Αφηρημένο

στρωματικά κύτταρα, όπως μυοϊνοβλάστες να επηρεάσει την εξέλιξη του όγκου. Οι μηχανισμοί είναι ασαφές, αλλά μπορεί να περιλαμβάνει αποτελέσματα επί αμφοτέρων των καρκινικών κυττάρων και την πρόσληψη των μεσεγχυματικών στρωματικά κύτταρα που προέρχονται από μυελό των οστών (MSC) το οποίο στη συνέχεια αποικίζουν όγκους. Χρησιμοποιώντας iTRAQ και LC-MS /MS εντοπίσαμε την αδιποκίνης, chemerin, όπως υπερεκφράζεται σε οισοφαγικό καρκίνο εκ πλακωδών συνδέονται μυοϊνοβλάστες (δοντιών) σε σχέση με τα παρακείμενα μυοϊνοβλάστες ιστού (ΑΤΜ). Ο υποδοχέας chemerin, ChemR23, εκφράζεται από την MSC. Ρυθμισμένο μέσο (CM) από CAM, αυξήθηκε σημαντικά την κυτταρική μετανάστευση MSC σε σύγκριση με το ATM-CM? η δράση του CAM-CM μειώθηκε σημαντικά από chemerin-αντίσωμα εξουδετέρωσης, προεπεξεργασία των CAMs με chemerin siRNA, προκατεργασία των MSCs με ChemR23 siRNA, και από έναν ανταγωνιστή υποδοχέα ChemR23, CCX832. Η διέγερση της MSCs από chemerin αυξημένη φωσφορυλίωση της ρ42 /44, ρ38 και JNK κινασών-ΙΙ και αναστολείς αυτών των κινασών και PKC αντιστραφεί chemerin διεγερμένα μετανάστευση MSC. Chemerin διέγερση του MSCs επίσης προκάλεσε έκφραση και την έκκριση του παράγοντα αναστολής μακροφάγων (MIF) που έτειναν να περιορίζουν μεταναστευτικών αποκρίσεις σε χαμηλές συγκεντρώσεις chemerin αλλά όχι υψηλότερες συγκεντρώσεις. Σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος που αποτελείται από OE21 καρκίνου του οισοφάγου κύτταρα και CAMs, παλιννόστησης των MSCs χορηγείται ενδοφλεβίως ανεστάλη με CCX832. Έτσι, chemerin εκκρίνεται από οισοφάγου μυοϊνοβλάστες καρκίνος είναι ένα δυναμικό χημειοελκτικό για τα MSC και η αναστολή της μπορεί να καθυστερήσει την εξέλιξη του όγκου

Παράθεση:. Kumar JD, Holmberg C, Kandola S, Steele Ι, Hegyi P, Tiszlavicz L, et al . (2014) αυξημένη έκφραση των Chemerin σε πλακωδών καρκίνο του οισοφάγου μυοϊνοβλάστες και ο ρόλος στην πρόσληψη μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα. PLoS ONE 9 (8): e104877. doi: 10.1371 /journal.pone.0104877

Επιμέλεια: Ajay Pratap Singh, Πανεπιστήμιο της Νότιας Αλαμπάμα Mitchell Ινστιτούτο Καρκίνου, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 6η Μαΐου, 2014? Αποδεκτές: 15 του Ιούλη 2014? Δημοσιεύθηκε: 15 του Αυγούστου, 2014

Copyright: © 2014 Kumar et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Cancer Research UK (AV), NIHR (AV), Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας /NCI (5U54CA126513, TCW, AV) και της Ουγγαρίας Επιστημονικής Έρευνας Ταμείο (NF100677, PH), Wellcome Trust (AV, CH, SK). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Τα TC και βουλευτή αμείβονται οι εργαζόμενοι της ChemoCentryx. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών. Οι άλλοι συγγραφείς δεν έχουν σύγκρουση συμφερόντων.

Εισαγωγή

Η σημασία του μικροπεριβάλλον του όγκου στον καθορισμό της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων και την εξάπλωση Είναι πλέον γνωστό [1]. Στρωματικά τύπους κυττάρων που συμβάλλουν στην μικροπεριβάλλον περιλαμβάνουν φλεγμονώδεις και άνοσα κύτταρα, ενδοθηλιακά κύτταρα, περικύτταρα και γραμμώσεις ινοβλαστών [2]. Στην περίπτωση των τελευταίων ένα αυξανόμενο σώμα της στοιχεία δείχνουν ότι σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες (CAFS), εκ των οποίων μυοϊνοβλαστών είναι ένας εξέχων υπότυπο, διαφέρουν από τους ομολόγους τους σε φυσιολογικό ιστό [3], [4], [5]. Υπάρχει επίσης μια αυξανόμενη εκτίμηση ότι το μυελό των οστών προερχόμενα μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα (στέλεχος) (MSCs) μπορούν να επηρεάσουν την εξέλιξη του καρκίνου με τη μετανάστευση σε θέσεις όγκου όπου μπορούν να διαφοροποιηθούν σε μία ποικιλία κυτταρικών τύπων, συμπεριλαμβανομένων μυοϊνοβλάστες [6], [7]? μπορούν επίσης να είναι χρήσιμα ως οχήματα για να παράσχει στοχευμένη αντικαρκινική θεραπεία [8]. Αν και δεν υπάρχουν στοιχεία για τη συμμετοχή των χημειοκινών στην πρόσληψη MSC οι μηχανισμοί παραμένουν ελάχιστα κατανοητή [9], [10].

καρκίνο του οισοφάγου θεωρείται ότι αντιπροσωπεύουν σχεδόν το μισό εκατομμύριο θανάτους ετησίως σε όλο τον κόσμο. Αδενοκαρκίνωμα, που συνδέονται με την παλινδρόμηση και την παχυσαρκία, τίθεται σε φόντο του οισοφάγου Barrett και αυξάνεται σε συχνότητα στις δυτικές κοινωνίες? οισοφαγικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (ESCC) συνδέεται με το κάπνισμα, η κατανάλωση αλκοόλ και η κακή διατροφή και έχει υψηλή συχνότητα εμφάνισης στις αναπτυσσόμενες χώρες [11]. Υπάρχει μια αυξανόμενη εκτίμηση του ρόλου της CAFS /μυοϊνοβλαστών στην ESCC ιδιαίτερα στην προώθηση της εισβολής του καρκίνου και την αγγειογένεση, αν και σε γενικές γραμμές αυτά παραμένουν ελάχιστα κατανοητή [12], [13].

Chemerin (που προκαλείται ταζαροτένης γονίδιο 2, TIG2 ? αποκριτή υποδοχέα ρετινοϊκού οξέος 2, RARRES2) είναι ένα 18 kDa χημειοκίνης-πρωτεΐνης που δρα στο ChemR23 (υποδοχέας χημειοκίνης-σαν 1, CMKLR1) [14], [15]. Εκκρίνεται ως ένα ανενεργό πρόδρομο που ενεργοποιείται με μία ποικιλία εξωκυτταρικών πρωτεασών που αφαιρούν ένα Ο-τερματικό εξαπεπτίδιο να απελευθερώσει ένα 157 αμινοξέων δραστική μορφή? εκφράζεται στα λιποκύτταρα, το ήπαρ και πλακούντα και έχει ρόλους σε χημειοταξία αδιπογένεσης και λευκοκυττάρων, συμπεριλαμβανομένης της πρόσληψης δενδριτικών και φυσικών φονικών (ΝΚ) κυττάρων σε θέσεις φλεγμονής ή καρκίνου του [16], [17], [18], [19] . Στην παρούσα μελέτη εντοπίσαμε αυξημένη έκφραση του chemerin σε ESCC σχετίζονται με τον καρκίνο myofibrobroblasts (δοντιών) σε σχέση με τα παρακείμενα μυοϊνοβλάστες ιστού (ΑΤΜ), και βρήκε έκφραση των συγγενών ChemR23 υποδοχέα της με MSCs. Ως εκ τούτου, η υπόθεση ότι chemerin ενεργεί ως χημειοελκτική MSC και σας παρουσιάζουμε εδώ στοιχεία που να υποστηρίζουν την υπόθεση.

Υλικά και Μέθοδοι

Cells

μυοϊνοβλάστες που παράχθηκαν από όγκους και παρακείμενο ιστό των ασθενών με ESCC χρησιμοποιώντας προηγουμένως περιγραφείσες μεθόδους (Πίνακας S1 στο S1 αρχείου) [20], [21], και χρησιμοποιήθηκαν μεταξύ των περασμάτων 3 και 10. το έργο αυτό εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Πανεπιστημίου του Szeged, Ουγγαρία και όλα τα θέματα έδωσε συγκατάθεση. κύτταρα ESCC (OE21) και ανθρώπινης ομφάλιας φλέβας ενδοθηλιακά κύτταρα (HUVEC) ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA). Ανθρώπινο μυελό των οστών τα βλαστικά κύτταρα προερχόμενα μεσεγχυματικά χρησιμοποιήθηκαν σε περάσματα 3-12 σε αδιαφοροποίητη κατάσταση τους? έως πέρασμα 12 που εκτίθενται λιποκυττάρων, οστεοκυττάρου και διαφοροποίηση χονδροκυττάρων σε λιποκυττάρων, οστεοκυττάρου και χονδροκυττάρων διαφοροποίηση των μέσων ενημέρωσης (Lonza, Cambridge, UK)? τα κύτταρα CD105, CD166, CD29, CD44, α-SMA και βιμεντίνης θετική και ήταν CD14, CD34, CD45, κυτοκερατίνη και δεσμίνη αρνητική.

Πολιτισμός τηλέφωνα

μυοϊνοβλάστες που καλλιεργήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20]. MSCs διατηρήθηκαν σε μια αδιαφοροποίητη κατάσταση στην MSCGM (Lonza) που περιέχει βασικό μέσο και συμπληρώματα ανάπτυξης MSC. Τα κύτταρα διατηρήθηκαν στους 37 ° C σε 5% ν /ν CO

2? HUVECs διατηρήθηκε σε μέσο EGM και χρησιμοποιήθηκαν σε περάσματα 5 έως 9? κύτταρα OE21 καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% ν /ν FBS, 1% ν /ν πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη, 2% ν /ν ί-γλουταμίνη.

Ρυθμισμένα μέσα

μυοϊνοβλάστες (1.5 × 10

6 κύτταρα) απλώθηκαν σε Τ-75 φιάλες Falcon και διατηρήθηκαν στους 37 ° C σε 5% ν /ν CO

2 για 24 ώρες σε πλήρες μέσο (FM). Οι καλλιέργειες στη συνέχεια πλύθηκαν 3 φορές με αποστειρωμένο PBS και επωάζονται σε 15 ml ελεύθερη (SF) ορού μέσα για 24 ώρες. Ρυθμισμένα μέσα (CM) συλλέχθηκαν, φυγοκεντρήθηκαν (7 λεπτά, 800 χ g, 4 ° C) και δείγματα φυλάχτηκαν στους -80 ° C μέχρι περαιτέρω χρήσης.

Η ανοσοκυτταροχημεία

Τα κύτταρα παραφορμαλδεΰδη (PFA) στερεωμένου (4% β /ο), περατά με 0,2% Triton Χ-100 σε PBS (ΡΒδ-Τ) για 30 λεπτά και υπέστησαν επεξεργασία για ανοσοκυτταροχημεία όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22] χρησιμοποιώντας πρωτογενή αντισώματα για CD105, CD34, CD29 (Ancell Corporation, Bayport, ΜΝ), α-SMA, βιμεντίνη, δεσμίνη, pancytokeratin (Fitzgerald, NJ), ChemR23 (Millipore, ΜΑ,) ή GPR1 (Abcam, Cambridge, UK) που ακολουθείται από επώαση με το κατάλληλο φλουορεσκεΐνη ή Texas Red επισημασμένα δευτερογενή αντισώματα που αναπτύσσονται στο γάιδαρο (Jackson Immunoresearch, Soham, Ηνωμένο Βασίλειο), και τοποθετείται με Vectashield

® περιέχει DAPI (Vector Laboratories, Peterborough, UK). Διαφάνειες παρατηρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Zeiss Αχίορίαπ-2 μικροσκόπιο (Zeiss Vision, Welwyn Garden City, Ηνωμένο Βασίλειο). Εικόνες συλλήφθηκαν χρησιμοποιώντας ένα JVC-3 κάμερα της συσκευής συζευγμένου φορτίου σε μεγέθυνση 40 φορές με το λογισμικό KS300 (Imaging Associates, Bicester, Oxfordshire, Ηνωμένο Βασίλειο).

πρωτεομική ανάλυση

Η secretome του οισοφάγου μυοϊνοβλαστών μελετήθηκε μετά από σήμανση iTRAQ πρωτεϊνών σε μέσα που ακολουθείται από LC-MS /MS όπως περιγράφηκε προηγουμένως (βλέπε Μέθοδοι S1) [3]. Υποθετικές στόχοι chemerin σε στρωματικά κύτταρα μυελού περιζήτητα επισήμανση SILAC των κυττάρων που ακολουθείται από έκθεση σε chemerin (R &? D Systems, Abindgon, Oxfordshire, UK) για 24 ώρες και η επεξεργασία των κυττάρων για LC-MS /MS (βλέπε Μέθοδοι S1) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [23].

κηλίδωση Western

Media ή τα κυτταρικά εκχυλίσματα παρασκευάστηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα RIPA που περιέχει αναστολείς πρωτεάσης και φωσφατάσης αναλύθηκαν με ηλεκτροφόρηση SDS-PAGE και υποβάλλονται σε επεξεργασία για κηλίδωση Western, όπως περιγράφεται προηγουμένως [24] χρησιμοποιώντας αντισώματα προς chemerin, μετανάστευση μακροφάγων ανασταλτικό παράγοντα (MIF), μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας (ΜΜΡ) -2 (R &? D Systems), GAPDH (Biodesign, Maine), το σύνολο και φωσφορυλιωμένα Ρ42 /44, ρ38 και κινάσες JNK-ΙΙ (Cell Signaling, Massachusetts)

ELISA

ELISA για chemerin (Adipo Bioscience, CA, USA) και MIF (R &?.. D Systems) εφαρμόσθηκαν σε μυοϊνοβλάστη μέσων σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή

δοκιμασίες κυτταρικής μετανάστευσης

δοκιμασίες μετανάστευσης Transwell διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας ένθετα BD (BD Bioscience, California) ως προηγούμενα περιγράφεται [25] που απασχολούν chemerin (R &? D Systems), chemerin-9 (Piscataway, NJ) ή μη αραιωμένο CM στην κάτω καλά. Τα αποτελέσματα μελετήθηκαν φορβόλης 12-μυριστικού 13-οξικού (PMA), Ro320432, SB202190, SP600125, U0126, ISO-1 (Calbiochem, Darmstadt, Γερμανία), LY294002 (New England Labs, Hertfordshire, UK), chemerin αντισώματος εξουδετέρωσης ( MAb2325, R & amp? D Systems), CCX-832 και CCX826 (ChemoCentryx, Mountain View, CA) [26]. Scratch δοκιμασίες μετανάστευσης τραύματος διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27]. δοκιμασίες ενδοθηλίου μετανάστευση διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας MSCs σημασμένο με 1 μΜ ΡΚΗ67 (Sigma Aldrich, Dorset, UK) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και BD Biocoat Matrigel εισβολής Chambers (BD Bioscience) επικαλύπτονται με μία μονοστοιβάδα HUVECs 48 ώρες προηγουμένως. Μετεγκατάσταση MSCs στη συνέχεια υπολογίζονται ως φθορίζοντα κύτταρα.

προσδιορισμούς δραστικότητας ΜΜΡ-2

δραστικότητα ΜΜΡ-2 σε MSC μέσων προσδιορίστηκε με ένα επιλεκτικό υπόστρωμα φθορισμού, MCA-Pro-Leu-Ala-Nva -Dpa-Ala-Arg-ΝΗ

2, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Merk Βιοεπιστημών, Beeston, Nottingham, UK).

Chemerin, chemR23, GPR-1 και ΜΙΡ νοκ ντάουν

μυοϊνοβλάστες επιμολύνθηκαν με 3 διαφορετικούς RNAs σίγηση (siRNA, πίνακας S2 σε File S1) (3 μΜ) για chemerin (Sigma, UK). MSCs υποβλήθηκαν σε θεραπεία με τρία διαφορετικά siRNAs (Πίνακας S2 σε File S1) (3 μΜ) για chemR23, και επικυρωμένων siRNAs για GPR-1 και ΜΙΡ (Invitrogen, Paisley, UK). Η αποτελεσματικότητα των νοκ ντάουν πιστοποιήθηκε με κηλίδωση Western ή ανοσοκυτταροχημεία

Η παροδική επιμόλυνση

Τα κύτταρα επιμολύνονται χρησιμοποιώντας κιτ Amaxa ινοβλάστες Nucleofector. (Amaxa? Köln, Γερμανία) και κιτ AmaxaTM Ανθρωπίνων MSC Nucleofector (Amaxa? Κολωνία, Γερμανία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Κάθε διαμόλυνση χρησιμοποιούνται 2 μg του DNA (5 × 10

5 κυττάρων) και 100 μΐ πλήρες διάλυμα nucleofector. Επιμόλυνση επιτεύχθηκε χρησιμοποιώντας πρόγραμμα U-23 (για την υψηλή αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης) με προσθήκη 500 μΙ του προθερμασμένο μέσο καλλιέργειας στην κυψελίδα και τη μεταφορά των δειγμάτων σε φιάλες Τ-75 με 20 ml προσφάτως παρασκευασμένου μέσου.

MSC παλιννόστησης σε ξενομοσχεύματα

Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν μετά την έγκριση από το Πανεπιστήμιο του Λίβερπουλ Επιτροπής Ευημερίας των ζώων και ήταν σε συμμόρφωση με το Ηνωμένο Βασίλειο Ζώα (Scientific Procedures) Act 1986 (PPL 40/3137) .Για μελέτη MSC πρόσληψη σε ξενομοσχεύματα, 6-8 εβδομάδων ηλικίας ανοσοκατεσταλμένους BALB /c ηυ /ηυ (Charles River, Wilmington, ΜΑ) ενέθηκαν sc με κύτταρα OE21 (10

6) μόνο του ή με τα έκκεντρα (5 × 10

5). Τα ποντίκια με όγκους παρόμοιου μεγέθους (1,0-1,2 cm διάμετρος) στη συνέχεια έλαβαν CCX832 (2 mg /ml, 125 μΙ, iv), ή όχημα, που ακολουθείται μετά από 24 ώρες από μία δεύτερη δόση και MSCs σημασμένο με ΡΚΗ67 (7.5 × 10

5). Μετά από 24 ώρες, οι όγκοι ανατμήθηκαν, μονιμοποιήθηκαν σε 4% PFA και υποβάλλονται σε επεξεργασία για τον εντοπισμό των φθοριζόντων κυττάρων.

Στατιστικά

Τα τελικά αποτελέσματα υπολογίστηκαν ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου (SEM). Student t-test και ANOVA πραγματοποιήθηκαν στα δεδομένα, ενδεχομένως, με σημαντικότητα σε p ≤ 0,05 χρησιμοποιώντας Systat Software Inc. (London, UK), εκτός αν αναφέρεται διαφορετικά.

Αποτελέσματα

Η αυξημένη έκφραση chemerin στην πλακώδες του οισοφάγου ΚΑΜΕΡΕΣ

μυοϊνοβλάστες που προσδιορίζονται από την έκφραση α-SMA βρέθηκαν σε μεγαλύτερους αριθμούς και παρουσίασε διαταράσσεται μορφολογία και αρχιτεκτονική σε ESCC σε σύγκριση με το παρακείμενο ιστό (Σχ S1 στο S2 αρχείου). Καλλιεργημένα μυοϊνοβλάστες από αυτούς τους όγκους και παρακείμενο ιστό εξέφρασαν α-SMA και βιμεντίνης, αλλά όχι δεσμίνης ή κυτοκερατίνης? CM από CAMs τονωθούν η ανάπτυξη και η μετανάστευση των κυττάρων OE21 σε σύγκριση με το ATM-CM (Σχ S2, S3 στο S2 αρχείου). Χρησιμοποιώντας την επισήμανση iTRAQ ακολουθούμενη από LC-MS /MS για τον εντοπισμό πιθανών κυτταρικής σηματοδότησης μόρια που εκκρίνονται από CAMs βρήκαμε αυξημένη αφθονία chemerin σε μέσα CAM σε σύγκριση με ΑΤΜ από το σύνολο των τεσσάρων ζευγών των δειγμάτων ESCC (Εικ S4 στο File S2? Πίνακας S3 σε Αρχείο S1). Κηλίδωση Western επιβεβαίωσε αυξημένη chemerin σε CAM σε σύγκριση με τα μέσα ενημέρωσης ATM (Εικόνα 1Α), και ELISA των μέσων ενημέρωσης που αναφέρονται 2.1 ± 0.4 φορές υψηλότερη έκκριση chemerin από CAM,

vs

ΑΤΜ. Σε εκχυλίσματα κυττάρων, κηλίδες Western έδειξε μέτρια αλλά σημαντικά αυξημένα chemerin σε CAM, σε σύγκριση με ζεύγη ΑΤΜ τους (Εικ S5 στο αρχείο S2). Ένα υποτιθέμενο υποδοχέα chemerin, ChemR23, εκφράστηκε από MSCs (βλέπε παρακάτω), και chemerin διεγείρεται εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση της μετανάστευσης των MSCs σε δύο διαφορετικές δοκιμασίες (Σχήμα 1Β). Επιπλέον, CAM-CM διεγείρονται MSC μετανάστευση και η απάντηση ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από ό, τι στο ATM-CM (σχήμα 1Γ, αριστερά). Άμεση απόδειξη για ένα ρόλο του chemerin ως δραστικό συστατικό του CAM-CM παρεσχέθη από την παρατήρηση ότι η ανοσοεξουδετέρωση της chemerin ανέστειλαν την επίδραση του CAM-CM (σχήμα 1C, κέντρο)? Επιπλέον, siRNA νοκ ντάουν της chemerin έκφρασης μείωσε τη δραστηριότητα της ΚΕ εφαρμόζεται στη συνέχεια MSCs σε δοκιμασίες μετανάστευσης (Σχήμα 1C, σωστά? Σχ S6 στο S2 αρχείου)

Μια

.. Εκπρόσωπος της Δυτικής ανάλυση chemerin στα μέσα ενημέρωσης από ESCC CAMs και ΑΤΜ (αριστερά). Ποσοτική ανάλυση με πυκνομετρία των chemerin αφθονία στα μέσα ενημέρωσης από ESCC CAMs και ΑΤΜ (n = 4 διαφορετικά ζεύγη μυοϊνοβλαστών) (δεξιά).

Β

. Εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση διέγερση των MSC μετανάστευση από chemerin σε δοκιμασίες μετανάστευσης μηδέν πληγή (αριστερά) και Boyden δοκιμασίες μετανάστευσης θάλαμο (δεξιά) (n = 3).

C

. Αυξημένη μετανάστευση των MSCs σε θαλάμους Boyden σε απόκριση σε ρυθμισμένα μέσα (CM) από CAMs και των αντίστοιχων ΑΤΜ τους (αριστερά) (n = 4 διαφορετικά ζεύγη μυοϊνοβλάστες). Η διέγερση της μετανάστευσης MSC από CAM-CM ανεστάλη με chemerin αντισώματος εξουδετέρωσης (Chem.Ab? 10 μg /ml) (κέντρο). MSC μετανάστευση μειώθηκε σε απόκριση προς CM από κύτταρα CAM1 και CAM4 επιμολυσμένα με chemerin siRNA # 3 (δεξιά). Οριζόντια βέλη, σ & lt?. 0,05, t-test (n = 3)

Η

ChemR23 εκφράζονται από MSCs μεσολαβεί μεταναστευτικών απαντήσεις σε chemerin

Η έκφραση σε MSC του υποτιθέμενου υποδοχέα chemerin, ChemR23, έχει αναγνωριστεί από το γονίδιο array [28] και επιβεβαιώσαμε την έκφραση αυτού και ένα δεύτερο υποθετικό υποδοχέα, GPR1 [29], με ανοσοκυτταροχημεία. Νοκ ντάουν με siRNA της ChemR23 (Σχήμα 2Α, αριστερό? Σχ S7 στο S2 αρχείου) ανέστειλε σημαντικά την μεταναστευτική απόκριση τόσο chemerin (Σχήμα 2Α, κέντρο) και CAM-CM (Σχήμα 2Α, δεξιά), ενώ νοκ ντάουν της GPR1 είχε μικρή επίδραση. Ένας ανταγωνιστής ChemR23, CCX832, με δοσοεξαρτώμενο τρόπο ανέστειλε τη μετανάστευση MSC σε απάντηση chemerin (Σχήμα 2Β, αριστερά και κέντρο) και CAM-CM (Σχήμα 2Β, δεξιά), ενώ ένα αδρανές ανάλογο, CCX826 δεν είχε καμία επίδραση? η αναστολή της CAM-CM από CCX832 ήταν παρόμοια με εκείνη που επιτυγχάνεται με ανοσοεξουδετέρωση (Σχήμα 2Β, δεξιά).

Μια

, Εκπρόσωπος εικόνες από MSCs βάφτηκαν για βιμεντίνη (θετικός μάρτυρας) και chemR23 αποκαλύπτοντας knock-down (KD) μετά τη θεραπεία ChemR23 siRNA (αριστερά). Εξόντωση ChemR23, αλλά όχι GPR1, ανέστειλαν μετανάστευση MSC σε απόκριση σε chemerin (100 ng /ml) (κέντρο) και CAM-CM (δεξιά).

B

, εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση αναστολή της MSC μετανάστευσης σε απάντηση chemerin από τον ανταγωνιστή CCX832 ChemR23 (αριστερά), αλλά όχι η ένωση ελέγχου CCX826 (1 μΜ) (κέντρο). MSC μετανάστευση σε απόκριση CAM-CM ανεστάλη παρομοίως με chemerin αντίσωμα εξουδετέρωσης, και CCX832, αλλά όχι CCX826 (1 μΜ) (δεξιά).

C

, Αντιπρόσωπος δείχνει κηλίδα Western αυξημένη φωσφορυλίωση της ρ42 /44, ρ38 και ΙΝΚ-ΙΙ κινάσες σε MSCs σε επεξεργασία με chemerin (100 ng /ml) (αριστερά). Σε προσδιορισμούς θαλάμου Boyden, chemerin διεγείρεται MSC μετανάστευση αναστέλλεται από τον αναστολέα JNK-ΙΙ, SP600125 (50 μΜ), ο /44 αναστολέα Ρ42, UO126 (10 μΜ), ρ38 αναστολέα SB202190 (3 μΜ), και ο αναστολέας PKC Ro320432 (2 μΜ), αλλά όχι από PIK3 αναστολέα LY294002 (50 μΜ) (δεξιά). Οριζόντια βέλη, σ & lt? 0,05, ANOVA (n = 3 σε κάθε περίπτωση)

Η

Chemerin διέγερση των οδών πρωτεϊνικής κινάσης μεσολαβεί MSC μεταναστευτικών απαντήσεις

Chemerin αμέσως αυξημένη φωσφορυλίωση διαφόρων πρωτεϊνικών κινασών. συμπεριλαμβανομένων ρ42 /44, ρ38 και κινάσες JnkII σε MSCs (Σχήμα 2C, αριστερά). Αναστολείς των τριών κινασών μείωσε σημαντικά την μεταναστευτική απόκριση των MSCs να chemerin αλλά αναστολή της ΡΙ-3-κινάσης χρησιμοποιώντας LY294002 δεν είχε καμία επίδραση. Ο αναστολέας PKC Ro320432 ανέστειλαν επίσης τη μετανάστευση και ο συνδυασμός του Ro320432, U0126, SP600125 και SB202190 ανέστειλε πλήρως μεταναστευτικά απαντήσεις (Σχήμα 2C, δεξιά). Απόδειξη ότι η ενεργοποίηση PKC ήταν ανοδικά διέγερση ΜΑΡ κινάσης παρέχεται από την παρατήρηση ότι PMA διεγερμένα μετανάστευση MSC και αυτό ανεστάλη με U0126, SP600125 και SB202190? Επιπλέον, PMA τονωθεί φωσφορυλίωση του Ρ42 /44, p38 και των κινασών JnkII (Εικ S8 στο αρχείο S2). Υπήρξε μια αξιοσημείωτη μείωση στην φωσφορυλίωση του ρ42 /44, ρ38 και JnkII κινασών μετά ChemR23 knockdown χρησιμοποιώντας siRNA σύμφωνα με την ιδέα ότι αυτές οι κινάσες είναι κατάντη του ChemR23 (Εικ S8 σε S2 File).

έκφραση Chemerin αυξάνει MIF σε MSC που περιορίζει τη μετανάστευση

για να καθορίσει περαιτέρω υποθετική στόχους της chemerin εφαρμόσαμε SILAC και LC-MS /MS για τον προσδιορισμό των πρωτεϊνών στα κυτταρικά εκχυλίσματα και τα μέσα ενημέρωσης των MSCs που έλαβαν θεραπεία με chemerin για 24 ώρες. Απροσδόκητα, MIF ήταν αυξημένη σε κύτταρα διεγερμένα chemerin (Πίνακας S4 στο File S1? Σχ S9 σε S2 File). κηλίδα Western επαλήθευσε ότι chemerin, καθώς και IGF-II που χρησιμοποιούνται ως θετικός έλεγχος, αυξημένη MIF στα εκχυλίσματα και μέσα κυτταροκαλλιέργειας (Σχήμα 3Α, αριστερά), και χρησιμοποιώντας ELISA υπήρχε περίπου 10 φορές υψηλότερες συγκεντρώσεις MIF σε μέσα μετά chemerin θεραπεία. Μετά ChemR23 νοκ ντάουν η απάντηση ΠΔΠ να chemerin ήταν βαθύτατα αναστέλλεται (Σχήμα 3Α, κέντρο). Με την παρουσία του MIF, το MSC μεταναστευτική απόκριση προς chemerin αναστάλθηκε κατά περίπου 50% (Σχήμα 3Α, δεξιά). Για να προσδιοριστεί η λειτουργική σημασία του MIF στο MSC μετανάστευσης χρησιμοποιήσαμε τον ανταγωνιστή MIF ISO-1? αυτό κατέστειλε την επίδραση των ΠΔΠ στην αναστολή chemerin διεγείρεται μετανάστευση MSC, και αύξησε σημαντικά τη μεταναστευτική ανταπόκριση των MSCs να chemerin (Σχήμα 3Β). Ομοίως, MIF knockdown (Σχ S10 σε S2 File) αυξήθηκε MSC μετανάστευση σε απόκριση σε χαμηλές συγκεντρώσεις chemerin (4 ng /ml), αλλά έχει ενδιαφέρον η απάντηση σε chemerin σε υψηλότερες συγκεντρώσεις (20 ng /ml) δεν επηρεάστηκε από MIF knockdown ( Σχήμα 3C)

Μια

, Εκπρόσωπος κηλίδες Western που δείχνει ΠΔΠ στο MSC μέσα μαζικής ενημέρωσης (επάνω αριστερά) και εκχυλίσματα κυττάρων (κάτω αριστερά) που έλαβαν θεραπεία με chemerin (Χ?. 100 ng /ml) ή IGF -II (100 ng /ml) για 15 λεπτά. ChemR23 knock-down μειωμένη απελευθέρωση MIF σε απάντηση chemerin (κέντρο). Chemerin διεγείρεται μετανάστευση MSC ανεστάλη από MIF (200 ng /ml) (δεξιά).

Β

, καταστολή του MIF σηματοδότησης με το πρότυπο ISO-Ι (50 μΜ) αυξήθηκε περαιτέρω chemerin διεγείρεται μετανάστευσης.

C

, MIF knock-down σε MSC αυξημένη μετανάστευση ως απάντηση σε 4 ng /ml, αλλά δεν είναι 20 ng /ml chemerin. Οριζόντια βέλη, σ & lt? 0,05, t-test (n = 3)

Η

Chemerin διεγείρει MSC μετανάστευση μεταξύ των ενδοθηλιακών κυττάρων και απαιτεί MMP-2

Τα στοιχεία που εμπλέκουν chemerin στην πρόσληψη. των MSC στο CAM που περιέχουν μικροπεριβάλλοντα του καρκίνου.

In vivo

αυτό απαιτεί ενδοθηλίου μετανάστευση και έτσι εξετάσαμε αν chemerin ήταν ικανή να διεγείρει τη μετανάστευση MSC μέσω ενός μονοστοιβάδα ενδοθηλιακών κυττάρων που σχηματίζονται στο παρελθόν σε θαλάμους Boyden. MSCs επισημασμένο με ΡΚΗ67 (Σχήμα 4Α, αριστερά) ταυτοποιήθηκαν ως μεταναστεύουν σε απόκριση σε chemerin (Σχήμα 4Α, κέντρο) και CAM-CM (Σχήμα 4Α, δεξιά), και ο μεταναστευτική απόκριση αναστάλθηκε κατά CCX832 αλλά όχι CCX826. Εκκρίνεται πρωτεάσες που θα μπορούσαν να διευκολύνουν ενδοθηλίου μετανάστευση στη συνέχεια αναζήτησε στους καταλόγους πρωτεϊνών που λαμβάνονται από SILAC-επισημασμένο MSCs που έλαβαν θεραπεία με chemerin. Άφθονα MMP-2 ταυτοποιήθηκε σε δείγματα chemerin διεγείρεται (Πίνακας S5 στο S1 File) και κηλίδες Western (Σχήμα 4Β, αριστερά) και ΜΜΡ-2 δοκιμασίες ενζυμικής δραστηριότητας (Σχήμα 4Β, δεξιά) επιβεβαίωσε αυξημένη αφθονία στα μέσα μαζικής ενημέρωσης για την αντιμετώπιση chemerin. Σε μελέτες μετανάστευση, η προσθήκη ΜΜΡ-2 που διεγείρεται MSC μετανάστευση και αυτό μειώθηκε σημαντικά από έναν αναστολέα ΜΜΡ-2 (Σχ 4C αριστερά). Το ίδιο αναστολέας επίσης μείωσε σημαντικά MSC ενδοθηλίου μετανάστευση ως απάντηση στην chemerin (Σχήμα 4C, δεξιά).

Μια

, Εκπρόσωπος πεδία από το MSC πειράματα ενδοθηλίου μετανάστευση δείχνει μετανάστευση ΡΚΗ67 επισημασμένου MSCs (αριστερά ). CCX832 (1 μΜ) ανέστειλε chemerin- (κέντρο) και CAM-CM διεγείρεται MSC ενδοθηλίου μετανάστευση αλλά CCX826 (1 μΜ) δεν είχε καμία επίδραση (δεξιά).

B

, Chemerin, και IGF-II που χρησιμοποιούνται ως θετικός έλεγχος, αμέσως (30 λεπτά) που διεγείρεται προΜΜΡ2 αφθονία σε μέσα όπως ανιχνεύεται με κηλίδα Western, αλλά δεν είχε καμία επίδραση στην κυτταρική αφθονία προΜΜΡ2 (αριστερά)? chemerin αυξήθηκε σημαντικά δραστικότητα του ενζύμου ΜΜΡ-2 σε MSC μέσων που ανιχνεύεται από τον εκλεκτικό υπόστρωμα MCA-Pro-Leu-Ala-Nva-Dpa-Ala-Arg-ΝΗ

2 (δεξιά).

C

, Ανθρώπινη ανασυνδυαστική ΜΜΡ-2 (80 ng /ml) διεγερμένα ενδοθηλίου μετανάστευση και υπήρχε εξαρτώμενη από τη δόση αναστολή από μια ΜΜΡ-2 εκλεκτικός αναστολέας (ΜΜΡ-2 αναστολέα Ι) (αριστερά). Ο αναστολέας ΜΜΡ-2 (60 μΜ) ανέστειλε σημαντικά chemerin διεγείρεται MSC ενδοθηλίου μετανάστευση (κέντρο). Οριζόντια βέλη, σ & lt? 0,05, t-test (n = 3)

Η

Σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος, MSC παλιννόστησης διεγείρεται από CAMs και αναστέλλεται από CCX832

Με βάση. τα δεδομένα που περιγράφονται παραπάνω, υποθέσαμε ότι

in vivo

chemerin μεσολαβεί MSC παλιννόστησης σε όγκους που αποτελείται από καρκινικά κύτταρα και CAMs. Σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος κυττάρων OE21 σε γυμνά ποντίκια, σε συνδυασμό όγκους παρόμοιου μεγέθους (1,0-1,2 cm διάμετρος) που παράγεται με και χωρίς συν-χορήγηση CAMs μελετήθηκαν μετά μεταγενέστερη ί.ν. ένεση ΡΚΗ67 επισημασμένου MSC. Επισημασμένα κύτταρα στα ξενομοσχεύματα αυξήθηκαν σε όγκους του OE21 και CAMs σε σύγκριση με κύτταρα OE21 μόνο (Σχήμα 5Α). Η προεπεξεργασία των ποντικών με τον ανταγωνιστή CCX832 ChemR23 πριν από την έγχυση MSCs μείωσε σημαντικά τον αριθμό των σημασμένων κυττάρων στα ξενομοσχεύματα καταδεικνύοντας έτσι ένα ρόλο για chemerin σε MSC προσλήψεως

in vivo

(Σχήμα 5Β).

A

, οπτικοποίηση του ΡΚΗ67-επισημασμένου MSCs σε αντιπροσωπευτικές πεδία από ξενομοσχεύματα συσταθεί μόνο με OE21 καρκινικά κύτταρα ή συν-ένεση με CAMs που ακολουθείται από επεξεργασία με όχημα (κορυφή) ή CCX832 (κάτω) και ένεση ίν του PKH67- επισημασμένο MSC.

B

, σε ξενομοσχεύματα με καρκινικά κύτταρα OE21 και CAMs εκεί αυξήθηκε MSC παλιννόστησης εκφράζονται ως επισημασμένα κύτταρα ανά μονάδα επιφανείας του ξενομοσχεύματος σε σύγκριση με ξενομοσχεύματα μόνο των καρκινικών κυττάρων OE21? θεραπεία με CCX832 ανέστειλε παλιννόστησης (OE21 /φορέα, η = 3? OE21 /CCX832, η = 4? OE21 και CAMs /φορέα, η = 6? OE21 και CAMs /CCX832, n = 6). Οριζόντια βέλη, σ & lt? 0,05, ANOVA

Η

Συζήτηση

Υπάρχουν αυξανόμενες ενδείξεις ότι MSCs μεταναστεύουν σε όγκους όπου συμβάλλουν στην ανάπτυξη του όγκου [6], [30].. Οι μηχανισμοί παλιννόστησης και της μετανάστευσης παραμένουν ατελώς κατανοητή. Στη μελέτη αυτή παρέχει αποδείξεις ότι η έκφραση της χημειοκίνης-όπως πεπτίδιο, chemerin, αυξάνεται σε CAMs από ESCC και δρα ως χημειοελκτικό για MSCs μέσω ενεργοποίησης των G-πρωτεΐνη υποδοχέα ChemR23. Ένα μικρό μόριο ανταγωνιστής του ChemR23, CCX832, ανέστειλε τη δράση της chemerin τόσο

in vitro

και σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος

in vivo

. Τα ευρήματα προσδιορίζουν chemerin ως νέου CAM προερχόμενο καθοριστικός παράγοντας της MSC προσλήψεως σε όγκους.

Προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει μια σειρά από διαφορετικούς ρόλους για CAFS, CAMs και σχετικά κύτταρα στην εξέλιξη και την ανταπόκριση στη θεραπεία μιας ποικιλίας καρκίνους συμπεριλαμβανομένου του προστάτη, του μαστού, του στομάχου, του πνεύμονα και του παχέος εντέρου [2], [31], [32], [33], [34], [35]. Τα CAMs που χρησιμοποιούνται για τις παρούσες μελέτες προήλθαν από όγκους σε ποιο αριθμό μυοϊνοβλάστη, αρχιτεκτονική και μορφολογία διασπάστηκαν? Επιπλέον CM από αυτές τις CAM, προκάλεσε ένα πιο επιθετικό φαινότυπο στα καρκινικά κύτταρα (πολλαπλασιασμός, μετανάστευση) σε σύγκριση με το CM από τα ΑΤΜ. Γενικότερα, οι ενέργειες των μυοϊνοβλαστών αναφερθεί ότι είναι τόσο θετικές όσο και αρνητικές επί του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων και τη μετανάστευση, και υπάρχουν επίσης επιπτώσεις στην αγγειογένεση, και διαμόρφωση των ανοσολογικών μηχανισμών [3], [12]. Ωστόσο, ενώ η MSC παλιννόστησης σε δικτυακούς τόπους του καρκίνου αναγνωρίζεται, ο ειδικός ρόλος των μυοϊνοβλαστών σε αυτή τη διαδικασία ήταν ασαφής. Τα παρόντα δεδομένα δεν προτείνουμε απλώς ότι CAM που είναι ενεργοί συμμετέχοντες στις προσλήψεις MSC, αλλά, επίσης, ότι ένα συγκεκριμένο μεσολαβητή, chemerin, εκφράζεται διαφορικά σε CAMs και ΑΤΜ.

Chemerin αναδύθηκε μέσα από μια πρωτεομική μελέτη της secretomes μυοϊνοβλάστη. Υπάρχει αυξανόμενο ενδιαφέρον για την εφαρμογή της πρωτεομικής μελέτες για να καθορίσει τις secretomes στρωματικών κυττάρων, αλλά ακόμη και έτσι αυτά παραμένουν λιγότερο καλά μελετηθεί από καρκινικό κύτταρο secretomes. Προηγούμενες μελέτες secretome στις δύο ινοβλαστικά κύτταρα της γενεαλογίας και MSCs έχουν εντοπίσει μερικά από τα μόρια που βρίσκονται στην παρούσα μελέτη κυρίως των πρωτεϊνών της ECM, MMPs, IGFBPs? μόρια σηματοδότησης που προσδιορίζονται σε αυτές τις μελέτες περιλαμβάνουν SDF-1, HGF, EGF και άλλες χημειοκίνες [36], [37]. Η αρχική μας ταυτοποίηση των chemerin έγινε σε όλα τα τέσσερα ζευγάρια των κυττάρων εξετάζονται και επικυρώθηκε από κηλίδα Western και ELISA των μέσων μαζικής ενημέρωσης τα οποία από κοινού δείχνουν ότι chemerin θα πρέπει να θεωρούνται νέα μεσολαβητής της σηματοδότησης μυοϊνοβλαστών κυττάρων.

Chemerin κανονικά εκφράζεται από λιποκύτταρα, ήπατος, πνεύμονα και άλλα κύτταρα. Σε έναν αριθμό καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων πλακώδους καρκίνου του δέρματος, του μελανώματος, του προστάτη, του πνεύμονα, του μαστού και το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, μειωμένη chemerin έκφραση σχετίζεται με δυσμενή έκβαση. Ωστόσο, αξίζει να σημειωθεί ότι η προηγούμενη εργασία δεν έχει, ως επί το πλείστον, λαμβάνονται υπόψη τα διαφορετικά πρότυπα έκφρασης των chemerin στα επιθηλιακά κύτταρα του όγκου σε σύγκριση με τα στρωματικά κύτταρα [18], [38]. Δεδομένου chemerin είναι ένα χημειοελκτικό για τα κύτταρα ΝΚ και των δενδριτικών κυττάρων [14], [16], [19] έχει προταθεί ότι η απώλεια του chemerin επιτρέπει όγκων να αποφύγει τις ανοσολογικούς μηχανισμούς άμυνας που αναστέλλουν ογκογένεση [18], [38], [ ,,,0],39]. Ωστόσο, οισοφάγου κύτταρα μπορεί να παρέχει ένα περιβάλλον ανεκτικογόνο [40], η οποία μετριάζει τα προστατευτικά αποτελέσματα της chemerin. Επιπλέον, σε γαστρικό καρκίνο υπάρχει αυξημένη chemerin πλάσμα και chemerin διεγείρει την προσβολή καρκινικών κυττάρων

in vitro

[41]. Έτσι, chemerin μπορεί να ασκήσει τόσο θετικές όσο και αρνητικές συνέπειες για την εξέλιξη του όγκου.

Υπάρχουν πολλαπλές δυναμικό ρόλους για chemerin απελευθερώνεται από CAM, συμπεριλαμβανομένης της διαμόρφωσης του καρκίνου και τη λειτουργία του ανοσοποιητικού κυττάρων και την αγγειογένεση. Βρήκαμε ότι το συγγενή υποδοχέα ChemR23 εκφράστηκε από MSCs και ότι chemerin ήταν ένα χημειοελκτικό για τα κύτταρα αυτά. Από knockdown υποδοχέα, ανοσοεξουδετέρωση και ένας ανταγωνιστής του υποδοχέα ChemR23 ανέστειλε μόνο εν μέρει τις επιδράσεις της CAM-CM, υπάρχουν επίσης πιθανό να είναι άλλα χημειοελκτικά CAM. Προτείνουμε chemerin είναι ένας καλός υποψήφιος για περαιτέρω μελέτη αν μη τι άλλο λόγω της διαθεσιμότητας των ανταγωνιστών των υποδοχέων. Οι μηχανισμοί της χημειοταξίας περιλαμβάνουν ενεργοποίηση της PKC και των πολλαπλών οδών κατάντη κινάσης συμπεριλαμβανομένων ρ42 /44, ρ38 και ΙΝΚ-ΙΙ κινάσες, οι οποίες όλες φαίνεται να παίζουν κάποιο ρόλο. Τουλάχιστον εν μέρει αυτά τα ενδοκυτταρικά μηχανισμοί σηματοδότησης μπορεί να μοιάζουν με εκείνες που περιγράφονται σε άλλα κύτταρα που εμφανίζουν χημειοταξία chemerin διεγερμένα συμπεριλαμβανομένων δενδριτικών κυττάρων [14].

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι μία ποικιλία παραγόντων ανάπτυξης και χημειοκινών διεγείρουν MSC μετανάστευση συμπεριλαμβανομένων HGF, TNFa, SDF-1, CXCL12, CXCL13, CHCL16 και CCL22 [42], [43]. MSCs μετεμψυχούμαι απέναντι ενδοθήλια με μηχανισμούς χημειοκίνη μεσολάβηση που περιλαμβάνουν επίσης μεταλλοπρωτεϊνάσες μήτρας κυρίως ΜΜΡ-2 [43], [44], [45], [46], [47]. Βρήκαμε ταχεία (30 λεπτά) διέγερση της έκκρισης προΜΜΡ-2 από MSCs σε απάντηση chemerin και ένας ρόλος για ΜΜΡ-2 για τη διευκόλυνση chemerin διεγείρεται μετανάστευση δια μέσω του ενδοθηλίου, πιθανώς μετά την ενεργοποίηση από άλλες εξωκυτταρικές πρωτεάσες όπως ΜΜΡ-14 [45].

είναι γνωστό ότι οι ΠΔΠ αναστέλλει MSC μετανάστευσης [48], [49]. Τα παρόντα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση επαγωγή του MIF σε MSC από chemerin πράξεις για τον περιορισμό της μετανάστευσης. Ωστόσο, η ανασταλτική δράση είναι εξασθενημένος σε υψηλές συγκεντρώσεις chemerin. Μια επίπτωση είναι ότι μυοϊνοβλάστες ελέγχου, όπου η έκφραση chemerin είναι μέτρια, δεν προάγουν αποτελεσματικά την πρόσληψη MSC εξαιτίας της autoinhibitory δράση του MIF? Ωστόσο, το CAM, όπου υπάρχει αυξημένη chemerin, η ικανότητα για την πρόσληψη MSC ενισχύεται αφού η autoinhibitory επίδραση των ΠΔΠ ξεπεραστεί.

Ο ανταγωνιστής CCX832 ChemR23 έχει χρησιμοποιηθεί προηγουμένως για να καθορίσουν νέες αλληλεπιδράσεις μεταξύ περιαγγειακή λιποκύτταρα και απαντήσεις αγγειοσυσπαστική [ ,,,0],26]. Θα δείξουμε τώρα και οι δύο

in vitro

και

in vivo

σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος που CCX832 αναστέλλει MSC μετανάστευσης σε απάντηση CAMs. Είτε chemerin επηρεάζει MSC διαφοροποίηση μετά την πρόσληψη σε καρκίνους μένει να καθοριστεί. Δεν θα ήταν έκπληξη εάν το έκανε, αφού είναι γνωστό ότι διεγείρει μεσεγχυματικά κύτταρα αδιπογένεσης [17], [50]. Στο σύνολό τους τα παρόντα δεδομένα υποδεικνύουν chemerin είναι ένα μυθιστόρημα δυναμικό ρυθμιστή της εξέλιξης του καρκίνου με τη στόχευση MSC προσλήψεων και προτείνουν τη σκοπιμότητα της χρήσης ανταγωνιστών του υποδοχέα ChemR23 για τη ρύθμιση αυτής της διαδικασίας.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Μέθοδοι S1.

συμπληρωματικές μέθοδοι

doi:. 10.1371 /journal.pone.0104877.s001

(PDF)

αρχείου S1.

συμπληρωματικούς πίνακες. Πίνακας S1 με τον Πίνακα S5

doi:. 10.1371 /journal.pone.0104877.s002

(PDF)

αρχείου S2.

Συμπληρωματικά Στοιχεία. Εικόνα S1 στο Σχήμα S10

doi:. 10.1371 /journal.pone.0104877.s003

(PDF)

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες στον καθηγητή Rod Dimaline για τις χρήσιμες συζητήσεις, η Υπηρεσία Μονάδα Βιοϊατρικής, Πανεπιστήμιο του Λίβερπουλ για βοήθεια σχετικά με ξενομοσχεύματα, και οι χειρουργοί από το Τμήμα χειρουργικής, Πανεπιστήμιο του Szeged για την παροχή χειρουργικών δειγμάτων.