Αφηρημένο

Ανθρώπινο Dachshund ομόλογο 1 (

DACH1

) είναι ένα σημαντικό συστατικό του αμφιβληστροειδούς Προσδιορισμός Gene δικτύου. Η απώλεια της έκφρασης DACH1 βρέθηκε στο στήθος, τον προστάτη, του πνεύμονα, του ενδομητρίου, του παχέος εντέρου και του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος. Για να διερευνηθεί η έκφραση, η ρύθμιση και η λειτουργία του

DACH1

σε ανθρώπινο καρκίνο του οισοφάγου, καρκίνο του οισοφάγου 11 κυτταρικές σειρές, 10 περιπτώσεις φυσιολογικό οισοφαγικό βλεννογόνο, 51 περιπτώσεις των διαφόρων βαθμών της δυσπλασίας και 104 περιπτώσεις πρωτογενούς οισοφαγικού πλακώδους καρκίνου του ήταν χρησιμοποιούνται. Η μεθυλίωση ειδική PCR, ανοσοϊστοχημεία, κηλίδα western, κυτταρομετρία ροής, χρησιμοποιήθηκαν μικρά παρεμβατικά RNAs, τεχνικές σχηματισμού αποικίας και ξενομοσχεύματος ποντίκια μοντέλο. Βρήκαμε ότι

DACH1

έκφραση ρυθμίζεται από την περιοχή προαγωγού υπερμεθυλίωση σε καρκίνο του οισοφάγου κυτταρικές σειρές. 18,8% (6 από 32) του βαθμού 1, 42,1% (8 από 19) βαθμού 2 και βαθμού 3 δυσπλασία (ED2,3) και 61,5% (64 από 104) του καρκίνου του οισοφάγου ήταν μεθυλιωμένο, αλλά δεν μεθυλίωση βρέθηκε σε 10 περιπτώσεις φυσιολογικό οισοφαγικό βλεννογόνο. Η μεθυλίωση αυξήθηκε σε εξέλιξη τάση κατά τη διάρκεια του οισοφάγου καρκινογένεση (

P

& lt? 0,01).

DACH1

μεθυλίωση συσχετίστηκε με κακή διαφοροποίηση (

P

& lt? 0,05) και το στάδιο αργά όγκου (

P

& lt? 0,05). Αποκατάσταση

έκφραση αναστέλλεται DACH1

ανάπτυξη των κυττάρων και ενεργοποιείται σηματοδότηση ΤΟΡ-β σε KYSE150 και KYSE510 κύτταρα.

DACH1

κατέστειλε την ανθρώπινη οισοφάγου την ανάπτυξη του όγκου των καρκινικών κυττάρων σε ποντίκια ξενομοσχεύματος. Εν κατακλείδι,

DACH1

συχνά μεθυλιώνονται στον ανθρώπινο καρκίνο του οισοφάγου και μεθυλίωση του

DACH1

εμπλέκεται στο πρώιμο στάδιο του οισοφάγου καρκινογένεσης. DACH1 έκφραση ρυθμίζεται από την περιοχή υποκινητή υπερμεθυλίωση.

DACH1

καταστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του οισοφάγου, με την ενεργοποίηση σηματοδότησης TGF-β

Παράθεση:. Wu L, Herman JG, Brock MV, Wu Κ, ο Μάο G, Yan W, et al. (2014) κατασιγάσει

DACH1

Προωθεί του οισοφάγου την ανάπτυξη του καρκίνου με ανασταλτικός TGF-β σηματοδότηση. PLoS ONE 9 (4): e95509. doi: 10.1371 /journal.pone.0095509

Επιμέλεια: Dajun Deng, το Πανεπιστήμιο του Πεκίνου Αντικαρκινικό Νοσοκομείο και το Ινστιτούτο, η Κίνα

Ελήφθη: 17 Φλεβάρη του 2014? Αποδεκτές: 26 Μαρτίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 17 του Απρίλη του 2014

Copyright: © 2014 Wu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από: Εθνικό πρόγραμμα βασικής Έρευνας (973 πρόγραμμα Νο 2012CB934002, 2010CB912802), Εθνική υψηλής τεχνολογίας Ε & amp? Α προγράμματος (863 πρόγραμμα Νο SS2012AA020314, SS2012AA020821, SS2012AA020303), Εθνικό Key επιστημονικό όργανο του Ειδικού προγράμματος της Κίνας ( Grant Νο 2011YQ03013405) και το Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών της Κίνας (Grant Νο 81121004, 81071953, 81161120432, 81072169, 81172422, 81261120395). Οι διευθύνσεις URL των ιστοσελίδων χρηματοδότης είναι: Εθνικό Πρόγραμμα Βασική Έρευνα: https://www.973.gov.cn/Default_3.aspx? Εθνική υψηλής τεχνολογίας Ε & amp? D Πρόγραμμα: https://www.863.gov.cn/? Ειδικό Πρόγραμμα Εθνικό Key επιστημονικό όργανο της Κίνας: https://www.most.gov.cn/index.htm? Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών της Κίνας: https://www.nsfc.gov.cn/. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. JGH είναι σύμβουλος σε MDxHealth, όμως, αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

καρκίνος του οισοφάγου είναι η πέμπτη πιο κακοήθη νόσο και έχει κατατάσσεται ως η τέταρτη κύρια αιτία που σχετίζονται με τον καρκίνο των θανάτων στην Κίνα. [1] οισοφαγικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (ESCC) είναι η επικρατούσα ιστολογικό τύπο του καρκίνου του οισοφάγου, και αντιστοιχεί περίπου στο 90% των περιπτώσεων καρκίνου του οισοφάγου στο βόρειο και κεντρική Κίνα. [2] Παρά την ανάπτυξη των πολυτροπικών θεραπειών, της 5ετούς συνολική επιβίωση παραμένει κάτω του 20%. [3] Οι μηχανισμοί του οισοφάγου καρκινογένεση παραμένουν ασαφείς. Πολλαπλές γενετικές και επιγενετικές μεταβολές θεωρήθηκαν ως σημαντικοί παράγοντες για την ανάπτυξη καρκίνου του οισοφάγου [4] – [6]

Dachshund ομόλογο 1 (

DACH1

), ένα σημαντικό συστατικό του Δικτύου Gene αμφιβληστροειδούς Προσδιορισμός. , εκφράζεται ευρέως σε επιθηλιακά κύτταρα. Μείωση της έκφρασης DACH1 συσχετίστηκε με κακή πρόγνωση σε μαστού, του προστάτη, του πνεύμονα, του ενδομητρίου, του παχέος εντέρου και καρκίνο του ήπατος. [7] – [13] Η έκφραση της DACH1 ρυθμιζόταν από τον υποστηρικτή υπερμεθυλίωση περιοχή του ενδομητρίου, του παχέος εντέρου και ηπατοκυτταρικό καρκίνο. [11] – [13]

DACH1

καταστέλλεται ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος με ενεργοποίηση σηματοδότησης ΤΟΡ-β. [13] Ενώ οι επιγενετικές αλλαγές και η λειτουργία του

DACH1

στην ανθρώπινη ESCC παραμένουν ασαφείς. Σε αυτή τη μελέτη, αναλύσαμε κυρίως τις επιγενετικές αλλαγές και το μηχανισμό της DACH1 για οισοφάγου καρκινογένεση.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Τα πρωτόκολλα των μελετών εγκρίθηκαν από την Ηθική Επιτροπή της κινεζικής PLA Γενικό Νοσοκομείο (Αριθμός άδειας: 20090701 – 015), και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από τους συμμετέχοντες. Όλες οι διαδικασίες της έρευνας σε ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας Ζώων της κινεζικής PLA Γενικό Νοσοκομείο (Αριθμός Άδειας: 2013-X8-40) και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία. Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές του 1975 Διακήρυξη του Ελσίνκι και ήταν σύμφωνη με την ορθή κατευθυντήριες οδηγίες κλινικής πρακτικής και τις τοπικές ρυθμιστικές απαιτήσεις.

Πρωτοβάθμια Ανθρώπινα δείγματα ιστών και κυτταρικών γραμμών

Ένα σύνολο 104 περιπτώσεις πρωτογενούς οισοφαγικό καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων συλλέχθηκαν ως κατεψυγμένα ιστού από την κινεζική PLA Γενικό Νοσοκομείο. Όλα τα δείγματα χαρακτηρίστηκαν από το στάδιο TNM, συμπεριλαμβανομένου του σταδίου Ι (Ν = 5), το στάδιο ΙΙ (Ν = 66), το στάδιο ΙΙΙ (Ν = 32), και το στάδιο IV (Ν = 1). Πενήντα ένα περιπτώσεις οισοφαγικού δυσπλασία συλλέχθηκαν και δείγματα παραφίνη-ενσωματωμένες, συμπεριλαμβανομένων 32 περιπτώσεων του βαθμού 1 δυσπλασία (Εϋ1), 11 περιπτώσεις της κατηγορίας 2 δυσπλασίας (ED2) και 8 περιπτώσεις της κατηγορίας 3 δυσπλασίας (ED3). Δέκα περιπτώσεις φυσιολογικό οισοφαγικό βλεννογόνο (ΝΕ) συλλέχθηκαν με βιοψία ενδοσκοπικά από την κινεζική PLA Γενικό Νοσοκομείο. Μεταξύ των 104 δειγμάτων καρκίνου, 30 περιπτώσεις μπλοκ παραφίνης ήταν διαθέσιμα με συμφωνημένα παρακείμενο ιστό. Έντεκα ανθρώπινες κυτταρικές σειρές ESCC (KYSE30, KYSE70, KYSE140, KYSE150, KYSE180, KYSE410, KYSE450, KYSE510, ΤΕ1, TE3 και TE8) συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη αυτή. Όλες οι κυτταρικές σειρές ESCC περιγράφηκαν προηγουμένως [14] – [17], και διατηρήθηκαν σε RPMI-1640 (Invitrogen) συμπληρωμένου με 10% ορό εμβρύου βοός και αντιβιοτικά. Η Επιτροπή Δεοντολογίας της κινεζικής PLA Γενικό Νοσοκομείο ενέκρινε την εν λόγω μελέτη (Αριθμός Άδειας: 20090701 – 015)., Και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε πριν από τη συλλογή των δειγμάτων και κυτταρικών σειρών ιστού

5-Aza-2′ δεοξυκυτιδίνη θεραπεία, RNA Απομόνωση και Ημι-ποσοτική αντίστροφη μεταγραφή-PCR

κυτταρικές σειρές ESCC χωρίστηκαν σε χαμηλή πυκνότητα (30% συρροή) 12 ώρες πριν από τη θεραπεία. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνη (5-ΑΖΑ) (Sigma-Aldrich) σε μία συγκέντρωση 2 μΜ στο μέσο ανάπτυξης, το οποίο ανταλλάσσεται κάθε 24 ώρες για ένα σύνολο θεραπεία 96 ώρες. Στο τέλος της διάρκεια της θεραπείας, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και το ολικό RNA απομονώθηκε από το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen). Ημι-ποσοτική αντίστροφη μεταγραφή-ΡΟΚ (RT-PCR) πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12].

τροποποίηση όξινου θειώδους, μεθυλίωση Ειδικά PCR και όξινου θειώδους Αλληλούχιση

Γονιδιωματικό DNA από κυτταρικές σειρές και πρωτογενείς ESCC ESCC ιστοί παρασκευάστηκαν με τη μέθοδο πρωτεϊνάση-Κ. Η μεθυλίωση ειδική PCR (MSP) και όξινου θειώδους Αλληλούχιση (BSSQ) διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως. [18], [19] εκκινητών MSP και αστάρια BSSQ [12] σχεδιάστηκαν σύμφωνα με τις αλληλουχίες γονιδιώματος γύρω περιοχή έναρξης της μεταγραφής στο νησί CpG του

DACH1

γονίδιο (GenBank NM_080759.4) περιοχή του υποκινητή και συντίθεται (BGI ) για την ανίχνευση μη μεθυλιωμένο (U) και μεθυλιωμένη (Μ) αλληλόμορφα.

ανοσοϊστοχημεία (IHC)

η ανοσοϊστοχημική χρώση για DACH1 διεξήχθη επί 4 μm πάχους σειριακές τομές που προέρχονται από την επίσημη μπλοκ παραφίνης καρβαλδευδη στερεωμένα χρησιμοποιώντας αντίσωμα έναντι DACH1 (1:500 αραίωση, Proteintech) όπως περιγράφηκε προηγουμένως. [12] Η ένταση της χρώσης και η έκταση της λεκιασμένη περιοχή βαθμολογήθηκαν σύμφωνα με το γερμανικό σύστημα ημι-ποσοτική βαθμολόγησης, η οποία επίσης περιγράφηκε προηγουμένως [12].

Κατασκευή πλασμιδίου και διαμόλυνση

Η

DACH1

φορέα έκφρασης ήταν ένα δώρο από τον Dr. Cvekl. Η

DACH1

φορέα έκφρασης και τα στοιχεία Smad-δέσμευσης (SBE) -4 πλασμίδιο ανταποκριτή Luc περιγράφηκαν προηγουμένως. [20]

DACH1

επίσης υποκλωνίστηκε μέσα σε φορέα pLenti6-GFP. Shuttle κατασκευές φορέα και ο ViraPower Συσκευασίας Mix συνεπιμολύνθηκαν 293FT κύτταρα να αποκτήσουν φακοϊό σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Invitrogen). Lentivirus προστέθηκε στη συνέχεια KYSE510 και KYSE150 κύτταρα και sceened με Blasticidin (5 μg /ml, Invitrogen) για να δημιουργήσει

DACH1

εκφράστηκε σταθερά κύτταρα. Lipofectamine 2000 (Invitrogen) χρησιμοποιήθηκε για επιμόλυνση πλασμιδίου. Όλα τα κατασκευάσματα επιβεβαιώθηκαν με αλληλούχιση.

Βιωσιμότητας Κυττάρων Δοκιμασία

DACH1

εκφράζεται σταθερά κύτταρα και ανέκφραστη ελέγχου σπάρθηκαν πάνω σε πλάκες 96 φρεατίων (3 χ 10

3 κύτταρα /φρεάτιο), και η κυτταρική βιωσιμότητα μετρήθηκε καθημερινά για 96 ώρες με τη χρήση του κυττάρου Μετρώντας Kit-8 (Dojindo Laboratorie) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα αποτελέσματα χαράσσονται ως μέσο ± SD. Όλες οι δοκιμασίες πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

Colony Δοκιμασία Σχηματισμού

DACH1

εκφράζεται σταθερά κύτταρα και ανέκφραστη ελέγχου (5 × 10

2 κύτταρα /φρεάτιο) επιστρώθηκαν σε 2 ml πλήρους μέσου ανάπτυξης. Το μέσο και τα αντιδραστήρια άλλαξαν μια φορά στις 72 ώρες. Μετά από 2 εβδομάδες επώασης, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με 75% αιθανόλη για 30 λεπτά και χρωματίστηκαν με 0.2% κρυσταλλικό ιώδες (Beyotime) για 20 λεπτά και καταμέτρηση. Για κάθε πείραμα, η δοκιμασία σχηματισμού αποικίας διεξήχθη τρεις φορές.

Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής

Για την ανάλυση του κυτταρικού κύκλου, την ανίχνευση του κυτταρικού κύκλου Kit (KeyGen Biotech) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Κάθε δείγμα αναλύθηκε με κυτταρομετρία ροής με ένα κυτταρόμετρο ροής FACScan (Becton-Dickinson) χρησιμοποιώντας ένα λέιζερ 488 nm. Ιστογράμματα αναλύθηκαν για διαμερίσματα του κυτταρικού κύκλου χρησιμοποιώντας ModFit έκδοση 2.0 (Verity Software House). Για την ανάλυση της απόπτωσης, η Annexin V-FITC απόπτωση Detection Kit (KeyGen Biotech) διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

DACH1 Γκρεμίζω από siRNA

Τέσσερις επιλεγμένα μικρά RNAs παρεμβολής (siRNA) που στοχεύουν

DACH1

και RNAi αρνητικού ελέγχου Duplex χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη, και οι αλληλουχίες που περιγράφηκαν προηγουμένως. [12] RNAi ολιγονουκλεοτίδιο ή RNAi Αρνητικός Έλεγχος Duplex (GenePharma) διαμολύνθηκε σε κύτταρα KYSE140 χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Dual-λουσιφεράσης Δοκιμασία

KYSE510 και KYSE150 κύτταρα (3 χ 10

3) σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων, επωάστηκαν για 24 ώρες και επιμολυσμένα με ένα κατάλληλο συνδυασμό των ρεπόρτερ, πλασμίδια έκφρασης και φορέα ελέγχου, συμπεριλαμβανομένης SBE4-luc πλασμίδιο αναφοράς (20 ng /φρεάτιο ), τον φορέα ελέγχου ρΡΙ_-ΤΚ (2 ng /φρεάτιο) ως ρεπόρτερ εσωτερικός έλεγχος, και αυξανόμενες ποσότητες

DACH1

πλασμίδιο exprssion. Τα κύτταρα τον ορό επί 36 ώρες και στη συνέχεια διεγέρθηκαν με ή χωρίς ΤΟΡ-β1 (Peprotech) για 12 ώρες πριν από την δοκιμασία λουσιφεράσης. Σχετική δραστηριότητες λουσιφεράσης μετρήθηκαν με το σύστημα προσδιορισμού Reporter διπλής λουσιφεράσης (Promega) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Για κάθε πείραμα, η δοκιμασία λουσιφεράσης εκτελέστηκε τρεις φορές.

Protein Παρασκευή και Ανάλυση Western Blot

απομόνωση πρωτεϊνών και στύπωμα western πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως. [12] Τα πρώτα αντισώματα ήταν ως εξής: DACH1 (Proteintech)? c-myc, ρ21, φωσφο-Smad3, cyclinD1 (Cell Technology σηματοδότηση)? CDK4 (Affinity)? φωσφο-Smad2 (Millipore)? cyclinE1, CDK2, Smad2 και Smad3 (Bioworld Technology)? β-ακτίνης (Beyotime). Οι κηλίδες απεικονίστηκαν με τη χρήση ενισχυμένης χημειοφωταύγειας (Pierce Bioscience).

In vivo

Ογκογονικότητα

DACH1

εκφράζεται σταθερά KYSE510 κύτταρα και ανέκφραστη ελέγχου (4 × 10

6 κύτταρα σε 0,2 ml με φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα) εγχύθηκε υποδόρια στο πλευρό της ράχης του 5-εβδομάδων θηλυκούς BABL /c γυμνά ποντίκια αντίστοιχα? κάθε ομάδα περιελάμβανε 5 ποντίκια. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε κάθε 5 ημέρες για 4 εβδομάδες από 5 ημέρες μετά την εμφύτευση, και ο όγκος του όγκου προσδιορίστηκε με τον ακόλουθο τύπο: όγκος του όγκου (mm

3) = [μήκος (mm)] × [πλάτος (mm) ]

2/2. Όλες οι διαδικασίες εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας Ζώων της κινεζικής PLA Γενικό Νοσοκομείο (Αριθμός Άδειας: 2013-X8-40). Όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα που συλλέγονται από πολλαπλά ανεξάρτητα πειράματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM, και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το

t

test του Student. DACH1 επίπεδο έκφρασης μεταξύ καρκίνο του οισοφάγου και συμφωνημένα παρακείμενο δείγματα ιστού συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ που υπογράφηκε-rank Wilcoxon. ο συντελεστής Spearman υπολογίσθηκε για την αξιολόγηση του συσχετισμού μεταξύ της έκφρασης και μεθυλίωση του DACH1. Η σχέση μεταξύ κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά και την κατάσταση DACH1 μεθυλίωσης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ chi-square. Ένα

σ

τιμή μικρότερη του 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS 15.0 λογισμικού.

Αποτελέσματα

Έκφραση DACH1 ρυθμίζεται προς τα κάτω από τον Διοργανωτή Περιφέρεια υπερμεθυλίωση στο ESCC Γραμμές κυττάρων

έκφραση DACH1 ρυθμιζόταν από τον υποστηρικτή υπερμεθυλίωση περιοχή στο ανθρώπινο ορθοκολικό και ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα. [12], [13] Για να εξερευνήσετε τη ρύθμιση των

DACH1

στην ESCC, η έκφραση και η κατάσταση μεθυλίωσης του

DACH1

ανιχνεύθηκαν με RT-PCR και MSP σε καρκίνο του οισοφάγου κυτταρικές σειρές. Όπως φαίνεται στο σχήμα 1Α, απώλεια της έκφρασης DACH1 βρέθηκε στην KYSE150, KYSE510, ΤΕ1 και κύτταρα TE3, μειωμένη έκφραση DACH1 είχε εμφανιστεί σε κύτταρα TE8, και η έκφραση του DACH1 ανιχνεύθηκε σε KYSE30, KYSE70, KYSE140, KYSE180, KYSE450 και KYSE410 κύτταρα . αποτελέσματα MSP υποβλήθηκαν φαίνεται στο σχήμα 1Β.

DACH1

ήταν εντελώς μετουσιωμένο σε KYSE150, KYSE510, ΤΕ1 και κύτταρα TE3, εν μέρει TE8, και μη μεθυλιωμένη σε KYSE30, KYSE70, KYSE140, KYSE180, KYSE450 και KYSE410 κύτταρα. αποτελέσματα MSP περαιτέρω επικυρωθεί από το όξινο θειώδες αλληλουχίας (BSSQ) σε KYSE150, KYSE510, TE8 και KYSE140 κύτταρα (Εικ. 1Γ). Παραπάνω αποτελέσματα δείχνουν ότι η περιοχή του υποκινητή υπερμεθυλίωση συσχετίζεται με την απώλεια /μείωση του

DACH1

έκφρασης. Re-έκφραση /αύξηση της έκφρασης του

DACH1

προκλήθηκε με 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνη (5-ΑΖΑ) σε

DACH1

μεθυλιωμένα καρκίνο του οισοφάγου κυτταρικές γραμμές (KYSE150, KYSE510, TE8, Σχ. 1Α). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι το

DACH1

έκφραση ρυθμίζεται από υποκινητή μεθυλίωση περιοχής σε κυτταρικές σειρές ESCC.

(Α)

DACH1

επίπεδο έκφρασης ανιχνεύεται με RT-PCR σε καρκίνο του οισοφάγου κυττάρων γραμμές. (Β) την κατάσταση μεθυλίωσης στην περιοχή του υποκινητή? IVD:

in vitro

μεθυλιωμένο DNA, χρησιμοποιείται ως έλεγχος μεθυλίωση? NL: κανονικό DNA των λεμφοκυττάρων στο αίμα, χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος unmethylation? U: μη μεθυλιωμένη αλληλόμορφα? M: μεθυλιωμένα αλλήλια. (C) BSSQ του

DACH1

περιοχή του υποκινητή (-426 bp έως -140 bp) σε KYSE150, KYSE510, TE8 και KYSE140 κύτταρα? διπλό βέλος: MSP προϊόντος PCR, που εκτείνονται σε 130 bp. Γεμάτοι κύκλοι: μεθυλιωμένες CpG θέσεις? ανοιχτοί κύκλοι:. μη μεθυλιωμένα CpG θέσεις

Η

DACH1 συχνά μεθυλιώνεται Ανθρωπίνων καρκίνο του οισοφάγου

Για να διερευνηθεί περαιτέρω η κατάσταση μεθυλίωσης του

DACH1

κατά τη διάρκεια της ανθρώπινης ανάπτυξης ESCC, 10 περιπτώσεις φυσιολογικό οισοφαγικό βλεννογόνο, 51 περιπτώσεις των διαφόρων βαθμών της δυσπλασίας και 104 περιπτώσεις πρωτογενούς ESCC είχαν εντοπιστεί από MSP. Όπως φαίνεται στο σχήμα 2Α και 2Β, 18.8% (6 από 32) του οισοφάγου βαθμού 1 δυσπλασία (Εϋ1), 42,1% (8 από 19) του βαθμού 2 και βαθμού 3 δυσπλασία (ED2,3) και 61,5% (64 από 104) του διηθητικού καρκίνου του οισοφάγου (ΕΚ) ήταν μεθυλιωμένα, αλλά καμία από τις 10 περιπτώσεις κανονικής οισοφαγικού βλεννογόνου μεθυλιώθηκε. Η συχνότητα των

DACH1

μεθυλίωση αυξήθηκε σε εξέλιξη τάση κατά τη διάρκεια του οισοφάγου καρκινογένεση (

P

& lt? 0,01).

DACH1

μεθυλίωση συσχετίστηκε με κακή διαφοροποίηση (

P

& lt? 0,05) και το στάδιο αργά όγκου (

P

& lt? 0.05) σημαντικά. Δεν βρέθηκε κάποια σχέση μεταξύ

DACH1

μεθυλίωση και την ηλικία, το φύλο, τη μετάσταση ή το μέγεθος του όγκου (

P

& gt? 0,05, Πίνακας 1). Παραπάνω αποτελέσματα δείχνουν ότι

DACH1

μεθυλίωση είναι ένα πρώιμο περίπτωση του οισοφάγου καρκινογένεση και μεθυλίωση του

DACH1

συσσωρεύεται κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου του οισοφάγου. Η έκφραση του DACH1 εκτιμήθηκε με ανοσοϊστοχημεία (IHC) σε 30 περιπτώσεις συμφωνημένα οισοφαγικού καρκίνου και γειτονικά δείγματα ιστών. Η έκφραση ήταν σημαντικά μειωμένη σε δείγματα καρκίνου (

P

& lt?. 0.01, Σχήμα 2Γ και 2Δ). Είναι δείχνουν ότι

DACH1

είναι δυνατόν καταστολέα όγκου σε καρκίνο του οισοφάγου. Για να δείτε εάν η έκφραση DACH1 ρυθμιζόταν από μεθυλίωση του DNA σε ανθρώπινα πρωτογενή καρκίνο, η ένωση των DACH1 έκφρασης και της περιοχής υποκινητή υπερμεθυλίωση αναλύθηκε. Μειωμένη έκφραση βρέθηκε σε 19 περιπτώσεις καρκίνου του ιστού και 15 περιπτώσεις ήταν μεθυλιωμένα (Σχ. 2Ε). Μείωση της έκφρασης DACH1 συνδέθηκε με την περιοχή υποκινητή υπερμεθυλίωση σημαντικά (

P

& lt? 0,01). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η έκφραση DACH1 ρυθμίζεται από περιοχή του υποκινητή υπερμεθυλίωση σε ανθρώπινα πρωτογενή ESCC.

(Α) αποτελέσματα Εκπρόσωπος MSP της

DACH1

κατάσταση μεθυλίωσης σε φυσιολογικό οισοφαγικό βλεννογόνο (ΒΑ), του οισοφάγου δυσπλασία ( ΕΔ) και καρκίνο του οισοφάγου (ΕΚ). (Β)

DACH1

συχνότητα μεθυλίωσης στο ΒΑ, Εϋ1, ED2 και ED3, και ΕΚ. Η συχνότητα των μεθυλιωμένο

DACH1

χαράχθηκαν σύμφωνα με ιστολογική βαθμό και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ chi-square. **

P

& lt? 0,01. αποτελέσματα (C) Αντιπροσωπευτική IHC για έκφραση DACH1 σε πρωτογενείς καρκίνο του οισοφάγου (αριστερά) και γειτονικούς ιστούς (δεξιά)? ανώτερη φάση, X200? κατώτερη φάση, X400. (Δ) επίπεδο έκφρασης DACH1 σε 30 περιπτώσεις συνδυάζεται πρωτογενούς καρκίνου και των γειτονικών δειγμάτων ιστού? Θηκόγραμμα: αντιπροσωπεύει το επίπεδο έκφρασης DACH1? οριζόντια γραμμή: αντιπροσωπεύουν το μέσο επίπεδο? το πάνω και κάτω γραμμή των κουτιά αντιπροσωπεύουν το 75% και% επίπεδο 25 έκφρασης, αντίστοιχα? κάθετες μπάρες αντιπροσωπεύουν διαφορετικά επίπεδα έκφρασης. **

P

& lt? 0,01 έναντι γειτονικών δειγμάτων ιστού χρησιμοποιώντας Wilcoxon signed-rank test. (Ε) Η ένωση του

μεθυλίωση και την απώλεια DACH1

/μειωμένη έκφραση σε 30 περιπτώσεις ESCC. **

P

& lt?. 0.01, ο συντελεστής Spearman του

Η

Αποκατάσταση της έκφρασης DACH1 Καταστέλλει του οισοφάγου την ανάπτυξη του καρκίνου και

in vitro

και

in vivo

η

για να δείτε το αποτέλεσμα του

DACH1

στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ESCC, KYSE510 και KYSE150 κυττάρων με τα οποία εκφράζουν σταθερά

DACH1

ή κενό φορέα ιδρύθηκαν από φακοϊό μεταγωγή. Η βιωσιμότητα των κυττάρων και του σχηματισμού αποικιών αναλύθηκαν σε

DACH1

εκφράζεται σταθερά κύτταρα και ανέκφραστη ελέγχου. Re-έκφραση του

DACH1

πολλαπλασιασμό ανέστειλε κυττάρων (

P

& lt? 0,01, Σχήμα 3Α.) Και το σχηματισμό αποικιών (

P

& lt? 0,05, Σχήμα 3Β.) Σε αυτές οι κυτταρικές γραμμές. Η λειτουργία του

DACH1

για τον καρκίνο του οισοφάγου μελετήθηκε επίσης σε μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντίκια (Σχ. 3C). Το μέγεθος του όγκου ήταν μικρότερη σε

DACH1

εξέφρασε KYSE510 κύτταρα σε σχέση με τον έλεγχο (104,23 ± 21,38 χιλιοστά

3 vs 494,65 ± 81,98 χιλιοστά

3

P

& lt? 0.01, Εικ . 3D), και το βάρος του όγκου ήταν μικρότερη σε

DACH1

εκφράζεται KYSE510 κύτταρα σε σχέση με την ομάδα ελέγχου (78 ± 28 mg έναντι 182 ± 37 mg,

P

& lt?. 0.01, Σχ 3Ε ). Η έκφραση της DACH1 επικυρώθηκε από την IHC σε ξενομόσχευμα (Εικ. 3F). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι

DACH1

καταστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του οισοφάγου και

in vitro

και

in vivo

.

(Α) καμπύλες ανάπτυξης αντιπροσωπεύουν CCK-8 δοκιμασία αποτελέσματα για

DACH1

εξέφρασε κύτταρα και ανέκφραστη cells.Points, σημαίνει από τέσσερα ανεξάρτητα πειράματα? μπαρ, SEM. **

P

& lt? 0,01,

t

test του Student. (Β) Αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα σχηματισμού αποικιών σε

DACH1

εκφράζεται και ανέκφραστη κυτταρικές σειρές KYSE150 KYSE510 και. Στήλες, σημαίνει από τέσσερα ανεξάρτητα πειράματα? μπαρ, SEM. *,

P

& lt? 0,05 έναντι των ελέγχων με τη χρήση

t

test του Student. (Γ) Εκπρόσωποι αποτελέσματα των όγκων ξενομοσχεύματος σε γυμνά ποντίκια για

DACH1

εκφράζεται και ανέκφραστη κύτταρα KYSE510. καμπύλες (Δ) Ανάπτυξη αντιπροσωπεύουν το μέγεθος του όγκου σε ποσοστό

DACH1

εκφράζεται και ανέκφραστη κύτταρα KYSE510 ξενομόσχευμα ποντίκια σε διαφορετικό χρόνο. Σημεία, σημαίνει 5 ποντίκια? . Μπαρ, SEM *,

P

& lt? 0,01, του Student

t

τεστ. (Ε) Αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα του βάρους του όγκου σε

DACH1

εκφράζεται και ανέκφραστη κύτταρα KYSE510 ξενομόσχευμα ποντίκια σε διαφορετικό χρόνο. Στήλες, σημαίνει 5 ποντίκια? μπαρ, SEM. *,

P

& lt? 0,01,

t

test του Student. (F) αντπροσωπευτικές DACH1 αποτελέσματα έκφρασης ανιχνεύεται με IHC για

DACH1

εκφράζεται και ανέκφραστη κύτταρα KYSE510 ξένου μοσχεύματος. έκφραση DACH1 βρέθηκε στο

DACH1

εξέφρασε KYSE510 κυττάρων ξενομοσχεύματος. (δικαίωμα). Μεγέθυνση: ανώτερη φάση, X200? κατώτερη φάση, Χ400.

Η

Αποκατάσταση DACH1 Έκφραση Αυξημένη G

1 Φάση και μειωμένη S φάσης κύτταρα

Η επίδραση του

DACH1

σε κυτταρικό κύκλο ήταν αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής σε κυτταρικές σειρές KYSE510 και KYSE150. Όπως φαίνεται στο σχήμα 4Α, η αναλογία των κυττάρων φάση G1 ήταν 51,05 ± 2,28% και 38,56 ± 1,64% στο

DACH1

εκφράζεται και ανέκφραστη KYSE510 κυτταρικές σειρές (

P

& lt? 0,05). Η αναλογία της φάσης S ήταν 25.72 ± 0.99% και 37.09 ± 1.49% στο

DACH1

εκφράζεται και ανέκφραστη KYSE510 κυτταρικές σειρές (

P

& lt? 0,05). Η αναλογία των κυττάρων φάση G1 ήταν 65,46 ± 2,84% και 44,41 ± 2,87% στο

DACH1

εκφράζεται και ανέκφραστη KYSE150 κυτταρικές σειρές (

P

& lt? 0,05). Η αναλογία της S φάσης ήταν 12,34 ± 0,10% και 32,06 ± 1,32% στο

DACH1

εκφράζεται και ανέκφραστη KYSE150 κυτταρικές σειρές (

P

& lt? 0,01). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι

DACH1

αυξάνει την φάση G1 και μειώνεται κύτταρα φάσης S σε καρκίνο του οισοφάγου

(Α) κυτταρομετρία ροής αποτελέσματα δείχνουν:. Η διανομή φάση των κυττάρων σε DACH1 ανέκφραστη και εξέφρασε KYSE510 και KYSE150 κύτταρα . Στήλες, σημαίνει τριών ανεξάρτητων πειραμάτων? μπαρ, SEM. *,

P

& lt? 0,05? **

P

& lt? 0,01,

t

test του Student. (Β) τα αποτελέσματα κηλίδος Western δείχνουν: έκφραση του σημείου ελέγχου G1 /S συναφή γονίδια σε DACH1 ανέκφραστη και εξέφρασε KYSE510 και KYSE150 κύτταρα, β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης

Η

Η αυξημένη έκφραση του CDK2. , CDK 4, cyclinD1 και cyclinE1 αντιπροσωπεύει συνήθως την προώθηση του κυτταρικού κύκλου από τη φάση G1 στην S φάση. Όπως φαίνεται στο σχήμα 4Β, η έκφραση των CDK2, CDK 4, cyclinD1 και cyclinE1 μειώθηκαν προφανώς σε

DACH1

εκφράζεται KYSE510 και KYSE150 κυττάρων σε σύγκριση με ανέκφραστη κύτταρα. Αυτό σημαίνει ότι

DACH1

καταστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αναστέλλοντας G

1 /S σημείου ελέγχου για τον καρκίνο του οισοφάγου. Η επίδραση του

DACH1

στην κυτταρική απόπτωση αναλύθηκε επίσης με κυτταρομετρία ροής σε κυτταρικές σειρές KYSE510 και KYSE150, αλλά καμία αλλαγή απόπτωση βρέθηκε πριν και μετά την αποκατάσταση της

DACH1

έκφραση σε αυτές τις δύο κυτταρικές σειρές (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Αποκατάσταση DACH1 Έκφραση ενεργοποιεί TGF-β σηματοδότηση στα ESCC

προηγούμενη μελέτη μας διαπίστωσε ότι

DACH1

εκτελούνται επίδραση αντι-πολλαπλασιασμό ενεργοποιώντας ΤΟΡ β σηματοδότηση και την αναστολή της έκφρασης c-Myc σε ανθρώπινο ηπατοκυτταρικό κυτταρικές γραμμές καρκινώματος. [13] Για να προσδιοριστεί αν η σηματοδότηση TGF-β ρυθμίζεται από

DACH1

στο ESCC, δοκιμασία ρεπόρτερ διπλής λουσιφεράσης χρησιμοποιήθηκε για να εξετάσει δραστηριότητα λουσιφεράσης SBE4 σε κυτταρικές σειρές KYSE510 και KYSE150. Όπως φαίνεται στο σχήμα 5Α, δραστικότητα προαγωγού SBE4 αυξήθηκε περισσότερο από 3 φορές σε KYSE510 και 2,6 φορές σε KYSE150 κύτταρα μετά από αποκατάσταση της

DACH1

έκφραση και η δραστικότητα αυξήθηκε με έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο με την αποκατάσταση του

DACH1

έκφραση σε συνδυασμό με τη θεραπεία με TGF-β1. Για την περαιτέρω κατανόηση του μηχανισμού

DACH1

επί σηματοδότηση TGF-β, το επίπεδο της φωσφορυλιωμένης Smad2 (ρ-Smad2) και φωσφορυλιωμένου Smad3 (ρ-Smad3), και κατάντη στόχους του, ρ21 και c-Myc αξιολογήθηκαν στο

DACH1

ανέκφραστη και εξέφρασε κυτταρικές σειρές KYSE510 και KYSE150. Το επίπεδο της p-Smad2 δεν άλλαξε πριν και μετά την εκ νέου έκφραση του

DACH1

, ενώ το επίπεδο της p-Smad3 αυξήθηκε μετά την εκ νέου έκφραση του

DACH1

. Το επίπεδο του ρ-Smad2 και Smad3 ρ-αυξήθηκαν μετά την προσθήκη ΤΟΡ-β1. p-Smad3 αυξήθηκε προφανώς όταν προστίθεται TGF-β1 σε

DACH1

εκ νέου εξέφρασε KYSE510 και KYSE150 κύτταρα. Η έκφραση των γονιδίων κατάντη ήταν διαφορετικά. ρ21 ήταν επάνω ρυθμισμένη και c-Myc ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω μετά την εκ νέου έκφραση του

DACH1

(Εικ. 5Β). Είναι υπαινίσσεται ότι η σηματοδότηση ΤΟΡ-β ενεργοποιείται με

DACH1

και ΤΟΡ-β1 ενισχύει αυτό το αποτέλεσμα. Για να επικυρώσετε περαιτέρω την επίδραση του

DACH1

για σηματοδότηση TGF-β, siRNA νοκ ντάουν τεχνική που χρησιμοποιείται. Το επίπεδο της p-Smad2 δεν άλλαξε μετά από να χτυπήσει κάτω

DACH1

στο

DACH1

εξέφρασε KYSE140 κύτταρα, αλλά το επίπεδο του p-Smad3 μειώθηκε όταν χτυπήσει κάτω

DACH1

. Τόσο ρ-Smad2 και Smad3 ρ-αυξήθηκαν μετά την προσθήκη ΤΟΡ-β1. p-Smad3 αυξήθηκε ελαφρώς με την προσθήκη TGF-β1 σε siRNA επιμολυσμένα KYSE140 κύτταρα σε σύγκριση με μόνο να χτυπήσει κάτω

DACH1

. Μειωμένη p21 και αυξημένη έκφραση c-Myc βρέθηκαν μετά από να χτυπήσει κάτω

DACH1

σε KYSE140 κύτταρα (Εικ. 5C και 5D). Πάνω από τα αποτελέσματα υποδηλώνουν περαιτέρω ότι η σηματοδότηση ΤΟΡ-β ενεργοποιείται με

DACH1

σε ανθρώπινο καρκίνο του οισοφάγου.

(Α) Smad-δεσμευτικά στοιχεία (SBE) -4 δραστηριότητες ρεπόρτερ Luc σε KYSE510 και KYSE150 κύτταρα . Στήλες, σημαίνει τριών ανεξάρτητων πειραμάτων? μπαρ, SEM. (Β) Το επίπεδο έκφρασης του ΤΟΡ-β σηματοδότηση κατάντη γονιδίων σε

DACH1

εκφράζεται κύτταρα και ανέκφραστη κύτταρα, β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Γ) Η απόδοση των siRNAs που στοχεύουν στο

DACH1

στο KYSE140 κύτταρα. (Δ) Το επίπεδο έκφρασης του TGF-β σηματοδότηση κατάντη γονίδια στο

DACH1

-siRNA KYSE140 κυττάρων και την ομάδα ελέγχου, β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Συζήτηση

Η έκφραση του DACH1 μειώθηκε σε μαστού, του προστάτη, του πνεύμονα, του ενδομητρίου, του παχέος εντέρου και ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, αλλά αυξήθηκε σε καρκίνο των ωοθηκών. [7] – [13], [21] η έκφραση DACH1 ρυθμιζόταν από τον υποστηρικτή υπερμεθυλίωση περιοχή του ενδομητρίου, του παχέος εντέρου και ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα. [11] – [13] Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι η έκφραση DACH1 μειώθηκε και η έκφραση της DACH1 ρυθμιζόταν από περιοχή προαγωγέα υπερμεθυλίωση σε ανθρώπινο καρκίνο του οισοφάγου. Είχαμε αναφερθεί ότι πολλοί καταστολείς όγκων ήταν μεθυλιωμένα με μια τάση εξέλιξη κατά τη διάρκεια του οισοφάγου καρκινογένεση. [15], [16], [22], [23] Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε την κατάσταση μεθυλίωσης του

DACH1

σε φυσιολογικό οισοφαγικό βλεννογόνο, διαφορετικές ποιότητες της δυσπλασίας και διηθητικού καρκίνου.

DACH1

ήταν συχνά μεθυλιώθηκε σε καρκίνο του οισοφάγου και η συχνότητα αυξάνεται με την πρόοδο της οισοφαγικής καρκινογένεσης από φυσιολογικό οισοφαγικό βλεννογόνο σε διηθητικό καρκίνο. Αυτό σημαίνει ότι

DACH1

είναι ένας δείκτης έγκαιρης ανίχνευσης του καρκίνου του οισοφάγου. Η συσχέτιση της κακής διαφοροποίησης και όψιμο στάδιο όγκου με

DACH1

μεθυλίωση υποδηλώνει ότι

DACH1

μεθυλίωση μπορεί να χρησιμεύσει ως καρκίνο του οισοφάγου προγνωστικός δείκτης.

DACH1

ήταν θεωρηθεί ως καταστολέας όγκου ή ενός ογκογονιδίου σε διαφορετικό είδος καρκίνου. [7] – [13], [21] Στη μελέτη μας,

DACH1

βρέθηκε να καταστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του οισοφάγου και

in vitro

και

in vivo

. Η υπεροικογένεια ΤΟΡ-β είναι ένα σύνολο πολυλειτουργικό κυτοκινών που ρυθμίζουν την κυτταρική ανάπτυξη, διαφοροποίηση, την απόπτωση, τη μετανάστευση και την αγγειογένεση. [24] – [27] Σε φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα, η σηματοδότηση ΤΟΡ-β περιλαμβάνει σε μεταγραφική ενεργοποίηση του εξαρτάται από κυκλίνη αναστολέα κινάσης p21Cip1, και καταστολή της αυξητικών παράγοντας μεταγραφής c-Myc. Συνεργατικά, αυτές οι απαντήσεις γονίδιο μεσολαβήσει διακοπή του κυτταρικού κύκλου στη φάση G1. [28] – [30] ΤΟΡ-β σηματοδότηση παίζει κρίσιμο αλλά παράδοξο ρόλο στη διαφορετικών καρκίνων [31] – [33]. Στον καρκίνο του μαστού, σηματοδότηση ΤΟΡ-β καταστέλλει την ανάπτυξη των κυττάρων στο πρώιμο στάδιο και να προωθήσει εισβολή καρκίνου στο προχωρημένο στάδιο. [34] Προηγούμενη μελέτη για τον καρκίνο του μαστού έδειξε ότι DACH1 ανέστειλε TGF-β σηματοδότηση μέσω δεσμευτικών Smad4. [20] Ενώ σε ηπατοκυτταρικό καρκίνο, βρήκαμε DACH1 ενεργοποιείται σηματοδότηση ΤΟΡ-β με την αύξηση της ρ-Smad3. Ενίσχυσε καταστολή της έκφρασης c-Myc και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. [13].

Προς στήριξη της προηγούμενης έκθεσης ότι DACH1 προκαλείται από πρωτεΐνη p21 αφθονία και ανταγωνίστηκε Myc που προκαλείται από ογκογόνο φαινότυπο στον καρκίνο του μαστού, [35] βρήκαμε εδώ ότι η έκτοπη έκφραση DACH1 μόνη της σε καρκίνο του οισοφάγου κυττάρων αυξήθηκε p21 και μειωμένη c-Myc επίπεδο πρωτεΐνης (Εικ. 5Β). Επιπλέον, DACH1 synergized με ΤΟΡ-β για να ενισχύσει την επαγωγή του ρ21 και καταστολής του c-myc? αντίστοιχα, να χτυπήσει κάτω DACH1 κατέστειλε σηματοδότησης TGF-β σε KYSE140 κύτταρα. σηματοδότηση ΤΟΡ-β μπορεί να αλληλοπαρεμβολές με πολλές άλλες οδούς. p53 και Smads σωματικά αλληλεπίδραση και συνεργικά coregulated TGF-β γονίδια-στόχους, όπως p21 και p15. [36] Πρόσφατες μελέτες έδειξαν ότι η DACH1 σχετίζονται με την ρ53 και βελτιωμένη λειτουργία ρ53 να επάγει απόπτωση και αναστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου. Περαιτέρω μελέτη έδειξε ότι DACH1 κοινόχρηστο πληρότητα -15% των γονιδίων p53-δεσμεύεται στην αλληλουχίας chip. [7], [9] Όπως DACH1 ενεργοποιημένο ΤΟΡ-β σηματοδότηση (Εικ. 5Α) και επαγόμενη φωσφορυλίωση του Smad2 /3 (Εικ. 5Β), μια πιθανή εξήγηση είναι η ενεργοποίηση και σταθεροποίηση των Smad2 σύμπλοκο /3 πρωτεΐνης με DACH1 σαν p53 . Ωστόσο, ο μηχανισμός λεπτομέρεια που χρειάζεται να αποδειχθεί.

Εν κατακλείδι,

DACH1

συχνά μεθυλιώνονται στον ανθρώπινο καρκίνο του οισοφάγου και μεθυλίωση του

DACH1

εμπλέκεται στο πρώιμο στάδιο του οισοφάγου καρκινογένεση. DACH1 έκφραση ρυθμίζεται από την περιοχή υποκινητή υπερμεθυλίωση.

DACH1

καταστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του οισοφάγου, με την ενεργοποίηση σηματοδότησης TGF-β.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Δρ Cvekl για την παροχή φορείς έκφρασης DACH1.