Αφηρημένο

Πρόσφατα, στοχεύουν καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) ο μεταβολισμός γίνεται μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτική προσέγγιση για τη βελτίωση των αποτελεσμάτων της θεραπείας του καρκίνου. Ωστόσο, η γνώση της μεταβολική κατάσταση των ΚΕΠ σε μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα εξακολουθεί να απουσιάζει. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι τα ΚΕΠ είχαν σημαντικά χαμηλότερο ρυθμό κατανάλωσης οξυγόνου και εξωκυτταρικό ρυθμό οξίνισης από τα καρκινικά κύτταρα μη-στέλεχος. Εν τω μεταξύ, αυτό το υποπληθυσμός κυττάρων που καταναλώνεται λιγότερη γλυκόζη, που παράγεται λιγότερο γαλακτικό και διατηρείται χαμηλότερα επίπεδα ΑΤΡ. Μπορούμε επίσης αποκάλυψε ότι ΚΕΠ θα μπορούσαν να παράγουν περισσότερο ATP μέσω της μιτοχονδριακής υποστρώματος επίπεδο φωσφορυλίωσης κατά τη διάρκεια του αναπνευστικού αναστολή σε σύγκριση με καρκινικά κύτταρα μη-στέλεχος. Επιπλέον, ήταν πιο ευαίσθητα σε καταστολή της οξειδωτικής φωσφορυλίωσης. Ως εκ τούτου, ολιγομυκίνης (αναστολέας της οξειδωτικής φωσφορυλίωσης) θα μπορούσε σοβαρά βλάψει σχηματισμού σφαίρας και τις ικανότητες του όγκου έναρξη των ΚΕΠ. Η εργασία μας δείχνει ότι τα ΚΕΠ αποτελούν μεταβολικά ανενεργό υποπληθυσμών των όγκων που διατηρούν σε μια κατάσταση που δείχνει χαμηλή μεταβολική δραστηριότητα. Ωστόσο, μιτοχονδριακή υπόστρωμα επιπέδου φωσφορυλίωσης των ΚΕΠ μπορεί να είναι πιο δραστικό από ότι των καρκινικών κυττάρων μη-στελέχους. Επιπλέον, ΚΕΠ έδειξε προνομιακή χρήση της οξειδωτικής φωσφορυλίωσης πάνω γλυκόλυση για να καλύψουν τις ενεργειακές τους ανάγκες. Αυτά τα αποτελέσματα επεκτείνουν την κατανόησή μας για το μεταβολισμό ΚΕΠ, ενδεχομένως παρέχοντας νέες θεραπευτικές στρατηγικές που στοχεύουν μεταβολικές οδούς σε μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα

Παράθεση:. Gao C, Shen Υ, Jin F, Miao Υ, Qiu Χ (2016) Cancer Stem κύτταρα σε μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα γραμμής Η446: Μεγαλύτερη εξάρτηση από οξειδωτική φωσφορυλίωση και μιτοχονδριακού υποστρώματος επιπέδου φωσφορυλίωσης από μη βλαστικά κύτταρα του καρκίνου. PLoS ONE 11 (5): e0154576. doi: 10.1371 /journal.pone.0154576

Επιμέλεια: Rafael Moreno-Sanchez, Instituto Nacional de Cardiologia, ΜΕΞΙΚΟ

Ελήφθη: 25, Μάρ, 2015? Αποδεκτές: 15η Απριλίου, 2016? Δημοσιεύθηκε: May 11, 2016

Copyright: © 2016 Gao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:.. η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Πρόγραμμα Έρευνας της Εφαρμοσμένης Βασικά και τεχνολογίες αιχμής της Tianjin κάτω Σύμβαση αρ 14JCZDJC35500

ανταγωνιστικά συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (SCLC) είναι ένας τύπος πολύ επιθετικός όγκος που αντιπροσωπεύει περίπου το 15% όλων των περιπτώσεων καρκίνου του πνεύμονα [1,2]. Αν και οι ασθενείς με SCLC έχει αρχική καλή κλινική απόκριση σε ραδιοθεραπεία ακτινοβολία, οι περισσότεροι ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με αυτές τις προσεγγίσεις θα υποτροπιάσουν μετά από ένα σύντομο χρονικό διάστημα [3]. Αυτό μπορεί εν μέρει να αποδοθεί στην αποτυχία για την εξάλειψη του καρκίνου βλαστικών κυττάρων (ΚΕΠ), που έχουν την ικανότητα να αυτο-ανανέωση, να διαφοροποιούνται σε πολλαπλές γενεές και να κινήσει όγκων σε ανοσοκατεσταλμένους ποντικούς [4,5]. ΚΕΠ πιστεύεται ότι είναι πιο ανθεκτικά στις ράδιο- και χημειο-θεραπεία από τα καρκινικά μη βλαστικά κύτταρα [5]. Ως εκ τούτου, είναι ζωτικής σημασίας για την ανάπτυξη των ελπιδοφόρων θεραπευτικών στρατηγικών που στοχεύουν ΚΕΠ ξεπερνώντας την αντίσταση τους για τα ναρκωτικά.

Πρόσφατα, φαίνεται όλο και πιο σαφές ότι η «μεταβολική επαναπρογραμματισμό» των καρκινικών κυττάρων υπήρξε μια αναδυόμενη σήμα κατατεθέν του φαινοτύπου του καρκίνου [6 , 7]. Σε αντίθεση με τα κανονικά κύτταρα, τα καρκινικά κύτταρα υιοθετήσει μια εναλλακτική μεταβολική οδό και εμφανίζουν ενισχυμένη μεταβολισμό της γλυκόζης και η παραγωγή του γαλακτικού ακόμη και παρουσία οξυγόνου [8-10]. Αυτή η προνομιακή χρήση αερόβια γλυκόλυση [11], που είναι γνωστό ως το φαινόμενο Warburg. Παρά το γεγονός ότι η αερόβια γλυκόλυση πιστεύεται ότι είναι ένα σχεδόν καθολικό φαινόμενο σε καρκινικά κύτταρα, μεταβολικές λειτουργίες των ΚΕΠ και της σημασίας τους στη θεραπευτική του καρκίνου παραμένουν ακόμα διαμάχη [12]. Ciavardelli et al [13] ανέφεραν ότι ο καρκίνος του μαστού βλαστικά κύτταρα είναι πιο γλυκολυτικό από τους μη-βλαστικών ομολόγους τους. Η μελέτη του Liao [14] και οι συνεργάτες του έχει επίσης δείξει ότι ο καρκίνος των ωοθηκών βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν με μεταβολίζουν κυρίως γλυκόζης από την αναερόβια γλυκόλυση και πεντόζη κύκλο. Εν τω μεταξύ, Yuan et al [5] έχουν δείξει ότι τα βλαστικά κύτταρα γλοιοβλαστώματος (GSCS) εμφανίζουν προνομιακή χρήση της γλυκόλυσης πάνω μιτοχονδριακή αναπνοή. Ωστόσο, Vlashi et al [15] έχουν δείξει ότι GSCS βασίζονται περισσότερο στην οξειδωτική φωσφορυλίωση (OXPHOS) από γλυκόλυση. Λαγκαδινού et al [16], επίσης, έχουν αποδείξει ότι η ΚΕΠ έδειξε μια μεγαλύτερη εξάρτηση από OXPHOS για την παροχή ενέργειας στα κύτταρα της λευχαιμίας. Pasto et al [9] έχουν δείξει ότι τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα από ασθενείς με επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών εμφάνισαν μεταβολικό προφίλ κυριαρχείται από OXPHOS. Παρά το γεγονός ότι υπάρχουν περιορισμένα δημοσιευμένα στοιχεία σχετικά με τις ιδιότητες του μεταβολισμού των ΚΕΠ [17], κανένας στο SCLC. Ως εκ τούτου, για να σχεδιάσει νέες θεραπευτικές προσεγγίσεις που στοχεύουν μεταβολικές οδούς των ΚΕΠ σε SCLC, βαθιά γνώση του μεταβολική κατάσταση του κυττάρου υποπληθυσμό χρειάζεται επειγόντως [7].

Για να εξερευνήσετε τις μεταβολικές ιδιότητες των ΚΕΠ, η πρώτη αποστολή είναι εμπλουτισμού για ΚΕΠ σε SCLC κύτταρα. Απομόνωση ΚΕΠ τόσο in vivo και in vitro βασίζεται σε ειδική επιφάνεια βιοδείκτες που διευκολύνουν τη διαλογή των καρκινικών κυττάρων σε φαινοτυπικά διακριτών υποπληθυσμών [18]. υποδοχέα ενεργοποιητή πλασμινογόνου ουροκινάσης-τύπου (uPAR) είναι ένας γλυκοσυλοφωσφατιδυλοϊνοσιτόλης (GPI) πρωτεΐνη -anchored [19] και συνήθως ρυθμίζεται αυξητικά σε πολλαπλούς τύπους καρκίνου [20]. Είναι σημαντικό, το έργο μας και των άλλων εντόπισε uPAR ως μεσολαβητής της λειτουργίας του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων [21,22]. Για παράδειγμα, uPAR

+ κυττάρων σε κυτταρικές σειρές μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα έδειξαν πολυφαρμάκου αντίσταση και την ενισχυμένη κλωνογονικού δράση in vitro σε σύγκριση με uPAR

– κύτταρα [23]. Προηγούμενη εργασία από το εργαστήριο μας επίσης έχουν δείξει ότι τα βλαστικά-όπως κυττάρων υποπληθυσμών μπορεί να εμπλουτιστεί στο uPAR

+ κύτταρα [24]. Ως εκ τούτου, θα χρησιμοποιηθούν για uPAR διαλογή για εμπλουτισμό για ΚΕΠ σε SCLC κυτταρική γραμμή Η446.

Σε αυτή τη μελέτη, πρέπει πρώτα συνέκρινε την μεταβολική κατάσταση των ΚΕΠ με εκείνη των μη-βλαστικών κυττάρων καρκίνου και διαπίστωσε ότι τα ΚΕΠ ήταν μεταβολικά αδρανείς όγκου υποπληθυσμών που κατοικούσε σε μια κατάσταση που δείχνει χαμηλή μεταβολική δραστηριότητα. Στη συνέχεια μελετήσαμε τα σημαντικότερα μονοπάτια του ΚΕΠ παράγουν ενέργεια σε SCLC. Σε αντίθεση με τα καρκινικά κύτταρα μη-στέλεχος, ΚΕΠ έδειξε προνομιακή χρήση OXPHOS πάνω γλυκόλυση για να καλύψουν τις ενεργειακές τους ανάγκες. Επιπλέον, βρήκαμε επίσης ότι η ΚΕΠ θα μπορούσε να παράγει ΑΤΡ μέσω των μιτοχονδρίων υποστρώματος επίπεδο φωσφορυλίωσης.

Υλικά και Μέθοδοι

καλλιέργειας κυττάρων

Το SCLC κυτταρική σειρά NCI-Η446 αποκτήθηκε από την American Type Culture Collection (ATCC). Αυτά τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640 (Biological Industries) συμπληρωμένο με 10% FBS (Thermo Scientific HyClone), 100 U /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη σε υγροποιημένο αέρα στους 37 ° C με 5% CO

2.

η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής

διαλογή κυττάρων διεξήχθη σε εναιώρημα μεμονωμένων κυττάρων από Η446 κύτταρα χρωματίστηκαν με πρωτεύον αντίσωμα έναντι υΡΑΚ (μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού, 1: 100, American Diagnostica, Νο 3936). Στη συνέχεια, τα κύτταρα πλύθηκαν και επωάστηκαν με ΡΙΤΟ-συζευγμένο δευτερογενές αντίσωμα (Dako) για 30 λεπτά. Όλα τα δείγματα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κυτταρόμετρο ροής FACSCalibur (BD Biosciences) και αναλύθηκαν με λογισμικό CellQuest (BD Biosciences). uPAR

+ κύτταρα και uPAR

– κύτταρα ταξινομούνται με FACS χρησιμοποιήθηκαν σε όλα τα πειράματα μας (S1 Σχήμα)

Η κατανάλωση οξυγόνου και εξωκυτταρικό ρυθμό οξίνισης

Το εξωκυτταρικό Flux Analyzer. επιτρέπει την ανάλυση ρυθμός κατανάλωσης οξυγόνου (OCR) και εξωκυτταρικό ρυθμό οξίνισης (ECAR) ενός καθορισμένου αριθμού κυττάρων σε πραγματικό χρόνο και για την παρακολούθηση απόκρισή τους σε φαρμακευτική αγωγή [15]. Τα κύτταρα επιστρώθηκαν σε πυκνότητα 1 × 10

5 κύτταρα που κάθε φρεάτιο πλακών 24 φρεατίων. Την επόμενη ημέρα τα κύτταρα πλύθηκαν και προστέθηκε φρέσκο ​​μέσο. Το φυσίγγιο φορτώθηκε για να διανέμει τρία διαδοχικά μεταβολικούς αναστολείς όπως συγκεκριμένα χρονικά σημεία: ολιγομυκίνη (αναστολέας της συνθάσης ΑΤΡ, 1 μΜ), που ακολουθείται από FCCP (ένα protonophore και αποζεύκτης των μιτοχονδριακών OXPHOS, 0.3 μΜ), ακολουθούμενη από την προσθήκη ενός συνδυασμού rotenone (μιτοχονδριακού συμπλόκου Ι αναστολέα, 1 μΜ) και αντιμυκίνη (μιτοχονδριακή αναστολέα σύμπλεγμα III, 1 μΜ). Basal OCR και ECAR μετρήθηκαν, καθώς και αλλαγές στην ECAR που προκαλούνται από τις μεταβολικές τους αναστολείς που περιγράφονται παραπάνω. Αρκετές παράμετροι αφαιρέθηκαν από τις αλλαγές στο OCR, όπως το βασικοκυτταρικό OCR, μέγιστη χωρητικότητα των μιτοχονδρίων, και μιτοχονδριακό εφεδρική δυναμικότητα (= [μέγιστο μιτοχονδριακό ικανότητα] – [βασική OCR]). Όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15,25]

Η πρόσληψη γλυκόζης και γαλακτικού παραγωγή μετρήσεων και υπολογισμός της βιοενεργητικής οργάνωσης

Για τη μέτρηση της πρόσληψης γλυκόζης, ταξινομημένα κύτταρα απλώθηκαν σε μια πυκνότητα 1 × 10

6 /κ.εκ. /φρεάτιο σε πλάκες 6-φρεατίων και επωάζονται σε γλυκόζη χωρίς RPMI 1640 για 2 ώρες στους 37 ° C. Μετά την προσθήκη του 2- [Ν- (7-νιτροβενζ-2-οξα-1,3-διαζολ-4-υλ) αμινο] -2-δεοξυ-D-γλυκόζης (2-NBDG) σε τελική συγκέντρωση 100 μΜ, τα κύτταρα επωάστηκαν για επιπλέον 1 ώρα, πλύθηκαν δύο φορές με PBS, και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής [26]. L-γαλακτικό παραγωγή ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ προσδιορισμού L-γαλακτικού (Eton Bioscience, San Diego, USA) όπως περιγράφεται προηγουμένως [27] και σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και τα επίπεδα L-γαλακτικού κανονικοποιήθηκαν σε αριθμούς κυττάρων. Οι βιοενεργητική οργανώσεις των κυττάρων υπολογίστηκαν όπως περιγράφεται στην έκθεση του Hao et al, χρησιμοποιήσαμε τα εξής: Lac (c) = συγκέντρωση γαλακτικού στο μέσο ελέγχου μετά την επώαση 6 ώρες? Lac (o) = συγκέντρωση γαλακτικού στο μέσο μετά από 6 ώρες επώασης με 2 μg /ml ολιγομυκίνη? Γλυκόλυση% = Lac (γ) × 100 /Lac (o)? και OXPHOS% = 100 -. γλυκόλυση% [28]

προσδιορισμούς ΑΤΡ

Κινητά ΑΤΡ συγκέντρωση μετρήθηκε χρησιμοποιώντας την ΑΤΡ-based κιτ CellTiter-Glo Luminescent κυττάρων Βιωσιμότητας (Promega, Madison, WI) τροποποιημένο από το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Εν συντομία, τα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων σε διαφορετικές πυκνότητες. Τρεις ώρες αργότερα, ένας ίσος όγκος ενός μοναδικού αντιδραστηρίου σε ένα στάδιο που παρέχεται από το κιτ προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και ανακινείται για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Cellular περιεχόμενο ΑΤΡ μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη φωταύγειας πλάκας. Για να δοκιμαστεί η ΑΤΡ καταστρέφουν αποτέλεσμα των μεταβολικών αναστολέων, διάφορες συγκεντρώσεις της ένωσης προστέθηκαν στα κύτταρα σπείρονται σε 1 χ 10

4 κύτταρα /φρεάτιο για επιπλέον 3 ώρες, και το κυτταρικό περιεχόμενο ΑΤΡ μετρήθηκε όπως περιγράφεται παραπάνω.

ΜΤΤ δοκιμασία

τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκα 96-φρεατίων στα 3000 κύτταρα ανά φρεάτιο σε 100 μΐ μέσου κυτταρικής καλλιέργειας και επωάστηκαν στους 37 ° C για 24 ώρες και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με αναφερόμενες ενώσεις σε διάφορες συγκεντρώσεις. Μετά την επώαση 72h, τα κύτταρα επωάστηκαν με 10 μΐ ΜΤΤ (σε τελική συγκέντρωση 0,5 mg /ml) στους 37 ° C επί 4 ώρες [29]. Το μέσο απομακρύνθηκε και το ίζημα φορμαζάνης διαλύθηκε σε 100 μΐ DMSO. Μετά από ανάδευση για 10 λεπτά, η απορρόφηση στα 490nm ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας TECAN GENIOS Pro (BioTek Instruments).

όγκου σφαίρας που σχηματίζει δοκιμασία

Για να αποκτήσετε σφαίρες στον πολιτισμό, uPAR

+ κύτταρα κατεργάζεται με αναφερόμενες ενώσεις για 3 ώρες. Στη συνέχεια, 1 × 10

3 κύτταρα σπάρθηκαν σε μέσο ελεύθερο ορού (SFM) (DMEM /F12) συμπληρωμένο με 20 ng /ml βασικό αυξητικό παράγοντα ινοβλαστών (bFGF) και του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) (PeproTech), 5 μg /ml ινσουλίνη (Sigma-Aldrich), 0.4% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA, Invitrogen), και 0,02 × Β27 (Invitrogen). Το μέσο καλλιέργειας αντικαταστάθηκε ή συμπληρώθηκε με επιπλέον παράγοντες ανάπτυξης δύο φορές την εβδομάδα. Ο συνολικός αριθμός των σφαιρών όγκου μετρήθηκε μετά από 14 ημέρες καλλιέργειας.

δοκιμασία Ογκογονικότητα σε άτριχα ποντίκια

Τα πειράματα σε ζώα πραγματοποιήθηκαν σε τέσσερις εβδομάδες BALB /CA γυμνά ποντίκια αγοράστηκαν από το Πεκίνο HFK βιο Τεχνολογία. Co, LTD (Πεκίνο, Κίνα). Τα πρωτόκολλα που έγιναν μετά την έγκριση από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα της Tianjin Ιατρικό Πανεπιστήμιο (Αριθμός Άδειας: TMHaMEC2014030). Η ταξινομημένη uPAR

+ κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 2 μg /ml ολιγομυκίνη για 24 ώρες, πλύθηκαν, και συλλέχθηκαν για υποδόριο εμβολιασμό επί στα αριστερά πλευρά BALB /CA γυμνούς ποντικούς. Οι ίδιοι αριθμοί των κυττάρων ελέγχου εμβολιάστηκαν στα σωστά πλευρών των ίδιων ποντικών υποδορίως. Κάθε ιστοσελίδα εμβολιασμό εγχύθηκε με 5 × 10

5 κύτταρα. Οι ποντικοί στη συνέχεια παρακολουθήθηκαν για σχηματισμό όγκου χωρίς περαιτέρω επεξεργασία φαρμάκου in vivo. Οι ποντικοί παρατηρήθηκαν 2-3 φορές την εβδομάδα με εργαστηριακό προσωπικό και παρακολουθούνται για σημάδια δυσφορίας (δηλαδή, οι αλλαγές στην εμφάνιση της αναπνοής, κ.λπ.). Οι όγκοι μετρήθηκαν μία φορά την εβδομάδα. Όλα τα ζώα σε αμφότερες τις ομάδες ήταν ακόμα σε καλή κατάσταση μέχρι το τέλος του πειράματος. Κανένα από τα ζώα που απαιτείται ευθανασία πριν από την πειραματική παράμετρο. Μετά από έξι εβδομάδες, τα πειραματόζωα αναισθητοποιήθηκαν με πεντοβαρβιτάλη νατρίου (45mg /kg, ενδοπεριτοναϊκή ένεση) και θανατώνονται με αυχενική εξάρθρωση. Ο όγκος του όγκου = 0,5 × μήκος × πλάτος

2

Ηλεκτρονική μικροσκοπία

uPAR

+ κύτταρα και uPAR

-. κύτταρα ταξινομήθηκαν με FACS όπως περιγράφεται παραπάνω. Η υπερδομική ανάλυση των διαλεγμένων κυττάρων πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται στην έκθεση της Varum et al [30].

Η στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση του SPSS για Windows έκδοση λογισμικού 17.0 (SPSS Inc, Chicago , IL, USA). Κάθε πείραμα διεξήχθη σε τουλάχιστον τρεις ανεξάρτητες μελέτες. Όλα τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέσοι ± s.e.m. και στατιστικές συγκρίσεις των συνόλων δεδομένων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας t-test unpaired Student ή τη δοκιμή ANOVA. P Πιστεύουμε ότι οι λόγοι είναι οι εξής. Πρώτον, η συγκέντρωση οξυγόνου σε ένα υποξικό μικροπεριβάλλον έχει προταθεί ότι είναι μέσα στο πεδίο της 8-57μM [4,40-42], η οποία είναι υψηλότερη από την περιοριστική συγκέντρωση για την O

2 σταθερά διάστασης για οξειδάση κυτοχρώματος c [43 ]. Ως εκ τούτου, ΚΕΠ θα μπορούσε ακόμα να στηρίζονται σε μεγάλο βαθμό OXPHOS ακόμη και κάτω από συνθήκες υποξίας. Δεύτερον, υπάρχει μια μεταβολική συμβίωση μεταξύ δύο υποπληθυσμών των καρκινικών κυττάρων με διακριτά εξαρτήσεις σε οδούς που παράγουν ενέργεια [44,45]. παραπροϊόν γαλακτικό γλυκολυτικών καρκίνος μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως ένα σημαντικό μεταβολίτη για OXPHOS από υποσύνολα του καρκίνου που εξαρτώνται από την μιτοχονδριακή μεταβολισμό. Το μεταβολικό συμβίωση επιτρέπει στα καρκινικά κύτταρα να κάνουν πλήρη χρήση των διαθέσιμων πόρων [45]. Τρίτον, το έργο Otto Warburg »έχει δείξει ότι πολύ πολλαπλασιασμού των κυττάρων συχνά κατά προτίμηση εκτελεί γλυκόλυση πάνω OXPHOS [17].