Αφηρημένο

Ιστορικό

Θα προσδιορίζεται η έκφραση Q1 κουτί forkhead (FoxQ1), Ε-καντερίνη (E-cad), Βλεννίνη 1 (MUC1), βιμεντίνη (VIM) και S100 πρωτεΐνη δέσμευσης ασβεστίου A4 (S100A4), όλες οι πρωτεΐνες επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) δείκτης σε μη μικροκυτταρικό δείγματα ιστού καρκίνου του πνεύμονα (NSCLC). Ερευνήσαμε επίσης τη σχέση μεταξύ αυτών των πέντε πρωτεΐνες έκφρασης και άλλα κλινικοπαθολογική παράγοντες NSCLC. Τέλος, εκτιμήσαμε την δυνητική αξία αυτών των δεικτών ως δείκτες πρόγνωσης της επιβίωσης σε ασθενείς με NSCLC του.

Μέθοδοι

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR και ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιήθηκαν για να χαρακτηρίσουν την έκφραση του mRNA FoxQ1 και πρωτεΐνης σε NSCLC. Έκφραση των μεταγραφών και μεταφρασμένα προϊόντα για τις άλλες πρωτεΐνες δείκτης τέσσερα ΕΜΤ εκτιμήθηκε με ανοσοϊστοχημεία στα ίδια δείγματα κλινικές NSCLC.

Αποτελέσματα

FoxQ1 mRNA και πρωτεΐνης πάνω ρυθμισμένα σε NSCLC σε σύγκριση με την κανονική ιστούς (

P

= 0.015 και

P

& lt? 0.001, αντίστοιχα). Έκφραση FoxQ1 σε αδενοκαρκίνωμα ήταν υψηλότερη από ό, τι σε καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (

P

= 0.005), και υψηλή έκφραση του FoxQ1 συσχετίζεται με απώλεια της έκφρασης Ε-CAD (

P

= 0.012), και ανώμαλη θετικότητα της VIM (

P

= 0.024) και S100A4 (

P

= 0,004). Πρόσθετη ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι η υψηλή έκφραση του FoxQ1 (

P

= 0,047) και E-CAD (

P

= 0.021) ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες.

Συμπέρασμα

FoxQ1 ίσως παίζει ένα συγκεκριμένο ρόλο στην EMT των NSCLC, και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός παράγοντας για NSCLC

Παράθεση:. Feng J, Ζανγκ Χ, Zhu η, Wang Χ, Ni S, Χουάνγκ J (2012) FoxQ1 υπερέκφραση Επιρροές κακή πρόγνωση σε μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, συγγενείς με το φαινόμενο της EMT. PLoS ONE 7 (6): e39937. doi: 10.1371 /journal.pone.0039937

Συντάκτης: Vladimir V. Kalinichenko, Ιατρικό Κέντρο Νοσοκομείο Σινσινάτι των παιδιών, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 27 Μαρτίου, 2012? Αποδεκτές: 29 Μάη, 2012? Δημοσιεύθηκε: 28, Ιουνίου του 2012

Copyright: © 2012 Feng et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από την Κοινωνική Ανάπτυξη και σχέδια εφαρμοσμένης έρευνας (S2010041) της Ναντόνγκ κυβέρνησης, την Κίνα? Διεθνής συνεργασία και ανταλλαγές (2011) από το Υπουργείο Υγείας Jiangsu? και το Ταμείο Διδακτορικό (2010) από το Ενταγμένο Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Nantong, Nantong, Κίνα. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο συχνά εμφανιζόμενες τύπο καρκίνου, και η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο παγκοσμίως, με μεγαλύτερη θνησιμότητα από καρκίνο μαστού, του προστάτη και του καρκίνου του παχέος εντέρου σε συνδυασμό [1], [2]. Κατά τις τελευταίες τρεις δεκαετίες στην Κίνα, η θνησιμότητα του καρκίνου του πνεύμονα έχει αυξηθεί κατά 465%, με αυτές τις κακοήθειες να γίνει η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου μετά τον καρκίνο του ήπατος [3]. Παρά τη μεγάλη πρόοδο στην θεραπεία των καρκίνων κατά τα τελευταία έτη, η πρόγνωση για τους ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα παραμένει φτωχή, με ποσοστά επιβίωσης 5-χρόνια λιγότερο από 15% [4], [5]. Οι περισσότεροι ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα είναι σε προχωρημένο περίοδο της νόσου κατά τη στιγμή της διάγνωσης, και περίπου το 85% αυτών των καρκίνων είναι μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) [1], [6].

Πολλές πρόσφατες μελέτες έχουν σημειωθεί ότι η επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) είναι ένα κρίσιμο γεγονός στην εισβολή και μετάσταση όγκων σε καρκίνους επιθηλιακής προερχόμενα [7] – [10], συμπεριλαμβανομένων NSCLC [11] – [14]. Η συνειδητοποίηση των φαινομένων EMT χρονολογείται ήδη από το 1908. Κατά τη διάρκεια της δεκαετίας του 1990, EMT αποκτήσει μεγαλύτερη αναγνώριση ως ένα ενδεχομένως σημαντικό μηχανισμό σε χρόνιες ασθένειες, όπως η ίνωση του οργάνου και του καρκίνου [15]. EMT χαρακτηρίζεται από τα κάτω ρύθμιση των επιθηλιακών δεικτών διαφοροποίησης Ε-καδερίνης (Ε-CAD) [16] – [20] και Βλεννίνη 1 (MUC1) [21], και η αυξητική ρύθμιση των δεικτών μεσεγχυματικών όπως βιμεντίνη (VIM) [17] – [20], [22], [23], ινονεκτίνη [17], [20], [24] και S100 ασβέστιο πρωτεΐνη δέσμευσης A4 (S100A4) [25] – [28]. Προηγούμενες μελέτες έχουν περιγράψει ένα σημαντικό ρόλο για το 1ο τρίμηνο κουτί forkhead (FoxQ1) στη ρύθμιση EMT και την επιθετικότητα του καρκίνου του ανθρώπου [29] – [32].

FOXQ1, παλαιότερα γνωστή ως HNF-3 /forkhead ομόλογο 1 (HFH1 ), ανήκει σε μέλος της οικογένειας παράγοντα μεταγραφής forkhead [32] – [34], τα οποία εκφράζονται σε διαφορετικούς ιστούς και παίζουν σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη, το μεταβολισμό, τον καρκίνο και τη γήρανση [30], [34]. Ως ένα από τα πρώτα forkhead γονίδια που μελετήθηκαν, FOXQ1 έχει ενοχοποιηθεί για την καταστολή των λείων μυών-ειδικά γονίδια, όπως Sm22α και telokin σε Α10 κύτταρα [35]. FOXQ1 έχει δειχθεί ότι είναι ένας μεταγενέστερος μεσολαβητής του Hoxa1 σε εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα [36]. Ανθρώπινα FOXQ1, που βρίσκεται στο χρωμόσωμα 6p23-25, έχει απομονωθεί και χαρακτηριστεί [33] και διαδραματίζει ουσιαστικό ρόλο στην αιτιολογία του καρκίνου του ανθρώπου [31], [32].

Ένα βήμα q RT-PCR διεξήχθη για να επιβεβαιωθεί η έκφραση της FoxQ1 mRNA σε ανθρώπινους ιστούς. Τα αποτελέσματα κανονικοποιήθηκαν σε επίπεδο GAPDH mRNA. Το επίπεδο FoxQ1 mRNA σε ιστούς NSCLC ήταν υψηλότερα από ότι σε peritumoural ιστούς με στατιστική σημασία χρησιμοποιώντας ένα τεστ Τ-ζευγαρωμένα δείγματα. **

P & lt?

0.05. Μπάρες δείχνουν το τυπικό σφάλμα (Τ.Σ.)

Η

(Α) 1 και 2:. Πνεύμονα πλακώδες καρκίνωμα μοτίβο ιστού με την H & amp? Χρώση Ε? 3 και 4: υψηλή έκφραση του FoxQ1? 5 και 6: απώλεια της έκφρασης Ε-CAD? 7 και 8: ισχυρή χρώση VIM-θετικά. (Β) 1 και 2: πνευμονικό αδενοκαρκίνωμα πρότυπο ιστού με Η &? Χρώση Ε? 3 και 4: θετική χρώση για FoxQ1? 5 και 6: αρνητική χρώση για MUC1? 7 και 8: επάνω ρυθμισμένη έκφραση του S100A4. (Γ) 1 και 2: πνευμονικό αδενοκαρκίνωμα ιστού με Η &? Χρώση Ε? 3 και 4: αρνητική IHC για FoxQ1? 5 και 6: ισχυρή ανοσολογική αντίδραση του E-CAD? 7 και 8: αρνητικό για S100A4. (D) 1 και 2: πνευμονικό ιστό πλακώδες καρκίνωμα με Η &? Χρώση Ε? 3 και 4: χαμηλή έκφραση του FoxQ1? 5 και 6: υψηλή έκφραση του MUC 1? 7 και 8: αδύναμη έκφραση της VIM. Πρωτότυπη μεγέθυνση ήταν Χ 40 για 1, 3, 5 και 7? και × 400 για 2, 4, 6 και 8.

Η

Η

Καμπύλες (Α) υπολογίζεται για έκφραση FoxQ1. Υψηλή έκφραση στην ομάδα FoxQ1 (κόκκινη γραμμή) έδειξε σημαντικά μικρότερη επιβίωση από χαμηλά και καθόλου έκφραση στην ομάδα FoxQ1 (μπλε γραμμή). (Β) Καμπύλες υπολογίζεται για έκφραση Ε-cad. Διάρκεια ζωής των ασθενών με θετική χρώση E-CAD είναι πολύ μικρότερη (κόκκινη γραμμή) από ό, τι σε ασθενείς με αρνητική χρώση E-CAD (μπλε γραμμή).

Η

Πρόσφατες μελέτες έχουν περιγράψει ότι FOXQ1 έχει βρεθεί να είναι υπερεκφράζεται σε καρκίνο του παχέος εντέρου [29], [31] και του καρκίνου του μαστού [31], [32], στην οποία οι ασθενείς έχουν κακή κλινική έκβαση [31], [32]. Αν και η υπερέκφραση του FOXQ1 σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του επιβεβαίωσε ότι το γονίδιο μπορεί να παίζει κάποιο ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του πνεύμονα [29], [33], ο συσχετισμός μεταξύ της έκφρασης FOXQ1 και EMT παράγοντες για να καθορίσει κλινική σημασία του στην NSCLC δεν έχει προηγουμένως αναφερθεί.

Αναλύσαμε την έκφραση του γονιδίου FoxQ1 χρησιμοποιώντας ποσοτική αντίστροφη μεταγραφή αντιδράσεις αλυσίδας πολυμεράσης (RT-ΡΟΚ) σε μικρά, φρέσκα κατεψυγμένα δείγματα ιστού NSCLC. Η έκφραση της πρωτεΐνης FoxQ1 και τεσσάρων πρωτεϊνών δεικτών κοινών EMT (Ε-cad, MUC1, VIM και S100A4) εκτιμήθηκε με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας τα τμήματα ίδια μικροσυστοιχιών ιστού (TMA). Επιπλέον, μελετήθηκε η σχέση μεταξύ των εκφράσεων των πέντε γονίδια που κωδικοποιούν αυτές τις πρωτεΐνες και άλλους παράγοντες κλινικοπαθολογικών σε NSCLC. Τέλος, αξιολογείται η δυνητική αξία αυτών των δεικτών ως προγνωστικοί δείκτες της επιβίωσης σε ασθενείς με NSCLC.

Μέθοδοι

Ασθενείς και TMA δειγμάτων NSCLC

Μετά από μια πλήρη παθολογική κριτική σύμφωνα με την 7η έκδοση του TNM στον καρκίνο του πνεύμονα [37], μια ομάδα φορμόλη-σταθερής ιστούς παραφίνης NSCLC με τα αντίστοιχα του όγκου των παρακείμενων ιστών που υποβάλλονται σε χειρουργική θεραπεία ελήφθησαν από το Ενταγμένο Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου της Ναντόνγκ, μεταξύ Ιανουαρίου 2005 και Δεκεμβρίου 2006. Κλινικά δεδομένα (συμπεριλαμβανομένου του φύλου, της ηλικίας, ιστολογικό τύπο, το βαθμό, το στάδιο, το μέγεθος του όγκου, τη διαφοροποίηση, την κατάσταση των λεμφαδένων μετάσταση) ελήφθησαν από τα ιατρικά αρχεία του κάθε ασθενούς.

Μεταξύ του αρχειακού υλικού, 103 τεμάχια ιστών από ασθενείς με ΜΜΚΠ με τα αρχεία επιβίωση παρακολούθηση των 5 ετών ήταν διαθέσιμα και χρησιμοποιούνται για την κατασκευή του TMA. Μια αντιπροσωπευτική περιοχή της κάθε όγκου επιλέχθηκε και 2,0 χιλιοστών πυρήνες ιστού χρησιμοποιήθηκαν για την κατασκευή ενός ΤΜΑ από Σαγκάη ξεπεράσει Biotech (Κίνα). Η ποιότητα των τμημάτων ΤΜΑ επιβεβαιώθηκε χρησιμοποιώντας χρώση αιματοξυλίνης-εοσίνης (Η &? Ε). Ο μέσος όρος ηλικίας της ομάδας ήταν 62,5 χρόνια (εύρος: 35-81 έτη). Επιβίωσης υπολογίστηκε από την ημέρα της χειρουργικής επέμβασης, μέχρι την ημερομηνία του θανάτου ή από την τελευταία παρακολούθηση. Επιπλέον, ένα πάνελ 20 προσφάτως κατεψυγμένα ιστούς NSCLC και ταιριάζουν peritumour ιστών από το ίδιο νοσοκομείο που αναφέρθηκαν παραπάνω χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη αυτή. Πριν από τη χειρουργική θεραπεία, κανένας από τους ασθενείς είχαν λάβει εισαγωγική χημειοθεραπεία, ακτινοθεραπεία ή ανοσοθεραπεία. έγκριση Δεοντολογίας για την εκτέλεση αυτής της μελέτης λήφθηκε από την τοπική επιτροπή Ανθρωπίνων Έρευνας Ηθικής.

Ποσοτική RT-PCR (qRT-PCR)

Το συνολικό RNA εκχυλίζεται και καθαρίζεται από 40 φρέσκα κατεψυγμένα δείγματα ιστού ΜΜΚΠ , συμπεριλαμβανομένων 20 ιστούς NSCLC και 20 αντίστοιχα μη-καρκινικούς ιστούς. Σύνολο εκχύλιση RNA, τον έλεγχο της ποιότητας και ενός σταδίου qRT-PCR διεξήχθησαν όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [38]. FOXQ1-ειδικό ολιγονουκλεοτίδιο εκκινητές (προς τα εμπρός, 5′-ACG CTG GCG GAG ATC AAC GAG-3 ‘? Αντίστροφη, 5′-ΑΟΟ ΤΤΟ TGG CGC GAG ACG ΤΤ-3′) σχεδιάστηκαν για να δώσουν ένα 92-bp PCR προϊόν. Τα δεδομένα ομαλοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας αφυδρογονάση γλυκεραλδεΰδης-3-φωσφορικής (GAPDH) ως ένα γονίδιο αναφοράς (εμπρόσθιος εκκινητής, 5’-TCG GAG TCA ACG GAT TTG GTC GT-3 ‘? Αντίστροφος εκκινητής, 5’-TGC GGG CAT TGG ΑΑΤ CAT ΑΤΤ GGA-3 ‘).

ανοσοϊστοχημεία (IHC)

IHC διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [39]. Αποπαραφινωθείσες τομές (πάχους 4-μm) από το μπλοκ συστοιχία ξεχωριστά χρωματίστηκαν σε ένα Autostainer καθολική χρώση System (LabVision, USA) χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες πρωτογενή αντισώματα: αντι-FOXQ1 ποντικού (1:300 αραίωση? Abcam, UK), ποντικού αντι-Ε -CAD (1:120? Invitrogen, USA), μονοκλωνικό ποντικού αντι-MUC 1 (1:200? Novocastra, UK), μονοκλωνικό ποντικού αντι-VIM (1: 100? Invitrogen, USA), και πολυκλωνικά κουνελιού αντι-S100A4 (1 :100? Newmarker, USA). Δευτερογενή αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν: Envision κατσίκα HRP αντι-ποντικού (ϋΑΚΟ, USA), Envision κατσίκας αντι-κουνελιού HRP (DAKO, USA). Η αξιολόγηση των ανοσοχρώση αυτών των τμημάτων έγινε τυφλή σε δύο εκπαιδευμένους παθολόγους που δεν γνώριζαν το κλινικό υπόβαθρο των δειγμάτων

Τα ποσοστά των FoxQ1-θετικών κυττάρων βαθμολογήθηκαν και τοποθετούνται σε τέσσερις κατηγορίες ανάλογα με την χρώση:. 0 για 0%? 1 για 1-33%? 2 για το 34-66%? και 3 για 67-100%. Οι εντάσεις χρώσης FoxQ1 επίσης βαθμολογήθηκε ως: 0, 1, 2, ή 3. Το άθροισμα των ποσοστών και βαθμολογίες έντασης χρησιμοποιήθηκε ως το τελικό σκορ χρώση FoxQ1, τα οποία έχουμε περιγράψει προηγουμένως [39] και έχει οριστεί ως εξής: 0-2, χαμηλή έκφραση? και 3-6, υψηλή έκφραση. Ωστόσο, για την θετικότητα των επιλεγμένων κατασκευαστές EMT (Ε-cad, MUC1, VIM και S100A4), μη ανιχνεύσιμη ή & lt? 10% θετική χρώση των καρκινικών κυττάρων κρίθηκε ως αρνητικό, ενώ ≥10% θετική χρώση των καρκινικών κυττάρων θεωρήθηκε θετική [40]. Όλα τα δείγματα αξιολογήθηκαν σε 4 × και 10 × μεγέθυνση.

Στατιστικές μέθοδοι

Το επίπεδο FoxQ1 mRNA σε φρέσκο ​​κατεψυγμένο ιστούς NSCLC και αντίστοιχα μη καρκινικούς ιστούς κανονικοποιήθηκε προς GAPDH και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Wilcoxon υπέγραψε τεστ κατάταξης για μη-παραμετρικές δοκιμές. Συσχετίσεις μεταξύ κλινικοπαθολογικοί μεταβλητών και την έκφραση της πρωτεΐνης FoxQ1 εξετάστηκαν από χ

2 δοκιμές. Η chi-τετράγωνο χρησιμοποιήθηκαν για να επιβεβαιώσουν τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των πρωτεϊνών δείκτη FoxQ1 και EMT. Οι καμπύλες επιβίωσης υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο των Kaplan-Meier και συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Παράγοντες που φαίνεται να είναι προγνωστική σημασία στα μονομεταβλητών μοντέλα αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο παλινδρόμησης Cox. Ένα

P

-τιμή μικρότερη από 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση του λογισμικού STATA 9.0 του λογισμικού (Stata Corporation).

Αποτελέσματα

FoxQ1 mRNA έκφραση σε NSCLC και peritumoural ιστούς

Το συνολικό RNA εξήχθη από τα φρέσκα κατεψυγμένα ιστούς NSCLC και υποβάλλεται σε ένα βήμα qRT-PCR για τη διερεύνηση της έκφρασης FoxQ1 mRNA. Ερευνήσαμε επίσης δείγματα από γειτονικά συμφωνημένα ιστούς όγκων. Όταν έγινε κανονικοποίηση ως προς GAPDH, τα μέσα επίπεδα έκφρασης του mRNA σε FoxQ1 NSCLC και αντίστοιχα μη-καρκινικό ιστό ήταν 0,15 ± 0,02 και 0,04 ± 0,02 (

P

= 0.015), αντίστοιχα. έκφραση FoxQ1 ήταν 3,75 φορές υψηλότερη κατά μέσο όρο στα δείγματα καρκίνου από ό, τι στους μη-κακοήθεις ιστούς (Εικ. 1).

IHC συμπεράσματα για τις πρωτεΐνες δείκτη FoxQ1 και EMT στο NSCLC ιστούς

Τυπική ανοσοϊστοχημική τα πρότυπα χρώσης που παρατηρήθηκαν για τις πέντε γονίδια που κωδικοποιούν την FoxQ1 και τις άλλες τέσσερις πρωτεΐνες δείκτης EMT σε NSCLC φαίνεται στο Σχήμα 2. Θετική χρώση για FoxQ1 ήταν εντοπισμένη κυρίως σε κύτταρα όγκου και πνευμονοκύτταρα στο κυτταρόπλασμα και πλασμαλήμμα σε διαφορετικά επίπεδα. Ενώ θετική πυρηνική χρώση θα μπορούσε να θεωρηθεί, FoxQ1 ανοσοσήμανση δεν παρατηρήθηκε στο στρώμα αυτών των ιστών. έκφραση υψηλού FoxQ1 ανιχνεύθηκε σε 82/103 (50,49%) των ιστών NSCLC και ήταν σε 38 (20,39%) των παρακείμενων συμφωνημένα καρκινικούς ιστούς. Τα δεδομένα έδειξαν στατιστική σημαντικότητα χρησιμοποιώντας χ

2 ανάλυση των δοκιμών (χ

2 = 38,6450,

P

& lt? 0.001). Και ήταν σύμφωνη με τα επίπεδα FoxQ1 mRNA σε NSCLCs

Θετική έκφραση της Ε-CAD και MUC1 εντοπίστηκε στην κυτταρική μεμβράνη, και ένας συνδυασμός των πλασμοκάψας και κυτταρόπλασμα στα κύτταρα του όγκου NSCLC, αντίστοιχα. Θετική ανοσοιστοχημική χρώση για VIM και S100A4 σε καρκινικά κύτταρα παρατηρήθηκε στο κυτταρόπλασμα, και ένας συνδυασμός του πυρήνα και του κυτταροπλάσματος. Μια εξαίρεση σε αυτό ήταν οι θετικές ινοβλάστες του στρώματος.

Σχέση μεταξύ της έκφρασης των πρωτεϊνών FoxQ1 και κλινικοπαθολογικών παραμέτρων σε NSCLC

Οι συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης FoxQ1 και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά του NSCLC παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. FoxQ1 έκφραση της πρωτεΐνης σε αδενοκαρκίνωμα ήταν υψηλότερη από ό, τι στο πλακώδες καρκίνωμα με στατιστική σημαντικότητα (χ

2 = 10,7089,

P

= 0,005) από χ

2 ανάλυση της δοκιμής. Αντίθετα, υπάρχουν σημαντικές συσχετίσεις παρατηρήθηκαν με την ηλικία του ασθενούς, το φύλο, τη διάμετρο του όγκου, η ιστολογική βαθμό του όγκου, την κατάσταση των λεμφαδένων μετάσταση, και το στάδιο ομαδοποίηση με TNM.

Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των FoxQ1 και των πρωτεϊνών δείκτη EMT

Οι σχέσεις μεταξύ της έκφρασης των FoxQ1 και των τεσσάρων πρωτεϊνών δεικτών EMT υπολογίστηκαν και έχουν περιγράφονται στον πίνακα 2. διαπιστώθηκε ότι τα επιθηλιακά συχνότητες απώλεια πρωτεΐνης στα 103 ιστούς NSCLC ήταν 66,02% για το E-CAD και 18.45 % για MUC1. Ανώμαλη μεσεγχυματικά συχνότητες έκφρασης πρωτεΐνης στα ίδια δείγματα ήταν 23,30% για VIM και 68,93% για S100A4. Το αποτέλεσμα έδειξε επίσης ότι η υψηλή έκφραση του FoxQ1 συσχετίζεται με απώλεια της έκφρασης Ε-CAD (χ

2 = 6.308,

P

= 0,012), και ανώμαλη θετικότητα της VIM (χ

2 = 1.396,

P

= 0.024) και S100A4 (χ

2 = 8.374,

P

= 0,004) σε κλινικά δείγματα NSCLC.

Η ανάλυση επιβίωσης

διάφορες γνωστές προγνωστικοί παράγοντες της κακής έκβασης σε NSCLC αξιολογήθηκαν για την επικύρωση της σειράς ασθενών αντιπροσωπεύεται από αυτή την ΤΜΑ (Πίνακας 3). Υψηλή έκφραση FoxQ1 πρωτεΐνης (

P

= 0,023) και χαμηλή έκφραση της πρωτεΐνης E-CAD (

P

= 0,002) έδειξε μια στατιστικά σημαντική συσχέτιση με πέντε χρόνια επιβίωσης από Cox παλινδρόμησης μονοπαραγοντική ανάλυση. Εκτός από αυτά τα δύο γενετικούς δείκτες, εκτός NSCLC κλινικές προγνωστικούς παράγοντες, όπως η διαφοροποίηση των όγκων και ΤΝΜ στάδιο συμπεριλήφθηκαν σε ένα πολυμεταβλητό μοντέλο παλινδρόμησης Cox. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η υψηλή έκφραση FoxQ1 (

P

= 0,047) και η απώλεια της έκφρασης Ε-CAD (

P

= 0,021) επιβεβαιώθηκαν να είναι ανεξάρτητη prognosticators για τη χαμηλή επιβίωση του NSCLC.

η επιβίωση απεικονίζονται με τη χρήση της μεθόδου Kaplan-Meier. Τα αποτελέσματα προσδιορίζονται ότι οι ασθενείς με υψηλή έκφραση FoxQ1 ή απώλεια της έκφρασης Ε-CAD είχαν σημαντικά μικρότερο χρόνο επιβίωσης, σε σύγκριση με εκείνους με χαμηλή ή διατηρημένα έκφραση, αντίστοιχα (Εικ. 3).

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιώντας μια TMA, τονίσαμε την προγνωστική αξία της έκφρασης FoxQ1 σε NSCLC. Υψηλή έκφραση του FoxQ1 ήταν ανιχνεύσιμη σε TMAs των δειγμάτων όγκου και συσχετίστηκε σημαντικά με μειωμένη συνολική επιβίωση. Επιπλέον, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκφραση FoxQ1 συσχετίστηκε σημαντικά με EMT σε μια υποομάδα ασθενών. Μέσω πολυπαραγοντική ανάλυση, υψηλή έκφραση FoxQ1 και μειωμένη έκφραση Ε-cad δείχθηκαν να είναι ανεξάρτητος προγνωστικός βιοδείκτες για την κακή συνολική επιβίωση. Όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη έκθεση της κλινικοπαθολογοανατομικών σημασία της έκφρασης FoxQ1 που σχετίζονται με την EMT σε κλινικά δείγματα NSCLC ιστού.

Πρόσφατα, συσσωρεύοντας τα στοιχεία δείχνουν ότι η ανθρώπινη FoxQ1 διαδραματίζει καίριο ρόλο στη ρύθμιση της EMT της του καρκίνου του μαστού [31], [32], και επιθετικότητα σε καρκίνο του παχέος εντέρου [29], [32]. Υπάρχει σημαντική απόδειξη ότι η παρουσία του φαινομένου ΕΜΤ υποδεικνύει μικρή επιβίωση στον καρκίνο του πνεύμονα [11] – [14]. Να προσδιορίσει τη σχέση μεταξύ FoxQ1 και EMT στο καρκίνωμα του πνεύμονα, τέσσερις συχνές βιοδείκτες δείκτης ερευνήθηκαν στον καρκίνο του πνεύμονα TMA χρησιμοποιώντας IHC. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι υψηλά επίπεδα έκφρασης για την πρωτεΐνη FoxQ1 συσχετίζεται με μειωμένη έκφραση πρωτεΐνης E-cad, και αυξήσεις στην έκφραση της πρωτεΐνης VIM και S100A4.

Μερικοί συγγραφείς έχουν δείξει ότι E-CAD συνδέεται με μετάσταση του καρκίνου του πνεύμονα [12]. VIM δεν πιστεύεται ότι σχετίζεται με την επιβίωση στον καρκίνο του πνεύμονα [14], αν και S100A4 έχει συσχετισθεί με την πρόγνωση του πνεύμονα καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων [41] σε κλινικές μελέτες. Έχουμε καθορίζεται επίσης την προγνωστική επίδραση της έκφρασης δείκτη EMT με μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση. Τα αποτελέσματά μας αποκάλυψε ότι ο μόνος δείκτης που σχετίζεται με το αποτέλεσμα ήταν E-cad.

Πρόσφατες μελέτες έχουν επιβεβαιώσει ότι FoxQ1 να είναι ένα πολύτιμο προγνωστικό δείκτη για την κακή επιβίωση στον καρκίνο του μαστού [31], [32]. Ωστόσο, η υψηλή έκφραση του γονιδίου FoxQ1 παρατηρήθηκε επίσης σε καρκίνο του πνεύμονα, γαστρικό καρκίνο, και κυτταρικές σειρές καρκίνου του κόλου [29]. Έτσι, το παρόν τα αποτελέσματά μας επιβεβαιώνουν τα προηγούμενα ευρήματα σχετικά με την έκφραση FoxQ1 στο NSCLC, ειδικά σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα.

Αν και οι ακριβείς μηχανισμοί της ογκογενητικών αποτελεσμάτων FoxQ1 σε NSCLC δεν έχουν περιγραφεί πλήρως στην παρούσα έρευνα μας, τη μοριακή βάση για την συσχέτιση μεταξύ FoxQ1 και EMT είναι καλά κατανοητές στον όγκο. Τα αποτελέσματα που προκύπτουν από τα δεδομένα μας είναι σύμφωνα με αυτά που παρουσιάζονται στην αναδυόμενη βιβλιογραφία, η οποία είχε δηλώσει ότι η καταστολή της FoxQ1 οδήγησε σε αύξηση της έκφρασης Ε-CAD σε ανθρώπινο καρκίνωμα [31], [32]. Συλλογικά, τα ευρήματα στην παρούσα μελέτη μας επιβεβαιώνεται ότι FoxQ1 θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν ενδεχομένως ως δείκτης EMT στον NSCLC.

Εν κατακλείδι, έχουμε δείξει ότι FoxQ1 ήταν ιδιαίτερα εκφράζεται σε NSCLC και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως άμεση μάντης της ένα αρνητικό αποτέλεσμα. Επίσης, τα αποτελέσματα μας υποστήριξε το γεγονός ότι FoxQ1 έχει έναν λειτουργικό ρόλο σε σχέση με την ΕΜΤ-συναφή γονίδια σε NSCLC.