Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να προσδιορίσει τη συχνότητα και τη σημασία κλινικοπαθολογοανατομικές του

c-myc

γονίδιο αριθμό αντιγράφων (GCN) κέρδος σε ασθενείς με πρωτοπαθή καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC).

Μέθοδοι

Το

c-myc

GCN διερευνήθηκε σε 367 συνεχόμενους CRC ασθενείς (ομάδα 1) με τη χρήση dual-χρώμα ασημί

in situ υβριδισμού

. Επιπλέον, για να αξιολογήσει την περιφερειακή ετερογένεια, εξετάσαμε CRC ιστού από 3 χώρους, συμπεριλαμβανομένης της πρωτοπαθούς καρκίνου, μακρινή μετάσταση, και μετάσταση λεμφαδένων σε 152 ασθενείς με προχωρημένο CRC (ομάδα 2).

KRAS

εξώνια 2 και 3 διερευνήθηκαν για μεταλλάξεις.

Αποτελέσματα

Στην ομάδα 1,

c-myc

ενίσχυση γονιδίου, που ορίζεται από το

c-MYC

: κεντρομερές του χρωμοσώματος 8 αναλογία ≥ 2,0, ανιχνεύθηκε σε 31 (8,4%) από 367 ασθενείς. Ένα

c-myc

κέρδος GCN, που ορίζεται από ≥ 4,0

c-myc

αντίγραφα /πυρήνα, βρέθηκε σε 63 (17,2%) των ασθενών και σχετίζεται με κακή πρόγνωση (

P

= 0,015). ανάλυση παλινδρόμησης Η πολυπαραγοντική Cox έδειξε ότι η αναλογία κινδύνου για το

c-myc

κέρδος GCN ήταν 2,35 (95% διάστημα εμπιστοσύνης, 1,453 έως 3,802?

P

& lt? 0.001). Σε μια υποομάδα ασθενών σταδίου ΙΙ-ΙΙΙ CRC,

c-myc

GCN αύξηση ήταν σημαντικά σχετίζεται με κακή πρόγνωση από μονοπαραγοντική (

P

= 0,034) και πολυπαραγοντική (

P

= 0.040) αναλύσεις.

c-myc

πρωτεΐνης υπερέκφραση παρατηρήθηκε σε 201 (54,8%) από τους 367 ασθενείς και ασθενώς συσχετίζονται με

c-myc

κέρδος GCN (ρ, 0,211). Στην ομάδα 2, το

c-myc

γενετική κατάσταση ήταν ετερογενή σε ασθενείς με προχωρημένο CRC. Ασυμφωνία μεταξύ κέρδος GCN στον πρωτογενή όγκο και είτε μακρινό ή λεμφαδένες μετάστασης ήταν 25,7% και 30,4%, αντίστοιχα. Μια παρόμοια συχνότητα για

c-myc

κέρδος GCN και ενίσχυση παρατηρήθηκε σε ασθενείς CRC με δύο αγρίου τύπου και μεταλλαγμένα

KRAS

.

Συμπεράσματα

c-myc

κέρδος GCN ήταν ένας ανεξάρτητος παράγοντας για την κακή πρόγνωση σε διαδοχικές CRC ασθενείς και στο ΙΙ-ΙΙΙ υποομάδα στάδιο. Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι η κατάσταση του

c-myc

μπορεί να είναι χρήσιμη στην πρόβλεψη της έκβασης των ασθενών και για τη διαχείριση ασθενών CRC

Παράθεση:. Lee KS, Kwak Υ, Nam KH, Κιμ DW , Kang SB, Choe G, et al. (2015)

c-myc

Copy-Αριθμός Κέρδος είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (10): e0139727. doi: 10.1371 /journal.pone.0139727

Επιμέλεια: Ανδρέας Krieg, Heinrich-Heine-Πανεπιστήμιο και Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Ντίσελντορφ, Γερμανία

Ελήφθη: May 24, 2015? Αποδεκτές: 15 Σεπτέμβρη 2015? Δημοσιεύθηκε: 1 Οκτ 2015

Copyright: © 2015 Lee et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση: Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από την επιχορήγηση της Κορέας Υγεία Τεχνολογία R & amp? D έργου μέσω του Ινστιτούτου Κορέα Βιομηχανίας Υγείας Ανάπτυξης (KHIDI), που χρηματοδοτείται από το Υπουργείο. υγεία & amp? Πρόνοιας, Δημοκρατία της Κορέας (αριθμός επιχορήγηση: HI14C1813, https://www.khidi.or.kr/eps). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο

c-MYC

πρωτο-ογκογονιδίου κωδικοποιεί ένα παράγοντα μεταγραφής που παίζει έναν κεντρικό ρόλο στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη διαφοροποίηση, την απόπτωση, τον μεταβολισμό, και την επιβίωση [1, 2]. Μπορεί να προωθήσει ογκογένεση σε μια ποικιλία ανθρώπινων κακοηθειών [3, 4].

c-myc

αλλοίωση παρουσιάζεται μέσα από διάφορους μηχανισμούς, συμπεριλαμβανομένων χρωμοσωμική μετατόπιση, ενίσχυση γονιδίου, και διαταραχή των οδών ανάντη σηματοδότησης [5, 6]. Gene αριθμό αντιγράφων (GCN) κέρδος ή η ενίσχυση είναι η πιο κοινή

c-myc

μεταβολή σε συμπαγείς όγκους [7].

Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν εξετάσει τις κλινικοπαθολογοανατομικών επιπτώσεις της

c-myc

κατάσταση στην καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC). Παλαιότερες μελέτες είχαν δείξει ότι

c-myc

κέρδος GCN στο CRC βρίσκεται περίπου στο 10% των ασθενών [8]. Μια πρόσφατη μελέτη ανέφερε ότι αρκετές σημαντικές ενισχύσεις επικεντρώθηκαν στο χρωμόσωμα 8, συμπεριλαμβανομένης της περιοχής 8q24 το οποίο περιέχει

c-myc

, και πρότεινε ότι

c-myc

ήταν ένα νέο δείκτη για την επιθετική νόσο σε CRC [9]. Ωστόσο, πιο πρόσφατα, Christopher

et al

. αναφερόμενων δεδομένων που λαμβάνονται με ανοσοϊστοχημεία (IHC), υποδεικνύοντας ότι το c-MYC υπερέκφραση πρωτεΐνης συσχετίστηκε σημαντικά με βελτιωμένη πρόγνωση σε ασθενείς CRC [10]. Κατά συνέπεια, η προγνωστική αξία του

c-myc

μεταβολές στην CRC είναι αμφιλεγόμενη.

Πρόσφατα, το εύρος των επιλογών για συστηματική χημειοθεραπεία έχει επεκταθεί και στοχευμένη θεραπεία έχει χρησιμοποιηθεί σε ασθενείς με προχωρημένο CRC, αυξάνοντας επιβίωση των ασθενών [11]. Ωστόσο, ορισμένοι ασθενείς CRC μικρή ανταπόκριση σε στοχευμένη θεραπεία παρά θετικά αποτελέσματα σε στοχευμένες μελέτες θεραπείας ειδικά μετάλλαξη [12]. Όγκου ετερογένεια είναι μια πιθανή αιτία για την αποτυχία της στοχευμένης θεραπείας και αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει ότι CRC έχουν μια ετερογενή γονότυπο συμπεριλαμβανομένων των

KRAS

,

p53

, και

BRAF

[13- 15]. Ως εκ τούτου, η γενετική παραλλαγή μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και της αντίστοιχης μεταστατικές θέσεις πρέπει να αποσαφηνιστεί για να βελτιωθεί η διαχείριση των ασθενών CRC με μεταστατική νόσο.

Η ετερογένεια των

c-myc

και προγνωστικές επιπτώσεις της έχουν δεν έχουν συστηματικά μελετηθεί σε ασθενείς με πρωτοπαθή CRC. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογήσει

c-myc

κατάστασης του γονιδίου και η κλινική σημασία της στην CRC. Αναλύσαμε επίσης την ετερογένεια των

c-myc

στον πρωτογενή όγκο και μακρινή μετάσταση.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και δείγματα

Ένα σύνολο 519 CRC ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με ριζική χειρουργική επέμβαση στο Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ Bundang Νοσοκομείο είχαν εγγραφεί σε αυτήν την αναδρομική μελέτη. Κατ ‘αρχάς, για την αξιολόγηση της κλινικοπαθολογική σημασία του

c-myc

κατάστασης του γονιδίου, 367 συνεχόμενες CRC ασθενείς που έλαβαν από τον Ιανουάριο του 2005 και Δεκεμβρίου 2006 εντάχθηκαν (ομάδα 1). Δεύτερον, για να διερευνηθεί η ασυμφωνία μεταξύ των πρωτογενών και μεταστατικών όγκων, 152 ασθενείς με προχωρημένο CRC με σύγχρονη ή metachronous μετάσταση που είχαν υποβληθεί σε χειρουργική εκτομή για την πρωτοβάθμια CRC μεταξύ του Μαΐου 2003 και του Δεκεμβρίου του 2009, εντάχθηκαν (ομάδα 2). Όλες οι περιπτώσεις εξετάστηκαν από δύο παθολόγους (Κ Σ L. και H. S. L.). Τα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά λήφθηκαν από τα ιατρικά αρχεία των ασθενών και τις εκθέσεις παθολογίας. συλλέχθηκαν πληροφορίες παρακολούθησης, συμπεριλαμβανομένων έκβαση των ασθενών και το χρονικό διάστημα μεταξύ της ημερομηνίας της χειρουργικής εκτομής και του θανάτου. Δεδομένα από ασθενείς έχασαν την παρακολούθηση ή εκείνοι που είχαν πεθάνει από άλλες αιτίες, εκτός CRC είχαν λογοκριθεί.

Ηθικοί κανόνες

Όλα τα δείγματα ελήφθησαν από χειρουργικά όγκοι εξετάστηκαν παθολογικά στο Τμήμα Παθολογίας , Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ Bundang Νοσοκομείο. Όλα τα δείγματα και τα ιατρικά δεδομένα ρεκόρ ήταν ανώνυμα πριν από τη χρήση σε αυτή τη μελέτη και οι συμμετέχοντες δεν παρέχουν γραπτή συγκατάθεση. Η χρήση των δεδομένων ιατρικού φακέλου και δείγματα ιστών για τη μελέτη αυτή εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Εθνικού Πανεπιστημίου της Σεούλ Bundang Νοσοκομείο. (Αναφορά: Β-1210 /174-301)

Ιστός μέθοδο array

χειρουργικά πρωτογενή CRC δείγματα ήταν φορμόλη-σταθερές και εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE). Για κάθε περίπτωση, ελήφθησαν και αναδιατάσσονται σε νέες παραλήπτη μπλοκ (Superbiochips Laboratories, Σεούλ, Νότια Κορέα) [16] αντιπροσωπευτικές περιοχές των μπλοκ δότη. Ένα ενιαίο πυρήνα ήταν 2 mm σε διάμετρο και αυτά που περιέχουν & gt? 20% των κυττάρων του όγκου θεωρείται έγκυρη πυρήνες.

Dual-ασημί χρώμα

in situ υβριδισμού

Το

c-myc

γονιδίου έγινε ορατή με τη χρήση ενός σύστημα μπλε χρώση (ultraView ασημί

in situ υβριδισμού

[SISH] [DNP] κιτ δινιτροφαινόλη ανίχνευσης και ανιχνευτή c-myc DNP, Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA). Το κεντρομερίδιο του χρωμοσώματος 8 (CEP8) έγινε ορατή με τη χρήση ενός συστήματος κόκκινο-χρώση (ultraView κόκκινο ISH διγοξιγενίνη κιτ ανίχνευσης [DIG] και του χρωμοσώματος 8 καθετήρα DIG, Ventana Medical Systems). Θετικά σήματα απεικονίστηκαν σε 60 × μεγέθυνση και μετρήθηκαν σε 50 μη-επικαλυπτόμενα πυρήνες των κυττάρων του όγκου για κάθε περίπτωση (Σχήμα 1) [17]. Μικρές και μεγάλες ομάδες βαθμολογήθηκαν ως 6 και 12 σήματα, αντίστοιχα

(Α)

c-myc

αύξηση αριθμού αντιγράφων γονιδίου (60 × μεγέθυνση).? (Β)

c-MYC

γονίδιο δισωμίας (60 × μεγέθυνση).

Η

Ανοσοϊστοχημεία

IHC ανάλυση του c-myc διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα εμπορικά διαθέσιμο κουνέλι αντι-c-myc αντισώματος (κλώνος Y69, Κατάλογος ab32072, Abcam, Burlingame, CA, USA). Οι διαδικασίες χρώσης πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το κιτ ultraView καθολική DAB (Ventana Medical Systems) και ένα αυτοματοποιημένο χρώσης (BenchMark®XT, Ventana Medical Systems), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Πυρηνική ανοσοχρώση του c-myc ήταν αρνητικό σε φυσιολογικό βλεννογόνο. Για στατιστική ανάλυση, c-MYC πυρηνική χρώση οποιασδήποτε έντασης σε μεγαλύτερη από 10% των νεοπλασματικών κυττάρων βαθμολογήθηκε ως θετικό (S2 Εικ) [10].

αστάθεια μικροδορυφόρου

αστάθεια μικροδορυφόρου (MSI ) αξιολογήθηκε σε CRC περιπτώσεις με διαθέσιμα ιστό. αποτελέσματα MSI παρήχθησαν με σύγκριση των αλληλικών προφίλ των 5 μικροδορυφορικών δεικτών (ΒΑΤ-26, ΒΑΤ-25, D5S346, D17S250, και S2S123) στον όγκο και το αντίστοιχο φυσιολογικά δείγματα. Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) προϊόντων από τους ιστούς FFPE αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας αυτοματοποιημένο αλληλουχητή ϋΝΑ (ΑΒΙ 3731 Genetic Analyser, συστήματα Applied Bio, Foster City, CA, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο που περιγράφεται προηγουμένως [18].

ανάλυση μετάλλαξη KRAS

η

KRAS

ανίχνευση μετάλλαξης επιτεύχθηκε με ανάλυση καμπύλης τήξης με τη χρήση του συστήματος cobas 4800 (Roche, Branchburg, NJ, USA) με αυτοματοποιημένο λογισμικό ερμηνεία των αποτελεσμάτων, . Αυτό είναι ένα TaqMelt με βάση PCR δοκιμασία πραγματικού χρόνου σχεδιαστεί για την ανίχνευση της παρουσίας των 21

KRAS

μεταλλάξεις στα κωδικόνια 12, 13, και 61. Η διαδικασία της ροής εργασίας και δοκιμών έχουν περιγραφεί προηγουμένως [19].

Στατιστικές αναλύσεις

η σύνδεση μεταξύ των κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και

c-myc

κατάσταση αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το chi-τετράγωνο ή ακριβές τεστ του Fisher, ανάλογα με την περίπτωση. Η συσχέτιση μεταξύ των μεθόδων ανίχνευσης εξετάστηκε χρησιμοποιώντας τον συντελεστή συσχέτισης Pearson. επιβίωση των ασθενών αναλύθηκε με χρήση της μεθόδου Kaplan-Meier και η δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί εάν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των καμπυλών επιβίωσης. μονοπαραγοντική ανάλυση και πολυμεταβλητή παλινδρόμηση πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το μοντέλο αναλογικών κινδύνων του Cox για να προσδιοριστεί η αναλογία κινδύνου και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης για κάθε παράγοντα. Ένα

P-

αξία & lt? 0.05 έγινε δεκτή ως στατιστικά σημαντική. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS Statistics 21 λογισμικό (ΙΒΜ, Armonk, NY, USA).

Αποτελέσματα

c-myc

κατάστασης του γονιδίου και κλινικές επιπτώσεις για διαδοχικές ασθενείς με πρωτοπαθή CRC

Σε διαδοχικές πρωτογενείς CRC περιπτώσεις (ομάδα 1), η διάμεση τιμή

c-myc

: αναλογία CEP8 ήταν 1,29 (εύρος 0,58 – 5,17).

c-myc

ενίσχυση γονιδίου, που ορίζεται από ένα

c-myc

: CEP8 αναλογία ≥ 2,0 και παρόμοιο με αυτό που καθορίστηκε για

HER2

[20], ανιχνεύθηκε σε 31 (8,4%) των 367 ασθενών. Η μέση

c-myc

GCN ήταν 2,88 (εύρος 1,22 – 13,12). Στην παρούσα μελέτη, ορίσαμε το κέρδος GCN όπως ≥ 4,0

c-myc

αντίγραφα /πυρήνα [21], και αυτό ανιχνεύθηκε σε 63 (17,2%) των 367 ασθενών CRC. Όλα

c-myc

ενίσχυση εντάχθηκε στο

c-myc

GCN κέρδος. Ένα

c-myc

GCN αποκτήσουν ≥ 4 είχε το χαμηλότερο

P

-τιμή (

P

= 0.015) και ως εκ τούτου, παρατηρήθηκε να είναι η πιο έξυπνη cut-off σημείο για πρόγνωση των ασθενών (Σχήμα 2)? ≥ 5,0

c-myc

αντίγραφα /πυρήνα επηρεάζεται επίσης πρόγνωση των ασθενών (

P

= 0,026). Δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ πρόγνωση του ασθενούς και είτε

c-myc

ενίσχυση (

P

= 0.149) ή & gt? 2, ≥ 3, και ≥ 6

c-myc

αντίγραφα /πυρήνα (

P

= 0,752,

P

= 0,175, και

P

= 0,122, αντίστοιχα)

(Α)

c-myc

αριθμού αντιγράφων γονιδίου (GCN) κερδίζουν.? (Β)

c-myc

κέρδος GCN στο στάδιο ΙΙ-ΙΙΙ υποομάδα? (C)

c-myc

ενίσχυση.

Η

Ο Πίνακας 1 δείχνει τις σχέσεις μεταξύ των

c-myc

κατάσταση και οι κλινικοπαθολογικών παραμέτρων σε διαδοχικές πρωτογενείς CRCs (ομάδα 1 ). Ενίσχυση του

c-myc

συσχετίζεται με πρώιμο στάδιο της νόσου (

P

= 0,039).

c-myc

κέρδος GCN ήταν συχνά παρατηρείται σε σιγμοειδές κόλον και το ορθό όγκους (

P

= 0,034), μικροί όγκοι (

P

= 0,041), και εκείνων που έχουν ταξινομηθεί ως μικροδορυφορικού σταθερό ή MSI-χαμηλή (

P

= 0,029).

Η

προγνωστική σημασία του

c-myc

κατάστασης του γονιδίου σε CRC ασθενείς

Όλοι οι ασθενείς CRC επιτυχώς παρακολουθήθηκαν για συμπερίληψη στην ανάλυση επιβίωσης (Σχήμα 2). Στην ομάδα 1, η μέση περίοδος παρακολούθησης ήταν 55 μήνες (εύρος, 1-85 μήνες) και 101 (27,5%) ασθενείς έχασαν τη ζωή τους κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης. Kaplan-Meier ανάλυση έδειξε ότι

c-myc

κέρδος GCN συσχετίστηκε με κακή επιβίωση σε ασθενείς CRC (

P

= 0,015), αλλά

c-myc

ενίσχυση ήταν δεν (

P

= 0,149). Στην II-III υποομάδα στάδιο,

c-myc

-GCN κέρδος προέβλεψε επίσης κακή πρόγνωση (

P

= 0,034). Πολυπαραγοντική ανάλυση των

c-myc

κατάσταση συνοψίζεται στον Πίνακα 2, και έδειξε ότι

c-myc

-GCN αποκτήσουν ανεξάρτητα προβλέψει κακή πρόγνωση σε διαδοχικές ομάδα (

P

& lt?. 0,001) και στην υποομάδα των ασθενών με σταδίου ΙΙ-ΙΙΙ CRC (

P

= 0,040)

η

η συσχέτιση μεταξύ του

c-myc

GCN κέρδος και πρωτεΐνη υπερέκφραση

η υπερέκφραση του c-myc πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε σε 201 (54,8%) των 367 ασθενών CRC (ομάδα 1) και συνδέθηκε με το πρώιμο στάδιο pt (

P

& lt? 0.001 ), χαμηλής ποιότητας της ιστολογικής διαφοροποίησης (

P

= 0,007), απουσία περινευρικό εισβολής (

P

= 0,025) και το μικρότερο μέγεθος (

P

& lt? 0.001) ( Τραπέζι 1). Η υπερέκφραση του c-myc πρωτεΐνης συσχετίστηκε με αύξηση GCN (ρ, 0,211?

P

& lt? 0.001), το οποίο είχε χαρακτηριστεί ως ασθενώς συσχέτισης σύμφωνα με χορευτικό και Reidy για κατηγοριοποίηση (2004) [22]. Επιπλέον, μόνο 46 (22,9%) των 201 ασθενών με c-myc υπερέκφραση παρουσίασαν αύξηση GCN.

c-myc

κατάσταση και η ανομοιογένεια ανάλογα με τη θέση του όγκου σε ασθενείς με προχωρημένο CRC

για να αξιολογηθεί η περιφερειακή ετερογένεια των

c-myc

κατάσταση, εξετάσαμε ιστού από 3 χώρους, συμπεριλαμβανομένης της πρωτοπαθούς καρκίνου, μακρινή μετάσταση, και μετάσταση λεμφαδένων για κάθε ασθενή με προχωρημένη CRC (ομάδα 2). Στις πρωτογενείς όγκους της κλάσης 2, η διάμεση τιμή

c-myc

: αναλογία CEP8 ήταν 1,14 (εύρος 0,57 – 2,97).

c-MYC

ενίσχυση γονιδίου ανιχνεύθηκε σε 8 (5,3%) από 152 ασθενείς. Η μέση

c-myc

GCN ήταν 2,97 (εύρος 1,40 – 9,94).

c-myc

κέρδος GCN ανιχνεύθηκε σε 48 (31,6%) των 152 ασθενών CRC. Επιπλέον,

c-myc

κέρδος GCN βρέθηκε σε 33 (21,7%) ασθενείς με απομακρυσμένες μεταστατικούς όγκους. μετάσταση λεμφαδένων παρατηρήθηκε σε 79 από 152 ασθενείς με προχωρημένο CRC και

c-myc

κέρδος GCN παρατηρήθηκε σε 18 (22,8%) από αυτές τις περιπτώσεις. Η ετερογένεια του

c-MYC

κέρδος GCN σύμφωνα με τη θέση του όγκου φαίνεται στον Πίνακα 3. Από 152 περιπτώσεις, ασυμφωνία μεταξύ

c-MYC

κέρδος GCN στον πρωτογενή όγκο και μακρινή μετάσταση παρατηρήθηκε σε 39 (25,7%) περιπτώσεις. Ασυμφωνία μεταξύ

c-MYC

κέρδος GCN στον πρωτογενή όγκο και λεμφαδένες μετάσταση ανιχνεύθηκε σε 24/79 (30.4%) περιπτώσεις. Έτσι, η περιφερειακή ετερογένεια των

c-myc

κέρδος GCN ήταν αρκετά διαδεδομένη στις προηγμένες CRC.

c-myc

GCN ετερογένεια δεν συσχετιζόταν με κλινικοπαθολογοανατομικές παράγοντες και την πρόγνωση (

P

& gt? 0,05? Δεδομένα δεν παρουσιάζονται)

Η

Δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική. συσχέτιση μεταξύ των κλινικοπαθολογοανατομικών παραγόντων και

c-myc

κέρδος GCN στην πρωτοβάθμια, μακρινό μεταστατικό, και των λεμφαδένων μεταστατικούς όγκους από ομάδα 2 ασθενείς CRC (

P

& gt? 0,05? δεδομένα δεν παρουσιάζονται) . Ο μέσος χρόνος παρακολούθησης ήταν 42 μήνες (εύρος, 1-105 μήνες) και 67 ασθενείς (44,1%) πέθαναν από καρκίνο κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης. Η ανάλυση Kaplan-Meier έδειξε ότι οι ασθενείς με

c-myc

κέρδος GCN στον πρωτογενή όγκο είχε μια κακή έκβαση από εκείνους που δεν, αλλά αυτό το αποτέλεσμα δεν ήταν στατιστικά σημαντική (

P

= 0,499). Ωστόσο, ≥ 3,0

c-myc

αντίγραφα /πυρήνα στον πρωτογενή όγκο ήταν σημαντικά σχετίζεται με κακή πρόγνωση (

P

= 0,044? S1 σχήμα). Δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της πρόγνωσης των ασθενών και

c-myc

κέρδος GCN σε απομακρυσμένες ή λεμφαδένων μεταστάσεων (

P

= 0.981 και

P

= 0,417, αντίστοιχα? δεδομένα δεν παρουσιάζονται)

KRAS

μεταλλάξεις σε προχωρημένο CRC

Το cobas

KRAS

δοκιμή πραγματοποιήθηκε σε 152 πρωτοπαθείς όγκους από τις προηγμένες CRC περιπτώσεις. (ομάδα 2).

KRAS

γονιδιακές μεταλλάξεις παρατηρήθηκαν σε 84 (55,3%) περιπτώσεις και σχετίστηκαν με όγκους που βρίσκεται στο δεξιό κόλον (

P

= 0,019), αλλά δεν συσχετίστηκαν με άλλους κλινικοπαθολογοανατομικές παράγοντες (

P

& gt? 0,05? δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επιπλέον, δεν υπήρχε στατιστική διαφορά μεταξύ της επιβίωσης των ασθενών CRC με μεταλλαγμένα ή άγριου τύπου

KRAS

(

P

= 0.688? Δεδομένα δεν παρουσιάζονται). 68 περιπτώσεις με άγριου τύπου

KRAS

,

c-myc

ενίσχυση σημειώθηκε σε 4 (5,9%) και ένα

c-myc

κέρδος GCN σε 28 (41,2 %). 84 περιπτώσεις με μεταλλαγμένο

KRAS

, 4 έδειξε

c-myc

ενίσχυσης (4,8%) και 20 (23,8%) αποκάλυψε ένα

c-myc

κέρδος GCN.

c-myc

GCN αλλαγές συνέβησαν σε ασθενείς με τόσο άγριου τύπου και μεταλλαγμένου KRAS. Ως εκ τούτου,

c-myc

GCN μεταβολές και

KRAS

μεταλλάξεις δεν ήταν αλληλοαναιρούνται.

Συζήτηση

Αν και έχουν υπάρξει αρκετές αναφορές στο

c-myc

κατάσταση σε ανθρώπινους καρκίνους, δεν υπάρχουν καθιερωμένα κριτήρια για την αύξηση του GCN. Καρκίνοι με

c-myc

κέρδος GCN συνδέονται συχνά με κακή πρόγνωση. Μια προηγούμενη μελέτη από βλεννώδες γαστρικού καρκινώματος έδειξε ότι

c-myc

ενίσχυσης, ορίζεται ως

c-myc

: αναλογία CEP8 & gt? 2.0, ήταν συσχετίζεται έντονα με τα προχωρημένα στάδια του καρκίνου [23]. Μια άλλη έκθεση διαπίστωσε σύνδεσης μεταξύ

c-myc

ενίσχυση (& gt? 4 αντίγραφα /κύτταρο σε τουλάχιστον 10% των κυττάρων του όγκου) και τα προχωρημένα στάδια του καρκίνου των ωοθηκών [21]. Σε μια μελέτη του καρκίνου του προστάτη, η

c-myc

κέρδος GCN περιλαμβάνεται το κριτήριο του

γ MYC-

CEP8 αναλογία & gt /? 1.5, και μια φτωχή πρόγνωση παρατηρήθηκε για τους ασθενείς σε αυτή την κατηγορία [24]. Σε πρόσφατες έρευνες για αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, οι ασθενείς με & gt? 2

c-myc

αντίγραφα /πυρήνα ταξινομήθηκαν ως έχουν αυξημένο

c-myc

GCN, η οποία βρέθηκε να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας κακής [25]. Σε ασθενείς με CRC, αναφέρθηκε ότι

c-myc

ενίσχυσης, ορίζεται ως

c-myc

CEP8 αναλογία & gt /? 2, ήταν συχνά ανιχνεύεται με τη χρήση φθορίζοντος

in situ υβριδισμού

(9,0 – 14,2%), αλλά δεν είχε σχέση με την κλινική έκβαση και παθολογικές δεδομένων [26]. Ως εκ τούτου, έχουμε εφαρμόσει διαφορετικές κριτήρια για τον προσδιορισμό

c-myc

κέρδος ενίσχυσης ή GCN σε αυτή τη μελέτη, και έχουν καθορίσει το

c-myc

κέρδος GCN όπως ≥ 4 αντίγραφα /πυρήνα, επειδή είχε τη χαμηλότερη

P

-τιμή για την πρόγνωση της νόσου (Εικόνα 2). Στην ομάδα 1, το μεγάλο συνεχόμενο ομάδα, οι ασθενείς CRC με

c-myc

κέρδος GCN είχε μια κακή επιβίωση από αυτούς χωρίς (

P

= 0,015). Επιπλέον, στην πολυπαραγοντική ανάλυση,

c-myc

κέρδος GCN ήταν ένας σημαντικός προγνωστικός παράγοντας CRC, τόσο στο συνεχόμενες ομάδα και για τα άτομα με νόσο σταδίου ΙΙ-ΙΙΙ. Η προγνωστική αξία του

c-MYC

GCN βρέθηκε να είναι ανεξάρτητη από γνωστούς προγνωστικούς παράγοντες. Η

c-myc

κριτήρια κέρδος GCN που χρησιμοποιούνται στην παρούσα μελέτη, μαζί με τη μέθοδο SISH, μπορεί να είναι χρήσιμη στην αξιολόγηση των ασθενών CRC επειδή σαφώς προσδιορισμένες οι ασθενείς αναμένεται να έχουν κακή επιβίωση, ανεξάρτητα από το

γ Myc έχει

:. αναλογία CEP8

στην ομάδα 2, δείξαμε ότι υπήρχε

c-myc

GCN περιφερειακή ετερογένεια μεταξύ αρχική τοποθεσία και τις σχετικές μεταστάσεις του. Ένα

c-myc

κέρδος GCN (c-myc GCN ≥ 4.0) στον τομέα της πρωτογενούς καρκίνου που δεν συνδέονται σημαντικά με την κακή επιβίωση (

P

= 0,499? S1 σχήμα), η οποία μπορεί να συμβαίνει επειδή όλα ομάδα 2 αποτελείτο από ασθενείς με προχωρημένο CRC με σύγχρονη και metachronous μετάσταση και ομάδα 2 ήταν σε μεγάλο βαθμό αποτελείται από το στάδιο IV CRC (98 περιπτώσεις? 64,5%). Έλαβαν μια ποικιλία εξατομικευμένων θεραπείας, αντίστοιχα, και αυτά μπορεί να αντανακλούν τη στατιστική ασημαντότητα. Είναι ενδιαφέρον, θα εφαρμοστεί ελαφρώς μη περιοριστικά κριτήρια του κέρδους GCN (

c-myc

GCN ≥ 3.0) και την πρόγνωση της άλλαξε σε στατιστικά σημαντική (

P

= 0,044? S1 σχήμα). Σε μια ευρεία έννοια, C-

MYC

GCN αύξηση του πρωτογενούς καρκίνου τείνει να συσχετίζεται με κακή επιβίωση σε προχωρημένο CRC. Από την άλλη πλευρά,

c-MYC

κατάσταση σε απομακρυσμένες και λεμφαδένες μεταστατικό βλάβης που δεν σχετίζονται με την πρόγνωση των ασθενών, αν και προσπαθήσαμε κάθε δυνατή κριτήρια GCN. Ακόμα κι αν,

c-myc

ετερογένεια που παρατηρείται συχνά σε προχωρημένο CRC, ένα

c-myc

κέρδος GCN στον πρωτογενή καρκίνο συχνά συνδέεται με κακή επιβίωση. Κατά συνέπεια, η

c-myc

GCN στη μη μεταστατική βλάβη θα πρέπει να χρησιμοποιούνται κατά την αξιολόγηση της πρόγνωσης.

Σε μια προηγούμενη μελέτη, η υπερέκφραση του

c-myc

mRNA σε CRC βρέθηκε να σχετίζεται με καλύτερη πρόγνωση [27], αλλά το αποτέλεσμα αυτό ερχόταν σε αντίθεση με μια άλλη μελέτη [28]. Christopher

et al

. πρόσφατα απέδειξαν ότι c-myc υπερέκφραση προσδιορίζεται από IHC μόνη της, ήταν σημαντικά σχετίζεται με καλύτερη επιβίωση σε ασθενείς με CRC, όταν αξιολογείται με μονοπαραγοντική ανάλυση, αλλά όχι από πολυπαραγοντική ανάλυση [10]. Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε αντικρουόμενα αποτελέσματα σε προηγούμενη μελέτη υπερέκφραση c-MYC? προφανώς, επειδή η έκφραση c-myc ελέγχεται από ένα πολύπλοκο ρυθμιστικής οδού που περιλαμβάνει πολλαπλές αλληλεπιδράσεις με άλλα μόρια, όχι μόνο απλή κέρδος GCN [29]. Επιπλέον, βρήκαμε ένα αδύναμο συσχετισμό μεταξύ c-myc υπερέκφραση της πρωτεΐνης και αύξηση GCN σε ασθενείς CRC.

c-MYC

κέρδος GCN δεν παρατηρήθηκε στις περισσότερες περιπτώσεις, πρωτεΐνη υπερέκφραση c-MYC. Σε αντίθεση με το

c-MYC

κέρδος GCN, η υπερέκφραση του c-myc πρωτεΐνης συσχετίστηκε με λιγότερο επιθετικές χαρακτηριστικά (Πίνακας 1). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι

c-myc

κέρδος GCN είναι πιθανώς μόνο εν μέρει υπεύθυνη για την πρωτεΐνη υπερέκφραση. Καθώς υπερέκφραση του c-myc δεν είναι το ίδιο με ένα

c-myc

κέρδος GCN, απαιτείται περαιτέρω έρευνα για να εξηγήσει τη διαφορά του c-myc υπερέκφραση και το κέρδος GCN στο CRC ογκογένεση.

μεταλλάξεις στο

KRAS

είναι εμφανείς σε 30-40% των όγκων παχέος εντέρου [30-32]. Πράγματι, προηγούμενες μελέτες ανέφεραν ότι

KRAS

μετάλλαξη που σχετίζεται με αντίσταση σε αντι-υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) μονοκλωνικό θεραπείας και μια κακή επιβίωση [33-35]. Στη μελέτη μας,

KRAS

μεταλλάξεις ήταν παρούσες στο 55,3% των προηγμένων CRC ασθενείς (ομάδα 2) και δεν σχετίστηκαν με την πρόγνωση. Μπορεί να είναι επειδή ερευνήσαμε

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης σε ασθενείς με προχωρημένο CRC. Phipps et al. Επίσης, ανέφερε ότι

KRAS

-mutation κατάσταση δεν ήταν σχετίζονται με την κακή ασθένεια συγκεκριμένες επιβίωσης σε περιπτώσεις που παρουσιάζονται με μακρινό στάδιο CRC [33].

c-myc

ενίσχυση παρατηρήθηκε στο 5,9% του άγριου τύπου

KRAS

και 4,8% των μεταλλαγμένων

KRAS

CRCs. Ένα

c-myc

κέρδος GCN παρατηρήθηκε στο 41,2% του άγριου τύπου

KRAS

και 23,8% των μεταλλαγμένων

KRAS

CRCs. Είναι αξιοσημείωτο ότι αυτά τα 2 γενετικά συμβάντα δεν ήταν αλληλοαναιρούνται. απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για να διερευνήσει τη δυνατότητα χρησιμοποίησης

c-myc

γενετικές αλλοιώσεις ως θεραπευτικοί στόχοι σε ασθενείς με προχωρημένο CRC με πρωτογενή και δευτερογενή αντίσταση σε αντι-EGFR θεραπείες.

Εν ολίγοις, έχουμε συνολικά ανέλυσε το

c-myc

κατάστασης του γονιδίου των ασθενών CRC χρησιμοποιώντας SISH.

c-myc

παρατηρήθηκαν κέρδος GCN και ενίσχυση στο 17,2% και το 8,4% των διαδοχικών CRC ασθενών, αντίστοιχα. Η

c-myc

κέρδος GCN ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας κακή, τόσο στο συνεχόμενες ομάδα και στην υποομάδα των ασθενών με νόσο σταδίου ΙΙ-ΙΙΙ. Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι

c-myc

κατάσταση μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να προβλέψει την πρόγνωση των ασθενών CRC, και μπορεί να ενημερώσει τις μελλοντικές μελέτες σχετικά με την παθογένεση και οι μηχανισμοί που εμπλέκονται στην εξέλιξη της CRC.

Υποστήριξη Πληροφοριών

S1 Εικ. Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier που απεικονίζει την προγνωστική επίδραση του

c-myc

κατάσταση στην πρωτοβάθμια βλάβες του καρκίνου του παχέος εντέρου (ομάδα 2).

(Α)

c-myc

αριθμού αντιγράφων γονιδίου ( GCN) ≥ 3,0? (Β)

c-myc

GCN ≥ 4,0

doi:. 10.1371 /journal.pone.0139727.s001

(ΔΕΘ)

S2 Εικ. Αντιπροσωπευτικά στοιχεία του c-myc υπερέκφραση με ανοσοϊστοχημεία (Α και Β) σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος

(Α) c-MYC υπερέκφραση (μεγέθυνση 40 φορές).? (Β) Δεν έκφρασης c-myc (40 × μεγέθυνση)?

Doi: 10.1371 /journal.pone.0139727.s002

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω Superbiochips εργαστήρια για την άριστη τεχνική βοήθεια.