Αφηρημένο

Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ErbB3 /HER3 μπορεί να είναι ένα χρήσιμο προγνωστικό δείκτη για καρκίνο του παχέος εντέρου. Όγκοι με μια εντερική βλαστικών κυττάρων υπογραφή έχουν επίσης αποδειχθεί να είναι πιο επιθετική. Εδώ, θα διερευνηθεί κατά πόσο ErbB3 σχετίζεται με εντερική σημειωτές βλαστοκυττάρων σε καρκίνο του παχέος εντέρου και του καρκίνου του εάν τα βλαστικά κύτταρα εντός όγκων χαρακτηρίζονται από την έκφραση του erbB3. Έκφραση των ErbB3 και εντερικών σημειωτές βλαστοκυττάρων (LGR5, ΕΡΗΒ2, CD44s και CD44v6) εκτιμήθηκε με qRT-PCR σε πρωτογενείς όγκους του παχέος (στάδια 0 έως IV) και να συνδυαστούν φυσιολογικούς ιστούς από 53 ασθενείς. Ο εντοπισμός του ErbB3, ΕΡΗΒ2 και ΚΙ-67 εντός όγκων διερευνήθηκε χρησιμοποιώντας συν-ανοσοφθορισμού. Έκφραση των ErbB3 και δεικτών εντερική βλαστικών κυττάρων ήταν σημαντικά αυξημένα σε αδενώματα και ορθοκολικούς όγκους συγκριτικά με φυσιολογικό ιστό. Θετικές συσχετίσεις βρέθηκαν μεταξύ ErbB3 και των δεικτών εντερική βλαστικών κυττάρων. Ωστόσο, η ανάλυση συν-ανοσοφθορισμού έδειξε ότι erbB3 και ΕΡΗΒ2 σήμανση ειδικών κυτταρικών πληθυσμών που ήταν αλληλοαποκλειόμενες εντός όγκων με διακριτές πολλαπλασιαστικές δυνατότητες, η πλειοψηφία των ErbB3 + ve κυττάρων είναι μη πολλαπλασιαστικές. Αυτό το μοτίβο μοιάζει με κυτταρική οργάνωση εντός φυσιολογικών κολονικό επιθήλιο όπου επισημασμένα ΕΡΗΒ2 πολλαπλασιαστικών κυττάρων διαμένουν στη βάση κρύπτη και ErbB3 + ve κυττάρων σηματοδοτήσει διαφοροποιημένα κύτταρα στο πάνω μέρος της κρυπτών. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι erbB3 και εντερική βλαστικών κυττάρων δείκτες συσχετίζονται σε παχέος εντέρου. ErbB3 εντοπίζεται σε διαφοροποιημένα κυτταρικούς πληθυσμούς εντός των όγκων που είναι μη πολλαπλασιαστικές και διακριτή από καρκινικά βλαστικά κύτταρα. Τα δεδομένα αυτά υποστηρίζουν την ιδέα ότι οι όγκοι περιέχουν διακριτά στέλεχος, πολλαπλασιασμού και διαφοροποίησης διαμερίσματα παρόμοια με εκείνη που υπάρχει στο κανονικό κρύπτες

Παράθεση:. Jarde Τ, Kass L, Staples Μ, Lescesen Η, Carne P, Oliva K, et al. (2015) ErbB3 συσχετίζεται θετικά με Εντερική Μαρκαδόροι Βλαστικών Κυττάρων, αλλά σηματοδοτεί μια έντονη μη πολλαπλασιαστικού κυτταρικού πληθυσμού στον καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (9): e0138336. doi: 10.1371 /journal.pone.0138336

Επιμέλεια: Michelina Plateroti, Πανεπιστήμιο Claude Bernard Lyon 1, Γαλλία

Ελήφθη: 23 Δεκ του 2014? Αποδεκτές: 28 Αυγούστου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 14 Σεπτεμβρίου 2015

Copyright: © 2015 Jarde et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς αναγνωρίζουν την υποστήριξη για το έργο αυτό από τις επιδοτήσεις σχεδίων Εθνικό Ερευνητικό Συμβούλιο Υγείας και Ιατρικής (Αυστραλία) 1.010.429 σε ΗΑ και PJM, και 1.011.187 για ΗΑ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του παχέος εντέρου είναι ένας από τους πιο συχνά διαγιγνώσκεται και θανατηφόρα καρκίνους παγκοσμίως, με περισσότερους από 1,2 εκατομμύρια νέες περιπτώσεις και 0,6 εκατομμύρια θανάτους εκτιμάται το 2008 [1]. Θεραπευτικές στρατηγικές που περιλαμβάνουν χειρουργική εκτομή συζευγμένο με χημειοθεραπεία είναι σχετικά αποτελεσματική στη θεραπεία όλη τη μάζα του όγκου. Ωστόσο, πολλοί καρκίνοι θα επαναληφθούν μέσα σε λίγους μήνες ή χρόνια. υποτροπή της νόσου έχει προταθεί ότι οφείλεται σε ανθεκτικά χημειοθεραπεία του καρκίνου βλαστοκύτταρα που διαδίδουν πριν από την εκτομή του όγκου. Αυτά τα πολυδύναμα κύτταρα είναι τότε σε θέση να δημιουργήσει ένα νέο όγκου, οδηγώντας σε υποτροπή του καρκίνου και μετάσταση. Οι πρόσφατες εξελίξεις στην ορθοκολικό καρκίνο έχουν οδηγήσει στο χαρακτηρισμό του εντερικού σημειωτές βλαστοκυττάρων, μεταξύ άλλων LGR5, ΕΡΗΒ2, και CD44 [2-4]. Σε κανονική επιθήλιο του κόλου, οι εν λόγω δείκτες περιορίζονται στη βάση του κρυπτών όπου βλαστοκυττάρων κατοικούν. Τα υψηλότερα επίπεδα έκφρασης αυτών των δεικτών που βρέθηκαν σε καρκίνο του παχέος εντέρου σε σύγκριση με παρακείμενο φυσιολογικό ιστό και η έκφραση LGR5 συσχετίζεται θετικά με τον αριθμό των μεταστάσεων λεμφαδένα [4-7]. ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο με υψηλή έκφραση ενός εντερικού υπογραφή γονίδιο βλαστικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων LGR5 και ΕΡΗΒ2, έχουν μια 10-φορές υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής σε σύγκριση με ασθενείς με χαμηλά επίπεδα [8]. Η κατανόηση των μονοπατιών σηματοδότησης και τα μόρια που ρυθμίζουν καρκινικά βλαστικά κύτταρα είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη ισχυρών προγνωστικών προσεγγίσεις και νέες θεραπευτικές στρατηγικές.

Το οικογένειας erbB των κινασών τυροσίνης, επίσης γνωστή ως υποδοχείς HER, αποτελείται από τέσσερα μέλη-ErbB1 /HER1 , erbB2 /HER2, ErbB3 /HER3 και ErbB4 /HER4. Αυτοί οι υποδοχείς είναι βασικές διαμορφωτές φυσιολογική αύξηση και ανάπτυξη και απορύθμιση τους έχει εμπλακεί στην έναρξη και την πρόοδο των καρκίνων [9, 10]. θεραπείες που βασίζονται σε αντισώματα που κατευθύνονται έναντι ErbB1 ή erbB2, με σκοπό τη μείωση των δυνατοτήτων μεταγωγής σήματος τους, έχουν αποδείξει κλινικά οφέλη στη θεραπεία αρκετών όγκων [11]. Λόγω της απουσίας ενός δραστικού ενδοκυτταρική περιοχή κινάσης τυροσίνης, ErbB3 δεν ελήφθη υπόψη για αρκετά χρόνια ως ένας στόχος καρκίνου του [12]. Ωστόσο, ErbB3 έχει προταθεί πρόσφατα ότι εμπλέκεται σε επίκτητη ανθεκτικότητα στις θεραπείες και έχει αναδειχθεί ως ένα πιθανό θεραπευτικό στόχο που οδηγεί στην ανάπτυξη πολλαπλών αντισώματα αντι-ΕrbΒ3 [13]. Παρόλο που η ακριβής λειτουργία του ErbB3 σε καρκίνο του παχέος εντέρου δεν έχει πλήρως κατανοηθεί, αρκετές μελέτες δείχνουν ότι ErbB3 διαταράσσεται σε όγκους. Για παράδειγμα, έχουν ErbB3 σωματικές μεταλλάξεις έχουν ταυτοποιηθεί στο 11% των καρκίνων του παχέος εντέρου και αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι ErbB3 εκφράζεται σε 36-89% των καρκίνων του παχέος [14-20]. Μερικές μελέτες έχουν δείξει ότι η αυξημένη έκφραση της πρωτεΐνης ErbB3 σε καρκίνο του παχέος εντέρου συνδέεται επίσης με μειωμένη επιβίωση των ασθενών [20, 21].

In vitro

, ErbB3 knockdown μειωμένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων, επαγόμενη απόπτωση και μπλοκάρει τη μετανάστευση των κυττάρων καρκίνου του παχέος εντέρου [21]. Ένας παρόμοιος μηχανισμός παρατηρήθηκε

in vivo

όπου ErbB3 νοκ ντάουν καθυστερήσει την ανάπτυξη του όγκου [14]. Παρά το γεγονός ότι τα στοιχεία αυτά είναι σαφώς ενδεικτική μιας ογκογόνο δυναμικό ErbB3, δεν είναι προς το παρόν άγνωστο αν ErbB3 ρυθμίζει τη παχέος πισίνα καρκινικό κύτταρο του στελέχους που προτείνεται να οδηγεί την έναρξη του όγκου και υποτροπή του όγκου [8, 22].

Υλικά και μέθοδοι

στρατολόγηση ασθενών και συλλογή ιστών

Πενήντα τρεις ασθενείς με πρωτοπαθή αδενώματα (n = 4) ή αδενοκαρκινώματα (n = 49) υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση στο 2012/2013 σε Cabrini Hospital (Malvern, Victoria) . Η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή Cabrini Ανθρωπίνων Έρευνας Ηθικής. Όλοι οι ασθενείς με την προϋπόθεση γραπτή συγκατάθεση. δείγματα όγκου και συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς κόλου πρόσφατα αποθηκευμένα σε RNAlater (Qiagen) για εξαγωγή RNA και σταθεροποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη για ανάλυση έκφρασης ιστού.

Κυτταρική καλλιέργεια

LIM1215, LIM1899, LIM2405, LIM2550 , Caco2 και SW480 ανθρώπινου ορθοκολικού καρκινικές κυτταρικές σειρές χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη (δόθηκαν ως δώρο από τον Ludwig Institute for Cancer Research, Parkville, Australia) [23-26]. Cells, εκτός Caco2 κύτταρα, ρουτίνας ανακαλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 που περιέχει 10% ορό εμβρύου μόσχου (Gibco), πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη (Gibco) και glutamax (Gibco). κύτταρα Caco2 διατηρήθηκαν σε DMEM που περιέχει 20% ορό εμβρύου μόσχου (Gibco), πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη (Gibco) και glutamax (Gibco). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO2 στους 37 ° C.

εκχύλιση RNA, cDNA παρασκευή και ποσοτική RT-PCR

Οι ιστοί που λαμβάνονται από εκτομή του παχέος εντέρου και συμφωνημένα κανονικό ιστό ήταν ομογενοποιημένο και το συνολικό RNA εκχυλίζεται χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Life Technologies) και RNeasy κιτ mini (Qiagen). Ολικό RNA εξήχθη από ορθοκολικό καρκίνο κυττάρων από τις κυτταρικές γραμμές 6 χρησιμοποιώντας το κιτ RNeasy μίνι (Qiagen). RNA μεταγράφηκε αντίστροφα χρησιμοποιώντας το κιτ QuantiTect Αντίστροφη Μεταγραφή (Qiagen). Ποσοτικής αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης μεταγραφάσης αντίστροφη (qRT-PCR) πραγματοποιήθηκε με τη χρήση Brilliant II SYBR Green QPCR Master Mix (τεχνολογίες Agilent). δείγματα εις τριπλούν αναλύθηκαν σε μία μηχανή LightCycler 480 (Roche Diagnostics). τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το 2

-DDCt μέθοδος που χρησιμοποιεί το γεωμετρικό μέσο όρο των 2 γονιδίων καθαριότητας. β-ακτίνης και β-2-μικροσφαιρίνης ως normalisers επειδή δημιουργείται την καλύτερη βαθμολογία κατά τη σύγκριση καρκινώματα με φυσιολογικό βλεννογόνο [27, 28]. Οι εκκινητές που παρατίθενται στον Πίνακα S1.

ανοσοφθορισμού

Σταθερή ιστοί σε παραφίνη και τεμαχίζονται σε τομές πάχους 4 μm. Τα πλακίδια αφαιρείται η παραφίνη σε ξυλόλιο, επανυδατώθηκαν σε βαθμιαίες αλκοόλες και επωάστηκαν σε κιτρικό ρυθμιστικό διάλυμα (ρΗ = 6) για 10 λεπτά σε μια χύτρα ταχύτητας.

Ο ορθοκολικός καρκίνος κύτταρα από τις 6 διαφορετικές κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν επί 4 ημέρες σε Πολυ-L-λυσίνη πλακίδια, πλύθηκαν με PBS και σταθεροποιήθηκαν με παγωμένο ακετόνη για 10 λεπτά.

και τα δύο τμήματα ιστών και διαφάνειες ορθοκολικού καρκίνου κυτταρική γραμμή αποκλείστηκαν με μπλοκ CAS (Life Technologies) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου πριν από την επώαση όλη τη νύχτα σε 4 βαθμούς με πρωτεύοντα αντισώματα, ΕΡΗΒ2 (R &? Α, AF467, 1/50), ErbB3 (Abcam, ab93739, 1/200), ΚΙ-67 (ϋΑΚΟ, M7248, 1/50), MUC2 (Abcam, ab11197, 1/200) και Ρ-H3 (Cell Signaling, 9706S, 1/100). Τα πλακίδια πλύθηκαν και κατόπιν εκτέθηκαν σε Alexa Fluor 488 γαϊδάρου αντι-κατσίκα IgG, Alexa Fluor 568 γαϊδάρου αντι-ποντικού IgG ή Alexa Fluor 637 γαϊδάρου αντι-κουνελιού IgG (Invitrogen, 1/500) για 1 ώρα και αντίθετα με DAPI. Φθορίζουσες εικόνες ελήφθησαν με Nikon C1 ομοεστιακό μικροσκόπιο (Nikon, Ιαπωνία). ένταση φωτισμού, την έκθεση, την αντιστάθμιση και οι ρυθμίσεις κέρδους διατηρήθηκαν μεταξύ των δειγμάτων. Η κατανομή των ΕΡΗΒ2 και ErbB3 σε κύτταρα όγκου προσδιορίστηκε ποσοτικά με τη λήψη έξι αντιπροσωπευτικών εικόνων ανά όγκου (n = 15 όγκους). Γύρω από 3500 κύτταρα ανά όγκου με το χέρι μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ΦΙΤΖΙ ανάλυσης εικόνας μετρητή κυττάρων του λογισμικού. Η ποσοτικοποίηση των κυττάρων Ρ-H3 + και τον εντοπισμό τους σε ΕΡΗΒ2 ή ErbB3 κυτταρικών πληθυσμών διεξήχθη με τη χρήση της Aperio FL πολυπλεξίας ανοσοφθορισμού σαρωτή διαφανειών. Φθορισμού εικόνες ολόκληρων τμημάτων ιστού (η = 8 όγκους) ελήφθησαν και όλα τα κύτταρα P-H3 προσδιορίστηκαν ποσοτικά (περίπου 100-200 + κύτταρα ανά καρκίνωμα P-Η3) και βρίσκονται εντός των διαφόρων κυτταρικών πληθυσμών.

Στατιστική αναλύει

Fold αλλαγές μεταξύ όγκου και συμφωνημένα κανονικά δείγματα υπολογίστηκαν ως ο λόγος της γονιδιακής έκφρασης σε όγκους έναντι των φυσιολογικών. Επειδή τα επίπεδα έκφρασης απόλυτη γονίδιο δεν ήταν κανονικά κατανεμημένες, χρησιμοποιήθηκαν μη παραμετρικές δοκιμασίες. Συσχετίσεις μεταξύ γονιδιακής έκφρασης αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας Wilcoxon ταιριάζουν ζεύγη υπογράψει-rank τεστ. Για να ελέγξετε τη σημασία της πτυχής αλλαγές, πραγματοποιήσαμε ένα δείγμα, δύο όψεων t-τεστ του φυσικού λογαρίθμου των φορές αλλαγές = 0. Ενώσεις αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας συσχετίσεις Spearman rank. μοντελοποίηση γραμμικής παλινδρόμησης, χρησιμοποιώντας το λογάριθμο των αλλαγών φορές δείκτη ως εξαρτημένη μεταβλητή, χρησιμοποιήθηκαν για να διερευνήσουν συσχετίσεις μεταξύ έκφρασης δείκτη και τα χαρακτηριστικά του όγκου. το στάδιο του όγκου, Τ, Ν και Μ στάδια και όγκου βαθμού συμπεριλήφθηκαν ως μεταβλητές με συντελεστές θεωρείται σημαντική εάν η p-τιμή ήταν μικρότερη από 0,05.

Αποτελέσματα

Έκφραση των ErbB3 και εντερική βλαστικών κυττάρων οι δείκτες αυξημένα σε καρκίνους του παχέος σύγκριση με συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς

Ο πληθυσμός της μελέτης αποτελείτο από 53 ασθενείς (χαρακτηριστικά των ασθενών στην S2 πίνακα). Εντερικές βλάβες χαρακτηρίστηκαν ως προ-καρκινικές σε 4 ασθενείς και καρκινικές σε 49 ασθενείς. Έκφραση όλους τους δείκτες, όπως αξιολογείται με qRT-PCR, ανιχνεύθηκε σε όλα φυσιολογικών και καρκινικών ιστών.

Τα επίπεδα έκφρασης του ErbB3 σε καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς συμφωνημένα ήταν πολύ μεταβλητές, κυμαινόμενες από 0,06 έως 60.2- πλάσια αλλαγή αντίστοιχα (Σχήμα 1). 38,8% (19/49) των όγκων είχαν αυξημένα επίπεδα έκφρασης ErbB3 (& gt? 2-φορές) σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς συμφωνημένα (Σχήμα 1). Το μεσαίο επίπεδο έκφρασης ErbB3 σε αδενοκαρκινώματα (0.141) ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε φυσιολογικούς ιστούς (0.079) (Wilcoxon δοκιμή συνδυασμένα ζεύγη, ρ & lt? 0.0005) (Σχήμα 1). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν στα αδενώματα σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς, αν και η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική (δοκιμασία T Paired του Student, ρ = 0.061) πιθανόν λόγω του μικρού αριθμού των δειγμάτων αδενώματος σε αυτή την ομάδα ασθενών (n = 4) (Σχ 2Α ). Η μέση τιμή του λογαρίθμου της πτυχής αλλαγής (0.587) ήταν σημαντικά διαφορετικό από το 0 (ρ = 0.009, το ένα δείγμα t-test). Γραμμική παλινδρόμηση μοντελοποίηση έδειξε ότι τα επίπεδα έκφρασης ErbB3 ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερος σε στάδιο IV όγκους σε σύγκριση με το Στάδιο Ι όγκους (συντελεστής = 1,36, (95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI) 0,07, 2,64), ρ = 0.039, δεδομένα που δεν φαίνονται). Δεν υπήρχαν άλλες σημαντικές σχέσεις μεταξύ των επιπέδων έκφρασης ErbB3 και κλινικών δεικτών, όπως το στάδιο της νόσου, ο βαθμός και τα στάδια ΤΝΜ. Αυξημένη έκφραση ErbB3 στα αδενώματα και αδενοκαρκινώματα σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς επιβεβαιώθηκε με ανοσοϊστοχημεία (Σχήμα 2Β). ErbB3 ήταν κυρίως εντοπισμένη στην κορυφαία και βασοπλευρική κυτταρική επιφάνεια φυσιολογικών εντερικών επιθηλιακών κυττάρων και ανιχνεύθηκε στην κυτταρική επιφάνεια στην πλειοψηφία των όγκων με κάποια διάχυτη κυτταροπλασματική χρώση εμφανής σε λίγες περιπτώσεις (S1 Σχήμα).

Ποσοτική οι πραγματικού χρόνου PCR εκφράζεται σε σχέση με συμφωνημένα φυσιολογικό ιστό για κάθε αδενοκαρκίνωμα (n = 50). Εισάγει δείχνουν Boxplots σύγκριση των απόλυτων τιμών της γονιδιακής έκφρασης σε φυσιολογικά (Ν) και του όγκου (Τ) ιστούς. * Σημαντική διαφορά σε σχέση με τον έλεγχο των ιστών (Wilcoxon test σημάδι rank, p & lt? 0.001)

Η

(Α):. Τα μέσα επίπεδα έκφρασης (2

-ΔΔCt) για κάθε γονίδιο υπολογίζεται σε σχέση με βήτα-2-μικροσφαιρίνης και τα επίπεδα έκφρασης β-ακτίνης από qRT-PCR σε φυσιολογικούς ιστούς κόλου (n = 54), του παχέος αδενώματα (n = 4) και του παχέος αδενοκαρκινώματα (n = 54) (μέση ± SEM). παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές (*) σε σύγκριση με ιστούς ελέγχου (τεστ Τ Paired του Student, ρ & lt? 0.001). (Β): Ανοσοϊστοχημική ανίχνευση erbB3 και ΕΡΗΒ2 σε φυσιολογικό ιστό του παχέος εντέρου, αδένωμα και το αδενοκαρκίνωμα. μπαρ κλίμακα, 50μm.

Η

Η έκφραση των πολλαπλών δεικτών εντερική βλαστικών κυττάρων διερευνήθηκε (LGR5, ΕΡΗΒ2, CD44s και CD44v6). CD44s είναι μια ισομορφή κοινή σε όλες τις παραλλαγές CD44 και έχει χρησιμοποιηθεί για τον εντοπισμό υποθετικών βλαστικά κύτταρα σε πολλαπλούς τύπους ιστών. Μια πρόσφατη μελέτη προτείνει ότι CD44v6, που περιλαμβάνει παραλλαγή εξόνιο 6, ήταν ένας σημαντικός ρυθμιστής της εντερικής βλαστικών κυττάρων και το σχηματισμό του καρκίνου, έτσι έχουμε αναλύσει επίσης αυτό στις μελέτες μας [29, 30]. LGR5, ΕΡΗΒ2, CD44s και CD44v6 ήταν σημαντικά πάνω ρυθμισμένα σε καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς (μέση αύξηση 9,4 φορές, 3,5 φορές, 3,0 φορές και 6,4 φορές αντιστοίχως, όλες οι ρ-τιμές & lt? 0,0005? Το ένα δείγμα t-tests του συνδεδεμένοι αξιών = 1) (Σχήμα 1). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν στα αδενώματα σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς (Σχήμα 2Α). Τα επίπεδα έκφρασης του LGR5, ΕΡΗΒ2, CD44s και CD44v6 αυξήθηκαν τουλάχιστον 2 φορές σε 70,8% (34/48), 72.0% (36/50), 66.0% (33/50) και 86,0% (43/50) του όγκου ιστών σε σύγκριση με συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς (Σχήμα 1). Αυξημένη έκφραση του ΕΡΗΒ2 στα αδενώματα και αδενοκαρκινώματα σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς επιβεβαιώθηκε με ανοσοϊστοχημεία και σαφώς εντοπισμένη στον επιθηλιακό ιστό του όγκου (Σχήμα 2Β). επίπεδα έκφρασης ΕΡΗΒ2 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε στάδιο ΙΙΙ, αλλά δεν σταδίου IV, οι όγκοι σε σχέση με το στάδιο Ι όγκους (συντελεστής = 1,47 (95% CI 0,30, 2,64), p = 0,015). Δεν υπήρχαν άλλες σημαντικές σχέσεις μεταξύ της έκφρασης των βλαστικών κυττάρων και την κλινική δείκτες.

ErbB3 συσχετίζεται θετικά με εντερική δείκτες βλαστικών κυττάρων σε καρκίνο του παχέος εντέρου και του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές

Οι συσχετίσεις μεταξύ mRNA φορές αλλαγές ( αδενοκαρκίνωμα

vs

κανονικό) σημειωτών που περιγράφονται στον πίνακα 1 αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας Spearman τεστ rank συσχέτιση. Εντερική δείκτη βλαστικών κυττάρων φορές αλλαγές (LGR5, ΕΡΗΒ2, CD44s και CD44v6) ήταν θετικά δια-συσχέτιση (Πίνακας 1). Είναι ενδιαφέρον ότι, οι θετικές συσχετίσεις βρέθηκαν μεταξύ ErbB3 και βλαστικών κυττάρων δείκτες LGR5, ΕΡΗΒ2 και CD44v6 (Πίνακας 1). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν όταν αδενώματος και αδενοκαρκινώματος συνενώθηκαν (S3 πίνακα).

Η

Μια ανάλυση qRT-PCR των επιπέδων ΕΡΗΒ2 και έκφραση ErbB3 διεξήχθη επίσης χρησιμοποιώντας κυτταρικές γραμμές καρκινώματος του παχέος 6. Τόσο ErbB3 και ΕΡΗΒ2 ανιχνεύθηκαν σε διάφορα επίπεδα έκφρασης σε αυτές τις κυτταρικές σειρές (Σχήμα 3Α). Το πιο σημαντικό, και όπως παρατηρείται στις πρωτογενείς όγκους, η έκφραση ErbB3 και ΕΡΗΒ2 συσχετίστηκε θετικά (Σχήμα 3Β, τεστ συσχέτισης Pearson, rho = 0,999, p & lt? 0.0001)

(Α):. Η μέση έκφραση επίπεδα (2

-ΔΔCt) του erbB3 και ΕΡΗΒ2 υπολογίστηκαν σε σχέση με την βήτα-2-μικροσφαιρίνης και τα επίπεδα έκφρασης β-ακτίνης από qRT-PCR σε 6 διαφορετικές ορθοκολικό καρκίνο κυτταρικές γραμμές (η = 3, μέσος όρος ± SEM). (Β):. Θετική γραμμική συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης ErbB3 και ΕΡΗΒ2 (τεστ συσχέτισης Pearson, rho = 0,999, p & lt? 0.0001)

Η

καρκίνο του παχέος εντέρου μοιάζει με φυσιολογικό ιστό του παχέος εντέρου

Η θετική συσχετίσεις που βρέθηκαν στο επίπεδο RNA μεταξύ ErbB3 και των δεικτών εντερική βλαστικών κυττάρων μας ώθησε να διερευνήσει τις δυνατότητες συνεργασίας εντοπισμό των ErbB3 και δεικτών εντερική βλαστικών κυττάρων σε όγκους. Πολλαπλές αντισώματα που κατευθύνονται έναντι LGR5 (Sigma-Aldrich, HPA012530? Abgent, AP2745? Abcam, ab75850), CD44 (Abcam, ab41478) και ΕΡΗΒ2 (R &? D, AF467) δοκιμάστηκαν σε φυσιολογικά ανθρώπινα κόλον και ορθοκολικό καρκινικούς ιστούς. Μόνο ο πολυκλωνικός αντι-ΕΡΗΒ2 αντίσωμα ανιχνεύεται σθεναρά ΕΡΗΒ2-θετικά κύτταρα στο κάτω μέρος του φυσιολογικού ανθρώπινου κολονικού κρύπτες (n = 5, σχ 4Α) όπου υποθετικό βλαστοκύτταρα κατοικούν [3]. Σε αντίθεση, ErbB3 θετικά κύτταρα ανιχνεύθηκαν εντός του διαμερίσματος διαφοροποιημένο κύτταρο στην κορυφή του κρύπτες (εικ 4Α). Τα πρότυπα έκφρασης των ErbB3 και ΕΡΗΒ2 ήταν αλληλοαποκλειόμενες στην κανονική κολικό ιστό. Αυτό το μοτίβο παρατηρήθηκε επίσης σε αδενοκαρκινώματα όπου ErbB3 και ΕΡΗΒ2 σημειώνονται διακριτές πληθυσμούς κυττάρων (η = 10) (Εικ 4Β).

Ανίχνευση ΕΡΗΒ2 (πράσινο) και ErbB3 (κόκκινο, Α και Β) με συν-ανοσοφθορισμό σε φυσιολογικό κόλον (Α) και ορθοκολικό καρκίνο (Β) (DAPI, μπλε). μπαρ κλίμακα, 50μm.

Η

Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι, αν και η έκφραση των ErbB3 και εντερική βλαστικών κυττάρων δείκτες συσχετίζονται μεταξύ τους σε επίπεδο RNA δεν σηματοδοτούν τα ίδια κύτταρα στους όγκους.

ErbB3 και ΕΡΗΒ2 σηματοδοτήσει διακριτοί πληθυσμοί κυττάρων σε καρκίνο του παχέος εντέρου

Σας ζητείται να ερευνήσει αν η αντίθεση πρότυπο έκφρασης των ErbB3 και ΕΡΗΒ2 διατηρήθηκε σε πολλαπλούς όγκους ή αν ορισμένες όγκοι περιείχαν κύτταρα που συν-εκφράζεται και τους δύο δείκτες. Μετά συν-ανοσοφθορισμό και ανάλυση εικόνας, ο αριθμός των ΕΡΗΒ2 + και ErbB3 + κυττάρων ποσοτικοποιήθηκε σε 15 ορθοκολικούς καρκίνους (3500 κύτταρα ανά όγκου). Προσδιορίστηκαν τρεις διαφορετικούς τύπους όγκων με βάση προφίλ έκφρασης τους. 33,3% (5/15) των όγκων ήταν εμπλουτισμένα για ΕΡΗΒ2 + κύτταρα και στερούνταν ErbB3 + κύτταρα (Σχήμα 5Α, οι όγκοι 1-5? Σχήμα 5Β). 60% (9/15) των όγκων είχε αμοιβαία έκφραση ΕΡΗΒ2 και ErbB3 (Σχήμα 5Α, όγκοι 6-14? Σχ 5C και 5D). Ένας όγκος που χαρακτηρίζεται από την απουσία ΕΡΗΒ2 + κυττάρων και την παρουσία ενός μεγάλου πληθυσμού διπλά αρνητικά κύτταρα (EPHB2- /ERBB3-, 85,1% των καρκινικών κυττάρων) (Σχήμα 5Α και 5Ε). Αξίζει να σημειωθεί, όλοι οι όγκοι που μελετήθηκαν περιέχονται διπλά αρνητικά κύτταρα (26,4% των κυττάρων του όγκου), που κυμαίνονται από 6,8% έως 85,1% των κυττάρων ανά καρκίνωμα. Η παρουσία των κυττάρων που συν-εκφράζεται ΕΡΗΒ2 και ErbB3 ήταν σπάνιες (κύτταρα όγκου 2,1%). Η έκφραση του ErbB3 διερευνήθηκε επίσης σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου του παχέος 6 με ανοσοφθορισμό (S2A Εικ). Σύμφωνα με τα δεδομένα qRT-PCR, ErbB3 ανιχνεύθηκε σε LIM1215, LIM1899, Caco2 και καρκινικά κύτταρα SW480. Είναι σημαντικό ότι, η έκφραση του ErbB3 ήταν ετερογενής σε αυτές τις κυτταρικές γραμμές, όπως χαρακτηρίζεται από την παρουσία κυττάρων ErbB3 + και ERBB3-. Επιπλέον, στις κυτταρικές σειρές που περιείχαν ένα ανιχνεύσιμο και ισχυρή πληθυσμό ErbB3 κυττάρων (LIM1215 και LIM1899), ΕΡΗΒ2 και ErbB3 σημειώνονται διακριτοί πληθυσμοί κυττάρων (S2B Σχήμα), όπως παρατηρήθηκε στη μελέτη μας στην ανθρώπινη παχέος όγκους. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι διακριτά πληθυσμοί κυττάρων που βρέθηκαν σε αυτές τις κυτταρικές σειρές

(Α):. Συχνότητα ΕΡΗΒ2 + και ErbB3 + κύτταρα σε ορθοκολικό καρκίνο (n = 15). (B, C, D, E): Συν-ανοσοφθορισμού ανίχνευση ΕΡΗΒ2 (πράσινο) και ErbB3 (κόκκινο) σε αντιπροσωπευτικά δείγματα ορθοκολικού καρκίνου του αντίθετα με ϋΑΡΙ (μπλε). Σημειώστε την παρουσία ενός EPHB2- /ErbB3 + κυττάρων (λευκό βέλος) σε έναν όγκο εμπλουτισμένα για ΕΡΗΒ2 + /ERBB3- κύτταρα (Β). Σημειώστε την παρουσία διπλών αρνητικών κυττάρων (λευκό βέλος) σε ένα όγκο που περιέχει τόσο ΕΡΗΒ2 + /ERBB3- και πληθυσμών EPHB2- /ErbB3 + κυττάρων (D). μπαρ κλίμακα, 50μm.

Η

Εν κατακλείδι, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι ΕΡΗΒ2 και ErbB3 προσδιορίσει διαφορετικούς υπο-τύπους καρκίνου του παχέος εντέρου, συμπεριλαμβανομένων των εμπλουτισμένο όγκους των βλαστικών κυττάρων (ΕΡΗΒ2 + /ERBB3-), οι όγκοι που περιέχουν αλληλοαποκλείονται διαμερίσματα (ΕΡΗΒ2 + /ErbB3 +) ή όγκοι λείπει ένα διαμέρισμα ΕΡΗΒ2 βλαστικών κυττάρων (EPHB2-).

ErbB3 + καρκινικά κύτταρα είναι κατά κύριο λόγο μη πολλαπλασιαστικές και διαφοροποιημένη σε αντίθεση με ΕΡΗΒ2 + καρκινικά κύτταρα

για να ορίσετε την πολλαπλασιαστική κατάσταση του erbB3 + καρκινικών κυττάρων σε πρωτογενή ορθοκολικό καρκίνο, οι ιστοί τριπλή χρώση για Κί-67, ενός γνωστού δείκτη τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, ErbB3 και ΕΡΗΒ2. Παραδόξως, ErbB3 + καρκινικά κύτταρα σπάνια συν-εντοπισμένη με ΚΙ-67 πυρηνική χρώση (Σχήμα 6Α και S3 Εικ). Σε αντίθεση, με τον ίδιο όγκο, ΕΡΗΒ2 + κύτταρα ήταν κυρίως θετικά για ΚΙ-67 (Σχήμα 6Α). Διπλά αρνητικά κύτταρα (EPHB2- /ERBB3-) ήταν επίσης KI-67 θετικά. Παρόμοιες παρατηρήσεις βρέθηκαν σε πολλαπλούς όγκους (Σχήμα 6Β και S4 Εικ). Είναι ενδιαφέρον ότι, οι παρατηρήσεις αυτές θύμιζαν της πολλαπλασιαστικής κατάστασης του φυσιολογικού κόλου δεδομένου ότι τα ΚΙ-67 + πολλαπλασιαστική κύτταρα μόνο που βρίσκεται στο κάτω μέρος της κρύπτης όπου ΕΡΗΒ2 + κύτταρα εντοπισμένα (S5 Σχήμα).

(Α και Β): Ανίχνευση ΕΡΗΒ2 (πράσινο), ErbB3 (κόκκινο) και ΚΙ-67 (γκρι) με συν-ανοσοφθορισμού σε δύο αντιπροσωπευτικά δείγματα ορθοκολικού καρκίνου (ϋΑΡΙ, μπλε). (Γ): Κατανομή των P-H3 πολλαπλασιαστικών κυττάρων + εντός των 4 διακριτές κυτταρικών πληθυσμών σε δείγματα καρκίνου του παχέος 8. (Δ και Ε) Ανίχνευση ΕΡΗΒ2 (πράσινο), ErbB3 (κόκκινο) και Ρ-H3 (γκρι) με συν-ανοσοφθορισμού σε δύο αντιπροσωπευτικά δείγματα ορθοκολικού καρκίνου (ϋΑΡΙ, μπλε). μπαρ κλίμακα, 50μm.

Η

Για να επιβεβαιώσετε τη μη παραγωγική φύση του /ErbB3 + κύτταρα EPHB2-, ένας δεύτερος δείκτης πολλαπλασιασμού (P-Η3), το οποίο ανιχνεύει μιτωτικά κύτταρα, χρησιμοποιήθηκε σε δείγματα καρκίνου του παχέος 8 ότι περιείχε ένα ισχυρό ErbB3 + κυτταρικό πληθυσμό (με βάση την Εικ 4Α). Μετά συν-ανοσοφθορισμό και ανάλυση εικόνας, τον αριθμό των κυττάρων Ρ-H3 + στις τέσσερις διαφορετικούς πληθυσμούς κυττάρων (ΕΡΗΒ2 + /ErbB3 +? ΕΡΗΒ2 + /ERBB3-? EPHB2- /ErbB3 +? EPHB2- /ERBB3-) ποσοτικοποιήθηκε (μεταξύ 100-200 P -H3 + κύτταρα ανά όγκου). 70,0% (που κυμαίνεται από 57,5% έως 81,8%) των κυττάρων Ρ-H3 + βρίσκονταν στην ΕΡΗΒ2 + /ERBB3- πληθυσμού, ενώ αντίθετα μόνο 8.8% (2,5 έως 14,0%) των κυττάρων Ρ-H3 + βρίσκονταν στην EPHB2- /ErbB3 + κυτταρικός πληθυσμός (Σχήμα 6C). + Κύτταρα P-H3 ήταν σπάνια διπλά θετικά για ΕΡΗΒ2 και ErbB3 (5,6%) (Σχ 6C). Αντιπροσωπευτικές εικόνες που δείχνουν τον εντοπισμό του + κυττάρων Ρ-H3 στο ΕΡΗΒ2 + /πληθυσμού ERBB3- κυττάρων σε 2 διαφορετικούς όγκους που παρουσιάζονται στο Σχήμα 6D και 6Ε.

Για να διερευνηθεί η διαφοροποιημένη κατάσταση του /ErbB3 + κυττάρων EPHB2- σε καρκίνο του παχέος εντέρου, ιστοί τριπλή χρώση για MUC2, έναν δείκτη των διαφοροποιημένων κυττάρων λαγηνοειδών, ErbB3 και ΕΡΗΒ2. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι περισσότεροι MUC2 + ορθοκολικό καρκίνο κύτταρα επίσης EPHB2- /ErbB3 + (Σχήμα 7Α). Παρόμοιες παρατηρήσεις βρέθηκαν σε πολλαπλούς όγκους (Σχ 7Β και S6 Εικ). Ωστόσο, μια υπο-ομάδα /ErbB3 + καρκινικά κύτταρα EPHB2- δεν ήταν θετικά για MUC2 σε αυτούς τους όγκους (Σχήμα 7Α και 7Β, λευκά βέλη). Επιπλέον, ορθοκολικούς όγκους που δεν περιέχει κανένα MUC2 + κυττάρων ακόμη είχε ένα πληθυσμό EPHB2- /ErbB3 + κυττάρων (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Ανίχνευση ΕΡΗΒ2 (πράσινο), ErbB3 (κόκκινο) και MUC2 (γκρι) από συν-ανοσοφθορισμού σε δύο αντιπροσωπευτικά δείγματα ορθοκολικού καρκίνου (DAPI, μπλε). Σημειώστε την παρουσία του /ErbB3 + κυττάρων EPHB2- (λευκό βέλος) που είναι MUC2-. μπαρ κλίμακα, 50μm.

Η

Στο σύνολό τους, τα στοιχεία αυτά αποδεικνύουν ότι καρκίνου του παχέος εντέρου κύτταρα ErbB3 + είναι κατά κύριο λόγο μη πολλαπλασιαστικές και διαφοροποιημένες, σε αντίθεση με ΕΡΗΒ2 + κύτταρα.

Συζήτηση

προκειμένου να καθοριστεί αν σηματοδότηση ErbB3 παίζει ένα ρόλο στη ρύθμιση του ορθοκολικού καρκίνου βλαστικών κυττάρων, η έκφραση ErbB3 και εντερικών σημειωτές βλαστοκυττάρων διερευνήθηκαν σε πολλαπλούς όγκων παχέος εντέρου, συμπεριλαμβανομένης της πρόωρης αδενωμάτων και καρκινωμάτων στάδιο (στάδιο Ι-IV). Βρήκαμε σημαντική αύξηση των επιπέδων erbB3 mRNA σε αδενώματα και του παχέος εντέρου σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν για LGR5, ΕΡΗΒ2, CD44s και CD44v6, σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες. [4, 5, 8] Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η έκφραση του ErbB3 και βλαστικά δείκτες κυττάρου αυξημένα σε όλες τις προοδευτικές στάδια καρκινογένεσης. Πιο ενδιαφέρον, διαπιστώσαμε ότι erbB3 και αρκετών μορίων που σηματοδοτούν βλαστικών κυτταρικών πληθυσμών θετικά συσχετίζονται σε επίπεδο RNA σε καρκίνο του παχέος εντέρου.

Αυτό το εύρημα μας ώθησε να ερευνήσει εάν ErbB3 ήταν παρόν στον πληθυσμό αρχέγονων κυττάρων εντός όγκων. Αναλύσαμε το εάν ΕΡΗΒ2, ένα καθορισμένο δείκτη βλαστικών κυττάρων, συν-εντοπίζεται με την έκφραση ErbB3 στα παχέος καρκινικούς ιστούς. Αυτό αποκάλυψε τρία διαφορετικά υποσύνολα του καρκίνου βασίζεται στην i) ο εμπλουτισμός του ΕΡΗΒ2 + κυττάρων και την έλλειψη ErbB3 + κυττάρων, ii) απουσία ΕΡΗΒ2 + κυττάρων ή iii) την παρουσία και των δύο erbB3 + και ΕΡΗΒ2 + καρκίνος κυτταρικών πληθυσμών. Στην αργότερα υποσύνολο, ErbB3 και ΕΡΗΒ2 σημειώνονται διαφορετικά αμοιβαία αποκλειόμενα κυτταρικών πληθυσμών με διακριτά πολλαπλασιαστικές δυνατότητες, η πλειονότητα των ErbB3 + κυττάρων είναι μη πολλαπλασιαστικές. Απροσδόκητα, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι αν και υπήρχε θετική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του erbB3 και ΕΡΗΒ2 στο επίπεδο του RNA, οι δύο αυτές οι δείκτες δεν ήταν παρόντες στα ίδια κύτταρα. Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση του erbB3 και ΕΡΗΒ2 σε διακριτές περιοχές ανιχνεύθηκε σε φυσιολογικό κολονικό επιθήλιο όπου επισημασμένα ΕΡΗΒ2 βλαστικά κύτταρα και πολλαπλασιαστικών προγόνων στον πυθμένα κρύπτης και ErbB3 σηματοδότησε την μη πολλαπλασιαστικός διαμέρισμα διαφοροποιημένο κύτταρο στο επάνω μέρος της εντερικής κρυπτών. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι οι περισσότεροι καρκίνοι του παχέος εξετάσαμε μοιάζουν φυσιολογικό ιστό με διακριτά διαμερίσματα κυττάρων και πολλαπλασιαστική κατάσταση και ότι ένας διπλός ΕΡΗΒ2 /ErbB3 υπογραφή θα μπορούσαν να προσδιορίσουν όγκους με αυτό το μορφολογία. Ένα παρόμοιο πρότυπο έκφρασης έχει παρατηρηθεί σε καρκίνους του παχέος χρησιμοποιώντας ΕΡΗΒ2 και κυτοκερατίνη 20 ως δείκτης διαφοροποίησης [8, 31]. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα επίπεδα κυτοκερατίνη 20 έκφρασης κάτω-ρυθμίζονται σε ορθοκολικό καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς, σε αντίθεση με ErbB3 στις μελέτες μας, η οποία προτείνει ένα πιο σύνθετο ρόλο για ErbB3 [8]. Συνεπής με το προφίλ έκφρασης του ErbB3, τα επίπεδα έκφρασης του PMEPA1, το οποίο είναι ένας δείκτης του τελικά διαφοροποιημένα κύτταρα που βρίσκονται αποκλειστικά στην επιφάνεια του κόλου επιθηλιακών κρυπτών, είναι αυξημένες σε όγκους παχέος εντέρου σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς [32], υποδηλώνοντας ότι τα μόρια που σηματοδοτούν διαφοροποιημένο πληθυσμό κυττάρων μπορεί επίσης να είναι αυξημένα σε ορισμένες περιπτώσεις κατά τη διάρκεια του παχέος καρκινογένεση.

τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η στόχευση ErbB3 σε καρκίνο του παχέος εντέρου με τη χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων, τα οποία είναι επί του παρόντος υπό ανάπτυξη [13], μπορούν να στοχεύουν διαφοροποιημένα κύτταρα και συμβάλλουν στην εξάλειψη του χύδην όγκου αλλά δεν μπορεί να επηρεάσει την πολλαπλασιαστική καρκινικά βλαστικά-όπως κυτταρικού πληθυσμού. Αυτό παραμένει να ελεγχθεί πειραματικά. Η καταστροφή των διαφοροποιημένων κυττάρων καρκίνου του παχέος εντέρου μπορεί να είναι ευεργετική καθώς αυτά τα κύτταρα έχουν πρόσφατα περιγραφεί ως σημαντικός μεσολαβητής της αντίστασης στη θεραπεία [33] και μπορεί να προστατεύσει τα κύτταρα του όγκου κίνηση από τον παράγοντα χημειοθεραπείας ιρινοτεκάνη λόγω των ικανοτήτων φάρμακο αποβολή τους [33]. Θα ήταν ενδιαφέρον να καθορίσει κατά πόσον ο πληθυσμός διαφοροποιημένων κυττάρων περιγράφεται από Emmink

et al

. συμπίπτει με την ΕΛΒ3 + διαφοροποιημένο πληθυσμό. Επιπλέον, αυτά τα μη-πολλαπλασιαστική ErbB3 + κύτταρα μπορεί να εξακολουθούν να έχουν ένα ρόλο να παίξουν κατά τη διάρκεια της υποτροπής του όγκου, όπως έχει αναφερθεί ότι η μετα-μιτωτικά κύτταρα του εντέρου μπορεί να απο-διαφοροποιούνται και αποκτούν βλαστικών κυττάρων, όπως ακίνητα και να ξεκινήσει ογκογένεσης σε ορισμένες περιπτώσεις [34]. τα επίπεδα

Αυξημένα της έκφρασης ErbB3 έχουν συσχετισθεί με μειωμένη επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου [20, 21]. Φαίνεται σημαντικό να καθορίσει αν αυτές ErbB3 + κύτταρα είναι σημαντικό οι οδηγοί της καρκινογένεσης και αν ενεργούν με την υποστήριξη της σχετίζεται πληθυσμό των βλαστικών κυττάρων ή άμεσα συμβάλλοντας στη μείωση της επιβίωσης των ασθενών.

Εν κατακλείδι, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η αυξημένη έκφραση των ErbB3 και δεικτών εντερική βλαστικών κυττάρων είναι κοινά χαρακτηριστικά των καρκίνων του παχέος εντέρου και να εντοπίσει τους όγκους που περιλαμβάνει διαχωριζόμενες μη παραγωγική κυτταρικούς πληθυσμούς διακριτή από πολλαπλασιαστικές περιοχές όπου καρκινικά βλαστικά κύτταρα κατοικούν. Με βάση την έκφραση του δείκτη ΕΡΗΒ2 βλαστικών κυττάρων και του δείκτη διαφοροποίησης ErbB3, μπορούμε διστακτικά προτείνουμε ότι οι παχέος εντέρου οργανώνονται σε i) βλαστικών σαν κύτταρο εμπλουτισμένο όγκοι, ii) διαφοροποιημένοι όγκοι με ένα διαμέρισμα αρχέγονων σαν κύτταρο ή iii) λείπει μια ΕΡΗΒ2 βλαστικών κυττάρων διαμέρισμα.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. ErbB3 είναι κατά κύριο λόγο βρίσκεται στο μεμβράνης σε αδενοκαρκινώματα.

Ανοσοϊστοχημική ανίχνευση ErbB3 σε 7 δείγματα ορθοκολικό καρκίνο που δείχνει μια κυρίαρχη ισχυρή χρώση μεμβράνης (Α-Δ) ή και τα δύο διαχέονται κυτταροπλασματική μεμβράνη και χρώση (Ε-G). μπαρ κλίμακα, 50μm

doi:. 10.1371 /journal.pone.0138336.s001

(ΔΕΘ)

S2 Εικ. ErbB3 είναι ετερογενώς εκφράζεται σε καρκίνο του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές

(Α):. Ανοσοφθορισμού ανίχνευση ErbB3 (κόκκινο) σε 6 διαφορετικές καρκινικές κυτταρικές σειρές αντίθετα με ϋΑΡΙ (μπλε). (Β): Έκφραση του ErbB3 (πράσινο) και ΕΡΗΒ2 (κόκκινο) σε καρκινικές κυτταρικές σειρές LIM1215 και LIM1899 αντίθετα με ϋΑΡΙ (μπλε). μπαρ κλίμακα, 50μm

doi:. 10.1371 /journal.pone.0138336.s002

(ΔΕΘ)

S3 Εικ. ErbB3 θετικά ορθοκολικό καρκίνο κύτταρα είναι κατά κύριο λόγο μη-πολλαπλασιαστική.

Co-ανοσοφθορισμού ανίχνευση ΚΙ-67 (πράσινο) και ErbB3 (κόκκινο) σε δύο διαφορετικά δείγματα ορθοκολικού καρκίνου του αντίθετα με ϋΑΡΙ (μπλε). μπαρ κλίμακα, 50μm

doi:. 10.1371 /journal.pone.0138336.s003

(ΔΕΘ)

S4 Εικ. ErbB3 θετικά ορθοκολικό καρκίνο κύτταρα είναι κατά κύριο λόγο μη πολλαπλασιαστικές σε αντίθεση με ΕΡΗΒ2 θετικά κύτταρα.

Co-ανοσοφθορισμού ανίχνευση ΚΙ-67 (πράσινο), ErbB3 (κόκκινο, A, C, E) και ΕΡΗΒ2 (κόκκινο, Β, D, F) σε τρία διαφορετικά δείγματα ορθοκολικού καρκίνου, ϋΑΡΙ (μπλε). μπαρ κλίμακα, 50μm

doi:. 10.1371 /journal.pone.0138336.s004

(ΔΕΘ)

S5 Εικ. ΕΡΗΒ2 θετικά κύτταρα είναι KI-67 θετικά σε φυσιολογικό ανθρώπινο κόλον.

Co-ανοσοφθορισμού ανίχνευση ΕΡΗΒ2 (πράσινο) και ΚΙ-67 (κόκκινο) σε φυσιολογικό ιστό κόλου (ϋΑΡΙ, μπλε). Σημειώστε την απουσία του ΚΙ-67 θετικών κυττάρων στο διαφοροποιημένο διαμέρισμα (λευκό βέλος). μπαρ κλίμακα, 50μm

doi:. 10.1371 /journal.pone.0138336.s005

(ΔΕΘ)

S6 Εικ.