Αφηρημένο

Καρκίνος βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν με (ΚΕΠ) /καρκίνο έναρξη κύτταρα (CICs) ορίζονται ως ένα μικρό πληθυσμό των καρκινικών κυττάρων που έχουν υψηλά ογκογενετικότητας. Επιπλέον, ΚΕΠ /CICs είναι ανθεκτικά σε πολλές θεραπείες του καρκίνου, και ως εκ τούτου είναι ΚΕΠ /CICs πιστεύεται ότι είναι υπεύθυνη για υποτροπής του καρκίνου μετά τη θεραπεία και μακρινή μετάσταση. Σε επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (EOC) περιπτώσεις, υποτροπή της νόσου μετά από χημειοθεραπεία συχνά παρατηρείται, γεγονός που υποδηλώνει ΚΕΠ ωοθηκών /τα CICs εμπλέκονται. Υπάρχουν τέσσερις μεγάλες ιστολογικών υποτύπων στην EOC και ορώδες αδενοκαρκίνωμα και σαφείς κυττάρων αδενοκαρκινώματος είναι κακοήθειες υψηλής ποιότητας. Ως εκ τούτου, αναλύθηκε ωοθηκών ΚΕΠ /CICs από κυτταρικές γραμμές καρκινώματος ωοθηκών (ορώδες αδενοκαρκίνωμα και σαφής κύτταρο αδενοκαρκίνωμα) και πρωτογενή καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών σε αυτή τη μελέτη. Εμείς απομονωθεί ωοθηκών ΚΕΠ /CICs ως αφυδρογονάση αλδεΰδη 1 υψηλή (ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή) πληθυσμού από 6 κυτταρικές σειρές EOC (3 ορώδες αδενοκαρκινώματα και 3 σαφές αδενοκαρκινώματα κυττάρων) με τη δοκιμασία ALDEFLUOR. ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα έδειξαν μεγαλύτερη σχηματισμού σφαίρας ικανότητα, υψηλότερα ογκογενετικότητας και μεγαλύτερη επεμβατική ικανότητα, υποδεικνύοντας ότι ωοθηκών ΚΕΠ /Τα CICs εμπλουτισμένα σε ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα. ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα θα μπορούσαν επίσης να απομονωθούν από 8 από 11 δείγματα πρωτογενών καρκίνωμα ωοθήκης. Ανοσοϊστοχημική χρώση αποκάλυψε ότι τα υψηλότερα επίπεδα έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 στην ωοθήκη περιπτώσεις καρκίνου που σχετίζονται με φτωχότερη πρόγνωση και στις δύο περιπτώσεις ορώδες αδενοκαρκίνωμα και σαφείς περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος κύτταρο. Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ΑΙ_ϋΗ1 είναι ένας δείκτης για την ωοθηκική ΚΕΠ /CICs και ότι το επίπεδο έκφρασης του ΑΙ_ϋΗ1 θα μπορούσε να είναι ένα νέο βιοδείκτη για την πρόβλεψη του φτωχή πρόγνωση

Παράθεση:. Kuroda Τ, Hirohashi Υ, Torigoe T , Yasuda Κ, Takahashi Α, Asanuma H, et al. (2013) ΑΙ_ϋΗ1-High ωοθηκών καρκινικά βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν μπορούν να απομονωθούν από υδαρής και Clear αδενοκαρκίνωμα κύτταρα, και ΑΙ_ϋΗ1 υψηλή έκφραση σχετίζεται με κακή πρόγνωση. PLoS ONE 8 (6): e65158. doi: 10.1371 /journal.pone.0065158

Επιμέλεια: Xin Yuan-Γκουάν, το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Κίνα

Ελήφθη: 8 Φεβρουαρίου του 2013? Αποδεκτές: 22 Απριλίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 6 του Ιούνη 2013

Copyright: © 2013 Kuroda et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις-in-ενισχύσεις για την Επιστημονική Έρευνα από το Υπουργείο Παιδείας, Πολιτισμού, Αθλητισμού, Επιστημών και Τεχνολογίας της Ιαπωνίας (αριθμοί επιχορήγηση 16209013, 17016061 και 15659097) για την πρακτική έρευνα Εφαρμογή από την Επιστήμη και την Τεχνολογία Οργανισμού της Ιαπωνίας, καθώς και για τον Καρκίνο έρευνα (15-17 και 19-14) από το Υπουργείο Υγείας, Εργασίας και Πρόνοιας της Ιαπωνίας, Ono τον Καρκίνο του Ταμείου Έρευνας (στην NS) και το Ίδρυμα Takeda Επιστημών (με ΥΗ). Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από το Εθνικό Κέντρο Καρκίνου Έρευνας και Ανάπτυξης Ταμείο (23-Α-44). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών είναι μια κακοήθης νόσος με υψηλή θνησιμότητα και είναι η τέταρτη πιο κοινή αιτία του καρκίνου που σχετίζονται θανάτου σε γυναίκες παγκοσμίως. [1], [2] σκοτεινό και ασαφές συμπτώματα κάνουν ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών σε πρώιμο στάδιο δύσκολη. [3] Σε γενικές γραμμές, ο καρκίνος των ωοθηκών είναι σχετικά ευαίσθητο σε χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής με βάση την πλατίνα /ταξανίου. [4] Η κλινική πλήρης απόκρισης (CR) μπορεί συχνά να επιτευχθεί με την κυτταροστατική χειρουργική επέμβαση και χημειοθεραπεία σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο των ωοθηκών? Ωστόσο, η πλειοψηφία των ασθενών με προχωρημένο στάδιο έχουν υποτροπή της νόσου η οποία είναι ο λόγος για την υψηλή θνησιμότητα της ασθένειας αυτής. [5] Ορισμένες θεραπευτικές τους υποψηφίους των μοριακών φαρμάκων στόχος για τον καρκίνο των ωοθηκών είχαν δοκιμαστεί, αλλά αξιοσημείωτες βελτιώσεις στην πρόγνωση δεν επιτεύχθηκαν. [2], [6].

Η πρόσφατη πρόοδος στην έρευνα για τον καρκίνο έχει αποκαλύψει ότι οι καρκίνοι που αποτελείται από έναν ετερογενή πληθυσμό κυττάρων και ότι μόνο ένας μικρός πληθυσμός των κυττάρων που ονομάζεται καρκινικά βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν με (ΚΕΠ) /καρκίνου -initiating κύτταρα (CICs) έχουν υψηλό όγκο έναρξη δυναμικό (υπόθεση καρκίνο βλαστικών κυττάρων). Τα ΚΕΠ /CICs ορίζεται ως ένα μικρό πληθυσμό κυττάρων τα οποία έχουν (1) υψηλής ογκογονικότητα, (2) ικανότητα πολλαπλών διαφοροποίηση και (3) την ικανότητα αυτο-ανανέωσης. [7] – [9] Τα αποτελέσματα της πρόσφατης μελέτης έδειξαν επίσης ότι ΚΕΠ /οι CICs σχετίζονται με υποτροπή του καρκίνου και αντίσταση σε ακτινοβολία ή χημειοθεραπεία. [10], [11] Ως εκ τούτου, τα ΚΕΠ /CICs πιστεύεται ότι είναι υπεύθυνη για την επανεμφάνιση του καρκίνου και μακρινή μετάσταση, και την εξάλειψη των ΚΕΠ /CICs είναι επομένως απαραίτητη για τη θεραπεία του καρκίνου.

Υπάρχουν διάφορες προσεγγίσεις για τον προσδιορισμό των ΚΕΠ /CICs από καρκίνους σε μία ποικιλία ιστών οργάνων. [12] Αυτές οι προσεγγίσεις περιλαμβάνουν (1) η χρήση του δείκτη της κυτταρικής επιφάνειας όπως CD44

+ CD24

– /lowESA

+ [13], CD133

+ [14], CD44

+ CD117

+ [15], και CD166

+ [16], (2) πλευρά του πληθυσμού (SP) δοκιμασία [17], στην οποία το κύτταρο πληθυσμός που έχει την ικανότητα να αντλεί ένα φάρμακο (Hoechst33342 [18 ] ή Dye Cycle Violet [19]) μέσω της σύνδεσης ΑΤΡ μεταφορέας κασέτα θεωρείται ως ΚΕΠ /CICs, και (3) δοκιμασία ALDEFLUOR με βάση το επίπεδο της αφυδρογονάσης αλδεΰδης 1 (ΑΙ_ϋΗ1) ενζυμική δραστηριότητα. [20].

Η λειτουργία της ενδοκυτταρικής ALDH είναι η κατάλυση της οξείδωσης της αλδεϋδης, και ως εκ τούτου ALDH παίζει σημαντικό ρόλο στην κυτταρική ομοιόσταση. Πρόσφατες μελέτες έδειξαν ότι τόσο φυσιολογικά και καρκινικά κύτταρα με υψηλά επίπεδα δραστηριότητας ΑΙ_ϋΗ1 έχουν τη δυνατότητα να λειτουργούν ως βλαστικά κύτταρα και δυνατότητες για την ικανότητα αυτο-ανανέωσης και στρες ιδιότητες αντοχής. [20] – [22].

Επίσης, στο επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (EOC), μερικές έρευνες έχουν δείξει τη χρησιμότητα των δραστηριοτήτων ΑΙ_ϋΗ1 για τον εντοπισμό ΚΕΠ /CICs. Η ύπαρξη των κυττάρων με υψηλή δραστηριότητα ALDH (ALDH1high κύτταρα, σε σύγκριση με κύτταρα ALDH1low) έχει επίσης δειχθεί σε κυτταρικές γραμμές EOC και σε κλινικά δείγματα. [23] – [25] Η συσχέτιση μεταξύ της δραστηριότητας ΑΙ_ϋΗ1 και την πρόγνωση των ασθενών, ωστόσο, εξακολουθεί να είναι αμφιλεγόμενη σε ΕΓΚ. [26] Την ίδια στιγμή, η σχέση με την έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 για κάθε ιστολογικό υπότυπο της EOC δεν έχει διευκρινιστεί ακόμα.

Σε αυτή τη μελέτη, θα προσδιορισθεί και να αξιολογηθεί η βλαστική ικανότητα των ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα στο ορώδες αδενοκαρκινώματος και σαφή κύτταρο αδενοκαρκινώματος της ωοθήκης, όχι μόνο από καθιερωμένες κυτταρικές σειρές, αλλά και από πρωτογενή καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Έχουμε, επίσης, στατιστικά ανέλυσε τη σχέση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και κλινική έκβαση για ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Τα ποντίκια διατηρήθηκαν και πειραματίστηκε σε σύμφωνα με την κατευθυντήριες γραμμές και μετά από έγκριση από την Επιτροπή των Sapporo Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου Ιατρικής, πειραματισμός Κέντρο ζώων υπό τον αριθμό αδείας 08-006. Κάθε ζώο που βρέθηκε ανθυγιεινό ή άρρωστα έγινε αμέσως ευθανασία. Όλες οι μελέτες εγκρίθηκαν από Institutional Review Boards (IRB) του Sapporo Ιατρικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο και το IRB του Hakodate Goryokaku Νοσοκομείου. Γραπτή ενημέρωση συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς σύμφωνα με τις οδηγίες της Διακήρυξης του Ελσίνκι.

Γραμμές κυττάρων και Πολιτισμού Προϋποθέσεις

Σε αυτή τη μελέτη, 3 ορώδες αδενοκαρκίνωμα κυτταρικές σειρές των ωοθηκών (AMOC-2, HUOA και χρησιμοποιήθηκαν OVCAR-3) και 3 ωοθηκών σαφής κυτταρικές γραμμές αδενοκαρκινώματος κύτταρο (ES-2, RMG-1 και TOV21G). AMOC-2 (ευγενική προσφορά του Dr. Yabushita, Τμήμα Μαιευτικής και Γυναικολογίας, Aichi- Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Aichi, Ιαπωνία) [27], HUOA (ευγενική προσφορά του Dr. Ishiwata, Μαιευτικής και Γυναικολογικής Νοσοκομείο, Ibaraki, Ιαπωνία) [28 ], OVCAR-3 και TOV-21G (ATCC, Manassas, VA, USA) καλλιεργήθηκαν σε RPMI1640 (Sigma-Aldrich, St Louis, ΜΟ, USA). ES κύτταρα-2 (ATCC) καλλιεργήθηκαν σε μέσο Eagle Τροποποιημένο κατά Dulbecco (DMEM, Sigma-Aldrich). κύτταρα RMG-1 (JCRB Τράπεζας Κυττάρων, Osaka, Japan) καλλιεργήθηκαν σε DMEM /F-12 (Life Technologies, Grand Island, ΝΥ, USA). Κάθε μέσο συμπληρώθηκε με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS). Τα κύτταρα επωάστηκαν σε υγροποιημένο 5% CO

2 επώασης στους 37 ° C.

Απομόνωση πρωτοπαθή καρκινικά κύτταρα από κλινικά δείγματα

Όλες οι μελέτες εγκρίθηκαν από Institutional Review Boards (IRB) του Sapporo Ιατρικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο και το IRB του Hakodate Goryokaku Νοσοκομείου. Γραπτή ενημέρωση συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς σύμφωνα με τις οδηγίες της Διακήρυξης του Ελσίνκι.

Συμπαγείς όγκοι κόπηκαν σε θραύσματα, πλένονται σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών (PBS) και φυγοκεντρείται στις 2000 rpm για 10 λεπτά. Στη συνέχεια, συσσωματώματα κυττάρων επωάστηκαν στους 37 ° C για περίπου 30 λεπτά με 2 mg Liberase ™ έρευνα Βαθμός (Roche, Βασιλεία, Ελβετία) σε 10 ml Iscove Τροποποιημένο κατά Dulbecco Μέσο (ΙΜϋΜ, Life Technologies) μέχρις ότου διαχωρίζονται σε μονά κύτταρα. Τα κύτταρα που λαμβάνονται με τις διαδικασίες αυτές αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής όπως περιγράφεται παρακάτω.

Δοκιμασία ALDEFLUOR και απομόνωση από ενεργοποιημένων με φθορισμό κυττάρων (FACS)

Χρησιμοποιήσαμε ένα κιτ δοκιμασίας ALDEFLUOR (Stem τεχνολογίες κυψελών ™, Vancouver, BC, Canada) για να προσδιοριστεί δραστικότητα ΑΙ_ϋΗ1 των κυττάρων σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Τα κύτταρα εναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό δοκιμασίας που περιέχει 1 ALDEFLUOR μmol /l ανά 1×10

6 κύτταρα του υποστρώματος ΑΙ_ϋΗ, βόριο-dipyrromethene-αμινοακεταλδεΰδης (ΒΑΑΑ) και επωάστηκαν για 50 λεπτά στους 37 ° C. Κάθε δείγμα υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 50 mmol /l ενός ALDH-ειδικός αναστολέας, diethylaminobenzaldehyde (ϋΕΑΒ), ως αρνητικός έλεγχος. Βιτρώ κύτταρα αναλύθηκαν με BD FACSAria ™ II (BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με 1 μg /ml ιωδιούχου προπιδίου για να αξιολογηθεί η βιωσιμότητά τους πριν από την ανάλυση.

Για την απομόνωση των επιθηλιακών κυττάρων από στερεά δείγματα καρκίνου των ωοθηκών, ταξινομήσαμε επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα χρησιμοποιώντας αντι-CD326 (Ερ-ΟΑΜ) αντισώματος APC (BD Biosciences). Χρησιμοποιήσαμε μικροσφαιρίδια αντι-CD326 (BD Biosciences) και ένα σύστημα Automacs (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Γερμανία) για να εμπλουτίσουν επιθηλιακά κύτταρα από κακοήθη ασκίτη των περιπτώσεων καρκίνου των ωοθηκών πριν από τη δοκιμασία ALDEFLUOR.

Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου και

in vitro

κυττάρων Grow Ανάλυση

ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα απευθείας σταθερό με 70% αιθανόλη μετά τη διαλογή. Στη συνέχεια επαναιωρήθηκαν σε PBS που περιέχει 250 μg /ml RNase Α (Sigma-Aldrich) για 30 λεπτά στους 37 ° C και χρωματίστηκαν με ιωδιούχο 50 μg /ml προπιδίου για 10 λεπτά στους 4 ° C στο σκοτάδι. Βιτρώ κύτταρα αναλύθηκαν με FACSCalibur (BD Biosciences), και τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Mod-Fit πρόγραμμα ανάλυσης κυτταρικού κύκλου.

Για

in vitro

δοκιμασία κυτταρικής ανάπτυξης, ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα που απομονώθηκαν από AMOC-2 και τα κύτταρα RMG-1 σπάρθηκαν σε 6-φρεατίων σε 5 × 10

4 κύτταρα ανά φρεάτιο. Μετά από επώαση για 48 και 96 ώρες, τα κύτταρα απομακρύνθηκαν με αριθμοί των βιώσιμων κυττάρων με θρυψίνη και προσδιορίσθηκαν χρησιμοποιώντας Countess® (Life Technologies).

σχηματισμού σφαίρας Δοκιμασία /απλού κυττάρου σχηματισμού σφαίρας Δοκιμασία

ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα απομονώθηκαν με FACS και μετά καλλιεργήθηκαν σε 6-φρεατίων εξαιρετικά χαμηλής επιφάνεια προσάρτησης (Corning, Tewksbury, MA, USA) στα 1000 κύτταρα ανά φρεάτιο. Για την απλή δοκιμασία κύτταρο σχηματισμού σφαίρας, τόσο ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή ταξινομήθηκαν σε 96 φρεατίων εξαιρετικά χαμηλής πιάτα προσάρτησης (Corning) σε ένα μόνο κύτταρο ανά φρεάτιο. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο βλαστοκυττάρων, DMEM ελεύθερο ορού /F12 (Life Technologies) συμπληρωμένο με Ν-2 συμπλήρωμα (Life Technologies), 20 mg /ml ανασυνδυασμένο ανθρώπινο επιθηλιακό αυξητικό παράγοντα (Life Technologies), 10 mg /ml ανθρώπινης βασικό αυξητικό παράγοντα ινοβλαστών (Sigma-Aldrich), 4 μg /ml ηπαρίνης (Sigma-Aldrich), 4 mg /ml αλβουμίνη βόειου ορού (Life Technologies), 20 g /ml ανθρώπινης ινσουλίνης, διάλυμα ψευδαργύρου (τεχνολογίες Life), και 2.9 mg /ml γλυκόζη (Sigma-Aldrich). [29] μορφολογική μεταβολή παρατηρήθηκε καθημερινά κάτω από ένα οπτικό μικροσκόπιο για 14 ημέρες.

In vivo

Ογκογονικότητα

Κατάταξη σύμφωνα ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 1,0 × 10

2, 1,0 × 10

3 και 1.0 10

4 κυττάρων σε 100 μl PBS και Matrigel (BD Biosciences) μίγματος × (1: 1). Στη συνέχεια, κάθε μίγμα εγχέεται υποδορίως στην δεξιά /αριστερά μέση πίσω περιοχές της 6-εβδομάδων θηλυκούς μη-παχύσαρκους διαβητικούς /σοβαρή συνδυασμένη ανοσολογική ανεπάρκεια (NOD /SCID) (NOD.CB17-Prdkcscid /J, Charles River Laboratory, Yokohama, Ιαπωνία) υπό αναισθησία εισπνοής με isoflurane. έναρξη και την πρόοδο των όγκων παρατηρήθηκαν εβδομαδιαίως μέχρι θυσιάστηκαν τα ποντίκια σε 7 εβδομάδες μετά την ένεση. Εξωτερικές όγκος του όγκου υπολογίστηκε ως 0,5 × Dmax × (Dmin)

2 [mm

3] (Dmax: μακρύ άξονα, Dmin: μικρό άξονα της μάζας).

ανοσοϊστοχημική χρώση για τον καρκίνο των ωοθηκών ιστών

Ανοσοϊστοχημική χρώση ΑΙ_ϋΗ1 και Ki-67 πραγματοποιήθηκε με σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, εγκλεισμένα σε παραφίνη τμήματα 123 επιθηλιακών ιστών του καρκίνου των ωοθηκών (62 ορώδης αδενοκαρκινώματα, 37 σαφής αδενοκαρκινώματα κύτταρο, 18 αδενοκαρκινώματα ενδομητριοειδές και 6 βλεννώδες αδενοκαρκινώματα) ως περιγράφηκε προηγουμένως. [30] [31] Το αντιγόνο ανάκτηση έγινε με τμήματα βρασμό σε 120 ° C για 5 λεπτά σε έναν φούρνο μικροκυμάτων σε προθερμασμένο 0,01 mol /l κιτρικό νάτριο (ρΗ 6.0). Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% σε αιθανόλη για 10 λεπτά. Μετά από αποκλεισμό με 1% άπαχο ξηρό γάλα σε PBS (ρΗ 7.4), οι τομές αντέδρασαν με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-ΑΙ_ϋΗ1 (1: 250, Sigma-Aldrich) ή ποντικού αντι Ki-67-μονοκλωνικό αντίσωμα (1: 100 , ϋΑΚΟ, Glostrup, Denmark) επί 1 ώρα ακολουθούμενη από επώαση με βιοτινυλιωμένο αντι-ποντικού IgG (Nichirei) για 30 λεπτά. Στη συνέχεια, οι τομές βάφτηκαν με setreptavidin-βιοτίνης (Nichirei Biosciences, Tokyo, Japan), που ακολουθείται από επώαση με 3,3′-διαμινοβενζιδίνη χρησιμοποιήθηκε ως χρωμογόνο και αντι-χρώση με αιματοξυλίνη. Κυτταροπλασματική χρώση θεωρήθηκε ως θετικό για ΑΙ_ϋΗ1, και χρώση των πυρήνων θεωρήθηκαν ως θετικά για Ki-67. Για την αξιολόγηση της χρώσης ΑΙ_ϋΗ1, οι περιπτώσεις χωρίστηκαν σε δύο ομάδες (ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή ομάδας και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή ομάδα) με διάμεση τιμή (διάμεση τιμή για το ορώδες αδενοκαρκίνωμα η διάμεση τιμή και σαφής κυττάρων αδενοκαρκινώματος είναι 20% και 15%, αντίστοιχα) .

Matrigel εισβολής Δοκιμασία

Η επεμβατική ικανότητα των κυττάρων εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας θαλάμους matrigel εισβολή (BD Biosciences). Απομονωμένες ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα (1.0 × 10

4) απλώθηκαν σε κάθε άνω θάλαμο σε DMEM ελεύθερο ορού. Τα εξωτερικά θάλαμοι πληρώθηκαν με ϋΜΕΜ συμπεριλαμβανομένου 10% FBS ως χημειοελκτικό. Τα κύτταρα επωάστηκαν για 48 ώρες, και επεμβατικές κύτταρα βάφτηκαν με αιματοξυλίνη, τοποθετήθηκαν σε πλακίδια, και μετρήθηκαν σε 400-πλάσιο άνω πεδίο με οπτικό μικροσκόπιο.

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση, τα στοιχεία προσαρμογής και τα γραφικά διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το πακέτο λογισμικού SPSS ver.19 (SPSS, Chicago, IL, USA). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ±

SD

τουλάχιστον 3 ανεξάρτητα πειράματα, και έλεγχος τ χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση στατιστικώς σημαντικές διαφορές (ρ & lt? 0,05). Η συνολική επιβίωση (OS), που ορίζεται ως το διάστημα από την ημερομηνία της πρώτης διάγνωσης μέχρι την ημερομηνία του θανάτου από την εξέλιξη της νόσου, και η επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS), που ορίζεται ως το χρονικό διάστημα από την ημερομηνία της πρώτης διάγνωσης από την ημερομηνία της εξέλιξης της νόσου, εκτιμήθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank. Σύλλογοι της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 με κλινικό στάδιο, οι μεταστάσεις στους λεμφαδένες και η διάδοση αναλύθηκαν με τη δοκιμασία του Fisher.

Αποτελέσματα

Απομόνωση ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή Κύτταρα από ΕΓΚ Γραμμές κυττάρων

αρκετές μέθοδοι για την απομόνωση ΚΕΠ /CICs έχουν ήδη περιγραφεί [12], και αφυδρογονάση αλδεΰδη 1 μεγάλο πληθυσμό (ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή) που προσδιορίζονται από την ανάλυση ALDEFLUOR περιγράφηκε να εμπλουτιστεί με ΚΕΠ /CICs. [20] Ως εκ τούτου, αναλύθηκε κυτταρικές γραμμές καρκινώματος των ωοθηκών με την δοκιμασία ALDEFLUOR για την απομόνωση των ωοθηκών ΚΕΠ /CICs. Ερευνήσαμε 3 ανθρωπίνων ορώδες αδενοκαρκίνωμα κυτταρικές γραμμές ωοθηκών (AMOC-2, HUOA και OVCAR-3) και σαφείς γραμμές κυττάρων αδενοκαρκινώματος κύτταρο 3 ανθρώπου (ES-2, RMG-1 και TOV-21G) (Σχήμα 1). ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή πληθυσμιακή ταυτοποιήθηκε σε όλα τα κύτταρα γραμμής καρκινώματος των ωοθηκών, και ο λόγος του ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα κυμαίνονταν από 0,7% για τα κύτταρα ES-2 στο 7,9% για τα κύτταρα TOV-21G. Θα μπορούσαμε να απομονώσουμε ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα σταθερά από 4 κυτταρικές σειρές (AMOC-2, ES-2, RMG-1 και TOV-21G), και ως εκ τούτου χρησιμοποιούνται αυτές τις κυτταρικές σειρές για περαιτέρω ανάλυση.

ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα ανιχνεύθηκαν σε 3 ορώδες αδενοκαρκίνωμα κυτταρικές σειρές (AMOC-2, HUOA και OVCAR-3) και σε 3 σαφή κυτταρικές γραμμές αδενοκαρκινώματος κύτταρο (ES-2, RMG-1 και TOV-21G). SSC-Α: ενιαία ανάλυση κλώνου. ΒΑΑΑ: βόριο-dipyrromethene- αμινοακεταλδεΰδης. FITC-A: ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη ανάλυση. Ποσοστά στα πλαίσια δείχνουν ΑΙ_ϋΗ1

υψηλές αναλογίες κυττάρων. Diethylaminobenzaldehyde (ϋΕΑΒ), ένας αναστολέας ΑΙ_ϋΗ ειδικά, χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός μάρτυρας.

Η

Χαρακτηρισμός ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα

Από τα ΚΕΠ /CICs γνωστό ότι σχηματίζει σφαίρες στην πλωτή συνθήκες καλλιέργειας [29], αναλύσαμε ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα με μία δοκιμασία σχηματισμού σφαίρας. Ένα σύνολο 10

3 κύτταρα ανά φρεάτιο και επωάστηκαν ταξινομούνται σε 6-φρεατίων σε αγκυροβόλιο-ανεξάρτητο περιβάλλον. Την ημέρα 10, ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα που προέρχονται από κύτταρα AMOC-2 έδειξε μεγαλύτερη σχηματισμού σφαίρας ικανότητα από εκείνη της ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν από κύτταρα ES-2, κύτταρα RMG-1 και τα κύτταρα TOV-21G (Σχήμα 2Α). Εφόσον η δοκιμασία σχηματισμού σφαίρας δεν είναι κατάλληλο για την ποσοτικοποίηση των δεικτών του ΚΕΠ /CICs σε ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα, πραγματοποιήσαμε ένα ενιαίο κυτταρική δοκιμασία σχηματισμού σφαίρας. σχηματισμός Σφαίρα παρατηρήθηκε στο 4,86% των φρεατίων του ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα που προέρχονται από κύτταρα AMOC-2 και σε 3,13% των φρεατίων του ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα που προέρχονται από ES-2 κύτταρα (Σχήμα 2Β). Από την άλλη πλευρά, φρεάτια ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα που προέρχονται τόσο από AMOC-2 και ES-2 κύτταρα δεν δείχνουν οποιαδήποτε σχηματισμό σφαίρας.

Μια δοκιμασία σχηματισμού σφαίρας Χίλια ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ένα πλωτό κατάσταση. Οι σφαίρες μετρήθηκαν την ημέρα 10. Η μεγέθυνση των εικόνων: × 100. Κριτήριο για σφαιροειδές μεγέθους: πάνω από 100 μm. Κάθε τιμή είναι ο μέσος αριθμός των σφαιροειδή ± SD. * Οι τιμές Ρ. Β Single κυττάρων δοκιμασία σχηματισμού σφαίρας Κατάταξη σύμφωνα ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ένα πλωτό κατάσταση σε ένα και μόνο κύτταρο ανά φρέαρ. Οι σφαίρες μετρήθηκαν την ημέρα 12. Μόνο ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα από AMOC-ες και τα κύτταρα ES-2 ξεκίνησε μόνο σφαιροειδή κυττάρων. Μεγέθυνση των εικόνων: × 200. Κάθε τιμές είναι ο μέσος όρος του ποσοστού σφαιροειδή ± SD. C Matrigel δοκιμασία εισβολή Εικόνες: Matrigel-εισβάλλοντας κύτταρα που προέρχονται από ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή /χαμηλή κύτταρα ES-2 και τα κύτταρα TOV-21G. Μεγέθυνση των εικόνων: × 100. Κάθε τιμές είναι ο μέσος αριθμός των εισβάλλοντας κυττάρων ± SD. * Οι τιμές Ρ.

Η

Στη συνέχεια διερευνήθηκε η ικανότητα εισβολής των ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κυττάρων από τη δοκιμασία Matrigel εισβολής. ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα που προέρχονται από τα τέσσερα κελιά της γραμμής έδειξε μεγαλύτερη matrigel εισβολή ικανότητα από ό, τι ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα (Σχήμα 2C).

Η κατάσταση του κυτταρικού κύκλου των ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή κυττάρων και των ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα αναλύθηκαν. Οι αναλογίες του ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή κυττάρων σε φάση S και G2 /M φάση ήταν μεγαλύτερη από αναλογία ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κυττάρων σε φάση S και G2 /M φάση (Σχήμα 3Α). Κυττάρων αυξάνεται ανάλυση αποκάλυψε ότι ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα που προέρχονται από AMOC-2 και RMG-1 κύτταρα είχαν υψηλότερα ποσοστά αυξάνονται από εκείνες της ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα (Εικόνα 3Β).

Μια ανάλυση ΑΙ_ϋΗ1 κυτταρικού κύκλου

υψηλή και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα αναλύθηκαν με μια δοκιμασία κυτταρικού κύκλου. Το γράφημα δείχνει τις αναλογίες των κυττάρων σε Ο0 /Ο1 φάση, φάση S και G2 /M φάση. Β ανάλυση της ανάπτυξης των κυττάρων Οι δυνατότητες ανάπτυξης της ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα ερευνήθηκαν. Κάθε τιμές είναι ο μέσος αριθμός κυττάρων ± SD.

Η

Ανώτατη Ογκογονικότητα ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή Κύτταρα από εκείνη της ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα

Για να αντιμετωπιστεί η

in vivo

ογκογονικότητας ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα από κυτταρικές σειρές EOC, η μεταμόσχευση ξενομοσχευμάτων σε ποντίκια NOD /SCID με ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα που προέρχονται από AMOC-2 και κύτταρα RMG-1 πραγματοποιήθηκε (Σχήμα 4Α, 4Β και 4C). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, οι όγκοι παρατηρήθηκαν σε 5 5 ποντικών (10

ένεση 4 κύτταρα), 4 5 ποντικών (10

3 κύτταρα ένεση) και 2 από 5 ποντικούς (10

2 κύτταρα ένεση ) στον οποίο ξενομεταμόσχευση του ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα που προέρχονται από κύτταρα AMOC-2 πραγματοποιήθηκε. Από την άλλη πλευρά, οι όγκοι παρατηρήθηκαν σε μόνο 3 από 5 ποντικούς (10

ένεση 4 κύτταρα) και 2 από 5 ποντικούς (10

ένεση 3 κύτταρα) στα οποία ξενομεταμόσχευση του ΑΙ_ϋΗ1

διεξήχθη χαμηλή κύτταρα. Επιπλέον, ο ρυθμός ανάπτυξης των όγκων που προέρχονται από AMOC-2 ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα ήταν σημαντικά ταχύτερη από εκείνη των όγκων που προέρχονται από AMOC-2 ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα (Σχήμα 4C). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν για κύτταρα RMG-1 (Σχήμα 4Β και 4C).

Ένα ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή /χαμηλή όγκους που προέρχονται από κύτταρα AMOC-2. Β ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή /χαμηλή όγκους που προέρχονται από κύτταρα RMG-1. Εικόνα: ποντίκια NOD /SCID που έλαβαν ένεση με 1,0 × 10

3 ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή /χαμηλή κύτταρα και στα οποία οι όγκοι που παρατηρήθηκαν στις δύο πλευρές του πίσω τους. Ιστολογική εικόνες: χρώση αιματοξυλίνης-Ηωσίνη (H-E, αριστερό πάνελ), ΑΙ_ϋΗ1 ανοσοϊστοχημική χρώση (μεσαίο πλαίσιο), Ki-67 ανοσοϊστοχημική χρώση (δεξί πάνελ) του ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή /χαμηλή όγκους. Μεγέθυνση των εικόνων: × 400. καμπύλες ανάπτυξης Γ ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή /χαμηλή όγκους που προέρχονται από AMOC-2 και τα κύτταρα RMG-1. Αριστερή στήλη: κύτταρα AMOC-2, 1,0 × 10

3 ένεση. Μεσαία στήλη: κύτταρα AMOC-2, 1,0 × 10

2 ένεσης. Δεξιά στήλη: κύτταρα RMG-1, 1,0 × 10

3 ένεση. Κάθε τιμή είναι ο μέσος όγκος του όγκου ± SD. * Οι τιμές Ρ. Δ Ανοσοαντιδραστικότητα να ΑΙ_ϋΗ1 ή Ki-67 της ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή /χαμηλή όγκους που προέρχονται από AMOC-2 και RMG-1cells Κάθε τιμή είναι ο μέσος όρος θετικό ποσοστό ± SD. * P τιμές.

Η

Η ιστολογική πτυχές των όγκων που προέρχονται από ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα που απομονώθηκαν από AMOC-2 και RMG-1 κύτταρα ερευνήθηκαν ( Το Σχήμα 4Α και 4Β). Οι όγκοι που προέρχονται από AMOC-2 ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα και AMOC-2 ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα έδειξαν ελάχιστα διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα και δεν υπήρχε σημαντική διαφορά. Ομοίως, οι όγκοι που προέρχονται από RMG-1 ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα και RMG-1 ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα έδειξαν ελάχιστα διαφοροποιείται σαφώς αδενοκαρκίνωμα κυττάρου. Ανοσοϊστοχημική χρώση αποκάλυψε ότι δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο ποσοστό ΑΙ_ϋΗ1 θετικούς μεταξύ όγκων που προέρχονται από AMOC-2 ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή κυττάρων και όγκων που προέρχονται από AMOC-2 ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα, ενώ στον όγκο που προέρχεται από RMG-1 ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα έδειξαν σημαντικά υψηλότερο θετικούς ρυθμούς ΑΙ_ϋΗ1 από εκείνη των όγκων που προέρχονται από RMG-1 ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα (Εικόνα 4D). Επιπλέον, οι όγκοι που προέρχονται από AMOC-2 ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα και RMG-1 ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα έδειξαν σημαντικά υψηλότερες θετικές τιμές για Ki-67 (MIB-1) από εκείνες των όγκων που προέρχονται από AMOC-2 ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα και RMG-1 ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή κύτταρα (Εικόνα 4D).

Αναγνώριση ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή Cells στην Πρωτοβάθμια ΕΓΚ δείγματα

Για την ανίχνευση ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα στην πρωτογενή καρκίνο των ωοθηκών, αναλύσαμε έντεκα κλινικά υλικά χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία ALDEFLUOR (5 περιπτώσεις στερεών ωοθηκών καρκινικά κύτταρα και 6 περιπτώσεις κακοήθους ασκίτη των περιπτώσεων καρκίνου των ωοθηκών, που συνοψίζονται στον πίνακα 2). επιθηλιακά κύτταρα CD326-θετικά αναγνωρίστηκαν σε στερεούς ιστούς καρκίνου των ωοθηκών, και οι θετικές τιμές κυμαίνονταν από 8,1% έως 81,0% (Σχήμα 5Α, άνω πάνελ). ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα ανιχνεύθηκαν στις 4 από τις 5 περιπτώσεις, και θετική ΑΙ_ϋΗ1

υψηλά ποσοστά κύτταρο κυμάνθηκε από 0,9% έως 12,0% (Σχήμα 5Α, κάτω πάνελ). Επιπλέον, ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα ανιχνεύθηκαν σε CD326-θετικά κύτταρα που προέρχονται από τον ασκίτη του καρκίνου των ωοθηκών σε 4 από τα 6 περιπτώσεις, και οι θετικές τιμές του ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα κυμαίνονταν από 1,7% έως 4,2% (Σχήμα 5Β). Ως εκ τούτου, η δραστηριότητα ΑΙ_ϋΗ1 προσδιορίστηκε με την χρησιμοποίηση της δοκιμασίας ALDEFLUOR μπορούσε να είναι μια χρήσιμη προσέγγιση για την απομόνωση του ΚΕΠ /CICs από πρωτογενή καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών.

Μια ανάλυση του πρωτογενούς στερεού ωοθηκών καρκινικά κύτταρα Άνω πάνελ δείχνει χρώση CD326. Ποσοστό υπόδειξη θετικό ποσοστό για CD326 κύτταρα. Κάτω πίνακας δείχνει ALDEFLUOR δοκιμασία του CD326-θετικών κυττάρων. Αριστερά: No.1 ασθενούς, περίπτωση αδενοκαρκινώματος διαυγοκυτταρικό στάδιο Ic. Δεξιά: No.3 ασθενούς, περίπτωση ενδομητριοειδές αδενοκαρκίνωμα σταδίου Ic. Β Ανάλυση πρωτογενών καρκινικών κυττάρων από τον ασκίτη CD326-θετική επιλογή έγινε πριν από την ανάλυση ALDEFLUOR. Αριστερά: No.4 ασθενούς, την περίπτωση του σταδίου IIIc ορώδες αδενοκαρκίνωμα. Δεξιά: No.6 ασθενούς, την περίπτωση του σταδίου IIIb σαφείς κυττάρων και αδενοκαρκίνωμα ενδομητριοειδές. CD326: Επιθηλιακά μόριο κυτταρικής προσκόλλησης (EpCAM). APC: αλλοφυκοκυανίνη περιοχή. Τοις εκατό βαθμολογίες σε κουτιά δείχνουν CD326-θετικά ή ΑΙ_ϋΗ1 δραστηριότητας αναλογίες.

Η

Σύλλογος υψηλή έκφραση Επίπεδο ΑΙ_ϋΗ1 είναι με κακή πρόγνωση

Ένα σύνολο 123 επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών ιστοί ανοσοϊστοχημικά χρωματίστηκαν με αντι-ΑΙ_ϋΗ1 αντίσωμα (Πίνακας 3, Σχήμα 6Α). Η διάμεση τιμή του ΑΙ_ϋΗ1-θετικούς ρυθμούς στο ορώδες περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος και σαφείς περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος κύτταρο ήταν 20% και 15%, αντίστοιχα. Ως εκ τούτου, διαιρούμενο τις περιπτώσεις σε δύο ομάδες, ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή ομάδας και ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή ομάδας, σύμφωνα με τις διαμέσους. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση του επιπέδου έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 με την ηλικία ή με κάθε κλινικό στάδιο FIGO. Υψηλό επίπεδο έκφρασης της ΑΙ_ϋΗ1 δεν έδειξε σημαντική συσχέτιση με προχωρημένα στάδια (στάδιο III + IV), παράγοντας Τ ή μετάσταση στους λεμφαδένες και στις δύο περιπτώσεις ορώδες αδενοκαρκίνωμα και σαφείς περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος κύτταρο. Η δοκιμασία log-rank αποκάλυψε ότι τα υψηλότερα επίπεδα έκφρασης της ΑΙ_ϋΗ1 συνδέεται με φτωχότερη πρόγνωση με μια σημαντική διαφορά στο λειτουργικό σύστημα των ασθενών με ορώδες αδενοκαρκίνωμα (P = 0.006) και το λειτουργικό σύστημα των ασθενών με αδενοκαρκίνωμα σαφές κυττάρων (P = 0,047) από εκείνες των κάτω επίπεδο έκφρασης του ΑΙ_ϋΗ1 (Σχήμα 6Β). Υψηλότερο επίπεδο έκφρασης της ΑΙ_ϋΗ1 έδειξαν μια τάση για μικρότερες PFS από εκείνη του χαμηλότερου επιπέδου έκφρασης της ΑΙ_ϋΗ1, αλλά οι διαφορές δεν ήταν σημαντικές (ορώδες αδενοκαρκίνωμα: P = 0,062? Σαφή αδενοκαρκίνωμα κυττάρου: P = 0,058).

HE χρώση και ΑΙ_ϋΗ1 ανοσοϊστοχημική χρώση των πρωτογενών ορώδες αδενοκαρκίνωμα ωοθηκών (αριστερά) και πρωτογενές αδενοκαρκίνωμα σαφές κυττάρων των ωοθηκών (δεξιά) Επάνω αριστερά πίνακα: HE χρώση των ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή δείγμα. Επάνω δεξιά πάνελ: ΑΙ_ϋΗ1 ανοσοϊστοχημική χρώση των ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή δείγμα. Κάτω αριστερά πίνακας: H-Ε χρώση ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή δείγματος. Κάτω δεξιά πίνακας: ΑΙ_ϋΗ1 ανοσοϊστοχημική χρώση των ΑΙ_ϋΗ1

χαμηλή δείγματος. Μεγέθυνση των εικόνων: × 400. Β δοκιμασία log-rank για ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή /χαμηλή ομάδες ορώδες αδενοκαρκίνωμα των ωοθηκών και των ασθενών σαφές αδενοκαρκίνωμα κυττάρου. Ορώδες αδενοκαρκίνωμα: 62 περιπτώσεις /σαφές αδενοκαρκινώματος κύτταρο: 37 ​​περιπτώσεις. Περιπτώσεις στην ομάδα του υψηλού ΑΙ_ϋΗ1

είναι οι περιπτώσεις με θετική αναλογία για ΑΙ_ϋΗ1 άνω του 20% για το ορώδες περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος και 15% για τις σαφείς περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος κύτταρο. Αριστερά: στήλη: επιβίωση χωρίς εξέλιξη της νόσου (PFS). Δεξιά στήλη: συνολική επιβίωση (OS). * P τιμές.

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, απομονώσαμε ωοθηκών ΚΕΠ /CICs με υψηλή ογκογενετικότητας από τη δοκιμασία ALDEFLURO. Μια ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή πληθυσμιακή θα μπορούσαν να απομονωθούν όχι μόνο από κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών, αλλά και από την πρωτογενή δείγματα καρκίνου των ωοθηκών. Αρκετές μέθοδοι για την απομόνωση των ΚΕΠ /CICs έχουν αναφερθεί. Πράγματι, ΚΕΠ ωοθηκών /CICs έχουν απομονωθεί επιτυχώς, χρησιμοποιώντας διάφορες μεθόδους, συμπεριλαμβανομένης της ανάλυσης ALDEFLUOR [25], με την πλευρά του πληθυσμού (SP) ανάλυση [32], [33], και η χρήση του CD133

+ [34], CD44

+ CD24

– [35] και CD24

+ κύτταρα. [36] Ωστόσο, υπάρχει μια αμφιλεγόμενη έκθεση δείχνει ότι ένα δείκτη CSC /CIC δεν λειτουργεί σε ορισμένους τύπους κυττάρων. [37], [38] Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο για την επικύρωση του κυτταρικού πληθυσμού που απομονώνονται από τους δείκτες CSC /CIC από διάφορους τύπους ανάλυσης. Σε αυτή τη μελέτη, επιβεβαίωσε ότι η ΑΙ_ϋΗ1

υψηλή πληθυσμιακή είχαν υψηλότερα ογκογενετικότητας και μεγαλύτερη ικανότητα σχηματισμού σφαίρας. Αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι η ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη αυτή είναι εμπλουτισμένα με ΚΕΠ /CICs. Υπήρξαν μερικές αναφορές για την επιτυχή απομόνωση των ΚΕΠ /CICs από τα καρκινικά κύτταρα τυπικότητα των ωοθηκών. Εμείς απομονωθεί ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα από 8 από 11 πρωτοβάθμια περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών. Δεν μπορέσαμε να αναλύσουμε ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα από πρωτογενή ωοθηκική καρκίνους εξαιτίας του περιορισμού του αριθμού των κυττάρων? Ωστόσο, η προσέγγισή μας είναι μια δυνατή και πολλά υποσχόμενη μέθοδο για την απομόνωση ΚΕΠ /CICs από πρωτογενείς καρκίνους των ωοθηκών.

Κύριες ιστολογικών υποτύπων του ΕΓΚ είναι ορώδες αδενοκαρκίνωμα, σαφείς κυττάρων αδενοκαρκινώματος, ενδομητριοειδές αδενοκαρκίνωμα και βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα, και αυτοί οι υπότυποι είναι γνωστές να έχουν διαφορετικά χαρακτηριστικά σε παράγοντα κινδύνου καρκινογένεσης, μοριακής βιολογίας πτυχές και ούτω καθεξής. Περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τις επιμέρους υποκατηγορίες είναι απαραίτητη για τη βελτίωση της επιβίωσης των ασθενών. Ορώδες αδενοκαρκίνωμα είναι ο υπότυπος ιστολογία με χειρότερη πρόγνωση? Ωστόσο, ορώδες περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος είναι συχνά διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο στάδιο. κυττάρου αδενοκαρκίνωμα σαφές αυξάνεται σταδιακά έως σχεδόν 12% του ΕΓΚ στις χώρες της Ασίας, και η σύγκριση των περιπτώσεων στο ίδιο στάδιο 3 ιστολογικών υποτύπων (αδενοκαρκίνωμα σαφές κυττάρων, ενδομητριοειδές αδενοκαρκίνωμα και βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα) αποκάλυψε ότι η σαφής κυττάρων αδενοκαρκινώματος είναι η φτωχότερη πρόγνωση σε κάθε στάδιο. Ως εκ τούτου, σαφές αδενοκαρκίνωμα κυττάρων πιστεύεται ότι είναι το υψηλότερο βαθμό EOC, πρόσφατα. [39], [40] υδαρής περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος αναλύθηκαν κυρίως σε προηγούμενες μελέτες, και έχουν υπάρξει λίγες μελέτες, στις οποίες αναλύθηκαν σαφείς περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος κύτταρο. [23] – [25] Σε αυτή τη μελέτη, αναλύσαμε όχι μόνο ορώδες περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος αλλά επίσης σαφείς περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος κύτταρο. Ως εκ τούτου, αυτές οι πληροφορίες θα φέρει εικόνα όχι μόνο για ορώδες αδενοκαρκινώματα, αλλά και πιο υψηλότερο βαθμό σαφές αδενοκαρκινώματα κυττάρων.

Βρήκαμε ότι 4 κυτταρικές σειρές ΕΓΚ συμπεριλαμβανομένων 3 καθαρές γραμμές αδενοκαρκινώματος κυττάρων ήταν θετικά για τον σχηματισμό σφαίρα με 1000 κύτταρα /Λοιπόν. Από την άλλη πλευρά, μόνο δύο κυτταρικές σειρές (AMOC-2 και ES-2) έδειξε σφαίρα σχηματισμός σε ανάλυση ενιαία σφαίρα κυττάρων. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα ΚΕΠ /CICs, τα οποία έχουν την ικανότητα να σχηματίζουν μια σφαίρα από ένα μόνο κύτταρο, είναι εμπλουτισμένα σε ΑΙ_ϋΗ1

υψηλής κύτταρα? Ωστόσο, οι αναλογίες των ΚΕΠ /CICs δεν είναι τόσο υψηλή, ακόμη και σε ΑΙ_ϋΗ1

υψηλών πληθυσμών. Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε ότι η δοκιμασία ALDEFLUOR είναι απλά ένα υποκατάστατο δείκτη για την ΚΕΠ /CICs και ότι ο συνδυασμός των ALDEFLUOR δοκιμασία με άλλους δείκτες μπορεί να είναι μια καλύτερη προσέγγιση για την απομόνωση ΚΕΠ /CICs.

Σε προηγούμενες μελέτες σχετικά με ανοσοϊστοχημική χρώση, αντιφατικά αποτελέσματα όσον αφορά τη συσχέτιση της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 με πρόγνωση της EOC ελήφθησαν. Chang

et al

. ανέφερε ότι η έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίζεται με ευνοϊκή πρόγνωση στο ορώδες ή μη ορώδες καρκίνωμα των ωοθηκών [26], ενώ Ντενγκ

et al

. και Wang

et al

.