Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η πέμπτη συχνότερη αιτία των θανάτων από καρκίνο μεταξύ των γυναικών. ασθένειας σε πρώιμο στάδιο, συχνά παραμένει απαρατήρητη λόγω της έλλειψης συμπτωμάτων και αξιόπιστων βιοδεικτών. Η αναγνώριση των πρώιμων γενετικών αλλαγών θα μπορούσε να προσφέρει γνώσεις σε νέα μονοπάτια σηματοδότησης που μπορούν να αξιοποιηθούν για την έγκαιρη ανίχνευση και θεραπεία.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Ποντίκι επιφάνεια επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών (MOSE) χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιορίσει στάδιο εξαρτώμενη αλλαγές στα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης και μονοπάτια μεταγωγής σήματος από το ποντίκι ολόκληρο μικροσειρά γονιδιώματος αναλύσεις και γονίδιο οντολογία. Αυτά τα κύτταρα έχουν υποστεί αυθόρμητη μετατροπή σε κυτταρική καλλιέργεια και μεταπηδά από μη ογκογόνων σε ενδιάμεσους και επιθετική, κακοήθη φαινότυπο. Σημαντικά αλλαγμένο γονίδια υπερεκπροσωπούνται σε μια σειρά από μονοπάτια, και κυρίως τη λειτουργική κατηγορία κυτταροσκελετού. Παράλληλα με τις αλλαγές της γονιδιακής έκφρασης, η κυτταροσκελετού αρχιτεκτονική έγινε σταδιακά ανοργάνωτη, με αποτέλεσμα την ανώμαλη έκφραση ή υποκυτταρική κατανομή των βασικών κυτταροσκελετού ρυθμιστικών πρωτεϊνών (κινάση εστιακής προσκόλλησης, α-ακτινίνης, και βινκουλίνης). Η κυτταροσκελετού αποδιοργάνωση συνοδεύτηκε από αλλαγμένη πρότυπα σερίνη και φωσφορυλίωση τυροσίνης, καθώς άλλαξε έκφρασης και υποκυτταρικός εντοπισμός των αναπόσπαστο ενδιάμεσα σηματοδότησης APC και PKCβII.

Συμπεράσματα /Σημασία

Οι μελέτες μας έχουν εντοπίσει τα γονίδια που τα έκτροπα που εκφράζονται κατά τη διάρκεια των νεοπλασματικών εξέλιξη MOSE κυττάρων. Θα δείξουμε ότι το πρώιμο στάδιο απορύθμιση των μικρονηματίων ακτίνης ακολουθείται από την προοδευτική αποδιοργάνωση των μικροσωληνίσκων και των ενδιάμεσων νημάτων σε μεταγενέστερα στάδια. Αυτά στάδιο-ειδικό, κατά στάδια αλλαγές παρέχουν περαιτέρω πληροφορίες για την ώρα και χωρική αλληλουχία γεγονότων που οδηγούν στην πλήρως μετασχηματισμένη κατάσταση αφού αυτές οι αλλαγές παρατηρούνται επίσης σε επιθετικό ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών γραμμών ωοθηκών ανεξάρτητα από ιστολογικού τύπου τους. Επιπλέον, οι μελέτες μας υποστηρίζουν μια σύνδεση μεταξύ αποκλίνον οργάνωση του κυτταροσκελετού και ρύθμιση των σημαντικών καθοδικά συμβάντα σηματοδότησης που μπορεί να εμπλέκονται σε πρόοδο του καρκίνου. Έτσι, MOSE που προέρχονται από το μοντέλο των κυττάρων μας αποτελεί ένα μοναδικό μοντέλο για την σε βάθος μηχανιστικές μελέτες της εξέλιξης του καρκίνου των ωοθηκών

Παράθεση:. Creekmore AL, SILKWORTH WT, Cimini D, Jensen RV, Roberts PC, Schmelz ΕΜ (2011) αλλαγές στη Γονιδιακή Έκφραση και Κυτταρικής Αρχιτεκτονική σε καρκίνο των ωοθηκών εξέλιξη μοντέλο. PLoS ONE 6 (3): e17676. doi: 10.1371 /journal.pone.0017676

Συντάκτης: Robert Oshima, Sanford-Burnham Medical Research Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 12 Νοέμβρη, 2010? Αποδεκτές: 8 Φεβ., 2011? Δημοσιεύθηκε: 3 Μαρτίου του 2011

Copyright: © 2011 Creekmore et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι μελέτες υποστηρίχθηκαν από ΝΙΗ R01 CA118846 (με EMS, PCR) και AICR χορηγήσει 04B071 (EMS). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών αντιπροσωπεύει μόνο το 3% των διαγνωσμένων καρκίνων, αλλά είναι η πέμπτη συχνότερη αιτία των θανάτων από καρκίνο μεταξύ των γυναίκα, με τα ποσοστά πενταετούς επιβίωσης των μόλις 45% [1]. Η μέση ηλικία της διάγνωσης είναι 63 ετών, και οι περισσότεροι ασθενείς (62%) του παρόντος με μεταστατική νόσο κατά τη στιγμή της διάγνωσης [1]. Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι μια ετερογενής νόσος με διάφορα ιστολογικά ή κλινικοπαθολογοανατομικές υποτύπους που αναπτύσσουν και παρουσιάζουν με διαφορετικό τρόπο. Η συμβατική άποψη είναι ότι περίπου το 90% των καρκίνων των ωοθηκών προέρχονται από το στρώμα μονοκύτταρους του επιφανειακού επιθηλίου που περιβάλλει την ωοθήκη [2]. Καθώς το επιθήλιο των ωοθηκών μεταμορφώνεται σε ένα κακοήθη φαινότυπο, το διαφοροποιεί σε αρκετές υποτύπους που έχουν κατηγοριοποιηθεί σε ορώδης, βλεννώδες, ενδομητριοειδές και σαφή καρκίνωμα, με βάση την μορφολογία τους και όχι γονότυπο τους [3]. Ωστόσο, η προέλευση των επιμέρους υποτύπων μπορεί να ποικίλλει και μια υψηλότερη συνεισφορά από σάλπιγγες και το ενδομήτριο σε πιο επιθετικών καρκίνων είναι επί του παρόντος υπό συζήτηση [4]. Η καταγωγή και των δύο ωοθηκών και σάλπιγγα επιθηλιακά είναι η ίδια, δηλαδή η coelomic επιθήλιο [2], η οποία μπορεί να συμβάλει στην αντιπαράθεση.

Τα επιθηλιακά καρκίνους των ωοθηκών παρουσιάζουν υψηλό βαθμό γενετική ετερογένεια ως αποτέλεσμα των μεταλλάξεων, φίμωση, και διαγραφές. Δεδομένου ότι οι αλλαγές στην έκφραση γονιδίων, είτε μέσω μετάλλαξης, επιγενετική ρύθμιση, ή διαφορικό συμβάντα ματίσματος, ανάπτυξη όγκου επιρροή, της εξέλιξης, της ανταπόκρισης του φαρμάκου και τελικά την επιβίωση του ασθενούς, η ταυτοποίηση του υποτύπου του όγκου και του γενετικού αποτυπώματος είναι απαραίτητη. Πρόσφατα, μια νέα ταξινόμηση των επιθηλιακών όγκων των ωοθηκών σε τύπου Ι και καρκίνους τύπου II έχει προταθεί: τύπου 1 είναι καλοήθεις σε οριακά όγκους με σχετικά σταθερό γονότυπους ενώ ο τύπος II περιλαμβάνει επιθετικό και υψηλής όγκους βαθμού που είναι γενετικά ασταθείς και εμφανίζουν σημαντική γενετικές αλλαγές [ ,,,0],5]. Οι περισσότεροι καρκίνοι των επιθηλιακών ακολουθούν ένα σχήμα εξέλιξης κατά την οποία κινήθηκε κύτταρα να εξελιχθούν σε αδενώματα να αδενοκαρκινώματα και μετάσταση, συσσωρεύοντας γενετικών αλλοιώσεων με σταδιακό τρόπο κατά τη διάρκεια της εξέλιξης [6]. Αυτή η αλληλουχία έχει επίσης περιγραφεί για χαμηλού βαθμού καρκινώματα ωοθηκών? Είναι, ωστόσο, συζήτησε αν όλοι οι καρκίνοι των ωοθηκών ακολουθήσει αυτή την ανάπτυξη του καρκίνου από το πρόδρομο βλάβες για τους πιο επιθετικούς όγκους των ωοθηκών (τύπου II) δεν έχουν οριστικά προσδιοριστεί [5]. Πρόσφατα, Lee et al. έχουν προτείνει ότι η fimbria της σάλπιγγας μπορεί να είναι η προέλευση για «τύπου ΙΙ» ορώδες καρκίνωμα κυττάρων [7]. Προτείνουν αυτού του τύπου προκύπτουν όγκοι II από το «ρ53 υπογραφή» πρόδρομες βλάβες που προέρχονται από την ενίσχυση της εκκριτικά επιθηλιακά κύτταρα. Μεταγενέστερες μεταλλάξεις τότε διευκολύνουν εξέλιξης σε ορώδες καρκίνωμα των σαλπίγγων ενδοεπιθηλιακές και τελικά να ορώδες καρκίνωμα.

Προς το παρόν, τα πρότυπα γονιδιακής έκφρασης έχουν χρησιμοποιηθεί μόνο επιτυχώς να γίνει διάκριση μεταξύ βλεννώδες και σαφή κύτταρο από ορώδες καρκίνωμα [8] ή μεταξύ χαμηλού βαθμού , χαμηλής κακοήθειας και υψηλής ποιότητας, μεταστατικούς όγκους [9], [10], [11]. Αξιόπιστη μοριακών ή κλινικών δεικτών να προσδιοριστούν οι αλλαγές στα πρώτα στάδια της εξέλιξης δεν έχουν ακόμη καθιερωθεί, και από τα πρώτα στάδια της νόσου είναι σχετικά ασυμπτωματικές η διάγνωση συχνά συμβαίνει μόνο στα όψιμα στάδια. Ως εκ τούτου, ο χαρακτηρισμός του προφίλ γονιδιακής έκφρασης των πρώιμων προδρόμων στάδιο βλαβών του καρκίνου των ωοθηκών θα μπορούσε να προσφέρει νέες γνώσεις και την ταυτοποίηση νέων στόχων για την προληπτική και θεραπευτική αγωγή των προσπαθειών.

Έχουμε αναπτύξει προηγουμένως και που χαρακτηρίζεται από ένα πρότυπο κύτταρο του επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών εξέλιξης να μελετήσουν την ακολουθία των γεγονότων που οδηγούν σε επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών [12]. Τα κύτταρα συγγενή ποντικό ωοθηκών επιθηλιακής επιφάνειας (MOSE), που προέρχονται από ποντίκια C57BL6, έχουν υποστεί αυθόρμητη μετατροπή σε κυτταρική καλλιέργεια. Τα ετερογενή κύτταρα MOSE υφίστανται διακριτά φαινοτυπικά αλλαγές που συνεχώς μεταβιβάσθηκαν στον πολιτισμό, με πρώιμη περάσματα αντιπροσωπεύουν προκαρκινικές, μη-ογκογόνο φαινότυπο, ενδιάμεσα περάσματα που αντιπροσωπεύει μια μεταβατική φαινότυπο, και αργότερα περάσματα προχωρά σε μια ιδιαίτερα επιθετική κακοήθη φαινότυπο όταν χορηγείται σε ανοσοϊκανά ποντίκια . Μεταβατικές καταστάσεις της εξέλιξης ήταν διακριτά από αλλαγές στα ποσοστά ανάπτυξης, το μέγεθος των κυττάρων, απώλεια αναστολής επαφής της ανάπτυξης, καθώς και την ικανότητα να αναπτύσσεται ως σφαιροειδή σύμφωνα με τα μη προσκολλημένα συνθήκες. Είναι σημαντικό ότι, τόσο η MOSE-Ι (ενδιάμεσο πέρασμα) και MOSE-L (αργά πέρασμα) κύτταρα έχουν αποκτήσει την ικανότητα να σχηματίζουν όγκους όταν εγχέονται εντός της περιτοναϊκής κοιλότητας συγγενών ποντικών ανοσοεπαρκείς, αν η πρώτη τιμή ήταν λιγότερο επεμβατική [12].

στην παρούσα μελέτη, εντοπίστηκαν σημαντικές αλλαγές στα πρότυπα γονιδιακής έκφρασης ως μη μετατραπεί MOSE που προέρχονται από κύτταρα μετάβαση σε πιο επιθετικό φαινότυπο και να χρησιμοποιηθούν εργαλεία γονίδιο οντολογία να καθορίσουν λειτουργικές κατηγορίες τους. Οι μεταβατικές καταστάσεις αυτού του μοντέλου μας επέτρεψε να προσδιορίσουν το στάδιο που εξαρτάται από τα γονίδια, τα προϊόντα των γονιδίων και μονοπατιών μεταγωγής σήματος που εμπλέκονται στην εξέλιξη του όγκου των ωοθηκών. Εδώ έχουμε τονίσει προοδευτικές αλλαγές που οδηγούν σε μια ιδιαίτερα απορυθμισμένη κυτταροσκελετού. Πολλές από τις αλλαγές αυτές επιβεβαιώθηκαν σε αρχειοθετημένα σύνολα δεδομένων καρκίνου μικροσυστοιχιών ανθρώπινη ωοθηκών. Είναι σημαντικό, έχουμε αποδείξει ότι κυτταροσκελετού αποδιοργάνωση μπορεί να έχουν σοβαρές επιπτώσεις στο υποκυτταρικό εντοπισμό σημαντικών ενδιάμεσων σηματοδότησης, η οποία τελικά μπορεί να οδηγήσει σε διαμορφωμένα μονοπάτια σηματοδότησης που συμβάλλουν στην ανάπτυξη του καρκίνου των ωοθηκών. Αυτά τα γονίδια, γονίδιο προϊόντα τους και οι σχετικές οδοί σηματοδότησης μπορεί να αντιπροσωπεύουν νέους στόχους για την έγκαιρη παρέμβαση των νεοπλασματικών εξέλιξης.

Αποτελέσματα

διαφορικά ρυθμιζόμενα γονίδια στο ποντίκι εξέλιξης του καρκίνου των ωοθηκών

Για να προσδιοριστούν οι αλλαγές γονιδιακής έκφρασης κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών και τον προσδιορισμό των πιθανών στάδιο-ειδικά πρότυπα, χρησιμοποιήσαμε ανάλυση συνόλου του γονιδιώματος μικροσυστοιχιών να συγκρίνουν τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης σε κύτταρα που εκπροσωπούν καλοήθεις (MOSE-Ε), το ενδιάμεσο (MOSE-I), και κακοήθεις ( MOSE-L) στάδια του καρκίνου των ωοθηκών ποντικού. Τρεις βιολογική επαναλήψεις χρησιμοποιήθηκαν για να λαμβάνονται υπόψη οι διακυμάνσεις εντός των ετερογενείς κουλτούρες. Από τους 45.102 σύνολα ανιχνευτή στη μικροσυστοιχία (που αντιπροσωπεύουν 18.136 σχολιασμένα γονίδια), 960 σύνολα ανιχνευτή βρέθηκαν να είναι σημαντικά πάνω ρυθμισμένα (701 σχολιασμένα γονίδια) και 1006 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω (711 σχολιασμένα γονίδια) μεγαλύτερη από 2 φορές (p≤ 0.05) μεταξύ MOSE-Ε και κύτταρα MOSE-L. Από αυτές τις 1.966 μεταβαλλόμενες σύνολα ανιχνευτή, 58,9% παρουσίασαν καμία σημαντική μεταβολή στα επίπεδα έκφρασης κατά τη διάρκεια της εξέλιξης μεταξύ MOSE-Ε και MOSE-I, υποδεικνύοντας την πλειοψηφία των αλλαγών στη γονιδιακή έκφραση είναι συνδεδεμένες με αργότερα γεγονότα στην κακοήθη πρόοδο στο μοντέλο μας, με 608 αύξηση και 549 μειώνεται καθώς τα κύτταρα μετάβαση από MOSE-Ι Mosé-L. Αντίθετα, το 33,3% των προσβεβλημένων γονιδίων έδειξε μια προοδευτική αύξηση (σετ 272 ανιχνευτή) ή μείωση (σετ 382 ανιχνευτή) στην έκφραση ως κύτταρα μετάβαση από MOSE-Ε να Mosé-Ι Mosé-L κύτταρα (Σχήμα 1). Ένας μικρός αριθμός των προσβεβλημένων σετ ανιχνευτών, 3,9%, κατέδειξε αναλογίες MOSE-I /MOSE-Ε που ήταν εντός 0,4 φορές του MOSE-L /αναλογίες MOSE-Ε, υποδεικνύοντας ότι αυτές οι αλλαγές γονιδιακής έκφρασης μπορεί να συνδέονται με πολύ πρώιμα γεγονότα στην κακοήθη εξέλιξη των κυττάρων μας. Μαζί αυτά τα δεδομένα δεικνύουν ότι οι περισσότερες από τις αλλαγές στα επίπεδα έκφρασης του γονιδίου είτε συμβαίνουν συνεχώς, με σταδιακό τρόπο, σε όλη την εξέλιξη του μοντέλου μας ή να λάβει χώρα σε μεταγενέστερα στάδια, ενώ μόνο ένα περιορισμένο υποσύνολο αλλαγή κατά τα αρχικά στάδια. Το πλήρες σύνολο δεδομένων μπορεί να βρεθεί στη βάση δεδομένων GEO (GSE24789).

Από 45.102 σετ καθετήρα που αναλύθηκαν, 970 ήταν σημαντικά (p ≤ 0,05) ρυθμίζεται προς τα πάνω (Α) και 1006 ήταν κάτω-ρυθμιζόμενη (Β ) μεγαλύτερη από δύο φορές. Τα βέλη υποδεικνύουν πρότυπο έκφρασης αλλάζει με τον αριθμό των σετ ανιχνευτή υποδεικνύονται δίπλα στο βέλος. σύνολα ανιχνευτή υποδεικνύεται ως άλλη δεν ακολουθούν τις περιγράφονται μοτίβα.

Η

υπερεκπροσωπούνται γονίδιο κατηγορίες της οντολογίας στην εξέλιξη του καρκίνου των ωοθηκών

Για την ανίχνευση οδούς που μπορεί να συμβάλλει στην προώθηση και την εξέλιξη των ωοθηκών καρκίνος, το πρόγραμμα Gene Trail χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των λειτουργικών κατηγοριών γονιδίων που επιδεικνύουν στατιστικώς σημαντικές αλλαγές στα επίπεδα έκφρασης τους μεταξύ MOSE-Ε και τα κύτταρα MOSE-L. Γονίδιο Trail είναι ένα προηγμένο εργαλείο ανάλυσης σύνολο γονιδίων εμπλουτισμού που καθορίζει υπερεκπροσωπούνται κατηγορίες γονιδίων οντολογίας σε σύνολα δεδομένων [13]. Η υπερ-εκπροσωπούνται κυτταρικό συστατικό, βιολογική διαδικασία, και οι κατηγορίες μοριακού γονίδιο λειτουργία οντολογία βρέθηκε στο MOSE-L έναντι Τα MOSE-Ε σύνολα διαφορικά εκφραζόμενο γονίδιο που απαριθμούνται στον Πίνακα 1 (ρ & lt? 0,01). Πάνω-αντιπροσώπευση γονιδίων στο πολλαπλασιασμό των κυττάρων του κυτταρικού κύκλου και των κατηγοριών αναμενόταν λόγω της προηγουμένως αναφερθεί αυξημένο ρυθμό ανάπτυξης των κυττάρων MOSE-L [12] και την εμπλοκή του ανεξέλεγκτο πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε καρκίνο [14]. Είναι ενδιαφέρον ότι η κυτταροσκελετού και τις κατηγορίες σύνδεσης μετάλλου Ion /κατιόντων που αντιπροσωπεύεται ένα σημαντικό αριθμό των διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων, με σημαντική επικάλυψη των γονιδίων κατηγοριοποιούνται σε δύο από αυτές τις κατηγορίες οντολογίας. Ωστόσο, σε αντίθεση με το ευρύ φάσμα των λειτουργιών των γονιδίων στην κατηγορία σύνδεσης μετάλλου Ion /κατιόν, τα γονίδια συγκεντρώνονται στην κατηγορία οντολογία γονίδιο κυτταροσκελετού ήταν λειτουργικά πολύ συγκεκριμένες. Δεδομένου ότι πιστεύεται ότι οι μεταβολές στα επίπεδα έκφρασης των πρωτεϊνών του κυτταροσκελετού και οι ρυθμιστικές τους που συνδέονται με την εξέλιξη και τη μετάσταση [15], [16], [17], οι αλλαγές στα γονίδια που εμπλέκονται στη δομή και τη ρύθμιση του κυτταρικού σκελετού κατά τη διάρκεια της εξέλιξης της μοντέλο MOSE μας ήταν το αντικείμενο περαιτέρω έρευνας.

η

αποδιοργάνωση της κυτταρικής κυτταροσκελετού κατά την κακοήθη εξέλιξη

ακτίνη κυτταροσκελετός.

από τα 141 γονίδια που κατηγοριοποιούνται εντός του κυτταροσκελετού γονίδιο κατηγορία οντολογία, 90 έχουν τα προϊόντα γονιδίων που είναι υπομονάδες των νηματίων ακτίνης (Πίνακας 2) ή εμπλέκονται στην οργάνωση και ρύθμιση του κυτταροσκελετού της ακτίνης (Πίνακας 3? πλήρης κατάλογος στον συμπληρωματικό πίνακα S1). Για τους περισσότερους από αυτά τα γονίδια, τα επίπεδα έκφρασης άλλαξε σταδιακά με σταδιακό τρόπο όπως τα κύτταρα μεταπηδά από MOSE-Ε να Mosé-Ι Mose-L, δεικνύοντας ότι αυτές οι αλλαγές είναι συνεχώς προκύπτουν καθ ‘όλη την εξέλιξη. Μόνο τρία γονίδια, γ-ακτίνη 1, formin 1, και drebrin 1, αποδεικνύεται αναλογίες MOSE-Ι /MOSE-Ε που ήταν μέσα σε λιγότερο από 0,4 φορές του MOSE-L /αναλογίες MOSE-E, προτείνοντας αυτές είναι πρώιμες αλλαγές στην κακοήθη εξέλιξη (Πίνακας 2 και 3). Επτά γονίδια, συμπεριλαμβανομένων της ιντεγκρίνης αν, -β1 και -β2, έδειξε επίπεδα έκφρασης που άλλαξε από το μεγαλύτερο μέγεθος σε κύτταρα MOSE-I, δύο εκ των οποίων επιβεβαιώθηκαν με qRT-PCR (Πίνακας 2 και Πίνακας 3). Ένας μεγάλος αριθμός από αυτά τα γονίδια είναι απορρυθμισμένη σε καρκίνο ή που εμπλέκονται στη μετάσταση, συμπεριλαμβανομένων όλων των 15 γονιδίων που επιβεβαιώθηκαν με qRT-PCR (Πίνακας 2 και 3).

Η

Τα προϊόντα γονιδίου ένα υποσύνολο των γονιδίων επιβεβαιώθηκε με qRT-PCR αναλύθηκαν επίσης με western blot, καθώς και μικροσκοπία ανοσοφθορισμού για τον προσδιορισμό των πιθανών διαφορών σε υποκυτταρικό εντοπισμό τους. Τα αποτελέσματα έδειξαν μια μικροσυστοιχία προοδευτική μείωση της α-ακτίνης και του mRNA γ-ακτίνης, η οποία επιβεβαιώθηκε με qRT-PCR (Πίνακας 2), ωστόσο, δεν παρατηρήθηκαν αλλαγές β-ακτίνης. Αυτό αντιστοιχούσε σε μείωση των συνολικών επιπέδων πρωτεΐνης ακτίνης κατά τη διάρκεια της εξέλιξης (Σχήμα 2Α). Επιπλέον, η εξέταση των F-ακτίνης αρχιτεκτονική με μικροσκοπία ανοσοφθορισμού απεκάλυψε σαφείς διαφορές της ακτίνης υποκυτταρικού οργάνωση. κύτταρα MOSE-Ε επέδειξε μεγάλη, καλά καθορισμένες καλώδιο-όπως ίνες στρες μετά από χρώση με Alexa Fluor

488 συζευγμένο phalloidin, ενώ οι κακοήθεις MOSE-L κύτταρα εμφανίζονται λιγότερο διακριτά F-ακτίνης δομές και την οργάνωση. (Σχήμα 3Α, 1

στήλη st). Στα κύτταρα MOSE-L, δομές ακτίνη κυμαίνονταν από μικρές ίνες λεπτό άγχος για εξέχοντα «αναστατωμένα» ζώνες με πολύ μικρή νημάτια ακτίνης, που θυμίζει podosomes (Εικόνα 3Α και 3Β, ομοεστιακό εικόνα 2 ένθετο). Αξίζει να σημειωθεί ότι ο MOSE-Ι εμφάνισαν F-ακτίνης αποδιοργάνωση παρόμοια με εκείνη των κυττάρων MOSE-L (Σχήμα 3Α). Για να συγκρίνετε ειδικά κυτταρικό περιεχόμενο F-ακτίνης μεταξύ των κυτταρικών σειρών MOSE, χρησιμοποιήθηκε μια διαδικασία που βασίζεται σε φθορισμό συζευγμένων phalloidin. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, το ολικό κυτταρικό F-ακτίνης μειώθηκε κατά 78% (ρ & lt? 0,01). Σε MOSE-L κύτταρα συγκριτικά με κύτταρα MOSE-Ε, επιβεβαιώνοντας qRT-PCR και Western αποτελέσματα

Ολικά κυτταρικά εκχυλίσματα από MOSE-Ε (Ε, λευκές ράβδοι), MOSE-Ι (Ι, γκρίζες ράβδοι) και MOSE-L (L, μαύρες ράβδοι) κύτταρα υποβλήθηκαν σε ανάλυση στυπώματος Western με αντισώματα που κατευθύνονται εναντίον ρύθμιση των πρωτεϊνών ακτίνης (Α) και ( πρωτεΐνες Β) μικροσωληνίσκων. Τα επίπεδα έκφρασης εκφράζονται ως επί τοις εκατό MOSE-Ε επίπεδα ομαλοποίηση να ριβοσωμική πρωτεΐνη L19 (RPL 19) ή γ-τουμπουλίνης για τρεις βιολογικούς επαναλήψεων γίνεται εις διπλούν ± την τυπική απόκλιση. Ένας εκπρόσωπος κηλίδα από τις τρεις βιολογικούς επαναλήψεις εμφανίζεται. * P≤ 0.01.

Η

(Α) χρώση ανοσοφθορισμού MOSE-Ε, MOSE-Ι και κύτταρα MOSE-L για να απεικονίσει νημάτια ακτίνης (phalloidin, πράσινο), α- τουμπουλίνης (2

nd στήλη), β- τουμπουλίνης (3

στήλες rd), ή κυτοκερατίνη (4

ου στήλη) μαζί με τον πυρήνα (μπλε, DAPI). (Β και C) Τρι χρώση MOSE-Ε και τα κύτταρα MOSE-L με ϋΑΡΙ (μπλε), φαλλοειδίνη (f-ακτίνης, πράσινο), και αντισώματα έναντι α-ακτινίνη (κόκκινο, Β) ή βινκουλίνης (κόκκινο, C). Οι ομοεστιακό εικόνες που εμφανίζονται είναι 0,6 μm πέρα ​​μέσα στο κύτταρο, με την εικόνα 1, ξεκινώντας από την βάση του κυττάρου και την εικόνα 2 προς την κορυφή του κελιού. Συν-εντοπισμός εμφανίζεται ως κίτρινο σε νέα και συνεστιακή εικόνες. (D) Τριπλό χρώση MOSE-Ε και τα κύτταρα MOSE-L με ϋΑΡΙ (μπλε), αντίσωμα έναντι FAK (πράσινο), και το αντίσωμα έναντι της FAK φωσφορυλιωμένη τυροσίνη 861 (κόκκινο, ΡΑΚ

Y861). Κίτρινο σε συγχωνευμένη εικόνα δείχνει συν-εντοπισμό. (Αρχική μεγέθυνση X600)

Η

Ίδιος αριθμός MOSE-Ε ή κύτταρα MOSE-L, όπου επιχρυσωμένο. Μετά από 48 ώρες, τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με παραφορμαλδεϋδη και βάφτηκαν με φαλλοϊδίνη συζευγμένο με Alexa Fluor

488. Η phalloidin διαλυτοποιήθηκε με MeOH και ο φθορισμός προσδιορίστηκε. Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν σε αριθμό κυττάρων και παρουσιάζονται ως οι μέσες σχετικές μονάδες φθορισμού (RFU) ανά κύτταρο ± την τυπική απόκλιση. . * P≤ 0.01

Η

συνεστιακή μικροσκοπία αποκάλυψε μεγάλη διαφορά στο πάχος των κυττάρων? κύτταρα MOSE-Ε είχε ένα μέσο πάχος από 2 μm, υποδεικνύοντας αυτά τα κύτταρα είναι μάλλον επίπεδη όταν αναπτύσσονται σε πλαστικά, ενώ MOSE-L κύτταρα παρουσίασαν ένα μέσο πάχος των 4,4 μm σε όλη κυτταροπλασματικές περιοχές. Οι ομοεστιακό εικόνες δείχνεται στο Σχήμα 3Β (συνεστιακή εικόνα 1 και 2) είναι διαδοχικά z-στοίβες 0,6 μm χώρια ξεκινώντας στη βάση του κυττάρου όπου οι ίνες ακτίνης που βρίσκεται σε αφθονία σε θέσεις προσάρτησης. Δεδομένου ότι η μέση MOSE-L κυττάρων είναι 4.4 μm πάχους, η δεύτερη εικόνα συλλαμβάνει περίπου το μεσαίο τρίτο του κυττάρου, όχι η μεμβράνη, γεγονός που υποδηλώνει τις μη ινώδεις δομές στα κύτταρα MOSE-L δεν είναι το αποτέλεσμα της μεμβράνης ruffling. Ωστόσο, είναι μέσα στο κυτταρόπλασμα του κυττάρου και θυμίζουν δομές που χαρακτηρίζεται από το διηθητικό καρκίνο του μαστού κύτταρα ως podosomes [18]. Σε αντίθεση, MOSE-Ε κυττάρων (Σχήμα 3Β) έδειξε ίνες στρες σε όλα τα κύτταρα χωρίς σύντομο νημάτια ακτίνης.

μικροσωληνίσκοι.

προϊόντα γονιδίων που συνθέτουν ή να ρυθμίσει το δίκτυο των μικροσωληνίσκων περιελάμβανε η δεύτερη μεγαλύτερη σετ γονιδίων (44 από 141) που επλήγησαν κατά τη διάρκεια νεοπλασματικό μετασχηματισμό κυττάρων MOSE (Πίνακας 4? πλήρης κατάλογος στον συμπληρωματικό πίνακα S2). Όλοι εκτός από έξι γονίδια είναι μόνο πάνω ή προς τα κάτω ρυθμισμένα στα κύτταρα MOSE-L. Πέντε γονίδια (Tubb2b, Cenpe, Mtap6, NDN και Vav2) είχαν επίπεδα έκφρασης που αλλάζουν σταδιακά από MOSE-Ε να Mosé-Ι Mose-L, υποδεικνύοντας ότι αυτές οι αλλαγές είναι συνεχώς προκύπτουν καθ ‘όλη την εξέλιξη. Μόνο ένα γονίδιο, Ninl, έδειξαν αναλογίες MOSE-I /MOSE-Ε ότι όπου μέσα σε λιγότερο από 0,4 φορές του /αναλογίες MOSE-L MOSE-Ε, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτό είναι ένα πρώιμο γεγονός στην κακοήθη εξέλιξη (Πίνακας 4). Είναι ενδιαφέρον ότι, από τις 44 διαφορικά εκφρασμένων μικροσωληνίσκων και γονίδια που σχετίζεται με τους μικροσωληνίσκους, 12 γονίδια που κωδικοποιούν πρωτεΐνες που εμπλέκονται στο χρωμόσωμα congression (Kif18a, Kif22, Kif4), διαχωρισμός (ASPM Cenpe, Ckap2, Incenp, JUB, Kif20a, Kif23, Lats2, PRC1) , ή /και κυτταροκίνηση (Incenp, Kif20a, Kif23, PRC1) (Πίνακας 4) [19]. Όλα τα 12 γονίδια παρουσίασαν μειωμένη έκφραση με πέντε από τους 12 γονίδια που κωδικοποιούν για κινεσίνες τα οποία είναι μοριακά κινητήρες που χρησιμοποιούν την ενέργεια της υδρόλυσης ΑΤΡ για να κινείται κατά μήκος της επιφάνειας των νημάτων μικροσωληνίσκων ή αποσταθεροποιήσει τους [19], [20].

Μια σημαντική μείωση των επιπέδων του α-τουμπουλίνης ισομορφή 4α και πολλαπλές ισομορφές της β-τουμπουλίνης παρατηρήθηκαν επίσης στα δεδομένα μικροσυστοιχιών. Η επιβεβαίωση από qRT-PCR των επιμέρους ισομορφών αποδείχθηκε δύσκολη λόγω των υψηλών επιπέδων της ομολογίας, αλλά η μείωση του mRNA τουμπουλίνης β3 στα κύτταρα MOSE-L επιβεβαιώθηκε. Ωστόσο, υπάρχουν σημαντικές αλλαγές των επιπέδων β-τουμπουλίνης πρωτεΐνη μεταξύ MOSE-Ε και τα κύτταρα MOSE-L ανιχνεύθηκαν (Σχήμα 2Β). Σε αντίθεση, α-τουμπουλίνης πρωτεϊνικά επίπεδα μειώθηκαν κατά 34% σε κύτταρα MOSE-L και το 67% σε κύτταρα MOSE-I σε σύγκριση με τα επίπεδα MOSE-Ε. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές αλλαγές σε γ-τουμπουλίνης mRNA (τα δεδομένα δεν φαίνονται) ή τα επίπεδα της πρωτεΐνης (Σχήμα 2Β) παρατηρήθηκαν και ανοσοχρώση αποκάλυψε κανένα ευδιάκριτη διαφορές στην πρωτεΐνη εντοπισμός μεταξύ MOSE-Ε και τα κύτταρα MOSE-L (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Είναι σημαντικό, υπήρχαν αξιοσημείωτες διαφορές μεταξύ MOSE-Ε και τα κύτταρα MOSE-L, όταν η υποκυτταρική οργάνωση των πρωτεϊνών των μικροσωληνίσκων, α- και β-τουμπουλίνης, εξετάστηκαν με ανοσοφθορισμό (Σχήμα 3Α). Στα κύτταρα MOSE-E, τόσο α- και β-τουμπουλίνης εμφανίζονται εφ ορίζεται νήματα που ακτινοβολεί από ό, τι είναι πιθανό να είναι η περιπυρηνικού εντοπισμένη κεντριόλιο (Σχήμα 3Α, 2

ου και 3

στήλες rd κορυφή του πίνακα), ανέφεραν να είναι ένα κανονικό οργάνωση της τουμπουλίνης σε επιθηλιακά κύτταρα. Αντίθετα, στα κύτταρα MOSE-L τουμπουλίνης νημάτια ήταν λιγότερο ορίζεται, εμφανίζουν τυχαία αποδιοργανωμένη διακλάδωση και την προέλευση του πολυμερισμού της τουμπουλίνης δεν ήταν άμεσα εμφανής σε πολλά κύτταρα (Εικόνα 3Α, 2

ου και 3

στήλες rd, κάτω πλαίσιο ). κύτταρα MOSE-I φαίνεται να έχουν ένα ενδιάμεσο φαινότυπο με την κεντριόλιο εμφανής σε περίπου 50% των κυττάρων μαζί με μικρότερες, λιγότερο συγκεκριμένες ίνες από ό, τι στα κύτταρα MOSE-Ε (Σχήμα 3Α, 2

ου και 3

ου στήλη , μεσαίο πάνελ).

ενδιάμεσων ινιδίων.

το τελικό υποσύνολο των προσβεβλημένων γονιδίων που σχετίζονται κυτταροσκελετού (7/141) έχουν γονιδιακών προϊόντων που συνθέτουν και να ρυθμίσει το δίκτυο ενδιάμεσων νημάτων (IF). Τα επίπεδα mRNA για τον αριθμό των κυτοκερατίνες μειώθηκε σε κύτταρα MOSE-L με κυτοκερατίνες 7,8, και 19 επαληθεύεται από qRT-PCR (Πίνακας 5). Ανοσοχρώση με ένα τηγάνι-κυτοκερατίνης αντισωμάτων αποκάλυψε ότι τα κύτταρα MOSE-Ε έχουν ένα καλά οργανωμένο δίκτυο ενδιάμεσων νημάτων που εκτείνονται σε όλη τα κύτταρα, ενώ το δίκτυο ενδιάμεσων νημάτων σε κύτταρα MOSE-L αποτελείται από σύντομες νηματοειδών δομών που δεν ακτινοβολεί σε όλο το κύτταρο σε ένα οργανωμένο τρόπο (Σχήμα 3Α, τελευταία στήλη). Καλά ορίζεται νημάτια κυτοκερατίνη παρατηρήθηκαν μόνο σε περίπου 25% των κυττάρων MOSE-I, ενώ το υπόλοιπο των κυττάρων που εμφανίζουν διάχυτη χρώση κυτοκερατίνη με την περιορισμένη οργάνωση θυμίζει κυττάρων MOSE-L.

Η

σύγκριση προς αρχειοθετηθεί ανθρώπινα σύνολα δεδομένων ωοθηκών μικροσυστοιχιών

για να προσδιοριστεί η συνάφεια των παρατηρούμενων μεταβολών στα επίπεδα έκφρασης του γονιδίου του κυτταροσκελετού της MOSE μοντέλο εξέλιξης των κυττάρων μας για να ανθρώπινου καρκίνου των ωοθηκών, αξιολογήσαμε αρχειοθετημένα σύνολα δεδομένων μικροσυστοιχιών DNA το οποίο σε σύγκριση με την έκφραση του γονιδίου επίπεδα σε διαφορετικές εγκατεστημένος ανθρώπινες κυτταρικές σειρές ωοθήκης με κανονικά κύτταρα ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακών ως αναφορά (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι για μια περιγραφή των κυτταρικών σειρών αξιολογείται). Παρά το γεγονός ότι η διαφορική έκφραση των γονιδίων του κυτταροσκελετού δεν ήταν ένα κομβικό σημείο σε αυτές τις μελέτες σε ανθρώπους, περίπου το 50% των γονιδίων που σχετίζονται προσκόλληση ακτίνης και εστιακών αναφέρονται στον Πίνακα 2 ως σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται κατά τη διάρκεια της προόδου του κυτταρικού MOSE ήταν επίσης σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται στο ανθρώπινο ωοθηκικό κυτταρικές γραμμές. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 6, υπήρχε μια σαφής εμπλουτισμός για σημαντικές αλλαγές στην ακτίνη και εστιακές γονιδίων που σχετίζονται προσκόλλησης. Χρησιμοποιώντας την αθροιστική δυωνυμική κατανομή, η εκτιμώμενη πιθανότητα παρατήρησης αυτό πολλοί εκφράζονται διαφορικά ακτίνης και τα γονίδια εστιακή πρόσφυση στις ανθρώπινες μελέτες κατά τύχη ήταν 2,23 × 10

-6 και 1,87 × 10

-7, αντίστοιχα, για τη σύγκριση με δεδομένα από Nagaraja et al. [21] και Iorio et al. [22]. Επιπλέον, η συγκριτική ανάλυση αποκάλυψε ότι διάφορα πρόσθετα γονίδια σύνδεση ακτίνης που παρατίθενται στον Πίνακα 3 ήταν σημαντικά κατιούσα ρύθμιση στις ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών. Της σημείωσης, Marcks και Tpm2 ρυθμίστηκαν προς τα κάτω από το 10- και 23-φορές, αντίστοιχα, επιθετικά καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών σε σύγκριση με την κανονική ΟΣΕ. Η επικάλυψη των διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων στη λειτουργική κατηγορία των μικροσωληνίσκων δεν έφθασαν σημασία [21]. Αυτό μπορεί να είναι αποτέλεσμα των συγκριτικά μικρές αλλαγές στα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης σε αυτή την κατηγορία. Ωστόσο, το γονίδιο NDN, η οποία ήταν 27 φορές κάτω-ρυθμίζονται στα κύτταρα MOSE, ήταν όσο 125 φορές κάτω-ρυθμίζονται στις ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές γραμμές [21]. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι οι αλλαγές στο κυτταροσκελετού είναι κοινά σε πολλές κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών ανεξάρτητα από ιστολογικό τύπο τους.

Η

Οι αλλαγές στην ακτίνη του κυτταροσκελετού ρύθμιση και την αρχιτεκτονική κατά τη διάρκεια της νεοπλασματικής εξέλιξη

Για να καθορίσει τους μηχανισμούς του κυτταροσκελετού απορρύθμισης κατά τη διάρκεια MOSE κακοήθη εξέλιξη, ερευνήσαμε τα επίπεδα έκφρασης και υποκυτταρικός εντοπισμός των διαφόρων ρυθμιστικών πρωτεϊνών, συμπεριλαμβανομένων των α-ακτινίνης, βινκουλίνης και κινάση εστιακής προσκόλλησης (FAK). Αυτές οι πρωτεΐνες επελέγησαν λόγω της συμμετοχής τους σε κυτταροσκελετού ρύθμιση, κυτταρική κινητικότητα, και ο καρκίνος εξέλιξη /μετάσταση. α-ακτινίνη εμπλέκεται σε συνολικές συμφωνίες ακτίνης από νημάτια εγκάρσια σύνδεση ακτίνης και είναι μέρος του συγκροτήματος εστιακής προσκόλλησης που συνδέει την ακτίνη κυτταροσκελετό να ιντεγκρίνες [23], [24]. Τα αποτελέσματα υποδεικνύονται μικροσυστοιχία προοδευτική μείωση των επιπέδων έκφρασης α-ακτινίνη που επιβεβαιώθηκαν με qRT-PCR (Πίνακας 2). α-ακτινίνη πρωτεϊνικά επίπεδα μειώθηκαν σημαντικά και στις δύο κύτταρα MOSE-L MOSE-Ι και σύγκριση με τα κύτταρα MOSE-Ε (Σχήμα 2Α). Μια ξεχωριστή συν-εντοπισμό των α-ακτινίνη (κόκκινο) με νημάτια ακτίνης (πράσινο) παράλληλο προς το χείλος προσβολής ήταν πάντοτε εύκολα εμφανείς σε κύτταρα MOSE-Ε (Σχήμα 3Β). Σε κύτταρα MOSE-L, α-ακτινίνη εμφανίστηκε σε μεγάλο βαθμό, όπως διάχυτη χρώση στο κυτταρόπλασμα με σημαντικά λιγότερο εμφανής συν-localiziation με νημάτια ακτίνης (Σχήμα 3Β, κόκκινο). Αυτό παρατηρήθηκε επίσης σε κύτταρα MOSE-Ι (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ομοεστιακό μικροσκόπιο έδειξε α-ακτινίνης δεν συνεργάστηκαν εντοπίζεται σε πολύ σύντομο νημάτια ακτίνης και ανοργάνωτο ακτίνη βρίσκονται στα κύτταρα MOSE-L (Σχήμα 3Β, συνεστιακή εικόνες και ένθετο).

Εκτός από την ομαδοποίηση ακτίνης, α -actinin δρα ως πλατφόρμα για να μεσολαβήσουν αλληλεπιδράσεις πρωτεΐνης-πρωτεΐνης, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που εμπλέκονται στο σχηματισμό και τη διατήρηση εστιακές συμφύσεις [23], [24]. κύτταρα MOSE είχαν μεταβλητά επίπεδα γονιδιακών προϊόντων που είναι γνωστό ότι συνδέονται με ή διαμορφώνουν εστιακές συμφύσεις (Πίνακας 2, εστιακές συμφύσεις). Επίσης, ένας αριθμός γονιδιακών προϊόντων απευθείας συνδέουν με α-ακτινίνη να ρυθμίζουν εστιακές συμφύσεις (zyxin, βινκουλίνης, ιντεγρίνη β1 και β2) ή ρυθμίζουν ακτίνης (Palladin και syndecan). Αλλαγές στα επίπεδα mRNA αρκετών από αυτά τα γονίδια επιβεβαιώθηκε με qRT-PCR (Πίνακας 2). Σημαντικά, γονίδια που συνδέονται με την εξέλιξη του καρκίνου (π.χ., Itgb2, Itgb5, παξιλλίνης, fyn) επέδειξε αυξημένη έκφραση, ενώ αυτοί πιστεύεται ότι καταστέλλει την εξέλιξη (δηλαδή, βινκουλίνης, Gravin) εμφάνισαν μειωμένα επίπεδα έκφρασης σε σύγκριση με κύτταρα MOSE-Ε.

βινκουλίνης, το οποίο δεσμεύει ακτίνη και αποτελεί μέρος του εστιακού συμπλόκου προσκόλλησης που συνδέουν ακτίνη προς ιντεγκρίνες, επέδειξε τόσο μειώνεται mRNA (Πίνακας 2) και τα επίπεδα πρωτεΐνης (Εικόνα 2Α) κατά τη διάρκεια κακοήθη πρόοδο. Για να απεικονίσει πιθανών αλλαγών στο υποκυτταρικού εντοπισμού, τα κύτταρα MOSE ανοσοχρωματίστηκαν τόσο για F-ακτίνη και βινκουλίνης (Σχήμα 3C). Σε κύτταρα MOSE-Ε, βινκουλίνης συν-εντοπίζεται στα άκρα των δεσμίδων ακτίνης, σχηματίζοντας καλά καθορισμένα εστιακά δομές προσκόλλησης παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε για μη μετασχηματισμένα επιθηλιακά κύτταρα. Αντίθετα, η χρώση βινκουλίνης ήταν σε μεγάλο βαθμό διάχυτη και μόνο οριακά συν-εντοπισμένη με ίνες ακτίνης στα κύτταρα MOSE-L. Εγγενώς, τα εστιακά πρόσφυση-όπως δομές στα κύτταρα MOSE-L ήταν λιγότερο συγκεκριμένες και περισσότερο στικτή. Ομοεστιακό μικροσκόπιο αποκάλυψε ότι βινκουλίνης διανεμήθηκε σε όλο το κυτταρόπλασμα των κυττάρων MOSE-L και δεν φάνηκε να συνδέσει απευθείας με το αποδιοργανωμένο ακτίνη, (Σχήμα 2C συνεστιακής εικόνες). Παρατηρήθηκαν παρόμοιες χρώσης βινκουλίνης σε 90% του MOSE-Ι (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), υποδεικνύοντας ότι παρεκκλίνουσα βινκουλίνης υποκυτταρική εντόπιση είναι ένα πρώιμο συμβάν ως κύτταρα μετάβαση από MOSE-Ε να Mosé-Ι.

Ο πρωταρχικός συστατικό του εστιακές συμφύσεις, ΡΑΚ, δεν παρουσίασαν σημαντικές μεταβολές στα επίπεδα mRNA κατά τη διάρκεια της εξέλιξης MOSE (Πίνακας 2). Ωστόσο, τα επίπεδα πρωτεΐνης ΡΑΚ ήταν σημαντικά αυξημένα σε τόσο MOSE-Ι και -L κυττάρων σε σύγκριση με MOSE-Ε (Σχήμα 2Α). Για να προσδιορίσετε αν υπάρχει επίσης μια αλλαγή στη δραστηριότητα ΡΑΚ και τον εντοπισμό, τα κύτταρα MOSE ήταν ανοσοφθορισμό χρώση για το σύνολο των FAK (κόκκινο) και ΡΑΚ φωσφορυλιωμένη σε tyrosine861 (ΡΑΚ-P

Y861, πράσινο) (Σχήμα 3D). Αξίζει να σημειωθεί, φωσφορυλίωση ΡΑΚ στην τυροσίνη Y

861 από Src, ένα από τα δύο κατάλοιπα φωσφορυλιώνεται από Src, συμβάλλει στην κυτταρική μετανάστευση [25], [26]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3D, FAK ήταν οριακά μόνο που συνδέονται με τις μεμβράνες των MOSE-L κυττάρων σε σύγκριση με το φωτεινό διάστικτη χρώση στην κυτταρική περιφέρεια του MOSE-Ε, αλλά μάλλον με διαχεόμενο διανέμονται σε όλη την κυτοσόλη. Συνολικά, υπήρχε πολύ μικρή διάστικτη χρώση του ΡΑΚ στην περιφέρεια των κυττάρων MOSE-L. Είναι ενδιαφέρον ότι, η περιφερειακή συνολικό ΡΑΚ συν-εντοπίζεται με την ενεργό FAK-Υ

861, γεγονός που υποδηλώνει ότι η περιφερειακή FAK είναι ενεργή τόσο MOSE-Ε και -Ε κύτταρα (Σχήμα 3C, συγχώνευση). Από χρώση ΡΑΚ απαιτεί MeOH στερέωσης, συνεστιακή μικροσκοπία δεν παρέχουν πειστικά αποτελέσματα ως προς την συν-εντοπισμό της διάχυτης συνολικού FAK και pFAK-Υ

861 παρατηρήθηκε σε κύτταρα MOSE-L. Έτσι, δεν είναι σαφές αν διάχυτη θύλακες αποδιοργανωμένη ακτίνης και συνολική ΡΑΚ συμβάλλουν στη μειωμένη σχηματισμό εστιακών συμφύσεων παρατηρήθηκε σε κύτταρα MOSE-L.

Η νεοπλασματική κυτταροσκελετού αλλάζει μονοπάτια μεταγωγής σήματος επιρροή

κυτταροσκελετού διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην πρόοδο και εκδηλώσεις όπως η μετανάστευση και εισβολή, επιτρέποντας στα κύτταρα να προσαρμοστούν και να επιβιώσουν σε διαφορετικά μικροπεριβάλλοντα κυττάρου όγκου? Οι ενώσεις που ρυθμίζουν κυτταροσκελετού οργάνωση έχουν χρησιμοποιηθεί ως θεραπευτικά μέσα του καρκίνου [27]. Από την άλλη πλευρά, η οργάνωση του κυτταροσκελετού επηρεάζει κυτταρική οργάνωση, σύμπλοκα προσκόλληση και την πολικότητα, και φυσαλιδώδη μεταφορές. Όπως σημειώθηκε παραπάνω, η υποκυτταρική εντόπιση των πρωτεϊνών που σχετίζονται με εστιακές συμφύσεις εμφανίζονται εκτροπές ταυτόχρονη με την αποδιοργανωμένη κατάσταση του κυτταροσκελετού. Αυτό μπορεί να επιτρέψει τα καρκινικά κύτταρα να παρακάμπτουν την κυτταρική ομοιοστατικών μηχανισμών ελέγχου από την εκτροπή πρωτεΐνες σηματοδότησης σε διαφορετικές θέσεις, αλλάζοντας έτσι τη διαθεσιμότητα των εταίρων δέσμευσης ή υποστρώματα, τα οποία μπορούν να τροποποιήσουν μονοπάτια μεταγωγής σήματος. Δεδομένου παρεκκλίνουσα σηματοδότηση είναι ένα σημάδι της κακοήθειας [28], ανοσοχρώση για την παγκόσμια τυροσίνη και σερίνη φωσφορυλιωμένων πρωτεϊνών χρησιμοποιήθηκε ως γενικός μετρητής της μεταγωγής σήματος οργάνωσης μονοπάτι και λειτουργία.

Η φωσφορυλίωση της τυροσίνης, ένας δείκτης του υποδοχέα και μη δραστικότητα κινάσης τυροσίνης υποδοχέα, παίζει έναν κρίσιμο ρόλο σε καρκινικά κύτταρα, που ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό, διαφοροποίηση, και μεταβολισμό? [58].