Αφηρημένο

MUC 16 (ΟΑ125) ανήκει σε μια οικογένεια υψηλού μοριακού βάρους O-γλυκοζυλιωμένη πρωτεΐνες γνωστές ως βλεννίνες. Ενώ MUC 16 είναι γνωστή ως βιολογικός δείκτης για τον καρκίνο των ωοθηκών, πρότυπο έκφρασης του σε καρκίνο του παγκρέατος (PC), η τέταρτη κύρια αιτία των θανάτων που σχετίζονται καρκίνο στις Ηνωμένες Πολιτείες, παραμένει άγνωστη. Ο σκοπός της μελέτης μας ήταν να αναλυθεί η έκφραση της MUC 16 κατά την έναρξη, εξέλιξη και μετάσταση του υπολογιστή για πιθανές επιπτώσεις στη διάγνωση PC, πρόγνωση και θεραπεία. Σε αυτή τη μελέτη, ένας μικροσυστοιχία περιέχουν ιστούς από υγιείς και PC ασθενείς για να διερευνηθεί η διαφορική έκφραση πρωτεϊνών του MUC 16 στο PC. επίπεδα MUC 16 mRNA μετρήθηκαν επίσης με RT-PCR στους φυσιολογικούς ανθρώπινους ιστούς παγκρέατος, παγκρεατίτιδα, και τον υπολογιστή. Για να διερευνηθεί πρότυπο έκφρασης του κατά τη διάρκεια της μετάστασης PC, αναλύθηκαν δείγματα ιστού από τον πρωτογενή παγκρεατικού όγκου και των μεταστάσεων (από τον ίδιο ασθενή) σε λεμφαδένες, το ήπαρ, οι πνεύμονες και επίπλουν από ασθενείς PC Stage IV. Για τον προσδιορισμό σύνδεσης του στην έναρξη της PC, ιστών από ασθενείς PC που περιέχει προ-νεοπλασματικές αλλοιώσεις διαφόρων βαθμών βάφτηκαν για MUC 16. Τέλος, η έκφραση MUC 16 αναλύθηκε σε 18 ανθρώπινες κυτταρικές σειρές PC. MUC 16 δεν εκφράζεται στους φυσιολογικούς παγκρεατικών αγωγών και είναι έντονα ρυθμίζεται αυξητικά σε PC και ανιχνεύονται σε παγκρεατίτιδα ιστό. Είναι πρώτα ανιχνεύθηκε στα υψηλής ποιότητας προ-νεοπλασματικές αλλοιώσεις που προηγούνται επεμβατική αδενοκαρκίνωμα, γεγονός που υποδηλώνει ότι προς τα πάνω ρύθμιση της είναι ένας αργά συμβάν κατά την έναρξη της ασθένειας αυτής. έκφραση MUC 16 φαίνεται να είναι ισχυρότερη σε μεταστατικές αλλοιώσεις, σε σύγκριση με τον πρωτογενή όγκο, προτείνοντας ένα ρόλο στη μετάσταση PC. Έχουμε επίσης προσδιορίσει κυττάρων PC σειρές που εκφράζουν MUC 16, τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν σε μελλοντικές μελέτες για να διαλευκανθεί λειτουργικό ρόλο της στον υπολογιστή. Συνολικά, τα αποτελέσματά μας αποκαλύπτουν ότι η έκφραση MUC 16 είναι σημαντικά αυξημένη σε PC και θα μπορούσε να διαδραματίσει δυναμικό ρόλο στην εξέλιξη της ασθένειας αυτής

Παράθεση:. Haridas D, Chakraborty S, Ponnusamy MP, Lakshmanan Ι, Rachagani S, Cruz Ε, et al. (2011) τάστασις Επιπτώσεις των MUC 16 Έκφραση σε καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 6 (10): e26839. doi: 10.1371 /journal.pone.0026839

Επιμέλεια: Rakesh Κ Srivastava, Το Πανεπιστήμιο του Κάνσας Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 30 Ιουλίου 2011? Αποδεκτές: 4 Οκτωβρίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: 31 Οκτ, 2011

Copyright: © 2011 Haridas et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (RO1 CA78590, RO1 CA131944, UO1 EDRN CA111294 και Ρ50 SPORE CA127297), Υπουργείο άμυνας (BC101014), το Ίδρυμα Susan G. Komen (KG070826), NCI Κέντρο Καρκίνου Υποστήριξη Grant 5 P30 CA036727-2452 και Νεμπράσκα Υπουργείο Υγείας Θεσμικών LB595 επιχορήγησης για τον Καρκίνο και το κάπνισμα έρευνας για τις ασθένειες. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του παγκρέατος (PC) είναι ένα εξαιρετικά θανατηφόρα κακοήθεια. Σύμφωνα με την Αμερικανική Αντικαρκινική Εταιρεία, ο εκτιμώμενος αριθμός των νέων κρουσμάτων και των θανάτων που οφείλονται σε PC στις Ηνωμένες Πολιτείες το 2010 ήταν 43.140 και 36.800 αντίστοιχα, με ποσοστό επιβίωσης πέντε χρόνων από 6% [1]. Το αδενοκαρκίνωμα των παγκρεατικών αγωγών αντιπροσωπεύει σχεδόν το 95% όλων των όγκων του παγκρέατος [2] και συνδέεται με μια μέση επιβίωση μόλις 3-6 μήνες. Οι φτωχοί προοπτικές των ασθενών PC αποδίδεται σε μεγάλο βαθμό με την κλινικά σιωπηλή φύση αυτής της κακοήθειας οποία συχνά οδηγεί σε διάγνωση του σε προχωρημένο και συχνά unresectable στάδιο της νόσου.

Αρκετές πρωτεΐνες έχουν αναφερθεί να απορρυθμισμένης κατά την έναρξη και την εξέλιξη του PC. Μία τέτοια οικογένεια πρωτεϊνών των οποίων η έκφραση ρυθμίζεται αυξητικά με παρεκκλίνοντα σε PC είναι βλεννίνες. Αυτές είναι υψηλού μοριακού βάρους, βαριά γλυκοσυλιωμένες πρωτεΐνες οι οποίες εξυπηρετούν διάφορες λειτουργίες σε φυσιολογικούς ιστούς, συμπεριλαμβανομένων λίπανση και την παγίδευση των επιβλαβών παθογόνων [3] – [7]. έκφρασή τους φαίνεται να μεταβάλλεται σε διάφορες κακοήθεις καταστάσεις, συμπεριλαμβανομένων PC [8].

CA125 (MUC 16) είναι ένα κυτταρικής επιφάνειας γλυκοπρωτεΐνη που εντοπίστηκε για πρώτη φορά από Σφουγγαράκι

et al

το 1981 [9]. MUC 16 διασπάται και να ρίξει στην κυκλοφορία του αίματος και αποτέλεσε το επίκεντρο της ενεργού έρευνας ως βιοδείκτη στον ορό για μια ποικιλία τύπων όγκου [10]. Είναι σήμερα η μόνη δείκτης όγκου του ορού που χρησιμοποιείται συνήθως σε κλινικές για τη διάγνωση και ιδιαίτερα την πρόβλεψη πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών [11]. CA125 είναι το πιο γνωστό αντίσωμα που αναγνωρίζει τόσο MUC 16 σε ιστούς και σε υγρά του σώματος και απευθύνεται σε ένα επίτοπο που βρίσκεται στην περιοχή διαδοχικών επαναλήψεων της πρωτεΐνης MUC 16 [4], [12].

Δομικά η πρωτεΐνη MUC 16 αποτελείται από έναν εξωκυτταρικό Ν-τερματικό πεδίο αποτελείται από τα υπολείμματα πάνω από 22.000 αμινοξέων και πιστεύεται ότι είναι γλυκοζυλιωμένη βαριά. Η κεντρική περιοχή περιέχει μέχρι 60 γλυκοζυλιωμένη πεπτιδικές αλληλουχίες επαναλαμβάνονται σε σειρά (ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα της οικογένειας βλεννίνη) που ακολουθείται από ένα C-τερματικό τομέα περιέχοντα μία πιθανή θέση πρωτεολυτικής διάσπασης, μια διαμεμβρανική περιοχή και μια σύντομη κυτταροπλασματική ουρά με αρκετές πιθανές θέσεις φωσφορυλίωσης [13], [14].

στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε την έκφραση της MUC 16 σε ιστούς PC και κυτταρικές σειρές χρησιμοποιώντας το CA125 μονοκλωνικό αντίσωμα. Περαιτέρω έχουμε αναλύσει την έκφραση του mRNA του σε ιστούς που απομονώθηκαν από ασθενείς PC και παγκρεατίτιδα με RT-PCR. Ο γενικός στόχος της μελέτης μας ήταν να διερευνηθεί αν υπάρχει διαφορική έκφραση του MUC 16 κατά τη διάρκεια της εξέλιξης και της ανάπτυξης των PC και να εξετάσει μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης MUC 16 και τα χαρακτηριστικά του όγκου. Η μελέτη μας δείχνουν ότι MUC 16 δεν εκφράζεται στους φυσιολογικούς αγωγούς του παγκρέατος, αλλά ρυθμίζεται αυξητικά κατά τη διάρκεια της εξέλιξης και ανάπτυξης PC, υποδηλώνοντας έτσι έναν πιθανό ρόλο για MUC 16 στην παθογένεση PC και την κλινική διάγνωση της.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Μια γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε για όλες τις μη-αρχειακό ιστό πριν από τη συλλογή ιστών για όλα τα δείγματα που λαμβάνονται μέσω UNMC.

δείγμα ιστών και κυτταρικών σειρών

Πενήντα -eight PC και 8 κανονικά δείγματα παγκρεατικού ιστού (φορμαλίνη και εγκλεισμένα σε παραφίνη) ελήφθησαν από Accumax (αριθμός Array A207IV). Η διάταξη που περιέχεται ιστούς ταξινομούνται ως μη-νεοπλασματικές (8 θέσεις), καλά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα (12 σημεία), μετρίως διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα (22 σημεία) και ελάχιστα διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα (24 σημεία). Έκφραση της MUC 16 αναλύθηκε με RT-PCR από 2 φυσιολογικούς ανθρώπινους ιστούς παγκρέατος, 6 παγκρεατίτιδα και 17 του παγκρέατος καρκινικούς ιστούς που ελήφθησαν μετά την έγκριση του πρωτοκόλλου από την IRB (IRB- 491-97) στο Πανεπιστήμιο της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο, Omaha , NE. Το mRNA μετατράπηκε σε cDNA χρησιμοποιώντας ολίγο dT εναρκτήρες. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για να ελέγξετε για MUC 16 έκφρασης είναι MUC16_F-5 ‘GTCCCCAACAGGCACCACACCG-3’ και MUC16_R-5’GGGCACTGTTGCTGGACGTTGTATT-3 ‘και το προϊόν της PCR ακολουθία επαληθεύεται κατά την εγκατάσταση της αλληλουχίας του DNA UNMC.

Επιπλέον, φορμόλη σταθερό και ενσωματωμένα σε παραφίνη δείγματα (FFPE) ιστού PC από 34 ασθενείς PC που αποτελείται από φυσιολογικό πάγκρεας (7 θέσεις), πρωτοβάθμια PC (31 σημεία) και μετάσταση στο ήπαρ (23 σημεία), πνεύμονες (11 σημεία), λεμφαδένα (17 σημεία) και επίπλουν /διαφράγματος (11 σημεία) που λαμβάνεται από το Πανεπιστήμιο της ταχείας αυτοψίας πρόγραμμα Νεμπράσκα Ιατρικού Κέντρου (IRB-091-01) αναλύθηκαν επίσης να διερευνηθεί η μεταβολή στην έκφραση MUC 16 κατά τη διάρκεια της μετάστασης PC. Σύμφωνα με την ταχεία αυτοψία πρόγραμμα σε UNMC, οι ιστοί από ασθενείς δότη συγκομίζονται εντός τριών ωρών μετά το θάνατο τους και τα δείγματα καταψύχθηκαν ακαριαία σε υγρό άζωτο ή τοποθετούνται σε φορμόλη για άμεση στερέωση. μικροσυστοιχίες ιστού (TMAs) από παραφίνη μπλοκ των ιστών από την ταχεία αυτοψία προγράμματος χρησιμοποιήθηκαν για MUC 16 ανοσοχρώση. Εκτός από τα πυρήνες του όγκου, κάθε μπλοκ περιείχαν δείγματα ελέγχου από τα μη νεοπλασματικά του παχέος εντέρου, του νεφρού και του όγκου παρακείμενα πάγκρεας από τους ίδιους δότες. Τα μπλοκ TMA κόπηκαν σε τομές πάχους 4 μm και τοποθετείται σε φορτισμένη διαφάνειες

Είκοσι πέντε δείγματα PC ιστού που περιέχει παγκρέατος ενδοεπιθηλιακή νεοπλάσματα (PanIN) βλάβες διαφόρων βαθμών (Αριθμός βλάβες εντοπίζονται-PanIN Ι- 163?. PanIN ΙΙ-197? PanIN ΙΙΙ-26 και κανονική αγωγούς-140) που γειτνιάζουν με τις περιοχές του PC επίσης ελήφθησαν μετά την έγκριση του πρωτοκόλλου από το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review (IRB-491-97) στο Πανεπιστήμιο της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο, Omaha, NE. Τέσσερις μικρόν τομές πάχους παραφίνης κόπηκαν και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη για παθολογική αξιολόγηση. Ο βαθμός της PanINs και της έκφρασης MUC 16 σε κάθε τύπο PanIN βλάβη αξιολογήθηκε από τη χειρουργική παθολόγο (ΟΕΙΜ).

Η έκφραση των MUC 16 mRNA και η πρωτεΐνη αναλύθηκε επίσης σε μια ομάδα κυττάρων PC γραμμές (ΜΙΑΡΑΟΑ, Panc89 , Dang, HPAC, SU86.86, Colo357, CD18 /ΗΡΑΡ, HUPT3, Capan1, Suit2, CD11, Τ3Μ4, FG, Aspc1, PANC1, HG625, Capan2 και BxPC3) με τη χρήση εκκινητών που αναφέρθηκαν προηγουμένως. Οι κυτταρικές γραμμές αναπτύχθηκαν σε 37 ° C παρουσία 5% CO

2 σε DMEM συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου και αντιβιοτικά (πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη 100 μg /ml). Όλες οι κυτταρικές σειρές ελήφθησαν από την ATCC.

Ανοσοϊστοχημεία

Οι πλάκες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για ανοσοκηλίδωση όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15], [16]. Το αντι- μονοκλωνικό αντίσωμα MUC 16 ποντικού (Μ11 κλώνος, που κατασκευάζεται από την Dako, Carpinteria, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε σαν το πρωτογενές αντίσωμα. (Stock: συντελεστής 764 μg /ml αραίωση 1:500)

όλο το χρωματισμένο διαφάνειες βαθμολογήθηκαν από έναν παθολόγο κάτω από μια Nikon E400 Φως μικροσκόπιο και αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες που λήφθηκαν. Ένταση χρώσης για MUC 16 (ΟΑ125) βαθμολογήθηκε σε μία κλίμακα 0-3 (0-αρνητικό, 1-αδύναμη, 2 μέτρια, 3-ισχυρή ανοσολογική αντίδραση). Το ποσοστό των κυττάρων που είναι θετικά για MUC 16 μέσα σε μια δεδομένη βλάβη βαθμολογήθηκε σε μια κλίμακα 1-4 ως εξής: 1: 0-25% κύτταρα θετικά? 2: 26-50% θετική? 3: 51-75% θετική? και 4: 76-100% θετικά. Το σκορ της έντασης χρώσης και το ποσοστό των ανοσοδραστικών κύτταρα στη συνέχεια πολλαπλασιάζονται για να ληφθεί ένα σύνθετη βαθμολογία που κυμαίνεται από 0 έως 12. Ένα τμήμα θεωρήθηκε «θετικά» για MUC 16 και αν η ένταση του MUC 16 ήταν & gt? 1. Κατά συνέπεια ιστοί επίσης ταξινομούνται ως «θετική» ή «αρνητική» για MUC 16 έκφραση.

Ομοεστιακή μικροσκοπία ανοσοφθορισμού

PC κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για συνεστιακή μικροσκοπία όπως περιγράφηκε προηγουμένως [17], [18] . Εν συντομία, τα κύτταρα αναπτύχθηκαν στους 37 ° C για 48 ώρες σε μια στείρα καλυπτρίδες από γυαλί, πλένεται με ρυθμιστικό διάλυμα Hanks που περιέχει 0.1 Μ HEPES και μονιμοποιήθηκαν σε παγωμένη μεθανόλη στους 20 ° C για 2 λεπτά. Τα κύτταρα αποκλείστηκαν με 10% ορό κατσίκας σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) για 30 λεπτά, ακολουθούμενη από επώαση με αντι-MUC 16 μονοκλωνικό αντίσωμα (ΟΑ125) αραιωμένο σε PBS (stock ΟΑ125: 764 μg /ml? Συντελεστής αραίωσης 1:500) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Τα κύτταρα πλύθηκαν για 10 λεπτά (χ 4 φορές) με PBS και στη συνέχεια επωάστηκαν με δευτερογενές αντίσωμα αντι-ποντικού συζευγμένο με FITC κατσίκας για 30 λεπτά. Τα κύτταρα πλύθηκαν πάλι (10 λεπτά χ 4) και τοποθετείται σε γυάλινες πλάκες σε αντι-fade Vectashield μέσο στερέωσης (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA).

Western ανάλυση κηλίδος

κυττάρων PC γραμμές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για την εκχύλιση των πρωτεϊνών και ακολουθήθηκε από κηλίδωση Western με SDS-αγαρόζης όπως περιγράφηκε προηγουμένως [17], [18]. Θερμική μετουσίωση προϊόντα λύσης διαχωρίστηκαν σε 2% SDS-πηκτής αγαρόζης με ηλεκτροφόρηση και στη συνέχεια μεταφέρθηκε σε μεμβράνες PVDF για. Μετά την μεταφορά η μεμβράνη μπλοκαρίστηκε με 5% άπαχο ξηρό γάλα σε PBS για 2 ώρες, και επωάστηκαν με αντι-MUC 16 mAb (stock: 764 μg /παράγοντα ml αραίωσης 1:1000) ή αντι-β-ακτίνης μονοκλωνικό αντίσωμα όλη τη νύκτα στους 4 ° ΝΤΟ. Οι μεμβράνες πλύθηκαν με PBS που περιέχει 0.1% Tween-20 και στη συνέχεια επωάστηκαν με χρένο υπεροξειδάση δευτερογενή αντισώματα αντι-ποντικού συζευγμένο κατσίκας (αραιωμένο 1:2000 σε 5% άπαχο ξηρό γάλα σε PBS) (Amersham Biosciences Buckinghamshire, UK) για 1 ώρα . Το σήμα ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας ενισχυμένης χημειοφωταύγειας (ECL, Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK).

RNA Εκχύλιση και RT-PCR

Ολικό RNA απομονώθηκε από ιστούς χρησιμοποιώντας το

mir

Βάνα miRNA κιτ απομόνωσης (Ambion, πόλη Foster, CA, USA) και από κυτταρικές γραμμές χρησιμοποιώντας το κιτ QIAGEN RNeasy Mini (QIAGEN, Valencia, CA, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Το mRNA που απομονώθηκε μετατράπηκε σε cDNA χρησιμοποιώντας ολίγο dT εναρκτήρες. Το cDNA αραιώθηκε 1:05 χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η έκφραση της MUC 16 mRNA χρησιμοποιώντας PCR σύμφωνα με το πρωτόκολλο που περιγράφηκε προηγουμένως [19]. Τα προϊόντα έτρεξαν σε ένα πήκτωμα αγαρόζης 1,5% που περιέχει βρωμιούχο αιθίδιο (10 μg /ml). Οι εκκινητές που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο της έκφρασης MUC 16 είναι εκείνες που έχουν ήδη αναφερθεί.

Η στατιστική ανάλυση

Οι συνεχείς μεταβλητές (egcomposite σκορ) συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας δύο-tailed t-test του Student υποθέτοντας άνισες διαφορά. Κατηγορικές μεταβλητές (στάδιο, βαθμός του όγκου, όργανο των μακρινών μεταστάσεων) συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ Kruskal Wallis ANOVA ή την ακριβή δοκιμασία του Fisher. Η τιμή p & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Όλα στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση MedCalc για Windows, έκδοση 9.6.4.0 του λογισμικού (software MedCalc BVBA, Mariakerke, Βέλγιο).

Αποτελέσματα

MUC 16 διαφορικά υπερεκφράζεται σε παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα ιστούς

Για τον προσδιορισμό του προτύπου έκφρασης του MUC 16 στην παθογένεση PC, η έκφραση του συγκρίθηκε μεταξύ μη νεοπλασματικών αγωγούς και παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα χρησιμοποιώντας μια μικροσυστοιχία ιστού που περιλαμβάνει μη νεοπλασματικές παγκρέατος (η = 8) και των ιστών από πρωτογενή PC διαφόρων τάξεων (n = 58 ). Ένα δείγμα ιστού θεωρήθηκε θετικό εάν τουλάχιστον & gt? 5% των κυττάρων που εκφράζονται MUC 16. έκφραση MUC 16 δεν παρατηρήθηκε σε μη-νεοπλασματικές αγωγούς (Σχήμα 1Α). Ωστόσο, σε 38/58 (65%) περιπτώσεις PC, τα κακοήθη αγωγοί ήταν θετικά για MUC 16. Η έκφραση του MUC 16 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε PC σε σύγκριση με τα μη νεοπλασματικά αγωγούς (ρ = 0,003 με την ακριβή δοκιμή του two-tailed Fisher). Περαιτέρω, για να προσδιορίσει αν υπάρχει μία μεταβολή στην έκφραση MUC 16 με την εξέλιξη της PC, συγκρίναμε την έκφραση της μεταξύ των ιστών PC ταξινομημένα ανά στάδιο του όγκου και βαθμό. Υπήρξε μια προοδευτική αύξηση στην έκφραση του MUC 16 με απώλεια της διαφοροποίησης του όγκου, με το 50% του καλά διαφοροποιημένου (6/12), το 59% του μετρίως διαφοροποιημένα (13/22) και 66% των πτωχά διαφοροποιημένους ιστούς PC (16/24) να είναι θετικός (Σχήμα 1Α). Ενώ η έκφραση του MUC 16 δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των τριών ομάδων, η μέση σύνθετη βαθμολογία ήταν σημαντικά υψηλότερη σε μέτρια και φτωχά διαφοροποιημένο PC σε σύγκριση με καλά διαφοροποιημένο αδενοκαρκινώματα (p = 0.02 και 0.001 αντίστοιχα). Ωστόσο, το σύνθετο σκορ δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ της μέτριας και χαμηλής διαφοροποίησης περιπτώσεις PC. Αυτό υποδηλώνει ότι MUC 16 αυξάνει έκφραση σημαντικά με απώλεια διαφοροποίησης των ιστών PC.

Ο ιστός τομές ελήφθησαν από ACCUMAX υπό τη μορφή ενός πίνακα και χρωματίστηκαν με μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-MUC 16. Οι χρωματισμένες τομές παρατηρούνται κάτω από το μικροσκόπιο και η ανοσοαντιδραστικότητα κρίθηκε από την ένταση και την εξάπλωση της σκοτεινής κηλίδας. Αντι-MUC 16 αντίσωμα έδειξε καμία χρώση στο φυσιολογικό πάγκρεας ιστού (και οι δύο αγωγοί και acini), ενώ μια ισχυρή χρώση παρατηρήθηκε στα καρκινικούς ιστούς. οικόπεδο (Α) Box αντιπροσωπεύει το σκορ της MUC 16 στις διάφορες βαθμίδες του PC. Από το οικόπεδο κουτί παρατηρήσαμε την ανοσολογική αντίδραση να είναι υψηλότερη στην κακώς (D) και μετρίως διαφοροποιημένων (C) σε ιστούς σε σύγκριση με καλά διαφοροποιημένα (Β) ιστούς. Η κανονική πάγκρεας (Α) ιστού είναι επίσης αρνητική. Τα αντιπροσωπευτικά τμήματα που αποδεικνύουν την έκφραση MUC 16 στην κανονική του παγκρέατος αγωγοί και διάφορες ποιότητες διηθητικό αδενοκαρκίνωμα εμφανίζονται. Σημειώστε τη χρώση κυρίαρχο μεμβράνη του MUC 16 στο PC. (Β) Μελέτες έκφρασης του MUC 16 σε κανονική, παγκρεατίτιδα και παγκρεατικό καρκινικούς ιστούς με RT-PCR. RT-PCR πραγματοποιήθηκε σε mRNA που απομονώθηκε από φυσιολογικό ανθρώπινο παγκρεατικό ιστό (Ν1, Ν2), ανθρώπινο παγκρεατίτιδα ιστού (Pt1-PT6) και ανθρώπινο ιστό καρκίνου του παγκρέατος (PC1-PC17). Δεν παρατηρήθηκε ενίσχυση στους φυσιολογικούς ιστούς αλλά ενίσχυση παρατηρήθηκε στα καρκίνο του παγκρέατος και παγκρεατίτιδα ιστούς. Η ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος.

Η

Η διαφορική έκφραση των MUC 16 στο PC εξετάστηκε επίσης ελέγχοντας την έκφραση του MUC 16 στο μεταγραφικό επίπεδο με απομόνωση του mRNA από κανονικό ανθρώπινο παγκρεατικό, παγκρεατίτιδα και ιστούς PC. έκφραση MUC 16 mRNA ήταν απούσα σε φυσιολογικό παγκρεατικό ιστούς (0/2, 0%), αλλά υπήρχε σε 12/17 (71%) PC και 1/6 (16,7%) σε ιστούς παγκρεατίτιδα (Σχήμα 1Β). Οι περισσότεροι από τους ιστούς PC ταξινομήθηκαν ως μέτρια έως κακή διαφοροποιημένα PC (8/17). Υπήρξε 1 περίπτωση καλά διαφοροποιημένα PC, ένα από pseudopapillary νεοπλάσματος και από μία από ένα βλεννώδες κυστική αδενοκαρκίνωμα και γιγαντιαία όγκου των κυττάρων. 5/8 (62,5%) της μέτριας-χαμηλής διαφοροποίησης, 1/1 (100%) των καλά διαφοροποιημένο, 1/1 γίγαντας των κυττάρων του όγκου και 1/1 του βλεννώδες κυστική αδενοκαρκινώματος εξέφρασε MUC 16. Έξι PC ασθενείς είχαν επίσης ιστορικό χρόνιας παγκρεατίτιδας (CP). 5/6 (83%) των όγκων αυτών ήταν επίσης θετικά για MUC 16. Σε σύγκριση, 7 ασθενείς PC δεν έχουν καμία ιστορία της CP. Από τις περιπτώσεις αυτές, 5/7 (71,4%) ήταν θετικά για MUC 16. Η έκφραση των MUC 16 δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ εκείνων με ή χωρίς ιστορικό CP (Πίνακας 1).

Η

Διαφορικές ρύθμιση προς τα άνω των MUC 16 σε υψηλού βαθμού δυσπλασία του παγκρέατος

Αφού παρατήρησε ότι MUC 16 εκφράζεται μη φυσιολογικά σε πόρου αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος εμείς δίπλα επεδίωξε να μελετηθεί η έκφραση του MUC 16 κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του PC. Για το σκοπό αυτό, μελετήσαμε την έκφραση του σε προ-κακοήθεις αλλοιώσεις γνωστό ότι προηγείται επεμβατική αδενοκαρκίνωμα, το οποίο αποκαλείται παγκρεατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (PanINs). PanIN βλάβες ταξινομούνται ως PanIN Ι, PanIN II και PanIN ΙΙΙ που αντιστοιχούν σε χαμηλής, μέσης και υψηλής βαθμού δυσπλασία και χαρακτηρίζονται από σαφώς καθορισμένες ιστολογικές μεταβολές συμπεριλαμβανομένων πυρηνική ατυπία, πυρηνική συνωστισμού, pseudostratification και υψηλής PanINs βαθμό, cribriforming [20] . Παρατηρήσαμε ότι το 20% των PanIN-Ι (33/163), το 28% των PanIN-ΙΙ (55/197) και το 42% των βλαβών PanIN-ΙΙΙ (11/26) ήταν θετικοί για MUC 16 έκφραση αλλά η έκφραση της δεν ανιχνεύθηκε στις παρακείμενες κανονικές αγωγούς (n = 140), όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α. έκφραση MUC 16 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε τρία στάδια της δυσπλασίας (ρ & lt? 0.00001) σε σύγκριση με τις κανονικές αγωγούς. Αλλά έκφραση MUC 16 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε υψηλού βαθμού δυσπλασία (PanIN-III) σε σύγκριση με χαμηλού βαθμού δυσπλασία (PanIN-Ι, ρ = 0,02). Ωστόσο, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο MUC 16 θετικότητας μεταξύ PanIN-Ι και PanIN-ΙΙ (Σχήμα 2Β). Όπως και σε διηθητικό καρκίνωμα, MUC 16 εντοπίζεται κυρίως στην κυτταρική μεμβράνη των κυττάρων δυσπλαστικών.

(Α) MUC 16 έκφραση αξιολογήθηκε σε ιστούς που περιέχουν και τα δύο τις κανονικές πάγκρεας, και τις παρακείμενες βλάβες δυσπλαστικών. Ενώ η έκφραση MUC 16 ήταν αδύναμη στο χαμηλής ποιότητας, πρώιμο στάδιο PanIN βλάβες (PanIN Ι), που αυξάνεται προοδευτικά με την αύξηση της δυσπλασίας με την υψηλότερη έκφραση παρατηρήθηκε σε υψηλού βαθμού δυσπλασία (PanIN III) και PC. Σημειώστε τη χρώση κυρίαρχο μεμβράνη MUC 16 σε όλες τις βαθμίδες της PanINs (Original μεγέθυνση χ 200). οικόπεδο (Β) Κουτί που αντιπροσωπεύει το άθροισμα της βαθμολογίας MUC 16 στις διάφορες βαθμίδες της PanIN βλαβών και κανονική αγωγούς. Από το οικόπεδο κουτί παρατηρούμε ότι MUC 16 εκφράζεται έντονα στο PanIN ΙΙ και ΙΙΙ, σε σύγκριση με PanIN Ι

Η

Σύγκριση της έκφρασης MUC 16 μεταξύ πρωτογενών και μεταστατικών

καρκίνο του παγκρέατος

Πολλές πρωτεΐνες είναι που είναι γνωστό ότι έχουν μια διαφορική έκφραση σε πρωτογενείς έναντι μεταστατικού καρκίνου [21], [22]. Για να διερευνηθεί αν η έκφραση του MUC 16 μεταβάλλεται κατά τη διάρκεια της μετάστασης του PC σε απομακρυσμένες θέσεις, ερευνήσαμε την έκφραση της σε συμφωνημένα (που λαμβάνεται από τον ίδιο ασθενή) πρωτογενή παγκρεατικά αδενοκαρκινώματα και μετάσταση στους λεμφαδένες, τους πνεύμονες, το ήπαρ και επίπλουν /διάφραγμα (που λαμβάνεται ως μέρος της ταχείας αυτοψίας προγράμματος). MUC 16 δεν εκφράστηκε σε οποιοδήποτε από τα μη νεοπλασματικά αγωγούς, ενώ οι πρωτογενείς και μεταστατικούς όγκους από τον ίδιο ασθενή που εκφράζεται MUC 16 με σχεδόν την ίδια ένταση. Τα αποτελέσματα συνοψίζονται στο Σχήμα 3Α και 3Β. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην σύνθετη βαθμολογία μεταξύ των πρωτογενών και μεταστατικών τόπων (συνοψίζονται στον Θηκόγραμμα). Ωστόσο, οι ασθενείς οι οποίοι εξέφρασαν MUC 16 σε πρωτοπαθή όγκο τους εξέφρασαν επίσης MUC 16 στις μεταστατικές θέσεις. Αυτό υποδηλώνει ότι παγκρεατικών όγκων διατηρούν MUC 16 έκφραση κατά την διάρκεια της εξάπλωσής τους, πιθανώς δείχνουν προς το ρόλο των MUC 16 σε διάδοση κυττάρων PC.

Για να διερευνηθεί η μεταβολή στην έκφραση MUC 16 με την εξέλιξη, ερευνήσαμε την έκφραση των MUC 16 σε συμφωνημένα πρωτογενή παγκρεατικά καρκίνος και μετάσταση είτε πνεύμονα, λεμφαδένα, ήπαρ ή το επίπλουν /διάφραγμα. Στο (Α), ενώ η έκφραση της MUC 16 ήταν υψηλότερη σε μεταστατικό PC σε σχέση με την πρωτογενή όγκο, αυτό δεν ήταν σημαντική. Α- Κανονική πάγκρεας? Β- καρκίνο του παγκρέατος? C- μετάσταση στο ήπαρ? D-μετάσταση στους πνεύμονες? E- λεμφαδένων μετάσταση? F- επίπλουν /διαφράγματος μετάσταση. Περαιτέρω, (Β) δείχνει ότι στον ίδιο ασθενή, τα μη νεοπλασματικά αγωγών ήταν αρνητικές, ενώ υπήρχε μια ισχυρή έκφραση της MUC 16 στον πρωτογενή παγκρεατικού όγκου και αυτό διατηρήθηκε ακόμη και στην μετάσταση.

Η

η έκφραση των MUC 16 στις διάφορες ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος

Αφού έδειξε ότι MUC 16 είχε εκφράζονται διαφορικά σε ιστούς PC, ερευνήσαμε περαιτέρω έκφραση της σε κυτταρικές σειρές PC. Η έκφραση της MUC 16 τόσο στο mRNA (μέγεθος προϊόντος PCR είναι 341 bp) και παρατηρήθηκαν επίπεδο πρωτεΐνης σε Colo357, Τ3Μ4, ΗΡΑΡ /CD18, Dang, HPAC, SU86.86, FG και τα κύτταρα Capan-1 (Σχήμα 4Α και 4Β). Όλες οι άλλες κυτταρικές σειρές που δοκιμάστηκαν PC ήταν αρνητικά για έκφραση MUC 16. Για να οριοθετηθούν το υποκυτταρικό εντοπισμό των MUC 16, μελέτες ανοσοφθορισμού διεξήχθησαν στο /κύτταρα CD18 (MUC 16 εκφράζοντας) και SUIT2 και CD11 (MUC 16 μη-εκφράζουν) κυττάρων Capan1 και ΗΡΑΡ. Χρώση παρατηρήθηκε και στις δύο θετικές κυτταρικές σειρές σύμφωνη με την κατανομή των MUC 16 στους ιστούς και χωρίς κηλίδωση παρατηρήθηκε στις αρνητικές κυτταρικές γραμμές (Σχήμα 4C).

(Α) ανάλυση Western blot της έκφρασης MUC 16 στο PC κυτταρικές γραμμές. προϊόντα λύσης πρωτεΐνης από δεκαοχτώ κυτταρικές σειρές PC διαχωρίστηκαν σε ένα πήγμα SDS-αγαρόζης 2%. έκφραση MUC 16 παρατηρήθηκε σε Dang, HPAC, SU86.86, Colo357, CD18 /ΗΡΑΡ, Capan1 και κυτταρικές σειρές Τ3Μ4. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος (Β) RT-PCR ανάλυση της έκφρασης MUC 16 σε διάφορες κυτταρικές σειρές PC. Η ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. (C) μελέτες ανοσοφθορισμού των δύο κυτταρικών σειρών (CD18 και Capan1) που εκφράζει MUC 16 και δύο κυτταρικές σειρές (CD11 και SUIT2) που δεν εκφράζουν MUC 16.

Η

Συζήτηση

PC είναι η τέταρτη κύρια αιτία που σχετίζονται με τον καρκίνο των θανάτων στις Ηνωμένες Πολιτείες μόνο περίπου το 20% των ασθενών επιβιώνουν για 2 χρόνια και μόνο το 6% για πέντε χρόνια. συχνότητα εμφάνισης της στην αναλογία θνησιμότητας έχει παραμείνει ουσιαστικά αμετάβλητη για αρκετές δεκαετίες παρά τη σημαντική κατανόηση της βιολογίας της [23], [24]. Αυτό το υψηλό ποσοστό θνησιμότητας των PC ασθενείς οφείλεται στην τάση των καρκινικών κυττάρων να κάνουν μετάσταση νωρίς. Αυτό, σε συνδυασμό με την κακή ανταπόκριση στη θεραπεία και υψηλής ποσοστό υποτροπής είναι μία από τις πιο θανατηφόρες των καρκίνων είναι γνωστό στον άνθρωπο [24] κάνει. PC είναι συχνά διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο στάδιο, κυρίως λόγω της έλλειψης αξιόπιστων νωρίς διαγνωστικών δεικτών [24]. Ως εκ τούτου, υπάρχει επείγουσα ανάγκη για αναγνώριση συγκεκριμένων δείκτη πρώιμης ανίχνευσης (ες) και κατάλληλα μοριακών στόχων για την καταπολέμηση της PC. Βλεννίνες είναι ένα από τα σημαντικότερα βιοδείκτες που έχουν προκύψει τα τελευταία χρόνια ως εξαιρετικά ειδικών διαγνωστικών δεικτών σε διάφορες κακοήθειες, συμπεριλαμβανομένων του παγκρέατος, γυναικολογικές και κακοήθειες αναπνευστικής οδού [25]. Περαιτέρω, παρεκκλίνουσα έκφραση τους έχει αποδειχθεί ότι ρυθμίζει την κυτταρική ανάπτυξη, διαφοροποίηση, μετασχηματισμός, προσκόλληση, εισβολή και το ανοσοποιητικό επιτήρησης [7].

CA125 /MUC 16 είναι ένας βιολογικός δείκτης όγκου που χρησιμοποιείται σήμερα για την παρακολούθηση της ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών [26]. Ωστόσο, ο ρόλος του στην παθογένεση του υπολογιστή παραμένει ανεξερεύνητο. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε την μορφή έκφρασης του MUC 16 σε ιστούς PC και σε σύγκριση με ότι στην κανονική πάγκρεας. Επιπλέον, μελετήσαμε επίσης τη σύνδεσή της με την ανάπτυξη του υπολογιστή και με το στάδιο του όγκου, το βαθμό και τη μετάσταση. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η κανονική πάγκρεας δεν εκφράζουν MUC 16 αλλά η έκφρασή του ρυθμίζεται αυξητικά σημαντικά σε 12/17 PC και 1/6 παγκρεατίτιδα ιστού. Έχει προηγουμένως δειχθεί ότι υπάρχει μια σύνδεση μεταξύ του καρκινώματος του παγκρέατος και χρόνιας παγκρεατίτιδας (σποραδική και οικογενή) και το ποσοστό της πάγιας περιστατικό των αναπτυσσόμενων PC σε ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα είναι 14-18 [27]. Αυτή η παρατήρηση του MUC 16 που ρυθμίζεται αυξητικά σημαντικά το PC είναι συνεπής με την έκφραση άλλων μεμβρανικού βλεννινών MUC4 και MUC1 τα οποία επίσης εκφράζονται ανώμαλα σε PC και έχουν ταυτοποιηθεί ως πιθανοί διαγνωστικοί δείκτες για αυτό το κακοήθειας [24], [28] – [31 ] Παρατηρήσαμε επίσης ότι η έκφραση MUC 16 αυξήθηκε προοδευτικά με την απώλεια της διαφοροποίησης του όγκου PC. Έχει προηγουμένως παρατηρηθεί ότι οι ασθενείς PC που έχουν διαγνωστεί με μακρινή μετάσταση είχαν την τάση να έχουν πτωχά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος [32], [33]. Έτσι, τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι MUC 16 μπορούν να διαδραματίσουν στην εξέλιξη σημαντικό ρόλο και τη μετάσταση του υπολογιστή.

Σύμφωνα με το γνωστό μοντέλο εξέλιξης για PC, πορογενές καρκίνωμα αναπτύσσεται από μη-νεοπλασματικές αγωγούς όμως μια σειρά προκαρκινικών αλλοιώσεων ονομαστεί ως PanINs [33]. Παρατηρήσαμε ότι η έκφραση MUC 16 αυξάνεται προοδευτικά από PanIN Ι PanIN III. Ιδιαίτερα, το ποσοστό των MUC 16 θετικότητα σε υψηλής ποιότητας PanIN βλάβες ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη του χαμηλού βαθμού PanINs. Αυτό υποδηλώνει ότι η έκφραση MUC 16 μεταβάλλεται κατά το στάδιο της παγκρεατικής δυσπλασία και μπορεί να παίζει ένα κρίσιμο ρόλο στην εξέλιξη του PC. MUC4, μια άλλη δεσμεύεται βλεννίνη μεμβράνη έχει προηγουμένως δειχθεί ότι ρυθμίζεται προς τα πάνω διαφορικά με προοδευτικά αυξανόμενη δυσπλασία, γεγονός που υποδηλώνει την πιθανότητα ότι μπορεί να υπάρχουν ορισμένα κοινά ρυθμιστικά μονοπάτια που ρυθμίζουν την έκφραση και των δύο αυτών βλεννινών κατά την ανάπτυξη PC [28], [34], [ ,,,0],35]

το υψηλό ποσοστό θνησιμότητας σε ασθενείς PC οφείλεται στη συχνή εμφάνιση των μακρινών μεταστάσεων. Σε μια ανάλυση του 4012 αυτοψίες εκτελείται σε ασθενείς PC μεταξύ 1914 και 1943, αναφέρθηκε ότι η πιο κοινή θέση του μακρινές μεταστάσεις ήταν το ήπαρ, ακολουθούμενο από το περιτόναιο, του πνεύμονα και του υπεζωκότα, τα οστά και τα επινεφρίδια [33], [36] . Αλλά PC δεν περιορίζεται σε αυτά τα όργανα. Ακόμη και μικρές υπολογιστές (& lt? 2 εκατοστά σε διάμετρο) εμφανίζουν μετάσταση, υποστηρίζοντας την υπόθεση ότι ο υπολογιστής είναι μια κακοήθεια που μεθίσταται πολύ νωρίς κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του [33], [37] Μεταξύ των διαφόρων μορίων παρατηρούνται να παίξει ένα ρόλο στη μετάσταση του PC κύτταρα, βλεννίνες έχουν αναδειχθεί ως ένας από τους βασικούς καθοριστικούς παράγοντες. Έχουμε δείξει προηγουμένως ότι MUC4, μια άλλη διαμεμβρανική βλεννίνης όταν εκφράζονται προάγει μετάσταση και διεισδυτικότητα σε κύτταρα PC [18], [38], [39]. Στην παρούσα μελέτη, παρατηρήσαμε ότι οι πρωτογενείς υπολογιστές που εκφράζουν MUC 16 εκφράζουν επίσης MUC 16 με σχεδόν την ίδια ένταση στις μεταστατικές θέσεις. Αυτό υποδηλώνει ότι τα κύτταρα PC μπορούν να διατηρήσουν την έκφρασή τους του MUC 16 κατά τη διάρκεια της μεταστατικής διαδικασίας. MUC 16 έχει προηγουμένως αποδειχθεί ότι είναι σημαντική στην μετάσταση των συμπαγών όγκων στο κεντρικό νευρικό σύστημα μέσω της αλληλεπίδρασής της με mesothelin, μία πρωτεΐνη εκφράζεται διαφορικά σε κανονική μεσοθηλιακών κυττάρων, μεσοθηλιώματος και ορισμένες άλλες κακοήθειες μεσεγχυματικά [40], [41]. Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι MUC 16 μπορεί να αλληλεπιδρά με mesothelin και διευκολύνει τη μετάσταση σε PC.

Οι μοριακοί μηχανισμοί οδήγησης μετάστασης σε PC απαιτεί καλύτερη κατανόηση των πρωτεϊνών που ρυθμίζουν επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ) και η αντίστροφη διαδικασία (ΜΕΤ ), οι οποίες είναι απαραίτητες για την αποκόλληση και την εκ νέου προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων στο σημείο της μετάστασης, αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα της μελέτης μας δείχνουν ότι MUC 16 μπορεί να έχει ένα ρόλο για την ανάπτυξη και εξέλιξη των PC και μελετώντας ειδικό ρόλο της στην εξέλιξη της PC θα είναι η βάση της επόμενης μελέτης μας. προς τα πάνω ρύθμιση, η οποία ήταν ιδιαίτερα έντονη κατά τη διάρκεια των τελευταίων σταδίων της δυσπλασίας PC, υποδηλώνει ότι οι μηχανισμοί που γυρίζουν στην έκφραση της είναι πιθανόν ενεργοποιηθεί αργά κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του υπολογιστή. Μελέτες για MUC4 μουκίνη έχουν αποκαλύψει ότι η έκφρασή του σιγήσει στην κανονική αγωγούς λόγω της υπερμεθυλίωσης του υποκινητή του [42], [43]. Είτε παρόμοια επιγενετικές αλλαγές ρυθμίζει επίσης την έκφραση MUC 16 Απομένει να εξεταστεί σε μελλοντικές μελέτες. Η ανίχνευση των MUC 16 σε υψηλής ποιότητας PanINs (θεωρείται ότι είναι οι πραγματικοί αλλοιώσεις δυσπλαστικών με υψηλό κίνδυνο για διηθητικό καρκίνο) υποδηλώνει πιθανή χρήση της στην έγκαιρη ανίχνευση των δυνητικά κακοήθεις αλλοιώσεις στο πάγκρεας. MUC 16 είναι επίσης ρίξει στην κυκλοφορία του αίματος (γνωστό και ως CA125), γεγονός που το καθιστά ελκυστικό μόριο για την έρευνα ως πιθανή εκκρίνεται βιοδείκτη για τον υπολογιστή [44].

Επίσης να προσδιορίσει ένα κατάλληλο

in vitro

μοντέλο για τη διερεύνηση του λειτουργικού ρόλου του MUC 16, ένα πάνελ των κυτταρικών γραμμών PC σαρώθηκε για MUC 16 έκφραση τόσο σε πρωτεΐνη και το επίπεδο του mRNA. Σχετικά με την εκτέλεση ανάλυση κηλίδος western, παρατηρήθηκε ότι η έκφραση MUC 16 είτε εμφανίστηκε ως μια μονή ζώνη ή ως ραβδωτό μπάντα. Έχει δειχθεί προηγουμένως ότι όταν οι βλεννίνες κατεργασία με 2-μερκαπτοαιθανόλη και αναλύθηκαν σε ένα πήκτωμα SDS-PAGE, μια ραβδωτό ζώνη αποκτάται ως οι βλεννίνες έχει μειωθεί από ολιγομερής δομή της προς μονομερή μορφή της. Αυτή η μονομερής μορφή επιτρέπει βλεννινών να μεταναστεύουν ταχύτερα επί του πηκτώματος και άθικτα ολιγομερή παραμένουν στο φρεάτιο [45]. Αυτό εξηγεί έτσι το πρότυπο διαφορική έκφραση MUC 16 που λαμβάνεται κατά μήκος των διαφόρων κυττάρων PC γραμμές διαλογή. Επιπλέον, παρατηρήσαμε επίσης ότι κυτταρικές σειρές που εκφράζουν MUC 16, όπως Capan 1 (ήπαρ met), Colo 357 (λεμφαδένας met) και Τ3Μ4 (λεμφαδένας met) προήλθαν από μεταστατικές θέσεις, ενώ το MUC 16 μη κυτταρικές σειρές που εκφράζουν όπως PANC1 , AsPC1 και BxPC3 απομονώθηκαν από την πρωτογενή θέση όγκου (πάγκρεας). Περαιτέρω, από τα RT-PCR μελέτες παρατηρήσαμε ότι τα επίπεδα του mRNA του μερικές κυτταρικές σειρές PC δεν επιβεβαιώνουν με αντίστοιχα επίπεδα τους σε πρωτεΐνες. Είμαστε εικάζουν ότι MUC 16 mRNA υποβάλλεται μετά την μεταγραφική μεταποίηση σε ορισμένες κυτταρικές σειρές.