Αφηρημένο

Hematogenous λογαριασμούς μετάσταση για την πλειονότητα των θανάτων που σχετίζονται με τον καρκίνο, αλλά ο μηχανισμός παραμένει ασαφής. Κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων (ΚΜΑ) στο αίμα μπορεί να εφαρμόζει διαφορετικές οδούς για να διασχίσουν τα ενδοθηλιακά φράγμα αίματος και να δημιουργήσουν μια μεταστατική θέση. Αρκετές μελέτες παρέχουν αποδείξεις ότι ο καρκίνος του προστάτη (PCA) των κυττάρων πρόσδεση και το τροχαίο στο μικροαγγειακό ενδοθήλιο μέσω συνδέτη αλληλεπιδράσεις Ε-σελεκτίνης /Ε-σελεκτίνη κάτω από ροή διάτμηση προωθούν θεωρητικά εξαγγείωση και να συμβάλλει στην ανάπτυξη των μεταστάσεων. Ωστόσο, είναι άγνωστο αν CTCs από ασθενείς PCa αλληλεπιδρούν με Ε-σελεκτίνη εκφράζεται στο ενδοθήλιο, την έναρξη μιας διαδρομής για μεταστάσεις των όγκων. Εδώ αναφέρουμε ότι ΚΜΑ που προέρχονται από ασθενείς PCa έδειξαν αλληλεπιδράσεις με Ε-σελεκτίνη και Ε-σελεκτίνη που εκφράζουν ενδοθηλιακά κύτταρα. Για να εξεταστεί η Ε-σελεκτίνη με τη μεσολάβηση των αλληλεπιδράσεων των κυτταρικών γραμμών προστάτη και ΚΜΑ που προέρχονται από μεταστατικό ασθενείς PCa, χρησιμοποιήσαμε φθορισμό σημασμένο αντι-ειδικού προστατικού αντιγόνου μεμβράνης (PSMA) μονοκλωνικό αντίσωμα το οποίο J591-488 εσωτερικοποιείται εξής δεσμευτική κυτταρικής επιφάνειας. Χρησιμοποιήσαμε μια συσκευή μικροκλίμακα ροής που αποτελείται από Ε-σελεκτίνη επικαλυμμένα μικροσωλήνες και τα ανθρώπινα ενδοθηλιακά κύτταρα ομφάλιας φλέβας (HUVECs) σε θάλαμο ροής παράλληλες πλάκες προσομοίωση αγγειακό ενδοθήλιο. Παρατηρήσαμε ότι J591-488 δεν μετέβαλε σημαντικά τη συμπεριφορά κύλισης στα κύτταρα του προστάτη σε διατμητικές τάσεις κάτω από το 3 dyn /cm

2. ΚΜΑ που λαμβάνονται από τις 31 δείγματα ασθενών προστάτη έδειξαν ότι πρόσδεσης ΚΜΑ και σταθερά αλληλεπιδρούν με Ε-σελεκτίνη και Ε-σελεκτίνη εκφράζοντας HUVECs σε φυσιολογικό στρες διάτμησης. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα δείγματα που συλλέγονται κατά τη διάρκεια της εξέλιξης της νόσου έδειξαν σημαντικά περισσότερες αλληλεπιδράσεις CTC /E-σελεκτίνης από τα δείγματα κατά τη διάρκεια των χρόνων της θεραπευτικής ανταπόκρισης (

σ

= 0,016). Ανάλυση της έκφρασης του σιαλυλ Lewis Χ (SLE

x) σε δείγματα ασθενών έδειξε ότι ένα μικρό υποσύνολο που περιλαμβάνει 1,9 έως 18,8% των CTCs διαθέτουν υψηλή ΣΕΛ

x έκφρασης. Επιπλέον, η Ε-σελεκτίνη με τη μεσολάβηση των αλληλεπιδράσεων μεταξύ CTCs προστάτη και HUVECs ήταν μειωμένη με την παρουσία του αντισώματος εξουδετέρωσης αντι-Ε-σελεκτίνης. CTC-Η ενδοθηλιακή αλληλεπιδράσεις παρέχει μια νέα εικόνα για το δυναμικό κόλλα μηχανισμούς της ΚΜΑ προστάτη, ως μέσο για την κίνηση μετάσταση

Παράθεση:. Gakhar G, Navarro VN, Jurish Μ, Lee GY, Tagawa ST, Akhtar ΝΗ, κ.ά. . (2013) Κυκλοφορούν καρκινικά κύτταρα από Προστάτη Καρκινοπαθών αλληλεπιδρούν με Ε-σελεκτίνη υπό φυσιολογικές Blood Flow. PLoS ONE 8 (12): e85143. doi: 10.1371 /journal.pone.0085143

Επιμέλεια: Kjetil Tasken, Πανεπιστήμιο του Όσλο, Νορβηγία

Ελήφθη: 27 του Αυγούστου, 2013? Αποδεκτές: 23 Νοεμ 2013? Δημοσιεύθηκε: 27, Δεκεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Gakhar et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από μεταδιδακτορικός βραβείο εκπαίδευσης από το Τμήμα του Καρκίνου άμυνας-προστάτη Πρόγραμμα Έρευνας (W81XWH-12-1-0124, στο Γ Gakhar)? U54CA143876 από το National Cancer Institute (στο Ο.Μ. nanus και Μ.Κ. βασιλιά)? David Ίδρυμα H. Koch και του Ιδρύματος Robert Dow (με Ν.Η. Bander)? Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών Μεταπτυχιακή Ερευνητική Υποτροφία (με το Υ Geng)? από τις ΗΠΑ ΝΙΗ (R01 CA137020-01, με τον Π Γιαννακάκου)? Ο Charles H. Leach, Ίδρυμα ΙΙ, και ο Robert H. McCooey Ουρογεννητικό Oncology Ταμείο Έρευνας? από την Κλινική Μεταγραφική Science Center, το Εθνικό Κέντρο για την Ανάπτυξη της Μεταγραφική Επιστημών (UL1-TR000457-06, να P.J. Χρήστος). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν διαβάσει την πολιτική του περιοδικού και έχουν τα ακόλουθα συγκρούσεις. NHB είναι ένας εφευρέτης για τα διπλώματα ευρεσιτεχνίας που σχετίζονται με το αντίσωμα J591 που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη (ανατρέξτε στο αρχείο attachment- Bander_J591Patent). Αυτά τα διπλώματα ευρεσιτεχνίας ανατεθεί Cornell. Ο Δρ μπάντας είναι σύμβουλος και κατέχει μετοχές σε ΒΖΕ Biologics, η εταιρεία στην οποία οι πατέντες έχουν λάβει άδεια από CRF για περαιτέρω έρευνα και ανάπτυξη. MS είναι ένα συν-εφευρέτης στην ακόλουθη δίπλωμα ευρεσιτεχνίας που καλύπτει τη χρήση των ενδοθηλιακών κυττάρων E4orf1 (ενδοθηλιακά κύτταρα που εκφράζουν αδενοϊό E4orf1 και μεθόδους χρήσης αυτών, Δίπλωμα Ευρεσιτεχνίας ΗΠΑ # 8,465,732). Δεν υπάρχουν περαιτέρω διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα για την ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Η ανάπτυξη των μεταστάσεων είναι η υπόθεση για την κίνηση μέσω παρόμοιων μηχανισμών, όπως χρησιμοποιείται από λευκοκύτταρα για προσκόλληση και μετανάστευση μέσω του ενδοθηλίου του αίματος [1]. Ο καταρράκτης στρατολόγηση των λευκοκυττάρων στο ενδοθήλιο κατά τη διάρκεια της φλεγμονής περιλαμβάνει διαδοχικά βήματα, συμπεριλαμβανομένων πρόσδεση, το τροχαίο, πρόσφυση, και τελικά μετενσάρκωσης. Το αρχικό βήμα της tethering και κυλιόμενου συμβαίνει μέσω δυναμικών και παροδικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σελεκτίνες εκφράζεται από ενδοθηλιακά κύτταρα (ECs), και τους αντίστοιχους συνδέτες τους που είναι παρόντες επί λευκοκυττάρων κατά την διάρκεια της ροής του αίματος που προκαλεί συνεχή σπάσιμο και σχηματισμό δεσμών υποδοχέα-συνδετήρα. Αυτός ο κύκλος οδηγεί στην χαρακτηριστική συμπεριφορά κύλισης λευκοκυττάρων [2]. Στους ανθρώπους, η Ε-σελεκτίνη έχει δειχθεί ότι είναι κυρίως υπεύθυνη για τη μεσολάβηση σελεκτίνης κύλισης και πρόσδεση [3].

Πολυάριθμες μελέτες που χρησιμοποιούν κυτταρικές γραμμές όγκου και μοντέλα ποντικών υποδεικνύουν ότι τα ενδοθηλιακά (Ε) -selectin εμπλέκεται επίσης στην προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων, η μετανάστευση και την ανάπτυξη των μεταστάσεων [4,5].

In vivo

μοντέλα ποντικού έδειξαν ότι η Ε-σελεκτίνη προωθεί μεταστάσεις [6] και ανακατευθύνει μεταστάσεις στο ήπαρ [7]. Η σιμετιδίνη, η οποία αναστέλλει την επαγωγή της έκφρασης Ε-σελεκτίνης, μειώθηκαν σημαντικά μετάσταση στο ήπαρ των ΗΤ-29 κύτταρα καρκίνου κόλου σε ένα αθυμικό μοντέλο ποντικού χωρίς να επηρεάζουν την πρωτογενή όγκο [8]. Επιπλέον, Ε- και Ρ-σελεκτίνης ανεπαρκή ποντίκια ενέθηκαν με ΗΤ 29-καρκινικά κύτταρα έδειξαν μια σημαντική μείωση του αριθμού των μεταστάσεων πνεύμονα σε σύγκριση με ποντικούς άγριου τύπου [9].

Ο σύνδεσμος μεταξύ Ε-σελεκτίνης και μετάσταση οδήγησε σε πολλές μελέτες που χαρακτηρίζουν συνδετήρες σελεκτίνης επί των κυττάρων του όγκου επιφάνειες. συνδετήρες σελεκτίνης είναι ειδικές γλυκοπρωτεΐνες, οι οποίες γίνονται λειτουργικές μετά μετα-μεταφραστική τροποποίηση από γλυκοζυλοτρανσφεράσες και σουλφοτρανσφεράσες. Η παρουσία του σιαλυλο-Lewis Χ (SLE

x) και σιαλυλ-Lewis α (SLE

α), υδατάνθρακας επιτόπους συνδετήρων σελεκτίνης [10,11] συχνά συνδέεται με την εξέλιξη του καρκίνου και κακή πρόγνωση [12,13 ]. Μελέτες δείχνουν επίσης ότι η τροπισμός κυττάρων προστάτη στα οστά αποδίδεται στις αλληλεπιδράσεις μεταξύ Ε-σελεκτίνης που εκφράζεται επί του μυελού των οστών ενδοθηλιακά κύτταρα (ECs), και συνδετήρες Ε-σελεκτίνης που υπάρχει στα κύτταρα του προστάτη [14].

Τα αποδεικτικά στοιχεία που εμπλέκουν το ρόλο της Ε-σελεκτίνης και του συνδεσμικά σε μετάσταση όγκου προέρχονται από μελέτες που χρησιμοποιούν κυτταρικές γραμμές όγκου, αλλά δεν έχουν ποτέ επιβεβαιωθεί σε κυκλοφορούντα κύτταρα όγκου (ΚΜΑ) που προέρχεται από ασθενείς. Αναφέρουμε εδώ χρησιμοποιώντας

ex vivo

συνθήκες που ΚΜΑ απομονωθεί από άνδρες με ευνουχισμό ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη (CRPC) αποδεικνύουν φυσικές αλληλεπιδράσεις, κυρίως tethering και σταθερή πρόσφυση, με Ε-σελεκτίνη-επικάλυψη επιφανειών και Ε-σελεκτίνη εκφράζουν ECs κατά τη διάρκεια της φυσιολογικής ροής του αίματος. Επιπλέον, οι αλληλεπιδράσεις CTC /Ε-σελεκτίνης έδειξε σημαντική συσχέτιση με την κλινική ανταπόκριση των ασθενών στη θεραπεία. Αυτές οι αλληλεπιδράσεις μειωθεί με την παρουσία του αντισώματος εξουδετέρωσης αντι-Ε-σελεκτίνης. Επιπλέον, βρήκαμε μεταβλητή έκφραση του ΣΕΛ

x για ΚΜΑ, γεγονός που υποδηλώνει ότι πιθανότατα δεν είναι όλα τα CTCs συμβάλλουν στην μεταστάσεις.

Υλικά και Μέθοδοι

Οι κυτταρικές σειρές

PC3, C4-2, LNCaP, MDA προστάτη 2β (MDA), και KGI κύτταρα είναι από την ATCC (Manassas, VA, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής ). PCa κυτταρικές σειρές PC3, C4-2, και LNCaP διατηρήθηκαν σε RPMI συμπληρωμένο με 10% FBS, και MDA PCa 2b (MDA) διατηρήθηκε σε F-12K μέσο συμπληρωμένο με ορό 20% εμβρυϊκό ορό (FBS), 10 ng /ml EGF, 0,005 mg /ml ινσουλίνη, 100 pg /ml υδροκορτιζόνη, 25 ng /ml τοξίνης χολέρας, 45 ηΜ σεληνιώδες οξύ, και 0,005 mM φωσφοαιθανολαμίνης. κυττάρων KG1 (οξεία μυελογενή λευχαιμικά κύτταρα) καλλιεργήθηκαν σε μέσα ΙΜϋΜ συμπληρωμένο με 20% FBS.

Δήλωση Ηθικής και δείγμα ασθενούς συλλογή

Σύμφωνα με μια Weill Cornell Medical College Board Institutional Review (IRB) εγκεκριμένο πρωτόκολλο, 31 δείγματα περιφερικού αίματος ελήφθησαν από ασθενείς με CRPC και 10 δείγματα περιφερικού αίματος ελήφθησαν από υγιείς δότες μετά από έγγραφη ενημερωμένη συγκατάθεση. Ελήφθη αίμα σε σωληνάρια είτε Ficoll-Paque (7,5 ml αίματος το καθένα) ή BD Vacutainer σωλήνες (2,7 ml αίματος κάθε? Becton-Dickinson) που περιέχει 2,3% αντιπηκτικό κιτρικό νάτριο. λήφθηκε αποχαρακτηριστούν κλινικές πληροφορίες. Προσδιορισμός του κράτους όγκου (κλινική πρόοδο ή την κλινική ανταπόκριση) προσδιορίστηκε από 2 ανεξάρτητοι νοσοκομειακοί γιατροί χρησιμοποιούν πρότυπα κριτήρια.

Surface Σήμανση με αντι-PSMA μονοκλωνικού αντισώματος J591

κύτταρα MDA τρυψινοποιήθηκαν, φυγοκέντρηση, και επωάζονται σε ισορροπημένο διάλυμα άλατος του Hank (HBSS) /10 mM HEPES /2mM CaCl

2 /0.5% αλβουμίνη ανθρώπινου ορού (ρυθμιστικό Ι). Το μονοκλωνικό αντίσωμα J591 [15] που αναγνωρίζει την εξωτερική περιοχή του αντιγόνου ειδικού προστατικού μεμβράνης (PSMA) συζευγμένο με Alexa fluor-488 (J591-488) προστέθηκε σε MDA και τα κύτταρα PC3 (μόνο και κύτταρα εμπλουτίστηκαν σε φυσιολογικά υγιή αίμα) στα 20 μg /ml για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου σε ένα περιστροφέα, φυγοκεντρήθηκαν στις 1500 rpm για 5 λεπτά, και το σφαιρίδιο επαναιωρήθηκε σε μέσο RPMI. Μονοπυρηνικά κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) απομονώθηκαν από φυσιολογικούς υγιείς αίμα με Ficoll πυκνότητα που βασίζεται φυγοκέντρηση παρομοίως σε επεξεργασία, και τοποθετήθηκε επάνω σε BD κύτταρο-Tak (BD Biosciences, San Jose, CA) επικαλύφθηκαν καλυπτρίδες με cytospin. PBMCs σταθεροποιήθηκαν με χρήση 2% φορμαλδεΰδη (Τουσίμη, Rockville, MD) και χρωματίστηκαν με αντίσωμα ποντικού αντι-CD45 (1: 200, κλώνος 2D1, BD Pharmingen, San Jose, CA), πλύθηκαν με PBS και επωάστηκαν με αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού Alexa φθορίου (AF) -594 δευτερογενές αντίσωμα, πλύθηκαν και βάφτηκαν αντίθετα με DAPI.

Εμπλουτισμός CTCs από αντι-CD45 ανοσομαγνητικά σφαιρίδια εξάντληση

για να εμπλουτίσει για ΚΜΑ, PBMCs απομονώνονται από περιφερικό αίμα με πυκνότητας Ficoll με έδρα φυγοκέντρηση υποβλήθηκαν σε αρνητική επιλογή για λευκοκύτταρα χρησιμοποιώντας αντι-CD45 ανοσομαγνητικά σφαιρίδια (Life Technologies, Grand Island, ΝΥ). PBMCs πλύθηκαν δύο φορές με 2% RPMI /4mM MgCl

2/1 mM ΟαΟ

2 buffer (ρυθμιστικό II) και επωάστηκαν με προ-πλυμένο ανοσομαγνητικά σφαιρίδια αντι-CD45 σε 1 ml ρυθμιστικού διαλύματος Ι για 20 λεπτά σε περιστροφέα. Μετά την επώαση, 35 ml ρυθμιστικού διαλύματος Ι προστέθηκε και τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε μαγνήτη για 10 λεπτά στους 4 ° C. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε φυγοκέντρηση σε 400 g για 12 λεπτά και αντι-PSMA J591-488 αντίσωμα προστέθηκε για 40 λεπτά, φυγοκεντρήθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα Ι και το τροχαίο δοκιμασίες διεξήχθησαν. Για ανοσοκηλίδωση πειράματα, μετά αντι-CD45 ανοσομαγνητικά εξάντληση, τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 500 μΐ 2% μέσο RPMI και περιδινήθηκαν σε θετικά φορτισμένα γυάλινες πλάκες (Thermo Scientific, Asheville, NC). Τα πλακίδια φυλάχθηκαν στους -20 ° C για μετέπειτα ανοσοχρώση.

Flow-Based Microtube Δοκιμασία

Εν συντομία, αποστειρωμένα μήκος 50 cm από τους σωλήνες microrenathane «D» 300 μm (Braintree Scientific, ΜΑ) ήταν επωάστηκαν με 10 mg /mL διαλύματος πρωτεΐνης-G επί 1,5 ώρες, ακολουθούμενο από 2 ώρες επώαση με 10 μg /mL ανθρώπινη ανασυνδυασμένη IgG Ε-σελεκτίνης [16] (R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ) και αποκλείστηκαν με 5% γάλα για 1 ώρα. Όλες οι επωάσεις διεξήχθησαν σε θερμοκρασία δωματίου. σωλήνες ελέγχου είτε δεν επωάστηκαν με Ε-σελεκτίνη ή επωάστηκαν με 10 μg /ml ανθρώπινη ανασυνδυασμένη IgG L-σελεκτίνη (R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ). Τα επικαλυμμένα μικροσωλήνες τοποθετήθηκαν σε ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο εξοπλισμένο με κάμερα Zeiss AxioCam MRM. Μία αντλία σύριγγας (KDS 230, ΔΣΙΣ Life Science, Woodland Hills, CA) χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο της τάσεως διατμήσεως του κυτταρικού εναιωρήματος. Μία γνωστή συγκέντρωση 1 χ 10

6 μη επισημασμένα ή J591-488 σημασμένα κύτταρα MDA αραιώνεται στο ρυθμιστικό Ι εγχύθηκε πάνω από την επιφάνεια σε μία διατμητική τάση 0,5 dyne /cm

2 επί 3 λεπτά μετά το οποίο τα κύτταρα διαχύθηκαν σε διατμητικές τάσεις που κυμαίνονται 0,5 έως 8 dyn /cm

2. Βίντεο καταγράφηκαν για 30 δευτερόλεπτα στους 10 τυχαίες θέσεις κατά μήκος του μήκους κάθε μικροσωλήνα.

Για τη μέτρηση του ασθενούς αλληλεπιδράσεων CTC με Ε-σελεκτίνη, PBMCs ελήφθησαν από 21 δείγματα ασθενών CRPC μετά την εξάντληση αντι-CD45 και έξι δείγματα ασθενών χωρίς εξάντληση αντι-CD45 σημάνθηκαν με J591-488 και έρευσε πάνω από Ε-σελεκτίνη επικαλυμμένη μικροσωληνίσκοι στο 0,6 dyn /cm

2. J591-488 επισημασμένο CTCs οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας 488 nm μήκος κύματος λέιζερ. Μια σειρά συνεχών 45 βίντεο sec καταγράφηκαν χρησιμοποιώντας Axiovision μονάδα time-lapse (Carl Zeiss, Thornwood, NY). Όλοι οι σωλήνες και ρύγχη πιπετών ήταν προ-επικαλύφθηκαν με 0,5% λευκωματίνη ανθρώπινου ορού για να εμποδίσει μη-ειδική σύνδεση του CTCs.

ανάλυση στρωτή ροή για τις αλληλεπιδράσεις CTC-ενδοθηλιακών κυττάρων Μελίσσια CTC-ενδοθηλιακών αλληλεπιδράσεων, χρησιμοποιήθηκε

ένας θάλαμος ροής παράλληλες πλάκες [17]. HUVECs (ένα δώρο του Dr. Shahin Ραφιί) καλλιεργήθηκαν σε Μ199 μέσα ενημέρωσης, 1 Μ Hepes, 20% FBS, 5 mg /ml ηπαρίνη, 100 μg /ml αυξητικό παράγοντα ενδοθηλιακών κυττάρων, και L-γλουταμίνη. E4orf1-μεταδιηγερμένα HUVECs παρασκευάστηκαν και διατηρήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18]. κύτταρα MDA ή ΚΜΑ που προέρχονται από τέσσερα CRPC ασθενείς διαχύθηκαν πάνω από συρρέουσες μονοστοιβάδες ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων ομφάλιας φλέβας (HUVECs) αναπτύχθηκαν σε 35 χ 10 mm δίσκους καλλιέργειας ιστού (Corning Inc., Corning, ΝΥ). HUVECs διεγέρθηκαν αρχικώς με 50 ng /ml IL-1β (Peprotech, Rocky Hill, NJ) για 4 ώρες. IL-1β-διεγερμένα HUVECs σε επεξεργασία με 30 μg /ml εξουδετερωτικών αντι-Ε-σελεκτίνης (68-5H11, BD Pharmingen, CA) για 1 ώρα στους 37 ° C επωαστήρα, μη διεγερμένα HUVEC, και τα ανθρώπινα ICAM-1 αντίσωμα αντι-ποντικού ( κλώνος BBIG-Ι1, # BBA3 συστήματα Ε και) χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. κύτταρα MDA ή CTCs επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό Ι και διαποτίστηκαν εντός του θαλάμου ροής παράλληλες πλάκες πάνω HUVECs. τροχαίο κυττάρων MDA αξιολογήθηκε σε διαφορετικές διατμητικές τάσεις που κυμαίνονται 0,5 έως 4 dyn /cm

2 εκτελεί τρία ανεξάρτητα πειράματα. Για το τροχαίο μετρήσεις σε κέντρα θεραπείας χολέρας που προέρχονται από ασθενείς προστάτη, κύτταρα εμπλουτισμένα με αντι-CD45 ανοσομαγνητικά εξάντληση και επισημαίνονται με αντι-PSMA J591-488, διαχύθηκαν πάνω από κύτταρα HUVEC σε 0,6 dyn /cm

2 στρες διάτμησης. Όπως αναφέρεται στα αποτελέσματα, ένα υποσύνολο του τροχαίου πειράματα προσδιορισμού πραγματοποιήθηκαν επίσης με τη χρήση τεχνολογιών Bioflux Microfluidics (ρευστοποίηση Biosciences, San Francisco, CA).

ανάλυση Αποσυνδεδεμένος της Ε-σελεκτίνης με τη μεσολάβηση των αλληλεπιδράσεων

κύτταρα «κυλιόμενη» ορίστηκαν ως οποιαδήποτε κυτταρική μετάφραση κατά μήκος της επιφάνειας του σωλήνα για περισσότερο από δύο δευτερόλεπτα σε ταχύτητα μικρότερη από 50% του υδροδυναμικού ελεύθερη ταχύτητα ρεύμα ενός μη αλληλεπιδρώσες κύτταρο κοντά στο τοίχωμα του σωλήνα [19]. Rolling ταχύτητα ποσοτικοποιήθηκε καταγράφοντας την ποσότητα του χρόνου (t) που απαιτείται για ένα κυλιόμενο κύτταρο να κινηθεί σε μια γνωστή απόσταση (d). Τροχαίο ταχύτητα v = d /t.

Για την αξιολόγηση των αλληλεπιδράσεων της ΚΜΑ ασθενή που προέρχεται με Ε-σελεκτίνη, ΚΜΑ κατηγοριοποιήθηκαν σε τρεις κατηγορίες: 1) ΚΜΑ Σταθερό πρόσφυση (δηλαδή, κόλλησε στην επιφάνεια για περισσότερο από πέντε δευτερόλεπτα)? 2) Rolling /Πρόσδεση ΚΜΑ (δηλαδή, πρόσδεση αναφέρεται στην ΚΜΑ που αποδίδουν στην επιφάνεια, στη συνέχεια, αποσυνδέστε σε λιγότερο από πέντε δευτερόλεπτα και συνδέστε ξανά πάλι)? και 3) Μη-προσκολλημένα ΚΜΑ (ΚΜΑ που δεν κυλήσει /πρόσδεσης ή τηρούν την επιφάνεια).

χρώση ανοσοφθορισμού των δεικτών κυτταρικής επιφάνειας

Μετά τον εμπλουτισμό των PBMCs από ασθενείς ΣΕΣ, απομονωμένα κύτταρα συνδέθηκαν με τις γυάλινες πλάκες με cytospin, σταθεροποιήθηκαν σε 2% φορμαλδεΰδη (Τουσίμη, Rockville, MD) επί 20 λεπτά, και πλύθηκαν 3Χ με PBS. Τα κύτταρα αποκλείστηκαν με 2% BSA για 1 ώρα, και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα αρουραίου αντι-SLE

x (1:10, αντισώματος HECA-452, BD Pharmingen, San Jose, CA) ή πολυκλωνικό κουνελιού αντι-CXCR4 (1: 100, Novus Biologicals, Littleton, CO) mAbs επί 1 ώρα, και επωάστηκε με δευτερογενή Abs (κατσίκα AF594 αντι-αρουραίου και κατσίκας αντι-κουνελιού Dylight 405) για 1 ώρα, επωάστηκαν σε AF-488 και AF-647 συζευγμένα πρωτογενή αντισώματα για αντι-PSMA (εξανθρωπισμένο) και αντι-EpCAM (ποντίκι, κλώνος 9C4, BD Biosciences), αντίστοιχα, και τοποθετείται σε coverslide με φρεσκομαγειρεμένο Mowiol (Calbiochem, Billerica, ΜΑ). Όλες οι επωάσεις διεξήχθησαν σε θερμοκρασία δωματίου ακολουθούμενη από πλύση με 3Χ PBS συν 0,5% BSA. Για ανοσοφθορισμού βαφή, MDA, PC3, KG1cells και PBMCs ελήφθησαν από κανονικούς υγιείς δότες χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί και θετικοί έλεγχοι για διαφορετικές πρωτεΐνες. κύτταρα ελέγχου σπάρθηκαν σε BD κυττάρων-Tak επικαλυμμένες και επεξεργασία ομοίως ως δείγματα ασθενών. Ποσοτικοποίηση του ΣΕΛ

x δεδομένα έκφρασης που λαμβάνονται χρησιμοποιώντας Metamorph

λογισμικού TM (MDS Analytical Technologies, Sunnyvale, CA) και μετρώντας την μέση ένταση φθορισμού (MFI) ανά pixel [20]. Η ένταση φόντο, που καθορίζεται από την επιλογή ενός χώρου που στερείται ΚΜΑ, αφαιρέθηκε από τις τιμές αυτές για κάθε εικόνα. Για τις μετρήσεις αυτές, Ζ-στοίβες των εικόνων που χρησιμοποιήθηκαν ελήφθησαν από LSM 700 Zeiss Observer.Z1 (Carl Zeiss, μικροαπεικόνισης Inc, Thornwood, NY).

Western blot και immunofluorescene για την έκφραση Ε-σελεκτίνης σε HUVECs

Τόσο 1 ° και E4orf1 HUVECs διεγέρθηκαν με IL-1β για 4 ώρες. Μετά από διέγερση IL-1β, τόσο μη διεγερμένα και διεγερμένα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές με παγωμένο PBS. Τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (150 mM NaCl, 10 mM Tris HCL, ρΗ = 7,5, 5 mM EDTA) που περιέχει αναστολέα πρωτεάσης δισκίο Cocktail (1 δισκίο /10 ml ρυθμιστικού λύσης? Roche). Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης κυτταρολύματος προσδιορίστηκαν με τη μέθοδο Bradford. κυτταρόλυμα αραιώθηκε σε αναγωγικό ρυθμιστικό διάλυμα δείγματος 6Χ (12% β /ο SDS, 0,06% w /v κυανούν βρωμοφαινόλης, 47% ν /ν γλυκερόλη, 0,5 Μ Tris, ρΗ = 6,8, φέρει τον όγκο στα 10 ml με απεσταγμένο νερό) και διαχωρίστηκαν σε πήκτωμα 10% SDS-PAGE. Αποφασισμένοι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου (Bio-Rad, Inc., Hercules, CA) και αποκλείστηκαν σε 5% γάλα για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μεμβράνη κόπηκε και στη συνέχεια επωάστηκαν με αντι-Ε-σελεκτίνης (1: 500, 68-5H11, BD Pharmingen, San Jose, CA) και ποντικού αντι-β-ακτίνης (1: 10.000, Sigma Aldrich) για μία νύκτα στους 4 ° ΝΤΟ. Η ανοσοαντιδραστικότητα οπτικοποιήθηκε με Οδύσσεια Infrared System Imaging LI-COR (LI-COR Biosciences). Για ανοσοφθορισμό, αμφότερα 1 ° και E4orf1 HUVECs διεγέρθηκαν με IL-1β για 4 ώρες και τόσο μη διεγερμένα και IL-1β-διεγερμένα HUVECs σταθεροποιήθηκαν, κατέστησαν διαπερατά με 0,1% Triton-Χ 100, και ανοσοχρώση με αντι-Ε-σελεκτίνης μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (2,5 μg /ml, 68-5H11, BD Pharmingen, San Jose, CA) επί μία νύκτα στους 4 ° C. HUVECs βάφτηκαν με αντίσωμα Alexa φθόριο κατσίκας αντι-ποντικού 488 nm (1: 500, Molecular Probes) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. HUVECs πλύθηκαν και αντίθετα με DAPI.

Στατιστική Ανάλυση

Οι περιγραφικές στατιστικές παρουσιάζονται με ιστογράμματα δείχνουν μέση τιμή + τυπική απόκλιση (SD). Μέσα συγκρίθηκαν με δύο δείγμα t-test με τις κατάλληλες αριθμομηχανή διακύμανσης. οικόπεδα κουτί έγιναν και το μη-παραμετρικό τεστ rank-sum Wilcoxon διεξήχθη για να συγκρίνει τις κατανομές (δηλαδή, διάμεσος, εύρος) μεταξύ των ομάδων. Ένα ελάχιστο τριών ανεξάρτητων πειραμάτων διεξήχθησαν με καρκινικές κυτταρικές σειρές. ακριβές τεστ Fisher διεξήχθη για να αξιολογήσει τη σχέση μεταξύ της κατάστασης του ασθενούς αλληλεπίδρασης CTC /E-σελεκτίνη και την κατάσταση κλινική πρόοδο. Μια τιμή ρ

& lt? 0,05

θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική σε όλες τις αναλύσεις. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν στο STATA έκδοση 10.0 (StataCorp, College Station, TX).

Αποτελέσματα

Επισήμανση των καρκινικών κυττάρων του προστάτη με αντι PSMA-J591-488 αντισώματος

Για να ΚΜΑ μελέτη απομονώθηκαν από ασθενείς με CRPC, επωφεληθήκαμε του γεγονότος ότι & gt? 90% των κυττάρων προστάτη εκφράζουν PSMA στην κυτταρική τους επιφάνεια [21,22], και να χρησιμοποιηθούν mAbJ591-488, το οποίο αναγνωρίζει ένα εξωτερικό τομέα του PSMA και ταχέως εσωτερίκευση μετά τη δέσμευση να κυτταρικής επιφάνειας PSMA, για τον εντοπισμό του προστάτη CTCs [15,23] .. κύτταρα MDA εκφράζουν PSMA και PC-3 κύτταρα (PSMA αρνητικός έλεγχος) προστέθηκαν χωριστά σε φυσιολογικά υγιή αίμα, και το μίγμα επωάστηκε με mAbJ591- 488. Μετά την επώαση, συλλέχθηκαν η στρώση που περιέχει PBMC καρκινικά κύτταρα. Όπως αναμενόταν (Σχήμα 1Α), κύτταρα MDA εκφράζουν PSMA εσωτερικεύονται mAbJ591-488 και ήταν εύκολα ορατές υπό μικροσκοπία φθορισμού, ενώ mAbJ591-488 δεν συνδέθηκαν με τα κύτταρα PC3 (Εικόνα 1Β). πειράματα εμβολιασμού αίματος με MDA και PC3 πραγματοποιήθηκαν έξι φορές με τη χρήση διαφορετικών αίμα υγιούς δότη. Δεν έκφραση PSMA ανιχνεύθηκε σε περιβάλλοντα λευκοκύτταρα που ταυτοποιήθηκαν με ανοσοχρώση με αντι-CD45 αντίσωμα (Σχήμα 1 C). έκφραση PSMA επίσης δεν παρατηρήθηκε σε κύτταρα PC3 αναμιγνύεται με αίμα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι mAbJ591-488 να ετικέτα ειδικά κύτταρα του προστάτη και έτσι μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την επισήμανση PCa CTCs.

Τα καρκινικά κύτταρα καλλιεργήθηκαν είτε μόνα τους (Α, Β) ή με την παρουσία του υγιούς δότη προέρχονται PBMCs (C ). Τα κύτταρα σημάνθηκαν με J591-488 αντίσωμα (πράσινο) σε θερμοκρασία δωματίου, στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν και ανοσοχρώση για CD45 (κόκκινο) και DAPI (μπλε). Α) Κύτταρα MDA είναι θετικά για έκφραση PSMA. Β) PC3 κύτταρα είναι αρνητικά και ως εκ τούτου, δεν έχουν την έκφραση PSMA. Γ) Δικαίωμα subfigure δείχνει την ειδική έκφραση του PSMA από κύτταρα MDA, ενώ τα κύτταρα του αίματος εκφράζουν CD45. PBMCs απομονώθηκαν από φυσιολογικούς υγιείς δότες αναμίχθηκαν με κύτταρα MDA και σε επεξεργασία όπως στο Α, Β PSMA-θετικά καρκινικά κύτταρα MDA είναι σαφώς και ειδικώς απεικονίζεται (λευκό βέλος) μεταξύ των λευκοκυττάρων CD45 εκφράζουν (αιχμές βελών) στο μίγμα.

Πράσινο = PSMA, Κόκκινο = CD45, και Μπλε = DAPI

.

Η

Ε-σελεκτίνη-εξαρτώμενη προσκόλληση μη επισημασμένου και αντι-PSMA J591-488 επισημασμένα καρκινικά κύτταρα του προστάτη

Κατά τη διάρκεια μιας φλεγμονώδους απόκρισης, τα λευκοκύτταρα προσκολλώνται στο αγγειακό ενδοθήλιο από τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ της πρόσφυσης μόρια παρόντα στην αυλική πλευρά του αγγειακού ενδοθηλίου και συμπληρωματική συνδετήρες που υπάρχουν στα λευκοκύτταρα. Αυτές οι αλληλεπιδράσεις έχουν ως αποτέλεσμα την παροδική, δυναμική πρόσφυσης (έλαση) των κυττάρων στο αγγειακό τοίχωμα [2]. Rolling παρατηρείται λόγω της συνεχούς θραύσεως και σχηματισμό δεσμών υποδοχέα-συνδετήρα στο πίσω άκρο του κυττάρου και το εμπρόσθιο άκρο του κυττάρου, αντίστοιχα. Για να διερευνηθεί αν η Ε-σελεκτίνη-εξαρτώμενη αλληλεπιδράσεις συμβαίνουν σε ΚΜΑ προστάτη, χρησιμοποιήσαμε πρώτα MDA, PC3, LNCaP, και C4-2 προστάτη κυτταρικές γραμμές για την αξιολόγηση κύλισης συμπεριφορά τους με την παρουσία της Ε-σελεκτίνης-επικαλυμμένες επιφάνειες μικροσωλήνα. Από τις τέσσερις κυτταρικές σειρές που μελετήθηκαν PCa, ανιχνεύσαμε μόνο εύρωστη συμπεριφορά κύλισης σε κύτταρα MDA (τα δεδομένα δεν φαίνονται), σε συνέπεια με προηγούμενες μελέτες [24,25].

Το μονοκλωνικό αντίσωμα J591 εσωτερικεύεται παρακάτω κυτταρική επιφάνεια δέσμευσης υποδηλώνοντας ότι προστάτη ΚΜΑ μπορούν να φέρουν την ένδειξη

ex vivo

και σπούδασε για CTC-ενδοθηλιακών αλληλεπιδράσεων. Ωστόσο, για να αποκλείσει το ενδεχόμενο ότι η δέσμευση J591-488 και αλλάζει εσωτερίκευση τροχαίο συμπεριφορά, σημασμένα κύτταρα MDA με J591-488 και σε σύγκριση με το κυλιόμενο συμπεριφορά με μη επισημασμένα κύτταρα MDA σε διατμητικές τάσεις που κυμαίνονται 0,5 έως 8 dyn /cm

2 . Η μέση ταχύτητα κύλισης του μη επισημασμένου και J591-488-επισημασμένα κύτταρα MDA στα 0,5 dyn /cm

2 ήταν 5,27 + 1,28 μm /sec και 5,23 + 1,85 μm /sec (Σχήμα 2, ρ = 0,88, NS). Κάναμε παρατηρούμε μια μικρή αλλά στατιστικά σημαντική διαφορά στη μέση τροχαίο ταχύτητες των μη επισημασμένη έναντι J591-488 σημασμένα κύτταρα MDA σε 3 (7,04 + 1,15 vs 6,33 + 1,22 μm /sec,

p & lt? 0.005

) και 8 ( 17.81 + 3.51 vs 14,38 + 1,83 μm /sec,

p & lt? 0,0005

) dyn /cm

2 στρες διάτμησης. Ως εκ τούτου, με βάση τα αποτελέσματα μας και προηγούμενες μελέτες, πραγματοποιήσαμε πειράματα σε 0,6 dyn /cm

2, μια εφαρμόζεται ευρέως φυσιολογική διατμητική τάση να μετρήσει τροχαίο συμπεριφορά [17]. Επίσης, έχει αποδειχθεί ότι τα καρκινικά κύτταρα κυλήσει και πρόσδεσης σε χαμηλότερες τάσεις διάτμησης (

& lt? 3 dyn /cm

2) [26]. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι ΚΜΑ μπορούν να επισημανθούν με J591-488 και ότι φθορίζουσα επισήμανση των ΚΜΑ δεν επηρεάζει τη συμπεριφορά κύλισης σε χαμηλότερες διατμητικές τάσεις. Αξίζει να σημειωθεί ότι δεν είχαμε ανιχνεύσει οποιαδήποτε κύλισης συμπεριφορά είτε απουσία της Ε-σελεκτίνης σε οποιαδήποτε διατμητική τάση που εξετάστηκαν ή παρουσία της ανθρώπινης πρωτεΐνης ανασυνδυασμένου ί-σελεκτίνης (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), υποδεικνύοντας ότι η Ε-σελεκτίνη απαιτείται για το στρίψιμο συμπεριφορά. Βίντεο S1 και S2 δείχνουν το κυλιόμενο συμπεριφορά των μη σημασμένο και J591-488-σημασμένα κύτταρα MDA

. κύτταρα

MDA σημάνθηκαν με mAb J591-488 για PSMA. Μετά την επισήμανση, 10

6 J591-488 σημασμένα κύτταρα MDA διαποτίστηκαν σε 0,5, 1, 3, 5, και 8 dyne cm

στρες /2 διάτμησης. Παρομοίως μη επισημασμένα κύτταρα MDA ήταν επίσης διαχέεται μέσω επικαλυμμένα Ε-σελεκτίνη μικροσωλήνες. Δέκα βίντεο ελήφθησαν σε διάφορα μήκη του μικροσωλήνα για κάθε διατμητική τάση. Rolling ταχύτητα μετρήθηκε για αμφότερα μη σημασμένο και αντι-PSMA J591-488 επισημασμένα κύτταρα MDA. Το σχήμα δεν δείχνει σημαντική διαφορά στο κυλιόμενο ταχύτητα μεταξύ μη σημασμένο και αντι-PSMA J591-488 επισημασμένα κύτταρα MDA σε διατμητική τάση που κυμαίνεται από 0.5-1 dyn /cm

2. Οι μέσες ταχύτητες τροχαίο στο 0,5 dyn /cm

2 ήταν 5.27+ 1,38 και 5,23 + 1,85 μm /sec σε μη σημασμένο και J591-488 σημασμένα κύτταρα MDA, αντίστοιχα. Σε υψηλότερες τάσεις διατμήσεως, παρατηρήθηκε μία σημαντική διαφορά μεταξύ των δύο κατηγοριών των κυττάρων MDA. Ιστόγραμμα δείχνει τα αποτελέσματα από τρία ξεχωριστά πειράματα συνδυάστηκαν μαζί. Απερ = μη επισημασμένα κύτταρα MDA, Lab = J591-488 σημασμένα κύτταρα MDA. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή + SD.

Η

Ε-σελεκτίνη μεσολάβηση αλληλεπιδράσεων στην ΚΜΑ που προέρχονται από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη

επόμενο καθοριστεί αν ΚΜΑ που προέρχονται από ασθενείς ΣΕΣΣ θα αλληλεπιδρούν με E- σελεκτίνης παρόμοιο με κύτταρα MDA ΣΕΣΣ. PBMCs από ~ 6 ml (5.4 έως 7.5) του πλήρους αίματος λήφθηκαν από 17 μεμονωμένους ασθενείς (27 δείγματα αίματος) με μεταστατικό προστάτη, και επωάστηκαν με mAb J591-488. Μετά την επισήμανση, 21 δείγματα υποβλήθηκαν σε αντι-CD45 εξάντληση? ενώ σε 6 δείγματα, δεν εξάντληση αντι-CD45 Διεξήχθη. Τρέξαμε πρώτους έξι δείγματα ασθενών χωρίς αντι-CD45 εξάντληση. Στη συνέχεια, για να αποφευχθεί η μόλυνση των λευκοκυττάρων που μπορεί να μειώσει την πιθανότητα της ΚΜΑ που αλληλεπιδρούν με την επιφάνεια, χρησιμοποιήσαμε εξάντληση αντι-CD45 για να εμπλουτίσουν για τον πληθυσμό CTC. Το ποσοστό ανάκτησης αυτής της τεχνικής ήταν 60-70% με τη χρήση κυττάρων που εκφράζουν PSMA PCa (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Κάθε δείγμα ασθενής εγχύθηκε πάνω Ε-σελεκτίνη-επικαλυμμένες επιφάνειες μικροσωλήνα σε 0,6 dyn /cm

2 παράγει ένα ρυθμό διάτμησης τοιχώματος 60

-s, η οποία είναι εντός της περιοχής από φυσιολογικό ρυθμό διάτμησης τοιχώματος σε μετα-τριχοειδή φλεβίδια [27 ]. PCa CTCs επισημασμένο με mAb J591-488 ταυτοποιήθηκαν σε 23 δείγματα, και ο διάμεσος αριθμός των CTCs ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας offline ανάλυση βίντεο ήταν εννέα (εύρος 0-270) (Πίνακας 1). Εννέα από 23 (39,1%) και 10/23 (43,5%) των δειγμάτων του ασθενούς έδειξε το τροχαίο /tethering και σταθερή πρόσφυση, αντίστοιχα. Οι μεσολάβηση Ε-σελεκτίνη αλληλεπιδράσεις που παρατηρήθηκαν στην ΚΜΑ προστάτη αποτελείται ως επί το πλείστον tethering και σταθερή πρόσφυση με πολύ λίγες CTCs δείχνει τροχαίο συμπεριφορά. Όταν αξιολογείται κλινική κατάσταση κατά τη στιγμή της συλλογής και επεξεργασίας του δείγματος, διαπιστώσαμε ότι ΚΜΑ από τα δείγματα των ασθενών που εμφάνισαν κλινική ανταπόκριση ήταν σημαντικά λιγότερο πιθανό να έχουν Ε-σελεκτίνης με τη μεσολάβηση των αλληλεπιδράσεων σε σύγκριση με ΚΜΑ από κλινικά προχωρούν ασθενείς (Πίνακας 1? 0.0 % έναντι 61,9%, αντίστοιχα,

σ

= 0,016). εξάντληση αντι-CD45 δεν έχει επίδραση στην Ε-σελεκτίνη που εξαρτώνται από αλληλεπιδράσεις στην ΚΜΑ (Πίνακας 1, το δείγμα 1, 13, 17, 21, 22, 25)? αν και δεν μπορούμε να αποκλείσουμε εντελώς την πιθανότητα ότι μερικοί ΚΜΑ χάθηκαν κατά τη διάρκεια της διαδικασίας αντι-CD45 εξάντληση. Βίντεο S3 δείχνει ένα βίντεο από ένα δείγμα ασθενούς που αποδεικνύουν την αλληλεπίδραση του ΚΜΑ με Ε-σελεκτίνη. Αυτά τα αποτελέσματα παρέχουν άμεση φυσική απόδειξη ότι ΚΜΑ προστάτη που εκφράζουν PSMA αλληλεπιδρούν με Ε-σελεκτίνη και δείχνουν ότι η ΚΜΑ προστάτη έχουν συνδέτη Ε-σελεκτίνης (s) (ESLs) στην επιφάνεια των κυττάρων τους.

Ασθενής Νο

Δείγμα Νο

Rolling και Πρόσδεση

Σταθερό πρόσφυση

Σύνολο

κλινικό ιστορικό κατά τη στιγμή της συλλογής δειγμάτων

Κλινική Ανταπόκριση κατά τη στιγμή της συλλογής δειγμάτων

1 * 13329Bone και LN μεταστάσεις παρακάτω εξέλιξη κατά την docetaxel και για τα δοκιμαζόμενα θεραπεία σήμερα στην κετοκοναζόλη /hydrocortisoneProgression121310Bone και LN μεταστάσεις παρακάτω εξέλιξη κατά την docetaxel και για τα δοκιμαζόμενα θεραπεία σήμερα στην κετοκοναζόλη /hydrocortisoneProgression132814270Bone και LN μεταστάσεις μετά από εξέλιξη στην ορμονική θεραπεία, docetaxel, και για τα δοκιμαζόμενα θεραπεία σήμερα στην αμπιρατερόνη /prednisoneProgression140072Bone και LN μεταστάσεις παρακάτω εξέλιξη κατά την docetaxel και abiraterone σήμερα στην καρβοπλατίνη /paclitaxelResponding150012Bone και LN μεταστάσεις παρακάτω εξέλιξη κατά την docetaxel και abiraterone σήμερα στην καρβοπλατίνη /paclitaxelResponding26009Bone και LN μεταστάσεις αντιμετωπίζονται προηγουμένως με ορμονική θεραπεία και ντοσεταξέλη για τα δοκιμαζόμενα therapyProgression27004Bone και LN μεταστάσεις αντιμετωπίζονται προηγουμένως με ορμονικές θεραπεία και docetaxel σε δοκιμαζόμενα μεταστάσεις therapyProgression38035Bone μετά από πολλαπλές σειρές των ορμονικών μεταστάσεων therapyProgression39009Bone μετά από πολλαπλές γραμμές ορμονική θεραπεία για docetaxelResponding410012Bone, LN, του ήπατος και του πνεύμονα μεταστάσεις είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία με ντοσεταξέλη και abiraterone σήμερα στις μεταστάσεις καρβοπλατίνη /paclitaxelProgression511009LN με την πρόοδο στην ορμονική μεταστάσεις therapyProgression512001LN με την πρόοδο στην ορμονική θεραπεία και docetaxel κυκλοφορούν σήμερα στην αμπιρατερόνη /prednisoneResponding6 * 13400166bone μεταστάσεις με την εξέλιξη στις docetaxel και για τα δοκιμαζόμενα μεταστάσεις therapiesProgression614036bone με την εξέλιξη στην docetaxel, τα δοκιμαζόμενα θεραπείες, και abirateroneProgression7152141bone, LN, του παχέος εντέρου, και τις μεταστάσεις ουροδόχου κύστης μετά από ορμονική και για τα δοκιμαζόμενα therapyProgression716002bone, LN, του παχέος εντέρου και της ουροδόχου κύστης μεταστάσεις μετά την ορμονική και για τα δοκιμαζόμενα θεραπεία, σήμερα στην docetaxelResponding8 * 17023bones μεταστάσεις είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία με πολλαπλές γραμμές των ορμονικών therapyProgression818000bones μεταστάσεις είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία με πολλαπλές γραμμές της ορμονικής θεραπείας, επί του παρόντος docetaxelResponding919000bone μεταστάσεις προχωρούν στην αρχική ορμονική therapyProgression10202153LN και ηπατικές μεταστάσεις είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία με ντοσεταξέλη σήμερα στην abirateroneProgression11 * 219228bone μεταστάσεις είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία με ντοσεταξέλη, κετοκοναζόλη, και για τα δοκιμαζόμενα therapyProgression12 * 22102LN μεταστάσεις αντιμετωπίζονται ήδη δοκιμαζόμενο θεραπεία και docetaxel, επί του παρόντος enzalutamideProgression1323000bone και LN μεταστάσεις σε λευπρολίδης και bicalutamideProgression14240020bone και στους πνεύμονες μεταστάσεις είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία με ορμονική therapyProgression15 * 250010bone, LN, της ουροδόχου κύστης και του πνεύμονα μεταστάσεις προηγουμένως λάβει θεραπεία με τα δοκιμαζόμενα θεραπεία και docetaxelProgression1626000bone και LN μεταστάσεις είχαν προηγουμένως λάβει θεραπεία με τα δοκιμαζόμενα θεραπεία και docetaxelProgression17271022LN και μεταστάσεις κύστης προηγουμένως treatd με κετοκοναζόλη, docetaxel, τα δοκιμαζόμενα θεραπεία, σήμερα στην cabazitaxelProgressionTable 1. Οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ ΚΜΑ που προέρχονται από μεταστατικό ασθενείς του προστάτη και Ε-σελεκτίνη-επικάλυψη μικροσωλήνα . επιφάνειες

LN = λεμφαδένων? Σύνολο νοούνται όλα τα J591-επισημασμένο ΚΜΑ?