Αφηρημένο

Ιστορικό

αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς (ATC) είναι μία από τις πιο θανατηφόρες ανθρώπινες κακοήθειες. ταχεία έναρξη και την αντοχή του στη συμβατική θεραπευτική συμβάλει σε μια μέση επιβίωση έξι μήνες μετά τη διάγνωση και να κάνει την ταυτοποίηση των θυρεοειδικών κυττάρων καρκίνου-κίνηση όλο και πιο σημαντική.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Στην προηγούμενη μελέτες των κυτταρικών σειρών ATC, CD133

+ κύτταρα παρουσίασαν βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν με χαρακτηριστικά όπως η υψηλή πολλαπλασιασμό, αυτο-ανανέωση και την ικανότητα σχηματισμού αποικιών

in vitro

. Εδώ μπορούμε να δείξουμε ότι η μεταμόσχευση του CD133

+ κύτταρα, αλλά όχι CD133

– κύτταρα, σε ανοσοανεπαρκή ποντίκια NOD /SCID είναι επαρκής για να επάγει την ανάπτυξη των όγκων

in vivo

. Μπορούμε επίσης να περιγράφουν πώς η αναλογία των κυττάρων ATC που είναι CD133

+ αυξάνεται δραματικά πάνω από τρεις μήνες του πολιτισμού, από 7% σε περισσότερο από το 80% του συνόλου. Αυτή

+ πισίνα κυττάρων CD133 μπορεί να διαχωριστεί περαιτέρω με κυτταρομετρία ροής σε δύο διακριτές πληθυσμούς: CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή. Παρά το γεγονός ότι και οι δύο υποσύνολα είναι ικανά μακροχρόνιας ογκογένεση, η ταχέως πολλαπλασιαζόμενα CD133

+ /υψηλής κύτταρα είναι μακράν η πιο αποτελεσματική. Μπορούν επίσης εκφράζουν υψηλά επίπεδα του αντιγόνου βλαστοκυττάρων Oct4 και τον υποδοχέα για ορμόνη διέγερσης του θυρεοειδούς, TSHR. Αγωγή κυττάρων ATC με TSH προκαλεί μία τρεις φορές αύξηση του αριθμού των CD133

+ κύτταρα και προκαλεί μία δοσο-εξαρτώμενη αυξητική ρύθμιση της έκφρασης του

TSHR

και

Oct4

σε Αυτά τα κύτταρα. Το πιο σημαντικό, ανοσοϊστοχημική ανάλυση δειγμάτων ιστού από τους ασθενείς ATC υποδεικνύει ότι CD133 εκφράζεται έντονα σε κύτταρα όγκου, αλλά όχι σε γειτονικές φυσιολογικά κύτταρα του θυρεοειδούς.

Συμπεράσματα /σημαντικότητα

Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση που δείχνει ότι τα κύτταρα CD133

+ ATC είναι αποκλειστικά υπεύθυνοι για την ανάπτυξη του όγκου σε ποντίκια με ανοσοανεπάρκεια. Τα δεδομένα μας δίνουν επίσης μια μοναδική εικόνα για τη ρύθμιση του CD133 από TSH. Αυτά τα εξαιρετικά ογκογόνο

+ κύτταρα CD133 και η ενεργοποιημένη οδό σηματοδότησης TSH μπορεί να είναι χρήσιμη στόχων για μελλοντικές θεραπείες ATC

Παράθεση:. Friedman S, M Lu, Schultz Α, Thomas D, Lin RY (2009) CD133 κύτταρα

+ αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς Έναρξη όγκοι σε ανοσοκατεσταλμένα ποντίκια και ρυθμίζονται από θυρεοτροπίνη. PLoS ONE 4 (4): e5395. doi: 10.1371 /journal.pone.0005395

Επιμέλεια: Bernadette Breant, INSERM, Γαλλία

Ελήφθη: 30η Ιανουαρίου 2009? Αποδεκτές: 27, Μαρτίου 2009? Δημοσιεύθηκε: 30 Απριλίου 2009

Copyright: © 2009 Friedman et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο εν μέρει υποστηρίζεται από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας Grant R01 DK068057 (RYL). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του θυρεοειδούς είναι ο πιο κοινός τύπος του ενδοκρινικού καρκίνου [1]. συχνότητα εμφάνισης της αυξάνεται ταχύτερα από ό, τι οποιαδήποτε άλλη συμπαγή όγκο – περίπου 3 τοις εκατό ανά 100.000 ανθρώπους κάθε χρόνο [2] – και τώρα είναι η έβδομη πιο κοινός καρκίνος στις γυναίκες [1]. Περισσότερο από το 90% των καρκίνων του θυρεοειδούς προέρχονται από θυρεοειδή θυλακιώδη κύτταρα, είναι καλά διαφοροποιημένα και έχουν ευνοϊκή πρόγνωση. Σε αντίθεση, ο καρκίνος του θυρεοειδούς αναπλαστικό (ATC), ένα μη διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς, είναι σημαντικά πιο σοβαρή από άλλους καρκίνους του θυρεοειδούς και έχει φτωχή πρόγνωση. Ενενήντα τοις εκατό των ασθενών με ATC πεθαίνουν μέσα σε έξι μήνες. Μολονότι ATC αντιπροσωπεύει περισσότερο από το 50% των θανάτων που σχετίζονται με τον καρκίνο του θυρεοειδούς κάθε χρόνο, τα αίτια αυτής της ασθένειας είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστες. Οι τρέχουσες θεραπείες για ATC είναι επιθετικοί – συμπεριλαμβανομένης της χειρουργικής επέμβασης, της ακτινοθεραπείας και χημειοθεραπείας – αλλά καμία μελέτη δεν έχει δείξει μια πειστική βελτίωση στην επιβίωση [3], ίσως επειδή δεν στοχεύουν επαρκώς τα καρκινικά κύτταρα έναρξη της έρευνας. Οι περισσότερες θεραπείες του καρκίνου στοχεύουν διαφοροποιημένα ή διαφοροποίηση των κυττάρων, ανεξάρτητα από το αν είναι ή όχι καρκινικά. Ωστόσο, εάν η ασθένεια οφείλεται σε καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) [4], [5], αυτό θα μπορούσε να είναι η λανθασμένη προσέγγιση. Όπως φυσιολογικά βλαστικά κύτταρα, ΚΕΠ μπορεί τόσο να αυτο-ανανέωση και την παραγωγή διαφοροποιημένων απογόνων, συμπεριλαμβανομένης μιας φαινοτυπικά ποικίλο πληθυσμό καρκινικών κυττάρων να οδηγεί ογκογένεση. Διάφορες ενδείξεις υποδεικνύουν ότι τα ΚΕΠ, τα οποία είναι ιδιαίτερα ανθεκτικά σε πρότυπο χημειοθεραπευτικούς παράγοντες και ακτινοβολία, τη διατήρηση της νόσου στα τέλη φάσεις της κακοήθειας. Μέχρι σήμερα, ΚΕΠ έχουν απομονωθεί με βάση την ικανότητά τους να εκφράζουν ειδικούς επιφανείας κυττάρου μόρια σε αιματολογικές κακοήθειες και επιθηλιακά-κυττάρων που προέρχονται από καρκίνους, συμπεριλαμβανομένης της οξείας μυελοειδούς λευχαιμίας (CD34

+ CD38

-CD123

+) [ ,,,0],5], μαστικό καρκίνωμα (CD44

+ CD24

χαμηλή) [6], οι όγκοι του εγκεφάλου (CD133

+) [7], ο καρκίνος του παχέος εντέρου και του μελανώματος (CD133

+) [8] – [ ,,,0],11]

CD133 (προμινίνη-1) είναι ένα πεδίο πέντε-διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που εκφράζεται ειδικά σε πληθυσμούς των αιμοποιητικών αρχέγονων και προγονικών κυττάρων από το αίμα του εμβρύου και ενηλίκου λώρου, περιφερικό αίμα και μυελό των οστών [12] -. [15 ]. Παρά το γεγονός ότι η βιολογική λειτουργία του παραμένει άγνωστη, χρησιμεύει επίσης σαν ένας δείκτης των βλαστικών κυττάρων σε μια ποικιλία μη-αιματοποιητικούς ιστούς, συμπεριλαμβανομένων των νευρικών και νευρογλοιακών κυττάρων στον εγκέφαλο εμβρύου καθώς και του προστατικού επιθήλια, των μυών, των νεφρών, του ήπατος και στρώμα του κερατοειδούς, και μερικοί καρκινικούς ιστούς [15] – [24]. Πρόσφατα, Zito

et al

ανέφερε ότι, από τις τέσσερις ανθρώπινες κυτταρικές σειρές ATC εξετάστηκαν, δύο – ARO και KAT-4 – περιέχει υποπληθυσμών CD133

+ κύτταρα που εμφανίζουν βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν με χαρακτηριστικά όπως η ταχεία διάδοση , την ικανότητα να αυτο-ανανέωση και σχηματίζουν αποικίες, και αντοχή σε χημειοθεραπεία απόπτωσης

in vitro

[25]. Ως αποτέλεσμα, αυτοί οι πληθυσμοί πιστεύεται ότι είναι σε θέση να ξεκινήσει την ανάπτυξη του όγκου, αν και αυτή η υπόθεση δεν έχει ακόμη επικυρωθεί σε ζωικά μοντέλα.

Εδώ θα αξιολογήσει τις ογκογόνο δυναμικό του ATC-που προέρχονται

+ πληθυσμούς CD133

in vivo

. Χρησιμοποιήσαμε φθορισμό ενεργοποιημένων κυττάρων (FACS) για να χωρίσει την περαιτέρω CD133

+ κυττάρων σε δύο ξεχωριστά κλάσματα: CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή. Στη συνέχεια συνέκριναν την ικανότητα του CD133

+ /υψηλή, CD133

+ /χαμηλό και CD133

– κύτταρα να εμφυτευθούν και να οδηγήσει σε υποδόρια όγκων σε ποντίκια NOD /SCID. Χρησιμοποιήσαμε δύο μοντέλα ξενομεταμόσχευση στη μελέτη μας για να διερευνήσει την πιθανή ύπαρξη ΚΕΠ σε ATC: τον περιορισμό των πειραμάτων μεταμόσχευσης αραίωση για να διαπιστωθεί αν το σύστημα ξενομοσχεύματος μας ήταν ποιοτική και ικανή να ανιχνεύει μόνο τα καρκινικά κύτταρα-κίνηση, και ένα σειριακό μοντέλο ξενομοσχεύματος για να ελέγξετε τα κύτταρα » αυτο-ανανέωση και ικανότητες καταγωγή. Παρατηρήσαμε ότι, αν και οι δύο CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή κύτταρα παράγουν υποδόριων όγκων ξενομοσχεύματος που εμφανίζουν ιστολογία που μοιάζουν με τις πρωτογενείς όγκους, CD133

+ /υψηλής κύτταρα ξεκινήσει νωρίτερα και πιο επιθετική ανάπτυξη του όγκου. Βρήκαμε επίσης ότι θυρεοειδοτρόπου ορμόνης (TSH), ο κύριος ρυθμιστής της λειτουργίας του θυρεοειδούς αδένα, είναι σημαντική για την ανάπτυξη του CD133

+ πληθυσμό. Σε αντίθεση με τα φυσιολογικά κύτταρα του θυρεοειδούς, τα δείγματα ιστού ATC ήταν σαφώς θετική για CD133. Τα ευρήματά μας, σε συνδυασμό με την αναγνώριση των ΚΕΠ του θυρεοειδούς και την αποσαφήνιση του ρόλου της TSH στο CD133

+ ανάπτυξη των κυττάρων, μπορεί να οδηγήσει σε νέα διαγνωστικά δείκτες και θεραπειών για την αντιμετώπιση αυτής της καταστροφική ασθένεια.

Αποτελέσματα

CD133 εκφράζεται σε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές ATC, αλλά όχι σε θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς κυτταρικές σειρές

για να προσδιορίσετε αν υπάρχει ένας πληθυσμός CSC στο ATC, εξετάσαμε την έκφραση CD133 σε ένα πάνελ κυτταρικών σειρών καρκίνου ανθρώπινου θυρεοειδούς. Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε ότι CD133 εκφράζεται σε δύο κυτταρικές σειρές ATC, ARO (όπου 7,02% των κυττάρων είναι CD133

+) και FRO (όπου 6,32% των κυττάρων είναι CD133

+), αλλά όχι σε οποιαδήποτε από δύο καλά διαφοροποιημένες θηλώδους κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς (ΝΡΑ και TPC) (Σχ. 1Α). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η έκφραση CD133 είναι μοναδικά σχετίζεται με αδιαφοροποίητα ATC. χρώση ανοσοφθορισμού επιβεβαιώνει την έκφραση του CD133 στην επιφάνεια του CD133

+ αλλά όχι CD133

– (Εικ. 1Β) κύτταρα. Επιπλέον, οι δύο CD133 ο πληθυσμός αυξάνεται με διαφορετικό τρόπο στον πολιτισμό. Σε όγκους, CD133

+ κύτταρα παρουσιάζουν πλειομορφικές πυρήνες γίγαντας των κυττάρων και εμφανίζεται κοκκώδες και πυκνό? σε δισδιάστατη καλλιέργειες σχηματίζουν σφιχτά γύρο αποικίες. Σε αντίθεση, CD133

– κύτταρα στερούνται τα περισσότερα από αυτά τα χαρακτηριστικά. Παρόμοια με τα κύτταρα ARO, μεγαλώνουν ανεξάρτητα ως μικρά, στρογγυλά κύτταρα σε καλλιέργεια (Σχήμα 1Β).

(Α) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της έκφρασης CD133 σε ARO, FRO, ΝΡΑ και κυτταρικές γραμμές TPC. Μαύρες γραμμές αντιπροσωπεύουν θετική χρώση για CD133, γκρι δείχνει ισοτόπου ελέγχους. (Β) Κατάταξη σύμφωνα CD133

+ κύτταρα σχηματίζουν σφιχτά γύρω από τις αποικίες σε καλλιέργειες δύο διαστάσεων κυττάρων, ενώ CD133

– κύτταρα αναπτύσσονται ανεξάρτητα ως μικρά στρογγυλά κύτταρα. Ανοσοφθορισμού εικόνες του CD133

+ κύτταρα (επάνω μεσαίο πάνελ? 63 × μεγέθυνση) δείχνουν έκφραση CD133 ως

πράσινο

σήματος στην κυτταρική επιφάνεια. Σε αντίθεση, CD133

– κύτταρα στερούνται αυτό το σήμα (κάτω μεσαίο πάνελ? 20 × μεγέθυνση)

Η

CD133

+ κύτταρα εκφράζουν υψηλά επίπεδα των γονιδίων για Oct4 και TSHR

. ανάλυση

Ποσοτική πραγματικό χρόνο αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qRT-PCR) έδειξε ότι CD133

+ κύτταρα εκφράζουν περίπου τέσσερις φορές περισσότερο

Oct-4

όπως κάνουν CD133

– κύτταρα (Εικ. 2Α? 1,02 ± 0,25 (μέση τιμή ± SEM)

έναντι

0.27 ± 0.10 (μέση τιμή ± SEM),

P

& lt? 0,05). Oct4 είναι ένα μέλος της οικογένειας POU παραγόντων μεταγραφής και παίζει βασικό ρόλο στη διατήρηση της pluripotency και του πολλαπλασιασμού των εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων. Η έκφραση των Oct4 στο CD133

+ κυττάρων δείχνει ότι, σύμφωνα με μια προηγούμενη αναφορά [25], ο πληθυσμός αυτός έχει βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν με ιδιότητες που δεν είναι κοινά με CD133

– κύτταρα. Το CD133

+ πληθυσμού εκφράζει, επίσης, περίπου 13 φορές υψηλότερα επίπεδα

TSHR

από ό, τι το CD133

– πληθυσμού (Σχήμα 2Α?. 1.05 ± 0.53 (μέση τιμή ± SEM)

έναντι

0,08 ± 0,03 (μέση τιμή ± SEM),

P

& lt? 0,01). TSHR είναι ένας υποδοχέας γλυκοπρωτεΐνης συζευγμένου με πρωτεΐνη που διεγείρει την ανάπτυξη των φυσιολογικών και καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς με την παρουσία της TSH. Η ανακάλυψή μας που CD133

+ κύτταρα εκφράζουν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα TSHR συνεπάγεται ότι TSH ρυθμίζει επίσης την ανάπτυξη των CD133

+ κύτταρα.

(Α) ανάλυση qRT-PCR δείχνει ότι CD133

+ κύτταρα εκφράζουν υψηλότερα επίπεδα

Oct-4

και

TSHR

από ό, τι CD133

– κύτταρα. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος και s.e.m. Asterisk:

P

& lt? 0,05? δύο αστερίσκους:

P

& lt? 0,01. (Β) TSH ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση του

TSHR

και

Oct4

και αυξάνει τον αριθμό των CD133

+ κύτταρα. Αριστερό πλαίσιο: ανθρώπινη ανασυνδυασμένη TSH προκαλεί μια δοσο-εξαρτώμενη ρύθμιση προς τα άνω του

TSHR

και

Oct4

επίπεδα mRNA σε μη ταξινομημένα κύτταρα ARO. Δεξιά πίνακα: ο αριθμός των

+ κύτταρα CD133 αυξάνει τρεις φορές σε απόκριση προς διέγερση της TSH

Η

Ενισχυμένη τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και up-ρύθμιση του Oct4 και TSHR γονιδίων σε απάντηση σηματοδότηση TSH

οι κλινικές μελέτες έχουν δείξει ότι τα αυξημένα επίπεδα TSH μπορεί να είναι ένας δείκτης για την ανάπτυξη του καρκίνου του θυρεοειδούς [26] – [30]. Ειδικότερα, οι περισσότεροι ασθενείς με καρκίνο του θυρεοειδούς έχουν πάνω από το κανονικό επίπεδα της TSH. Επειδή CD133

+ κύτταρα εκφράζουν πολύ υψηλότερα επίπεδα από ό, τι TSHR CD133

– κύτταρα, εξετάσαμε την επίδραση της TSH στο CD133

+ πληθυσμούς. κύτταρα καλλιεργήθηκαν με ARO 0-1000 μU /ml ανασυνδυασμένης ανθρώπινης TSH για 48 ώρες επέδειξε μία εξαρτώμενη από τη δόση αύξηση στην σχετική έκφραση τόσο του

TSHR

και

Oct4

γονίδια (Εικ. 2Β) . Ο αριθμός των κυττάρων που εκφράζουν ARO CD133 αυξήθηκε επίσης περίπου τρεις φορές σε απόκριση σε θεραπεία TSH (Εικ. 2Β). Μαζί, αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι TSH διεγείρει τον πολλαπλασιασμό του CD133

+ πληθυσμούς

in vitro

.

κύτταρα ARO ανασύσταση ανθρώπινων όγκων ATC in vivo

Για να αναπτυχθεί ένα αξιόπιστο μοντέλο της ανθρώπινης βιολογίας ATC, ιδρύσαμε τέσσερις ARO υποδόρια ξενομοσχεύματα σε οκτώ εβδομάδων θηλυκά NOD ποντίκια /SCID. Τα ποντίκια με ένεση μονοκύτταροι αναστολές του 10

6 κύτταρα ARO αναπτύχθηκε ψηλαφητών όγκων μέσα σε λίγες ημέρες και ορατή όγκους εντός 21 ημερών. Αυτοί οι όγκοι είναι εντυπωσιακά παρόμοια με εκείνα από ασθενείς ανθρώπους και εμφανίζουν μικρή ομοιότητα με την αρχική δομή του θυρεοειδούς ωοθυλάκιο (Σχ. 3Α). Είναι σημαντικό ότι, διαπιστώσαμε ότι το ογκογόνο δυναμικό των κυττάρων ARO ποικίλλει ανάλογα με τον αριθμό πέρασμα τους: κύτταρα που είχαν καλλιεργηθεί σχηματίζεται πλέον μεγαλύτερη και πιο επιθετικούς όγκους όταν μεταμοσχεύονται σε ποντίκια NOD /SCID από ό, τι τα κύτταρα του μικρότερου αριθμού διόδου (σχήμα 3Α).. Είμαστε εικάζουν ότι το φαινόμενο αυτό οφείλεται στη θετική επιλογή πάροδο του χρόνου της πιο σθεναρά πολλαπλασιάζονται CD133

+ κυττάρων σε βάρος της CD133

– κύτταρα. Πράγματι, διαπιστώσαμε ότι δύο ARO καλλιέργειες που είχαν ανακαλλιεργήθηκε 50 ή περισσότερες φορές περιείχε ένα υψηλότερο ποσοστό (~50.1%) του

+ κύτταρα CD133 από ό, τι ARO καλλιέργειες χαμηλότερους αριθμούς διόδου (~21.9%) (Εικ. 3Β) . Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι η ανθρώπινη κυτταρική σειρά ARO περιέχει κύτταρα με την ικανότητα να σχηματίζουν όγκους σε νέα NOD ποντίκια /SCID και ότι τα επίπεδα έκφρασης CD133 συσχετίζονται θετικά με το σχηματισμό όγκων. Περαιτέρω, η ταχεία εξάπλωση των CD133

+ κυττάρων έχει ως αποτέλεσμα την ισχυρή θετική επιλογή αυτών των κυττάρων συναρτήσει του χρόνου, από το αρχικό 7.02% (Σχ. 1Α) του συνολικού πληθυσμού σε περισσότερο από 80% μετά από τρεις μήνες συνεχούς καλλιέργειας ( Σχ. 4). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι μια παρατεταμένη περίοδος του πολιτισμού μπορεί να μετατρέψει CD133

– κυρίαρχο πληθυσμού στο CD133

+ -. Κυρίαρχη πληθυσμούς

(Α) Όλα τα ποντίκια ένεση με 10

6 κύτταρα ARO αναπτυχθεί όγκους εντός 21 ημερών. Ανάλυση αιματοξυλίνη-Eosin αυτών των ξενομοσχευμάτων έδειξε ότι είναι εντυπωσιακά παρόμοια με τμήματα όγκου από ανθρώπους ασθενείς. Σημειώστε ότι οι όγκοι που δημιουργούνται από υψηλής διόδου κύτταρα ARO σχηματίζονται μεγαλύτερα και πιο επιθετικούς όγκους όταν υποδορίως μεταμοσχευθεί σε ποντίκια NOD /SCID από ό, τι οι όγκοι που δημιουργούνται από χαμηλή διέλευση κυττάρων ARO. (Β) ανάλυση FACS δείχνουν ότι τα κύτταρα ARO του μεγάλου αριθμού διέλευσης (δεξιά πάνελ, αριθμό πέρασμα & gt? 50) περιέχει ένα μεγαλύτερο ποσοστό των

κύτταρα CD133 + από ό, τι τα κύτταρα ARO του μικρού αριθμού διόδου (αριστερό πάνελ, αριθμό πέρασμα & lt? 10) .

Η

(Α) Το CD133

+ πληθυσμού μπορεί να διαχωριστεί περαιτέρω σε CD133

+ /υψηλό και CD33

+ /χαμηλών πληθυσμών με FACS. (Β) Η καθαρότητα του κάθε ταξινομημένο κλάσμα επιβεβαιώθηκε με ανάλυση FACS. (Γ) ARO δοκιμασία πολλαπλασιασμού κυττάρων (αριστερό πάνελ). δοκιμασίες πολλαπλασιασμού των κυττάρων δείχνουν ότι CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή κύτταρα πολλαπλασιάζονται ταχύτερα από ό, τι CD133

– κυττάρων κατά τις ημέρες του πολιτισμού τεσσάρων και οκτώ (δεξιά πλευρά). ανάλυση (D) qRT-PCR. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος και s.e.m. Asterisk,

P

& lt?. 0.05

Η

CD133

+ /υψηλής κύτταρα εκφράζουν υψηλότερα επίπεδα TSHR και Oct4 γονίδια από ό, τι CD133

+ /χαμηλό και CD133

– κύτταρα

Το CD133

+ πισίνα κυττάρων μπορεί να διαχωριστεί περαιτέρω με FACS σε δύο διακριτές υποπληθυσμούς: CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή (Σχήμα 4Α.). Σε μια ιδιαίτερα περάστηκαν καλλιέργεια κυττάρων ARO, περίπου το 80% των κυττάρων ήταν CD133

+ /χαμηλή, 16% ήταν CD133

+ /υψηλή, και 4% ήταν CD133

– (Σχ. 4Α). Επιβεβαιώσαμε την καθαρότητα των κλασμάτων μετά την ταξινόμηση (Εικ. 4Β) και διεξάγονται δοκιμασίες πολλαπλασιασμού των κυττάρων για να διαπιστωθεί αν υπάρχουν διαφορές στα ποσοστά πολλαπλασιασμό αυτών των υποπληθυσμών. Όπως ήταν αναμενόμενο, το CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή υποπληθυσμών πολλαπλασιάζονται πιο γρήγορα από ό, τι το CD133

– (Εικ. 4C) υποπληθυσμό

in vitro

. Ανάλυση qRT-PCR αποκάλυψε επίσης ότι το CD133

+ /υψηλή υποπληθυσμό εκφράζει τα υψηλότερα επίπεδα του

Oct4

και

TSHR

, ενώ CD133

– κύτταρα εκφράζουν τα χαμηλότερα επίπεδα από αυτά γονίδια (Εικ. 4D). Εκτιμήσαμε επίσης την έκφραση του

CXCR4

, ο υποδοχέας για το κύτταρο που προέρχεται από παράγοντα-1 CXCL2 χημειοκίνης στρωματικά που εκφράζεται σε μία ποικιλία στερεών όγκων, συμπεριλαμβανομένων ATC [31], [32]. Βρήκαμε ότι τα επίπεδα έκφρασης ούτε

CXCR4

ούτε ο δείκτης ενδόδερμα

Foxa2

διέφερε σημαντικά μεταξύ των τριών υποπληθυσμών (Εικ. 4D).

CD133

+ /υψηλής κύτταρα είναι άκρως ογκογόνο in vivo

για να ελέγξετε την υπόθεσή μας ότι μόνο ένα μικρό υποπληθυσμό πολύ πολλαπλασιασμού κυττάρων ARO είναι υπεύθυνη για το σχηματισμό όγκων, εμείς μεταμοσχεύονται ομάδες NOD /SCID ποντίκια με αύξηση του αριθμού των CD133

+ /υψηλή, CD133

+ /χαμηλό και CD133

– κύτταρα – από ένα ποσό συνήθως σε θέση να ξεκινήσει την ανάπτυξη του όγκου (~1,000 κύτταρα) σε ένα ποσό που ξεκινά πάντα την ανάπτυξη του όγκου (~100,000 κύτταρα). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, η έγχυση 100.000 έως 10.000 CD133

+ /υψηλή κύτταρα προκάλεσε ορατή όγκους σε όλους τους ποντικούς (4/4) εντός τεσσάρων εβδομάδων και 1 από 2 ποντικούς που έλαβαν ένεση με 1000 CD133

+ /υψηλή κύτταρα ανέπτυξαν έναν όγκο. Αντίθετα, αν ένεση 100.000 CD133

+ /χαμηλή κύτταρα έδωσε επίσης την ανάπτυξη νέων όγκων (4/4), μόνο 1 από τα 4 ποντίκια ανέπτυξαν έναν όγκο μετά την ένεση 10.000 CD133

+ /χαμηλή κύτταρα, και δεν παρατηρήθηκαν όγκοι όταν οι ποντικοί εγχύθηκαν με 1000 CD133

+ /χαμηλή κύτταρα. Δεν παρατηρήθηκαν όγκοι σε ποντικούς που έχουν εγχυθεί με οποιοδήποτε αριθμό CD133

– κύτταρα. Αξίζει να σημειωθεί ότι, υποδόρια όγκους που προέρχονται από την εισφορά των CD133

+ /υψηλής κύτταρα ARO αυξήθηκαν πιο γρήγορα σε NOD /SCID ποντίκια από ό, τι οι όγκοι που προέρχονται από CD133

+ /χαμηλή κυττάρων: τα ποντίκια ένεση με 100.000 CD133

+ /υψηλής κύτταρα αναπτύχθηκαν 250 χιλιοστά

3 όγκους εντός 16 ημερών και 1000 mm

3 όγκων μέσα σε 35 ημέρες, ενώ ποντίκια ένεση με 100.000 CD133

+ /χαμηλή κύτταρα που απαιτούνται 35 ημέρες για την ανάπτυξη 250 χιλιοστά

3 όγκων και 45 ημέρες για να αναπτύξει 1000 mm

3 όγκων (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι, αν και οι δύο CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή κύτταρα μπορεί να κινήσει όγκους, CD133

+ /υψηλής κύτταρα ξεκινήσει την ανάπτυξη του όγκου πιο αποτελεσματικά και να αναπτυχθούν πιο γρήγορα από ό, τι CD133

+ /χαμηλή κύτταρα.

Η

Μακροχρόνια ογκογόνο δυναμικό του CD133

+ /υψηλό και CD33

+ /χαμηλή κυττάρων σε NOD /SCID ποντίκια

Τα κύτταρα από πρωτοπαθείς όγκους που προέρχονται από την έγχυση του CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή κύτταρα σειριακά μεταμοσχεύθηκαν σε NOD ποντίκια /SCID για να καθοριστεί η μακροπρόθεσμη ογκογόνο δυναμικό των κυττάρων. Τα πειράματα μεταμόσχευσης περιορισμό αραίωσης περιγράφεται παραπάνω δείχνουν ότι το μέγεθος των όγκων συσχετίζεται θετικά με τον αριθμό των CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή κύτταρα εγχέονται. Οι όγκοι που προέρχονται από CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή πρωτοβάθμιας και δευτεροβάθμιας ξενομοσχευμάτων αναπαράγονται με συνέπεια τις πρωτογενείς όγκους στο ιστολογικό επίπεδο (Εικ. 5). Αν και οι δύο υποπληθυσμοί όχι μόνο διατηρείται ογκογόνο δυναμικό τους κατά τη διάρκεια

in vivo

πέρασμα αλλά και αυξημένη επιθετικότητα τους, όπως υποδεικνύεται από την επιτάχυνση της ανάπτυξης και την αύξηση του μεγέθους των διαδοχικώς δημιουργούνται όγκων, ο CD133

+ /υψηλής κύτταρα είναι συνολικά πιο επιθετική. Μαζί αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι όχι μόνο CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή κύτταρα έχουν μακροπρόθεσμες ογκογόνο δυναμικό, αλλά και ότι το μοντέλο ξενομοσχεύματος μας σύστημα ποσοτικά και ποιοτικά ανακεφαλαιώνει ογκογένεση

in vivo

.

(Α) CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή υποσύνολα των κυττάρων ARO κάθε έκθεμα μακροπρόθεσμη ογκογόνο δυναμικό. Υποδόρια όγκων σε NOD /SCID ποντίκια που προέρχεται από τη δευτεροβάθμια έγχυση CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή κύτταρα. (Β) με αιματοξυλίνη-ηωσίνη (Η &? Ε) ανάλυση έκφρασης και CD133 ξενομοσχευμάτων ποντικού που παράγεται από πρωτογενή και δευτερογενή ξενομοσχεύματα

Η

CD133 εκφράζεται έντονα σε χειρουργικές δείγματα ανθρώπινης ATC αλλά όχι σε φυσιολογικά κύτταρα του θυρεοειδούς.

για να κατανοήσουμε το ρόλο του CD133 στην ανθρώπινη ATC, είναι απαραίτητο να εξακριβωθεί αν η πρωτεΐνη CD133 εκφράζεται σε χειρουργική δείγματα που προέρχονται από ασθενείς με παθολογική και κλινική διάγνωση της ATC. Χρησιμοποιήσαμε την ανοσοϊστοχημική χρώση για να αξιολογήσει τα επίπεδα έκφρασης CD133 σε μια σειρά αρχειακών, συνήθως υποβάλλονται σε επεξεργασία, φορμόλη σταθερό, παραφίνη-ενσωματωμένες ATC δείγματα ιστού ασθενών (

n

= 10). Ανιχνεύσαμε την έκφραση CD133 σε 8 από τα δείγματα 10 (80%) ATC. Ένταση χρώσης κυμαίνονταν από ισχυρή έως μέτρια. Αντιπροσωπευτικά εικόνες των δειγμάτων ελέγχου εναέριας κυκλοφορίας που φαίνεται στο Σχ. 6. Εντυπωσιακά, CD133 εκφράζεται έντονα σε κύτταρα όγκου, αλλά όχι σε γειτονικές φυσιολογικά κύτταρα του θυρεοειδούς των ωοθυλακίων (Εικ. 6). Αντισώματος εξειδίκευση αποδεικνύεται μέσω μπλοκαρίσματος πεπτιδίου. Μαζί αυτά τα δεδομένα δεικνύουν ότι CD133 υπερεκφράζεται σε ATC κλινικά δείγματα σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς θυρεοειδούς.

(Α-Δ) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης CD133 σε δείγματα ελέγχου εναέριας κυκλοφορίας. Θετικά κύτταρα είναι καστανά. Σημειώστε ότι τα φυσιολογικά κύτταρα του θυρεοειδούς δεν εκφράζουν CD133 (βέλος). Η φωτογραφία στην κάτω δεξιά γωνία είναι χρώση του αντισώματος συν πεπτίδιο ανταγωνισμό CD133.

Η

Συζήτηση

ATC είναι ένα από τα πιο θανατηφόρα όλων των ανθρώπινων νεοπλασμάτων. Είναι ιδιαίτερα ανθεκτικό σε συμβατικές θεραπείες και το ποσοστό θνησιμότητας της προσεγγίζει το 100%. Η σχετική σπανιότητα και γρήγορα θανατηφόρα φύση της ATC περιπλέκουν τόσο τη διάγνωση και τη θεραπεία της. Η παρούσα μελέτη αποδεικνύει για πρώτη φορά ότι μόνο ένα υποπληθυσμό κυττάρων ATC είναι σε θέση να σχηματίζουν όγκους σε ποντίκια NOD /SCID. Εμείς ταυτοποιηθούν και να απομονωθούν αυτά τα κύτταρα με βάση την έκφραση του μια κυτταρική επιφάνεια CSC δείκτη, CD133, στην ανθρώπινη κυτταρική σειρά ATC ARO. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι τόσο λίγα όσο 1.000 CD133

+ /υψηλής κύτταρα και 10.000 CD133

+ /χαμηλή κύτταρα μπορούν να σχηματίσουν όγκους σε ποντίκια NOD /SCID. Σε αντίθεση, οι ποντικοί που ενέθηκαν με CD133

– κύτταρα παρέμειναν άνευ όγκου καθ ‘όλη τη διάρκεια της μελέτης. Αυτά τα δεδομένα αποκαλύπτουν ότι ογκογόνο και μη-ογκογόνο κύτταρα συνυπάρχουν μέσα ATC, και σημαίνει ότι δεν είναι όλα τα κύτταρα του όγκου είναι σε θέση να ξεκινήσει νεοπλασματική ανάπτυξη. Μάλλον, οι όγκοι αναπλαστικό παράγεται από ένα μικρό υποσύνολο των CSC κύτταρα που μπορούν να αυτο-ανανέωση και διαφοροποιούνται σε ολόκληρο τον πληθυσμό του όγκου. Μας

in vivo

δεδομένα υποστηρίζουν μια προηγουμένως μη χαρακτηρισμένα μοντέλο CSC για ATC ογκογένεση [33], [34]

Η τρέχουσα προσέγγιση στηρίζεται σε δύο σαφώς χαρακτηρισμένος ανθρώπινες κυτταρικές σειρές ATC:. ARO και FRO . Zito

et al

έχουν αναφερθεί στο παρελθόν ότι πάνω από το 60% των κυττάρων ARO ήταν CD133

+, και ότι FRO κύτταρα δεν εκφράζουν CD133 [25]. Αντίθετα, διαπιστώσαμε ότι το 7% περίπου των δύο ARO και FRO κύτταρα CD133

+ (Σχ. 1Α). Επιπλέον, παρά το γεγονός ότι ανοσοφθορισμού χρώση από εμάς (Εικ. 1Β) και άλλοι δείχνουν σαφώς ότι CD133 είναι μία πρωτεΐνη κυτταρικής επιφάνειας, ομάδα Zito περιγράφονται CD133 ανοσοχρώση ως κυτταροπλασματική και κορυφαία – άτυπα για πέντε διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη [25]. Υπάρχουν αρκετές πιθανές εξηγήσεις γι ‘αυτές τις διαφορές. Πρώτον, επειδή οι πηγές κυτταρικές γραμμές είναι διαφορετικό, είναι πιθανό ότι κληρονόμησε διαφορετικά χαρακτηριστικά. Για παράδειγμα, περιγράφουμε εδώ, πώς, όπως και πολλά ΚΕΠ, CD133

+ /υψηλής κύτταρα πολλαπλασιάζονται ταχύτερα από ό, τι CD133

– κύτταρα (Εικ. 3). Πάνω από μια παρατεταμένη περίοδο συνεχούς καλλιέργειας, παρατηρήσαμε ότι η αναλογία των κυττάρων CD133 +

στην καλλιέργεια ARO αυξήθηκε δραματικά από 7% έως 80%. Αν η ομάδα Zito μελέτησε έγκαιρης πέρασμα κύτταρα δώθε μπορούν να έχουν εσφαλμένα κατέληξε στο συμπέρασμα ότι τα κύτταρα δεν εκφράζουν CD133. Μια πρόσφατη έκθεση από Schweppe

et al

προτείνει, επίσης, ότι οι δήθεν κυτταρικές σειρές ATC ARO και KAT-4 είναι στην πραγματικότητα προέρχεται από τον καρκίνο του παχέος εντέρου κυτταρική σειρά ΗΤ-29 και δεν είναι του καρκίνου του θυρεοειδούς προέλευσης [35]. Αν και δεν είναι σαφές αν οι κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιούνται από Zito

κ.ά.

είχαν μολυνθεί, μελέτες αποτυπωμάτων γενετική ανάλυση και DNA θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν για να αποσαφηνιστεί η ταυτότητα αυτών των κυτταρικών γραμμών. Τέλος, θα πρέπει να επιβεβαιώσουν τα ευρήματά μας σε νωπά δείγματα χειρουργική ανθρώπινο ιστό ATC επειδή κυτταρικές σειρές δεν Ανακεφαλαιώνοντας πάντα όλες τις πτυχές των πρωτογενών όγκων. Ωστόσο, η σπανιότητα της νόσου μπορεί να κάνει αυτό το δύσκολο να επιτευχθεί.

Η ραγδαία εξάπλωση των CD133

+ κύτταρα μπορεί να εξηγήσει εν μέρει τουλάχιστον θανατηφόρα φύση της ATC. Οι υπάρχουσες διαγνωστικές μέθοδοι βασίζονται σε διάφορα χαρακτηριστικά: έλλειψη της πρόσληψης ραδιενεργού ιωδίου, μια άμεση επέκταση σε μαλακούς ιστούς, και μια ταχέως διευρυνόμενη μάζα αυχένα (μέσο μέγεθος στην παρουσίαση: 8 cm). Οι περισσότεροι ασθενείς που αγωνίζεται με αναπνευστικά προβλήματα από τη στιγμή που έχουν διαγνωστεί, και οι περισσότεροι από αυτούς τους καρκίνους είναι ήδη στάδιο IV-έχουν εξαπλωθεί ευρέως σε τραχηλικούς λεμφαδένες και απομακρυσμένα όργανα, όπως του πνεύμονα και των οστών, και είναι δύσκολο να στοχεύσουν και να σκοτώσουν ακόμη και με χειρουργική. Επειδή είναι πιθανό ότι η ταχέως αναπτυσσόμενη φύση του ελέγχου εναέριας κυκλοφορίας και οι επακόλουθες υψηλές απώλειες οφείλονται στην υψηλή πολλαπλασιαστική και ογκογόνο φύση του CD133

+ κύτταρα, φαίνεται λογικό ότι οι μελλοντικές θεραπείες θα πρέπει να σχεδιαστεί για να στοχεύσουν CD133

+ πληθυσμούς. φαρμακευτικές θεραπείες που στοχεύουν αυτοί οι πληθυσμοί είναι πιθανό να διαφέρουν από τις τρέχουσες χημειοθεραπείες για τους ασθενείς ελέγχου εναέριας κυκλοφορίας και μπορεί να είναι πιο επιτυχής στην αντιμετώπιση της νόσου.

μελέτες ανοσοϊστοχημική μας κλινικών ATC δείγματα που σαφώς έδειξε ότι CD133 εκφράζεται σε καρκινικά κύτταρα αλλά όχι σε γειτονικά φυσιολογικά κύτταρα του θυρεοειδούς. Το πιο σημαντικό, οι όγκοι που προέρχονται από CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή πρωτοβάθμιας και δευτεροβάθμιας ξενομοσχευμάτων αναπαράγονται πιστά τις πρωτογενείς όγκους στο ιστολογικό επίπεδο σε μοντέλα ξενομοσχεύματος μας (Εικ. 5). Μαζί αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι CD133

+ κύτταρα διατηρούν ογκογόνο δυναμικό τους κατά τη διάρκεια του

in vivo

πέρασμα και είναι πράγματι ΚΕΠ. ΚΕΠ αυτο-ανανέωση και την ανασύσταση συγκεκριμένα συστήματα οργάνων τους, μέσα από μια διαδικασία ασύμμετρη διαίρεση που δημιουργεί μια νέα βλαστικών κυττάρων και μία κόρη κύτταρο ικανό διαφοροποίησης. Μπορούν επίσης να διαιρέσει συμμετρικά για να σχηματίσουν είτε δύο κανονικές θυγατρικά κύτταρα ή δύο βλαστικών κυττάρων, ανάλογα με τις γύρω εξωκυτταρικό παράγοντες. Τα δεδομένα μας που CD133

+ κύτταρα παράγουν νέα ογκογόνο CD133

+ κύτταρα εκτός από μικτούς πληθυσμούς των μη ογκογόνων κυττάρων στηρίξει περαιτέρω την αντίληψη ότι είναι αλήθεια ΚΕΠ.

Shmelkov

κ.ά.

ανέφερε πρόσφατα ότι CD133 δεν μπορεί να είναι ένας αξιόπιστος δείκτης για τα ΚΕΠ του παχέος εντέρου. Χρησιμοποιώντας διαγονιδιακά ποντίκια που εκφράζουν LacZ κάτω από τον προαγωγό CD133, διαπίστωσαν ότι CD133 έτυχε ευρείας εκφράζεται σε φυσιολογικό και καρκινικό επιθήλιο του κόλου [36]. Επιπλέον, ανέφεραν ότι αν και οι δύο CD133

+ και CD133

– μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα μπορεί να κινήσει όγκους σε NOD ποντίκια /SCID, CD133

+ κύτταρα μπορούν να προκαλέσουν την πιο επιθετική CD133

– κύτταρα κατά τη διάρκεια της μεταστατικής μετάβαση [36]. ATC είναι ένα αδιαφοροποίητο καρκίνο του θυρεοειδούς, και η συμπεριφορά του είναι διαφορετική σε μεγάλο βαθμό από τον καρκίνο του παχέος εντέρου. Για παράδειγμα, βρήκαμε ότι τα φυσιολογικά κύτταρα του θυρεοειδούς δεν εκφράζουν CD133. Επιπλέον, τόσο CD133

+ /υψηλό και CD133

+ /χαμηλή υποσύνολα μπορεί να ξεκινήσει την ανάπτυξη του όγκου σε NOD ποντίκια /SCID, αλλά CD133

+ /υψηλής κύτταρα παράγουν περισσότερο επιθετικούς όγκους από CD133

+ /χαμηλή κύτταρα. Δεν είναι σαφές στη μελέτη μας, η οποία CD133 υποσύνολα παίζουν ρόλο στις μεταστάσεις ATC. τρέχον μοντέλο ξενομοσχεύματος μας εξαρτάται από την υποδόρια μεταμόσχευση κυττάρων CD133 σε NOD /SCID ποντίκια. Αυτή η τοποθεσία δεν είναι ένα κανονικό κόγχη των καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς και μπορεί να μην ανακεφαλαιώνουν πιστά το περιβάλλον που βιώνουν τα καρκινικά κύτταρα στον αρχικό όγκο. Αν και έχουμε δείξει ότι οι όγκοι που προέρχονται από είτε χύμα ή ταξινομούνται πληθυσμοί κυττάρων ARO είναι εντυπωσιακά παρόμοια με τον πρωτογενή όγκο, είναι κατανοητό ότι ο θυρεοειδής κρεβάτι μπορεί να στηρίζει καλύτερα την ανάπτυξη και διαφοροποίηση των ΚΕΠ του θυρεοειδούς. Το σημείο αυτό είναι ακόμη πιο σημαντικό αν αναλογιστούμε ότι ATC είναι τοπικά επιθετικός τύπος του θυρεοειδούς όγκου με υψηλό ποσοστό των απομακρυσμένων μεταστάσεων. Ως εκ τούτου, είναι εξαιρετικά σημαντικό για τη δημιουργία ενός ορθοτοπικό μοντέλο στο οποίο οι καρκινικά κύτταρα εγχέονται απευθείας εντός του θυρεοειδούς αδένα [37].

Βρήκαμε ότι CD133

+ κύτταρα υπερεκφράζουν προτίμηση γονίδια, όπως Oct4, ότι συνήθως εμπλουτισμένα σε εμβρυϊκά βλαστοκύτταρα. προηγούμενα προφίλ γονιδιακής έκφρασης RT-PCR μας δείχνουν ότι οι κυτταρικές σειρές ATC εκφράζουν τους δείκτες των εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων Rex1, Oct4 και Nanog. Η έκφραση ενός αριθμού δεικτών ενδοδερμικής, συμπεριλαμβανομένων Sox17, Foxa2 και SOx 7, ανιχνεύεται επίσης (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αν και αυτές οι καρκινικές κυτταρικές σειρές εκφράζουν επίσης TSHR και τον παράγοντα PAX8 θυρεοειδή μεταγραφής, άλλους δείκτες τελικά διαφοροποιημένα κύτταρα του θυρεοειδούς, όπως συμμεταφορέα νατρίου-ιωδίδιο και θυρεοσφαιρίνης, δεν εκφράζονται σε αυτές τις κυτταρικές σειρές (Friedman και Lin, αδημοσίευτες παρατηρήσεις). Τα αποτελέσματα αυτά είναι σε συμφωνία με αυτά που αναφέρθηκαν από Zito

et al

ο οποίος διαπίστωσε ότι ARO /CD133

+ κύτταρα εκφράζουν την thyroblast ειδικό μεταγραφικό παράγοντα TTF-1 και Oct4, αλλά δεν θυρεοσφαιρίνης, thyroperoxidase ή περιέχει νάτριο ιώδιο συμμεταφορέα [25]. Μαζί αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι τα κύτταρα ελέγχου εναέριας κυκλοφορίας δεν έχουν μόνο αρχίσει να πολλαπλασιάζονται ανεξέλεγκτα, μια ιδιότητα κοινή σε όλα τα καρκινικά κύτταρα, αλλά και ότι τα χαρακτηριστικά των διαφοροποιημένων κυττάρων του θυρεοειδούς χάσει. Τα αποτελέσματά μας αποκαλύπτουν μια προηγουμένως άγνωστη σχέση μεταξύ γονιδίων που σχετίζονται με τα εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα και τα κύτταρα του θυρεοειδούς και υποστηρίζουν την πιθανότητα ότι αυτά τα γονίδια συμβάλλουν στα CSC-όπως φαινοτύπους που παρουσιάζεται από πολλούς όγκους. Αυτές οι παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι οι ρυθμιστικές δίκτυα ελέγχουν την λειτουργία των κυττάρων του θυρεοειδούς μπορεί επίσης να είναι ενεργός σε ενεργοποιημένα Τ-λεμφοκύτταρα. Η ανακάλυψή μας που TSH μπορούν να ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό και την ανάπτυξη του CD133

+ κύτταρα μπορεί να έχουν σημαντικές επιπτώσεις. Κλινικά, η υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης καρκίνου του θυρεοειδούς εμφανίζεται σε ασθενείς με αφύσικα υψηλά επίπεδα της TSH. Βρήκαμε ότι CD133

+ κύτταρα υπερεκφράζουν το γονίδιο TSHR. Επιπλέον, αυτή η έκφραση ρυθμίζεται θετικά από TSH, υπονοώντας μια αυτορύθμισης μηχανισμό ανάδρασης (Εικ. 7). Είναι σημαντικό να διερευνηθεί περαιτέρω ο τρόπος TSH επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό των CD133

+ κυττάρων και, κατ ‘επέκταση, των άλλων ΚΕΠ. Ο ρόλος της ενεργοποίησης Oct4 στην επιβίωση του καρκίνου και τα γονίδια και πρωτεΐνες που διευκολύνουν την αυτο-ανανέωση του CD133

+ δικαιολογούν επίσης έρευνα.

TSH, ορμόνη διέγερσης θυρεοειδούς, TSHR, ο υποδοχέας για ορμόνη διέγερσης θυρεοειδούς, Κόκκινος κύκλος, CD133

+ /υψηλής κύτταρα, μπλε κύκλο, CD133

+ /χαμηλή κύτταρα, κίτρινο κύκλο, CD133

-. κύτταρα

Η

Εν ολίγοις, η ταυτοποίηση μας από αυτά ογκογόνων κυττάρων ATC είναι ένα κρίσιμο πρώτο βήμα για την κατανόηση του πώς σηματοδότηση TSH επηρεάζει την ανάπτυξη του CD133

+ κυττάρων και στην ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών θεραπειών για την ATC. Η διάγνωση της ATC σήμερα βασίζεται σε ένα σύνθετο πάνελ παθολογικών παραμέτρων και τη χρήση του CD133 ως νέου δείκτη για τον εντοπισμό ATC-καρκίνος-κύτταρα έναρξης μπορεί να είναι ένας πιο αξιόπιστος τρόπος για την ανίχνευση και την παρακολούθηση της εξέλιξης του καρκίνου. Τα ευρήματα αυτά θα πρέπει να τονώσει περαιτέρω μελέτες για να καθοριστεί εάν ποσοτικές ή ποιοτικές διαφορές στην έκφραση CD133 σε ATC έχουν προγνωστική αξία.