Αφηρημένο

Το ΕΤΠ-οικογένεια της τυροσίνης κινάσης υποδοχέων ενεργοποιεί κυτταροπλασματική οδών που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη μετανάστευση και τη διαφοροποίηση ως απάντηση σε συγκεκριμένα εξωκυττάρια συνδέτες. Εκτός από αυτά τα κανονικών μονοπατιών, ο πυρηνικός εντοπισμός του ErbB υποδοχέων σε πρωτογενείς όγκους και κυτταρικές γραμμές καρκίνου οδήγησε να διερευνήσει τον ρόλο τους ως ρυθμιστές της μεταγραφής των γονιδίων του καρκίνου. Η πυρηνική εντόπιση του ErbB3 έχει αναφερθεί σε διάφορους ιστούς του καρκίνου και κυτταρικές σειρές, αλλά οι πυρηνικές λειτουργίες και η υποτιθέμενη συσχέτιση με την εξέλιξη του όγκου και την αντίσταση στη θεραπεία παραμένουν ασαφείς. Εκτιμήσαμε την πρώτη έκφραση ErbB3 σε φυσιολογικών και καρκινικών ιστών του προστάτη. Η πυρηνική χρώση οφειλόταν κυρίως σε μια ισομορφή ταιριάζουν με την περιοχή C-τελικό άκρο της πλήρους μήκους ErbB3

υποδοχέα 185kDa. Πυρηνική χρώση περιορίζεται επίσης σε καρκινικά κύτταρα και αυξήθηκε σε προχωρημένο ευνουχισμός ανθεκτικά καρκίνο του προστάτη σε σύγκριση με εντοπισμένους όγκους, γεγονός που υποδηλώνει ότι μπορεί να εμπλέκονται στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη μέχρι το τερματικό ευνουχισμό ανθεκτικό στάδιο. ChIP-on-chip πειράματα διεξήχθησαν σε αθανατοποιημένες και όγκου κυτταρικές γραμμές επιλέγονται κατά χαρακτηρισμό ενδογενών πυρηνική έκφραση ενός ErbB3

80kDa ισομορφή. Μεταξύ των 1840 υποστηρικτές στόχων που προσδιορίζονται, επιλέχθηκαν 26 πριν ErbB3

έκφρασης 80kDa εξαρτώμενη από το γονίδιο αξιολογήθηκε με πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR, παρέχοντας ενδείξεις ότι ErbB3

80kDa που ασκείται μεταγραφικό έλεγχο σε αυτά τα γονίδια. Μερικοί στόχοι έχουν ήδη γνωστό ότι εμπλέκεται στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη, ακόμη και αν δεν σύνδεσμο προηγουμένως ιδρύθηκε με μεμβράνη ErbB3 και /ή πυρηνικών σηματοδότησης. Πολλοί άλλοι, δεν έχει ακόμη σχετίζεται με τον καρκίνο του προστάτη, θα μπορούσε να προσφέρει νέες θεραπευτικές δυνατότητες για ασθενείς που εκφράζουν ErbB3

80kDa. Ανίχνευση ErbB3

80kDa θα μπορούσε επομένως να αποτελέσει ένα χρήσιμο δείκτη της πρόγνωσης και της ανταπόκρισης στη θεραπεία

Παράθεση: Ελ. Maassarani M, BARBARIN Α, Fromont G, Kaissi O, Lebbe Μ, Vannier Β, et al. (2016) Ολοκληρωμένη και λειτουργική γονιδιωματική ανάλυση Επικυρώνει τη σημασία της πυρηνικής Variant ErbB3

80kDa σε καρκίνο του προστάτη Εξέλιξη. PLoS ONE 11 (5): e0155950. doi: 10.1371 /journal.pone.0155950

Επιμέλεια: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, ΑΥΣΤΡΙΑ

Ελήφθη: 20 Ιουλίου 2015? Αποδεκτές: 7η Μαΐου 2016? Δημοσιεύθηκε: May 18, 2016

Copyright: © 2016 El Maassarani et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Δεδομένων μικροσυστοιχιών διατίθενται σε ArrayExpress: E-mtab-3499, E-mtab-3504

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από την Ligue contre le καρκίνο, LCC PS /2012-13-14 στο PS? Groupe Pasteur Αμοιβαιότητα στην ΑΒ? και Ministère de l’éducation nationale de la recherche et des τεχνολογίες 2010-2014 σε ΜΕΜ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η οικογένεια EGF-υποδοχέων αποτελείται από τέσσερα κινάσης τυροσίνης (ΤΚ) υποδοχέων (EGFR /ErbB1, HER2 /ErbB2, HER3 /HER4 ErbB3 και /ErbB4) με ένα εξωκυτταρικό πεδίο σύνδεσης συνδετήρα, μια διαμεμβρανική περιοχή και μια ενδοκυτταροπλασματική περιοχή. Μετά τη σύνδεση στην επιφάνεια των κυττάρων ειδικό συνδετήρα, υποδοχείς ErbB διμερίζονται και ενεργοποιούν ενδοκυτταρικά μονοπάτια που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, μετανάστευση και διαφοροποίηση [1]. Η απελευθέρωση του ErbB κατάντη οδούς, μέσω τριών μηχανισμών δικτύου -Η αυξημένη έκφραση του υποδοχέα, η αυξημένη έκφραση συνδέτη ή ενεργοποίησης μετάλλαξη του τομέα- ΤΚ συχνά εμπλέκονται στην ογκογένεση [2]. Εκτός από την εντόπιση τους στην μεμβράνη του πλάσματος, ErbB υποδοχείς έχουν επίσης περιγραφεί στον πυρήνα και έχουν διάφορες λειτουργίες έχουν αποδοθεί στους μετατοπίζεται υποδοχείς ErbB μεταξύ των οποίων είναι ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων, την επιδιόρθωση του DNA και τον έλεγχο της μεταγραφής [3-8]. Σε αυτό το πλαίσιο, ο υποδοχέας ErbB1 πλήρους μήκους στον πυρήνα συνδέεται με αυξημένη έκφραση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και μεταστατικών γονιδίων [9-11]. Η έκφραση του προ-αποπτωτικών και προ-αγγειογενετική πρωτεΐνη COX-2 είναι διαμορφωμένο κατά ErbB2-δεσμευτική για τον

COX-2

προαγωγού σε μαστικά κύτταρα όγκου [12]. ErbB2 λειτουργεί επίσης ως ένας μεταγραφικός συν-ενεργοποιητή της πρωτεΐνης Stat3 στο

CCND1

(Κυκλίνη D1) υποκινητή [13] και συνεργάζεται με ErbB1 την πλειορύθμιση

STAT1

γονιδιακή έκφραση [14] . Το πλήρες μήκος ErbB3

πρωτεΐνη 185kDa ή βραχείας ισομορφές έχουν περιγραφεί στον πυρήνα των φυσιολογικών επιθηλιακών κυττάρων μαστού [15] και τα κύτταρα Schwann [16], καθώς και σε διάφορες κυτταρικές σειρές ανθρώπινου καρκίνου: του μαστού (SKBR3, MCF-7 et ΒΤ474), του πνεύμονα (H226 et SCC6) κεφαλής και του τραχήλου (SCC6 et SCC1) και του παχέος εντέρου (LoVo et Caco2) [15, 17-19]. Σε Η358 μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) και κυτταρικές σειρές μαστού SKBR3, ErbB3 έχει αποδειχθεί ότι ασκεί λειτουργία ως συν-μεταγραφικός ενεργοποιητής για

CCND1

γονιδιακή έκφραση [17,19]. Το ισχυρό δυναμικό διενεργοποίησης του ErbB3 βασίζεται σχεδόν αποκλειστικά στο τερματικό πεδίο C του υποδοχέα [19].

Ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η πιο κοινή κακοήθεια και ουρολογικές η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις βιομηχανικές χώρες . Όγκου υποτροπή μετά από χειρουργική εκτομή ή ακτινοθεραπεία εμφανίζεται συχνά σε ένα σημαντικό ποσοστό ασθενών που αναπτύσσουν διάχυτη επιθετική ασθένεια. Καθώς τα κύτταρα του προστάτη βασίζονται σε υποδοχέα ανδρογόνων (AR) δραστηριότητα για την ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό, ανδρογόνων θεραπεία απόσυρση έχει υιοθετηθεί σε αυτές τις προχωρημένες περιπτώσεις [20]. Οι ευεργετικές επιδράσεις που παρατηρούνται για περίπου 24 μήνες πριν ο ασθενής αναπτύσσει θανατηφόρα ευνουχισμό ανθεκτικά-καρκίνο του προστάτη (CRPC). Μοριακοί μηχανισμοί που εμπλέκονται στην αντίσταση θεραπεία παραμένει ακόμα ασαφής. Μια εξήγηση για την υποτροπή του ασθενούς μετά τη θεραπεία θα μπορούσε να προέλθει από την cross-talk μεταξύ AR σηματοδότησης και της επιθηλιακής αυξητικού παράγοντα της οικογένειας των υποδοχέων (EGFR) οδών [21]. Οι υποδοχείς ErbB και τους συνδέτες τους εκφράζονται στο φυσιολογικό ενήλικα προστάτη για τη διατήρηση της ομοιόστασης του οργάνου και ErbB1, ErbB2 και ErbB3 συχνά αυξάνεται κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του προστάτη [22]. Σε CRPC, αυξημένη υποδοχέα ErbB2 και /ή ErbB1, ErbB2 ή έκφραση ErbB3-συνδετήρων συνδέεται με κακή πρόγνωση και μετάσταση [23-25].

Για την παράκαμψη των μηχανισμών αντίστασης στην ανδρογόνων-θεραπεία, ErbB1 και έχουν ErbB2 TK-αναστολείς έχουν ελεγχθεί μαζί με ορμονοθεραπεία που βασίζεται σε ασθενείς με υψηλής ποιότητας, CRPC όγκους. Ωστόσο, δοκιμές δεν ήταν επιτυχείς, όπως τα καρκινικά κύτταρα αναπτύσσονται αντισταθμιστικά μονοπάτια ρυθμίζοντας την έκφραση ErbB3 και εντοπισμός [18,26]. Πράγματι, αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει την πυρηνική εντόπιση του ErbB3 σε ιστούς του προστάτη και κυτταρικές σειρές προστάτη δυνητικά συσχετίζονται με την εξέλιξη της νόσου [18,27] .Η πυρηνική πρωτεΐνη ErbB3 θα μπορούσε επομένως να διαδραματίσει κεντρικό ρόλο στην εξέλιξη του προστάτη και θεραπεία αντίστασης, αλλά οι μοριακοί μηχανισμοί εμπλέκονται παραμένουν ακόμα ανεξερεύνητα.

Η παρούσα μελέτη καταδεικνύει τη λειτουργική σημασία της ErbB3 πυρηνικού εντοπισμού στη ΣΕΣΣ και παρέχει νέα στοιχεία για την κατανόηση των μονοπατιών που σχετίζονται με την εξέλιξη του καρκίνου και την αντίσταση της θεραπείας.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς μικροσυστοιχίες ιστών

Γράφει πληροφορημένες συγκαταθέσεις ελήφθησαν από ασθενείς, σύμφωνα με τις απαιτήσεις του θεσμικού επιτροπή ηθικής του Κέντρου Hospitalo-Universitaire de Poitiers, που ενέκρινε τη μελέτη. 169 φορμόλη-σταθερό, παραφίνη-ενσωματωμένες, αρχειακό ιστών από ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με το «νοσοκομειακό κέντρο de Poitiers» για την PCA, είχαν συμπεριληφθεί. 137 δείγματα ιστού ελήφθησαν από ορμόνη-ευαίσθητη (HS) ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή για κλινικά εντοπισμένο καρκίνο, κανένας από αυτούς τους ασθενείς έλαβαν θεραπεία ορμονικής αποστέρησης πριν από την επέμβαση. Από αυτούς, 97 ήταν σταδίου pT2 και 40 ρΤ3. Η βαθμολόγηση Gleason ήταν αντίστοιχα 6 σε 38 ασθενείς, 7 σε 83 ασθενείς, και 8 ή περισσότερο σε 16 ασθενείς. 32 δείγματα ιστού ελήφθησαν από trans-uretral εκτομή από CRPC ασθενείς. Επίσης περιλαμβάνονται κανονική εμφανίζονται προστατικό ιστό από 50 ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με ριζική προστατεκτομή. Η ανοσοχρώση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τα ακόλουθα αντισώματα: ErbB3 C-ter (κουνέλι πολυκλωνικό sc-285, Santa Cruz Biotechnology 1/200), ErbB3 Ν-ter (Mouse μονοκλωνικό Ab-5 κλώνος H3.105.5, NeoMarkers, 1/50), CCND1 (Rabbit μονοκλωνικά, κλώνος EP12, ϋΑΚΟ, 1/50) και Ki67 (μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού, κλώνος MIB-1, ϋΑΚΟ, 1/100). Οι αρνητικοί έλεγχοι ελήφθησαν με τη χρήση ενός άσχετου αντισώματος. Ιστός από ζώνη μανδύα λέμφωμα χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος για Κί67 και CCND1. Τα πλακίδια αναλύθηκαν με 2 παρατηρητές με τυφλό τρόπο. Για ErbB3C-ter, CCND1 και χρώση Ki67, κάθε πυρήνας ιστός δόθηκε μια συνεχής τιμή που αντιπροσωπεύει το ποσοστό των κυττάρων του όγκου που εμφανίζουν πυρηνική χρώση. Για κάθε ασθενή, επιλέχθηκε ο πυρήνας με το υψηλότερο ποσοστό.

Οι κυτταρικές σειρές

Ανθρώπινα κύτταρα του προστάτη RWPE (ATCC

® CRL11609 ™), φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα απαθανάτισε από HPV-18, διατηρήθηκαν σε κερατινοκυττάρων ορού Ελεύθερη μέσο συμπληρωμένο με εκχύλισμα υπόφυσης βοοειδούς (ΒΡΕ, 0,05mg /ml) και ανθρώπινο ανασυνδυασμένο επιδερμικό αυξητικό παράγοντα (EGF, 5ng /ml) (Invitrogen). Ανθρώπινα προστάτη LNCaP κυτταρική γραμμή (ATCC

® CRL1740 ™) που προέρχεται από λεμφαδένα και PC3 (ATCC

® CRL 1435 ™) κυτταρική γραμμή που λαμβάνεται από μετάσταση στα οστά, αναπτύχθηκαν σε ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου και 1% πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη.

κηλίδωση Western

εκχυλίσματα πρωτεϊνών και ανάλυση κηλιδώσεως Western πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφεται στο [17]. Πυρηνικών και μη πυρηνικά εκχυλίσματα παρασκευάστηκαν ως ακολούθως: τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε Tris-HCl 10 mM ρΗ 7,5, NaCl 120 mM και λύθηκαν με ΝΡ40 σε μια τελική συγκέντρωση 0.3%. Μετά από φυγοκέντρηση για 5 λεπτά στα 2500 g, τα υπερκείμενα συμπληρωμένο με EDTA 1 mM, DTT 1 mM, SDS 0,1%, PIC 1/50 και 1/100 PMSF αποτελούν τον μη-πυρηνικό κλάσμα. Το σφαιρίδιο που αντιστοιχεί σε πυρήνες πλύθηκε τρεις φορές σε Tris-HCl 10 mM ρΗ 7,5, NaCl 120 mM, ΝΡ40 0.3% για την εξάλειψη κυτταροπλασματικής υπολείμματα, τότε λύθηκαν όπως παραπάνω.

ChIP-on-chip

τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1% φορμαλδεΰδη και εκχύλιση χρωματίνη διεξήχθη με το κιτ Simple ChIP Ενζυματική χρωματίνης IP (Cell Signaling Technology, CST) σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή. Η ανάκτηση της χρωματίνης σε πέψη με μικρόκοκκη νουκλεάση για να ληφθούν θραύσματα χρωματίνης γύρω 500pb μέγεθος. Σε αυτό το βήμα, ένα σύνολο δείγμα DNA (Input) συλλέχθηκε για μετέπειτα χρήση. Ανοσοκαταβύθιση διεξήχθη χρησιμοποιώντας αντισώματα αντι ErbB3 C-ter (sc-285 ή SC-7390, SCBT) ή αντι-H3 (θετικός έλεγχος, ιστόνη Η3 αντίσωμα ChIP διαμορφωθούν # 2650, CST) και για επώαση με το μη-σχετικό φυσιολογική IgG κουνελιού (ChIP αρνητικός μάρτυρας). Ολικό DNA και τσιπ DNA ενισχύθηκαν χρησιμοποιώντας ολόκληρο το γονιδίωμα Amplification Kit (WGA-2, Sigma-Aldrich) και αντίστοιχα επισημασμένα με Cy-3 ή Cy-5 φθοριοχρώματα χρησιμοποιώντας BioPrime Array κιτ Genomic Επισήμανση (Invitrogen). Τα επισημασμένα δείγματα υποβλήθηκαν σε υβριδισμό για τα Ανθρώπινα υποψήφιοι μικροσυστοιχίες (Agilent Ανθρωπίνων Ανάδοχος ChIP-on-Chip μικροσυστοιχιών Set 244K, P /N G4489A) σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή.

Κανονικοποίηση και την ανάλυση των δεδομένων των μικροσυστοιχιών

τα δεδομένα που παρέχονται από την Agilent υψηλής ανάλυσης DNA μικροσυστοιχιών σαρωτή αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Feature Extraction 10.1 Λογισμικό (Agilent Technologies). Οι κηλίδες φθορισμού που απέτυχε να περάσει τον έλεγχο της ποιότητας αποκλείστηκαν. Σήματα των αναλογιών εμπλουτισμού (ChIP /Input) που σχετίζονται με συγχωνεύονται επαναλήψεις υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό CoCAS [28]. ErbB3 εμπλουτισμένο υποκινητές από τρία ανεξάρτητα πειράματα απομονώθηκαν χρησιμοποιώντας τον αλγόριθμο ανίχνευσης αιχμής σε CoCAS ακολουθούμενη από τις βαθμολογίες εμπλουτισμού υπολογίστηκε μετρώντας την αποτελεσματική περιοχή κορυφής.

πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR (qPCR) ανάλυση

πειράματα qPCR διεξήχθησαν επί ErbB3-ανοσοκαταβυθίστηκε ή IgG ελέγχου DNA, χρησιμοποιώντας την GoTaq qPCR Master Mix (Promega) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή σε ένα γρήγορο πραγματικό σύστημα 7500 Time PCR (Applied Biosystems). Σχετική εμπλουτισμός εκτιμήθηκε μετά τον ποσοτικό προσδιορισμό των σημάτων PCR με μέτρηση της αναλογίας IP ErbB3 /IgG. Κατάλογος των τσιπ qPCR εκκινητές δίδεται στον Πίνακα 1.

Η

απομόνωση RNA και RT-qPCR

LNCaP και PC3 κύτταρα επιμολύνθηκαν με 20 pmol του ελέγχου ή ErbB3-ειδική siRNAs (Eurogentec ) πριν από ολικό RNA εξήχθη χρησιμοποιώντας RNAble (Eurobio). cDNA συντέθηκαν από 2-6μg του συνολικού RNA και ενισχύθηκε με qPCR, όπως περιγράφεται παραπάνω. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος για την κανονικοποίηση της έκφρασης γονιδίου. Λίστα cDNA RT-qPCR εκκινητών δίδεται στον Πίνακα 2.

Η

Αποτελέσματα

έκφραση ErbB3 και τον εντοπισμό σε φυσιολογικών και καρκινικών ιστών του προστάτη

137 HS, 32 CRPC και 50 κανονικά εμφανίζονται ογκο-γειτονικών ιστών αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία (Εικόνα 1). Σε όλα τα δείγματα, η χρώση για ErbB3 Ν-ter, όταν υπάρχει, βρισκόταν κυρίως στη μεμβράνη, και καμία πυρηνική χρώση παρατηρήθηκε (Σχήμα 1Α). Όλα τα 169 δείγματα που εμφανίζονται κυτταροπλασματική χρώση με ErbB3 C-ter. (Σχήμα 1Β). Σε αντίθεση, η πυρηνική χρώση παρατηρήθηκε με ErbB3 C-ter σε 60 από τα 169 (35%) δείγματα PCa, αλλά σε κανένα από τα δείγματα μη-όγκου. έκφραση Πυρηνική ErbB3 ήταν περισσότερο συχνά παρατηρείται σε CRPC (17/32, το 53%) από ό, τι στους όγκους HS (43/137 31%) (ρ = 0,03, Chi 2 τεστ). Επιπλέον, όταν υπάρχουν, το ποσοστό των προστάτη που εκφράζουν ErbB3 στον πυρήνα ήταν υψηλότερη σε CRPC (διάμεσος 10%, εύρος 2-95%) από ό, τι σε καρκίνους HS (διάμεσος 2%, εύρος 1-20%) (ρ = 0.007, Mann Whitney τεστ). Η διάμεση έκφραση CCND1 ήταν 15% του ΕΣ, κύτταρα καρκίνου του προστάτη (εύρος 0-70%, δεν φαίνεται) και το 20% των καρκινικών κυττάρων σε ιστούς CRPC (εύρος 0-80%) (Σχ 1D και 1G). Ο μέσος ρυθμός πολλαπλασιασμού εκτιμήθηκε με χρώση Ki67 ήταν 1% των κυττάρων PCA σε ιστούς HS (εύρος 0-10%, δεν φαίνεται) και 17,5% στα δείγματα CRPC (Σχ 1 Ε και 1 Η). Σε HS, δεν παρατηρήθηκε καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ των πυρηνικών ErbB3, CCND1 (p = 0.09) και ο ρυθμός πολλαπλασιασμού (ρ = 0,1, δοκιμή Spearman). Σε CRPC, η πυρηνική έκφραση ErbB3 ήταν σημαντικά σχετίζεται με

CCND1

έκφρασης, με μια θετική συσχέτιση (p = 0.01, δοκιμασία Spearman) (Σχήμα 1Γ και 1Δ vs 1F και 1G). Για να συνεχίσετε, η πυρηνική ErbB3 είναι ιδιαίτερα και συχνά εκφράζονται σε CRPC και συσχετίζεται με την έκφραση CCND1, ενώ δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε σε όγκους του ΕΣ.

Βαφή με ErbB3 αντισώματος Ν-ter σε ιστούς προστάτη βρισκόταν στη μεμβράνη, χωρίς πυρηνική έκφραση (α). Αριθ ErbB3 πυρηνική χρώση C-ter ανιχνεύθηκε σε «κανονική» ιστοί προστάτη (β). έκφραση Πυρηνική ErbB3 παρατηρήθηκε σε κύτταρα PCa, και πιο συχνά σε CRPC προχωρημένους όγκους όταν συγκρίνονται με κλινικά εντοπισμένο καρκίνους. Σε CRPC, υψηλή πυρηνική χρώση που σχετίζονται με την υψηλή έκφραση CCND1 και έτειναν να σχετίζεται με υψηλότερο πολλαπλασιασμό (Κί67) (CRPC 1, CE), ενώ οι περισσότεροι όγκοι χωρίς πυρηνική χρώση εμφανίζεται χαμηλή έκφραση CCND1 και έτειναν να παρουσιάζουν χαμηλότερα πολλαπλασιασμό (CRPC 2, fh).

Η

έκφραση ErbB3 και τον εντοπισμό σε κυτταρικές σειρές προστάτη

επόμενο αξιολογηθούν ενδογενή έκφραση ErbB3 και τον εντοπισμό σε κυτταρικές σειρές προστάτη χρησιμοποιώντας ErbB3 αντισώματα C-ter. Με έμμεσο ανοσοφθορισμό, κηλίδωση ErbB3 ήταν παρόν κυρίως στην πλασματική μεμβράνη και στο κυτόπλασμα των κυττάρων RWPE ενώ ένα υψηλό πυρηνική χρώση ανιχνεύθηκε σε καρκινικές κυτταρικές σειρές (Σχήμα 2Α). Η ανάλυση στυπώματος Western των εκχυλισμάτων ολικής πρωτεΐνης έδειξαν ότι οι τρεις κυτταρικές γραμμές εξέφρασαν παρόμοια επίπεδα πλήρους μήκους ErbB3

185kDa πρωτεΐνης. Μια πρόσθετη πρωτεΐνη 80kDa ανιχνεύτηκε ειδικά στις ορμόνες ευαίσθητα (LNCaP) και ορμόνη ανθεκτικά (PC3) κυτταρικές γραμμές όγκου (Σχήμα 2Β). Στη συνέχεια, western αποτύπωση πραγματοποιήθηκε σε μη πυρηνικές vs κλάσματα πυρηνική πρωτεΐνη. Η ποιότητα των εκχυλισμάτων επικυρώθηκε από την ειδική ανίχνευση της κυτταροπλασματική πρωτεΐνη ΡΑΚ1 στα μη πυρηνικά εκχυλίσματα και το (νουκλεολίνη) πρωτεΐνη C23 στα πυρηνικά εκχυλίσματα. Όπως φαίνεται, ErbB3

185kDa εκφράστηκε κυρίως στις μη πυρηνικές κλάσματα και ήταν απούσα ή ελαφρώς ανιχνεύσιμη στα πυρηνικά κλάσματα όλων των τύπων κυττάρων. Αντ ‘αυτού, η πρωτεΐνη 80kDa ανιχνεύθηκε σχεδόν αποκλειστικά στα πυρηνικά κλάσματα των LNCaP και PC3 κυττάρων (Σχήμα 2C). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η πυρηνική πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε σε κύτταρα προστάτη θα μπορούσε να αντιστοιχεί κυρίως στην ErbB3

80kDa πυρηνική ισομορφή περιγράφηκε προηγουμένως στον καρκίνο του πνεύμονα κυτταρικές γραμμές [17].

(Α) Τόσο η RWPE και PC3 κύτταρα εμφανίζουν κυτταροπλασματική και ErbB3 μεμβράνη εντοπισμού. Επιπλέον, η μητρική PC3 κύτταρα εμφανίζουν μια ισχυρή πυρηνική εντόπιση που ανιχνεύεται από τον ErbB3 C-ter αντίσωμα (SC-285, Σάντα-Κρουζ Βιοτεχνολογίας). (Β) Με εκχυλίσματα ολικής πρωτεΐνης, το ErbB3 C-ter αντίσωμα ανιχνεύει την πλήρους μήκους ErbB3

185kDa πρωτεΐνη σε όλες τις κυτταρικές σειρές και η πρωτεΐνη 80kDa στο LNCaP και κυτταρικές σειρές PC3 όγκου. (Γ) Το πλήρες μήκος ErbB3

πρωτεΐνη 185kDa είναι σχεδόν ανιχνευθεί μόνο στις μη πυρηνικές κλάσματα που περιλαμβάνουν πλασματική μεμβράνη και κυτταροπλασματικών πρωτεϊνών, ενώ ένα ισχυρό σήμα 80kDa παρατηρείται στα πυρηνικά κλάσματα των γραμμών όγκου. (D) Ένα προϊόν ενισχύσεως 719 bp ανιχνεύεται στις τρεις κυτταρικές γραμμές με τους εκκινητές σχεδιασμένοι να ενισχύουν τόσο το mRNA πλήρους μήκους (NM_001982.3) και την παραλλαγή AK300909.1 (PCR1), ενώ PCR2 και PCR3 εκκινητές ειδικούς για AK124710. 1 και AK1250281 αντίστοιχα, απέτυχε να ενισχύσει οποιαδήποτε αλληλουχία. (Ε) Ποσοτική ανάλυση με ειδικούς εκκινητές για μεταγραφές ErbB3 δείχνουν ότι NM_001982.3 και AK300909.1 εκφράζονται σε συγκρίσιμα επίπεδα σε LNCaP και PC3 κυτταρικές σειρές, ενώ AK300909.1 είναι ελαφρώς ανιχνεύσιμη στα κύτταρα RWPE.

Η

Μεταξύ των θεωρούμενων παραλλαγών που αναφέρθηκαν σε δημόσιες βάσεις δεδομένων που θα μπορούσε να μεταγραφεί από την

ErbB3

γονιδίου, μόνο τρεις θα μπορούσε να αντιστοιχεί στο πυρηνικό ErbB3

80kDa πρωτεΐνη. Στερούνται την αλληλουχία 5 ‘που κωδικοποιεί τα πεδία σύνδεσης συνδετήρα και διαμεμβράνης του υποδοχέα και έχουν προβλεφθεί σήματα πυρηνικού εντοπισμού (NLS) [29]. Για διακρίσεις μεταξύ των εν παραλλαγών, πραγματοποιήσαμε RT-PCR με εκκινητές γύρω από το κωδικόνιο έναρξης ATG του mRNA. Στις τρεις κυτταρικές γραμμές, ένα προϊόν PCR 719 bp ανιχνεύθηκε με το ζεύγος εναρκτήρων (PCR1) επιτρέποντας την ενίσχυση τόσο του πλήρους μήκους NM_001982.3 και τις μεταγραφές παραλλαγή AK300909.1 που μοιράζονται την ίδια αλληλουχία νουκλεοτιδίων. Το πείραμα αυτό μας οδήγησε στην εξάλειψη AK124710.1 και AK1250281 και να επικεντρωθεί στην απομαγνητοφώνηση AK300909.1 (Σχήμα 2D). Αυτή η παραλλαγή προβλέπεται ότι κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη 699aa, του οποίου η αλληλουχία είναι απολύτως ταυτόσημη με την ενδοκυτταρική περιοχή του ErbB3

185kDa. Για να διακρίνουν μεταξύ NM_001982.3 και έκφραση AK300909.1 στις κυτταρικές γραμμές, RT-qPCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας εναρκτήρες που ενισχύουν τις δύο μεταγραφές ή εκκινητές ειδικά για το 5 ‘κωδικοποιητική αλληλουχία του NM_001982.3 (Σχήμα 2Ε). Όπως φαίνεται, οι δύο μεταγραφές εκφράστηκαν στο ίδιο επίπεδο σε LNCaP και PC3 κύτταρα, ενώ AK300909.1 ήταν δύσκολα ανιχνεύσιμη σε RWPE κύτταρα (Σχήμα 2Ε).

Έτσι, κυτταρικές σειρές LNCaP και PC3 καρκίνου του προστάτη κωδικοποιούν δύο διαφορετικές ισομορφές πρωτεΐνης ErbB3

185kDa και ErbB3

80kDa, που αντιστοιχεί στην NM_001982.3 και οι μεταγραφές mRNA AK300909.1 αντίστοιχα.

Γονιδιώματος ολόκληρη ανάλυση υποκινητών ErbB3-στόχου σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη

για την αναγνώριση των γονιδίων ErbB3-στόχο, είμαστε δίπλα εκτελούνται chIP-on-chip δοκιμασίες χρησιμοποιώντας τσιπ επικυρωθεί ErbB3 αντισώματα C-ter [17], σύμφωνα με την ροή εργασιών που περιγράφεται (Σχήμα 3Α). ErbB3 δεσμευμένες περιοχές του γονιδιώματος πρώτα διερευνήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό V2.4 CoCAS αυτόνομο [28]. Μετά το βήμα προ-επεξεργασίας, κορυφή αλγόριθμο ανίχνευσης ανιχνεύονται σήματα υψηλής ανιχνευτής που αντιστοιχεί σε σημαντικές αλλαγές στην αναλογία Cy3 /Cy5 εμπλουτισμένου περιοχές του γονιδιώματος. Συνολικά το 68% των ιχνηλατών ErbB3-στόχοι βρίσκονται στις κύριες υποκινητές, ενώ το 30% ήταν εντός των γονιδίων και 2% προς τα κάτω της θέσης έναρξης μεταγραφής (TSS). Σημαντικά εμπλουτισμένη διερευνητές πιστοποιήθηκαν πάνω από ένα όριο ρυθμίστηκε στο 0,998, με αποτέλεσμα να εντοπιστούν τελικά 1840 υποκινητές ErbB3-στόχο κατανέμονται ως εξής: 317 προαγωγούς σε RWPE, 606 σε LNCaP και 1297 σε κύτταρα PC3, μεταξύ των οποίων 8 βρέθηκαν σε κυτταρικές σειρές 3 και 361 μοιράστηκαν από τις κυτταρικές σειρές LNCaP και PC3 (Εικόνα 3Β). Τα στοιχεία αυτά επιβεβαιώθηκαν περαιτέρω με το 7.0 λογισμικό Agilent Workbench. Η κατανομή του σήματος κατά μήκος των υποκινητών χρησιμοποιήθηκε για το σχεδιασμό τσιπ qPCR εκκινητές στις περιοχές που εμφανίζονται την υψηλότερη συγκέντρωση ανιχνευτών ErbB3 εμπλουτισμένο με την υψηλότερη αναλογία log-(Σχήμα 3C). Ο αριθμός των υποκινητών στόχος ήταν σημαντικά υψηλότερη σε κύτταρα PC3 ορμόνη ανθεκτικά από ότι στα κύτταρα LNCaP ορμόνη ευαίσθητη, υποδηλώνοντας την εμπλοκή του ErbB3

80kDa σε PCa εξέλιξη και επιθετικότητα, σύμφωνα με τα δεδομένα που ελήφθησαν σε ασθενείς (Σχήμα 1). λίστες γονίδιο που προέρχεται από ChIP-on-chip πειράματα αναλύθηκαν περαιτέρω με τον David (βάση δεδομένων για το σχολιασμό, την απεικόνιση και την Ολοκληρωμένη Discovery) [30]. Λειτουργική σχολιασμό επιβεβαίωσε τη συμμετοχή της ErbB3

στόχων 80kDa σε κυτταρικές διεργασίες υψηλής απορυθμισμένη στους μηχανισμούς του όγκου (Σχήμα 3D). Ένας σημαντικός αριθμός των ErbB3

στόχοι 80kDa σε PC3 ή PC3 και κυτταρικές γραμμές όγκου LNCaP ήταν ήδη γνωστό ότι σχετίζονται με προστάτη, ή άλλων στερεών όγκων, γεγονός που υποδηλώνει ότι ErbB3

80kDa θα μπορούσε να ρυθμίσει σε ένα πιο γενικό τρόπο οι μηχανισμοί πρόοδο του όγκου (Σχήμα 3D).

(Α) χρωματίνης ανοσοκατακρήμνιση εκτελέστηκε κατά ενδογενείς συνθήκες. Πυρηνική προϊόντα λύσης παρασκευάστηκαν από γηγενή κύτταρα αναπτύχθηκαν σε πλήρες μέσο και χωρίς καμία ανδρογόνων. Τσιπ DNA και το συνολικό DNA (Input) επισημασμένο με Cy5 και Cy3 φθοροφόρα αντίστοιχα, συν-υβριδοποιήθηκαν σε υποστηρικτές Agilent οργώνουν συστοιχίες. (Β) Ανάλυση δεδομένων με το λογισμικό CoCAS οδήγησε στην επιλογή 1840 υποστηρικτές ErbB3-στόχο στις τρεις κυτταρικές σειρές. (Γ) Agilent Worbench ανάλυση 7.0 λογισμικό που απεικονίζει την κατανομή των θετικών ανιχνευτές (ErbB3 δεσμευμένο DNA /κόκκινα σημεία) και αρνητικό ανιχνευτές (Input /πράσινες κουκκίδες) σε ολόκληρη την αλληλουχία των γονιδίων (Χ-άξονας). Η ένταση του σήματος εμφανίζεται στην Υ-άξονα.

CCND1

και

ΜΜΡ7

αντιστοιχούν σε θετικούς και αρνητικούς μάρτυρες, αντίστοιχα. (Δ) Ανάλυση Γονιδιακή οντολογία του ErbB3-στόχων με τον David.

Η

τσιπ qPCR επικύρωση των δικαιούχων στόχου πυρηνικών ErbB3 σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη

Μεταξύ των στόχων του 1840, επελέγησαν 26 γονίδια για επικύρωση τσιπ qPCR (Σχήμα 4). Τέσσερις μη εμπλουτισμένο υποκινητές (

ErbB3

,

EBP1

,

PSA

και

ΜΜΡ7

) χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί μάρτυρες και εμφανίζεται καμία σημαντική ενίσχυση, ενώ η

CCND1

υποκινητή εμφανίζονται 7 έως 12 φορές σε εμπλουτισμό LNCaP και PC3 κύτταρα, αντίστοιχα (Σχήμα 4). Τα 3 LNCaP-ειδικούς στόχους εμφάνισαν σημαντική φορές εμπλουτισμό σε κύτταρα LNCaP και όχι σε κύτταρα PC3, ενώ παρατηρήθηκε μία ισχυρή και ειδική εμπλουτισμού για τα 6 PC3-ειδικούς στόχους στην κυτταρική γραμμή PC3 (Εικόνα 4Α vs 4Β). Εμπλουτισμός φορές παρατηρείται για τις κοινές προαγωγοί ποικίλουν ανάλογα με τον στόχο και την κυτταρική γραμμή, αλλά ήταν πάντοτε υψηλότερη στην ορμόνη-ανθεκτικά κύτταρα PC3 σε σύγκριση με τα κύτταρα LNCaP.

Βάσει των δεδομένων βιοπληροφορική, 16 τυχαία επιλεγμένων ErbB3-στόχος υποκινητές από κύτταρα LNCaP (Α) και 19 τυχαία επιλεγμένα προαγωγούς ErbB3-στόχου από κύτταρα PC3 (Β) εξετάστηκαν. Όλα έδειξαν μια σημαντική εμπλουτισμό ErbB3 σε σύγκριση με τον αρνητικό έλεγχο τσιπ IgG (τιμή κανονικοποιούνται προς 1). Η

CCND1

υποστηρικτής χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας ενώ τα μη εμπλουτισμένα υποστηρικτές

ErbB3

,

EBP1

,

PSA

, και

ΜΜΡ7

χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί έλεγχοι. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά 3 ανεξάρτητων πειραμάτων και είναι οι μέσες τριπλών δειγμάτων. * P & lt? 0.05, ** P & lt?. 0,01, ns = μη σημαντική, του Student

t

τεστ

Η

ρύθμιση Μεταγραφική του ErbB3 που εξαρτάται από τα γονίδια στόχους

Δεδομένης της δομής της μεταγραφής AK300909.1, καμία ειδική για αυτή την παραλλαγή siRNAs μπορεί να σχεδιαστεί. Έτσι, ασχοληθήκαμε με τις επιδράσεις της μεταγραφικής ErbB3

80kDa με αφαιρετική ανάλυση: Χρησιμοποιήθηκαν δύο τύποι siRNAs, που στοχεύουν είτε το 5 ‘κωδικοποιητική αλληλουχία της NM_001982.3

ErbB3

μεταγραφής (siErbB3A) ή 3 «ακολουθία κωδικοποίησης τόσο NM_001982.3 και AK300909.1

ErbB3

μεταγραφές (siErbB3B) όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α. Τα siRNAs επικυρώθηκαν με RT-qPCR (δεν φαίνεται) και κηλίδωση Western ανάλυση: ErbB3

έκφραση 185kDa ανεστάλη από τα δύο siRNAs, ενώ ErbB3

έκφραση 80kDa μειώθηκε μόνο κατά siErbB3B σε LNCaP και κυτταρικές σειρές PC3 (Σχήμα 5Α ). Υπό αυτές τις συνθήκες, μπορούμε επόμενο αναλύσαμε την έκφραση της 15ης ErbB3

γονίδια 80kDa-στόχων (Σχήμα 5Β). Όπως αναμενόταν, η έκφραση του

CCND1

ήταν σημαντικά μειωμένη σε LNCaP και PC3 κύτταρα επιμολυσμένα με siErbB3B vs siErbB3A, ο τελευταίος εμφανίζεται καμία διαφορά με το στοιχείο ελέγχου siRNA. Το ίδιο ισχύει για

GATA2

,

RUNX2

,

MAP3K14

και

ErbB2

στις δύο κυτταρικές σειρές, καθώς και για

ARID1A

στα κύτταρα PC3. Αντιστρόφως, siErbB3B επαγόμενη υψηλότερη έκφραση για το

PPIG

και

MXI1

στις δύο κυτταρικές γραμμές και για το

ID3

και PC3-μόνο στόχων σε κύτταρα PC3 (Εικόνα 5Β). Για την απλοποίηση ανάλυση των δεδομένων, το ποσοστό της έκφρασης αλλαγή αναδίπλωσης που μπορεί να αποδοθούν ειδικά στον πυρηνικό ισομορφή υπολογίστηκε με τον τύπο (σχετική γονιδιακή έκφραση μετά κατεργασία siErbB3B) /(σχετική γονιδιακή έκφραση μετά κατεργασία siErbB3A) για κάθε γονίδιο στόχο (Σχ 5C) . Όπως φαίνεται, ErbB3

80kDa μεταγραφικά ενεργοποιεί

CCND1

,

GATA2

,

RUNX2

,

MAP3K14

και αναστέλλει

PPIG

,

MXI1

τόσο LNCaP και PC3 κυττάρων, ενώ αναστέλλει

TBCC

,

SIN3A

,

ACE

,

ID3

,

RAD52

,

CXCR3

μόνο σε κύτταρα PC3. Η ανάλυση στυπώματος Western εκτελείται σε ErbB3

80kDa-στόχους επιβεβαίωσε τις μεταγραφικές αποτελέσματα της ισομορφής πυρηνικής ErbB3 στο πρωτεϊνικό επίπεδο (S1 Σχήμα).

(Α) Δύο siRNAs χρησιμοποιήθηκαν για να αναστέλλουν ειδικώς την NM_001982.3 μεταγραφή (siErbB3A) ή και τα δύο το NM_001982.3 και AK300909.1 μεταγραφές (siErbB3B) και επικυρώνονται από κηλίδωση Western χρησιμοποιώντας το αντίσωμα ErbB3 C-ter. (Β) LNCaP και PC3 κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με siErbB3A ή siErbB3B πριν mRNAs μεταγράφηκαν ανάστροφα και ενισχύεται. RT-qPCR διεξήχθη σε μια επιλογή των γονιδίων ErbB3-στόχου. αλλαγή έκφρασης φορές ομαλοποιήθηκε για τον έλεγχο siRNA επιμολυσμένα δείγματα. Οι επιμολύνσεις έγιναν εις τριπλούν, και τα αποτελέσματα RT-qPCR αναφέρονται είναι από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. (Γ) έκφραση αλλαγή φορές συνεχόμενες με την αναστολή της ErbB3

80kDa ισομορφή σε κάθε κυτταρική σειρά και για κάθε γονίδιο στόχο υπολογίζεται από το λόγο (σε σχέση γονιδιακής έκφρασης κατά την κατεργασία siErbB3B) /(σχετική γονιδιακή έκφραση κατά την κατεργασία siErbB3A). ErbB3

80kDa εξαρτώμενη μεταγραφική ενεργοποίηση του

GATA2

,

RUNX2

,

MAP3K14

,

ErbB2

και

CCND1

και αδρανοποίηση του

PPIG

, MXI1 ήταν παρόμοιες σε LNCaP και PC3, ενώ

ARID1A

,

TBCC

,

FYN

,

SIN3A

,

TOR3A

,

ACE

,

RAD52

,

CXCR3A

φάνηκε να ρυθμίζονται διαφορικά στις δύο κυτταρικές σειρές. * P & lt? 0.05, ** P & lt? 0,01, ns = μη σημαντική, του Student

t

τεστ

Η

Τα στοιχεία που παρουσιάζονται εδώ μπορούν να ενσωματωθούν να προτείνει ένα μοντέλο για την πυρηνική ErbB3.

80kDa λειτουργίες σε εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη (Σχήμα 6).

Αποκλεισμός RA-εξαρτώμενη σηματοδότηση με θεραπεία στέρησης ανδρογόνων (AWT) πρώτη αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου, αλλά σύντομα εναλλακτικές πολλαπλασιαστικές οδούς επανενεργοποιηθεί επάγει την εξέλιξη του όγκου. Αυξημένη έκφραση ErbB3 και την επακόλουθη εκ νέου ενεργοποίηση του μονοπατιού ΡΙ3Κ σε απόκριση προς AWT είναι ένας κύριος μηχανισμός αντίστασης των όγκων. Εναλλακτικά, αναφέρουμε εδώ την πυρηνική συσσώρευση του ErbB3

80kDa, μια παραλλαγή λείπει το πεδίο σύνδεσης συνδετήρα και διαμεμβρανική του ErbB3

180kDa, σε προχωρημένο προστάτη ανθεκτικό σε θεραπεία (CRPC). Ως συν-ρυθμιστή για τη μεταγραφή των γονιδίων που σχετίζονται με τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη διαφοροποίηση, την απόπτωση, η ογκογένεση, ErbB3

80kDa είναι πιθανό να εμπλέκονται έντονα σε αντίσταση θεραπεία και την εξέλιξη σε μοιραία PCa.

DHT

:

διυδροτεστοστερόνη? AR

:

υποδοχέα ανδρογόνων? Are Κίνα:.

ανδρογόνων ανταποκρίνεται στοιχεία

Η

Συζήτηση

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να αναδείξει μοριακών οδών που περιλαμβάνουν ErbB3 στην πρόοδο του όγκου και τη μεταστατική εξάπλωση , με σκοπό τον χαρακτηρισμό νέων πιθανών θεραπευτικών στόχων για καρκίνο του προστάτη. Πρόσφατες θεραπείες που έχουν εγκριθεί για επαναλαμβανόμενες προστάτη καθυστέρηση μεταστατικό καρκίνο πρόοδο και να επεκτείνει τη συνολική επιβίωση, αλλά εξακολουθούν να αποτυγχάνουν να αναστείλουν την εξέλιξη του όγκου σε μοιραία CRPC. Ακατάλληλη έκφραση και /ή ενεργοποίηση της οικογένειας ErbB υποδοχέων κινάσης τυροσίνης έχει αναφερθεί σε προχωρημένο PCa, οδηγώντας σε εξετάσει ErbB1, ErbB2 και ErbB3 ως πιθανοί διαγνωστικοί και προγνωστικοί δείκτες [22,31]. Κατά συνέπεια, η αυξημένη έκφραση ErbB3 έχει αναφερθεί σε εξαρτώμενη από ανδρογόνο PCa αντιμετωπίζονται από ανδρογόνο απόσυρση και συνδέθηκε με κακή πρόγνωση. Αυτή η υπερέκφραση συσχετίζεται με την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και την επανενεργοποίηση της μεταγραφικής δραστηριότητας του AR σε απουσία ανδρογόνων [26]. Επιπλέον, η πυρηνική διαμερισματοποίηση των ErbB3 έχει προταθεί να διαδραματίσει ρόλο στην εξέλιξη του προστάτη, αλλά οι μηχανισμοί που εμπλέκονται παραμένουν ακόμα άγνωστα [18,27,32].

Θα διερευνηθεί για πρώτη φορά την έκφραση ErbB3 σε κανονική ή όγκου ιστούς του προστάτη. Χρώση για ErbB3 Ν-ter κατευθύνθηκε στη μεμβράνη, χωρίς πυρηνική έκφραση. Χρησιμοποιώντας το αντίσωμα C-ter ErbB3, η πυρηνική χρώση παρατηρήθηκε περιοριζόταν σε κύτταρα προστάτη και αυξήθηκε σε προχωρημένο ευνουχισμός ανθεκτικά καρκίνο του προστάτη σε σύγκριση με εντοπισμένους όγκους. Τα δεδομένα αυτά ενισχύουν τη συμμετοχή της πρωτεΐνης πυρηνικής ErbB3 σε εξέλιξη προστάτη έως τερματικό ευνουχισμό ανθεκτικά στάδιο [18]. Όπως έχουμε αποτύχει να ανιχνεύσουν την πυρηνική χρώση σε CRPC με αντισώματα αντι-Ν-ter ErbB3, υποθέσαμε ότι η πρωτεΐνη πυρηνικής ErbB3 θα μπορούσε να είναι μια παραλλαγή, κατά το πρότυπο των περιγραφόμενων προηγουμένως ErbB3

80kDa ή ErbB3

ισομορφές 50kDa [16 , 17]. έκφραση της πρωτεΐνης ErbB3 αξιολογήθηκαν για την κανονική και προστάτη καρκινικών κυτταρικών σειρών επιβεβαίωσε την υπόθεσή μας, με την πλήρη υποδοχέα μήκους ErbB3

185kDa εκφράζεται κυρίως στην πρωτεΐνη κλάσμα μη πυρηνική όλων των κυτταρικών σειρών και μια ErbB3

80kDa ισομορφή ανιχνεύεται κυρίως στην κλάσμα πυρηνική πρωτεΐνη των κυτταρικών γραμμών όγκου. Μέχρι σήμερα, μόνο η πλήρους μήκους ErbB3

185kDa πρωτεΐνη αναφέρθηκε στον πυρήνα των όγκων του προστάτη και κυτταρικές σειρές [15,19]. Οι μηχανισμοί του πυρηνικού εντοπισμού αναλυθεί μέχρι στιγμής εμπλέκονται δρομολόγησης από ενδοσωμάτων ή /και η διάσπαση της μεμβράνης μετά την ενεργοποίηση του υποδοχέα [5-7, 32-36]. Από ErbB3

185kDa είναι κινάσης τυροσίνης ανεπάρκεια, η φωσφορυλίωση του συμβαίνει κατά διμερισμό με άλλα μέλη της οικογένειας ErbB [37].