Αφηρημένο

Στόχος

Για να εξεταστεί η έκφραση LMP10 και της πιθανές επιπτώσεις στην κλινική έκβαση των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) θετικές και HPV-αρνητικών αμυγδαλών και τη βάση του καρκινώματος της γλώσσας πλακωδών κυττάρων (TSCC και BOTSCC).

Ιστορικό

αποτέλεσμα είναι καλύτερη σε HPV-θετικών TSCC και BOTSCC σε σύγκριση με ταιριάζουν HPV-αρνητικούς όγκους, με περίπου 80% έναντι 40% 5-ετή επιβίωση χωρίς νόσο (DFS) με λιγότερο επιθετική θεραπεία από το σημερινό χημειοακτινοθεραπεία. Από την τρέχουσα θεραπεία συχνά οδηγεί σε επιβλαβείς παρενέργειες, λιγότερο εντατική θεραπεία, με παρατεταμένη επιβίωση των ασθενών θα ήταν ελκυστική εναλλακτική λύση. Ωστόσο, άλλοι δείκτες, μαζί με την κατάσταση του HPV είναι απαραίτητες για την επιλογή των ασθενών και γι ‘αυτό το σκοπό την έκφραση LMP10 διερευνάται εδώ παράλληλα με την κατάσταση του HPV και την κλινική έκβαση.

Υλικά και Μέθοδοι

Από 385 ασθενείς που διαγνώστηκαν μεταξύ των ετών 2000 και 2007, στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Karolinska, 278 φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη TSCC και βιοψίες BOTSCC, με γνωστή κατάσταση του HPV DNA, ελέγχθηκαν για LMP10 πυρηνική και κυτταροπλασματική έκφραση (κλάσμα των θετικών κυττάρων και την ένταση χρώσης). Τα δεδομένα στη συνέχεια συσχετίζεται με την κλινική έκβαση.

Αποτελέσματα

Μια απών /χαμηλή σε σύγκριση με μια μέτρια /υψηλή LMP10 πυρηνικό κλάσμα των θετικών κυττάρων συσχετίστηκε στην καλύτερη 3-χρόνια DFS στον HPV -θετικό ομάδα ασθενών (log-rank p = 0,005), αλλά όχι στο HPV-αρνητική ομάδα. Στην HPV-αρνητικών ομάδα ασθενών, σε αντίθεση με το HPV-θετική ομάδα, μέτρια /υψηλή LMP10 κυτταροπλασματικό κλάσμα και αδύναμος /κυτταροπλασματική ένταση μέτρια /υψηλή LMP10 συσχετίζεται με ένα καλύτερο 3-χρόνια DFS (p = 0,003 και ρ = 0,001) και 3-ετή συνολική επιβίωση (p = 0,001 και 0,009).

Συμπέρασμα

LMP10 πυρηνική έκφραση της HPV-θετική ομάδα και LMP10 κυτταροπλασματική έκφραση του HPV-αρνητική ομάδα ασθενών συσχετίζονται με καλύτερη κλινική έκβαση

Παράθεση:. Τερτίπης Ν, Haeggblom L, Nordfors C, Grün Ν, Näsman Α, Βλαστός A, et al. (2014) Συσχέτιση της LMP10 έκφρασης και της κλινικής έκβασης σε ιό των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) Θετική και HPV-Αρνητική αμυγδαλών και Βάση του Καρκίνου Tongue. PLoS ONE 9 (4): e95624. doi: 10.1371 /journal.pone.0095624

Επιμέλεια: Αντώνης WI. Lo, το Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 7 του Φλεβάρη 2014? Αποδεκτές: 27 Μάρτη, 2014? Δημοσιεύθηκε: 21 του Απρίλη 2014

Copyright: © 2014 Τερτίπης et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η σουηδική Ίδρυμα του καρκίνου 120.417? Το σουηδικό Ιατρικό Συμβούλιο Έρευνας K2011-56X-15282-07-06? Ο καρκίνος της Στοκχόλμης Ίδρυμα 121.043? Henning και Ida Ίδρυμα Perssons? Ινστιτούτου Καρολίνσκα 2013fobi37387? Το Συμβούλιο της Κομητείας της Στοκχόλμης 520.007? Ο βασιλιάς Γουσταύος V Ταμείο Ιωβηλαίο? Το Ίδρυμα Καρκίνου και Αλλεργιών. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Συν-συγγραφέας Torbjörn Ramqvist είναι μια Συντακτική μέλος του Διοικητικού Συμβουλίου PLoS ONE. Αυτό δεν αλλάζει προσήλωση μας στην PLoS ONE Editorial πολιτικές και κριτήρια.

Εισαγωγή

Το 2007, ο Διεθνής Οργανισμός Έρευνας για τον Καρκίνο (IARC) αναγνώρισε ιό των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) ως παράγοντας κινδύνου για την στοματοφαρυγγική καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (OPSCC) βασίζεται σε δεδομένα από άλλους και εμάς [1], [2], [3], [4]. Επιπλέον, HPV-θετικά OPSCC, με αμυγδαλικά και βάση του καρκίνου της γλώσσας πλακωδών κυττάρων (TSCC και BOTSCC) αντιπροσωπεύει το 80% των περιπτώσεων, έχει καλύτερη πρόγνωση σε σχέση με τις αντίστοιχες HPV-αρνητικούς όγκους (80% έναντι 40% -60 % 3-χρόνια χωρίς νόσο επιβίωση (DFS) [1], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12]. παράλληλα με την πρόσφατη αύξηση στη συχνότητα εμφάνισης της HPV-θετικών OSCC σε πολλές χώρες, θεραπευτική αγωγή για καρκίνωμα κεφαλής και λαιμού πλακωδών κυττάρων (HNSCC), συμπεριλαμβανομένων των OPSCC, έχει γίνει πιο επιθετική με π.χ. χημειο-ακτινοθεραπεία αποτέλεσμα περισσότερα σοβαρές ανεπιθύμητες ενέργειες [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22], [23], [24] . Λιγότερο επιθετική θεραπεία είναι πιθανό να είναι επαρκής για τους περισσότερους ασθενείς με HPV-θετικά TSCC και BOTSCC, όπου HPV βρίσκεται πιο συχνά και όπου HPV έχει τη μεγαλύτερη επίδραση στην επιβίωση [25]. Παρ ‘όλα αυτά, πριν εκλεπτύνει τη θεραπεία, άλλοι δείκτες σε συνδυασμό με τον HPV κατάσταση θα ήταν χρήσιμες για την επιλογή ασθενών με HPV-θετικά TSCC και BOTSCC με ένα πολύ πιθανό ευνοϊκή ανταπόκριση στη θεραπεία [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32] . Πρόσφατες μελέτες έχουν εντοπίσει κάποιους δείκτες, π.χ. απών /χαμηλή HLA τάξης Ι ή έκφραση ένταση CD44, ή υψηλή CD8 + λεμφοκυττάρων διήθησης νεοπλασίας (ΤΙΕ) μετράει σε HPV-θετικά TSCC και BOTSCC, τα οποία όλα φαίνονται να είναι ευνοϊκοί παράγοντες προγνωστικά και δείχνουν μια πιθανότητα 95-100% του 5-χρόνια νόσος συγκεκριμένες επιβίωσης [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32]. Δυστυχώς, οι παραπάνω βιοδείκτες αναγνωρίζουν μόνο ένα κλάσμα του συνόλου των ασθενών με μια καλή πιθανότητα να ανταποκρίνονται καλά στη θεραπεία και για την πρόσθετη αυτή βιοδείκτες με αυτές ανωτέρω απαιτούνται.

LMP10 (πρωτεΐνη χαμηλού μοριακού βάρους 10) είναι ένας βήτα υπομονάδα του πρωτεασώματος 20S, που προσδιορίζονται ως τρίτο IFN-g επαγώγιμο μονάδα Nandi κ.ά. 2006 [33]. Μαζί με LMP2 και LMP7, LMP10 δημιουργήσει το λεγόμενο immunoproteasome δρα επί ενταθεί ανοσολογική απόκριση. Ως συστατικό των μηχανημάτων επεξεργασίας αντιγόνου (ΑΡΜ), LMP10 εμπλέκεται στο μονοπάτι του πεπτιδίου ράμφους κατά την παρουσίαση του πεπτιδίου από μόρια HLA. Ελαττώματα και στα διαφορετικά συστατικά ΑΡΜ έχουν βρεθεί σε πολλούς όγκους και έχουν δείξει συσχέτιση με την κλινική έκβαση των ασθενών [34], [35], [36], [37].

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε επομένως εξετάζονται για έκφραση LMP10 σε HPV-θετικά και HPV-αρνητικών TSCC και BOTSCC, σε 278 ασθενείς που διαγνώστηκαν μεταξύ 2000-2007 στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Karolinska, και οποιαδήποτε συσχέτιση της έκφρασης LMP10 για την επιβίωση.

Οι ασθενείς, Υλικά και Μέθοδοι

ηθική Δήλωση

Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις ηθικές δικαιώματα 2005/431 – 31/4, 2005 /1330-1332 και 2009 /1278-31 /4 από την Περιφερειακή Επιτροπή Ηθικής στο Karolinska Institutet, Στοκχόλμη, Σουηδία. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους συμμετέχοντες στη μελέτη

Οι ασθενείς και οι βιοψίες

Κατά τη διάρκεια του 2000-2007, 385 ασθενείς διαγνώστηκαν με TSCC και BOTSCC (που ορίζεται ως το ICD-10 κωδικοί:. C09, C01 0,9 αντίστοιχα) στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Karolinska, εντοπίστηκαν μέσω του σουηδικού Αρχείο Καρκίνου. Από αυτούς, 278 ασθενείς, με διαγνωστικές βιοψίες προ-επεξεργασία, προηγουμένως δοκιμαστεί για τον HPV DNA και με αρκετό υλικό, συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη [27]. Οι 258 ασθενείς που έλαβαν θεραπευτική πρόθεση στη συνέχεια περιλαμβάνονται στην ανάλυση επιβίωσης. Συμβατική ραδιοθεραπεία (RT) (2.0 Gy /ημέρα, για 6.5-7 εβδομάδα, συνολική δόση: 68 Gy) ή επιταχυνόμενη RT (1.1 + 2.0 Gy /ημέρα για 4,5 εβδομάδες, συνολικής δόσης: 68 Gy) δόθηκε σε 192/258 ( 74,4%) των ασθενών, ενώ το 66/258 (25,6%) ασθενείς είχαν επίσης χημειοθεραπεία εφόδου και ταυτόχρονη RT. Διάμεση ακτινοβολία (βραχυθεραπεία) δόθηκε επίσης σε ορισμένους ασθενείς (78 Gy εντελώς). Οι ασθενείς με νόσο κομβικά υποβλήθηκαν σε εκτομή τραχήλου 6-8 εβδομάδες μετά την ολοκλήρωση της RT. Οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν κάθε 3 μήνες για τα πρώτα 2 έτη και κάθε 6 μήνες κατά τη διάρκεια του 3ου χρόνου, και τα δεδομένα επιβίωσή τους ελήφθησαν από τα αρχεία των ασθενών. Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις ηθικές δικαιώματα 2005 /431-31 /4, 2005 /1330-1332 και 2009 /1278-1231 /4 από την Περιφερειακή Επιτροπή Ηθικής στο Ινστιτούτου Καρολίνσκα, Στοκχόλμη, Σουηδία.

HPV Ανάλυση

HPV DNA της 27ης τύπων HPV και βήτα-σφαιρίνης προσδιορίστηκε με ένα σφαιρίδιο με βάση multiplex δοκιμασία σε ένα όργανο Magpix (Luminex Corporation) όπως περιγράφεται προηγουμένως [30].

Ανοσοϊστοχημεία

εν συντομία, σταθεροποιημένα με φορμαλίνη εμβαπτίστηκαν σε παραφίνη (FFPE) ολισθαίνει βιοψία όγκου (4 μm) από-παραφινοποιήθηκαν με ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν εντός αιθανόλης του μειούμενες συγκεντρώσεις. Στη συνέχεια αυτά θερμάνθηκαν σε κιτρικό ρυθμιστικό (ρΗ 6.0) για ανάκτηση αντιγόνου. Μη ειδικές θέσεις αποκλείστηκαν με 1,5% ορό αλόγου αραιωμένο σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS). τομές παραφίνης επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους + 8 ° C με πρωτογενές αντίσωμα, MeCl-1 C-2 (αντι LMP10-αντίσωμα από την Santa Cruz Biotechnology), σε ένα υγρό θάλαμο που ακολουθείται από δευτερογενή εφαρμογή αντίσωμα και ένα πρότυπο κιτ ABC-HRP για την ανίχνευση αντιγόνου . Το χρωμογόνο-3′-diaminobenzydine (DAB) χρησιμοποιήθηκε για την οπτικοποίηση. Αιματοξυλίνη ζητήθηκε αντιχρωματισμός που ακολουθείται από αφυδάτωση σε αιθανόλη από αυξανόμενες συγκεντρώσεις και ξυλόλιο.

Αξιολόγηση της ανοσοϊστοχημείας χρώσης

LMP10 κυτταροπλασματική και πυρηνική χρώση, συμπεριλαμβανομένων των αρνητικών και θετικών μαρτύρων (Σχήμα 1), αξιολογήθηκε από δύο ανεξάρτητους ερευνητές τυφλωθεί για τα δεδομένα και την κλινική έκβαση, παρόμοια με αυτή που περιγράφηκε προηγουμένως [32]. Το κλάσμα των κακοηθών κυττάρων χρωματίστηκαν για LMP10 στον πυρήνα και το κυτταρόπλασμα αξιολογήθηκε χωριστά ημι-ποσοτικά σε 4 βαθμούς ποσοστά των χρωματισμένων κυττάρων όγκου: 0 (0%), 1 (1-25%), 2 (26-75% ) ή 3 (76-100%). Η ένταση της χρώσης βαθμολογήθηκε ξεχωριστά και αξιολογείται ως απών, αδύναμα, μέτρια και ισχυρή χρώση. Η ένταση της χρώσης ορίστηκε με σύγκριση της έντασης της χρώσης στα κακοήθη κύτταρα, με την χρώση των εσωτερικών ελέγχων (κανονικό λεμφοειδή ιστό) ανά παρτίδα. Στην μειοψηφία των περιπτώσεων όπου η χρώση εντός του ίδιου δείγματος δεν ήταν καν, η ένταση της πλειοψηφίας των κυττάρων που χρησιμοποιούνται στην ανάλυση. Χρώση και αξιολόγηση των αντιγόνων HLA τάξης Ι διεξήχθησαν στα ίδια δείγματα όγκου σε δύο προηγούμενες μελέτες, όπως περιγράφεται αλλού [27], [28]

(Α):. Ασθενής /μέτρια κυτταροπλασματική έκφραση του LMP10? (Β): Μέτρια /υψηλή πυρηνικά και απουσιάζει κυτταροπλασματική έκφραση της LMP10? (Γ): Απών ή ανιχνεύσιμα πυρηνική LMP10 και κυτταροπλασματική έκφραση? (D): Μέτρια πυρηνική και κυτταροπλασματική έκφραση της LMP10. Μεγέθυνση 400Χ.

Η

Στατιστική Ανάλυση

Τόσο τα χαρακτηριστικά των ασθενών και κατηγορικά δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας την τετραγωνική-τεστ Chi ή, για σύγκριση των μέσων τιμών, ο μαθητής T-test. Δίπλευρη p-τιμές (5% επίπεδο σημαντικότητας) έχουν αναφερθεί για όλες τις αναλύσεις. Επιβίωση μετρήθηκε σε ημέρες από τη διάγνωση μέχρι συνέβη ένα γεγονός, ή μέχρι τρία χρόνια μετά τη διάγνωση, όταν οι ασθενείς είχαν λογοκριθεί. Ο θάνατος οφείλεται σε οποιαδήποτε αιτία (εκδήλωση) είχε συμπεριληφθεί στον ορισμό της συνολική επιβίωση (OS), ενώ μόνο την υποτροπή της νόσου (TSCC ή BOTSCC) χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό της επιβίωσης ελεύθερης νόσου (DFS). Αξίζει να σημειωθεί ότι, ο θάνατος των ασθενών χωρίς προηγούμενη υποτροπή λογοκρίθηκε κατά την ημέρα 0, κατά τον υπολογισμό DFS. Kaplan-Meier εκτιμητής χρησιμοποιήθηκε για την DFS και OS, και οι διαφορές στην επιβίωση των ασθενών εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Η Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων που χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό των προσαρμοστούν και να μη προσαρμοσμένες αναλογίες κινδύνου (HR). Όλοι οι υπολογισμοί και οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του IBM Corp., SPSS Statistics, έκδοση 21.0.

Αποτελέσματα

Οι ασθενείς, όγκου Χαρακτηριστικά και HPV

Τα χαρακτηριστικά των 278 ασθενών, 195 (70%) με TSCC και 83 (30%) με BOTSCC και οι όγκοι τους παρουσιάζονται στον πίνακα 1. Συνολικά 207/278 (74%) των όγκων ήταν HPV-θετικές. Ασθενείς με HPV-θετικούς όγκους ήταν νεότεροι (μέση και διάμεση ηλικία 60) από εκείνους με HPV-αρνητικούς όγκους (μέση και διάμεση ηλικία 64 και 62 έτη αντίστοιχα) (ρ & lt? 0.001) (Πίνακας 1, και τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Συνολικά 258/278 (92,8%) ασθενείς έλαβαν θεραπεία με θεραπευτική πρόθεση (Πίνακας 1), 199/207 (96%) των ατόμων με HPV-θετικούς όγκους (διάμεση ηλικία 60 ετών), και 59/71 (83%) των ατόμων με HPV-αρνητικούς όγκους (διάμεση ηλικία 62 έτη). Μόνο οι 258 ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με θεραπευτική πρόθεση συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση των 3 ετών DFS και OS.

Η

LMP10 Έκφραση και HPV σε TSCC και BOTSCC

LMP10 πυρηνική και κυτταροπλασματική έκφραση ήταν εκτιμάται για όλους τους 278 ασθενείς και επεξηγείται στο Σχήμα 1. LMP10 πυρηνική έκφραση δεν έδειξε κάποια σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων TSCC και BOTSCC, ούτε όσον αφορά το κλάσμα των θετικών κυττάρων ούτε με την ένταση της χρώσης (ρ = 0,115 και ρ = 0.313, αντίστοιχα, Πίνακας 2). Ωστόσο, το κλάσμα των LMP10 κυτταροπλασματικής θετικών κυττάρων ήταν σχετικά υψηλότερο στην HPV-θετικά σε σύγκριση με την ομάδα HPV-αρνητικά (p = 0,033), ενώ δεν υπήρξε σημαντική διαφορά στην LMP10 χρώσης κυτταροπλασματική ένταση μεταξύ των ομάδων (ρ = 0,211, Πίνακας 2).

η

LMP10 πυρηνική χρώση και HPV Status σε συσχετισμό με Clinical Αποτέλεσμα

LMP10 πυρηνική έκφραση αξιολογήθηκε τόσο για το κλάσμα των θετικών κυττάρων στον πυρήνα, και για την ένταση του πυρηνική χρώση, και συσχετίστηκε με την επιβίωση των 258 ασθενών που έλαβαν θεραπεία με θεραπευτική πρόθεση (που απεικονίζεται ως καμπύλες Kaplan-Meier στα σχήματα 2 και 3 αντίστοιχα)

Α και D:. DFS (Α) και OS (D ) για TSCC και BOTSCC ανεξάρτητα από το καθεστώς του HPV του όγκου. Β και Ε: DFS (Β) και OS (Ε) των ασθενών με HPV-θετικά TSCC και BOTSCC. C και F:. DFS (C) και OS (F) των ασθενών με HPV-αρνητικό TSCC και BOTSCC

Η

Α και D: DFS (Α) και OS (D) για TSCC και BOTSCC ανεξαρτήτως της κατάστασης HPV του όγκου. Β και Ε: DFS (Β) και OS (Ε) των ασθενών με HPV-θετικά TSCC και BOTSCC. C και F:. DFS (C) και OS (F) των ασθενών με HPV-αρνητικό TSCC και BOTSCC

Η

Μια απουσιάζει /χαμηλή (≤25%), σε σύγκριση με μέτρια /υψηλή ( 26 – 100%), κλάσμα LMP10 πυρηνικών θετικών κυττάρων συσχετίζεται με ένα καλύτερο 3-year DFS σε ολόκληρη την ομάδα των ασθενών, όσο και για τους ασθενείς με HPV-θετικούς όγκους, αλλά όχι μεταξύ των ασθενών με HPV-αρνητικούς όγκους (δοκιμασία log-rank , ρ = 0,002, ρ = 0,005 και ρ = 0,688 αντίστοιχα) (Σχήμα 2 Α-C). Δεν υπήρχε όμως καμία σημαντική διαφορά σε 3 χρόνια OS, κατά τη σύγκριση παρόμοιες παραμέτρους, για ολόκληρη την ομάδα, η HPV-θετικά και τα HPV-αρνητικές ομάδες (log-rank test, p = 0,115, p = 0,158 και 0,561 αντίστοιχα) ( Εικόνα 2 D-F).

μια απουσιάζει, σε σύγκριση με αδύναμα /μέτρια /strong (σήμερα), χρώση των πυρηνικών ένταση LMP10 συσχετίστηκε με ένα καλύτερο 3 ετών DFS για ολόκληρη την ομάδα (p = 0,01) και ο HPV-θετική ομάδα (p = 0.037), αλλά όχι για τον HPV-αρνητική ομάδα (p = 0,473) (Σχήμα 3Α-Γ). Για 3 χρόνια OS αυτό παρατηρήθηκε μόνο για ολόκληρη την ομάδα των ασθενών (p = 0,014) (Εικόνα 3 D).

Η πιθανή επίδραση της πυρηνικής έκφρασης LMP10 καθώς LMP10 χρώση των πυρηνικών ένταση συνεχίστηκε ξεχωριστά για οι HPV-θετικά και HPV-αρνητικές ομάδες.

Μια πολυπαραγοντική ανάλυση Cox-παλινδρόμησης έγινε για τους ασθενείς με HPV-θετικά και HPV-αρνητικούς όγκους ξεχωριστά, συμπεριλαμβανομένου του κλάσματος της LMP10 πυρηνικών θετικών κυττάρων ή LMP10 πυρηνική ένταση, την ηλικία και το στάδιο του όγκου, σε σχέση με 3-year DFS και 3 ετών OS. Για το HPV-θετική ομάδα μια απούσα /χαμηλή κλάσμα σε σύγκριση με μία μέτρια /υψηλή κλάσμα LMP10 θετικών κυττάρων ήταν ακόμα ένας καθοριστικός παράγοντας της καλύτερης 3-χρόνια DFS (p = 0,027) (Πίνακας 3), αλλά όχι την ηλικία ή το στάδιο, (ρ = 0,079 και ρ = 0,744) (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επιπλέον, καμία από αυτές τις παραμέτρους ήταν καθοριστικούς παράγοντες του 3-χρόνος OS, εκτός από την ηλικία (ρ = 0.006, δεδομένα που δεν φαίνονται) (Πίνακας 3). LMP10 χρώση των πυρηνικών ένταση δεν ήταν στατιστικά σημαντική τόσο για 3 χρόνια DFS ή 3 ετών OS (Πίνακας 3). Η αντίστοιχη ανάλυση για τον HPV-αρνητική ομάδα πρότεινε ότι η έκφραση της πυρηνικής LMP10 δεν είχε καμία επίδραση στην κλινική έκβαση σε αυτή την ομάδα (3-year DFS και 3 ετών OS) (Πίνακας 3).

Η

LMP10 Cytoplasmic χρώση και HPV Status σε συσχετισμό με Clinical Αποτέλεσμα

LMP10 κυτταροπλασματική έκφραση αξιολογήθηκε τόσο για το κλάσμα των θετικών κυττάρων και η ένταση της χρώσης και συσχετίστηκε με την επιβίωση για τους 258 ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με θεραπευτική πρόθεση (που απεικονίζεται ως Kaplan-Meier καμπύλες στα σχήματα 4 και 5 αντίστοιχα)

Α και D:. DFS (Α) και OS (D) για TSCC και BOTSCC ανεξάρτητα από την κατάσταση του HPV του όγκου. Β και Ε: DFS (Β) και OS (Ε) των ασθενών με HPV-θετικά TSCC και BOTSCC. C και F:. DFS (C) και OS (F) των ασθενών με HPV-αρνητικό TSCC και BOTSCC

Η

Α και D: DFS (Α) και OS (D) για TSCC και BOTSCC ανεξαρτήτως της κατάστασης HPV του όγκου. Β και Ε: DFS (Β) και OS (Ε) των ασθενών με HPV-θετικά TSCC και BOTSCC. C και F:. DFS (C) και OS (F) των ασθενών με HPV-αρνητικό TSCC και BOTSCC

Η

Μια μέτρια /υψηλή σε σύγκριση με έναν απόντα /χαμηλό κλάσμα του LMP10 κυτταροπλασματική θετικών κυττάρων συσχετίζεται στην καλύτερη 3-year DFS για ασθενείς με HPV-αρνητικούς όγκους, αλλά όχι για ολόκληρη την ομάδα των ασθενών, ούτε για τους ασθενείς με HPV-θετικούς όγκους, (log-rank test, p = 0,003, p = 0,488 και p = 0,086 , αντίστοιχα (Σχήμα 4 Α-Γ). για 3-χρόνια OS η αντίστοιχη συσχέτιση ήταν σημαντική τόσο για την HPV-αρνητικά και ολόκληρη την ομάδα, αλλά όχι για τον HPV-θετική ομάδα (log-rank test, ρ = 0.001, ρ & lt ?. 0,001 και p = 0,159, αντίστοιχα), (Σχήμα 4 D-F)

Ασθενής /μέτρια /υψηλή (σήμερα) LMP10 κυτταροπλασματική χρώση ένταση σε σύγκριση με απούσα χρώση LMP10 συσχετίστηκε με καλύτερη 3 ετών DFS για ασθενείς με HPV-αρνητικούς όγκους, αλλά όχι για το σύνολο της ομάδας ή για ασθενείς με HPV-θετικούς όγκους (log-rank test ρ = 0.001, ρ = 0.219, και 0.368, αντίστοιχα) (Εικόνα 5 Α-Ο). για 3-χρόνια OS η αντίστοιχη συσχέτιση ήταν σημαντική τόσο για την HPV-αρνητικά και ολόκληρη την ομάδα, αλλά όχι για την ομάδα HPV-θετικό (log-rank test ρ = 0,009, ρ = 0,01 και ρ = 0,334, αντίστοιχα (Εικόνα 5 D -F).

Η πιθανή επίδραση των LMP10 κυτταροπλασματικής έκφρασης επιδιώκεται χωριστά για τον HPV-θετικά και HPV-αρνητικές ομάδες (Πίνακας 3). Για ότι μια πολυμεταβλητή ανάλυση Cox-παλινδρόμησης διεξήχθη σε ασθενείς με HPV-θετικών και HPV-αρνητικούς όγκους, συμπεριλαμβανομένου του κλάσματος του LMP10 κυτταροπλασματική θετικών κυττάρων, την ηλικία και το στάδιο, σε σχέση με 3-year DFS και 3-χρόνος OS. Μια αντίστοιχη ανάλυση διεξήχθη για LMP10 κυτταροπλασματική ένταση. Για τους ασθενείς με HPV-αρνητικούς όγκους, τόσο μέτρια /υψηλό κλάσμα της LMP10 κυτταροπλασματική θετικών κυττάρων, και η παρουσία του κυτταροπλασματική χρώση LMP10 συσχετίστηκε στην καλύτερη 3-χρόνια DFS (p = 0,014 και ρ = 0,006, αντίστοιχα) (Πίνακας 3 ). Τα αντίστοιχα ποσοστά για 3 χρόνια OS ήταν p = 0,010 και p = 0,051, αντίστοιχα (Πίνακας 3). Η ηλικία και το στάδιο δεν έφθασε στατιστική σημασία στην ανάλυση για ασθενείς με HPV-αρνητικούς όγκους (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η αντίστοιχη ανάλυση για τον HPV-θετική ομάδα πρότεινε ότι κυτταροπλασματική έκφραση LMP10 δεν είχε καμία επίδραση στην κλινική έκβαση (3-year DFS και 3 ετών OS) (Πίνακας 3).

Έκφραση LMP10, HLA Τάξης I Έκφραση και HPV Κατάσταση στην Συσχέτιση στην Κλινική Αποτέλεσμα

σε πρόσφατες μελέτες που έχουν δείξει ότι η απούσα ή χαμηλή έκφραση HLA τάξης Ι συσχετίστηκε με καλύτερη επιβίωση σε ασθενείς με HPV-θετικά TSCC και BOTSCC, ενώ το αντίθετο συνέβη σε ασθενείς με HPV-αρνητικό TSCC και BOTSCC [27], [28]. Για να διερευνηθεί εάν η συσχέτιση της έκφρασης LMP10 προβλέπει επιβίωση ανεξάρτητη από HLA τάξης Ι έκφραση ή όχι, δύο πολυμεταβλητή Cox-αναλύσεις παλινδρόμησης σε σχέση με 3-year DFS διεξήχθησαν, με HLA τάξης Ι δεδομένα που λαμβάνονται από Näsman et al [27].

στην πρώτη ανάλυση, HPV-θετικά TSCC και BOTSCC εξετάστηκαν και η ανάλυση περιλάμβανε το κλάσμα του LMP10 πυρηνικών θετικών κυττάρων, την ηλικία, το στάδιο και HLA τάξης Ι έκφραση αναλύθηκε η ένταση του HCA2-χρώση. Όπως παρουσιάζεται στον Πίνακα 4, τόσο LMP10 και την ένταση HCA2 ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες του 3-year DFS.

Η

Στη δεύτερη ανάλυση, HPV-αρνητικό TSCC και BOTSCC μελετήθηκαν και η ανάλυση περιείχε το κλάσμα του LMP10 κυτταροπλασματική θετικών κυττάρων, την ηλικία, το στάδιο και το κλάσμα των θετικών κυττάρων HLA τάξης Ι αποτιμήθηκε με HCA2-χρώση. Όπως παρουσιάζεται στον Πίνακα 4, τόσο το κλάσμα του LMP10 και HCA2 θετικά κύτταρα ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες του 3-year DFS.

Συζήτηση

Η παρούσα μελέτη διερευνήθηκε η έκφραση LMP10 τόσο στα πυρηνικά και κυτταροπλασματικά τμήματα , σε σχέση με την κατάσταση του HPV και την κλινική έκβαση σε 195 TSCC και 83 περιπτώσεις BOTSCC. πυρηνικά και κυτταροπλασματικά έκφραση LMP10, συμπεριλαμβανομένου τόσο του κλάσματος των θετικών κυττάρων και την ένταση της χρώσης ήταν παρόμοια σε HPV-θετικών και HPV-αρνητικούς όγκους, εκτός από την υψηλότερη κλάσμα LMP10 κυτταροπλασματικής θετικών κυττάρων στο HPV-θετική ομάδα.

Επιπλέον, μια απούσα /χαμηλή κλάσμα LMP10 θετικών κυττάρων στον πυρήνα, καθώς και απών ένταση πυρηνική χρώση συσχετίζεται με ένα καλύτερο 3-χρόνια DFS για ασθενείς με HPV-θετικούς όγκους, αλλά όχι για εκείνους με HPV-αρνητικούς όγκους . Το αντίστροφο βρέθηκε για κυτταροπλασματική χρώση LMP10, όπου μία μέτρια /υψηλό κλάσμα των θετικών κυττάρων και ασθενές /μέτρια /υψηλή ένταση συσχετίστηκε με καλύτερα 3-χρόνια DFS και OS στο HPV-αρνητικό, αλλά όχι στο HPV-θετική ομάδα.

Ο λόγος για τη διαφορά σε σχέση με χρώση πυρηνικά και κυτταροπλασματικά LMP10 και επιβίωσης για τους HPV-θετικών και HPV-αρνητικών ομάδες δεν είναι προφανής. Σε προηγούμενες μελέτες LMP10 κυτταροπλασματική έκφραση έχει αξιολογηθεί στην κύστη και ο καρκίνος του οισοφάγου, τόσο για το κλάσμα των θετικών κυττάρων και την ένταση της χρώσης, αλλά δεν φάνηκε να έχει οποιαδήποτε επίδραση προγνωστική [34], [35], [37]. Ωστόσο, σε αυτές τις μελέτες δεν υπήρχε καμία χωριστή ανάλυση των πυρηνικών και κυτταροπλασματικά έκφρασης. Σε αυτή τη μελέτη, αξιολόγηση και ανάλυση των πυρηνικών και κυτταροπλασματικών χρώση παρέχονται πρόσθετες πληροφορίες.

Για τις γνώσεις μας, δεν υπάρχουν προγενέστερες μελέτες για την έκφραση LMP10 σε σχέση με την επιβίωση σε HNSCC. Meissner

et al.

Κατέδειξε συσχέτιση με την επιβίωση σε HNSCC τόσο για LMP2 και LMP7 [38] και σε μια πρόσφατη μελέτη, η έκφραση της LMP7 επίσης συσχετίζεται με την επιβίωση στον καρκίνο σιελογόνων [39]. Ωστόσο, οι όγκοι δεν αναλύθηκαν για την παρουσία του HPV σε οποιαδήποτε από αυτές τις μελέτες.

Το εύρημα ότι μια χαμηλή έκφραση πυρηνικών LMP10 συσχετίζεται με ένα καλύτερο 3-χρόνια DFS στον HPV-θετική ομάδα, ενώ μια αντίστοιχη υψηλή κυτταροπλασματική έκφραση LMP10 συσχετίζεται με καλύτερη 3-year DFS στον HPV-αρνητική ομάδα προτείνει αρκετές συνέπειες. Πρώτα απ ‘όλα, η μελέτη μας δείχνει ότι LMP10 θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός δείκτης για ασθενείς με είτε HPV-θετικά ή HPV-αρνητικών όγκων. Έχουμε προηγουμένως ήταν σε θέση να αποδείξει ότι ένας βιοδείκτης, στην ίδια οδό, HLA τάξης Ι έκφραση, μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε ένα διαφορικό τρόπο να προβλέψουμε το κλινικό αποτέλεσμα σε HPV-θετικών και HPV-αρνητικών όγκων. Έτσι, ένα απών /χαμηλή HLA έκφραση τάξης Ι είναι ένας θετικός προγνωστικός παράγοντας για ασθενείς με HPV-θετικούς όγκους, ενώ το αντίθετο ισχύει για τους ασθενείς με HPV-αρνητικούς όγκους, όπου μια έκφραση υψηλού HLA τάξης Ι είναι επωφελής [27]. Έτσι, τόσο όσον αφορά τα HLA τάξης Ι και έκφραση LMP10 σε σχέση με την επιβίωση, υπήρχαν διαφορές μεταξύ HPV-θετικών και HPV-αρνητικούς όγκους, αν και αυτά ήταν εντονότερη για HLA τάξης Ι Αξιοσημείωτα, όπως αποδεικνύεται από την πολυμεταβλητή ανάλυση στον πίνακα 4, η έκφραση της LMP10 και HLA τάξης Ι ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες της επιβίωσης τόσο για τους HPV-θετικά και HPV-αρνητικούς όγκους. Οι υποκείμενοι μηχανισμοί πίσω από τη ρύθμιση της LMP10 και έκφραση HLA τάξης Ι στους όγκους αυτούς θα πρέπει επομένως τουλάχιστον εν μέρει να είναι χωριστά.

Δεν είναι γνωστό εάν η παρουσία του HPV μπορεί να επηρεάσει άμεσα την έκφραση LMP10, και ακόμη και αν αυτό είναι η περίπτωση, ο μηχανισμός πίσω από αυτή τη ρύθμιση δεν είναι γνωστή. Έχει αποδειχθεί ότι ο HPV Ε5 έχει τη δυνατότητα να ρυθμίζουν προς τα κάτω την έκφραση των HLA τάξης Ι [40]. Είτε Ε5 επηρεάζει επίσης την έκφραση της LMP10 έχει, εξ όσων γνωρίζουμε, δεν έχουν διερευνηθεί. Έχει δειχθεί ότι τα ανθρώπινα ιοί των ανθρωπίνων θηλωμάτων έχουν την ικανότητα να ρυθμίζουν την HLA τάξης Ι βαριά αλυσίδα, καθώς και μερικά από τα συστατικά μηχανήματα επεξεργασίας αντιγόνου στο μεταγραφικό επίπεδο [41]. Ωστόσο, η μεταγραφική ρύθμιση π.χ. ο υποκινητής LMP2 βρέθηκε να είναι εξαρτώμενη από την πρωτεΐνη Ε7 του HPV 18 και του χαμηλού κινδύνου HPV 6b, αλλά όχι από Ε7 του HPV16. Αυτό υποδηλώνει ότι υπάρχει μια διαφορά δυναμικού στις κυτταρικές επιδράσεις που προκαλούνται από την πρωτεΐνη Ε7 του HPV16 και HPV18. Αξίζει να σημειωθεί, η πλειοψηφία των περιπτώσεων TSCC και BOTSCC είναι θετικές για HPV16. Είτε η έκφραση του LMP10 μπορεί να ρυθμιστεί με Ε7 έχει, εξ όσων γνωρίζουμε, δεν έχουν διερευνηθεί. Αξιοσημείωτα, στην παρούσα μελέτη, το κλάσμα του LMP10 κυτταροπλασματικής θετικών κυττάρων ήταν υψηλότερη στην HPV-θετικά σε σύγκριση με το HPV-αρνητική ομάδα. Ωστόσο, δεν υπήρξε σημαντική διαφορά στην LMP10 χρώσης κυτταροπλασματική ένταση μεταξύ των ομάδων. Αυτό δείχνει την πιθανότητα ορισμένα αλλά όχι μια ισχυρή ρύθμιση από HPV σε αυτά τα καρκινικά κύτταρα.

Υπάρχουν κάποιοι περιορισμοί στη μελέτη μας. Κατά κύριο λόγο η μελέτη είναι αναδρομική, αλλά αυτό δεν μπορεί να επηρεάσει τα αποτελέσματα. Επιπλέον, υπήρχαν λιγότερες HPV-αρνητικές περιπτώσεις, η οποία είναι μια άμεση αναπαράσταση της επικράτησης υψηλών HPV σε OSCC σε ασθενείς από τη Σουηδία και σήμερα.

Εν κατακλείδι, αυτή η μελέτη δείχνει ότι η έκφραση LMP10 στην TSCC και BOTSCC συσχετίζεται με τη νόσο επιβίωση χωρίς τόσο για τους ασθενείς με HPV-θετικών και HPV-αρνητικούς όγκους και έχει τη δυνατότητα να χρησιμοποιηθεί σε ένα κλινικό περιβάλλον. Ωστόσο, δεδομένου ότι η έκφραση της πυρηνικής LMP10 προβλέπει την επιβίωση των ασθενών με HPV-θετικούς όγκους, ενώ η κυτταροπλασματική έκφραση LMP10 συσχετίζεται με την επιβίωση για τον HPV-αρνητικούς όγκους, η έκφραση LMP10 θα πρέπει να αναλυθούν σε σχέση με την κατάσταση του HPV όγκου.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Caitrin Jane Crudden για την προσεκτική ανάγνωση του χειρογράφου.