καρκίνου

Αφηρημένο

προστάτη είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου των ανδρών στο δυτικό κόσμο, και νέες προσεγγίσεις για προστάτη μείωση του κινδύνου του καρκίνου χρειάζονται. Plant προερχόμενο φαινολικές ενώσεις εξασθενεί την ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη σε προκλινικά μοντέλα από διάφορους μηχανισμούς, η οποία είναι σύμφωνη με επιδημιολογικά ευρήματα υποδηλώνουν ότι η κατανάλωση φυτικής προέλευσης δίαιτες συνδέεται με χαμηλό κίνδυνο του καρκίνου του προστάτη. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογήσει τις επιπτώσεις ενός νέου λιγνάνες stilbenoid μείγμα σε PC-3M-luc2 ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του προστάτη

in vitro

και ορθοτοπική ξενομοσχεύματα. Λιγνανών και stilbenoid πλούσια σε εκχύλισμα που λαμβάνεται από δασικής πεύκης (

Pinus sylvestris

) κόμβους. Pine εκχύλισμα κόμπο καθώς και στιλβενοειδών (μεθυλ pinosylvin και pinosylvin), και λιγνάνες (matairesinol και nortrachelogenin) που υπάρχουν στο εκχύλισμα πεύκου κόμπο έδειξε αντιπολλαπλασιαστική και προαποπτωτικής αποτελεσματικότητα σε ≥40 συγκέντρωση μΜ

in vitro

. Επιπλέον, πεύκο εκχύλισμα κόμπος προέρχονται στιλβενοειδή ενισχυμένη παράγοντα νέκρωσης όγκων που σχετίζονται με συνδέτη που επάγει απόπτωση (TRAIL) επήγαγε απόπτωση ήδη στο ≥10 μΜ συγκεντρώσεις. Σε ορθοτοπική PC-3M-luc2 ξενομόσχευμα φέρουν ανοσοκατεσταλμένοι ποντίκια, τριών εβδομάδων από του στόματος έκθεση σε εκχύλισμα πεύκου κόμπος (52 mg λιγνανών και στιλβενοειδή ανά kg σωματικού βάρους) ήταν καλά ανεκτή και έδειξε αντι-ογκογόνο αποτελεσματικότητα, αποδεικνύεται από πολυπαραγοντική ανάλυση συνδυασμού ουσιωδών δείκτες της ανάπτυξης του όγκου (δηλαδή ο όγκος του όγκου, αγγείωση, και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων). Methyl pinosylvin, pinosylvin, matairesinol, nortrachelogenin, καθώς επίσης και η ρεσβερατρόλη, ένας μεταβολίτης της pinosylvin, ανιχνεύθηκαν σε ορό σε ολική συγκέντρωση 7-73 μΜ, επιβεβαιώνοντας τη βιοδιαθεσιμότητα του εκχυλίσματος πεύκου κόμπο προέρχονται λιγνάνες και στιλβενοειδή. Εν περιλήψει, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι το εκχύλισμα πεύκου κόμπος είναι μια νέα και αποδοτική πηγή της ρεσβερατρόλης, μεθύλιο pinosylvin και άλλα βιοενεργά λιγνάνες και στιλβενοειδή. Pine εκχύλισμα κόμπος δείχνει αντικαρκινική αποτελεσματικότητα σε προκλινικό μοντέλο καρκίνου του προστάτη, και μας

in vitro

δεδομένα δείχνουν ότι οι ενώσεις που προέρχονται από το εκχύλισμα μπορεί να έχουν δυναμικό ως νέων χημειο-ευαισθητοποιητές για TRAIL. Τα ευρήματα αυτά προωθήσει περαιτέρω την έρευνα σχετικά με τις αιτήσεις των βιοχημικών ξύλο σχετίζονται με την υγεία

Παράθεση:. Yatkin E, Polari L, Laajala TD, Smeds Α, Eckerman C, Holmbom B, et al. (2014) Μυθιστόρημα Lignan και Stilbenoid μίγμα εμφανίζει Αντικαρκινική Αποτελεσματικότητα σε προκλινικά PC-3M-luc2 Καρκίνος του προστάτη μοντέλο. PLoS ONE 9 (4): e93764. doi: 10.1371 /journal.pone.0093764

Επιμέλεια: Rajesh Agarwal, Πανεπιστήμιο του Κολοράντο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 13 Ιαν 2014? Αποδεκτές: 8 Μάρτη του 2014? Δημοσιεύθηκε: 3 Απριλίου, 2014

Copyright: © 2014 Yatkin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από την FIBIC φινλανδική βιοοικονομία Cluster, το πρόγραμμα BioRefine της φινλανδικής Φορέας χρηματοδότησης για την Τεχνολογία και την καινοτομία, και η Ακαδημία της Φινλανδίας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου των ανδρών στη Βόρεια Αμερική, Δυτική Ευρώπη, Ανατολική Ευρώπη και τη Σκανδιναβία. Η μεγάλη φυσική ιστορία του προστάτη παρουσιάζει ένα σχετικά μεγάλο χρονικό παράθυρο για διαιτητικές ή φαρμακευτικές παρεμβάσεις που θα μπορούσε να εκδηλωθεί ως μείωση της συχνότητας εμφάνισης, υποτροπή, νοσηρότητα ή εξέλιξη της νόσου [1]. Προτεινόμενες τροποποιήσιμοι παράγοντες κινδύνου για την PCA που παρέχει στους δυνητικούς στόχους για την πρόληψη περιλαμβάνουν φλεγμονή, στεροειδείς ορμόνες και οι υποδοχείς τους, την παχυσαρκία, την υπερχοληστερολαιμία και διατροφικών παραγόντων [2]. Φυσικό φαινολικές ενώσεις, που διαθέτουν αντικαρκινικές ιδιότητες, μπορούν να προσφέρουν ενδιαφέρουσες δυνατότητες για τη μείωση της επιβάρυνσης του καρκίνου [3], [4]. Ωστόσο, περισσότερα στοιχεία σχετικά με την αποτελεσματικότητα και τους μηχανισμούς δράσης τους απαιτείται από σχετικές προκλινικά μοντέλα, προκειμένου να επιλεγούν οι βέλτιστες ενώσεις ή μείγματα για τις κλινικές δοκιμές και την ανάπτυξη προϊόντων.

Τα δέντρα είναι μια πλούσια πηγή φαινολικών ενώσεων, δομικά πανομοιότυπα ή παρόμοια με εκείνα της βρώσιμα φυτά [5]. Αυτές οι ενώσεις μπορούν εύκολα να απομονωθούν από ξύλο από υδρόφιλες εκχύλιση μετά την αφαίρεση των λιπόφιλων εκχυλίσματα από εκχύλιση με εξάνιο [6]. Ξύλο που προέρχονται από εκχυλίσματα είναι επομένως μια οικονομικά αποδοτική πηγή φυσικού φαινολικές ενώσεις, και μια ελκυστική επιλογή για την ανάπτυξη νέων προϊόντων που προάγουν την υγεία.

φαινολικά των φυτών, όπως οι λιγνάνες και στιλβενοειδή, ρυθμίζουν πολλές σημαντικές βιολογικές διεργασίες σε κύτταρα θηλαστικών [7], [8], και δείχνουν αντικαρκινική ιδιότητες σε προκλινικά μοντέλα ΣΕΣΣ. Rye ή λιναρόσπορο που περιέχει δίαιτες, οι οποίες έχουν υψηλή περιεκτικότητα λιγνανών, καθώς και μια δίαιτα συμπληρωμένη με το ξύλο που προέρχεται από φυτό λιγνανών, 7-hydroxymataresinol (HMR), αναστέλλουν την ανάπτυξη PCA σε

in vivo

[ ,,,0],9], [10], [11], [12]. Παρομοίως, φυτικής προέλευσης στιλβενοειδή, ρεσβερατρόλη (RV) και pterostilbene έχουν αναφερθεί ότι καταστέλλουν την ανάπτυξη του προστάτη

in vivo

[13]. Αρκετές πιθανοί μηχανισμοί, με τους οποίους οι λιγνάνες και στιλβενοειδή μπορεί να ασκήσει αντικαρκινικές δράσεις τους σε PCa έχουν ταυτοποιηθεί, συμπεριλαμβανομένων διακοπή του κυτταρικού κύκλου και η επαγωγή απόπτωσης [14], [15], η αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων [16], [17], η αγγείωση του όγκου [18], η διαμόρφωση του προφίλ κυτοκίνης [19], και η ευαισθητοποίηση των καρκινικών κυττάρων σε προγραμματισμένο κυτταρικό θάνατο [20], [21], [22].

Παράγοντας Νέκρωσης όγκων-Σχετικές συνδέτη που επάγει απόπτωση (TRAIL ) μεσολάβηση απόπτωση έχει πρόσφατα αναγνωριστεί ως μια ενδιαφέρουσα στόχο για λιγνάνες και στιλβενοειδή. TRAIL είναι μια πρωτεΐνη που λειτουργεί ως συνδέτης, το οποίο ενεργοποιεί μια οδό σηματοδότησης θανάτου ειδικά στα καρκινικά κύτταρα, με ελάχιστη τοξικότητα σε κανονικούς ιστούς [23]. Αντοχή σε TRAIL είναι κοινή σε προστάτη, και οι ενώσεις που ευαισθητοποιούν προστάτη σε TRAIL είναι ήδη υπό διερεύνηση. Είναι ενδιαφέρον, λιγνάνες, όπως matairesinol (MR), και nortrachelogenin (NTG), καθώς επίσης και την ενίσχυση της RV αντικαρκινική δράση του TRAIL σε κύτταρα προστάτη [21], [22] ή ξενομοσχευμάτων [18].

Πειραματικό έτσι μελέτες δείχνουν ότι τα φυσικά λιγνάνες και στιλβενοειδή εξασθενεί την ανάπτυξη του προστάτη, μέσω πολλών μηχανισμών δράσης. Είναι, ως εκ τούτου, λογικό να προτείνουμε ότι ο συνδυασμός των δύο ομάδων των φαινολικών ενώσεων μπορεί να προσφέρει επιπλέον οφέλη κατά την χρήση των απλών ενώσεων. Ωστόσο, δεν δημοσιεύονται στοιχεία υπάρχουν σχετικά με τις συνδυασμένες επιπτώσεις των λιγνανών και στιλβενοειδή σε ελεγχόμενες πειραματικές ρυθμίσεις. Στην παρούσα μελέτη, αποδείξαμε την ανάπτυξη-ανασταλτική δράση του εκχυλίσματος πεύκου knotwood (PKE), πλούσιο σε λιγνάνες και στιλβενοειδή, στο PC-3M-luc2 ανθρώπινα κύτταρα του προστάτη

in vitro

και

in vivo

. Επιπλέον, επιβεβαιώσαμε τη βιοδιαθεσιμότητα της PKE που προέρχονται από φαινολικά, και προσδιόρισε τις ενώσεις που μπορούν να λογοδοτήσουν για τις αντικαρκινικές επιδράσεις του PKE.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Ζώων φροντίδα και χρήση διεξήχθη σύμφωνα με τη φινλανδική νόμο για τα πειράματα σε ζώα και ΕΕ νόμους, τις κατευθυντήριες γραμμές και συστάσεις. Όλες οι μελέτες εγκρίθηκαν από το εθνικό συμβούλιο των ζώων Πείραμα στη Φινλανδία (αριθμός αδείας 1993 /04.10.03 /2011).

Προετοιμασία και χημικών χαρακτηριστικών του PKE

Σκωτσέζοι κόμπους πεύκο ελήφθησαν από μια βιομηχανική διαδικασία πολτού μύλο (τα λεγόμενα πέτρινα παγίδα) (UPM Tervasaari, Valkeakoski, Φινλανδία). Οι κόμποι αλέστηκαν, διαλογή (& lt? 2 mm), λυοφιλοποιείται και εκχυλίζεται διαδοχικά με

n

εξάνιο στους 90 ° C (3 χ 5 λεπτά) και αιθανόλης-νερού (95:5 κατ ‘όγκο .) στους 100 ° C (3 χ 5 λεπτά) χρησιμοποιώντας επιταχυνόμενη εκχύλιση με διαλύτη. Το PKE χημικώς χαρακτηρίζεται από την ανίχνευση ιονισμού GC-φλόγας (FID), GC-MS και με υψηλής απόδοσης χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους με αναθυμιάσεων σκέδασης φωτός ανίχνευσης (HPSEC-ELSD). Η GC-FID, GC-MS, και HPSEC-ELSD αναλύσεις διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. GC-FID χρησιμοποιήθηκε για τον ποσοτικό προσδιορισμό των συστατικών στο εκχύλισμα που εκλούεται από τη στήλη GC. Η ποσοτικοποίηση βασίστηκε στην τριπλούν αναλύσεις του ίδιου εκχυλίσματος. Heneicosanoic οξύ χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικό πρότυπο, με παράγοντες η ανταπόκριση 1.00. Οι μεμονωμένες ενώσεις που ανιχνεύονται με GC-FID ταυτοποιήθηκαν με GC-MS, χρησιμοποιώντας εμπορικά και τα δικά φασματική βιβλιοθήκες του εργαστηρίου. Η μοριακή κατανομή της μάζας των συστατικών PKE προσδιορίστηκε με HPSEC-ELSD

Τα κύρια ένωση ομάδες στο PKE ήταν:. Λιγνάνες (16%), στιλβενοειδών (17%), λιπαρά οξειδωμένο ρητίνη (20%), οξέα ρητίνη (24%), και τα υψηλότερα-μοριακή μάζα ενώσεων (550 έως 4000 Da, 18%). Οι συγκεντρώσεις (% κατά βάρος του ξηρού εκχυλίσματος) από τις κύριες GC-ανιχνεύσιμη φαινολικά στο PKE ήταν pinosylvin μονομεθυλ αιθέρα (ευρωβουλευτές, 10,2%), NTG (7,0%), pinosylvin (PS, 4,0%), MR (1,5%) , αβιετικό οξύ (1,5%), και pinostilbene (0,4%). Οι GC-ανιχνεύσιμη ρητίνη οξέα αντιπροσώπευαν το 21,8% του ξηρού βάρους του PKE. Μικρά ποσά (& lt? 0,1-0,5%) των λιγνανών ΗΜΚ, conidendric οξύ, σεκοϊσολαρικιρεσινόλης και todolactol Ένα βρέθηκαν

Αναφορά και Ενώσεις Δοκιμής

Η προετοιμασία και η καθαρότητα της ΗΜΚ λιγνάνες, MR. , ΝΤΟ, secoisolarici-, larici-, cyclolarici-, 7-oxomatai-, πεινο-και medioresinol, α-conidendrin, εντερολακτόνη, 7-υδροξυεντερολακτόνη, MR-

δ

6, και enterolactone-

d

6 έχουν περιγραφεί προηγουμένως [25], [26]. Η στιλβένια PS και ευρωβουλευτές και η ρητίνη οξύ αφυδροαβιετικόν οξύ (καθαρότητα & gt? 95%) παρασκευάστηκαν στο εργαστήριο από ξύλο και χαρτί Χημεία στο Åbo Akademi University με απομόνωση από ξύλο και καθαρισμό με flash χρωματογραφία (Biotage Flash 40i) με στήλες πυριτίου. RV και εντεροδιόλης ήταν από Sigma-Aldrich Co, pinostilbene από TCL Pharma Chem., Inc (Vaughan, ON, Καναδάς) και

O

-methylpodocarpic οξύ, νεοαβιετικό οξύ και αβιοτικό οξύ από Helix Biotech Corp. (CanSyn Chem Corp., Τορόντο, Καναδάς).

για να μελετήσουμε τις συνδυασμένες επιπτώσεις της καθαρής PKE που προέρχονται από λιγνάνες και στιλβενοειδή

in vitro

, έχουμε ετοιμάσει ένα μείγμα λιγνάνες στιλβενίων (μείγμα LS) που περιέχει οι τέσσερις πιο άφθονα PKE που προέρχονται από ενώσεις στις μοριακές αναλογίες παρόμοιες με PKE (Πίνακας 1).

η

Cell Culture και τον πολλαπλασιασμό, απόπτωση και κυτταρικού κύκλου Αναλύσεις

PC-3M-luc2 κύτταρα (δαγκάνα Life Sciences, Hopkinton, μΑ) καλλιεργήθηκαν σε άνευ ερυθρού φαινόλης μέσο Eagle τροποποιημένο Dulbeccos συμπληρωμένο με 50 IU /ml πενικιλλίνη, 50 μg /ml στρεπτομυκίνη, 2 mM L-γλουταμίνη, και 10% θερμικά-αδρανοποιημένο εμβρυϊκό βόειο ορό ( Invitrogen, Paisley, UK). Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε υγροποιημένο 5% CO

2 /ατμόσφαιρα αέρα στους 37 ° C.

Για την δοκιμασία πολλαπλασιασμού των κυττάρων, PC-3M-luc2 κύτταρα σπάρθηκαν σε 96 φρεατίων πλάκα (1500 κύτταρα ανά φρεάτιο). Διμεθυλ σουλφοξείδιο διαλύματα παρακαταθήκης του PKE (1-100 mg /l), καθαρισμένες ενώσεις (1-100 μΜ) ή μάρτυρες διμεθυλοσουλφοξείδιο παρασκευάστηκε στο μέσο καλλιέργειας προστέθηκαν σε φρεάτια (έξι αντίγραφα). Μετά από 48 ώρες, ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων μετρήθηκε με ELISA Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού BrdU κιτ ανοσοδοκιμασίας (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Για την δοκιμασία απόπτωσης, PC-3M-luc2 κύτταρα σπάρθηκαν σε ένα 96 -Καλά πλάκα. Όταν 60-80% συρροή ήμισυ του μέσου απομακρύνθηκε και αντικαταστάθηκε με το μέσο που περιέχει τις ενώσεις του ξύλου που προέρχεται από (τελικές συγκεντρώσεις 1-40 mg /l). Μετά από 48 ώρες, τα κύτταρα αποκολλήθηκαν με θρυψίνη και διασπάστηκαν με 0.4 Μ ρυθμιστικό κιτρικού σε PBS που περιέχει 0.3% Triton-X (Sigma Life Sciences, St. Louis, ΜΟ). Πυρήνες και πυρηνικά θραύσματα σημάνθηκαν με ιωδιούχο προπίδιο (Sigma). Για τον προσδιορισμό του κλάσματος των γεγονότων υπο-G0 /G1, δείγματα αναλύθηκαν με κυτταρόμετρο ροής (BD LSR II, BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA). Για την αξιολόγηση της ευαισθησίας TRAIL, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με συνδυασμό των ενώσεων που προέρχονται από ξύλο (όπως παραπάνω) και το ανθρώπινο TRAIL /Apo2L (αρ. Κατ. C-63600, Promokine, Heidelberg, Germany) σε συγκεντρώσεις των 3, 25, 50, και 100 . ng /ml

ορθοτοπική PC-3M-luc2 ξενομοσχεύματα σε αθυμικούς ποντικούς

Hsd: αθυμικού – Foxn1

ηυ αρσενικών ποντικών (5-6 εβδομάδων) που αγοράστηκαν από την Harlan εργαστήρια (Horst, Ολλανδία) στεγάστηκαν σε άσηπτες συνθήκες στο Κεντρικό Εργαστήριο ζώων του Πανεπιστημίου του Turku. Οι ποντικοί εγκλιματίστηκαν για δύο εβδομάδες? παρέχεται με σόγια χωρίς δίαιτα φυσικό συστατικό (RM3, SDS, Essex, Ηνωμένο Βασίλειο) και το νερό της βρύσης

κατά βούληση

.

PC-3M-luc2 κύτταρα που χρησιμοποιούνται στο πείραμα ορθοτοπική ξενομόσχευμα καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 ερυθρό φαινόλης-ελεύθερο μέσο συμπληρωμένο με 50 IU /ml πενικιλλίνη, 50 μg /ml στρεπτομυκίνη, 2 mM L-γλουταμίνη, και 10% θερμοαπενεργοποιημένο βόειο εμβρυϊκό ορό. Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε υγροποιημένο 5% CO

2 /ατμόσφαιρα αέρα στους 37 ° C. κύτταρα PC-3M-luc2 (1 × 10

6 κύτταρα σε 20 μΐ σκέτο ΚΡΜΙ 1640) εμβολιάστηκαν σε πλαγιοπίσθιο προστάτη μέσω μιας κοιλιακής τομής υπό αναισθησία με ισοφλουράνιο. Για την ανακούφιση του πόνου, οι ποντικοί έλαβαν βουπρενορφίνη (Temgesic, 0,05-0,1 mg /kg

sc

.) Και carpofen (Rimadyl, 5 mg /kg

sc

.) Πριν και μετά την επέμβαση, αντίστοιχα. Η ανάπτυξη του όγκου ακολουθούμενη από βιοφωταύγεια απεικόνισης με IVIS αυλούς ΙΙ, που είναι εξοπλισμένα με XGI-8 Συστήματος Αερίου Αναισθησία (δαγκάνα Life Sciences, Runcorn, Ηνωμένο Βασίλειο). Οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με ισοφλουράνη, εγχύεται

ip

με 150 mg /kg D-λουσιφερίνη (Xenogen αρ. Κατ. XR-1001, Oregon, USA) 10 λεπτά πριν την απεικόνιση, και βιοφωταύγειας ποσοστώθηκε χρησιμοποιώντας LivingImage 4.09A λογισμικού άνθρακα (Xenogen).

Μία εβδομάδα μετά τον εμβολιασμό, τα ζώα άνευ όγκου εντοπίστηκαν από απεικόνισης βιοφωταύγεια και αποκλείστηκαν από τη μελέτη. ποντίκια που φέρουν όγκου χορηγήθηκαν σε φορέα (έλεγχος), χαμηλή δόση (32 mg /kg) ή υψηλή δόση (160 mg /kg) ομάδες PKE. Χαμηλής και υψηλής δόσης περιείχε περίπου 5,0 και 5,4, και 25 και 27 mg των λιγνανών και στιλβενοειδών, αντίστοιχα. PKE διαλύθηκε σε ένα όχημα που περιείχε 10% (ν /ν) απόλυτης αιθανόλης και 90% (ν /ν) καλαμποκέλαιο. Τόσο οχήματος και PKE καθετηριάστηκαν

δ.σ..

Καθημερινά. Οι ποντικοί ζυγίστηκαν εβδομαδιαίως και απεικόνισης βιοφωταύγειας διεξήχθη δύο φορές την εβδομάδα.

Κατά τη διάρκεια της τρίτης εβδομάδας της θεραπείας 24 ώρες δείγματα ούρων συλλέχθηκαν σε μεταβολικούς κλωβούς (5-6 ποντικοί ανά κλωβό). Συλλέχθηκαν ούρα σε βάζα που περιέχουν 0.15 Μ αζίδιο του νατρίου και 0,56 Μ ασκορβικού οξέος ως συντηρητικά. Τα δείγματα ούρων εφυγοκεντρήθησαν και αποθηκεύτηκαν σε -20 ° C μέχρι να αναλυθούν.

Μετά την θεραπεία των τριών εβδομάδων, τα ποντίκια θυσιάστηκαν με CO

2 ασφυξία ακολουθούμενη από αυχενική εξάρθρωση. Το αίμα συλλέχθηκε μέσω καρδιακής παρακέντησης, φυγοκεντρούνται και ο ορός διαχωρίστηκε και διατηρήθηκε σε -70 ° C μέχρι να αναλυθούν. Οι όγκοι αποκόπηκαν και ζυγίστηκαν, και το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε με παχύμετρο σε τρεις διαστάσεις. Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο: Όγκος (mm

3) = (μήκος Χ πλάτος Χ ύψος) × π /6. Οι όγκοι σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη και υποβάλλονται σε επεξεργασία για εμβάπτιση σε παραφίνη και χρησιμοποιήθηκε για ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις.

Ανάλυση των λιγνανών και στιλβενοειδή ορό ποντικού και ούρων

Serum (50 μΙ) και τα ούρα ( 300 μΙ) δείγματα υδρολύθηκαν και στερεάς φάσης εκχυλίζεται όπως περιγράφηκε προηγουμένως με ορισμένες τροποποιήσεις [25], [27]. Για υδρόλυση, ένα πρόσφατα παρασκευασμένο β-γλυκουρονιδάση /-sulphatase σε 10 mM ρυθμιστικού διαλύματος οξικού νατρίου (ρΗ 5,0) προστέθηκε σε δείγματα ορού και ούρων και επωάστηκε για 19 ώρες στους 37 ° C. Μετά την υδρόλυση, τα εσωτερικά πρότυπα προστέθηκαν στα δείγματα: MR-

δ

6 για το εργοστάσιο λιγνάνες και στιλβένια, EL-

δ

6 για enterolignans (τελικές συγκεντρώσεις ~ 1 μg /ml), και

O

-methylpodocarpic οξύ για τα οξέα ρητίνης (τελική συγκέντρωση ~ 3 μg /ml). Η στερεή φάση εκχυλίζεται και εξατμίζεται δείγματα ορού και ούρων [25] επαναδιαλύθηκαν σε 150 μΐ και 500 μΐ μεθανόλη /0,1% οξικό οξύ 20:80 (ν /ν), αντίστοιχα. Τα συστατικά PKE και οι μεταβολίτες τους ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας HPLC-MS /MS με πολλαπλές παρακολούθηση ιόντων στον τρόπο λειτουργίας αρνητικού ιόντος όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Οι βελτιστοποιημένες πολλαπλές μεταβάσεις παρακολούθηση ιόντων ήταν η αποπρωτονιωμένη μοριακό ιόν και τα ακόλουθα τμήματα στο MS

2 (

m /z

)? PS 169 18? Οι ευρωβουλευτές 182 20? RV 143, 22? pinostilbene 225. Τα οξέα ρητίνη που σχηματίζεται κανένα θραύσματα στο MS

2. Τα χρησιμοποιούμενα τάσεις του κώνου ήταν 40 V για τα στιλβένια και 48 V για τα οξέα ρητίνης. Οι ενέργειες σύγκρουσης ήταν περίπου 20 eV για τα στιλβένια και 5.0 eV για τα οξέα ρητίνης. Οι παράμετροι MS για τις αναλύθηκαν λιγνάνες έχουν περιγραφεί προηγουμένως [26]. Οι ποσοτικοί προσδιορισμοί πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας πρότυπα διαλύματα που περιέχουν τα εσωτερικά πρότυπα και έξι επίπεδα συγκέντρωσης των αναλυτών όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26].

Ανοσοϊστοχημεία και Ανίχνευση των αποπτωτικών κυττάρων σε δείγματα όγκων

Για νοη Willebrand παράγοντα (vWF, αραίωση: 1:4000, ab6994-100, Abcam, Cambridge, UK) και φωσφο-ιστόνης Η3 (pH-H3, αραίωση: 1:200, Ser10, κυτταρική σηματοδότηση) ανοσοϊστοχημεία, τμήμα ιστού αποπαραφινοποιήθηκαν, ενυδατωμένοι, και επωάστηκαν σε 10 mM Tris-EDTA ρΗ 9 (για χρώση vWF) ή σε 10 mM κιτρικού νατρίου ρΗ 6 (για το ρΗ-H3 χρώσης) ρυθμιστικό, σε ένα φούρνο μικροκυμάτων για ανάκτηση αντιγόνου. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με 3% Η

2O

2. Μετά την έκπλυση με PBS, οι τομές επωάστηκαν με αλβουμίνη 3% βόειου ορού (BSA) για 10 λεπτά και επισημάνθηκαν με vWF ή ρΗ-H3 αντισωμάτων για 60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT) ή όλη τη νύκτα στους + 4 ° C, αντίστοιχα. Υπεροξειδάση χράνου αντι-κουνελιού (ϋΑΚΟ σύστημα Envision, Dako) σημασμένο πολυμερές χρησιμοποιήθηκε ως δευτερεύον αντίσωμα. Διαμινοβενζιδίνη (Dako) εφαρμόστηκε στις τομές ακολουθούμενο από αιματοξυλίνη και τοποθέτηση της Mayer.

Το τερματικό δεοξυνουκλεοτιδυλοτρανσφεράσης βιοτίνη-dUTP nick τέλος επισήμανση (TUNEL) μέθοδος χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί αποπτωτικά κύτταρα σε τομές όγκων. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ApopTag υπεροξειδάσης in situ Apoptosis Detection Kit (Chemicon International, Hampshire, UK) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι τομές αποπαραφινοποιήθηκαν, επανυδατώθηκαν και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού νατρίου 10 mM σε συσκευή μικροκυμάτων για ανάκτηση αντιγόνου. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με 3% Η

2O

2. Για θετικό έλεγχο, ένα τμήμα επωάστηκε με DNase Ι (Invitrogen) για 30 λεπτά στους + 37 ° C. Για το TUNEL, οι τομές επωάστηκαν με 0,8 U /μl TdT μείγματος αντίδρασης: ρυθμιστικό TdT, 4 U /μl τρανσφεράσης, 25 mM CoCl

2 (Terminal τρανσφεράσης, Roche, Mannheim, Germany), βιοτίνη-16-dUTP (Roche ) και νερό ΜίΙΙίΟ? και για τον αρνητικό έλεγχο, ένα τμήμα επωάστηκε με TUNEL μείγμα αντίδρασης χωρίς τρανσφεράσης επί μία ώρα στους + 37 ° C. αντίδραση TUNEL διεκόπη με 300 mM NaCl, 30 mM κιτρικό νάτριο σε dH

2O (15 λεπτά σε RT). Οι μη ειδικές θέσεις φράχθηκαν με 3% BSA /PBS για 30 λεπτά σε RT. ExtrAvidine®-υπεροξειδάσης 1:500 (Sigma) εφαρμόστηκε σε 1% BSA /PBS για 30 λεπτά στους + 37 ° C, μετά το οποίο εφαρμόστηκε διαμινοβενζιδίνη και οι τομές βάφτηκαν με αιματοξυλίνη Mayer και τοποθετημένα.

Ποσοτικοποίηση της πολλαπλασιασμό και την απόπτωση Δείκτες, και η πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων και Μήκος

Βιτρώ τμήματα σαρώθηκαν με ένα εικονικό μικροσκόπιο (Digital εικονικό μικροσκόπιο, Soft Imaging System, η Olympus, Γερμανία). Ο αριθμός και το μήκος του vWF-θετικών αγγείων ποσοτικοποιήθηκε σε τρία ή τέσσερα επιλεγμένες περιοχές, χρησιμοποιώντας το εργαλείο μέτρησης του προγράμματος dotSlide (Soft Imaging System). Η ποσοτικοποίηση των ρΗ-H3 και TUNEL θετικών κυττάρων σε τομές όγκων διεξήχθη με προσαρμοσμένες λειτουργίες που αναπτύχθηκαν για ανάλυση εικόνας του ιστού με Quva Ltd (Tampere, Φινλανδία). Πρώτον, οι εικόνες που λαμβάνονται από σαρωμένα διαφάνειες ομαλοποιήθηκαν για την ένταση και το χρώμα παραλλαγές. Η επεξεργασία συνεχίστηκε με κατωφλίου της εικόνας, η οποία ανιχνεύει περιοχές με κατάλληλο χρώμα για να θεωρηθούν ως οι θετικώς χρωματισμένα κύτταρα-στόχους. Τέλος, ξένα ανιχνεύσεις έχουν φιλτραριστεί από το μέγεθος και το σχήμα των πληροφοριών, και τα προκύπτοντα κύτταρα κατέστησαν ορατά στην κόκκινες κηλίδες πάνω από την αρχική εικόνα.

Στατιστικές Αναλύσεις

Οι μονοδιάστατες αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση GraphPad Prism έκδοση 4.00 για Windows (GraphPad Software Inc., San Diego, CA). Σε κανονική κατανομή των δεδομένων, χρησιμοποιήθηκε η μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης και τεστ post-hoc κατά Tukey? Αλλιώς, χρησιμοποιήθηκε το Kruskal-Wallis ή μη παραμετρική δοκιμή t. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ομάδας ± SEM. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές σε

σ

& lt?. 0.05

ζεύγη πολυμεταβλητή συγκρίσεις των μέσων τιμών των ομάδων (ας πούμε μ1 και μ2) εξετάστηκαν με την απόσταση Mahalanobis (MD) 🙁 1)

Mahalanobis απόσταση είναι ένα πολύ γνωστό πολυμεταβλητή στατιστική, η οποία ενσωματώνει γραμμική συσχετίσεις συμμεταβλητές μέσω του πίνακα συνδιασποράς-διακύμανσης

S

, με διάσταση ίση με τον αριθμό των συμμεταβλητών [28]. Με τη συσσώρευση συμπληρωματικών πληροφοριών από διασυνδεδεμένα παραγόντων και έχοντας ευαισθησία στα πρότυπα διαφέρουν από τις σημαντικότερες τάσεις [29], MD είναι ένα βολικό στατιστικό στοιχείο για τον έλεγχο πιο ανεπαίσθητες επιδράσεις της θεραπείας ενδέχεται να χάσει από τα μονοπαραγοντική δοκιμές. Σε ειδικές περιπτώσεις, MD μειώνει την τυποποιημένη Ευκλείδεια απόσταση, εάν

S

είναι ένας διαγώνιος πίνακας, και με τη συνήθη Ευκλείδεια απόσταση, εάν

S

είναι μια μήτρα μονάδα, και έτσι συνδέσμους στενά για να η συμβατική

t

στατιστική δοκιμή των ανεξάρτητων δεικτών ανάπτυξης του όγκου. Η στατιστική σημαντικότητα της απόστασης

D

αξιολογήθηκε με τυχαία μετάθεση των ετικετών τάξη στις δοκιμές δύο δειγμάτων (Vehicle vs. Low δόση ή οχήματος έναντι υψηλής δόσης) [30]. Η μηδενική κατανομές ελήφθησαν με τρέξιμο 100.000 προσομοιώσεις αυτών δημιουργείται τυχαία αποστάσεις και τα εμπειρικά

σ

-τιμές ορίστηκαν ως το ποσοστό των τυχαίων αποστάσεις μεγαλύτερες από ή ίση με την παρατηρούμενη απόσταση

D

.

Αποτελέσματα

PKE και Εξαρτήματα Αναστέλλουν PC-3M-luc2 Διάδοση κυττάρων και επάγει απόπτωση

in vitro

Η

PKE σημαντικά εξασθενημένο PC-3M-luc2 τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων κατά ≥40 mg /l (Εικ. 1Α), αποδεικνύεται από τη μειωμένη ενσωμάτωση BrdU. Σύμφωνα με αυτό, τα κύρια συστατικά της PKE, στιλβενοειδών (ευρωβουλευτές και PS), καθώς και λιγνάνες (MR και NTG) κάθε ανέστειλε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε 40-100 μΜ συγκέντρωση (Εικ. 1Β). Επιπλέον, ο συνδυασμός αυτών των τεσσάρων ενώσεων (ΒΕΚ, PS, MR, και NTG), με την ίδια αναλογία, όπως παρουσιάζονται στην PKE (λιγνανών-στιλβένιο, LS, μίγμα), μειωμένη ενσωμάτωση BrdU κατά τρόπο παρόμοιο με το αρχικό εκχύλισμα (Σχ. 1C). PKE (40 mg /l) και μίγμα LS (40 μΜ), και οι δύο αυξημένο ρυθμό απόπτωσης, αποδεικνύεται με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής (Σχ. 2Α). PKE σύλληψη επάγεται κυτταρικού κύκλου, δηλαδή αύξησε το κλάσμα των μη αποπτωτικών κυττάρων σε G0 /G1 (Εικ. 2Β), και, αντίστοιχα, μείωσε την κλάσμα των κυττάρων σε S και G2 /M φάσεις. Επιπλέον, PKE (10 και 40 mg /ml) ευαισθητοποιήθηκαν PC 3M-luc2-κυττάρων σε TRAIL-επαγώμενη απόπτωση (Σχ. 3Α). μίγμα LS και όλες οι δοκιμασμένες PKE που προέρχονται από ενώσεις (ευρωβουλευτές, ΝΤΟ, PS, MR, και RV), εκτός από αβιετικό οξύ, ενίσχυσε σημαντικά TRAIL-απόπτωση (Σχ. 3Β), PS, οι ευρωβουλευτές, και MR που δείχνουν οι πιο έντονες επιπτώσεις .

Α) τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με PKE ή ένα μίγμα των κύριων λιγνανών και στιλβενοειδή του (μίγμα LS) για 48 ώρες. Β) Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με μεμονωμένα PKE προέρχεται ενώσεις για 48 ώρες. ρυθμού πολλαπλασιασμού των κυττάρων εκφράστηκε ως ποσοστό του ελέγχου μετρήθηκε με δοκιμασία BrdU. Τα δεδομένα είναι μέσοι τριών ανεξάρτητων πειραμάτων ± SEM. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε με μη παραμετρική δοκιμή t για κάθε θεραπεία σε σύγκριση με την αντίστοιχη θεραπεία όχημα (Ctrl). * Ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt? 0,01, *** ρ & lt?. 0.001

Η

ποσοστά απόπτωση και ο αριθμός των κυττάρων σε Ο0 /G1 φάση εκφράζονται σε σχέση με το έκδοχο ελέγχου (Ctrl = 1). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ενώσεις δοκιμής επί 48 ώρες και ο ρυθμός της απόπτωσης και κυτταρικού κύκλου φάση προσδιορίσθηκε με κυτταρόμετρο ροής. LS, μίγμα των κύριων λιγνάνες PKE και στιλβένια? Οι ευρωβουλευτές, pinosylvin μονομεθυλαιθέρας? NTG, nortrachelogenin? PS, pinosylvin? MR, matairesinol? Ab, αβιετικό οξύ? RV, η ρεσβερατρόλη. Τα δεδομένα είναι μέσοι τριών ανεξάρτητων πειραμάτων ± SEM. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε με μη παραμετρική δοκιμή t για κάθε θεραπεία σε σύγκριση με τις αντίστοιχες Πίν. * Ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt? 0,01, *** ρ & lt?. 0.001

Η

Α) Κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με PKE σε συνδυασμό με αυξανόμενες συγκεντρώσεις ανθρώπινου TRAIL (0-100 ng /ml), οι τιμές είναι ποσοστά των πυρηνικών κατακερματισμού. Β) Τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με PKE, μίγμα LS, ή με μεμονωμένες ενώσεις PKE σε συνδυασμό με ανθρώπινο TRAIL (25 ng /ml), τιμές είναι σχετικές τιμές απόπτωση (Ctrl = 1). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ενώσεις δοκιμής για 48 ώρες και η πυρηνική κατάτμηση προσδιορίσθηκε με κυτταρόμετρο ροής. LS, μίγμα των κύριων λιγνάνες PKE και στιλβένια? Οι ευρωβουλευτές, pinosylvin μονομεθυλαιθέρας? NTG, nortrachelogenin? PS, pinosylvin? MR, matairesinol? Ab, αβιετικό οξύ? RV, η ρεσβερατρόλη. Τα δεδομένα είναι μέσοι τριών ανεξάρτητων πειραμάτων ± SEM. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε με μη παραμετρική δοκιμή t για κάθε θεραπεία σε σύγκριση με την αντίστοιχη θεραπεία όχημα (Ctrl). * P & lt? 0,05, ** p & lt? 0,01, *** p & lt? 0.001

Η

Επίδραση της PKE σε ορθοτοπική PC-3M-luc2 Ξενομοσχεύματος Volume, Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού και αγγειογένεση

. τριών εβδομάδων καθημερινή πρόσληψη PKE ήταν καλά ανεκτή, και δεν υπάρχουν ενδείξεις παρατηρήθηκαν ανεπιθύμητες ενέργειες σε οποιοδήποτε χρονικό σημείο. PKE μείωσε σημαντικά το δείκτη πολλαπλασιασμού (Σχ. 4Α) και το μήκος των αιμοφόρων αγγείων (δηλαδή περιμετρικά) στους όγκους PC-3M-luc2 (Εικ. 4Β). Μια τάση να μειώνεται βιοφωταύγειας και τον όγκο του όγκου του προστάτη παρατηρήθηκε στην υψηλότερη δόση PKE ομάδα (160 mg /kg) (Εικ. 4C και D). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές μεταβολές παρατηρήθηκαν στο δείκτη απόπτωσης, όπως ποσοτικοποιούνται από TUNEL-χρωματισμένες τομές όγκων (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Η πολυμεταβλητή σύγκριση του όγκου του όγκου αποκόπηκαν, log-μετασχηματισμένα βιοφωταύγεια όγκων, απόπτωση και τον πολλαπλασιασμό των δεικτών, και η πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων και το μήκος εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας το στατιστικό MD (Εξ. 1). Όταν η απόκριση ελέγχθηκε σε σχέση με την συνδυασμένη επίδραση αυτών των 6 συμμεταβλητών (Εικ. S1), υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων PKE οχήματος και υψηλής δόσης (ρ = 0,0051, Σχ. 5Α), ενώ το όχημα και ο ομάδες PKE χαμηλής δόσης ήταν παρόμοια (p = 0,4195, σχ. 5Β). Είναι ενδιαφέρον ότι, η συνδυασμένη αξιολόγηση των συμπαράγοντες και τις αλληλεπιδράσεις τους διαχωρίζονται σαφώς το όχημα και ομάδες PKE υψηλής δόσης (Εικ. 5C, με ορατά τα 3 πιο σημαντικά χαρακτηριστικά). Το συμπέρασμα που προκύπτει από αυτή την συνδυασμένη ανάλυση ήταν ριζικά διαφορετική από τις ανεξάρτητες μονομεταβλητών αναλύσεις (Σχήμα 4).? για παράδειγμα, η πολυπαραγοντική προσέγγιση Διαπιστώσαμε ότι ορισμένοι όγκοι είχαν μειωμένη αγγείωση (

σκάφος μήκους

), ενώ άλλοι είχαν μειωμένο μέγεθος (

όγκου όγκο

), και ως εκ τούτου έδωσε μια πολυδιάστατη εικόνα των αποτελεσμάτων της θεραπείας . Τα αρχικά μετρήσεις του όγκου φαίνεται στον συμπληρωματικό υλικό όπως διμεταβλητή (Εικ. S1) και μονομεταβλητών οικόπεδα (Εικ. S2). Η υπολογισμένη δομή variance-covariance

S,

μετά την κλιμάκωση στην μήτρα συσχέτισης, φαίνεται στο Σχ. S3. Όπως ήταν αναμενόμενο, οι σχετικές παράγοντες, όπως ο όγκος του όγκου και βιοφωταύγεια όγκου ή πυκνότητας των αγγείων και το μήκος του σκάφους, συσχετίζονταν ισχυρά, και οι αποστάσεις τους ήταν αποτελεσματικά ομαδοποιούνται στην ανάλυση MD (Εικ. S3).

Α) PKE μειώνει δείκτης πολλαπλασιασμού των κυττάρων. Αντιπροσωπευτικά εικόνες του pH-H3-ανοσοκηλιδώσεις δείξει. Β) PKE μειώνει το μήκος των αιμοφόρων αγγείων. Αντιπροσωπευτικά εικόνες του vWF-ανοσοκηλιδώσεις δείξει. Γ) Η βιοφωταύγεια των όγκων, ποσοτικά δύο φορές την εβδομάδα από το

in vivo

απεικόνισης. όγκοι Δ) των όγκων κατά τη θυσία. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή καθημερινά με όχημα (n = 11), PKE 32 mg /kg σωματικού βάρους (η = 10) ή PKE 160 mg /kg σωματικού βάρους (n = 11) για τρεις εβδομάδες. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SEM. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε με μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης και τεστ post-hoc κατά Tukey. * P & lt? 0,05. Κλίμακα μπαρ, 100 μm.

Η

Γ) Το μέγεθος του όγκου, το μήκος του σκάφους και τον πολλαπλασιασμό του δείκτη ανιχνεύθηκαν ως τους σημαντικότερους παράγοντες των διαφορών στις αναλύσεις πολλών μεταβλητών. Το υπερεπίπεδο δείχνει ότι δύο από τις ομάδες (όχημα σε μαύρο και υψηλή δόση σε πράσινο) ήταν γραμμικά διαχωρίσιμα, όταν οι τρεις παράγοντες που θεωρήθηκαν από κοινού. (Υπερεπίπεδο: 100,55 = 0,104 δείκτης όγκου + 0,895 × διάδοσης × όγκου + 21,1 × μήκος του σκάφους)

για την εκτίμηση αυτών των παραγόντων που ήταν πιο σημαντικό για τη διάκριση της ομάδας PKE υψηλής δόσης από την ομάδα ελέγχου, μια εξαντλητική δοκιμή του MD για διαφορετικούς συνδυασμούς των 6 συμπαράγοντες εκτελέστηκε. Τα σημαντικότερα αποτελέσματα ανιχνεύθηκαν ως συνδυασμός του όγκου του όγκου, το δείκτη πολλαπλασιασμού και το μήκος του σκάφους. Διερεύνηση των αλληλεπιδράσεων μεταξύ των τριών αυτών δεικτών αποκάλυψε ότι ακόμα και αν οι επιμέρους συμπαράγοντες από μόνη της δεν ήταν αρκετά κατατοπιστική για τη διάκριση των δύο ομάδων, όταν εξεταστούν από κοινού, το όχημα και υψηλής δόσης ομάδες PKE ήταν γραμμικά διαχωρίσιμα με ένα υπερεπίπεδο (Εικ. 5C). Επιπλέον, αν και το όχημα και διαφορά ομάδα χαμηλής δόσης δεν ήταν στατιστικά σημαντική, η συνολική τάση κατά μήκος των τριών ομάδων αναφέρει αυξημένο αντικαρκινική δράση με ένα αυξανόμενο επίπεδο δόσης (όπως φαίνεται με τη σειρά του μαύρου, κόκκινου και πράσινου σύννεφα στο Σχ. 5C).

οι συγκεντρώσεις φαινολικών ενώσεων στον ορό και στα ούρα των ποντικών που φέρουν όγκο

μικρομοριακές συγκεντρώσεις της NTG και ευρωβουλευτές είχαν εντοπιστεί στον ορό των ζώων που εκτέθηκαν στην υψηλότερη δόση της PKE ( Πίνακας 2). ρητινικά οξέα που υπήρχαν στο PKE δεν ανιχνεύθηκαν στα δείγματα ορού ή ούρων. Είναι ενδιαφέρον, σημαντικές συγκεντρώσεις RV, το οποίο είναι το μονοϋδροξυλιωμένοι μεταβολίτης του PS, καθώς και pinostilbene, ένα μεταβολίτη των ευρωβουλευτών, ανιχνεύθηκαν στον ορό και τα ούρα από ποντίκια που τρέφονταν με το PKE (Πίνακας 2). Επιπλέον, οι συγκεντρώσεις των MR και HMR και των μεταβολιτών τους εντερολακτόνη, εντεροδιόλη, και 7-υδροξυεντερολακτόνη, καθώς και οι συγκεντρώσεις των ευρωβουλευτών, PS, ΝΤΟ, και pinostilbene σημαντικά αυξημένη σε σύγκριση με τον μάρτυρα (Πίνακας 2). Στιλβενίων και των λιγνανών μεταβολίτες ήταν παρόντα στον ορό 15 min-3 ώρες μετά την τελευταία χορήγηση (τα δεδομένα δεν φαίνονται), και οι υψηλότερες συγκεντρώσεις μετρήθηκαν σε 2 ώρες (Πίνακας 2). Το προφίλ μεταβολίτης στα ούρα (24 συλλογή ώρες) ήταν πολύ παρόμοια με εκείνη του ορού (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η

Συζήτηση

Επιδημιολογικές και προκλινικές μελέτες προτείνουν μια αντίστροφη σχέση μεταξύ της κατανάλωσης των πολυφαινόλες τροφές πλούσιες και τη συχνότητα εμφάνισης των χρόνιων ασθενειών, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου [3], [7], [31]. Ειδικότερα, λιγνάνες και στιλβένια, και των μεταβολιτών τους, είναι ελκυστικοί υποψήφιοι για τη μείωση του κινδύνου του προστάτη. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε δείξει αντικαρκινική επιδράσεις του εκχυλίσματος δασικής πεύκης κόμπο (PKE), ένα μίγμα πλούσιο σε λιγνάνες και στιλβενοειδή,

in vitro

και

in vivo

σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο ξενομοσχεύματος προστάτη