Αφηρημένο

προηγούμενη μελέτη μας έχει δείξει ότι mesothelin (MSLN) είναι ένας πιθανός στόχος ανοσοθεραπευτικών για τον καρκίνο του παγκρέατος. Εδώ, μελετήσαμε περαιτέρω την ανοσογονικότητα των σωματιδίων MSLN-ομοιάζουν με ιό χιμαιρικό ποντικού (mMSLN-VLPs), την ικανότητά τους να σπάσει την ανεκτικότητα σε mMSLN, μια αυτο-αντιγόνου, και αποκρυπτογραφηθεί το μηχανισμό ανοσοαποκρίσεων που προκαλούνται από mMSLN-VLP ανοσοποίηση χρησιμοποιώντας ένα παγκρεατικός καρκίνος μοντέλο ποντικού (PC). Εκτός από ό, τι έχουμε βρει με ξενογενή ανθρώπινη MSLN-VLP (hMSLN-VLP), mMSLN-VLP ανοσοποίηση ήταν σε θέση να σπάσει την ανοχή των εγγενών MSLN και mount mMSLN ειδικά, κυτταροτοξικά CD8

+ Τ κύτταρα, τα οποία οδήγησαν σε ένα σημαντική μείωση στον όγκο του όγκου και παρατεταμένη επιβίωση σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο ποντικού PC. Επιπλέον, CD4

+ foxp3

+ ρυθμιστικά Τ κύτταρα (Tregs) ήταν σταδιακά μειώθηκε και στις δύο σπλήνα και καρκινικών ιστών εξής mMSLN-VLP ανοσοποίηση και αυτό ήταν τουλάχιστον εν μέρει λόγω των αυξημένων επιπέδων της IL-6 παραγωγή από ενεργοποιημένα plasmocytoid δενδριτικών κυττάρων (pDC) -όπως κύτταρα μετά mMSLN-VLP ανοσοποίηση. Επιπλέον, η θεραπεία mMSLN-VLP μειώνεται κυρίως τη συχνότητα του CD4

+ foxp3

+ ICOS

– Treg υποσύνολο. Ωστόσο, mMSLN-VLP που προκαλείται από IL-6 παραγωγή αυξήθηκε επίσης έκφραση ICOSL για ράο- σαν κύτταρα τα οποία υποστήριξε τον πολλαπλασιασμό των ανοσοκατασταλτικών CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ κυττάρων Treg. Αυτή η μελέτη αποκαλύπτει ότι mMSLN-VLP ανοσοποίηση είναι ικανό να ελέγχει την εξέλιξη της PC με την αποτελεσματική τοποθέτηση ανοσοαπόκριση εναντίον mMSLN, ενός όγκου αυτο-αντιγόνο, και την αλλαγή της ανοσοκατασταλτικής μικροπεριβάλλον του όγκου μέσω ενεργοποίησης του pDCs κύτταρα που μοιάζουν και μείωση της συχνότητας των CD4

+ foxp3

+ ICOS

– κυττάρων Treg. Ωστόσο, ο συνδυασμός θεραπειών θα πρέπει πιθανόν να χρησιμοποιηθούν για να στοχεύσουν υπολειμματική CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ κύτταρα Treg

Παράθεση:. Zhang S, Yong LK, Li D, Cubas R, Chen C, Yao Q (2013) Mesothelin Όμοιο με Ιό Σωματίδιο Ανοσοποίηση Έλεγχοι του παγκρέατος ανάπτυξη του καρκίνου μέσω CD8

+ Τ κυττάρων επαγωγής και μείωση της συχνότητας των CD4

+ foxp3

+ ICOS

– Κανονιστική Τ κύτταρα. PLoS ONE 8 (7): e68303. doi: 10.1371 /journal.pone.0068303

Επιμέλεια: Hiroshi Shiku, Mie Πανεπιστημίου Graduate School of Medicine, Ιαπωνία

Ελήφθη: 11 Ιουλίου του 2012? Αποδεκτές: 4 Ιούν 2013? Δημοσιεύθηκε: 9 Ιουλίου 2013

Copyright: © 2013 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει από Dan L Duncan Κέντρο Καρκίνου πιλοτικά επιχορήγηση από BCM και το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας CA140828 επιχορήγησης για Q. Yao και AI053831 για το S. Ζανγκ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Καμία πρόσθετη εξωτερική χρηματοδότηση που έλαβε για την παρούσα μελέτη

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος παραμένει μια καταστροφική, ιδιαίτερα θανατηφόρα ασθένεια. ακόμη και με τις τρέχουσες επιστημονικές εξελίξεις. Η νόσος αυτή αποτελεί μια τεράστια πρόκληση για τους κλινικούς γιατρούς και τους επιστήμονες, επειδή είναι φυσικά ανθεκτικά σε διάφορες μορφές θεραπειών [1]. Ως εκ τούτου, υπάρχει επείγουσα ανάγκη για την ανάπτυξη νέων θεραπειών για τον καρκίνο του παγκρέατος. Μεταξύ των πιο πρόσφατων θεραπευτικών προσεγγίσεων, εμβόλια καρκίνου έχουν δείξει κάποια ελπιδοφόρα αποτελέσματα για τον έλεγχο της νόσου. [2] Πολλοί έχουν αναφερθεί να είναι πολλά υποσχόμενη για την επαγωγή

in vivo

υποχώρηση του όγκου [xpath ΣΦΑΛΜΑ:. Άγνωστη μεταβλητή «START2»], [4]. Ωστόσο, ο μηχανισμός του τρόπου με εμβόλια όγκου μπορεί επιτυχώς τον έλεγχο της προόδου των όγκων είναι ακόμα ασαφής.

όγκου-ειδικά κυτταροτοξικά Τ-λεμφοκυττάρων (CTL) επαγωγή έχει αποδειχθεί ότι είναι απαραίτητο για την εκρίζωση των καρκινικών κυττάρων με αποτελεσματική κατά του όγκου εμβόλια 5,6 αφού ΟΤίς μπορούν να είναι ειδικά σε ένα συγκεκριμένο αντιγόνο που εκφράζεται από τα καρκινικά κύτταρα. Επιπλέον, ο ρόλος των ρυθμιστικών Τ κυττάρων (Tregs) στην ανοσία κατά του όγκου έχει σημαντικά μελετηθεί και θα διευκρινιστούν [7]. Treg κυττάρων που προσδιορίζονται ως CD4

+ CD25

+ foxp3

+ αντιπροσωπεύουν τον κύριο ανασταλτικό πληθυσμό λεμφοκυττάρων [8], [9]. Απομάκρυνση των κυττάρων Treg με

in vivo

χορήγηση ενός αντισώματος αντι-CD25 έχει δειχθεί ότι καταργεί ανοσοκαταστολή, περιορίζουν την ανάπτυξη του όγκου, και την προώθηση της απόρριψης όγκου σε ποντικούς [10]. Το συν-διεγερτικό μόριο ICOS είναι μία από τις ρυθμιστικές πρωτεΐνες εκφράζονται επί CD4

+ CD25

+ foxp3

+ Tregs [11]. Η επέκταση των Tregs μπορεί να συνδεθεί με ICOS σηματοδότηση, η οποία συμμετέχει επίσης στην ανάπτυξη των ειδικών για το αντιγόνο Tregs [12]. Μια πρόσφατη έκθεση έδειξε ότι foxp3

+ Tregs έχουν δύο διακριτά υποσύνολα με διαφορετικές βιολογικές λειτουργίες με βάση την έκφραση ICOS. Ένα από αυτά τα υποσύνολα, CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Tregs, εκκρίνει IL-10 και ΤΟΡ-β η οποία καταστέλλει δενδριτικά κύτταρα (DCs) και CD4

+ βοηθητικά Τ κύτταρα. Το άλλο υποσύνολο, CD4

+ foxp3

+ ICOS

– Tregs, παράγουν μόνο TGF-β [13]. Μια μελέτη έδειξε επίσης ότι ποντικού Tregs περιέχουν υπερπολλαπλασιαστική και το θάνατο επιρρεπείς υποσύνολα με διαφορική έκφραση ICOS [14]. Ωστόσο, η απάντηση αυτών των δύο υποσύνολα Treg στον εμβολιασμό ανοσοθεραπευτικών όγκος δεν έχει διερευνηθεί.

Η επαγωγή και η γενιά του Foxp3

+ Tregs συσχετίζεται με DC λειτουργία [15]. Παρά το γεγονός ότι και οι δύο συμβατικά ΑΧ (CDCs, μυελοειδή DC) και πλασμακυτταροειδή ΑΧ (pDCs) μπορεί να αλληλεπιδράσει με foxp3

+ κύτταρα Treg, μόνο τα pDCs αναφερθεί ότι έχουν την ικανότητα να προνομιακή CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Tregs [13]. pDCs είναι γνωστά ως κύριο υποσύνολο DC σε αντι-ιικές ανοσοαποκρίσεις [16]. Κατά την ενεργοποίηση και την ωρίμανση, αυτοί εκκρίνουν μεγάλες επίπεδα τύπου Ι ιντερφερονών τα οποία ενεργοποιούν άλλες έμφυτη κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος όπως το CDC και ΝΚ κύτταρα και γέφυρα προσαρμοστική κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος, όπως Τ κύτταρα και Β κύτταρα [17]. pDCs δεν έχουν μόνο την ικανότητα της παρουσίασης επιτόπων MHC-ΙΙ, προκειμένου να ενεργοποιήσει CD4

+ Τ κύτταρα, αλλά μπορεί επίσης να cross-σήμερα επιτόπων MHC-I να επεκτείνει CD8

+ Τ κύτταρα [18]. Η επαγωγή των CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Tregs από pDCs, αλλά δεν CDC, συνδέεται με την έκφραση συνδέτη ICOS για pDCs [13].

Η αποτελεσματικότητα του καρκίνου ανοσοθεραπευτικών προσεγγίσεων εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό την ανοσογονικότητα του στοχευόμενου αντιγόνου που συνδυάζεται με καρκίνωμα. Mesothelin (MSLN), είναι μια γλυκοπρωτεΐνη μεμβράνης που εκφράζεται κανονικά επί μεσοθηλιακών κυττάρων, αλλά υπερεκφράζεται στους περισσότερους καρκίνους του παγκρέατος [19] – [21]. Η περιορισμένη επίπεδο έκφρασης MSLN σε φυσιολογικά κύτταρα είναι ένα κατάλληλο θεραπευτικό στόχο για εμβόλια καρκίνου [22] κάνει. Μεταξύ των διαφόρων προσεγγίσεων εμβόλιο που μεταφέρουν και αντιγόνα που υπάρχουν όγκου στον ξενιστή, σωματίδια που μοιάζουν με ιό (VLPs) μπορεί να είναι το πλέον κατάλληλο για την επαγωγή τόσο χυμικών και κυτταρικών ανοσοαποκρίσεων. Ως ανάλογο των ιών, χιμαιρικά VLPs μπορεί να θεωρηθεί ανίκανος ιούς, οι οποίοι έχουν την πλήρη δομή του ιού και ιικά συστατικά πρωτεΐνης να διεγείρει ισχυρές κυτταρικές αποκρίσεις χωρίς ιικών νουκλεϊκών οξέων. VLPs μπορεί να επάγει προληπτική ή θεραπευτική ανοσία όχι μόνο έναντι της λοίμωξης από τον ιό όγκου που σχετίζονται με το οποίο μπορεί να οδηγήσει σε ογκογένεση [23], [24], αλλά μπορούν επίσης να αναστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου με στόχευση ειδικά αντιγόνα που σχετίζονται με όγκους [25]. Έχουμε δείξει στο παρελθόν ότι χιμαιρικά hMSLN-VLPs μπορεί να μειώσει αποτελεσματικά την ανάπτυξη του όγκου μέσω της μείωσης της συχνότητας των CD4

+ foxp3

+ Tregs σε ένα ορθοτοπικό παγκρέατος μοντέλο ποντικού καρκίνου [21]. Σε αυτή τη μελέτη, θα αξιολογηθεί περαιτέρω κατά πόσον αυτο-αντιγόνου mMSLN ενσωματωθεί σε VLPs μπορεί να σπάσει την ανοχή σε mMSLN, mount προσαρμοστικές ανοσολογικές αποκρίσεις και να ελέγχουν την εξέλιξη του όγκου. Για την περαιτέρω κατανόηση του μηχανισμού δράσης με τον οποίο η ανοσοποίηση VLP μπορεί να επιτύχει την υποχώρηση του όγκου, μπορούμε επίσης να διερευνηθεί ιδιότητες επαγωγής DC από mMSLN-VLP και κυτταροκίνες που εμπλέκονται στην καταστολή των CD4

+ foxp3

+ κυττάρων Treg.

Αποτελέσματα

mMSLN-VLP ανοσοποίηση αναστέλλει την παγκρεατική ανάπτυξη του καρκίνου και προωθεί την επιβίωση σε ποντικούς που φέρουν όγκο

στην προηγούμενη έκθεσή μας, αποδείξαμε ότι η ανοσοποίηση με ανθρώπινο MSLN-VLP μπορούσε να ελέγξει αποτελεσματικά όγκου ανάπτυξη σε ένα μοντέλο ποντικού που οδήγησε στην ενίσχυση των κυτταροτοξικών ανοσοαποκρίσεων έναντι παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα μέσω της μείωσης της συχνότητας των κυττάρων Treg [21]. Δεδομένου ότι τα ανθρώπινα και MSLN ποντίκι έχει μόνο περίπου 60% ομολογία, η ισχυρή ανοσολογική απόκριση μπορεί να προκύψει από ένα ξενογενή απόκριση στην ανθρώπινη MSLN. Ωστόσο, εάν η ανοσοποίηση με mMSLN-VLP μπορεί να σπάσει την ανοχή και να επάγουν ανοσολογικές αποκρίσεις σε mMSLN, μια αυτο-αντιγόνου, στο πλαίσιο της παρουσίασης VLP, και αν mMSLN-VLP έχει παρόμοια επίδραση στην πρόκληση μιας απόκρισης κατά του όγκου μέσω διαμόρφωσης Tregs δεν έχει διερευνηθεί. Για να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα του ανοσοθεραπευτικού mMSLN-VLP ανοσοποίηση, τα ζώα ανοσοποιήθηκαν είτε με mMSLN-VLP ή SIV VLP ως έλεγχος για την VLP «ραχοκοκαλιά» ή PBS σε ποντίκια που φέρουν όγκο. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1Α, mMSLN-VLP ανοσοποίηση μείωσε σημαντικά τον όγκο του όγκου (0,92 ± 0,39) σε σύγκριση με τις δύο ομάδες ελέγχου (2.49 ± 0.43 στην SIV-VLP και 3.18 ± 0.38 στην ομάδα ελέγχου PBS) (

σ

& lt? 0,05) . Δεν υπήρχε στατιστική διαφορά σε βάρος του όγκου μεταξύ του PBS και των ομάδων ανοσοποίησης SIV-VLP. Επιπλέον, βρήκαμε ότι όλοι οι ποντικοί σε αγωγή με PBS ή SIV-VLP είχε 1 ml έως 4 ml ασκίτη ή αιματηρή ασκίτη στην κοιλιακή κοιλότητα. Υπήρξε λιγότερο ρευστό (& lt? 1 ml) στην εμβολιασμένη ομάδα mMSLN-VLP. Επιπλέον, όπως φαίνεται στο Σχ. 1Β, με SIV-VLP ανοσοποίηση, υπήρχε μια ελαφρά παρατεταμένη επιβίωση ακόμη δεν είναι στατιστικά σημαντική σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου PBS (

σ

= 0,1947). Αντιθέτως, mMSLN-VLP ανοσοποίηση παρέτεινε σημαντικά την επιβίωση των ποντικών που φέρουν όγκο σε σύγκριση με τις ομάδες PBS και SIV-VLP (

σ

= 0,0012 και

σ

= 0.0198, αντίστοιχα) . Επιπλέον, περισσότερο από το 50% των mMSLN-VLP ανοσοποιημένων ποντικών ήταν ακόμη ζωντανοί κατά την ημέρα 30.

Panc02 κύτταρα (7 Χ 10

5) έχουν ορθοτοπικά εμφυτεύθηκαν στο πάγκρεας ηλικίας 8 εβδομάδων C57BL /6 ποντίκια την ημέρα 0. Τρεις ανοσοποιήσεις τις ημέρες 3, 13, και 21 που εφαρμόζονται από ip διαδρομή με διαφορετικά VLPs. Οι ποντικοί χωρίστηκαν σε τρεις ομάδες, οι οποίες έχουν ανοσοποιηθεί είτε με 100 μΙ PBS, ή 100 μg /100 μΙ SIV-VLP ή 100 μg /100 μΙ MSLN-VLP. ΈΝΑ). Μειωμένο φορτίο όγκου σε mMSLN-VLPs έχουν εμβολιαστεί. Το μέγεθος του όγκου μεταξύ κάθε ομάδας στατιστικώς σε σύγκριση με Student t-test. *

σ

& lt? 0,05. ΣΙ). Η παρατεταμένη επιβίωση mMSLN-VLPs ανοσοποιηθεί ομάδες ποντικών Kaplan-Meier Ανάλυση Επιβίωσης.

P τιμές

υπολογίστηκαν και είναι εισηγμένη στο σχήμα. Αυτά ήταν αντιπροσωπευτικά δεδομένα που επιλέγονται από τέσσερα ανεξάρτητα πειράματα με Α) πέντε ή Β) τουλάχιστον 9 ποντίκια ανά ομάδα.

Η

mMSLN-VLP Ανοσοποίηση Ενεργοποιεί CD8

+ Τ κύτταρα και δημιουργεί MSLN-ειδικών λειτουργικών CD8

+ Τ κύτταρα

προηγούμενες εκθέσεις μας έχουν δείξει ότι VLPs έχουν υψηλή ικανότητα να ενεργοποιούν Th1 προσανατολισμένη κυτταρικές ανοσοαποκρίσεις και να δημιουργήσουν ειδικά κυτοτοξικά Τ λεμφοκύτταρα σε εμβολιασμένα ποντίκια [26], [27]. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2Α, υπήρξε μια αύξηση της συχνότητας των CD8

+ CD62L

– Τ κυττάρων μετά τη θεραπεία mMSLN-VLP (46,5% έναντι 19,6% σε PBS), γεγονός που υποδηλώνει ότι mMSLN-VLP μπορεί να τονώσει την γενική CD8

+ ενεργοποίηση των Τ κυττάρων.

στα 17

ης ημέρας μετά την εμφύτευση του όγκου και μετά από ένα χρόνο VLP εμβολιασμός κατά την ημέρα 3, οι ποντικοί θυσιάστηκαν για ανάλυση ανοσολογική απόκριση. FACSCalibur χρησιμοποιήθηκε για την απόκτηση και λογισμικό FlowJo χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των δεδομένων. ΈΝΑ). Γενικά CD8

+ ενεργοποίησης Τ κυττάρου στην ομάδα ελέγχου PBS και τα VLPs ανοσοποιημένα ομάδες ποντικών. Τα κύτταρα CD8 περίφραξη σε

+ Τ κύτταρα, Τ κυτταρική ενεργοποίηση της έκφρασης CD62L δείκτη παρουσιάστηκαν στο ιστόγραμμα. ΣΙ). MSLN ειδικά τετραμερούς

+ CD8

+ Τ επαγωγής κυττάρων. Σπληνοκύτταρα υπέστησαν χρώση με ΡΕ σημασμένο MSLN ειδικά τετραμερές. ΝΤΟ). MSLN-ειδική ΙΡΝ-γ παραγωγή CD8

+ επαγωγή Τ κυττάρων. Σπληνοκύτταρα επαναδιεγέρθηκαν με πεπτίδιο MSLN για 6 ώρες με την παρουσία Golgi ένωσης απόφραξης

in vitro

. Μετά τη στερέωση και διαπερατοποίηση, τα προ-επεξεργασμένα σπληνοκύτταρα βάφτηκαν με ΡΕ επισημασμένο αντι ΙΡΝ-γ αντίσωμα. ΡΕ). MSLN-ειδική επαγωγή CTL εναντίον κυττάρων Panc02. Τα σπληνοκύτταρα επαναδιεγέρθηκαν

in vitro

για 6 ημέρες παρουσία IL-2. Τα προ-επεξεργασμένα σπληνοκύτταρα μετρήθηκαν και χρησιμοποιήθηκαν ως κύτταρα τελεστή. Panc 02 κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν ως κύτταρα-στόχους. Τελεστή κύτταρα και κύτταρα-στόχοι αναμίχθηκαν με διάφορες αναλογία Ε: Τ και επωάστηκαν για 4 ώρες. Το ποσοστό λύσης υπολογίστηκε ως:% κυτταροτοξικότητα = [(Πειραματικό – τελεστή Αυθόρμητη – Target Αυθόρμητη) /(Target Μέγιστη – Target Αυθόρμητη)] χ 100. Εμφανίζεται ήταν αντιπροσωπευτικά δεδομένα που επιλέγονται από δύο ανεξάρτητα πειράματα με πέντε ποντικούς ανά ομάδα. (Στατιστικά έννοιες φαίνονται, * υποδηλώνει

σ

& lt? 0.05.)

Η

Για να εκτιμηθεί η γενιά των mMSLN ειδικών CD8

+ Τ κύτταρα ποντικού σπλήνας μετά την ανοσοποίηση. , ένα MHC-I: πεπτίδιο τετραμερές MSLN χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί το ποσοστό του mMSLN-ειδικών CD8

+ Τ κύτταρα. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2Β, το ποσοστό των

+ Τ κύτταρα τετραμερούς + CD8 σε mMSLN-VLP ανοσοποιημένες ομάδες ήταν περίπου 3-διπλώνει υψηλότερη από ότι στην ομάδα ελέγχου PBS (3,21% έναντι 1,18%). SIV-VLP ανοσοποίηση δεν ιδίως να αυξήσει τη συχνότητα των mMSLN ειδικών CD8

+ Τ κύτταρα (1,35%). Ως εκ τούτου, mMSLN-VLP ανοσοποίηση μπορεί να προκαλέσει mMSLN ειδικών CD8

+ Τ κύτταρα

Ενεργός τελεστές CD8

+ Τ κύτταρα μπορούν να χωριστούν σε δύο διαφορετικές ομάδες:. Κυτταροκινών που εκκρίνουν CD8

+ T κύτταρα και κυτταροτοξικά Τ λεμφοκύτταρα [28]. Μετά MSLN-ειδικό πεπτίδιο διέγερση, MSLN-ειδικά CD8

+ Τ κυττάρων που εκκρίνουν ΙΡΝ-γ ανιχνεύτηκαν με χρώση ενδοκυτταρικής κυτοκίνης. Όπως απεικονίζεται στο Σχ. 2C, το ποσοστό των MSLN ειδικών εκκρίνουν ΙΡΝ-γ τελεστή CD8

+ Τ κυττάρων στο mMSLN-VLP ανοσοποιημένη ομάδα ήταν περίπου 2-διπλώνει υψηλότερο σε σχέση με την ομάδα PBS (2,55% έναντι 1,42%). Ωστόσο, δεν υπήρξε καμία βελτίωση όσον αφορά την συχνότητα αυτών των κυττάρων μετά από SIV-VLP ανοσοποίηση (1,77%). Για να εκτιμηθεί η ικανότητα του VLP που προκαλείται CTLs να σκοτώσουν άμεσα τα καρκινικά κύτταρα, ένα

in vitro δοκιμασία

θανάτωση όγκου διεξήχθη χρησιμοποιώντας κύτταρα Panc02 ως κύτταρα-στόχους τα οποία δείχθηκε να υπερεκφράζουν MSLN [21]. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2D, η κυτταρολυτική αποτελεσματικότητα των CTLs να Panc02 κύτταρα αποδείχθηκε επίσης ότι είναι το υψηλότερο στο mMSLN-VLP εμβολιασμένες ομάδες σε αναλογία 120:1. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι το συγκεκριμένο τελεστή CD8

+ Τ κυττάρων που επάγεται από mMSLN-VLP ανοσοποίηση μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στον έλεγχο άμεσα υποχώρηση του όγκου.

mMSLN-VLP Ανοσοποίηση Καταστέλλει συστηματικής και της διηθούν τους όγκους CD3e

+ CD4

+ foxp3

+ Tregs

Αν και έχουμε δείξει ότι η ανοσοποίηση VLP μπορεί να μειώσει τον αριθμό των CD4

+ foxp3

+ κύτταρα Tregs στο σπλήνα ποντικού και του όγκου ιστός, ο φαινότυπος και βιολογία αυτών των κυττάρων ακόμη remainslargely άγνωστος [21]. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3, το σύνολο σχεδόν των foxp3

+ κυττάρων σε ποντίκια που φέρουν όγκο ήταν παρόντες στην CD3e

+ CD4

+ Τ κυτταρικού πληθυσμού από το CD3e

+ CD8a

+ foxp3

+ και CD3e

+ CD4

-CD8a

-foxp3

+ υποσύνολα ήταν κάτω από 0,5%. Το ποσοστό των CD3e

+ CD4

+ foxp3

+ Tregs παρακάτω mMSLN-VLP ανοσοποίηση (12,9 ± 1,83%) ήταν μικρότερη από ό, τι στην ομάδα PBS ελέγχου (17,81 ± 1,26%) (p & lt? 0,05). SIV-VLP ανοσοποίηση οδήγησε επίσης σε μια μείωση στον πληθυσμό των Tregs, αν και, σε μικρότερο βαθμό (14.4 ± 2.19%) (ρ & gt? 0,05). Ως εκ τούτου, η μειωμένη foxp3

+ κύτταρα σε ποντικούς που φέρουν όγκο ανήκε στη συμβατική CD3e

+ CD4

+ foxp3 ομάδα

+ Treg κυττάρων, δεδομένου ότι τα VLPs δεν διεγείρει ή να επηρεάσει CD4

– foxp3

+ κύτταρα Treg στο σπλήνα ποντικού. Ως εκ τούτου, VLP ανοσοποίηση μπορεί να μειώσει τη συστηματική πληθυσμό CD3e

+ CD4

+ foxp3

+ Tregs σε ποντίκια που φέρουν όγκο.

Α). Στους 12

ης ημέρας μετά την εμφύτευση του όγκου και μετά από ένα χρόνο VLP εμβολιασμός κατά την ημέρα 3, οι ποντικοί θυσιάστηκαν για ανάλυση ανοσολογική απόκριση. Περίπου 10

6 σπληνοκύτταρα επωάστηκαν με τα κατάλληλα αραιωμένο φθορίζοντα αντισώματα συζευγμένα συμπεριλαμβανομένων CD3e, CD4, CD8, και Foxp3. + Κύτταρα Foxp3

αναλύθηκαν σε τρία υποσύνολα των κυττάρων Τ: CD4

+ CD8

-, CD4

-CD8

+ και CD4

-CD8

-. Αυτές ήταν αντιπροσωπευτικά δεδομένα από τρία ανεξάρτητα πειράματα με τουλάχιστον τρεις ποντικούς ανά ομάδα. ΣΙ). CD4

+ Foxp3

+ Τ κύτταρα που απομονώθηκαν από σπληνοκύτταρα που φέρουν όγκο κατέστειλε Tresp πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Συν-καλλιέργεια CD4

+ CD25

+ Tregs και CD4

+ CD25

– Tresps (CFSE βάφονται) σε διαφορετικές αναλογίες 1:08, 1:04 και 1:02. CFSE επισημασμένα πολλαπλασιασμός Tresps αναλύθηκε με FACS. Οι αριθμοί για το CFSE

υψηλή αιχμή δείχνουν τοις εκατό της αδιαίρετης κυττάρων. ΝΤΟ). Η κατασταλτική δράση του CD4

+ CD25

+ Tregs σε CD4

+ CD25

– τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Tresp σε διαφορετικές Treg: αναλογίες Tresps (χ-άξονας). Υ-άξονας δείχνει τοις εκατό της καταστολής σε Tresp δραστηριότητα πολλαπλασιασμό των κυττάρων.

Η

Για να αποδείξει ότι CD4

+ foxp3

+ Τ κύτταρα που απομονώθηκαν από σπληνοκύτταρα των ποντικών που έφεραν όγκους έχουν κατασταλτική δράση, που εκτελείται μια δοκιμασία καταστολής Treg CFSE που βασίζεται. Για να αποκτήσετε ζωντανά κύτταρα για αυτήν την δοκιμασία συν-καλλιέργεια 5 ημερών, χρησιμοποιήσαμε CD4 και επιφάνειας CD25 δείκτες για την απομόνωση CD4

+ CD25

+ Tregs. Πραγματοποιήσαμε ενδοκυττάρια χρώση του δείκτη Foxp3 να επιβεβαιώσει ότι η πλειοψηφία των απομονωμένων CD4

+ CD25

+ Tregs ήταν επίσης CD4

+ foxp3

+ Τ κύτταρα. Όπως καταδεικνύεται στο Σχ. S1, περιφραγμένο σε CD4

+ CD25

+ κύτταρα, περίπου το 87% των κυττάρων βάφονται θετικά για Foxp3

+. Η δοκιμασία καταστολής Treg CFSE με βάση διεξήχθη με συν-καλλιέργεια CD4

+ CD25

+ Tregs και CD4

+ CD25

– ανταποκρινόμενα Τ κύτταρα (Tresps) (CFSE χρωματίζονται) απομονώθηκαν από τις σπλήνες PC ποντίκια που φέρουν όγκους. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3Β, όταν δεν προσετέθησαν κύτταρα Treg, τα περισσότερα κύτταρα Tresp υποβλήθηκε σε πολλαπλασιασμό και μόνο 36,5% παρέμεινε αδιαίρετη. Καθώς ο λόγος των κυττάρων Treg σε κύτταρα Tresp αυξήθηκε στην συν-καλλιέργεια, δεν παρατηρήθηκε καταστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού Tresp. Το ποσοστό της αδιαίρετης κυττάρων Tresp αυξήθηκε από 36,5% (χωρίς Treg προστεθεί) στο 50,7%, 62,2% και 84,5% σε Treg: αναλογίες Tresp των 1:08, 1:04 και 1:02, αντίστοιχα. Όπως απεικονίζεται στο Σχ. 3C, η κατασταλτική δράση του CD4

+ CD25

+ Tregs σε CD4

+ CD25

– τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Tresp ήταν 22% κατά 12,5% Tregs ήταν παρόντες στη συν-καλλιέργεια, και αυξήθηκε σε 40% και 76%, όταν το 25% και 50% των Tregs ήταν παρόντες, αντίστοιχα. Αυτά τα δεδομένα υποστηρίζει σθεναρά την άποψη ότι CD4

+ foxp3

+ Τ κύτταρα σπλήνας που φέρουν όγκους έχουν κατασταλτική δράση.

Για τον προσδιορισμό του φαινοτύπου των foxp3

+ Tregs σε ιστούς όγκων, ανοσοφθορισμό χρώση διεξήχθη. Σε ιστούς όγκων από τα ποντίκια που δεν έλαβαν mMSLN-VLP ανοσοποίηση, βρήκαμε ότι οι περισσότεροι foxp3

+ Tregs είχαν διεισδύσει στον ιστό του όγκου από τα αιμοφόρα αγγεία και βρίσκεται κοντά στο αγγειακό σύστημα του όγκου (Σχ. S2A). Επιπλέον foxp3

+ Tregs στον ιστό του όγκου ήταν του φαινοτύπου CD4

+ CD8a

– (Εικ. S2B), και ένα μεγάλο μέρος του CD8a

+ Τ κύτταρα (πράσινη χρώση κύτταρα) που βρίσκονται δίπλα στο foxp3

+ Τ κύτταρα (κόκκινο χρωματισμένο κύτταρα) (Εικ. S2C). Συγκρίνοντας τον αριθμό των Foxp3

+ αριθμούς κυττάρων μεταξύ ανοσοποιημένων και μη ανοσοποιημένων ομάδων, τα + κύτταρα foxp3

μειώνεται σε ιστούς όγκου ποντικού VLP-ανοσοποιηθεί (Εικ. S2D). Η παρατήρηση αυτή σημαίνει ότι foxp3

+ Tregs μπορούν να βασίζονται σε άμεση αλληλεπίδραση με CD8a

+ Τ κύτταρα να ασκεί κατασταλτική επίδραση της επί CD8

λειτουργία αντι-καρκινικών κυττάρων + Τ στο μη-ανοσοποιημένη ομάδα του ποντικιού, ενώ, VLP ανοσοποίηση μειώνει την foxp3

+ πληθυσμό Treg και έτσι την καταστολή που ασκείται από foxp3

+ Tregs στον ιστό του όγκου μπορεί να ανακουφιστεί.

υψηλά επίπεδα IL-6 επαγωγή με mMSLN-VLP είναι μερικώς υπεύθυνος για την Treg κάτω ρύθμιση

IL-6 έχει αναφερθεί ότι αναστέλλει τα φυσικά συμβαίνουν foxp3

+ Tregs. Για να εκτιμηθεί εάν mMSLN-VLP ανοσοποίηση θα μπορούσε να επάγει παραγωγή IL-6, και οι δύο σπληνοκύτταρα και τα κύτταρα JAWSII χρησιμοποιήθηκαν για διέγερση

in vitro

με mMSLN-VLPs. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4Α, υπήρξε μια αξιοσημείωτη αύξηση στις IL-6 που εκκρίνουν DCs στην ομάδα που λάμβανε mMSLN-VLP σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου PBS (22,8% έναντι 3,21%). Επιπλέον, η ενισχυμένη έκκριση IL-6 από σπληνοκύτταρα ποντικού ανιχνεύθηκε επίσης με την διέγερση mMSLN-VLP. Υπήρξε αύξηση κατά 100 φορές στα επίπεδα της IL-6 εκκρίνονται από σπληνοκύτταρα στην ομάδα που λάμβανε mMSLN-VLP σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου PBS. Αυτό υποδηλώνει ότι mMSLN-VLP έχει την ικανότητα να διεγείρει λεμφοκύτταρα, ειδικά DCs, και επάγουν την έκκριση τους από τα υψηλά επίπεδα της IL-6.

Α). Αυξημένη IL-6 κύτταρα που παράγουν JAWSII και αυξημένα επίπεδα IL-6 σε μέσο καλλιέργειας λεμφοκυττάρων κατά την κατεργασία mMSLN-VLP. κύτταρα JAWSII διεγέρθηκαν με MSLN-VLP (5 μg /ml) για 12 ώρες και ενδοκυτταρική χρώση IL-6 εκτελέστηκε. Τα λεμφοκύτταρα παρασκευάστηκαν από τη σπλήνα του αφελή Β6 ποντικούς. Μετά την επώαση με MSLN-VLP για 24 ώρες, το υπερκείμενο συλλέχθηκε για να προσδιοριστεί η IL-6 συγκεντρώσεις από την Bio-Plex. ΣΙ). Μερική διάσωση της κατασταλτικής επίδρασης της mMSLN-VLP διέγερση foxp3

+ κύτταρα Treg από την IL-6 εξουδετέρωσης. MSLN-VLP με ή χωρίς IL-6 εξουδετέρωσης Ab ή ισοτυπικού ελέγχου Ab προστέθηκαν σε λεμφοκύτταρα καλλιέργεια για 3 ημέρες. Η foxp3

+ κύτταρα χρωματίστηκαν με τη χρήση foxp3 ενδοκυτταρική κιτ χρώσης. Τα δεδομένα που αποκτήθηκαν για ανάλυση κυτταρομετρίας ροής με περίφραξη σε CD3

+ και CD4

+ Τ κύτταρα. Ορατή ήταν αντιπροσωπευτικά δεδομένα από τρία σε πέντε ανεξάρτητα πειράματα. (Στατιστικά έννοιες φαίνονται, ** δείχνουν

σ

& lt?. 0.01).

Η

Για να αντιμετωπιστεί αν η μείωση του foxp3

+ Tregs με επεξεργασία mMSLN-VLP επιτεύχθηκε με τη μεσολάβηση από την IL-6, IL-6 αντισώματος εξουδετέρωσης εφαρμόστηκε κατά τη διάρκεια της διέγερσης VLP και ένα αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4Β, το ποσοστό των foxp3

+ Tregs ήταν 12,7% το CD3

+ CD4

+ οριοθετημένα κύτταρα από φρέσκα αφελείς Β6 ποντίκια μετά από 3 ημέρες επώασης. Ωστόσο, το ποσοστό των Foxp3

+ Tregs μειώθηκε με κατεργασία mMSLN-VLP με ή χωρίς αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου (6,51% και 6,18%). Κατά συνέπεια, η IL-6 αντισωμάτων εξουδετέρωσης ήταν σε θέση να διασώσει εν μέρει την μείωση της συχνότητας του Foxp3

+ Treg κυττάρων κατά περίπου 32% (8,16% σε σύγκριση με 6,18% το mMSLN-VLP μόνο θεραπεία). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η IL-6 μπορεί να παίζει ρόλο στη μείωση της foxp3

+ Tregs από mMSLN-VLP ανοσοποίηση.

mMSLN-VLP Ανοσοποίηση μπορεί επιλεκτικά να καταστείλει μια υποομάδα των CD4

+ Foxp3

+ ICOS

– Tregs

λειτουργικά μόρια, όπως η CTLA-4, CD25 και CD44 που εκφράζεται στην επιφάνεια των foxp3

+ Tregs είναι απαραίτητη υπαγορεύει το παλιννόστησης, τη λειτουργία και την επιβίωση της ικανότητας αυτών κύτταρα. Για την περαιτέρω αντιμετώπιση πώς VLPs επηρεάζουν foxp3

+ Treg βιολογίας, πολλά σημαντικά λειτουργικά μόρια βάφτηκαν. Σε σύγκριση με την ομάδα PBS, δεν υπήρχαν εμφανείς διαφορές στις συχνότητες των CD4

+ foxp3

+ CTLA-4

+ Tregs (Εικ. 5Α), CD4

+ foxp3

+ CD25

+ Tregs (Εικ. 5Β), CD4

+ foxp3

+ CD44

hi Tregs (Εικ. 5C) μετά VLP ανοσοποίηση. Η ανασταλτική μόριο PD-1 και συν-διεγερτικό μόριο CD40L είχαν ένα χαμηλό επίπεδο έκφρασης σε foxp3

+ Tregs (Εικ. 5D). Το ποσοστό και των ΝΧΙ για CD4

+ foxp3

+ PD-1

+ και CD4

+ foxp3

+ CD40L

+ Tregs στις ομάδες VLP ήταν πολύ παρόμοια με αυτές τις αξίες σε η ομάδα ελέγχου PBS. Ωστόσο, σε σύγκριση με αγωγές PBS (35,7%), το ποσοστό των CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Tregs στις ομάδες που έλαβαν VLP αυξήθηκε. Το υψηλότερο ποσοστό των CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Treg υποσύνολο παρατηρήθηκε μετά mMSLN-VLP ανοσοποίηση (59,8%). Το ποσοστό στα ποντίκια έλαβαν SIV-VLP ήταν 54,0% (Εικ. 5F). Συσχετίζοντας τα παραπάνω δεδομένα με τη μείωση σε απόλυτο αριθμό των Foxp3

+ κυττάρων και την αύξηση του ποσοστού των ICOS

+ κύτταρα στο foxp3

+ ομάδα Treg, αυτά τα στοιχεία δείχνουν ότι η μείωση των Foxp3

+ Tregs αντιστοιχεί στον πληθυσμό των CD4

+ foxp3

+ ICOS

– Tregs αλλά όχι στο CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Tregs. ICOS μπορεί συνεπώς παίζουν ένα κρίσιμο ρόλο στη λειτουργία κατασταλτική του όγκου που ασκείται από Tregs σε ποντίκια που φέρουν όγκο. Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι παρόλο που mMSLN-VLP ανοσοποίηση μπορεί να μειώσει τη συνολική συχνότητα των κυττάρων Treg αυτά είναι κατά κύριο λόγο από την CD4

+ foxp3

+ ICOS

– Treg κυττάρων υποσύνολο, αλλά αυτά τα Tregs που ανήκουν στην CD4

+ foxp3

+ ICOS

υποσύνολο + φαίνεται να διατηρείται.

στο 12

ου ημέρα μετά την εμφύτευση του όγκου και μετά από ένα χρόνο VLP εμβολιασμού κατά την ημέρα 3, τα ποντίκια θυσιάστηκαν για το ανοσοποιητικό ανάλυση απάντηση. Περίπου 10

6 σπληνοκύτταρα επωάστηκαν με τα κατάλληλα αραιωμένο φθορίζοντα αντισώματα συζευγμένα συμπεριλαμβανομένων CD4, Foxp3, CTLA-4, CD25, CD44, PD-1, CD40L, και ICOS. FACSCalibur χρησιμοποιήθηκε για την απόκτηση και λογισμικό FlowJo χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των δεδομένων. Τα κύτταρα περίφραξη σε CD4

+ foxp3

+ πληθυσμού και ιστόγραμμα διαφορετική έκφραση μορίου σε διαφορετικές πειραματικές ομάδες παρουσιάστηκαν στο Α). CTLA-4? ΣΙ). CD25? ΝΤΟ). CD44? ΡΕ). PD-1? ΜΙ). CD40L? ΦΆ). ICOS. Ορατή ήταν αντιπροσωπευτικά δεδομένα από τρία πειράματα με τουλάχιστον τρεις ποντικούς ανά ομάδα. (Στατιστικά έννοιες φαίνονται, ** δείχνουν

σ

& lt?. 0.01).

Η

Για να προσδιοριστεί η παρουσία και των δύο υποσύνολα κυττάρων Treg στους ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος, δείγματα ιστών αναλύθηκαν με χρώση ανοσοφθορισμού. Όπως φαίνεται στο Σχ. S3A, υπήρξε μια υψηλή πυκνότητα των CD3

+ foxp3

+ Tregs στην παγκρέατος καρκινικών ιστών και περισσότερα από τα μισά από αυτά τα foxp3

+ Tregs ήταν ICOS

+ (Σχ. S3b). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι foxp3

+ Tregs παίζουν σημαντικό ρόλο στην παθογένεια του καρκίνου του παγκρέατος, και οι δύο foxp3

+ ICOS

+ και foxp3

+ ICOS

– Tregs υποπληθυσμών εμπλέκονται στην ανοσολογική καταστολή σε ιστούς όγκων.

mMSLN-VLP Θεραπεία Ενεργοποιεί pDCs και απορυθμίζει ICOSL για pDCs μέσω της IL-6 να διατηρήσει CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Treg κύτταρα αλλά όχι CD4

+ foxp3

+ ICOS

– Treg κύτταρα

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι pDCs εκφράζουν υψηλό επίπεδο ICOSL, και η αλληλεπίδραση μεταξύ ICOS και ICOSL είναι σημαντική για την ομοιόσταση των CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ κύτταρα Treg [13], [29]. Από mMSLN-VLP ανοσοποίηση επηρεάζει τη συχνότητα των CD4

+ foxp3

+ ICOS

– κύτταρα Treg αλλά όχι CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ κύτταρα Treg, μία από τις πιθανές εξηγήσεις για αυτό το προτιμησιακό συντήρηση των CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ κύτταρα Treg θα μπορούσε να οφείλεται σε mMSLN-VLP διαμεσολαβείται προς τα πάνω ρύθμιση ICOSL για pDCs. Για να μελετήσει κατά πόσον mMSLN-VLP θα μπορούσε να ενεργοποιήσει pDCs, μια κυτταρική σειρά ποντικού DC, JAWSII, χρησιμοποιήθηκε. LPS χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος για την τόνωση DCs. Όπως φαίνεται στο Σχ. 6Α, LPS διέγερση αυξήθηκε σημαντικά έκφραση CD11b σύγκριση με την αγωγή με PBS (84,6% έναντι 28,0%). Παρ ‘όλα αυτά, mMSLN-VLP μείωσε σε μεγάλο βαθμό την έκφραση του CD11b (9,14%). Αντίθετα, η έκφραση των Β220 και Gr-1 ήταν δραματικά τα πάνω ρυθμισμένη μετά την αγωγή mMSLN-VLP (95,5% και 86,4%). Β220 και Gr-1 έχουν ταυτοποιηθεί ως πρωταρχικό δείκτες των pDCs. Υπήρχαν μόνο χαμηλά επίπεδα Β220 και Gr-1 έκφραση εξής PBS και LPS επεξεργασίες (10,3% και 10,4% σε PBS, 19,7% και 17,5% σε αγωγή LPS). Αυτά τα στοιχεία δείχνουν ότι mMSLN-VLPs μπορεί να προωθήσει pDCs-όπως τα κύτταρα, ενώ LPS έχει μια προτίμηση για την ενεργοποίηση του CDC-όπως τα κύτταρα.

Περίπου 10

7 JAWSII κύτταρα διεγείρονται είτε με PBS, LPS (1 μg /ml), ή MSLN-VLP (5 μg /ml) σε πλήρες άλφα μέσα με 5 ng /ml rmGM-CSF. Μετά από 24 ώρες επώασης, δεικτών κυτταρικής επιφάνειας χρωματίστηκαν και αποκτήθηκαν από FACSCalibur. ΈΝΑ). Έκφραση του CD11b, Β220, και Gr-1 κατά τη διαφορετική μεταχείριση των PBS, LPS, ή mMSLN-VLP σε κύτταρα JAWSII. ΣΙ). Έκφραση ICOSL σε PBS, mMSLN-VLP ή IL-6 που προκαλείται από pDCs. ΝΤΟ). Έκφραση των ICOS σε CD4

+ foxp3

+ Tregs. ΡΕ). Ποσοστό Ki-67 κύτταρα χρώση τόσο CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Tregs και CD4

+ foxp3

+ ICOS

– Tregs. Πολλαπλές δείκτες κυτταρικής επιφάνειας ήταν λεκέδες και ανάλυση των φαινοτύπων υποπληθυσμού έγινε με τη χρήση FACSCalibur και FlowJo λογισμικού. Ορατή ήταν αντιπροσωπευτικά δεδομένα από τρία έως έξι ανεξάρτητα πειράματα. (Στατιστικά έννοιες φαίνονται, ** δείχνουν

σ

& lt?. 0.01).

Η

Για να προσδιορίσετε αν mMSLN-VLP ενεργοποιηθεί pDCs-όπως κύτταρα εκφράζουν αυξημένα ICOSL, ή αν mMSLN- VLP επαγόμενη IL-6 μπορεί να ρυθμίζει προς τα πάνω ICOSL επί pDCs, PBS, mMSLN-VLP (10 μg /ml) ή IL-6 (20 ng /ml) χρησιμοποιήθηκαν για να διεγείρουν σπληνοκύτταρα και λεκές για επιφάνεια ICOSL επί περιφραγμένη pDCs. Όπως φαίνεται στο Σχ. 6Β, το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν ICOSL-σε-mMSLN VLP ενεργοποιούνται pDCs ή IL-6 ενεργοποιήθηκε pDCs ήταν 12,4% και 12,3%, αντίστοιχα, οι οποίες ήταν σημαντικά αυξημένη σε σύγκριση με PBS ενεργοποιημένο DCs (4,95%). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι mMSLN-VLP ή IL-6 ενεργοποιημένα pDCs κύτταρα που μοιάζουν εκφράζουν υψηλά επίπεδα ICOSL.

Έχουμε δείξει ότι mMSLN-VLP εμβολιασμός προκάλεσε υψηλά επίπεδα παραγωγής IL-6 η οποία είναι εν μέρει υπεύθυνη για η μείωση της συχνότητας των κυττάρων Treg, αλλά το αποτέλεσμα της IL-6 έχει στην CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Tregs υποπληθυσμό πρέπει ακόμη να καθοριστεί. Ως εκ τούτου, εκτίμησε κατά πόσον mMSLN-VLP ή IL-6 θα μπορούσε επίσης να μειώσει το συνολικό CD4

+ foxp3

+ Tregs, διατηρώντας παράλληλα ένα υψηλό ποσοστό των CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Tregs

in vitro

. Σπληνοκύτταρα ποντικού διεγέρθηκαν είτε με PBS, mMSLN-VLP (10 μg /ml), ή IL-6 (20 ng /ml). Ενώ κάναμε παρατηρούμε σημαντική CD4

+ foxp3

+ Treg ρύθμιση προς τα κάτω τόσο στην mMSLN-VLP και IL-6 ομάδες θεραπείας, περιέργως, παρατηρήσαμε ότι η IL-6 είχε ένα παρόμοιο αποτέλεσμα ως θεραπεία mMSLN-VLP που οδήγησε επίσης σε αύξηση της συχνότητας των CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ κύτταρα Tregs (Εικ. 6C). Να εξετάσει περαιτέρω την ιδιοκτησία αυτής της υποπληθυσμό των κυττάρων Treg και να διαπιστωθεί αν η έκφραση ICOS σχετίζεται με τον πολλαπλασιασμό των CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Treg υποπληθυσμό, Ki-67 έκφραση χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό ο κύκλος των κυττάρων. Όπως φαίνεται στο Σχ. 6D, βρήκαμε ένα σημαντικό ποσοστό των Ki-67 θετικών κυττάρων εντός του ICOS

+ Tregs έναντι ICOS- Tregs (47,8 ± 8,4% έναντι 12,3 ± 3,8%, p & lt? 0.001). Αυτό δείχνει ότι ακόμα κι αν mMSLN-VLP διεγειρόμενης IL-6 μειώνει τη συνολική συχνότητα των κυττάρων Treg μπορεί επίσης να είναι υπεύθυνη για την αυξημένη αναλογία των υπολοίπων CD4

+ foxp3

+ ICOS

+ Treg υποσύνολο μέσω ενισχυμένης πολλαπλασιασμό της ICOS

+ κυττάρων που παρουσιάζουν ένα δίκοπο μαχαίρι.

Συζήτηση

Η ταχεία ανάπτυξη των εμβολίων κατά του καρκίνου παρέχει μεγάλη υπόσχεση για την πρόληψη και θεραπευτική όγκου [4]. Σε αντίθεση με άλλες θεραπείες όγκου, τα εμβόλια έχουν πολλά πλεονεκτήματα, όπως η ανάπτυξη μιας απόκρισης μνήμης, ειδική στόχευση των καρκινικών κυττάρων και λιγότερες παρενέργειες, μεταξύ άλλων. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι mMSLN-VLP ανοσοποίηση θα μπορούσε να σπάσει την ανοχή να αυτο mMSLN και εξαπολύσουν μια ισχυρή ανοσολογική απόκριση έναντι mMSLN, και ως εκ τούτου, να μειώσει αποτελεσματικά το μέγεθος του όγκου και ιδίως να παρατείνει την επιβίωση των ποντικών που φέρουν όγκο σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος . MSLN-ειδικά CD8

+ Τ κυττάρων μπορεί να επαχθεί αποτελεσματικά από κατεργασία mMSLN-VLP και έχουν βρεθεί να συμβάλει στην καταστολή της ανάπτυξης του όγκου.