Αφηρημένο

Πρόβλεψη πρόγνωση του καρκίνου του προστάτη είναι προκλητική και προγνωστική βιολογικών δεικτών της επανάληψης παραμένουν ασαφείς. Αν και το ειδικό προστατικό αντιγόνο (PSA) έχει υψηλή ευαισθησία (90%) σε ένα επίπεδο PSA από 4,0 ng /mL, η χαμηλή εξειδίκευση του οδηγεί σε πολλά ψευδώς θετικά αποτελέσματα και σημαντική υπερβολική θεραπεία των ασθενών και την απόδοσή του και στα χαμηλότερα επίπεδα είναι κακή. Με δεδομένη την ιστοπαθολογική και μοριακή ετερογένεια του καρκίνου του προστάτη, προτείνουμε ότι ένα πάνελ των δεικτών θα είναι ένα καλύτερο εργαλείο από ένα μόνο δείκτη. Δοκιμάσαμε ένα πάνελ των δεικτών αποτελείται από την αντι-αποπτωτική πρωτεΐνη FLIP και ρυθμιστές της μεταγραφής του Sp1 και Sp3 χρησιμοποιώντας ιστούς του προστάτη από 64 ασθενείς με υποτροπιάζοντα και μη επαναλαμβανόμενο καρκίνο που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή ως βασική θεραπεία για τον καρκίνο του προστάτη και παρακολουθήθηκαν με μετρήσεις του PSA για τουλάχιστον 5 χρόνια. Η ανοσοϊστοχημική χρώση για Sp1, SP3, και flip διεξήχθη σε αυτούς τους ιστούς και βαθμολογήθηκαν με βάση την αναλογία και την ένταση της χρώσης. Η προγνωστική αξία του flip /Sp1 /Sp3 υπογραφή για την κλινική έκβαση (υποτροπή έναντι μη επανάληψης) εξερευνήθηκε με λογιστική παλινδρόμηση, και συνδυασμοί FLIP /Sp1 /Sp3 και το σκορ Gleason αναλύθηκαν με μια κλιμακωτή (προς τα πίσω και προς τα εμπρός) υλικοτεχνική μοντέλο. Η διάκριση των δεικτών ταυτοποιήθηκε με ανάλυση ευαισθησίας-ειδικότητας και τη διαγνωστική αξία του FLIP /Sp1 /Sp3 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) για το χειριστή του δέκτη χαρακτηριστικές καμπύλες. Οι AUCs για FLIP, Sp1, SP3, και Gleason σκορ για την πρόβλεψη αποτυχία PSA και μη-αποτυχίας ήταν 0,71, 0,66, 0,68 και 0,76, αντίστοιχα. Ωστόσο, αυτό αυξήθηκε σε 0,93 όταν συνδυάζονται. Έτσι, η «υπογραφή βιοδεικτών» της flip /Sp1 /Sp3 σε συνδυασμό με το σκορ Gleason προβλεπόμενη επανεμφάνιση της νόσου και στρωματοποιημένη ασθενείς που είναι πιθανό να ωφεληθούν από την πιο επιθετική αγωγή

Παράθεση:. Bedolla RG, Γκονγκ J, Prihoda TJ, Yeh IT, Thompson IM, Ghosh R, et al. (2012) προγνωστική αξία του Sp1 /Sp3 /FLIP Υπογραφή για τον καρκίνο του προστάτη Η υποτροπή. PLoS ONE 7 (9): e44917. doi: 10.1371 /journal.pone.0044917

Συντάκτης: Τσαντ Creighton, Baylor College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 24, 2012? Αποδεκτές: 9 του Αυγ 2012? Δημοσιεύθηκε: 13 Σεπτεμβρίου, 2012 |

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από κεφάλαια από την Κλινική Βραβείο Μεταγραφική Science (CTSA) επιχορήγηση (UL1RR025767)? Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου R01 CA 135.451 και βραβείο 1 Ι01 BX 000766-01 (ΑΡΚ) Υποθέσεων Βετεράνων-Merit? R01 CA 149516 (RG)? και EDRN (UO1 054.174? IT). Οι συγγραφείς αναγνωρίζουν την υποστήριξη που παρέχεται από τον καρκίνο Θεραπεία και Ερευνητικό Κέντρο του Πανεπιστημίου του Τέξας Επιστημών Υγείας Κέντρο του Σαν Αντόνιο, μέσω του Εθνικού Ινστιτούτου Καρκίνου επιχορήγηση υποστήριξης # 2P30 CA 054174 – 17 (ΔΧΕ, IMT, και RG). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται με τους άνδρες και αναμένεται να προκαλέσει 28.170 θανάτους στις Ηνωμένες Πολιτείες το 2012 [1]. PCA επηρεάζει γενικά τους άνδρες άνω των 65 ετών, αλλά παραμένει νωχελικός και ασυμπτωματική στην πλειοψηφία των περιπτώσεων. Η ιστοπαθολογική και μοριακή ετερογένεια της ασθένειας καθιστά πρόβλεψη της πρόγνωσης προκλητική. Παρά το γεγονός ότι το PSA είναι ο πιο ευρέως χρησιμοποιούμενος δείκτης ορού για καρκίνο του προστάτη, δεν έχει αποδεκτή σημείο αποκοπής με υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα και συχνά οδηγεί σε εσφαλμένα θετικά αποτελέσματα [2] – [4]. Επιπλέον, δεν υπάρχουν σήμερα μοριακούς δείκτες που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να προβλέψει αξιόπιστα ποια προκαρκινικές αλλοιώσεις θα επαναληφθεί ή να εξελιχθούν σε επεμβατική PCA [2] – [6]. Μια έγκυρη βιοδείκτη θα πρέπει να έχει τα ακόλουθα χαρακτηριστικά: (i) η ακρίβεια (δεν θα πρέπει να ψευδώς προβλέψει θετικά ή αρνητικά αποτελέσματα)? (Ii) επιλεκτικότητα (ικανότητα για τη διάγνωση της νόσου κατά τη διάρκεια της εξέλιξης της νόσου)? και (iii) ειδικότητα (ικανότητα να διακρίνει καρκινικούς από μη καρκινικός φαινότυπος). Αν και PSA πληροί πλέον αυτών των κριτηρίων και χρησιμοποιείται ευρέως, περιορίζεται από χαμηλές τιμές της ειδικότητας και εκλεκτικότητας [2] – [6]. Λόγω της αυξανόμενες ενδείξεις για υπερβολική θεραπεία του καρκίνου του προστάτη, είναι σημαντικό για τον εντοπισμό και την επικύρωση νέων προγνωστικοί δείκτες που θα προβλέψει κλινικά σημαντικό καρκίνο του προστάτη [6] – [10]. Αυτοί οι δείκτες θα επιτρέψει τη στοχευμένη θεραπεία των ασθενών με επιθετικούς όγκους, αποφεύγοντας άσκοπη θεραπεία και τις παρενέργειες του σε ασθενείς με βραδείας εξέλιξης της νόσου.

Η

Η έρευνα κατά την τελευταία δεκαετία έχει προσδιορίσει μια σειρά βιοδεικτών που σχετίζονται με υψηλής ποιότητας νόσος Gleason [7] – [13]. Προηγούμενες μελέτες από το εργαστήριο μας βρήκε μια συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του FLICE-ανασταλτικής πρωτεΐνης (FLIP) και βαθμού όγκου στον καρκίνο του προστάτη στον άνθρωπο [13]. Συγκεκριμένα, βρήκαμε ότι υψηλής ποιότητας Gleason όγκοι εμφανίζουν αυξημένη χρώση FLIP σε σύγκριση με χαμηλού βαθμού Gleason όγκους (ρ = 0,04) [13]. Σε πειράματα για να κατανοήσουν το ρόλο της ρύθμισης FLIP κατά τη διάρκεια της καρκινογένεσης του προστάτη, εντοπίσαμε παράγοντες μεταγραφής Sp1 και Sp3 ως σημαντικοί ρυθμιστές της FLIP μεταγραφική δραστηριότητα στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη [13]. Δείξαμε επίσης ότι Sp1 trans-ενεργοποιεί τον υποκινητή FLIP ενώ Sp3 αναστέλλει Sp1 μεσολάβηση trans-ενεργοποίηση, ενοχοποιώντας έτσι ένα ρόλο για αυτούς τους παράγοντες κατά την διάρκεια της καρκινογένεσης του προστάτη. Ωστόσο, δεν ήταν γνωστό αν κάποιο από αυτά τα γονίδια θα μπορούσε να επιτύχει την ευαισθησία και ειδικότητα απαραίτητο να γίνει διάκριση επιθετική από βραδείας ασθένεια. Εδώ, θα αξιολογηθεί αν η «υπογραφή βιοδεικτών» της flip, Sp1 και SP3 είναι δυνατό να προβλέψει την ανάπτυξη της υποτροπής του καρκίνου του προστάτη με ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση των δειγμάτων ιστού που λαμβάνονται από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε προστατεκτομή ως βασική θεραπεία για τον καρκίνο του προστάτη και παρατηρήθηκαν για τουλάχιστον 5 χρόνια με μετρήσεις του PSA. Δείχνουμε ότι ο συνδυασμός της βαθμολογίας flip, Sp1, SP3, και Gleason είναι μια εξαιρετική ικανότητα πρόβλεψης της βιοχημικής υποτροπής. Η περιοχή κάτω από το χειριστή του δέκτη χαρακτηριστική καμπύλη για Flip, Sp1, και το SP3 κατά πρόβλεψη αποτυχία PSA ήταν 0,71, 0,66 και 0,68 αντίστοιχα? Ωστόσο, όταν οι τρεις αυτοί δείκτες ενώθηκαν με Gleason σκοράρει η AUC αυξήθηκε σε 0,93. Αυτό το επίπεδο της πρόβλεψης για την αποτυχία PSA δείχνει ότι αυτό το πάνελ βιοδείκτη θα μπορούσε να είναι ένας σημαντικός προγνωστικός δείκτης της βιοχημικής υποτροπής.

Η

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και ιστοί

Χρησιμοποιήσαμε ιστούς από το αποθετήριο ιστό GU στο Πανεπιστήμιο του Science Center Texas Health, San Antonio, TX, για τα οποία λήφθηκε γραπτή έγκριση συγκατάθεση ενημερώνεται από το Διοικητικό συμβούλιο αναθεώρηση Θεσμική (αριθμός πρωτοκόλλου του HSC 20050234H τράπεζα με τίτλο ιστών και βάσης δεδομένων για τις ουρολογικές παθήσεις) στο Πανεπιστήμιο του Science Center Texas Health, San Antonio, TX. Αυτοί οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή ως βασική θεραπεία για τον καρκίνο του προστάτη στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο και το σύστημα υγειονομικής Νότιο Τέξας Βετεράνων Υγείας, Audie Murphy Veterans Administration Hospital στο San Antonio, Τέξας. Στην παρούσα μελέτη, οι ιστοί που χρησιμοποιήθηκαν ήταν από 64 αγνώστων στοιχείων των ασθενών (που εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου του Τέξας Health Science Center στο San Antonio). ηλικιακή ομάδα ήταν 51 έως 76 ετών, μέση ηλικία 63 χρόνια (Πίνακας 1). Περιπτώσεις ταξινομήθηκαν ως επαναλαμβανόμενες αν PSA ήταν ανιχνεύσιμο και αυξήθηκε σε 0,2 ng /mL ή υψηλότερη, όπως επιβεβαιώθηκε από μια δεύτερη εξέταση PSA. Οι ασθενείς χωρίς υποτροπή είχαν μη ανιχνεύσιμα επίπεδα PSA ή PSA & lt? 0,2 ng /mL κατά τη διάρκεια τουλάχιστον μιας περιόδου παρακολούθησης 60 μηνών μετά την προστατεκτομή. Από τα 64 άτομα, 30 είχαν υποτροπιάζοντα καρκίνο (47%) και 34 ήταν χωρίς υποτροπή (53%). Gleason σκορ ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των δύο ομάδων (p = 0,0001): 82.35% των μη-επαναλαμβανόμενες περιπτώσεις (PSA μη ανεπάρκεια) είχαν χαμηλού βαθμού Gleason [5 έως 7 (3 + 4)], ενώ 76,66% του PSA περιπτώσεις υποτροπής (αποτυχία PSA) είχε υψηλό βαθμό Gleason [7 (4 + 3) σε 9].

Η συνολική βαθμολογία για αυτό το δείγμα ήταν 0, 6, και 0 για Flip, Sp1 και Sp3 αντίστοιχα. B. H & amp? Ε και IHC χρώση του FLIP, Sp1 και Sp3 σε ένα αντιπροσωπευτικό δείγμα από έναν ασθενή με υποτροπιάζοντα PCA [(Gleason 9 (4 + 5)] υπό χαμηλή μεγέθυνση (αριστερά) και υψηλή μεγέθυνση (δεξιά) τη συνολική βαθμολογία. για αυτό το δείγμα ήταν 7, 8, και 6 για Flip, Sp1 και SP3, αντίστοιχα.

Η

αντισώματα και ανοσοϊστοχημεία

Κουνέλι πολύκλωνα αντισώματα ειδικά για Flip, Sp1 και Sp3 ήταν από την Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). ανοσοϊστοχημεία (IHC) διεξήχθη στον πυρήνα παθολογία εγκατάσταση του Τμήματος παθολογίας του Πανεπιστημίου του Τέξας Health Science Center στο San Antonio. η χρώση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση πρότυπων μεθόδων IHC συμπεριλαμβανομένης της χρήσης των κατάλληλων αρνητικούς μάρτυρες. πολυμερούς κουνέλι HRP και DAB χρωμογόνου χρησιμοποιήθηκε ως επικουρικού συστήματος και αιματοξυλίνη (DAKO North America Inc. Carpentaria, CA) χρησιμοποιήθηκε για αντιχρωματισμός.

η περιοχή κάτω από τις καμπύλες ROC υπολογίζεται για FLIP (0,71), sp1 (0.66), Sp3 (0,68), και Gleason (0.76) δείχνουν διάφορους βαθμούς διακρίσεις ως προάγγελοι της υποτροπής. Μια περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC των 0,8 έως 1,0 θεωρείται ότι είναι πολύ καλή έως εξαιρετική διάκριση, ενώ 0,5 υποδεικνύει καμία διάκριση.

Η

ποσοτικαί Αξιολόγηση των ιστών χρώσης

τμήματα ιστών που περιέχει 30 -40% του όγκου επιλέχτηκαν για παθολογικές αξιολόγηση. Ένας παθολόγος (Ι-ΤΥ) αξιολογήθηκαν τυφλά χρώση του ιστού του προστάτη. Χρώση εντάσεις και η αναλογία των θετικών κυττάρων χρώση των όγκων προσδιορίστηκαν ανεξάρτητα. Εν συντομία, η αναλογία των θετικών κυττάρων όγκου βαθμολογήθηκε ως εξής: 0, δεν βάφονται κύτταρα? 1, ≤1%? 2, 1-10%? 3, 10-33%? 4, 33-66%? 5, 66-100% θετική χρώση. Το σκορ ένταση (IS) αντιπροσωπεύει την μέση ένταση χρώση των καρκινικών κυττάρων: 0, καθόλου χρώση? 1, αδύναμη? 2, μέτρια? 3, ισχυρή χρώση. Η βαθμολογία αναλογία και η βαθμολογία ένταση προστέθηκαν για να ληφθεί η συνολική βαθμολογία (TS) με μια σειρά από 0 έως 8.

Η περιοχή κάτω από τις καμπύλες ROC υπολογίζεται για συνδυασμό των flip, Sp1, SP3, σκορ Gleason, και αλληλεπιδράσεις τους δίνει μια τιμή 0,93 που δείχνει την εξαιρετική διάκριση μεταξύ των μη επαναλαμβανόμενων και υποτροπιάζουσες περιπτώσεις.

η

Στατιστικές Μέθοδοι Ανάλυσης και

Σύλλογος του flip /Sp1 /Sp3 βιοδεικτών υπογραφή με την κλινική έκβαση (υποτροπή έναντι μη επανάληψης) αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας πολλαπλές στατιστικές μεθόδους. Η μέση χρώση βαθμολογίες για έκφραση πρωτεΐνης στις δύο ομάδες συγκρίθηκαν με μία δοκιμή rank-sum Wilcoxon. ρ-τιμές & lt? 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές. Η προγνωστική αξία του κάθε δείκτη (flip, Sp1 και SP3) για την κλινική έκβαση (υποτροπή ή μη επανάληψης) εξερευνήθηκε για πρώτη φορά ξεχωριστά με λογιστική παλινδρόμηση, και στη συνέχεια το πρόσθετο προβλεπόμενη τιμή του flip /Sp1 /Sp3 υπογραφή και το βαθμό στον οποίο που αλληλεπιδρούν μεταξύ τους και με το σκορ Gleason εξερευνήθηκε με μια καθυστερημένη μοντέλο επιλογής. Η διάκριση των δεικτών ταυτίστηκε με την ανάλυση ευαισθησίας-ειδικότητας και τη διαγνωστική αξία του flip /Sp1 /Sp3 υπογραφή προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) για το χαρακτηριστικό χειριστή του δέκτη (ROC) καμπύλη. Μεταβλητές με p & lt? 0,15 διατηρήθηκαν [14], προκειμένου να βελτιωθεί η ακρίβεια της σημαντική (p & lt? 0,05) μεταβλητές που αναφέρθηκαν. Για το τελικό μοντέλο έγινε η Hosmer-Lemeshow καλοσύνη του Fit δοκιμής. Τα επίπεδα σημαντικότητας και AUC για την καμπύλη ROC αναφερθεί. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SAS έκδοση 9.2 (SAS Institute Inc.) και STATA έκδοση 9.2 (STATA Corporation).

Σε ένα σημείο πιθανότητα αποκοπής του 0.45 τόσο η ευαισθησία (80%) και η ειδικότητα (85,3 %) για αυτό το συνδυασμό των δεικτών είναι υψηλή, δείχνει εξαιρετική δύναμη διακρίσεις του συνδυασμού.

η

Αποτελέσματα

Σε αυτή τη μελέτη αξιολόγησε την έκφραση του αντι-αποπτωτική πρωτεΐνη FLIP και της ρυθμιστές της μεταγραφής Sp1 και SP3, ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση των δειγμάτων ιστού που λαμβάνονται από 64 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή ως βασική θεραπεία για τον καρκίνο του προστάτη. Οι ασθενείς είχαν τουλάχιστον 60 μήνες παρακολούθησης με μετρήσεις του PSA και μόνο εκείνοι με ένα μη ανιχνεύσιμο PSA σε 60 μήνες θεωρήθηκαν να έχουν μη-υποτροπιάζουσα νόσο. Η αύξηση των επιπέδων του PSA μετά την προστατεκτομή χρησιμοποιήθηκαν ως υποκατάστατο τελικό σημείο για κακή έκβαση. PSA μη αποτυχία ορίστηκε ως μη ανιχνεύσιμα επίπεδα του PSA ή & lt? 0,2 ng /mL για τουλάχιστον 5 έτη μετά την προστατεκτομή και δεν εκδηλώθηκαν άλλα σημεία επανάληψης όπως μετάσταση. αποτυχία PSA ορίστηκε ως το επίπεδο του PSA & gt? 0,2 ng /mL, που αυξήθηκε κατά την διάρκεια των 5 ετών μετά την προστατεκτομή [15]. Λόγω του περιορισμένου μεγέθους του δείγματος θεωρήθηκαν μόνο αμφίδρομη αλληλεπίδραση και η PSA δεν προστέθηκε στο σκορ Gleason. Πρώτον, σε σύγκριση με την έκφραση του FLIP, Sp1 και Sp3 μεταξύ των δύο ομάδων με τη χρήση ανοσοϊστοχημείας και βρήκε σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων αποτυχία PSA και μη αποτυχία στην έκφραση του FLIP, SP3, και Sp1 (Wilcoxon rank-sum? Σχήμα 1 και Σχήμα 2). Όπως φαίνεται στα οικόπεδα κουτί στο Σχήμα 1, βρήκαμε σημαντικές διαφορές στη μέση συνολική βαθμολογία IHC μεταξύ των μη επαναλαμβανόμενων και υποτροπιάζουσες περιπτώσεις για Sp1 (p = 0,019), Sp3 (p = 0,011), και flip (p = 0,0019) . Έχουμε περιλαμβάνονται επίσης σκορ Gleason στην ανάλυσή μας, διότι αυτό θα έχει μια επιρροή στο αποτέλεσμα. Gleason βαθμολογίες για κοόρτη 64 ασθενών μας ήταν σημαντικά διαφορετικές σε επαναλαμβανόμενες και μη επαναλαμβανόμενες ομάδες (p = 0,0001? Δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Θα πρέπει να αναφερθεί ότι αυτό δεν είναι απαραιτήτως η περίπτωση καθώς μελέτες έχουν δείξει ότι η Gleason βαθμού 7 από μόνη της δεν μπορεί να είναι σημαντική [16]. Στην ομάδα μας, το 50% των περιπτώσεων προστατεκτομή ήταν Gleason 7: (29,69% ήταν 3 + 4 και 20,3% ήταν 4 + 3). Του 29,69% που ήταν 3 + 4, το 41,2% ήταν μη-επαναλαμβανόμενες και 16,67% ήταν υποτροπιάζουσες περιπτώσεις. Από την άλλη πλευρά, το 20,3% με την πιο επιθετική ταξινόμησης 4 + 3, 8,8% ήταν μη-επαναλαμβανόμενες και 33,33% ήταν επαναλαμβανόμενη. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι οι διαφορές στο FLIP, Sp1 και Sp3 μεταξύ των βιοχημικά επαναλαμβανόμενες και μη επαναλαμβανόμενες ομάδες είναι σημαντικές.

Οι περιπτώσεις πάνω από το σημείο αποκοπής του 0.45 (διακεκομμένη γραμμή) προβλέπεται να επαναληφθεί. Η αλληλεπίδραση του FLIP και Sp3 εμφανίζεται ως στερεό χρώμα γραμμές επί του Χ-άξονα. Β Προβλεπόμενη πιθανότητα επανάληψης όταν Gleason είναι υψηλής ποιότητας 7 (4 + 3) για διαφορετικά επίπεδα Sp1 (0, 3, και 6) και Sp3 (0-6) ως συνάρτηση του (0-8) αλληλεπίδραση FLIP. Οι περιπτώσεις πάνω από το σημείο αποκοπής του 0.45 (διακεκομμένη γραμμή) προβλέπεται να επαναληφθεί. Η αλληλεπίδραση των FLIP και SP3 δεν είναι εμφανίζεται ως στερεό χρώμα γραμμές στο Χ-άξονα.

Η

Με βάση τις σημαντικές διαφορές που παρατηρούνται μεταξύ βιοχημικά επαναλαμβανόμενες και μη επαναλαμβανόμενες ομάδες, είμαστε δίπλα υπολογίζεται η ευαισθησία και η ειδικότητα της τα παραγόμενα δεδομένα [16] – [17]. Μονοπαραγοντική λογιστική παλινδρόμηση του FLIP, Sp1, SP3, και το βαθμό Gleason οδήγησε σε AUCs για ROC καμπύλες 0,71, 0,66, 0,68 και 0,76, αντίστοιχα (Σχήμα 3).

Η

Λαμβάνοντας υπόψη τα πιο πάνω αποτελέσματα θα διερευνηθούν η προγνωστική αξία των δεικτών χρησιμοποιώντας ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο λογιστικής με μια καθυστερημένη επιλογής που περιλαμβάνονται σκορ Gleason (υψηλή έναντι χαμηλή) (p = 0.14), FLIP (p = 0,07), και Sp1 (p = 0,08) ως κύρια αποτελέσματα και η αλληλεπιδράσεις του FLIP με Sp3 (p = 0.02), Sp1 (0.11), και Gleason (p = 0.03), όπως επίσης και η αλληλεπίδραση της Sp3 και Gleason (p = 0,014), όπως δευτερολέπτων διαρκείας αποτελέσματα. Αυτές οι αλληλεπιδράσεις ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των μη επαναλαμβανόμενων και επαναλαμβανόμενες ομάδες. Μεταβλητές με p & lt? 0,15 επελέγησαν για την καλοσύνη Hosmer-Lemeshow του Fit μοντέλο, χρησιμοποιώντας την αποτυχία PSA έναντι μη-αποτυχίας ως εξαρτημένη μεταβλητή. Το μοντέλο έδειξε μια καλή προσαρμογή, με chi-square αξία των 8,8 και ρ = 0,4, με την AUC για την καμπύλη ROC 0,93 (Σχήμα 4). Στο βέλτιστο σημείο αποκοπής του 0,45, η ευαισθησία ήταν 80% και η ειδικότητα ήταν 85,29%, με αποτέλεσμα τη σωστή κατάταξη σε 83% των περιπτώσεων (Σχήμα 5).

Το Σχήμα 6 δείχνει ασθενείς που προβλέπεται να επαναληφθεί με βάση αυτά τα βιοδείκτες. Τόσο Gleason και PSA και μόνο έχουν ευαισθησίες κάτω από το 80%, επομένως, αυτό το μοντέλο είναι μια βελτίωση σε σχέση με τους δείκτες που χρησιμοποιούνται σήμερα. υλικοτεχνική οικόπεδο πρόβλεψη παλινδρόμησης μας δείχνει ότι ένας συνδυασμός FLIP, Sp1 και Sp3 εκτός από την Gleason είναι προγνωστική της αποτυχίας PSA και μη-αποτυχίας. Όταν σχεδιάζουμε τα αποτελέσματα του μοντέλου για την προβλεπόμενη πιθανότητα υποτροπής στον Υ-άξονα και την αλληλεπίδραση των flip-SP3, Gleason Βαθμός (χαμηλή ή υψηλή) επί του Χ-άξονα, μπορούμε να δούμε ξεκάθαρα την επίδραση της αλληλεπίδρασης μεταξύ των δύο δεικτών και η επίδραση της ποιότητας Gleason, καθώς επίσης και η επιρροή του Sp1 σε τρία επίπεδα (συνολική βαθμολογία 0, 3, και 6). Στο Σχήμα 6 Α & amp? Β, όλες οι περιπτώσεις πάνω από το σημείο αποκοπής του 0.45 (διακεκομμένη γραμμή) προβλέπεται να είναι επαναλαμβανόμενο. Με κάθε αύξηση στο σκορ χρώση του SP3, σε συνδυασμό με την αύξηση των FLIP, ο κίνδυνος υποτροπής ανεβαίνει ακόμα και με χαμηλό βαθμό Gleason του 5-7 (3 + 4). Ωστόσο, όταν Gleason βαθμός είναι υψηλός 7 (4 + 3) -9 και Sp1 είναι υψηλή (6), ο κίνδυνος αυξάνει δραματικά. Όταν FLIP είναι 4 (κλίμακα 0-8) και Gleason ποιότητας είναι υψηλή, τόσο Sp3 και Sp1 πρέπει να είναι κοντά στο 0 για μια περίπτωση να είναι μη επαναλαμβανόμενο, αλλά όταν το σκορ SP1 είναι 3, περιπτώσεις με σκορ κτύπημα 4 είναι υποτροπιάζουσα όταν SP3 δεν είναι ≥1 (Σχήμα 6 Α και Β). Αυτό το μοντέλο δείχνει ότι flip, τα επίπεδα SP1 και Sp3 σε συνδυασμό με το βαθμό Gleason μπορεί να είναι ένας καλός προγνωστικός δείκτης του κινδύνου της βιοχημικής υποτροπής μετά από ριζική προστατεκτομή. Το σχήμα 6 δείχνει ότι για μια δεδομένη τιμή της βαθμολογίας Sp3 (ανεξάρτητα από Sp1 βαθμολογίας), την προβλεπόμενη πιθανότητα υποτροπής αυξάνει με την αύξηση της χρώσης FLIP όταν το σκορ Gleason ήταν χαμηλή, γεγονός που υποδηλώνει πιθανή αλληλεπίδραση. Από την άλλη πλευρά, όταν το σκορ Gleason ήταν υψηλή, αν και η προβλεπόμενη πιθανότητα υποτροπής αυξάνεται με χρώση FLIP όταν το σκορ Sp1 ήταν 0 ή 3, όταν το σκορ Sp1 ήταν 6, δεν είδαμε αυτή την αλληλεπίδραση, γεγονός που υποδηλώνει ότι Gleason και Sp3 επαρκούν για την πρόβλεψη υποτροπής (Πίνακας 2).

Τα στοιχεία που παρουσιάζονται σε αυτό το χειρόγραφο δείχνουν τη σημασία του flip /Sp1 /Sp3 υπογραφή για την πρόβλεψη της βιοχημικής υποτροπής σε αυτήν την ομάδα ασθενών. προηγουμένως δημοσιευμένες μελέτες μας απέδειξαν τη σημασία των παραγόντων μεταγραφής Sp1 και Sp3 στη μεταγραφική ρύθμιση του FLIP [13]. Τα σημερινά δεδομένα δείχνουν ότι αυτές οι πρωτεΐνες είναι σημαντικές παίκτες στην υποτροπή του καρκίνου του προστάτη. Περαιτέρω πειράματα χρησιμοποιώντας γονιδιακή σίγηση καρκίνου του προστάτη κυτταρικές γραμμές υποδηλώνουν ότι Sp1 ρυθμίζει φυσιολογικά FLIP (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η έκφραση FLIP ρυθμίζεται θετικά από το SP1 σε καρκινικά κύτταρα και ότι η στόχευση Sp1 /Sp3 /FLIP θα μπορούσε να είναι μια πιθανή οδός για την κλινική διαχείριση των επαναλαμβανόμενων καρκίνου του προστάτη. Είμαστε εικάζουν ότι Sp1 /Sp3 θα μπορούσε να αναστέλλουν τη δράση του FLIP υποκινητή, που οδηγούν στην ενεργοποίηση των αποπτωτικών σηματοδότησης.

Συζήτηση

Η αποτελεσματική κλινική διαχείριση της PCA έχει παρεμποδιστεί από σημαντικές εντός του όγκου ετερογένεια σε συνδυασμό με την ελλιπή κατανόηση των τα μοριακά γεγονότα που συνδέονται με την ανάπτυξη της νόσου και την επακόλουθη υποτροπή παρακάτω παραδοσιακές θεραπείες [18] – [19]. Επομένως, υπάρχει μία ανικανοποίητη ανάγκη για νέες μεθόδους και /ή παράγοντες για τη διαχείριση της PCA. Με δεδομένη την ατομική γενετική ποικιλότητα και την ανομοιογένεια της νόσου, εξατομικευμένες θεραπευτικές προσεγγίσεις είναι ζωτικής σημασίας για την επιτυχή διαχείριση της PCA. Να αναπτυχθούν τέτοιες εξατομικευμένες θεραπευτικές προσεγγίσεις, είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί μια ομάδα βιοδεικτών ή «υπογραφή βιοδεικτών» που θα μπορούσαν να χρησιμοποιούνται για τη διαστρωμάτωση των ασθενών ανάλογα με την ανταπόκριση σε συγκεκριμένες θεραπείες [20] – [21]. Αν και ο έλεγχος του PSA στον ορό που βασίζεται χρησιμοποιείται ευρέως, η PSA έχει τους ακόλουθους περιορισμούς ως βιοδείκτη έγκαιρης ανίχνευσης [20] – [23]: (i) Τα αυξημένα επίπεδα του PSA στον ορό έχουν παρατηρηθεί όχι μόνο στον καρκίνο του προστάτη, αλλά επίσης σε καλοήθη προστατική ασθενείς υπερπλασία, ως εκ τούτου, το PSA δεν είναι ειδικό για τον καρκίνο του προστάτη, και (ii) του PSA δεν είναι αρκετά ευαίσθητη, όπως υποδεικνύεται από τον καρκίνο Δίκη του προστάτη Πρόληψης (PCPT), η οποία κατέδειξε ότι το 15% των ανδρών με επίπεδα PSA του 4 ng /ml είχαν προστάτη καρκίνο και το 15% αυτών των ασθενών είχαν υψηλού βαθμού ασθένεια Gleason. Επιπλέον, δύο τυχαιοποιημένες μελέτες έδειξαν μέτρια επίδραση του ελέγχου PSA στη θνησιμότητα του καρκίνου του προστάτη, γεγονός που υποδηλώνει σημαντικό κίνδυνο αρνητικής βιοψίας και υπερδιάγνωσης και υπερβολική θεραπεία του καρκίνου νωχελικός. Αν και πολυάριθμες δείκτες περιλαμβανομένων α-methyacylCoA-ρακεμάση (AMCAR), συνθετάση λιπαρών οξέων (FASN), ERG, και προστατικό αντιγόνο μεμβράνης ειδικό (PSMA), έχουν ταυτοποιηθεί με βάση την προκλινικές μελέτες και φαίνεται να σχετίζεται με το αποτέλεσμα του καρκίνου του προστάτη μετά τη χειρουργική θεραπεία με τη χρήση δειγμάτων ανθρώπινου ιστού, πολύ λίγα από αυτά έχουν προγνωστική αξία εξαρτάται από την παραδοσιακή προγνωστικούς παράγοντες, όπως σκορ Gleason, παθολογικές στάδιο, και τα επίπεδα προεπεξεργασίας PSA [5] – [6]. Για το καλύτερο της γνώσης μας, δεν υπάρχουν σήμερα ευαίσθητη δείκτες για την παρακολούθηση της υποτροπής της νόσου.

Σε αυτή τη μελέτη αξιολόγησε την έκφραση του αντι-αποπτωτική πρωτεΐνη FLIP και η μεταγραφή παράγοντες Sp1 και SP3, ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση των ιστών δείγματα που ελήφθησαν από 64 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή ως βασική θεραπεία για τον καρκίνο του προστάτη. Πιστεύουμε ότι αυτή είναι η πρώτη έκθεση του FLIP, Sp1, και η έκφραση Sp3 και τη συσχέτιση μεταξύ αυτών των πρωτεϊνών στα βιοχημικά επαναλαμβανόμενα δείγματα PCA. Παρά το γεγονός ότι η αυξημένη έκφραση του SP1, SP3, ή αναστροφή έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των περιπτώσεων αποτυχίας PSA και μη-αποτυχίας, μεμονωμένα δεν είναι ισχυρή προγνωστικοί παράγοντες της κακής κλινικής έκβασης με βάση την AUC όταν αποτυχία PSA χρησιμοποιείται ως υποκατάστατο αποτέλεσμα: την περιοχή κάτω από την ROC καμπύλη για FLIP, Sp1, SP3, και Gleason ως προγνωστικός δείκτης περιπτώσεις αποτυχίας PSA και μη-αποτυχίας ήταν 0,71, 0,66, 0,68 και 0,76 αντίστοιχα. Από την άλλη πλευρά, ο βιοδείκτης υπογραφή του Sp1 /Sp3 /FLIP συνδυασμό με Gleason πέτυχε AUC του 0,93. Τα δεδομένα αυτά δείχνουν την εξαιρετική διάκριση μεταξύ των περιπτώσεων αποτυχίας PSA και μη-αποτυχίας και υποδηλώνουν ότι αυτή η βιοδείκτη υπογραφή είναι ένας σημαντικός προγνωστικός δείκτης της πιθανότητας της βιοχημικής υποτροπής. Αυτό είναι σημαντικό δεδομένου ότι τα τρέχοντα διαγνωστικά διαδικασίες δεν μπορούν να διακρίνουν μεταξύ επιθετικών και κλινικά νωχελικός ασθένεια, με αποτέλεσμα περισσότεροι άνδρες που υποβάλλονται σε θεραπεία για τη νόσο από ό, τι είναι απαραίτητο. τριών γονιδίων υπογραφή μας σε συνδυασμό με το βαθμό Gleason ήταν ακριβής 83% του χρόνου στην ομάδα μας.

Η παρατήρηση ότι Sp1 /Sp3 και flip μπορεί να είναι προάγγελοι της κλινικής έκβασης θα μπορούσε να αντικατοπτρίζει το σημαντικό τους ρόλο στον καρκίνο του προστάτη. Αυξημένα επίπεδα Sp1 /Sp3 /FLIP ενδέχεται να σχετίζονται με αποπτωτικό αντίσταση και την εξέλιξη σε βιοχημική υποτροπή ή εξέλιξη από χαμηλής σε καρκίνο του προστάτη υψηλού κινδύνου. Cellular FLICE-ανασταλτική πρωτεΐνη (c-FLIP) είναι μία συντετμημένη μορφή της κασπάσης-8 που έχει δειχθεί ότι παίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη της αντοχής σε θεραπευτικά σε καρκινικά κύτταρα με αναστολή της απόπτωσης που διαμεσολαβείται από τον υποδοχέα σηματοδότησης θανάτου [24] – [ ,,,0],25]. Κατά συνέπεια, FLIP υπερεκφράζεται σε διάφορους καρκίνους και αυτό υπερέκφραση έχει αποδειχθεί για τον προσδιορισμό θεραπευτικών αντίσταση [26] – [35]. Επιπλέον, η υπερέκφραση του FLIP έχει συσχετιστεί με φτωχή πρόγνωση σε κόλον, ουροδόχο κύστη, και ουροθηλίου καρκίνων [26] – [35]. Πρόσφατες μελέτες από το εργαστήριο μας έδειξαν ότι δείγματα από καρκίνο του προστάτη υψηλής ποιότητας εμφανίζουν υψηλότερη έκφραση του FLIP από εκείνα από όγκους χαμηλής κακοήθειας [13]. Επιπλέον, δείξαμε επίσης ότι FLIP ρυθμίζεται μεταγραφικά μέσω της διαφοροποίησης των παραγόντων μεταγραφής Sp1 και Sp3 και ότι η αναστολή της FLIP εμπόδισε την ανάπτυξη του όγκου του προστάτη σε προκλινικό ζωικό μοντέλο [13]. Sp1 και Sp3 ανήκουν στην οικογένεια Ζη-δάχτυλο του παράγοντες μεταγραφής που έχει δειχθεί ότι ρυθμίζουν την έκφραση γονιδίων που εμπλέκονται σε διάφορες κυτταρικές διαδικασίες, συμπεριλαμβανομένων της ογκογένεσης διαφοροποίησης, της απόπτωσης, κυτταρική μετανάστευση, και την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου [36] – [38]. Sp1 και Sp3 έχουν παρόμοια διαρθρωτικά χαρακτηριστικά συμπεριλαμβανομένης μιας άκρως συντηρημένη περιοχή πρόσδεσης DNA και κατά συνέπεια συνδέονται με το DNA με παρόμοια συγγένεια. Αν και Sp1 είναι ένα γνωστό trans-ενεργοποιητής, λειτουργεί Sp3 τόσο ως ενεργοποιητής και ως καταστολέας ανάλογα με το κυτταρικό περιβάλλον. Αν και οι μελέτες σχετικά με Sp3 και τον καρκίνο λείπουν, τα επίπεδα Sp1 δειχθεί ότι είναι αυξημένα σε μια ευρεία ποικιλία καρκίνων συμπεριλαμβανομένου του μαστού, του θυρεοειδούς, ηπατοκυτταρικό, του παγκρέατος, του παχέος εντέρου, του στομάχου, του πνεύμονα και του καρκίνου [38]. Περαιτέρω, μη φυσιολογικά επίπεδα πρωτεΐνης Sp1 έχουν συσχετιστεί με το στάδιο του καρκίνου και κακή πρόγνωση. Κατά συνέπεια, η αναστολή της SP1 ή knock-down του σε φυσιολογικά κυτταρικά επίπεδα συνήθως μειώνεται σχηματισμό όγκου, την ανάπτυξη και μετάσταση. Είναι αξιοσημείωτο ότι στο παρελθόν έδειξαν ότι Sp1 trans-ενεργοποιεί FLIP σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη, ενώ Sp3 αναστέλλει αυτή την ενεργοποίηση του trans [13]. Με βάση αυτά τα δεδομένα που περιμέναμε να δούμε μια αντίστροφη σχέση μεταξύ Sp1 και Sp3 σε αυτά τα δείγματα. Ωστόσο, η παρατηρούμενη θετική συσχέτιση υποδηλώνει ότι Sp1 και Sp3 έχουν ένα παρόμοιο λειτουργικό ρόλο στο πλαίσιο της μικροπεριβάλλον του όγκου αν και άλλοι παράγοντες, όπως είναι το μικρό μέγεθος του δείγματος, θα μπορούσε επίσης να συμβάλει σε αυτές τις παρατηρήσεις. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η έκφραση FLIP θα μπορούσε να ρυθμίζεται θετικά από Sp1 σε καρκινικά κύτταρα και ότι η στόχευση Sp1 /Sp3 /FLIP θα μπορούσε να είναι ένας πιθανός δρόμος για την κλινική διαχείριση των επαναλαμβανόμενων καρκίνου του προστάτη.

Αυτή είναι η πρώτη έκθεση για να περιγράψει ένα τριών γονιδίων υπογραφή που θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για να αξιολογηθεί κατά πόσο ο καρκίνος του ασθενούς θα επαναληφθεί μετά από μία δεδομένη θεραπεία. Ένα τέτοιο εργαλείο θα έχει σημαντικό αντίκτυπο στην κλινική διαχείριση του καρκίνου του προστάτη. Προηγούμενες μελέτες ανέφεραν ότι AR και pAkt χρώση προβλέπει υποτροπή μετά από προστατεκτομή [17], [39] και είναι πιθανό ότι ο συνδυασμός αυτών των δεικτών με εκείνους της παρούσας μελέτης μπορεί να ενισχύσει περαιτέρω την πρόβλεψη υποτροπής. Μεγαλύτερες παρακολούθηση μελετών, συμπεριλαμβανομένης της επικύρωσης των ευρημάτων αυτών με τη χρήση ανεξάρτητων συνόλων δεδομένων, είναι δικαιολογημένη για να αξιολογήσει τη χρησιμότητα αυτού του βιοδείκτη υπογραφής. Η αναπαραγωγή αυτών των αποτελεσμάτων και η ένταξη όλων των γνωστών προγνωστικών παραγόντων στη μελέτη θα ενισχύσει επίσης το κύρος αυτής της βιοδεικτών υπογραφή, μεμονωμένα και σε συνδυασμό. Εν περιλήψει, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η υπογραφή Sp1 /Sp3 /FLIP σε συνδυασμό με το βαθμό Gleason είναι προγνωστική της υποτροπής του καρκίνου του προστάτη και ότι η κλινική εφαρμογή της θα μπορούσε να αποφευχθεί η άσκοπη επιθετικές παρεμβάσεις, βελτιώνοντας έτσι την ποιότητα ζωής και τη μείωση των δαπανών που συνδέονται με την υγειονομική περίθαλψη.

Μεταγραφική Συνάφεια

Αν και το ειδικό προστατικό αντιγόνο (PSA) χρησιμοποιείται ευρέως για την ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη, υπάρχει μία ανάγκη για ένα βιοδείκτη (ες) που προβλέπει αξιόπιστα υποτροπής του καρκίνου του προστάτη. Έχουμε ήδη εντοπιστεί μεταγραφικών παραγόντων Sp1 και Sp3 ως ρυθμιστές της αντι-αποπτωτική πρωτεΐνη FLIP χρησιμοποιώντας μοντέλα κυτταρικής καλλιέργειας. Μεταγενέστερες μελέτες έδειξαν ότι η αναστολή της ανάπτυξης του όγκου του προστάτη σε ένα προκλινικό ζωικό μοντέλο συνοδευόταν από κάτω ρύθμιση των FLIP και Sp1. Εδώ ερευνήσαμε την πιθανή χρήση αυτών των γονιδίων ως παράγοντες πρόβλεψης για την πρόγνωση του καρκίνου του προστάτη. Εμείς αναδρομική ανάλυση των ιστών από ασθενείς με υποτροπιάζοντα και μη επαναλαμβανόμενες καρκίνο του προστάτη που είχαν υποβληθεί σε ριζική προστατεκτομή ως βασική θεραπεία και παρακολουθήθηκαν για τουλάχιστον 5 χρόνια με μετρήσεις του PSA. Οι περιοχές κάτω από το δέκτη λειτουργεί χαρακτηριστικές καμπύλες για τα επιμέρους δείκτες flip, Sp1, SP3, και Gleason σκορ για την πρόβλεψη της αποτυχίας PSA και μη-αποτυχίας ήταν 0,71, 0,66, 0,68 και 0,76 αντίστοιχα. Αυτό βελτιώθηκε σε 0.93 όταν οι δείκτες συνδυάστηκαν με Gleason και θεωρήθηκαν οι αλληλεπιδράσεις τους. Με βάση αυτές τις αναλύσεις, καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι η «υπογραφή βιοδεικτών» της flip /Sp1 /SP3 είναι δυνατό να προβλέψει την υποτροπή της νόσου και διαστρωμάτωση των ασθενών αναμένεται να επωφεληθούν από πιο επιθετική θεραπεία. Τα αποτελέσματα αυτά παρέχουν επίσης υποστήριξη για τη στόχευση του άξονα Sp1 /Sp3 /FLIP για τη διαχείριση του καρκίνου του προστάτη και απαιτούν περαιτέρω μελέτες χρησιμοποιώντας ένα μεγαλύτερο μέγεθος δείγματος και πρόσθετα σύνολα κλινικά δεδομένα.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Shellye R Lampkin (Τμήμα Παθολογίας) και David R Rodriguez, (Greehy Παιδικό Ινστιτούτο Καρκίνου) στο Πανεπιστήμιο του Τέξας Health Science Center για βοήθεια σχετικά με ανοσοϊστοχημεία και την προετοιμασία μοντέλου γραφημάτων, αντίστοιχα. Σας ευχαριστούμε Donna P Ankerst και Xiaoyu Shi, Τμήμα Ουρολογίας για τις παρατηρήσεις των εμπειρογνωμόνων τους στο χειρόγραφο.