Αφηρημένο

Ιστορικό

Ένα μοντέλο πρωτευόντων πλην του ανθρώπου (ΝΗΡ) της ευαισθησίας στη γλουτένη χρησιμοποιήθηκε για τη μελέτη των διαταραχών του γονιδίου σχετίζεται με διατροφικές αλλαγές γλουτένη στην λεπτού εντέρου ιστούς από ευαισθησία στη γλουτένη ρέζους μακάκοι (

Macaca mulatta

).

Μεθοδολογία

Στάδια της ύφεσης και υποτροπής πραγματοποιήθηκαν σε ζώα ευαισθησία στη γλουτένη με χορήγηση χωρίς γλουτένη (GFD) και περιέχουν γλουτένη (GD) δίαιτες, όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Pin-κεφαλή μεγέθους βιοψίες, που λαμβάνεται με μη επεμβατικό τρόπο με παιδιατρική ενδοσκόπιο από το δωδεκαδάκτυλο, ενώ σε GFD ή GD, χρησιμοποιήθηκαν για την παρασκευή του ολικού RNA και γονίδιο προφίλ, χρησιμοποιώντας το εμπορικό Rhesus μακάκος Microarray (Agilent Technologies), με στόχο την έκφραση πάνω από 20.000 γονίδια .

Κύρια Ευρήματα

Σε σύγκριση με φυσιολογικούς υγιείς ελέγχου, ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι έδειξαν διαφορική γονιδιακή έκφραση που προκαλείται από GD. Ενώ παρατηρούμενες διαταραχές γονίδιο ταξινομήθηκαν σε μία από τις 12 επικαλυπτόμενες κατηγορίες – καρκίνος, το μεταβολισμό, τη λειτουργία του πεπτικού συστήματος, ανοσοαπόκριση, κυτταρική ανάπτυξη, τη μεταγωγή σήματος, αυτοανοσία, αποτοξίνωση ξενοβιοτικών, απόπτωση, απόθεση ακτίνη κολλαγόνου, η νευρωνική και άγνωστης λειτουργίας – αυτή η μελέτη επικεντρώθηκε σε καρκίνο που σχετίζονται με τα δίκτυα γονιδίων, όπως η οικογένεια του κυτοχρώματος P450 (λειτουργία αποτοξίνωση) και μεταλλοπρωτεϊνασών ακτίνης-κολλαγόνου μήτρας (ΜΜΡ) γονίδια.

Συμπεράσματα /Σημασία

Μια απώλεια της λειτουργίας αποτοξίνωσης παράλληλα με ανάγκη να μεταβολίζουν καρκινογόνα αποκαλύφθηκε στη γλουτένη-ευαίσθητα ζώα, ενώ στο GD. Σημειώθηκαν μια αύξηση στον καρκίνο-παράγοντες προαγωγής και μια ταυτόχρονη μείωση στις καρκίνο πρόληψη παράγοντες που συνδέονται με αλλοιωμένη έκφραση του γονιδίου του δικτύου ακτίνης-κολλαγόνου-ΜΜΡ. Επιπλέον, ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι έδειξε μείωση του αριθμού των διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων, συμπεριλαμβανομένων των καρκινο-συναφές αυτά κατά την απόσυρση των διατροφικών γλουτένη. Στο σύνολό τους, τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ενδεχομένως επεκταθεί χρησιμότητα ευαισθησία στη γλουτένη ρέζους μακάκους στην έρευνα για τον καρκίνο

Παράθεση:. Sestak K, L Conroy, Aye PP, Mehra S, Δοξιάδης GG, Kaushal D (2011) Βελτιωμένη ξενοβιοτικών Μεταβολισμός και μειωμένη ευαισθησία στον καρκίνο στην ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι κατά την εισαγωγή ενός δίαιτα χωρίς γλουτένη. PLoS ONE 6 (4): e18648. doi: 10.1371 /journal.pone.0018648

Επιμέλεια: Irina Agoulnik, Διεθνές Πανεπιστήμιο της Φλόριντα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 8η Οκτωβρίου, 2010? Αποδεκτές: 11, Μάρ του 2011? Δημοσιεύθηκε: 12 Απριλίου του 2011

Copyright: © 2011 Sestak et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας χορηγεί R01DK076653 και 3R01DK076653 στην KS και την επιδότηση λειτουργίας βάση της TNPRC RR000164. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ευαισθησία γλουτένη είναι ένα από τα εξέχοντα χαρακτηριστικά της κοιλιοκάκης (CD), η οποία είναι μια αυτοάνοση διαταραχή που χαρακτηρίζεται από κατεστραμμένα επένδυση του λεπτού εντέρου λόγω αποκρίσεις που προκαλούνται από διαιτητικές γλουτένη, ένα σύμπλεγμα πρωτεΐνη που βρίσκεται στο σιτάρι, σίκαλη, και κριθάρι [2]. Μια σειρά από ιστοπαθολογικών εκδηλώσεις έχουν περιγραφεί σε ασθενείς με κοιλιοκάκη και επίσης σε ρέζους μακάκους με ευαίσθητη σε γλουτένη εντεροπάθεια – μια νεοϊδρυθείσα μη ανθρώπινο μοντέλο πρωτευόντων της ευαισθησίας στη γλουτένη [1], [3], [4], [5]. Στους ανθρώπους, Marsh [6], [7] διαιρούμενο CD βλάβες που σχετίζονται, με βάση την σοβαρότητα, σε πέντε κατηγορίες. Σε ρέζους μακάκους, βλάβες που περιγράφεται ότι κυμαίνεται μεταξύ ήπια ενδοεπιθηλιακή και λεμφοκυττάρωση υμένα μέχρι σχεδόν πλήρη ισοπέδωση και σύντηξη των μικρών εντερικών λαχνών, με χρόνια φλεγμονή του αντίστοιχου ίδιο υμένα [1], [5]. Ευαίσθητη σε γλουτένη μοντέλο μακάκος χρησιμοποιήθηκε πρόσφατα για να αποδείξει τις λειτουργικές αλλαγές στην εντερική διαπερατότητα κατά το στάδιο των επιθηλιακών ερείπωση που προκαλούνται από διαιτητικές γλουτένη. Διαπιστώθηκε ότι κατά το στάδιο της ερείπωση, ένα γλουτένη πεπτίδιο προερχόμενο όπως αλφα-2-γλιαδίνης 33-μερές είναι ικανό να διεισδύει κάτω από εντερικού επιθηλίου σε lamina propria, σύμφωνα με τα ευρήματα που περιγράφονται στο celiacs [3], [4], [5], [8]. Διαταραχθεί πρότυπο της εντερικής στενοσυνδέσεων και εναπόθεση των αυτοαντισωμάτων που στοχεύουν το ένζυμο που παίζει ζωτικό ρόλο στην πέψη γλουτένη δηλαδή τρανσγλουταμινάση ιστού 2 (TG2) σε δωδεκαδάκτυλο των μακάκων με γλουτένη εντεροπάθεια, αλλά όχι σε υγιείς ελέγχους παρατηρήθηκε επίσης [5].

Παρά την εκτενή μελέτη των κλινικών, ανοσολογικές και ιστοπαθολογικές ιδιότητες των CD, σχετικά λίγα είναι γνωστά για τις επιπτώσεις της ευαισθησίας στη γλουτένη για άλλες ασθένειες και τις πιθανές σχέσεις τους. Η έλλειψη γνώσης είναι εμφανής όταν προσπαθεί να μελετήσει τους παράγοντες που προκαλούν τη μετάβαση από το ένα στάδιο της νόσου σε ένα άλλο. Υποκείμενη γενετική προδιάθεση, που ξεκίνησε μόνο να διευκρινιστεί σε ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι είναι ένα άλλο σημαντικό στοιχείο αυτής της πολύπλοκης νόσου. Λόγω της αύξησης του αριθμού των κλινικών αναφορών που δείχνουν συσχέτιση μεταξύ CD και εντερικά λεμφώματα Τ κυττάρων, αδενοκαρκινώματα, διαβήτη τύπου 1, Αυτισμός ή σύνδρομο Down [9], [10], [11], [12], [13], [ ,,,0],14], [15], [16], είναι σημαντικό να καθοριστεί αν οι παρατηρήσεις από την παραπάνω μελέτες μπορεί επίσης να αποδειχθεί σε μοριακό επίπεδο. Μια τέτοια έρευνα θα πρέπει να είναι η παροχή νέων οδηγεί για τις υπάρχουσες θεραπείες όχι μόνο CD αλλά και προαναφερθείσες ασθένειες. Προκειμένου να μελετηθούν τα επιλεγμένα δίκτυα γονιδίου σε ευαίσθητη σε γλουτένη πρωτεύοντος ξενιστή, χρησιμοποιήθηκαν μία ποσοτική γενετική τεχνολογία μικροσυστοιχιών και ρέζους μακάκου μοντέλο. Υποτέθηκε ότι διαταραχών σε δίκτυα γονίδιο που σχετίζεται με καρκίνο θα φανεί σε ζώα ευαίσθητη σε γλουτένη στο στάδιο της υποτροπής έναντι στάδιο της ύφεσης. Ελάχιστη έως καμία διαταραχές που προκαλούνται από διατροφικές αλλαγές γλουτένη αναμενόταν σε φυσιολογικά υγιή έλεγχο και στην ευαισθησία στη γλουτένη ζώων στο στάδιο της remission.The πρωταρχικός στόχος ήταν να δείξει ότι με ευαισθησία στη γλουτένη πρωτεύοντα ανταποκριθεί στις διατροφικές αλλαγές γλουτένη από πάνω /κάτω ρύθμιση της επιλεγμένα γονίδια και ότι τέτοιες διαταραχές μπορούν να συνδέονται με αυξημένο κίνδυνο για άλλες ασθένειες όπως ο καρκίνος. Δευτερεύων στόχος ήταν να καθοριστεί εάν απόσυρση των διατροφικών γλουτένη είναι αρκετή για να αναστρέψει αυτές τις αλλαγές.

Αποτελέσματα

Αυξημένα επίπεδα AGA πλάσματος και τα αντισώματα TG2 στην ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι

Απόσυρση των διατροφικών γλουτένη επιλύει σε ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι κλινικές, ιστοπαθολογική καθώς και ανοσολογικές εκδηλώσεις της νόσου, συμπεριλαμβανομένης της μείωσης των αντισωμάτων AGA και TG2 στο πλάσμα [1], [3]. Σε ασθενείς ανθρώπους, σε συνδυασμό παρουσία αντισωμάτων AGA και TG2 θεωρείται ότι είναι μια ιδιαίτερα ακριβή προγνωστικό δείκτη CD [2]. Σε αυτή τη μελέτη, τη μετάβαση από GFD να GD συνοδεύτηκε από σημαντική (p & lt? 0,05) αύξηση τόσο της AGA και αντισώματα TG2 στην ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι (Σχήμα 1). Σε συμφωνία με αυτά και σε προηγούμενες εκθέσεις, η περίοδος GFD με αρχικά επίπεδα της AGA και αντισωμάτων TG2 υποδεικνύεται εδώ ως το στάδιο της ανοσολογικής ύφεσης, ενώ η περίοδος GD με σημαντική αύξηση των AGA και αντισωμάτων TG2, ενδείκνυται ως το στάδιο της ανοσολογικής υποτροπής. Σε φυσιολογικούς υγιείς μακάκους ελέγχου, AGA και TG2 αντισώματα παρέμειναν σε επίπεδα βασικής γραμμής, ανεξάρτητα από τη διαιτητική πρόσληψη γλουτένης.

αποκρίσεις αντισωμάτων στο πλάσμα να γλιαδίνης και TG2 μετρήθηκαν σε τέσσερις ευαισθησία στη γλουτένη (FH45, FB97, DJ68 και DE87) και τέσσερα φυσιολογικούς υγιείς μάρτυρες (HK31, HT24, HD60 και IA24) μακάκους ρέζους κατά το χρόνο της διαγραφής ή /και υποτροπής. Γραφική παράσταση απεικονίζει πτυσσόμενο αυξήσεις των αντισωμάτων κατά τη διάρκεια της βασικής γραμμής κατά την εισαγωγή των διατροφικών γλουτένη. Σημαντική (p & lt? 0,05). Οι αυξήσεις υποδεικνύεται (*)

Η

διαφορική γονιδιακή έκφραση στο δωδεκαδάκτυλο από ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι

Σε σύγκριση με φυσιολογικούς υγιείς ελέγχου, ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι έδειξε μια αύξηση του αριθμού των διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων κατά τη διάρκεια του σταδίου της υποτροπής, ενώ στο GD (Σχήμα 2). Παρά το γεγονός ότι και οι τρεις δοκιμάστηκαν ευαίσθητη σε γλουτένη ζώα έδειξαν ένα μικρότερο αριθμό των διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων κατά τη διάρκεια του σταδίου της διαγραφής, FH45 μακάκος ήταν η μόνη που ομαλοποιήθηκε γονιδιακή έκφραση του κατά τη διάρκεια της θεραπείας GFD σε επίπεδο βασικής γραμμής – συγκρίσιμο με εκείνο ενός υγιούς HK31 ελέγχου (Σχήμα 2). Αυτό δεν ήταν εντελώς απρόσμενη, δεδομένου του χρόνου που απαιτείται για να επιτευχθεί η ύφεση μπορεί να διαφέρουν ουσιωδώς μεταξύ διαφόρων ατόμων, καθώς επηρεάζεται από πολλές φυσιολογικές και γενετικούς παράγοντες [17], [18].

Μια εμπορική rhesus-ειδική συστοιχίας γονιδίων χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί η διαφορική γονιδιακή έκφραση σε οκτώ δωδεκαδάκτυλο δείγματα από τέσσερα επιλεγμένα μακάκους μελέτη: Κανονική υγιή ελέγχου (HK31), andFH45, FB97 και DJ68 γλουτένη ευαίσθητη μακάκοι κατά τα στάδια της ύφεσης και /ή υποτροπής. Οι απόλυτοι αριθμοί των ενόχλησή γονιδίων από ~ 20.000 δοκιμαστεί για κάθε δείγμα που εμφανίζεται.

Η

Κατηγορίες των διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων

Όλα τα γονίδια με διαφορική επίπεδο έκφρασης περαιτέρω διαιρείται σε 12 επικαλυπτόμενες κατηγορίες : 1- καρκίνος, 2- μεταβολισμό, 3- λειτουργία του πεπτικού συστήματος, 4- ανοσοαπόκριση, 5- κυτταρική ανάπτυξη, 6- μεταγωγή σήματος, 7- αυτοανοσία, αλλεργία, 8- αποτοξίνωση ξενοβιοτικών, 9- απόπτωση, 10- δεν γνωστών λειτουργία, 11- ακτίνη κολλαγόνου-ΜΜΡ δίκτυο γονίδιο, και 12- νευρωνική λειτουργία. Τρεις κατηγορίες που υπόκεινται σε πιο προσεκτική εξέταση περιλαμβάνονται: τον καρκίνο, την αποτοξίνωση ξενοβιοτικών και η ακτίνη-κολλαγόνου-MMP δίκτυο γονιδίων. επιλεγμένες κατηγορίες αυτές βασίστηκαν σε άμεση ή έμμεση εμπλοκή τους στην εξέλιξη του καρκίνου ή καταστολή (σχήματα 3 και 4). Δεδομένου ότι τα γονίδια του καρκίνου (κατηγορία 1) εκπροσωπείται από δύο διακριτές υποκατηγορίες δηλαδή καρκίνο προώθηση και τον καρκίνο-καταστολή και οι δύο από αυτές τις υποκατηγορίες που περιέχονται πάνω και κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια, κατηγορίας 1 καταλήξαμε με λιγότερο διακριτό πρότυπο της διαφορικής έκφρασης από την κατηγορία 8 ή 11 (σχήματα 4 και 5). Κατηγορίες 8 και 11 παρουσίασαν προβλέψιμη μορφή της διαφορικής έκφρασης σε όλες τις τρεις ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι: Ενώ γονίδια που είναι υπεύθυνα για την αποτοξίνωση των ξενοβιοτικών ήταν κυρίως κάτω ρυθμισμένα κατά τη διάρκεια της υποτροπής (Σχήματα 3 και 4D, E, F), τα γονίδια ακτίνης-κολλαγόνου-ΜΜΡ δίκτυο ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω (Σχήματα 3 και 4Α, Β, Γ).

Επιλεγμένα τρεις κατηγορίες ενόχλησή γονιδίων στο δωδεκαδάκτυλο της FH45 ευαισθησία στη γλουτένη μακάκος (ομαλοποιηθεί έναντι των φυσιολογικών, υγιών έλεγχο μακάκος HK31), ενώ για τη διατροφή χωρίς γλουτένη . Διαφορετικές αποχρώσεις αντιστοιχούν σε τέσσερις κατηγορίες ενόχλησή γονιδίων. Παρόμοια μοτίβα της γονιδιακής διαταραχής ταυτοποιήθηκαν επίσης σε FB97 και DJ68 ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι (δεν φαίνεται)

Η

1. – Καρκίνος, 2 – μεταβολισμός, 3 – λειτουργία του πεπτικού συστήματος, 4 – ανοσολογική απόκριση, 5 – την ανάπτυξη των κυττάρων, 6 – μεταγωγή σήματος, 7 – αυτοανοσία, αλλεργία, 8 – αποτοξίνωση ξενοβιοτικών, 9 – απόπτωση, 10 – δεν είναι γνωστή λειτουργία, 11 – ακτίνη κολλαγόνο-ΜΜΡ δίκτυο, και 12 – νευρωνική λειτουργία. Οι σχετικές κατανομές πάνω ρυθμισμένα κατηγορίες γονίδιο φαίνεται στο πάνελ Α (FH45), Β (FB97) και C (DJ68), ενώ οι κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια δείχνεται στο πάνελ D (FH45), Ε (FB97) και F (DJ68).

Η

Διαιτητικά επιπτώσεις απόσυρση γλουτένη σχετική κατανομή των ενόχλησή κατηγορίες γονιδίων σε ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι. Σε τρεις επιλεγμένες κατηγορίες [1 (καρκίνος), 8 (αποτοξίνωση ξενοβιοτικών), και 11 (ακτίνης-κολλαγόνου-MMP δικτύου)], οι αλλαγές αυτές περιλάμβαναν μείωση του αριθμού των «καρκίνος-προαγωγής» γεγονότα, όπως ρύθμιση προς τα κάτω της κατηγορίας 8 γονίδια και up-ρύθμιση της κατηγορίας 11 γονίδια. Τα δεδομένα που δημιουργούνται με FB97 και DJ68 μακάκους κατά το στάδιο της ύφεσης και υποτροπής φαίνεται. FH45 μακάκος είχε μόνο λίγες γονίδιο διαταραχές κατά τη φάση της ύφεσης, ενώ σε δίαιτα χωρίς γλουτένη, έτσι σχετικές μετρήσεις γονίδιο δεν αναγράφεται για αυτό το ζώο.

Η

Επιπτώσεις των διατροφικών απόσυρση της γλουτένης στη διαφορική γονιδιακή έκφραση

Αν και υπήρχαν ομοιότητες στη γονιδιακή έκφραση τριών ευαισθησία στη γλουτένη μακάκους κατά το στάδιο της υποτροπής (Σχήμα 4), υπήρχαν επίσης διαφορές στο στάδιο ύφεσης (Σχήμα 5). Η πιο πιθανή εξήγηση για τις διαφορές είναι ότι παρά ότι και οι τρεις ευαισθησία στη γλουτένη ζώα ήταν στην ανοσολογική ύφεση κατά το διάστημα της διαδικασίας βιοψίας, διαφορική γονιδιακή έκφραση των FB97 και DJ68 μακάκους »δεν ήταν ακόμη κατά την έναρξη, παρά τις δαπάνες 10 εβδομάδες σε GFD. Αυτό ήταν περισσότερο εμφανής στην περίπτωση DJ68 ό, τι σε FB97, ενώ η πλήρης βασική γραμμή και δεν παρατηρήθηκαν διαταραχές στην FH45 μακάκος κατά τη διάρκεια του σταδίου διαγραφής ενώ σε GFD (Σχήμα 2). Όπως ήταν αναμενόμενο, η εισαγωγή των διατροφικών γλουτένη οδήγησε σε αύξηση του διαταραγμένο γονιδίων σε τρία δοκιμάστηκαν γλουτένη-ευαίσθητα ζώα με DJ68 είναι η υψηλότερη (Σχήματα 2 και 5).

κυτοχρώματος Ρ450 δίκτυο οικογένεια γονιδίων ρυθμίζεται προς τα κάτω σε γλουτένη ευαίσθητη μακάκοι κατά την εισαγωγή των διατροφικών γλουτένη

με βάση τις παρατηρήσεις με ασθενείς με κοιλιοκάκη οι οποίοι παρουσιάζουν σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του γονιδίου CYP3A4, ένα μέλος της οικογένειας Ρ450, όπως επίσης και μια αυξημένη συχνότητα εμφάνισης αδενοκαρκινώματος και το λέμφωμα του λεπτού εντέρου, είχε προβλέψει ότι ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι θα δείξει προς τα κάτω ρύθμιση της οικογένειας γονιδίων Ρ450, ενώ στο GD. Είχαν αναμένεται να έχουν σχετικά φυσιολογική έκφραση αυτών των γονιδίων, ενώ σε GFD. Διαφορική έκφραση του δικτύου γονιδίου Ρ450 σε όλες τις τρεις ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι ακολούθησε παραπάνω πρόβλεψη. Το δίκτυο γονίδιο Ρ450 του FH45 ζώο παρουσιάζεται για λόγους επεξήγησης (Εικόνα 6): Έξι από επτά διαταραγμένο γονιδίων στο δίκτυο Ρ450 ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω κατά το στάδιο της υποτροπής σε αντίθεση με μόνο δύο κατά το στάδιο της διαγραφής. Το γεγονός ότι ένα (CYP4B1) γονίδιο ήταν ρυθμισμένη σε FH45 κατά το στάδιο της υποτροπής απεικονίζει την πολύπλοκη σχέση μεταξύ των παραγόντων που σχετίζονται με την ευαισθησία στη γλουτένη. Από CYP4B1 μεταβολίζει καρκινογόνες ουσίες, η λειτουργία του είναι ιδιαίτερα σημαντική για την παρουσία πολλαπλών παραγόντων καρκίνο προώθηση.

Εισαγωγή των διατροφικών γλουτένη (υποτροπή στάδιο) ρυθμίζει προς τα κάτω αρκετά από τα γονίδια στο δίκτυο P450, ενώ τα διαιτητικά απόσυρση γλουτένη (ύφεση στάδιο) ομαλοποιεί την έκφραση της προς επίπεδο βασικής γραμμής: έκφραση σε FH45 ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκος δείχνει 5 από τις 6 διαταράσσονται γονιδίων που περισσότερο κάτω ρυθμισμένα κατά το στάδιο υποτροπή από ό, τι κατά τη διάρκεια του σταδίου διαγραφής. Κόκκινο σημαίνει πάνω ρύθμιση ενός γονιδίου, ενώ το πράσινο υποδηλώνει κάτω ρύθμιση, με το πρότυπο επίπεδο έκφρασης προσδιορίζεται από HK31 φυσιολογικούς υγιείς μακάκους ελέγχου. Ένταση του χρώματος αντιπροσωπεύει το μέγεθος της αλλαγής στην έκφραση. Οι συνεχείς γραμμές σημαίνουν ότι το πρωτεϊνικό προϊόν του γονιδίου επηρεάζει άμεσα τα επίπεδα της πρωτεΐνης του γονιδίου-στόχου, ενώ διακεκομμένες γραμμές σημαίνουν ότι το πρωτεϊνικό προϊόν του γονιδίου μεταβάλλει έμμεσα τα επίπεδα της πρωτεΐνης του γονιδίου στόχου μέσω της συμμετοχής ενός ενδιάμεσου γονιδίου.

Η

δίκτυο γονίδιο ακτίνης-κολλαγόνου-ΜΜΡ εκφράζεται διαφορικά σε ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι κατά την εισαγωγή των διαιτητικών

γλουτένη

το δίκτυο αυτό ρυθμίζει την έκφραση ακτίνης και του κολλαγόνου που είναι σημαντικά για τη διαδικασία επούλωσης της πληγής και σχηματισμό ουλώδους ιστού. Μια προς τα άνω ρύθμιση αυτών των γονιδίων αναμενόταν ως πιθανός μηχανισμός αντισταθμιστικής την αποκατάσταση των ζημιών των ιστών που προκαλείται από τη χρόνια φλεγμονώδη διαδικασία ή /και αυτοάνοσες αντίδραση στο λεπτό έντερο. Παρόλο FH45 και DJ68 ευαίσθητη σε γλουτένη ζώα έδειξαν αρκετά από αυτά τα γονίδια είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω κατά το στάδιο της υποτροπής (δεν φαίνεται), η διαφορά με το στάδιο της διαγραφής δεν ήταν τόσο εμφανή όπως ήταν στην περίπτωση του FB97 όπου σχεδόν το σύνολο του δικτύου διαταράχθηκε κατά το στάδιο της υποτροπής (Σχήμα 7). Ενώ η έκφραση ακτίνης και διαφορική γονιδιακή κολλαγόνου ήταν σύμφωνη με την αναμενόμενη ανοδική ρύθμιση ή /και το σχηματισμό ουλώδους ιστού, τα δύο βασικά μεταλλοπρωτεϊνάσες μήτρας ΜΜΡ3 και MMP9 ήταν κάτω-ρυθμίζονται, σε αντίθεση με την παραπάνω «σχηματισμό ουλώδους ιστού» υπόθεση.

Εισαγωγή των διατροφικών γλουτένη (υποτροπή στάδιο) up-ρυθμίζει περισσότερα από τα γονίδια ακτίνης και του κολλαγόνου ενώ ΜΜΡ3 και ΜΜΡ9 είναι ρυθμισμένα προς τα κάτω. Τα δεδομένα που δημιουργούνται με FB97 ευαισθησία στη γλουτένη μακάκος κατά το στάδιο της ύφεσης και υποτροπής φαίνεται. Κόκκινο σημαίνει πάνω ρύθμιση ενός γονιδίου, ενώ το πράσινο υποδηλώνει κάτω ρύθμιση, με το πρότυπο επίπεδο έκφρασης προσδιορίζεται από HK31 φυσιολογικούς υγιείς μακάκους ελέγχου. Ένταση του χρώματος αντιπροσωπεύει το μέγεθος της αλλαγής στην έκφραση. Οι συνεχείς γραμμές σημαίνουν ότι το πρωτεϊνικό προϊόν του γονιδίου επηρεάζει άμεσα τα επίπεδα της πρωτεΐνης του γονιδίου-στόχου, όπου ως διακεκομμένες γραμμές σημαίνουν ότι το πρωτεϊνικό προϊόν του γονιδίου μεταβάλλει έμμεσα τα επίπεδα της πρωτεΐνης του γονιδίου στόχου μέσω της συμμετοχής ενός ενδιάμεσου γονιδίου.

Η

αρκετές ασθένειες που σχετίζονται ομάδες γονίδιο εκφράζονται διαφορικά σε ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι

Εκτός από 12 κατηγορίες διαταραγμένο γονίδια που προσδιορίζονται στην παρούσα μελέτη σε ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι (Σχήμα 4), ήταν ενδιαφέρον για την ταυτοποίηση γονιδίων που θα συνδέσει αυτή την κατάσταση με άλλες ασθένειες από τον καρκίνο, όπως αναφέρεται όλο και περισσότερο σε κλινικές μελέτες στις οποίες συμμετείχαν ασθενείς πάσχοντες από κοιλιοκάκη [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16] . Και οι τρεις δοκιμάστηκαν ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι έδειξαν διαφορική έκφραση αρκετών γονιδίων που θα μπορούσαν να συνδέονται όχι μόνο με CD, αλλά και με τον αυτισμό, τροφική αλλεργία, το σύνδρομο Down, Νόσου Alzheimer, ρευματοειδή αρθρίτιδα, νόσο του Parkinson και μυϊκής δυστροφίας (Σχήμα 8). Παρά το γεγονός ότι η σημασία αυτών των ευρημάτων πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω, παρέχει δυνητικά νέα κατεύθυνση για τη μελλοντική έρευνα σχετικά με την ανάπτυξη των μη ανθρώπινων πρωτευόντων μοντέλα της παραπάνω ασθένειες.

Επιλεγμένες κατηγορίες (Α. Κοιλιοκάκη, β. Γενική γλουτένη ευαισθησία ή φλεγμονή και γ. άλλες ασθένειες) του ρυθμίζεται αυξητικά γονίδια στο δωδεκαδάκτυλο του DJ68 και FB97 ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι (ομαλοποιηθεί έναντι των φυσιολογικών, υγιών έλεγχο μακάκος HK31), ενώ για τη διατροφή που περιέχουν γλουτένη. Διαφορετικές αποχρώσεις αντιστοιχούν σε διαφορετικές κατηγορίες ενόχλησή γονιδίων.

aTGM2 = ιστικής τρανσγλουταμινάσης 2 λειτουργεί ως αυτοαντιγόνο κοιλιοκάκη?

bIL17B = IL-17 κυτοκίνης αναφέρθηκαν να παράγονται σε celiacs αλλά όχι σε άλλους ασθενείς με ευαισθησία στη γλουτένη?

cMICB = NKG2D συνδέτη πρότεινε να μεσολαβήσει η μετατροπή του ΤΟΡ-εξαρτώμενη CD8 + CTLs με ΤΟΚ-ανεξάρτητο (ΝΚ-όπως) IELs τελεστή σε ασθενείς με κοιλιοκάκη?

dIFNg = ιντερφερόνη γάμμα παράγονται από τα Τ κύτταρα και προάγει γλουτένη πεπτίδιο ροή κατά μήκος του εντερικού επιθηλίου?

eITGAE δηλαδή CD103 αντιγόνο προτάθηκε να μεσολαβήσει η κοιλιοκάκη ειδικά αυτοάνοση αντίδραση στο λεπτό έντερο.

Η

Mamu II

σύνθεση ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι

Παρά το γεγονός ότι και οι τέσσερις ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι εκχωρηθεί για αυτή τη μελέτη είχαν αντισώματα κατά το στάδιο της υποτροπής όχι μόνο κατά της γλιαδίνης αλλά και TG2 (αυτοαντιγόνο), τους

Mamu II

(

DQA1

,

DQB1

και

σύνθεση DRB

) αλληλόμορφο αποδείχθηκε ότι δεν είναι ομοιόμορφη (Πίνακας 1). Αυτό ενδεχομένως να υποδηλώνει ότι η ευαισθησία στη γλουτένη είναι σε ρέζους μακάκους, είτε α) που συνδέονται με περισσότερα από ένα

MHC II

αλληλόμορφο λόγω της μεγαλύτερης ποικιλομορφίας και ένα ευρύτερο ρεπερτόριο

Mamu II

από

HLA II

[19], [20] ή β) γλουτένη ευαισθησία σε μακάκους που δεν είναι γενετικά που συνδέονται με το

Mamu II

. Πρόσθετες μελέτες βρίσκονται σε εξέλιξη με μεγαλύτερο αριθμό ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι να διευκρινιστεί αυτό το θέμα.

Η

Συζήτηση

Ένα ρέζους μακάκους μοντέλο ευαισθησία στη γλουτένη χρησιμοποιήθηκε για να μελετήσει τις εκφράσεις διαφορική γονιδιακή που προκαλείται από GD. Επιπλέον, εξετάστηκε η πιθανή σχέση μεταξύ της ευαισθησίας στη γλουτένη και του καρκίνου. Παρά το γεγονός ότι υπάρχει αύξηση του αριθμού των κλινικών αναφορών που υποδηλώνει τέτοια σχέση σε ασθενείς με κοιλιοκάκη, οι μελέτες που επικεντρώνονται στις μοριακών μηχανισμών που συνδέουν αυτές τις συνθήκες είναι απούσα. Όπως περιγράφεται σε προηγούμενες εκθέσεις, η χορήγηση της GFD ή GD στη γλουτένη ευαίσθητη ρέζους μακάκους συνδέεται με την απουσία ή την παρουσία της σειράς της κλινικής, ιστοπαθολογικές, μεταβολικές και ανοσολογικές συμπτώματα, που συλλογικά αναφέρονται ως στάδια της ύφεσης ή υποτροπής, αντίστοιχα [1] , [3], [4], [5]. Σύμφωνα με πρόσφατη μελέτη, ευαίσθητη σε γλουτένη και ελέγχου μακάκων μας επιλέχθηκαν από την μεγαλύτερη κλάση των 500 υποψήφιων ζώων βασίζεται στην παρουσία των AGA πλάσματος και τα αντισώματα TG2 [5]. Από συνδυασμένη παρουσία της AGA και αντισωμάτων TG2 θεωρείται σε ανθρώπους ασθενείς ως ιδιαίτερα αξιόπιστος προγνωστικός δείκτης CD [2], [21], είναι σημαντικό να τονίσουμε ότι και οι τέσσερις ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι σε αυτή τη μελέτη είχαν και τα δύο αντισώματα AGA και TG2. Σε αντίθεση με τις προηγούμενες εργασίες μας [1], [5], ιστοπαθολογικές ενδείξεις δεν χρησιμοποιήθηκαν ως προγνωστικοί παράγοντες της ευαισθησίας στη γλουτένη, δεδομένου βλάβη του βλεννογόνου δεν ήταν το αντικείμενο της παρούσας μελέτης.

Δεδομένου ότι υπάρχει μια αυξανόμενη στοιχεία που υποδηλώνουν συσχέτιση μεταξύ του CD, του εντέρου καρκίνων και άλλων ασθενειών, που εκμεταλλεύτηκε την ρέζους μοντέλο μακάκος της ευαισθησίας στη γλουτένη να διευκρινίσει α) αν η σχέση μπορεί να εντοπιστεί στο επίπεδο της γονιδιακής έκφρασης, και Β) αν οι αλλαγές στις διατροφικές επίδραση της πρόσληψης γλουτένης επιλεγμένη γονιδιακή έκφραση. Προς το σκοπό αυτό, χρησιμοποιήσαμε κυρίως μια rhesus-ειδική μικροσυστοιχιών μπορούν να μετρήσουν την έκφραση πάνω από 20.000 γονιδίων σε ένα δείγμα ιστού. Διαφορικά ενόχλησή γονίδια ταξινομήθηκαν σε 12 επικαλυπτόμενες κατηγορίες μεταξύ των οποίων τρεις κύριες κατηγορίες ενδιαφέροντος: καρκίνος, η λειτουργία αποτοξίνωση, και τα γονίδια ακτίνης-κολλαγόνου-ΜΜΡ. Επιπλέον, διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων που είχαν προηγουμένως αναφερθεί ότι συνδέεται με διάφορες άλλες ασθένειες εντοπίστηκαν επίσης (Σχήμα 8).

Η εντερική γονίδια του κυτοχρώματος Ρ450 CYP3A4 όπως συμμετέχουν στο μεταβολισμό των ξενοβιοτικών να μειωθούν οι δυσμενείς επιπτώσεις τους. Ωστόσο, η έκφραση του CYP3A4 σε ασθενείς με κοιλιακή νόσο μειώνεται σημαντικά σε σύγκριση με υγιείς ενήλικες [22], [23]. Επιπλέον, οι ασθενείς CD εμφανίζουν αυξημένη συχνότητα εμφάνισης των εντερικών κυττάρων Τ λεμφώματος και αδενοκαρκίνωμα [17], [18]. Ως εκ τούτου, τα μειωμένα επίπεδα κυτοχρωμάτων Ρ450 μπορεί να αυξήσει τη βιοδιαθεσιμότητα των ξενοβιοτικών σε celiacs, αυξάνοντας έτσι τη συχνότητα εμφάνισης ξενοβιοτικών που προκαλείται εξέλιξης του καρκίνου. Προκειμένου να προσδιοριστεί εάν παραπάνω υπόθεση μπορεί να εξετασθεί σε μελέτες με ευαίσθητη σε γλουτένη ρέζους μακάκους, η έκφραση των γονιδίων του κυτοχρώματος Ρ450 μαζί με άλλα γονίδια «καρκίνος που σχετίζεται με» μετρήθηκε σε δωδεκαδάκτυλο βιοψίες ελήφθησαν στα στάδια της ύφεσης και υποτροπής. Προβλέφθηκε ότι η έλλειψη της έκφρασης του γονιδίου Ρ450 κυτοχρώματα αντιστρέφεται με απόσυρση των διατροφικών γλουτένη – τοποθετώντας τους ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι επί GFD. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης δείχνουν καθαρά ότι κάτω ρύθμιση δικτύου γονιδίου του κυτοχρώματος Ρ450 εμφανίζεται σε ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι ενώ σε GD. Παρατηρήθηκε επίσης ότι οι εν λόγω προς τα κάτω ρύθμιση βελτιώνεται με κατεργασία GFD αν και πλήρη αντιστροφή σε επίπεδο συγκρίσιμο με φυσιολογικό υγιές άτομο επιτεύχθηκε μόνο σε ένα από τα τρία ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι δοκιμαστεί από μικροσυστοιχίες. Είναι εύλογο από δημιουργούνται αποτελέσματα ότι αν οι ευαισθησία στη γλουτένη μακάκοι θα διατηρούνται σε GFD για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα, υπόλοιπα δύο ζώα θα συνεχίσει την αντιστροφή του κυτοχρώματος P450 ρύθμιση προς τα κάτω. Το δίκτυο γονίδιο του κυτοχρώματος Ρ450 κάτω ρύθμιση έγινε παράλληλα με τη συνολική πάνω ρύθμιση του δικτύου γονιδίου ακτίνης-κολλαγόνου-ΜΜΡ. Σύμφωνα με τα ευρήματά μας, αναφέρθηκε ότι πάνω ρύθμιση της ακτίνης και του κολλαγόνου με ταυτόχρονη ρύθμιση προς τα κάτω του ΜΜΡ3 και ΜΜΡ9 εμφανίζεται ως μέτρο για την πρόληψη του σχηματισμού καρκίνου σε πειραματικά ποντίκια με αγωγή [24]. Δεδομένου ότι αυτό παρατηρήθηκε σε FB97 μακάκος διάρκεια υποτροπής, είναι πιθανό ότι η γονιδιακή διαταραχές του δικτύου ακτίνης κολλαγόνου-ΜΜΡ είναι ενδεικτικά μιας προστατευτικής έμφυτης απόκρισης ενάντια εισβολή καρκίνου σε τουλάχιστον μερικά από τα ευαισθησία στη γλουτένη πρωτεύοντα (Σχήματα 3 και 7).

Παρά τα προβλέψιμα μοτίβα της διαφορικής έκφρασης γονιδίων στην προαναφερθείσα κατηγορία 8 (αποτοξίνωση) και 11 γονίδια (ακτίνης-κολλαγόνου-MMP), κατηγορίας 1 (καρκίνος) δεν ακολούθησε τέτοιο σχέδιο, λόγω της υψηλής πολυπλοκότητας των αλληλεπιδράσεων γονιδίων σε αυτή την κατηγορία, με πολλαπλά γονίδια του καρκίνου, την προώθηση και την -suppressing επηρεάζονται ταυτόχρονα από διατροφικές αλλαγές γλουτένη. Σε συνδυασμό με την κατηγορία 8 και 11 τα αποτελέσματα της γονιδιακής έκφρασης, ωστόσο, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η υποτροπή στάδιο της ευαισθησίας στη γλουτένη σε ρέζους μακάκους είναι ευνοϊκό για την ογκογένεση και μπορεί να αντιστραφεί εν μέρει από την απόσυρση των διατροφικών γλουτένη.

Πολλά ερωτήματα παραμένουν . Μερικά από αυτά είναι λόγω της ατελούς γνώσης μας αν τα αλληλόμορφα μακάκους ρέζους κατηγορίας II που σχετίζεται με την ευαισθησία στη γλουτένη με έναν τρόπο ανάλογο με ανθρώπους ασθενείς με κοιλιοκάκη δηλαδή

DQ2 /8

αλληλόμορφα [2], [18], [25] , [26]. σημερινό μοντέλο μας μπορεί να αναφέρεται μόνο ως «ευαισθησία στη γλουτένη» μοντέλο, έχοντας κατά νου ότι υπάρχουν τουλάχιστον δύο κατηγορίες ευαισθησία στη γλουτένη σε πρωτεύοντα θηλαστικά: το πρώτο από τα οποία είναι

Mamu II

εξαρτώμενη (CD-όπως), ενώ δεύτερο είναι

Mamu II

ανεξάρτητη από (τροφίμων αλλεργία-όπως). Τα αποτελέσματά μας που αφορούν την γενετική ανάλυση των 50+ ρέζους μακάκους με και χωρίς ευαισθησία στη γλουτένη δείχνουν ότι

Mamu II

-associated προδιάθεση για την πάθηση αυτή υπάρχει σε πιθήκους ρέζους [Sestak et al., αδημοσίευτα]. Σχετικά υψηλές διακύμανση απόκλιση διανομή γονιδίου σε αυτή τη μελέτη θα μπορούσε έτσι να εξηγηθεί από διαφορετικές

υπόβαθρα Mamu II

σε επιλεγμένα ζώα ευαίσθητη σε γλουτένη (Πίνακας 1). Προκειμένου να βελτιωθεί η rhesus μοντέλο της ευαισθησίας στη γλουτένη και για να καταστεί πιο σχετική ως CD μοντέλο, την επιλογή των ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι θα πρέπει να διεξάγονται στο μέλλον και στο πλαίσιο του

MamuII

προκαταρκτικό έλεγχο . Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η CD, τροφική αλλεργία και άλλα γονίδια κατάσταση που σχετίζεται με τη νόσο συμπεριλαμβανομένων εκείνων που σχετίζονται με τον καρκίνο εκφράζονται διαφορικά σε γλουτένη ευαίσθητη μακάκοι. Τέλος, τα αποτελέσματα που αναφέρονται εδώ δείχνουν ότι οι παραπάνω διαταραχές γονίδιο που βελτιώνεται ακόμη και καταργήθηκε με διαιτητική ανάκληση γλουτένη. Αυτά τα αποτελέσματα μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βάση για μελλοντικές μελέτες που αποσκοπούν στην αποσαφήνιση της σχέσης μεταξύ του CD και του καρκίνου.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Έγκριση για όλες τις κτηνιατρικές διαδικασίες η μελέτη αυτή είχε ληφθεί από το Πανεπιστήμιο Tulane Animal Care και της Επιτροπής Χρήση (πρωτόκολλο # 3508), την Ευημερία των ζώων Διασφάλισης Α-4499-01. Τα ζώα σε αυτό το έργο ήταν υπό την πλήρη φροντίδα των κτηνιάτρων του Εθνικού Κέντρου Έρευνας Πρωτευόντων Tulane, σύμφωνα με τα πρότυπα που ενσωματώνονται στον Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου (ΝΙΗ) 78-23 (Αναθεωρημένο 1996). Όλες οι κτηνιατρικές διαδικασίες εκτελούνται μόνο με ναρκωμένος ζώα. καλή διαβίωση των ζώων και ελήφθησαν μέτρα για τη βελτίωση ταλαιπωρία, σύμφωνα με τις συστάσεις της έκθεσης Weatherall.

Ζώα και δίαιτες

Τέσσερις ευαισθησία στη γλουτένη (FH45, DJ68, DE87 και FB97) και τέσσερις κανονικές , υγιή ελέγχου (HK31, HT24, HD60 και IA24) ρέζους μακάκους (

Macaca mulatta

) του Ινδικού υποείδη, 2-9 ετών, ρετροϊό πιθήκου-free, ανεξαρτήτως φύλου χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Από επικράτηση της ευαισθησίας στη γλουτένη σε μακάκους είναι παρόμοια με εκείνη των ανθρώπων, επελέγησαν ευαίσθητη σε γλουτένη ζώων από την μεγαλύτερη ομάδα των 500 υποψηφίων, όπως περιγράφεται λεπτομερώς αλλού [5]. Ευαίσθητη σε γλουτένη μακάκοι είχαν διακριθεί από την κανονική, υγιή από την παρουσία αμφοτέρων των αντι-γλιαδίνης (AGA) και τρανσγλουταμινάση αντι-ιστού 2 (TG2) αντισωμάτων ορού. Όλα τα ζώα ευαισθησία στη γλουτένη κρατήθηκαν τουλάχιστον 10 εβδομάδες δίαιτα ελεύθερη γλουτένης (GFD), ακολουθούμενη από 10 εβδομάδες τακτικής, που περιέχουν γλουτένη chow (GD) (ΡΜΙ Nutrition Intl., St. Louis, ΜΟ), για να επιτευχθεί η στάδιο της ύφεσης και υποτροπής. Η μετάβαση της GFD να GD χαρακτηρίζεται από σημαντική (p & lt? 0,05) αύξηση της AGA και αντισωμάτων ορού αντι-TG2 πάνω από τη βασική γραμμή (Σχήμα 1). Στην περίπτωση της κανονικής υγιή ζώα ελέγχου, τα επίπεδα αντισωμάτων ήταν πάντα στην αρχική τιμή, ανεξαρτήτως της διαιτητικής πρόσληψης γλουτένης.

λεπτό έντερο και δείγμα περιφερικού αίματος συλλογή

Δύο ml περιφερικού αίματος συλλέχθηκαν κατά το στάδιο της διαγραφή ή /και υποτροπής από όλα τα ζώα, όπως περιγράφεται [5]. Επιπλέον, δείγμα του άπω δωδεκαδάκτυλου (πέντε pin-κεφαλή μεγέθους βιοψίες) συλλέχθηκε στο στάδιο της ύφεσης και υποτροπής από τρία ζώα ευαισθησία στη γλουτένη με υψηλότερο επίπεδο αύξησης αντισώματος (Σχήμα 1) με παιδιατρικό ενδοσκόπιο όπως περιγράφεται [5]. Στην περίπτωση των υγιών ζώων ελέγχου (HK31), διαδικασία ενδοσκόπηση πραγματοποιήθηκε επίσης δύο φορές παράλληλα με τις διαδικασίες που πραγματοποιήθηκαν σε ζώα ευαισθησία στη γλουτένη, παρά ότι δεν στάδιο υποτροπή χαρακτηρίζεται από σημαντική αύξηση των αντισωμάτων ήταν παρούσα σε HK31 σε συνδυασμό με την εισαγωγή των διατροφικών γλουτένη (Εικόνα 1 ). Όλα συλλέγονται δείγματα βιοψίας τοποθετήθηκαν αμέσως σε πέντε ml από RNA-αργότερα διάλυμα (Qiagen, Valencia, CA) για τη διατήρηση του RNA. Αίμα υπέστη επεξεργασία για την εκχύλιση του πλάσματος, το οποίο αποθηκεύτηκε στους -20 ° C και δοκιμάστηκαν με έμμεση ELISA για την παρουσία αντι-γλιαδίνης και αντι-TG2 αντισωμάτων [1].

απομόνωση RNA, σύνθεση cDNA

Ολικό RNA εξήχθη από τις εντερικές βιοψίες χρησιμοποιώντας το Qiagen’sRNeasy συν μικρο kit, ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μία βιοψία pin-head-μεγέθους από τους πέντε που συλλέχθηκε ήταν επαρκής για την απομόνωση της απαιτούμενης ποσότητας RNA χρησιμοποιώντας το φασματοφωτόμετρο RNeasy kit.NanoDrop (Thermo Scientific, Wilmington, DE) χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση της συγκέντρωσης του RNA και την καθαρότητα. Ολικό RNA χρησιμοποιείται για την εκτέλεση της επισήμανσης σύνθεση cDNA και βαφή κυανίνης όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27], με τη χρήση της Agilent χαμηλό RNA εισόδου Γραμμική Kit Amplification-επισήμανση (LRILAK). Το επισημασμένο cDNA χρησιμοποιήθηκε για να εκτελέσει τη διάρκεια της νύχτας υβριδοποίηση σε ρέζους μακάκους ολόκληρο το γονιδίωμα μικροσυστοιχιών Agilent, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή [28].

διαδικασία Microarray και γονιδιακή έκφραση

Ένα εμπορικά διαθέσιμο ολιγονουκλεοτίδιο ρέζους μακάκους ολόκληρο γονιδίωμα μικροσυστοιχιών περιλαμβάνει ~ 20.000 γονιδίων-στόχων (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) χρησιμοποιήθηκε. Συστοιχίες τυπώθηκαν με τη χρήση του 4 × 44 format k (Agilent Technologies). Τα πλακίδια πλύθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και στη συνέχεια απεικονίζονται χρησιμοποιώντας το Pro 6.1 λογισμικό GenePix. Ατομικές μετρήσεις καταγράφηκαν σε τουλάχιστον δύο αντίγραφα. Η προκύπτουσα.

gal

αρχεία αναλύθηκαν από SpotfireDecisionSite, μονάδα Microarray Analysis (TIBCO Spotfire-Βοστώνης ΜΑ) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28]. Μετά την απομάκρυνση των αναξιόπιστων κηλίδων, τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Επιτόπου σταθμισμένων εξομάλυνση διαγράμματος διασποράς (Lowess) αλγόριθμος και οι προκύπτουσες αναλογίες της αλλαγής σε γονιδιακή έκφραση συλλαμβάνεται σε ένα λογάριθμο σε δύο κλίμακα [28]. Κάθε σύνολο των διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων που περιέχονται τόσο «επάνω ρυθμισμένη» και «κάτω-ρυθμίζονται» αυτοί.