Αφηρημένο

Hook πρωτεΐνη μικροσωληνίσκων-πρόσδεση 3 (HOOK3) είναι μια πρωτεΐνη προσαρμογέα για μικροσωληνίσκων που εξαρτώνται από ενδοκυτταρικά κυστίδια και διακίνησης των πρωτεϊνών. Για να αξιολογηθεί ο ρόλος του HOOK3 στον καρκίνο του προστάτη αναλύσαμε την έκφραση HOOK3 με ανοσοϊστοχημεία σε TMA που περιέχει περισσότερο από 12.400 καρκίνοι του προστάτη. Τα αποτελέσματα συγκρίθηκαν με φαινότυπο του όγκου και υποτροπή του PSA, καθώς και εκτροπές, ενδεχομένως, τον καθορισμό των σχετικών μοριακών υποτύπους όπως η κατάσταση ERG και τις διαγραφές των 3p13, 5q21, 6q15 και PTEN. HOOK3 ανοσοχρώση ήταν αρνητική σε φυσιολογικά αυλού κύτταρα του επιθηλίου του προστάτη, ενώ 53,3% των 10.572 ερμηνεύσιμη καρκίνων έδειξαν έκφραση HOOK3, η οποία θεωρήθηκε χαμηλή σε 36,4% και υψηλή σε 16,9% των περιπτώσεων. έκφραση HOOK3 υψηλού επιπέδου συνδέθηκε με προχωρημένο στάδιο του όγκου, υψηλή βαθμολογία Gleason, υψηλό δείκτη πολλαπλασιασμού, θετικό στάδιο λεμφαδένες, και την επανάληψη του PSA (p & lt? 0,0001 η κάθε μία). Η προγνωστική ρόλος της έκφρασης HOOK3 ήταν ανεξάρτητη των καθιερωμένων κλινικο-παθολογικών παραμέτρων τόσο στην προεγχειρητική και μετεγχειρητική ρυθμίσεις. Συγκρίσεις με μοριακά χαρακτηριστικά πραγματοποιήθηκαν για να εξαχθούν συμπεράσματα σχετικά με την ενδεχόμενη λειτουργία του HOOK3 στον προστάτη. Μια ισχυρή συσχέτιση με όλες τις εξετασθεί διαγραφές είναι συνεπής με τον ρόλο της για τη διατήρηση της HOOK3 γονιδιωματική ακεραιότητα συμβάλλοντας στην ορθή κεντροσωμάτων συναρμολόγηση. Η εύρεση HOOK3 έκφραση στο 74% της ERG θετικό, αλλά μόνο το 38% της ERG αρνητικών καρκίνων (p & lt? 0.0001) προτείνει περαιτέρω λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ αυτών των γονιδίων. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα της μελέτης μας προσδιορίσει HOOK3 ως ισχυρό υποψήφιο προγνωστικό δείκτη με μια πιθανή ρόλο στη διατήρηση της γονιδιωματικής ακεραιότητας στον καρκίνο του προστάτη, η οποία μπορεί να έχει δυνατότητες για ένταξη στην κλινική αναλύσεις ρουτίνας

Παράθεση:. Μέλιν Ν, Harutyunyan L, Hube-Magg C, Kluth Μ, Simon R, Lebok P, et al. (2015) Υψηλού Επιπέδου HOOK3 έκφρασης αποτελεί ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα της κακή πρόγνωση των συνδεδεμένων με γενετική αστάθεια στον καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 10 (7): e0134614. doi: 10.1371 /journal.pone.0134614

Επιμέλεια: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, ΑΥΣΤΡΙΑ

Ελήφθη: 28η Απριλίου, 2015? Αποδεκτές: 10 Ιουλ 2015? Δημοσιεύθηκε: 31 Ιουλίου 2015

Copyright: © 2015 Μέλιν et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι η πιο διαδεδομένη μορφή καρκίνου στους άνδρες στις δυτικές κοινωνίες [1]. Ενώ οι περισσότεροι όγκοι έχουν μια μάλλον νωχελικός κλινική πορεία, ο καρκίνος του προστάτη εξακολουθεί να αποτελεί την τρίτη συχνότερη αιτία θανάτου που σχετίζονται με τον καρκίνο στους άνδρες. Ιδρύθηκε προγνωστικές παράμετροι είναι Gleason βαθμό, την έκταση του όγκου επί βιοψίες, προεγχειρητική ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA), και κλινικό στάδιο. Παρά το γεγονός ότι στατιστικά ισχυρό, δεν επαρκούν για τη βέλτιστη μεμονωμένες αποφάσεις για τη θεραπεία. Εκφράζεται η ελπίδα ότι μια καλύτερη κατανόηση της βιολογίας της νόσου θα οδηγήσει τελικά στην ταυτοποίηση των κλινικά εφαρμόζεται μοριακών δεικτών που επιτρέπουν μια πιο αξιόπιστη πρόβλεψη της επιθετικότητας του καρκίνου του προστάτη σε μεμονωμένους ασθενείς.

Η οικογένεια πρωτεϊνών μικροσωληνίσκων-πρόσδεση της ανθρώπινης γάντζο (αγκίστρια) περιλαμβάνει τρία ομόλογα, HOOK1, HOOK2, και HOOK3, τα οποία αφθόνως εκφράζεται σε ανθρώπινα κύτταρα. Άγκιστρα λειτουργούν ως πρωτεΐνες προσαρμογής που εμπλέκονται στην διακίνηση των κυστιδίων μεμβράνης και συμπλέγματα πρωτεϊνών κατά μήκος των μικροσωληνίσκων μεταξύ της συσκευής Golgi, κεντροσωμάτια [2-5], endosomes [6] και λυσοσώματα [7]. Ένας καρκίνος σχετικό ρόλο έχει προταθεί ειδικά για HOOK3 από αρκετές μελέτες εύρεσης υποτροπιάζουσες αλλοιώσεις του γονιδίου. Για παράδειγμα, μια μελέτη ανέφερε HOOK3: σύντηξη RET σε περίπτωση θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς, η οποία αποδείχθηκε ότι είναι ογκογόνο σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος καρκίνου του ποντικού [8]. Μια άλλη μελέτη διαπίστωσε μεταλλάξεων της πρωτεΐνης-αλλάζοντας με άγνωστη σημασία σε 2 από 48 όγκοι του λεπτού εντέρου νευροενδοκρινείς [9]. Επιπλέον, η γονιδιακή HOOK3 βρίσκεται στο 8p11, ένα κοινό σημείο διακοπής σε πολλούς ανθρώπινους τύπους όγκων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη [10,11]. Ως εκ τούτου, την αδρανοποίηση θραύση με αποτέλεσμα τη μειωμένη έκφραση του HOOK3 βρέθηκε σε ένα σημαντικό ποσοστό (9,0%) των όγκων [11] σε μια μελέτη σε 77 καρκίνοι του προστάτη.

Αυτά τα ευρήματα μας ώθησε να μελετήσει τα μοτίβα έκφρασης HOOK3 στον καρκίνο του προστάτη με περισσότερες λεπτομέρειες. Πήραμε πλεονέκτημα του προϋπάρχοντος μικροσυστοιχιών ιστού μας (TMA) που περιέχουν & gt? 12.000 προστάτη δείγματα καρκίνου που συνδέεται με μια βάση δεδομένων με την κλινική παρακολούθηση και εκτεταμένη μοριακά δεδομένα. Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι υψηλά επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης HOOK3 συνδέονται στενά με δυσμενείς φαινότυπο του όγκου και στις αρχές της επανάληψης PSA και μπορεί ανεξάρτητα να προβλέψει κακή έκβαση του καρκίνου του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς

η ριζική προστατεκτομή δείγματα ήταν διαθέσιμα από 12.427 ασθενείς, που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση στο διάστημα μεταξύ 1992 και 2012 στο Τμήμα Ουρολογίας και τα Martini Κλινικές στο Ιατρικό Κέντρο του Πανεπιστημίου του Αμβούργου-Eppendorf. Συνέχεια υπήρχαν διαθέσιμα στοιχεία για συνολικά 12.344 ασθενείς με διάμεση παρακολούθηση 36 μηνών (εύρος: 1-241 μήνες? Πίνακας 1). τιμές (PSA) Το ειδικό προστατικό αντιγόνο μετρήθηκαν μετά από χειρουργική επέμβαση και PSA υποτροπή ορίστηκε ως το χρονικό σημείο όταν μετεγχειρητική PSA ήταν τουλάχιστον 0.2ng /ml και η αύξηση στις επόμενες μετρήσεις. Όλα τα δείγματα του προστάτη αναλύθηκαν σύμφωνα με μια συνήθη διαδικασία, συμπεριλαμβανομένης μιας πλήρους ενσωμάτωσης ολόκληρης προστάτη για ιστολογική ανάλυση [12]. Η διαδικασία κατασκευής ΤΜΑ περιγράφηκε προηγουμένως λεπτομερώς [13]. Εν ολίγοις, ένα πυρήνα 0,6 χιλιοστά λήφθηκε από έναν εκπρόσωπο μπλοκ ιστού από κάθε ασθενή. Οι ιστοί διανέμονται μεταξύ 27 μπλοκ TMA, που το καθένα περιέχει 144 να 522 δείγματα όγκων. Για εσωτερικούς ελέγχους, κάθε μπλοκ TMA περιείχε επίσης διάφορους ιστούς ελέγχου, συμπεριλαμβανομένων φυσιολογικό ιστό του προστάτη. Η μοριακή βάση δεδομένων που επισυνάπτεται στην παρούσα TMA περιέχονται αποτελέσματα στην έκφραση ERG σε 10.678 [14], ERG σπάσει χώρια ανάλυση FISH στο 7099 (επεκτάθηκε από το [15]), την κατάσταση διαγραφή 5q21 (CHD1) σε 7.932 (επεκταθεί από [16]), 6q15 (MAP3K7) σε 6.069 (επεκταθεί από [17]), PTEN (10q23) στο 6704 (επεκτάθηκε από το [18]), 3p13 (FOXP1) σε 7.081 (επεκταθεί από [19]) καρκίνους, και ο δείκτης επισήμανση Ki67 (Ki67LI) δεδομένων σε 4.426 καρκίνους (επεκταθεί από [20]).

Η

δήλωση Ηθικής

Η χρήση των αρχειοθετημένα διαγνωστικών αριστερά-πάνω από τους ιστούς για την κατασκευή των μικροσυστοιχιών ιστού και την ανάλυσή τους για ερευνητικούς σκοπούς, όπως καθώς και ανάλυση των δεδομένων των ασθενών έχει εγκριθεί από την τοπική νομοθεσία (HmbKHG, §12,1) και από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας (ηθική Επιτροπή Ärztekammer Αμβούργο, WF-049/09 και PV3652). Σύμφωνα με τους τοπικούς νόμους, ενημερωμένη συγκατάθεση δεν απαιτείται για τη μελέτη αυτή. φακέλους των ασθενών /πληροφορίες ανώνυμα και de-εντοπίστηκαν πριν από την ανάλυση. Όλες οι εργασίες έχουν διεξαχθεί σύμφωνα με τη δήλωση του Ελσίνκι.

Η ανοσοϊστοχημεία

Το φρεσκοκομμένο τμήματα TMA ανοσοχρώστηκαν σε μία μέρα και σε ένα πείραμα. Πλάκες αποπαραφινοποιήθηκαν και εκτίθεται σε θερμότητα επαγόμενη ανάκτηση αντιγόνου για 5 λεπτά μέσα σε αυτόκλειστο στους 121 ° C σε ρΗ 7.8 ρυθμιστικό Tris-EDTA-κιτρικό. Affinity καθαρίστηκε πρωτογενές HPA024756 αντίσωμα που εγείρεται κατά της πρωτεΐνης HOOK ομόλογο 3 ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη ετικέτα επιτόπου υπογραφής (KEEIAQRCHELDMQVAALQEEKSSLLAENQVLMERLNQSDSIEDPNSPAGRRHLQLQTQLEQLQEETFRLEA) (πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού, Sigma, St. Louis, ΜΟ, USA? Αραίωση 1: 150) εφαρμόστηκε σε 37 ° C για 60 λεπτά. Ιδιαιτερότητα του αντισώματος ελέγχθηκε από τον κατασκευαστή, όπως έδειξε μία μονή ζώνη στο προβλεπόμενο μέγεθος (83,1 kD) σε κηλίδα western. Το δεσμευμένο αντίσωμα στη συνέχεια ορατή χρησιμοποιώντας το EnVision Kit (Dako, Glostrup, Denmark) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, καθώς [15]. Το αντίσωμα συνήθως βάφονται στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων του όγκου σε όλα τα κύτταρα (100%) ενός δεδομένου τόπου ιστό. Χρώση ένταση όλες τις περιπτώσεις, έτσι ημιποσοτικά αξιολογήθηκε σε τρεις κατηγορίες:. Αρνητικό, χαμηλή (ασθενής έως μέτρια) και υψηλή (ισχυρή ένταση χρώσης)

Στατιστικά

Στατιστικοί υπολογισμοί έγιναν με JMP 10.0. 2 λογισμικό (SAS Institute Inc., NC, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής). πίνακες έκτακτης ανάγκης και η chi²-τεστ έγιναν για να ψάξετε συσχετίσεις μεταξύ μοριακών παραμέτρων και του φαινοτύπου του όγκου. Οι καμπύλες επιβίωσης υπολογίστηκαν σύμφωνα με Kaplan-Meier. Η δοκιμασία log-rank εφαρμόστηκε για να ανιχνεύσει σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων. Ανάλυση της διακύμανσης της δοκιμής (ANOVA) εφαρμόστηκε για να αναζητήσετε τις ενώσεις μεταξύ κυτταρικού πολλαπλασιασμού και χρώση HOOK3. Cox ανάλυση παλινδρόμησης αναλογικών κινδύνων έγινε για να ελεγχθεί η στατιστική ανεξαρτησία και τη σημασία των παθολογικών, μοριακές και κλινικές μεταβλητές. Ξεχωριστές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση διαφορετικά σύνολα παραμέτρων διαθέσιμες είτε πριν είτε μετά την προστατεκτομή.

Αποτελέσματα

Τεχνικές πτυχές

Ένα σύνολο 10.572 (85,0%) των δειγμάτων όγκων ήταν ερμηνεύσιμο στην ανάλυσή μας TMA. Λόγοι για μη-ενημερωτική περιπτώσεις (1.855 σημεία? 15,0%) περιλαμβάνεται η έλλειψη σημεία του ιστού στο τμήμα TMA ή ελλείψει σαφών καρκινικού ιστού στο σημείο TMA

έκφραση

HOOK3 σε φυσιολογικά και καρκινικά κύτταρα του προστάτη

.

Αντιπροσωπευτικά εικόνες των αρνητικών και θετικών ανοσοκηλιδώσεις HOOK3 δίνεται στο Σχήμα 1. HOOK3 ανοσοχρώση ήταν εντοπισμένη στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων (Εικ ένθετο 1γ). Φυσιολογικούς ιστούς, που προέρχονται από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη, δεν έδειξε καμία χρώση των στρωματικών και αυλού κύτταρα, ενώ τα βασικά κύτταρα χρωματίζονται θετικά (** στο σχ 1d). Θετική HOOK3 ανοσοχρώση παρατηρήθηκε σε 5.636 από 10.572 (53,3%) των καρκίνων του προστάτη ερμηνεύσιμο μας και θεωρήθηκε χαμηλή σε 36,4% (Σχήμα 1β) και υψηλή σε 16,9% των καρκίνων (Σχήμα 1γ).

(α) αρνητική , (β) χαμηλή ένταση, (γ) χρώση υψηλής έντασης σε 10χ, ένθετα σε 300x μεγέθυνση και (δ) αρνητικά την κανονική του αυλού κυττάρων και θετική βασικά κύτταρα (*) μαζί με υψηλού επιπέδου θετικός καρκινικού ιστού (**) με τον ίδιο πυρήνα σε μεγέθυνση 150χ

η

σύνδεσης με TMPRSS2:. κατάστασης σύντηξης ERG και την έκφραση της πρωτεΐνης ERG

Για να αξιολογηθεί κατά πόσον η έκφραση HOOK3 συνδέεται με την TMPRSS2: ERG σύντηξης σε καρκίνους του προστάτη, χρησιμοποιήσαμε δεδομένα από προηγούμενες μελέτες (επεκταθεί από [14,15] στοιχεία για TMPRSS2:. κατάστασης σύντηξης ERG λαμβάνονται με FISH ήταν διαθέσιμα από 6302 και με ανοσοϊστοχημεία από 9.370 όγκους με αξιολογήσιμη HOOK3 ανοσοχρώση στοιχεία τόσο για ERG FISH και IHC ήταν διαθέσιμα από 6076 καρκίνους. , και το ίδιο αποτέλεσμα (ERG IHC θετικών και διάλειμμα από FISH ή ERG IHC αρνητικά και λείπει διάλειμμα από FISH) βρέθηκε σε 5.811 από 6.076 (95,6%) των καρκίνων. Θετική HOOK3 ανοσοχρώση συνδέθηκε με TMPRSS2: ERG αναδιάταξη και ERG θετικότητα σε καρκίνους του προστάτη. HOOK3 ανοσοχρώση παρατηρήθηκε στο 74,3% και το 76,1% των καρκίνων με TMPRSS2: ERG σύντηξης ανιχνεύεται με IHC και FISH, αλλά βρέθηκε μόνο το 38,2% των καρκίνων χωρίς χρώση ERG και 44,1% των καρκίνων χωρίς ERG ανακατατάξεις ανιχνεύονται με FISH (p & lt? 0.0001 κάθε , σχήμα 2)

IHC = ανοσοϊστοχημεία.? FISH = φθορισμού in-situ υβριδισμού.

Η

Σύνδεσης με το φαινότυπο του όγκου

Όταν ήταν να αναλύονται από κοινού όλα τα καρκινώματα, έκφραση HOOK3 υψηλού επιπέδου ήταν σημαντικά συνδεδεμένη με προχωρημένο στάδιο παθολογική όγκου, υψηλής Gleason βαθμό, οι μεταστάσεις στους λεμφαδένες (p & lt? 0,0001 η κάθε μία) και χειρουργικές θετικότητα περιθωρίου (p = 0,0003). Δεν βρέθηκε συσχέτιση με υψηλή προεγχειρητική PSA-επίπεδα (ρ = 0,7594? Πίνακας 2). ανάλυση υποομάδας για ERG-αρνητικών και θετικών καρκίνων αποκάλυψε παρόμοια αποτελέσματα (S1 και S2 πίνακες).

Η

Σύνδεσης με άλλους βασικούς γονιδιωματική διαγραφές

Προηγούμενες μελέτες έχουν παράσχει αποδείξεις για την ξεχωριστή μοριακή υποομάδες καρκίνους του προστάτη που ορίζεται από TMPRSS2: ERG συγχωνεύσεις και αρκετές γονιδιωματική διαγραφές. Τους άλλους και μας έχουν περιγραφεί στο παρελθόν μια ισχυρή σύνδεση της PTEN και 3p13 διαγραφές στο ERG θετικότητα και 5q21 και 6q15 διαγραφές στο ERG αρνητικότητα [16-19]. Έτσι ώστε να εξετάσει, αν η έκφραση HOOK3 μπορεί να σχετίζεται ιδιαίτερα με ένα από αυτά γονιδιωματικών διαγραφές, δεδομένα HOOK3 συγκρίθηκαν με προϋπάρχουσα ευρήματα σχετικά ΡΤΕΝ (10q23), 3p13 (FOXP1), 6q15 (MAP3K7) και 5q21 (CHD1) διαγραφές. Στην ανάλυση όλων των όγκων, η έκφραση HOOK3 ήταν σημαντικά συνδεδεμένη με όλες τις διαγραφές που αναφέρονται ανωτέρω (ΡΤΕΝ, 5q21 και 3p13 (ρ & lt? 0,0001 καθένα), 6q15 (p = 0,003)? Σχήμα 3α). Οι ενώσεις αυτές διέφεραν κατά την ανάλυση των υποομάδων πραγματοποιήθηκε για ERG αρνητικό (Σχήμα 3β) και ERG θετική καρκίνους (Σχήμα 3γ). Εδώ HOOK3 χρώση συσχετίζεται έντονα με διαγραφές στην PTEN (p & lt? 0,0001 και για τις δύο ERG αρνητικών και θετικών καρκίνων), 6q15 (και τα δύο p & lt? 0.0001) και 5q21 (p & lt? 0,0001, p = 0,01 αντίστοιχα), αλλά όχι με 3p13 διαγραφές (p = 0,10 και p = 0,73 αντίστοιχα).

(α) όλοι οι καρκίνοι, (β) στην ERG-αρνητικό, γ) ERG-θετική υποσύνολο.

η

σύνδεσης με πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων ( δείκτης σήμανσης Ki67)

ισχυρή χρώση HOOK3 ήταν σημαντικά συνδεδεμένη με επιταχυνόμενη κυτταρικό πολλαπλασιασμό όπως μετρείται από Ki67LI σε όλους τους καρκίνους, καθώς και σε υποσύνολα των καρκίνων με πανομοιότυπο σκορ Gleason (≤3 + 3, 3 + 4, 4+ 3, και ≥4 + 4, σ & lt?. 0.0001 καθένα, Πίνακας 3)

Η

σύνδεσης με την PSA υποτροπή

ήταν διαθέσιμα παρακολούθηση δεδομένων για 9.916 ασθενείς με ερμηνεύσιμο HOOK3 ανοσοχρώση για η TMA. Μια ιδιαίτερα σημαντική συσχέτιση μεταξύ υψηλού επιπέδου έκφρασης HOOK3 και στις αρχές της επανάληψης PSA βρέθηκε όταν αναλύθηκαν όλοι οι όγκοι, αλλά και στην υποομάδα αναλύσεις για ERG αρνητικών και θετικών καρκίνων (p & lt? 0,0001 καθένα? Σχήμα 4α-4ε).

(α) όλοι οι καρκίνοι (n = 9.540), (β) ERG-αρνητικό (ERG

-) καρκίνων (n = 4.732), (γ) ERG-θετικό (ERG

+) καρκίνων (n = 3678 ), (δ)

PTEN

μη διαγράφεται (PTEN

νόρμα) καρκίνων (n = 4.349), (ε)

PTEN

διαγράφονται καρκίνους (n = 1037).

η πολυπαραγοντική ανάλυση

Τέσσερις διαφορετικοί τύποι πολυπαραγοντική ανάλυση έγινε αξιολόγηση της κλινικής σημασίας της έκφρασης HOOK3 σε διαφορετικά σενάρια (Πίνακας 4). Σενάριο 1 αξιολόγησε όλα τα μετεγχειρητικά διαθέσιμες παράμετροι περιλαμβανομένης της παθολογικής στάδιο του όγκου, την κατάσταση παθολογικών λεμφαδένων (PN), την κατάσταση χειρουργικό περιθώριο, προεγχειρητική τιμή PSA και παθολογικές βαθμό Gleason λαμβάνεται μετά τη μορφολογική αξιολόγηση του συνόλου εκτομή του προστάτη. Στο σενάριο 2, συμπεριλήφθηκαν όλα τα μετεγχειρητικά διαθέσιμες παράμετροι με εξαίρεση τα κομβικά κατάστασης. Η λογική αυτής της προσέγγισης ήταν ότι η ένδειξη και η έκταση των λεμφαδένων δεν είναι τυποποιημένη στη χειρουργική θεραπεία του καρκίνου του προστάτη και ότι ο αποκλεισμός ΡΝ σε πολυπαραγοντική ανάλυση μπορεί να αυξήσει σημαντικά τους αριθμούς υπόθεση. Δύο επιπλέον σενάρια είχαν ως σκοπό να διαμορφώσει το προεγχειρητικής κατάσταση όσο το δυνατόν περισσότερο. Σενάριο 3 περιλαμβάνεται HOOK3 έκφρασης, προεγχειρητική PSA, το στάδιο των κλινικών του όγκου (στάδιο CT) και ο βαθμός Gleason που λαμβάνονται για το δείγμα προστατεκτομή. Από μετεγχειρητική προσδιορισμό του βαθμού όγκων Gleason είναι «καλύτερο» από το προεγχειρητικά καθορίστηκε βαθμό Gleason (υπόκειται σε σφάλματα δειγματοληψίας και, κατά συνέπεια, στο πλαίσιο αναβάθμισης σε περισσότερες από το ένα τρίτο των περιπτώσεων [21]), προστέθηκε άλλο πολυπαραγοντική ανάλυση. Στο σενάριο 4, η προεγχειρητική βαθμό Gleason που λαμβάνονται σχετικά με την αρχική βιοψία έγινε σε συνδυασμό με την προεγχειρητική PSA, το στάδιο αξονική και έκφραση HOOK3. HOOK3 αποδείχθηκε ότι είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράμετρος σε όλα τα σενάρια, όταν όλοι οι όγκοι και οι υποομάδες της ERG αρνητικές και θετικές ERG όγκους αναλύθηκαν (Πίνακας 4). HOOK3 αποδείχθηκε ότι είναι ένας ανεξάρτητος μάντης ανεξάρτητα από την δοκιμή σενάριο ή υποομάδας (όλοι οι καρκίνοι: p = 0,0003 στο σενάριο 1, σ & lt? 0,0001 στο σενάριο 2-4? ERG αρνητικών καρκίνων: p = 0,0002 στο σενάριο 1, σ & lt? 0,0001 στο σενάριο 2-4? ERG θετική καρκίνους: p = 0,0381 στο σενάριο 1, p = 0,0433 στο σενάριο 2, p = 0,0006 στο σενάριο 3, σ & lt? 0,0001 στο σενάριο 4)

Η

Συζήτηση

.

Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης δείχνουν ότι η έκφραση υψηλού επιπέδου HOOK3 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης της πρώιμης υποτροπής PSA για τον καρκίνο του προστάτη.

ανοσοϊστοχημική ανάλυση μας αποκάλυψε κυτταροπλασματική χρώση HOOK3 στο 85,0% των 10.572 αναλυθούν καρκίνων του προστάτη. Φυσιολογικό επιθήλιο του προστάτη συνήθως έδειξαν αρνητικά ή ασθενή ανοσοχρώση σε αυλού κυττάρων, ενώ η βασική και στρωματικά κύτταρα δεν λεκιάζουν για HOOK3. Ότι η αύξηση των επιπέδων της HOOK3 παράλληλα την επιθετικότητα του καρκίνου είναι σύμφωνη με τις σχετικές ρόλο της HOOK3 μέχρι ρύθμισης για την ανάπτυξη και την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη. Τα δεδομένα από την ανθρώπινη πρωτεΐνη Atlas (www.proteinatlas.org) φαίνεται να δείχνουν ότι HOOK3 μπορεί επίσης να ρυθμιστεί επάνω σε άλλους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παχέος εντέρου, του καρκίνου του ενδομητρίου, του γλοιώματος, του καρκίνου του πνεύμονα, λέμφωμα, καρκίνο του θυρεοειδούς και [22].

Η ισχυρή συσχέτιση της έκφρασης HOOK3 υψηλού επιπέδου με δυσμενείς χαρακτηριστικά όγκου, συμπεριλαμβανομένων προχωρημένο στάδιο, υψηλού βαθμού Gleason, κομβικό μετάσταση και στην επανάληψη PSA υποστηρίζει για μια πρακτική σημασία της μέτρησης HOOK3 για την εκτίμηση της πρόγνωσης. Ότι η ισχυρή έκφραση HOOK3 αφορούσαν προγνωστική ενδιαφέρον ακόμη και στο υποσύνολο των καρκίνων που φιλοξενούν PTEN διαγραφές-ένα από τα ισχυρότερα γνωστά προγνωστικοί δείκτες στον καρκίνο του προστάτη [18,23,24] -Περαιτέρω τονίζει μια κλινικά σχετική ρόλος των δοκιμών HOOK3. Αυτό είναι το πιο αληθινό, όπως η προγνωστική επίδραση της HOOK3 ήταν επίσης ανεξάρτητη από τις κλινικές και παθολογικές παραμέτρους. εκτεταμένη πολυπαραγοντική μοντελοποίηση μας υποδηλώνει περαιτέρω ότι HOOK3 μπορούσε να είναι μια κλινικά χρήσιμη προγνωστικός δείκτης στις δύο προ- και μετεγχειρητική σενάρια. Λαμβάνοντας υπόψη ότι μια κλινική βιοδεικτών πρέπει να αναλύεται σε υλικό βιοψίας και πριν ληφθούν αποφάσεις για την αγωγή, θα πρέπει να σημειωθεί, ότι η προσέγγισή μας για την ανάλυση των μοριακών χαρακτηριστικών σε ένα λεπτά TMA δείγμα ιστού μέτρηση 0,6 χιλιοστά σε διάμετρο μοντέλα εκ του σύνεγγυς τις μοριακές αναλύσεις του πυρήνα βιοψίες βελόνας όπου οι συγκρίσιμες ποσότητες των ιστών αξιολογούνται. Καθώς τα δείγματα μας TMA δεν ήταν ακριβώς λαμβάνονται από το «χειρότερο» περιοχή του κάθε όγκου, αλλά τυχαία μέσα σε μια αντιπροσωπευτική περιοχή του καρκίνου από, σημείο TMA μας θα μπορούσε να είναι όσο το δυνατόν αντιπροσωπευτικότερα του «χειρότερη» περιοχή της κλινικής καρκίνου που έχουν αναγνωριστεί σε ένα σύνολο καρκίνο βιοψίες.

είναι άγνωστο πώς HOOK3 μπορεί να συμβάλει στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου. Εμείς δεν εκπληρώσει τις δικές της λειτουργικές πειράματα, αλλά ο μεγάλος αριθμός των καρκίνων του προστάτη που περιλαμβάνονται στο έργο μας, μαζί με εκτεταμένες μοριακές πληροφορίες σχετικά με τους όγκους μας, μας έδωσε τη δυνατότητα να εξαχθούν ορισμένα συμπεράσματα σχετικά με υποτιθέμενη καρκίνο σχετικές ρόλους των HOOK3 «in silico». Αυτή η προσέγγιση της «λειτουργικής μοριακής επιδημιολογίας» απέδειξε πρώτος, ότι η έκφραση HOOK3 συνδέεται στενά με την κλασική παραμέτρων της γονιδιωματικής αστάθειας, όπως η επικράτηση της χρωμοσωμικές διαγραφές, και στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων αυξημένα. Διαγραφές ορισμένων μικρών και μεγάλων χρωμοσωμικές περιοχές είναι το σήμα κατατεθέν του καρκίνου του προστάτη. Τα δεδομένα από τις μελέτες προσδιορισμού αλληλουχίας επόμενη γενιά αποδείξει ότι αυτές οι διαγραφές είναι πιο διαδεδομένες από οποιαδήποτε μεταλλάξεις συγκεκριμένων γονιδίων που κωδικοποιούν και πολλές από αυτές τις διαγραφές έχουν συνδεθεί με είτε ERG θετικό (δηλ ΡΤΕΝ και 3p13) ή αρνητικά καρκίνους ERG (δηλ 6q15 και 5q23). Ότι η έκφραση υψηλής HOOK3 συνδέεται με υψηλότερο επιπολασμό όλων αναλύονται διαγραφές αναδεικνύει μια πιθανή συμμετοχή της HOOK3 σχετικά με τους μηχανισμούς που ρυθμίζουν τη γονιδιακή του ακεραιότητα. Αυτό είναι σύμφωνο με προηγούμενες εργασίες που αποδεικνύουν ότι HOOK3 είναι σημαντικές για τη σωστή λειτουργία των κεντροσωμάτια, όπως είναι απαραίτητο για τη μεταφορά και τη δυναμική συναρμολόγηση centrosomal πρωτεϊνών [3,4]. Τόσο γκρεμίζω και έκτοπη υπερέκφραση της HOOK3 σε μοντέλα κυτταρική σειρά οδήγησε σε κίνδυνο centrosomal λειτουργίες [3], ένα κατακερματισμένο σύστημα Golgi, διαταράσσεται κακώς οργανωμένο δίκτυο μικροσωληνίσκων, και αυξημένο κλάσμα των κυττάρων με δύο ή περισσότερους πυρήνες [5]. Επιπλέον, έχουν κεντροσωμάτων ανωμαλίες έχουν συνδεθεί με ανευπλοειδία στον καρκίνο του προστάτη πριν από [25].

μας στην προσέγγιση silico κατέδειξε ακόμη ότι HOOK3 υπερέκφραση συνδέεται στενά με την ενεργοποίηση ERG. Περισσότερο από το ήμισυ του συνόλου των καρκίνων του προστάτη, ιδίως των νεαρών ασθενών, φέρουν το γονίδιο συγχωνεύσεις που συνδέει το γονίδιο TMPRSS2 ανδρογόνα ρυθμίζονται με τον παράγοντα μεταγραφής ERG [14,26]. Αυτές οι γονιδιωματικές μεταθέσεις ως αποτέλεσμα ενός ανδρογόνου με γνώμονα υπερέκφραση του ERG σε προσβεβλημένους κύτταρα [27] και, ως εκ τούτου, αλλοιωμένη έκφραση περισσότερων από 1.600 γονιδίων σε επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη. [28] Είναι απίθανο, ωστόσο, ότι τα υψηλά επίπεδα HOOK3 σε ERG θετικό καρκίνους οδηγείται από την άμεση ενεργοποίηση, επειδή η περιοχή HOOK3 υποκινητή στερείται θέσεις πρόσδεσης ERG. Εναλλακτικές εξηγήσεις για τη θετική συσχέτιση της έκφρασης HOOK3 και ERG θα περιλαμβάνουν άμεση ή έμμεση αλληλεπίδραση αυτών των δύο πρωτεϊνών. Μπορεί, για παράδειγμα, να είναι δυνατό ότι HOOK3 -responsible για τη μεταφορά των πρωτεϊνών centrosomal-αλληλεπιδρά με centrosomal πρωτεΐνες όπως ιντεγκρίνης-συνδεδεμένη κινάση (ILK), η οποία είναι μια σχετική λειτουργική εταίρος της ERG [29,30]. ILK και ERG έχει αποδειχθεί ότι οδηγεί συνεργατικά κακοήθη μετασχηματισμό και επιθηλιακά μεσεγχυματικά μετάβαση στον καρκίνο του προστάτη [31].

Εν περιλήψει, η μελέτη μας παρέχει την απόδειξη ότι HOOK3 είναι ένα ανεξάρτητο μάντης στον καρκίνο του προστάτη. Εμείς ως εκ τούτου προτείνω η ανάλυση της έκφρασης HOOK3 έχει τη δυνατότητα για καθημερινή κλινική πρακτική εφαρμογή είτε μόνη της, ή πιο πιθανό, σε συνδυασμό με άλλους βιοδείκτες. μεγάλης κλίμακας προσέγγισή μας μικροσυστοιχιών ιστού θα συνεχίσει να αποδειχθεί ιδιαίτερα καθοριστική για τη συνεχή εντοπισμό των κατάλληλων προγνωστικούς βιοδείκτες. μοριακή βάσεις δεδομένων μεγάλης κλίμακας που σχετίζονται με μεγάλες TMAs επιτρέψει επίσης περιορισμένες λειτουργικές αναλύσεις «in silico».

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1. Κλινικο-παθολογικές ένωση HOOK3 ανοσοχρώση αρνητική υποσύνολο ERG

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134614.s001

(DOC)

S2 πίνακα. Κλινικο-παθολογικές ένωση HOOK3 ανοσοχρώση στο ERG θετικό υποσύνολο

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134614.s002

(DOC)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Janett Luttgens , Sünje Seekamp και Inge Brandt για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια.