Αφηρημένο

Οι τρέχουσες προσπάθειες ανάπτυξης φαρμάκων για καρκίνο του στομάχου στρέφεται εναντίον πολλών μοριακών στόχοι οδήγηση της ανάπτυξης του νεοπλάσματος. Ενδονεοπλαστική βιοδεικτών ετερογένεια, ωστόσο, παρατηρούνται συχνά σε καρκίνο του στομάχου, θα μπορούσε να οδηγήσει σε μεροληπτική επιλογή των ασθενών. ΚΟΑ, ATM, FGFR2 και HER2 είχαν προφίλ στο γαστρικό δείγματα βιοψίας καρκίνου. Ένα καινοτόμο παθολογική εκτίμηση έγινε μέσω βαθμολόγησης των επιμέρους βιοψιών από όλο το βιοψίες από έναν ασθενή για να γίνεται δυνατή η αξιολόγηση της ετερογένειας. Μετά από αυτό, ψευδώς αρνητικά τους κινδύνους για κάθε βιοδείκτη εκτιμήθηκαν

in silico

. 166 γαστρικό περιπτώσεων καρκίνου με πολλαπλές βιοψίες από μεμονωμένους ασθενείς συλλέχθηκαν από τη Σαγκάη Renji Νοσοκομείο. Μετά από προκαθορισμένα κριτήρια, 56 ~ 78% των περιπτώσεων έδειξαν χαμηλή, 15 ~ 35% παρουσίασαν μέσο και 0 ~ 11% έδειξε μεγάλη ετερογένεια εντός των βιοδεικτών προφίλ. Εάν 3 βιοψίες συλλέχθηκαν από έναν ασθενή, ο κίνδυνος εσφαλμένων αρνητικών για την ανίχνευση των βιοδεικτών ήταν κοντά στο 5% (εξαίρεση για FGFR2: 12,2%). Όταν συλλέχθηκαν 6 βιοψίες, το ψευδώς αρνητικό κίνδυνο πλησίασε 0%. Η μελέτη μας καταδεικνύει το όφελος των πολλών δειγματοληψίας βιοψίας κατά την εξέταση εξατομικευμένη στρατηγική βιοδεικτών της υγειονομικής περίθαλψης, και παρέχει ένα παράδειγμα για να αντιμετωπίσουν την πρόκληση της ενδονεοπλαστική βιοδείκτη ετερογένεια χρήση εναλλακτικών παθολογική εκτίμηση και στατιστικών μεθόδων

Παράθεση:. Ye P, Ζανγκ M, Fan S, Zhang Τ, Fu Η, Su Χ, et al. (2015) ενδονεοπλαστική ετερογένεια του HER2, FGFR2, cMet και ΑΤΜ στο γαστρικό καρκίνο: Βελτιστοποίηση Εξατομικευμένη Υγείας μέσω καινοτόμων Παθολογική και στατιστική ανάλυση. PLoS ONE 10 (11): e0143207. doi: 10.1371 /journal.pone.0143207

Επιμέλεια: Daniele Generali, Instituti Ospitalieri di Cremona, Ιταλία

Ελήφθη: 30 Ιούλη του 2015? Αποδεκτές: 2 Νοέμβρη 2015? Δημοσιεύθηκε: 20 Νοέμβρη του 2015

Copyright: © 2015 Ye et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. AstraZeneca έχει υποστηρίξει αυτή τη μελέτη. Ο χρηματοδότης παρέχεται στήριξη με τη μορφή των μισθών για τους συγγραφείς [ΡΥ, MZ, SF, TZ, HF, XS, PG και ΧΥ] και εφόσον η εγκατάσταση και οι πόροι για την ολοκλήρωση αυτής της μελέτης. Οι συγκεκριμένοι ρόλοι αυτών των συγγραφέων αρθρωτά στην ενότητα «συγγραφέας συνεισφορές»

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Συγγραφείς συνδεδεμένες με AstraZeneca είναι εργαζόμενοι με πλήρη απασχόληση ή /και των ενδιαφερόμενων φορέων της AstraZeneca. Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από την AstraZeneca. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών. Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν άλλα ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

Καρκίνος στομάχου (GC) είναι ένας από τους πιο κοινούς καρκίνους παγκοσμίως, με περίπου το ήμισυ του συνόλου των περιπτώσεων που συμβαίνουν στην Ανατολική Ασία (κυρίως Κίνα), και είναι η τρίτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται παγκοσμίως [1]. Παρά το γεγονός ότι η συχνότητα μειώνεται, οι περισσότερες περιπτώσεις GC διαγιγνώσκονται σε προχωρημένο στάδιο και την πρόγνωση της νόσου παραμένει φτωχή [2]. Η διάμεση επιβίωση για μεταστατικό GC είναι μικρότερη από ένα έτος, ενώ το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών είναι λιγότερο από το 7% [3].

ενδονεοπλαστική ετερογένεια παρατηρείται συνήθως σε GC. Στη δεκαετία του 1980, de Aretxabala

et al

αξιολογήθηκαν 222 δείγματα από 37 περιπτώσεις GC και βρήκε ένα μίγμα διπλοειδή και ανευπλοειδικών δείγματα ή διαφορετικά ανευπλοειδικών stemlines στην ίδια υπόθεση (η λεγόμενη DNA ετερογένεια περιεχόμενο) στο 33% της πρωτογενούς όγκους [4]. Μια παρόμοια μελέτη από Yonemura

et al

έδειξε 69% ομοιογένεια του περιεχομένου του DNA σε 65 εκτομή δείγματα GC [5]. Πρόσφατα, Γιανγκ

et al

αξιολογούνται δείγματα GC από 148 ασθενείς και διαπίστωσαν ποσοστό ετερογένεια του 79,3% σε ανθρώπινο υποδοχέα επιθηλιακού αυξητικού παράγοντα 2 (HER2) υπερέκφρασης της πρωτεΐνης και 44% σε

HER2

γονίδιο ενίσχυσης [6]. Κατά συνέπεια, η υψηλή ενδονεοπλαστική ετερογένεια που παρατηρείται σε GC είναι πιθανό να συμβάλει στην αντίσταση της θεραπείας και χειρότερη πρόγνωση των ασθενών [7, 8], και, τελικά, αντιπροσωπεύει ένα σημαντικό άλυτο πρόβλημα που αντιμετωπίζουν από τους κλινικούς γιατρούς, παθολόγους, και τους ερευνητές.

αρκετές μοριακούς στόχους διαθέτουν επί του παρόντος είτε έχουν εγκριθεί φαρμακευτικές θεραπείες ή ελπιδοφόρα θεραπευτική υποβάλλονται σε κλινική ανάπτυξη στο GC. HER2 παίζει σημαντικούς ρόλους στην ογκογένεση του καρκίνου του μαστού, τον καρκίνο των ωοθηκών και γαστρικό καρκίνο [9] και Trastuzumab, ένα μονοκλωνικό αντίσωμα εναντίον του HER2, έχει εγκριθεί για τη θεραπεία της GC [10]. Το γονίδιο μεσεγχυματικά-επιθηλιακά παράγοντας μετάβαση (ΚΟΑ) κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη η οποία είναι η μόνη γνωστή υποδοχέας για (HGF) πρόσδεμα αυξητικού παράγοντα ηπατοκυττάρων [11].

MET

ενίσχυση γονιδίου και της πρωτεΐνης υπερέκφραση έχει δειχθεί ότι οδηγεί σε συνεχή ενεργοποίηση του μονοπατιού σηματοδότησης ΜΕΤ που συμβάλλει στην αύξηση του όγκου, αγγειογένεση και μετάσταση [12]. Αρκετές MET αναστολείς είναι σήμερα στο στάδιο των κλινικών δοκιμών GC, συμπεριλαμβανομένων Savolitinib (Φάση 1 (NCT02252913) [13]) και AMG337 (Φάση 2 (NCT02016534)). Ομοίως, παράγοντα ανάπτυξης ινοβλαστών υποδοχέα 2 (FGFR2) εμπλέκεται επίσης στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, διαφοροποίηση και κινητικότητα, και ενίσχυση των

FGFR2

γονίδιο παίζει σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση του GC, υπογραμμίζοντας με τον τρόπο αυτό η έλξη του ως ανάπτυξη φαρμάκων στόχου [14-16]. Αταξία τηλαγγειεκτασία μεταλλαγμένη (ΑΤΜ) είναι μια πρωτεϊνική κινάση που ανήκει στην φωσφατιδυλοϊνοσιτόλης 3 ‘κινάσης οικογένειας (ΡΙ3Κ), και υπό κανονικές συνθήκες ενεργοποιείται σε απόκριση DNA δίκλωνα σπασίματα [17]. ATM ανεπάρκεια σχετίζεται με μία υψηλή συχνότητα εμφάνισης κακοηθειών ιστού [18-20] και ATM ανεπάρκεια όγκοι κύτταρα είναι ευαίσθητα σε πολυ (ADP-ριβόζη) πολυμεράσης-1 (PARP) αναστολή, ένας πιθανός στόχος η οποία έχει προταθεί για τη θεραπεία της GC σε αρκετές προηγούμενες μελέτες [21-24]. Lynparza, η πρώτη αμερικανική και την ευρωπαϊκή εγκεκριμένο αναστολέας PARP στόχευση γονιδίων BRCA1 /2 μεταλλαγμένο καρκίνο των ωοθηκών, βρίσκεται σήμερα σε κλινική δοκιμή Φάσης ΙΙΙ σε GC (NCT01924533) και χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση του ασθενούς βιοδείκτη επιλογή χρησιμοποιώντας την έκφραση ΑΤΜ με IHC (δημοσίευση στον Τύπο) .

Στη σημερινή εποχή της μοριακά στοχευμένη ανάπτυξη φαρμάκων, οι βιοδείκτες αναμένεται να προβλέψουμε με ακρίβεια την κλινική ανταπόκριση [25]. Υψηλή ετερογένεια καρκινικών ωστόσο, μπορεί να οδηγήσει σε μια προκατάληψη ανίχνευση βιοδεικτών εάν τα δείγματα που λαμβάνονται από μια μικρή περιοχή του όγκου και όχι το σύνολο του ιστού όγκου (π.χ. χειρουργικά δείγματα είναι συνήθως μόνο 2 cm χ 2 εκατοστά). Αντίθετα, δείγματα βιοψίας συνήθως λαμβάνονται από διαφορετικές περιοχές του συνόλου του όγκου και είναι πιθανό να είναι πιο αντιπροσωπευτικά της συνολικής κατάστασης έκφρασης των βιοδεικτών των ασθενών », υποστηρίζοντας για τη δυνατότητά τους να μειώσουν τον αντίκτυπο των ενδονεοπλαστική ετερογένεια στην προκατάληψη επιλογή των ασθενών.

στη μελέτη μας, προκειμένου να αξιολογηθεί καλύτερα ενδονεοπλαστική ετερογένεια, χρησιμοποιήσαμε χειρουργική βιοψία ως στρατηγική δειγματοληψίας όγκου μας. Επιπλέον, πραγματοποιήσαμε μια καινοτόμο παθολογική εκτίμηση μέσω της βαθμολόγησης των ατομικών βιοψιών από όλο το βιοψίες από μεμονωμένους ασθενείς. Στο παρόν, δεν χρησιμοποιούνται, επίσης, στατιστικές μέθοδοι για την εκτίμηση των ψευδών κινδύνους ανίχνευσης αρνητικό κατά την ανάλυση πεπερασμένων αριθμών των βιοψιών, προκειμένου να κατανοήσουν τη σχέση μεταξύ του αριθμού των βιοψιών και τον κίνδυνο της επιλογής ενός ψευδώς θετικά ασθενή για μια συγκεκριμένη θεραπεία ή ένταξη σε μια κλινική δοκιμή .

Υλικά και Μέθοδοι

πληροφορίες για τον ασθενή

Αρχείο GC βιοψίας δείγματα συλλέχθηκαν από 166 ασθενείς που έλαβαν γαστροσκόπηση εξέταση με πολλαπλές βιοψίες από διαφορετικές περιοχές του όγκου του κάθε ασθενή μεταξύ του 2007 και 2014 Renji νοσοκομείο, Σαγκάη της Κίνας. Προηγούμενη γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς και το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review Renji Νοσοκομείο. Όλα τα δείγματα εξετάστηκαν από δύο εκπαιδευμένους παθολόγους για τη διάγνωση GC και σαράντα δείγματα αποκλείστηκαν στη μελέτη λόγω της κακής ποιότητας των ιστών.

Η ανοσοϊστοχημεία (IHC)

φορμόλη σταθερό και ενσωματωμένα σε παραφίνη (FFPE) δείγματα κόπηκαν σε πάχος 4 μm. Για χρώση ΚΟΑ, ένα μονοκλωνικό αντι-συνολικής αντισώματος ΚΟΑ (cMet SP44, Ventana Medical Systems, AZ, USA) χρησιμοποιήθηκε και η δοκιμασία διεξήχθη σε ένα αυτόματο χρώσης (Discovery XT, Ventana Medical Systems, AZ, USA). χρώση ATM πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα μονοκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αντι-ATM (ab32420, Abcam, MA, USA) σε μια Autostainer (Thermo Scientific, ΜΑ, USA). χρώση HER2 πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ HercepTest (DAKO, Denmark) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή σε ένα αυτόματο χρώσης (Discovery XT, Ventana Medical Systems, ΑΖ, USA).

φθορισμού in situ υβριδισμού (FISH)

Ο προσδιορισμός FISH διπλού χρώματος διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26].

HER2 /CEP17

ανιχνευτές αγοράστηκαν από Vysis (IL, USA?. Cat # 30-171060).

MET

και

FGFR2

ανιχνευτές παρασκευάστηκαν με BAC επισήμανση (CTD-2270N20 και RP11-62L18, αντίστοιχα) DNA με Red-dUTP (Enzo Biochem, NY, USA?. Cat # 02N23- 050),

CEP10

-Spectrum Πράσινο και

CEP7

-Spectrum Πράσινη ανιχνευτές αγοράστηκαν από Vysis (Cat. # 32 με 112.010 και # 32-132007, αντίστοιχα) και να χρησιμοποιηθούν ως εσωτερικοί έλεγχοι για την

FGFR2

και

ΚΟΑ

ανιχνευτές

αξιολόγηση Παθολογίας σε βιοψίες

με βάση την H & amp?. χρώσης Ε, κάθε βιοψία με επαρκή καρκινικά κύτταρα (πάνω από 50 καρκινικά κύτταρα) ήταν αρχικά χαρακτηρίστηκε από έναν παθολόγο. Στη συνέχεια, το καθεστώς των βιοδεικτών, συμπεριλαμβανομένων IHC και χρώση FISH της ΚΟΑ, ATM, FGFR2 και HER2 αξιολογήθηκαν σε κάθε βιοψία. Ατομικές βαθμολογίες για κάθε βιοδείκτη δόθηκαν σε κάθε βιοψία (Σχήμα 1).

Αυτό είναι ένα παράδειγμα την περίπτωση που δείχνει την ατομική βαθμολογία δίνεται σε κάθε βιοψία για κάθε βιοδείκτη. Επιπλέον, η εικόνα δείχνει, επίσης, την ετερογένεια της κατάστασης των βιοδεικτών μεταξύ διαφορετικών βιοψίες για την ίδια υπόθεση.

Η

Σύμφωνα με MetMab δίκη στο GC (NCT01662869), για χρώση ΚΟΑ IHC, η βιοψία δείχνει IHC 3+ ορίζεται ως θετικός? για την αναγνώριση ΚΟΑ FISH, η βιοψία δείχνει

ΚΟΑ

αριθμό γονιδίων μέση αντίγραφο ≥ 5 ορίζεται ως θετική. Από την εν εξελίξει δίκη για άλλο αναστολέα ΚΟΑ, AZD6094 (NCT02449551), χρήσεις

ΚΟΑ

αριθμό γονιδίων μέση αντίγραφο ≥ 4 ως αποκοπεί για βραχίονα μόνο θεραπεία παράγοντα σε ασθενείς GC, θα διαιρεθεί περαιτέρω την ΚΟΑ FISH αρνητικό ομάδα σε δύο υποομάδες (

ΚΟΑ

γονίδιο αριθμητικό μέσο αντιγράφων ≥ 4 και & lt? 5 και

γονίδιο ΜΕΤ

μέσος αριθμός αντιγράφων & lt? 4). Για χρώση ATM IHC, η βιοψία δείχνει IHC 0 ορίζεται ως αρνητικό, σύμφωνα με Olaparib δίκη (NCT01063517). Για FGFR2 FISH, η βιοψία δείχνει

FGFR2

ενίσχυση του γονιδίου (αριθμητικό μέσο αντίγραφο ≥ 6) ορίζεται ως θετικό, σύμφωνα με μελέτες του AZD4547 (NCT01457846) και dovitinib (NCT01719549). Για HER2, η βιοψία δείχνει HER2 3+ κατά IHC ή HER2 IHC 2+ συν

HER2

ενίσχυση γονιδίου ορίζεται ως θετική σύμφωνα με ToGA δίκη (NCT01041404).

Για ΚΟΑ IHC, FISH ΚΟΑ, FGFR2 FISH και HER2, περιπτώσεις με

οποιαδήποτε

από τις βιοψίες που δείχνουν θετική ορίζονται ως θετικές περιπτώσεις. Για χρώση ΑΤΜ IHC, οι υποθέσεις με όλες τις βιοψίες που δείχνει αρνητική ορίζεται ως αρνητικό περιπτώσεις

Η ετερογένεια βαθμό αξιολόγησης

Μετά την επανεξέταση παθολόγο, ο βαθμός ετερογένειας βιοδεικτών προσδιορίστηκε σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια:.

Υψηλή ετερογένεια: & lt? 25% των βιοψιών με ΚΟΑ IHC 3+,

ΚΟΑ

ενίσχυση γονιδίου, ATM IHC 0,

FGFR2

ενίσχυση του γονιδίου, ή η θετικότητα HER2

Medium ετερογένεια:. 25% ~ 50% των βιοψιών με ΚΟΑ IHC 3+,

ΚΟΑ

ενίσχυση γονιδίου, ATM IHC 0,

FGFR2

ενίσχυση του γονιδίου, ή η θετικότητα HER2

Χαμηλή ετερογένεια:. ≥50% βιοψίες με ΚΟΑ IHC 3+,

ΚΟΑ

ενίσχυση γονιδίου, ATM IHC 0,

FGFR2

ενίσχυση του γονιδίου, ή η θετικότητα HER2.

Για ΚΟΑ IHC, FISH ΚΟΑ, FGFR2 FISH και η θετικότητα HER2, υπολογίστηκαν οι μέσες ποσοστά θετικών βιοψιών σε μια συγκεκριμένη περίπτωση μεταξύ των θετικών περιπτώσεων. Για υπολογίστηκε ΑΤΜ IHC, το μέσο ποσοστό των ATM IHC αρνητικές βιοψίες σε μια μεμονωμένη περίπτωση μεταξύ των περιπτώσεων με τουλάχιστον ένα ΑΤΜ αρνητική βιοψία. Τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% των παραπάνω μέσων τιμών εκτιμήθηκαν από bootstrapping.

Ψευδώς αρνητικό κίνδυνο εντοπισμού αξιολόγηση

Για κάθε βιοδεικτών και ένας προκαθορισμένος αριθμός των βιοψιών

ν

(0 & lt ? n & lt? μέγιστο αριθμό των βιοψιών από ένα δείγμα), όλα τα πιθανά σενάρια επιλογή

ν

βιοψίες από κάθε δείγμα και κάνοντας ένα καθορισμό του καθεστώτος του βιοδείκτη για το δείγμα με βάση το

n

επιλεγεί βιοψίες που δημιουργούνται υπολογιστικά.

Με βάση τα σενάρια που αναφέρονται παραπάνω, εκτιμήθηκαν οι κίνδυνοι ψευδών αρνητικών ανίχνευσης. Για ΚΟΑ IHC, FISH ΚΟΑ, FGFR2 FISH, και της θετικότητας HER2, ο κίνδυνος ψευδών αρνητικών ανίχνευσης με

ν

βιοψίες από κάθε δείγμα ορίστηκε ως τον αναμενόμενο αριθμό του λόγου μεταξύ του αριθμού των θετικών δειγμάτων που έχουν αρνητικές αποτελέσματα ανίχνευσης με

ν

βιοψίες και το συνολικό αριθμό των θετικών δειγμάτων. Για ΑΤΜ IHC, το ψευδώς αρνητικό κίνδυνο εντοπισμού με

ν

βιοψίες από κάθε δείγμα ορίστηκε ως η αναμενόμενη τιμή του λόγου μεταξύ του αριθμού των μη-αρνητικών δειγμάτων με όλες τις αρνητικές βιοψίες με

n

βιοψίες από κάθε δείγμα, και ο συνολικός αριθμός των ΑΤΜ μη αρνητικά δείγματα.

Όλοι οι υπολογισμοί ήταν ακριβής, εκτός από ATM IHC με μία βιοψία από κάθε δείγμα, λόγω του εξαιρετικά μεγάλου αριθμού των πιθανών σεναρίων. Για ΑΤΜ IHC με μία βιοψία από κάθε δείγμα, ο κίνδυνος ψευδών αρνητικών ανίχνευσης υπολογίζεται λαμβάνοντας ένα τυχαίο υποσύνολο των 30 μη-αρνητικά δείγματα χωρίς αντικατάσταση σε έναν χρόνο, υπολογίζοντας τον κίνδυνο ψευδώς αρνητικά ανίχνευσης στο υποσύνολο, επαναλαμβάνοντας τη διαδικασία 22.000 φορές και λαμβάνοντας ένα μέσο όρο των κινδύνων από ψευδώς αρνητικών ανίχνευσης από τις 22.000 τυχαία υποσύνολα. Επιπλέον, το 95% Διάστημα Εμπιστοσύνης αυτού του εκτιμώμενου κινδύνου αναφέρθηκε.

Αποτελέσματα

Επισκόπηση των αριθμών βιοψία GC σε κλινικά δείγματα

Σε αυτή την ομάδα, ο αριθμός των βιοψίας δείγματα από έναν ασθενή κυμαινόταν από 1 έως 9, με τη διάμεση τιμή των δύο συνολικών και θετικών βιοψιών (με κύτταρα όγκου) σε 4. τα θετικά βιοψίας αριθμοί ήταν ελαφρώς μικρότερη από το σύνολο των βιοψία αριθμούς. Θήκες με 3 ~ 4 και 5 ~ 6 θετικές βιοψίες αντιπροσώπευαν το 47% και 25% αντίστοιχα του συνόλου των δειγμάτων που συλλέχθηκαν (Εικόνα 2).

(Α) Κατανομή του συνολικού και θετικό αριθμό βιοψία. Σε αυτή την κινεζική ομάδα GC, συνολικής βιοψία αριθμοί κυμαίνονται από 1 έως 9, με ένα μέσο όρο 4. Θετική βιοψία (βιοψία με όγκο) είναι ελαφρώς χαμηλότερη από το συνολικό αριθμό βιοψία. (Β) Κατανομή θετικό αριθμό βιοψία. Πλειοψηφία των βιοψία αριθμοί χωρίζονται σε 3 ~ 4 (47%) και 5 ~ 6 (25%).

Η

βαθμού ετερογένεια και ψευδείς

αρνητική αξιολόγηση

Στις 18 ΚΟΑ IHC θετικών περιπτώσεων (Σχήμα 3Α), το 61% των περιπτώσεων έδειξαν χαμηλή ετερογένεια, ενώ το 33% παρουσίασε μέσο και 5,5% εμφάνισαν υψηλή ετερογένεια. Το μέσο ποσοστό της ΚΟΑ θετικών βιοψιών σε μια συγκεκριμένη περίπτωση, μεταξύ αυτών 18 θετικές περιπτώσεις ήταν 65.78% (95% CI: 52,14% -79,60%). Το ψευδώς αρνητικό ποσοστό ανίχνευσης ΚΟΑ εκτιμάται σε περίπου 3,39% με 4 βιοψίες και πλησίασε το 0% κατά τη δειγματοληψία 6 βιοψίες (Σχήμα 4Α).

διανομής ετερογένεια της έκφρασης της πρωτεΐνης ΚΟΑ (Α),

ΚΟΑ

αριθμού αντιγράφων μέσο όρο γονίδιο (Β), η έκφραση της πρωτεΐνης ΑΤΜ (C),

FGFR2

ενίσχυση (D), και η θετικότητα HER2 (Ε). AMP: ενίσχυση. AVG:. Μέσος αριθμός αντιγράφων

Η

Οι κίνδυνοι των ψευδώς αρνητικών ανίχνευσης μαζί με διαφορετικούς βιοψία αριθμούς στην ΚΟΑ IHC (Α), το ΚΟΑ FISH (Β), ATM IHC (C), FGFR2 FISH (D) , και HER2 (Ε). Σημείωση: * Εκτιμώμενο από αναδειγματοληψία, 95% CI:. 7,5% -20,94%

Η

Στις 13 ΚΟΑ FISH θετικό περιπτώσεις (Σχήμα 3Β), 77% των περιπτώσεων έδειξαν χαμηλή ετερογένεια, ενώ το 15% έδειξε μέσο και 8% εμφάνισαν υψηλή ετερογένεια. Το μέσο ποσοστό της ΚΟΑ FISH θετικό βιοψίες σε μια συγκεκριμένη περίπτωση, μεταξύ αυτών 13 θετικές περιπτώσεις ήταν 74,05% (95% CI: 57,53% -89,10%). Το ψευδώς αρνητικό ποσοστό ανίχνευσης ΚΟΑ FISH εκτιμήθηκε σε περίπου 3,30% με 4 βιοψίες και πλησίασε το 0% κατά τη δειγματοληψία 7 βιοψίες (Σχήμα 4Β). Επιπλέον, σημαντική συσχέτιση βρέθηκε μεταξύ βαθμολογίας ΚΟΑ IHC και ΚΟΑ αποτελέσματα FISH (p & lt? 0.01, κ = 0.62, ακριβής δοκιμασία του Fisher)

Στις 58 περιπτώσεις με τουλάχιστον ένα ΑΤΜ αρνητική βιοψία (Σχήμα 3C) , το 62% των περιπτώσεων έδειξαν χαμηλή ετερογένεια, ενώ το 35% παρουσίασε μέσο και 3,6% εμφάνισαν υψηλή ετερογένεια. Το μέσο ποσοστό των ATM IHC αρνητικές βιοψίες σε μια συγκεκριμένη περίπτωση, μεταξύ αυτών 58 περιπτώσεις ήταν 63,07% (95% CI: 54.93% -71.39%). Το ψευδώς αρνητικό ποσοστό ανίχνευσης ΑΤΜ IHC εκτιμήθηκε σε περίπου 0,19% με 4 βιοψίες, και πλησίασε 0% με 5 βιοψίες (Σχήμα 4C).

Στις 9 FGFR2 FISH θετικό περιπτώσεις, το 56% των περιπτώσεων έδειξαν χαμηλά ετερογένεια, ενώ το 33% παρουσίασε μεσαίες και 11% εμφάνισαν υψηλή ετερογένεια (Σχήμα 3D). Το μέσο ποσοστό FGFR2 FISH θετικό βιοψίες σε μια συγκεκριμένη περίπτωση, μεταξύ αυτών 9 θετικές περιπτώσεις ήταν 56.30% (95% CI: 36,85% -76,85%). Το ψάρι FGFR2 ψευδώς ποσοστό ανίχνευσης αρνητικών εκτιμήθηκε σε περίπου 3,70% με 4 βιοψίες και πλησίασε 0% με 6 βιοψίες (Σχήμα 4D).

Στις 32 HER2 θετικό περιπτώσεις, το 78% των περιπτώσεων έδειξαν χαμηλή ετερογένεια, ενώ το 22% παρουσίασε μέσο ετερογένεια και καμία από τις περιπτώσεις που έδειξαν υψηλή ετερογένεια (Σχήμα 3Ε). Το μέσο ποσοστό των HER2 θετικό βιοψιών σε μια συγκεκριμένη περίπτωση, μεταξύ αυτών 32 θετικές περιπτώσεις ήταν 75,16% (95% CI: 65,88% -85,11%). Το ποσοστό των λανθασμένων αρνητικών ανίχνευσης HER2 εκτιμήθηκε σε περίπου 0,21% με 4 βιοψίες και πλησίασε 0% με 5 βιοψίες (Σχήμα 4Ε).

Συζήτηση

ενδονεοπλαστική βιοδείκτη ετερογένεια έχει εδώ και καιρό ένα ζήτημα στην επιλογή των ασθενών για τις κλινικές δοκιμές και, ως εκ τούτου, η κατανόηση της ετερογένειας των όγκων είναι ζωτικής σημασίας για την επιτυχή ανάπτυξη της εξατομικευμένης βιοδεικτών (PHB) στρατηγική για την υγειονομική περίθαλψη. Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν ασχοληθεί μέχρι τώρα αυτό το πρόβλημα και δεν υπάρχει τυποποιημένη στρατηγική για τη μέτρηση του βαθμού ετερογένειας όγκου. Σε αυτή τη μελέτη, πήραμε μια νέα προσέγγιση με σκορ κάθε άτομο βιοψία και τον υπολογισμό του επιπέδου της ετερογένειας σε κάθε περίπτωση. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι τα υψηλά επίπεδα της ετερογένειας βρέθηκαν μόνο σε 0 ~ 11% του θετικού (ή αρνητικά για ΑΤΜ) περιπτώσεις, ενώ οι περισσότερες θετικές περιπτώσεις (56% ~ 78%) παρουσίασαν χαμηλή ετερογένεια, υποδεικνύοντας ένα σχετικά χαμηλό επίπεδο της ετερογένειας για επιλεγμένα βιοδεικτών μας σε αυτή την ομάδα των περιπτώσεων GC.

Επιπλέον, θα πραγματοποιηθεί επίσης ψευδώς αρνητικές εκτιμήσεις για κάθε βιοδείκτη για την εκτίμηση των ψευδώς αρνητικά ποσοστά που σχετίζονται με την είσπραξη διαφόρων αριθμών των βιοψιών. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι, όταν συλλέχθηκαν 3 ή περισσότερες βιοψίες, οι ψευδώς αρνητικά κίνδυνοι ήταν κοντά στο 5% για όλες τις ελεγχόμενες βιοδείκτες (7,14%, 5,16%, 0,86% και 1,41%, αντίστοιχα, για την αναγνώριση ΚΟΑ IHC, ΚΟΑ FISH, ATM IHC και HER2 ). Αυτός ο αριθμός (3-4 βιοψίες) είναι περίπου ισοδύναμο με το μέσο αριθμό των βιοψιών που συλλέγονται στην κλινική πρακτική για αυτή την ομάδα και ως εκ τούτου, δείχνει το σχετικά χαμηλό ψευδώς αρνητικά κινδύνου που συνδέεται με αυτούς τους βιοδείκτες στην ομάδα μας. Μια εξαίρεση ότι FGFR2 FISH παρουσίασαν υψηλότερο ποσοστό ψευδώς αρνητικών (12,2% ψευδώς αρνητικό ποσοστό για 3 βιοψίες), θα μπορούσε να οφείλεται στην περιορισμένη FGFR2 θετικά μέγεθος του δείγματος (9 θετικά δείγματα). Όταν ένα σύνολο 6 βιοψίες συλλέχθηκαν από έναν ασθενή, ο ψευδώς αρνητικά κίνδυνο για την αναγνώριση ΚΟΑ, ATM, FGFR2 και HER2 πλησίασε 0% σε αυτή την ομάδα. Τα αποτελέσματα αυτά παρέχουν ένα παράδειγμα του πώς η αύξηση της βιοψίας αριθμοί θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για την αντιμετώπιση της πρόκλησης της βιοδείκτη ετερογένεια στην ανάπτυξη κλινικών προσεγγίσεων επιλογή των ασθενών.

Λαμβάνοντας υπόψη τη σημασία της ακριβούς επιλογής των ασθενών σε κλινικές μελέτες, πιστεύουμε ακράδαντα ότι η επαρκής αντιμετώπιση βιοδείκτη ετερογένεια είναι κρίσιμη για την επιτυχία. Για παράδειγμα, MetMab έδειξε σημαντική βελτίωση τόσο επιβίωση χωρίς εξέλιξη (2,9 έναντι 1,5 μήνες) και τη συνολική επιβίωση (12,6 έναντι 3,8 μηνών) [27] σε μια φάση 2 μελέτη (NCT01590719) Ωστόσο, η βελτίωση αυτή δεν μεταφέρει με επιτυχία στη ρύθμιση φάσης 3 (NCT01662869). Αξίζει να σημειωθεί ότι, επιλέχθηκε ΚΟΑ πρωτεΐνης υπερέκφραση (από την IHC) ως ασθενής κριτήρια επιλογής [28]. Αν και ακόμα ένα θέμα συζήτησης, είναι πιθανό ότι η υπόσχεση της MetMab στη φάση 2, αλλά αποτυχία της φάσης 3 ήταν τουλάχιστον εν μέρει συνέπεια της ετερογένειας των όγκων, καθώς και η αδυναμία της στρατηγικής επιλογής του ασθενούς (IHC) να αντιμετωπίσει με σθένος η πρόκληση της ενδονεοπλαστική ετερογένεια στο GC.

Τέλος, έχουμε επίσης συγκριτικά το ποσοστό θετικότητας (ή ποσοστό αρνητικότητα για ΑΤΜ) των βιοδεικτών εντοπιστεί σε αυτήν την ομάδα των δειγμάτων βιοψίας με τα χειρουργικά δείγματα από προηγούμενες μελέτες μας ( Τραπέζι 1). Με την εξαίρεση των ΑΤΜ, τόσο βιοψίας και χειρουργικών δείγματα συλλέχθηκαν από το ίδιο τοπικό νοσοκομείο. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι αν και τα ποσοστά θετικότητας είναι υψηλότερα (για ΑΤΜ, τα ποσοστά είναι χαμηλότερα αρνητικότητα) σε δείγματα βιοψίας, τα συνολικά αποτελέσματα σε δείγματα βιοψίας ήταν παρόμοια με χειρουργική δείγματα. Αυτή η αύξηση σε ποσοστό θετικότητας (ή μείωση στο ρυθμό αρνητικότητα για το ATM) είναι πιθανόν εξηγείται από την ανίχνευση θετικών περιπτώσεων χρησιμοποιώντας πολλαπλές βιοψίες που είχαν χάσει τη χρήση προηγούμενων στρατηγικών δειγματοληψίας (δηλ. Χειρουργική εκτομές).

Η θετική /αρνητική τιμή για κάθε βιοδείκτη είναι συγκρίσιμη μεταξύ των δειγμάτων βιοψίας σε αυτή τη μελέτη και χειρουργικές δείγματα περίγραμμα σε προηγούμενες μελέτες μας, συμπεριλαμβανομένων ΑΤΜ [29] και άλλα βιοδεικτών [26]. Μια μικρή αύξηση σε θετικούς ρυθμούς για τους βιοδείκτες (ή μείωση σε αρνητικό ποσοστό για ΑΤΜ) παρατηρήθηκε, η οποία θα μπορούσε ενδεχομένως να εξηγηθεί από την ανίχνευση θετικών δειγμάτων που είχαν προηγουμένως χάσει κατά την ανάλυση των χειρουργικών δειγμάτων λόγω ενδονεοπλαστική ετερογένεια. Και οι δύο βιοψίας και χειρουργικά δείγματα συλλέχθηκαν από το ίδιο τοπικό νοσοκομείο [26], εκτός από τα ATM [29].

Η

Στο σύνολό τους, αυτή η μελέτη έχει αντιμετωπίσει την πρόκληση της ετερογένειας των όγκων από ένα καινοτόμο οπτική γωνία χρησιμοποιώντας βιοψίες ως δειγματοληπτική προσέγγιση του όγκου και δίνει επιμέρους βαθμολογίες των βιοδεικτών σε κάθε βιοψία. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ένα σχετικά χαμηλό επίπεδο ετερογένειας μεταξύ των βιοδεικτών που αναλύονται στην παρούσα κοόρτη. Παρ ‘όλα αυτά, ο βαθμός ετερογένειας εντός άλλων ομάδων ασθενών μπορεί να είναι διαφορετική και θα πρέπει να αναλυθούν για κάθε περίπτωση χωριστά. Επιπλέον, τα αποτελέσματα μας έδειξαν μια μείωση στο ποσοστό των ψευδώς αρνητικών ανίχνευσης που αντιστοιχεί με μία αύξηση του αριθμού βιοψία για όλες βιοδείκτες δοκιμάστηκαν εδώ, αποδεικνύοντας το πλεονέκτημα των πολλαπλών δειγματοληψία βιοψίας και χρησιμεύει ως παράδειγμα για την αντιμετώπιση ενδονεοπλαστική ετερογένειας με στατιστικές μεθόδους.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε AstraZeneca για τη χορηγία αυτή τη μελέτη.