Mouse

Αφηρημένο

φωτοανοσοθεραπεία (PIT) είναι μια νέα θεραπεία του καρκίνου που συνδυάζει την εξειδίκευση των αντισωμάτων για τη στόχευση όγκων με την τοξικότητα που προκαλείται από φωτοευαισθησίας μετά από έκθεση σε εγγύς υπέρυθρο (NIR) φως. Πραγματοποιήσαμε PIT σε ένα μοντέλο διαδίδονται γαστρικού καρκίνου περιτοναϊκή καρκινωμάτωση και παρακολουθείται η αποτελεσματικότητα με

in vivo

απεικόνιση φθορισμού GFP.

In vitro

και

in vivo

πειράματα διεξήχθησαν με HER2-εκφράζουν GFP που εκφράζουν, γαστρικού καρκίνου κυτταρική γραμμή (Ν87-GFP). Ένα συζυγές αποτελούμενο από ένα φωτοευαισθητοποιητή, IR-700, συζευγμένο με trastuzumab (TRA-IR700), ακολουθούμενη από NIR φως χρησιμοποιήθηκε για την τάφρο.

In vitro

ΡΙΤ αξιολογήθηκε με μέτρηση κυτταροτοξικότητας με νεκρούς χρώση και μείωση του φθορισμού GFP.

In vivo

PIT αξιολογήθηκε σε μια διάχυτη περιτοναϊκή μοντέλο καρκινομάτωση και ξενομόσχευμα πλευρό χρησιμοποιώντας μετρήσεις όγκου των όγκων και η ένταση του φθορισμού GFP.

In vivo

κατά του όγκου αποτελέσματα των PIT επιβεβαιώθηκαν από σημαντικές μειώσεις στον όγκο του όγκου (σε ημέρες 15, σ & lt? 0,0001 vs. ομάδα ελέγχου) και GFP ένταση φθορισμού (μοντέλο πλευρό: την ημέρα 3, ΡΙΤ αγωγή εναντίον ελέγχου p & lt? 0.01 και περιτοναϊκή διαδίδονται μοντέλο: την ημέρα 3 PIT αγωγή έναντι του ελέγχου, σ & lt? 0,05). Τα κυτταροτοξικά αποτελέσματα

in vitro

δείχθηκαν να είναι εξαρτώμενη από τη δόση φως και προκάλεσε ρήξη νεκρωτικές κυττάρων που οδηγεί σε απελευθέρωση GFP και μια μείωση στην ένταση φθορισμού

in vitro.

Έτσι, η απώλεια του φθορισμού GFP εξυπηρετούνται ως ένα χρήσιμο βιοδείκτη της κυτταρικής νέκρωσης μετά από PIT

Παράθεση:. Sato Κ, Choyke PL, Kobayashi η (2014) φωτοανοσοθεραπεία της γαστρικός καρκίνος περιτοναϊκή Καρκινωμάτωση σε ένα μοντέλο ποντικού. PLoS ONE 9 (11): e113276. doi: 10.1371 /journal.pone.0113276

Επιμέλεια: Ιρίνα Β Λεμπέντεβα, το Πανεπιστήμιο Columbia, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 2 Ιουλίου, 2014? Αποδεκτές: 21 Οκτ, 2014? Δημοσιεύθηκε: 17 Νοέμβρη 2014

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Οι συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το πρόγραμμα ΝΙΗ Τειχών και JSPs Research Fellowship. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

γαστρικού καρκινώματος προκαλεί περισσότερους από 740.000 θανάτους από καρκίνο που σχετίζονται με το χρόνο σε όλο τον κόσμο ιδιαίτερα στην Ασία [1] – [3]. Η πλειοψηφία των ασθενών με γαστρικό καρκίνο παρόν με τοπικά προχωρημένο, υποτροπιάζοντα ή μεταστατική νόσο απαγορεύουν θεραπευτική χειρουργική επέμβαση που ως επί το πλείστον διοικείται από μη-θεραπευτική αγωγή [1]. Η περιτοναϊκή καρκινωμάτωση και μετάσταση ήπατος είναι κοινά απειλητικές για τη ζωή εκδηλώσεις προχωρημένο στάδιο γαστρικού καρκίνου [1], [4]. Περιτοναϊκή καρκινωμάτωση εμφανίζεται επίσης σε ωοθηκών, appendiceal, του παχέος εντέρου, του παγκρέατος και του γαστρικού καρκίνου. Η πρόγνωση είναι καθολικά φτωχή και οι τοπικές θεραπείες είναι πάντα ανεπιτυχείς με υψηλά ποσοστά υποτροπής και τη νοσηρότητα που σχετίζεται με ασκίτη και απόφραξη του εντέρου. Συστημική θεραπεία είναι επίσης συνήθως ανεπιτυχής. Έτσι, οι νέες μεθόδους θεραπείας περιτοναϊκής καρκινωμάτωσης χρειάζεται.

φωτοανοσοθεραπεία (ΡΙΤ) είναι μια ειδική θεραπεία του καρκίνου νέο στόχο-κυττάρου που χρησιμοποιεί ένα σύζευγμα φωτοευαισθητοποιητού αντίσωμα (APSC) που ακολουθείται από το εγγύς υπέρυθρο (NIR) την έκθεση στο φως. Μια APSC αποτελείται από ένα μονοκλωνικό αντίσωμα καρκινικό κύτταρο-ειδικό (mAb) και ενός φωτοευαισθητοποιητή, IR700, το οποίο είναι ένα παράγωγο του πυριτίου-φθαλοκυανίνης ομοιοπολικά συζευγμένα με το αντίσωμα. Η APSC δεσμεύει μόρια στόχους στην κυτταρική μεμβράνη και στη συνέχεια επάγει σχεδόν άμεση νέκρωση των κυττάρων μετά από έκθεση σε φως NIR στα 690 nm.

In vitro

μελέτες έχουν δείξει PIT να είναι ιδιαίτερα κυττάρου-ειδική, ως εκ τούτου, μη-εκφράζοντα κύτταρα ακριβώς δίπλα στοχευόμενα κύτταρα δεν παρουσιάζουν τοξικές επιδράσεις [5]. Κύτταρα κατεργασμένα με ΡΙΤ υφίστανται ταχεία αύξηση του όγκου που οδηγεί σε ρήξη της κυτταρικής μεμβράνης, εξώθηση των περιεχομένων των κυττάρων εντός του εξωκυτταρικού χώρου, και μη αναστρέψιμη νέκρωση [6] – [8]. Τα αποτελέσματά μας και άλλοι δείχνουν ότι η κυτταροτοξικότητα που προκαλείται από PIT δεν στηρίζεται απόλυτα από αντιδραστικά είδη οξυγόνου ή την ύπαρξη μονήρους οξυγόνου καταστολείς [9]. Επιπλέον, η κυτταροτοξικότητα που προκαλείται από ΡΙΤ είναι κυρίως εντός της κυτταρικής μεμβράνης και όχι εντός των μιτοχονδρίων, όπως συμβαίνει με PDT.

Ενώ PIT οδηγεί σε ταχεία κυτταρική νέκρωση, ο συνολικός όγκος του όγκου δεν μπορεί να αλλάξει για αρκετές ημέρες. Αυτό συμβαίνει γιατί χρειάζεται τουλάχιστον αρκετές ημέρες για τα μακροφάγα να εισέλθουν, να επεξεργάζονται και να αφήσει την θεραπεία των όγκων. Ως εκ τούτου, νέες μεθόδους, πέρα ​​από τις μετρήσεις του μεγέθους, είναι απαραίτητες για την παρακολούθηση των επιπτώσεων της PIT. Οι πρωτεΐνες φθορισμού (ΠΠ) που χρησιμοποιούνται συνήθως για την οπτικοποίηση κυτταρικές διεργασίες [10], [11]. Ενώ οι περισσότεροι αποτελέσματα αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο σε διατήρηση της κυτταρικής μεμβράνης και την κατακράτηση του ΠΠ καθιστώντας φθορισμού μη ευαίσθητη σε κυτταρικό θάνατο [12], [13], σε ΡΙΤ, η ξαφνική ρήξη των κυτταρικών μεμβρανών έχει ως αποτέλεσμα την εξώθηση της κυτταροπλασματικής ΠΠ και ως εκ τούτου, μια σχετικά ταχεία ανάγνωση των νεκρών κυττάρων. Ένα πλεονέκτημα της ΠΠ για

in vivo

απεικόνισης είναι ότι δεν απαιτούν εξωγενή ενέσεις παραγόντων (όπως λουσιφερίνη στην περίπτωση της βιοφωταύγειας) και μπορεί να παρακολουθείται σε πραγματικό χρόνο [14] – [18]. Δεδομένου ότι απαιτούν γονίδιο επιμόλυνση, θα ήταν πιθανό μόνο να είναι χρήσιμη σε προ-κλινικές μελέτες.

Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε την αποτελεσματικότητα του PIT σε ένα μοντέλο ποντικού διαδίδονται περιτοναϊκής γαστρικού καρκίνου χρησιμοποιώντας in vivo GFP απεικόνιση φθορισμού για την παρακολούθηση της ανταπόκρισης.

Υλικά και Μέθοδοι

Αντιδραστήρια

τα υδατοδιαλυτά, παράγωγο πυριτίου-φθαλοκυανίνης, IRDye 700DX NHS εστέρα και IRDye 800 CW NHS εστέρα ελήφθησαν από LI-COR Bioscience (Lincoln, ΝΕ, USA). Το panitumumab, πλήρως εξανθρωπισμένο IgG

2 mAb κατευθύνεται έναντι EGFR, αγοράστηκε από Amgen (Thousand Oaks, CA, USA). Trastuzumab, 95% εξανθρωπισμένο IgG

1 mAb κατευθύνεται έναντι HER2, αγοράστηκε από την Genentech (South San Francisco, CA, USA). Όλα τα άλλα χημικά ήταν ποιότητας αντιδραστηρίου.

Σύνθεση IR700-συζευγμένου trastuzumab ή panitumumab και IR800-συζευγμένο trastuzumab

Η σύζευξη των βαφών με mAbs διεξήχθη σύμφωνα με μια προηγούμενη αναφορά [19]. Εν συντομία, panitumumab ή trastuzumab (1 mg, 6.8 nmol) επωάστηκε με IR700 NHS εστέρα (60,2 μg, 30.8 nmol) ή IRDye 800 CW NHS εστέρα (35,9 μg, 30.8 nmol) σε 0,1 mol /L Na

2HPO

4 (ρΗ 8.6) σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Το μίγμα καθαρίστηκε με στήλη Sephadex G50 (PD-10? GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA). Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με κιτ δοκιμασίας πρωτείνης Coomassie Plus (Thermo Fisher Scientific Inc, Rockford, IL, USA) με τη μέτρηση της απορρόφησης στα 595 nm με φασματοσκοπία (8453 Αξία Σύστημα? Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Η συγκέντρωση του IR700 ή IR800 μετρήθηκε αντίστοιχα με απορρόφηση στα 689 nm ή 774 nm με φασματοσκοπία για να επιβεβαιωθεί ο αριθμός των μορίων φθοροφόρου συζευγμένο σε κάθε mAb. Η σύνθεση ελέγχεται έτσι ώστε ο μέσος όρος των τεσσάρων μορίων IR700 και δύο μόρια IR800 ήταν δεσμευμένα με ένα αντίσωμα. Πραγματοποιήσαμε SDS-PAGE ως έλεγχος ποιότητας για κάθε προϊόν σύζευξης, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [19]. Έχουμε συντομεύσει IR700 συζευγμένο με trastuzumab ως TRA-IR700, να panitumumab ως παν-IR700 και IR800 συζευγμένο με trastuzumab ως TRA-IR800.

καλλιέργειας κυττάρων

κύτταρα Ν87-GFP που εκφράζουν σταθερά GFP είχαν αγοραστεί από ΚΑΤΑΠΟΛΕΜΗΣΗ ΤΟΥ ΚΑΡΚΙΝΟΥ (San Diego, CA, USA). έκφραση υψηλού GFP επιβεβαιώθηκε με την απουσία ενός παράγοντα επιλογής με 10 περάσματα. Για την αξιολόγηση της ειδικής θανάτωσης κυττάρου από PIT, 3Τ3 που εκφράζουν σταθερά DsRed (3Τ3 /DsRed) χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικός έλεγχος [5]. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε RPMI 1640 (Life Technologies, Gaithersburg, MD, USA) συμπληρωμένο με 10% βόειο εμβρυϊκό ορό και 1% πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη (Life Technologies) σε φιάλες καλλιέργειας ιστού σε ένα υγροποιημένο επωαστή στους 37 ° C σε ατμόσφαιρα 95 % αέρα και 5% διοξείδιο του άνθρακα

φθορισμού μικροσκοπία

Για την ανίχνευση του αντιγόνου-ειδικό εντοπισμό των συζυγών IR700 και την αλλαγή στην κυτταρική μορφολογία μετά ΡΙΤ, μικροσκοπία φθορισμού διεξήχθη (IX61 ή IX81.? Όλυμπος Αμερική, Melville, Νέα Υόρκη, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής). Δέκα χιλιάδες κύτταρα σπάρθηκαν σε πιάτα κάλυμμα υάλου πυθμένα και επωάστηκαν για 24 ώρες. Tra-IR700 συνέχεια προστέθηκε στο μέσο καλλιέργειας (άνευ ερυθρού φαινόλης) στα 10 μg /mL και επωάστηκαν στους 37 ° C για 6 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν με PBS? Ιωδιούχου προπιδίου (ΡΙ) (1:2000) ή Cytox Blue (1:500) (Life Technologies) προστέθηκε στο μέσο 30 λεπτά πριν από την ΡΙΤ να ανιχνεύσει τα νεκρά κύτταρα. Τα κύτταρα στη συνέχεια εκτίθενται σε φως NIR και λήφθηκαν σειριακές εικόνες. Μία ημέρα μετά την PIT, τα κύτταρα πλύθηκαν και επωάστηκαν με νέο μέσο μετά PIT (0,5 J /cm

2) και προστέθηκε πάλι ΡΙ. Για να εξασφαλιστεί ότι η ίδια περιοχή φωτογραφήθηκε σημάδια έγιναν σε κάθε πιάτο πολιτισμό για να δείξει όπου η απεικόνιση αποκτήθηκε. Το φίλτρο ορίστηκε για την ανίχνευση IR700 φθορισμού με ένα φίλτρο διέγερσης 590-650 nm, και μια ζώνη 665 – 740 nm περάσει φίλτρο εκπομπής. Η ανάλυση των εικόνων έγινε με το λογισμικό ImageJ (https://rsb.info.nih.gov/ij/).

κυτταρομετρίας ροής

φθορισμού από τα κύτταρα μετά από επώαση με παν-IR700 ή TRA-IR700 μετρήθηκε χρησιμοποιώντας κυτταρόμετρο ροής (FACS Calibur, BD Biosciences, San Jose, CA, USA) και λογισμικό CellQuest (BD Biosciences). Κύτταρα (1 χ 10

5) επωάστηκαν με κάθε προϊόν σύζευξης για 6 ώρες στους 37 ° C. Για την επικύρωση της ειδικής σύνδεσης του συζευγμένου αντισώματος, η περίσσεια αντισώματος (50 μg) χρησιμοποιήθηκε για να εμποδίσει 0,5 μg χρωστικής-αντισώματος συζυγείς [8].

In vitro ΡΙΤ

Εκατό χιλιάδες κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 24 φρεατίων και επωάστηκαν για 24 ώρες. Τα μέσα καλλιέργειας αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​μέσο καλλιέργειας που περιέχει 10 μg /mL του TRA-IR700 και τα κύτταρα επωάστηκαν για 6 ώρες στους 37 ° C. Μετά την πλύση με PBS, προσετέθη μέσο χωρίς ερυθρό φαινόλης καλλιέργειας. Στη συνέχεια, τα κύτταρα ακτινοβολούνται με NIR φως λέιζερ σε 685 – 695 nm μήκος κύματος (BWF5-690-8-600-0.37? B & amp?. W ΤΕΚ INC, Newark, DE, USA). Η πραγματική πυκνότητα ισχύος των mW /cm

2 μετρήθηκε με ένα οπτικό μετρητή ισχύος (PM 100, Thorlabs, Newton, NJ, USA).

Η κυτταροτοξικότητα δοκιμασία

Οι κυτταροτοξικές επιδράσεις της PIT με tra-IR700 προσδιορίστηκαν με κυτταρομετρία ροής χρώση ΡΙ, η οποία ανιχνεύει μειωμένη κυτταρικές μεμβράνες. Για τον προσδιορισμό κυτταρομετρίας ροής, τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν 1 ώρα μετά τη θεραπεία και πλένονται με PBS. ΡΙ προστέθηκε στο κυτταρικό εναιώρημα (τελική 2 μg /mL) και επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά, που ακολουθείται από κυτταρομετρία ροής.

Εκτίμηση της GFP έντασης φθορισμού in vitro

Εκατό χιλιάδες κύτταρα σπάρθηκαν σε πιάτα κάλυμμα υάλου πυθμένα και επωάζονται για 12 ώρες. Tra-IR700 συνέχεια προστέθηκε στο μέσο καλλιέργειας (άνευ ερυθρού φαινόλης) στα 10 μg /mL και επωάστηκαν στους 37 ° C για 6 ώρες. Τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS και αντικατασταθεί με ένα νέο, ερυθρό φαινόλης μέσο καλλιέργειας και της κάτω πλευράς του υάλινου καλύματος σημαδεύτηκε (για να προσδιοριστεί η θέση της παρατήρησης). Μετά PIT, τα κύτταρα επωάστηκαν και πάλι για 1 ημέρα. Μία ημέρα μετά την PIT, τα κύτταρα παρατηρήθηκαν και πάλι. Η ένταση GFP αξιολογήθηκε με συνολικό pixels με το ίδιο όριο στον ίδιο τομέα [20]. Η ανάλυση των εικόνων έγινε με το λογισμικό ImageJ (https://rsb.info.nih.gov/ij/).

φθορισμού από επεξεργασμένα κύτταρα μετρήθηκε επίσης χρησιμοποιώντας ένα κυτταρόμετρο ροής (FACS Calibur).

ζώων και του όγκου

Όλα

in vivo

διαδικασίες διεξάγονται σύμφωνα με τον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση Εργαστηριακών ζώων Πόρων (1996), το Εθνικό Συμβούλιο Ερευνών των ΗΠΑ, και που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης ΝΙΗ των ζώων. Έξι έως οκτώ εβδομάδων θηλυκά ομοζυγώτες αθυμικά γυμνά ποντίκια αγοράστηκαν από την Charles River (NCI-Frederick). Προκειμένου να αξιολογηθεί μόνο η άμεση κυττάρου όγκου θανάτωση επίδραση του

in vivo

ΡΙΤ, χρησιμοποιήθηκαν ανοσοκατεσταλμένους γυμνούς ποντικούς. Κατά τη διάρκεια των διαδικασιών, οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με ισοφλουράνιο. Δέκα εκατομμύρια κύτταρα Ν87-GFP εγχύθηκαν υποδορίως στη δεξιά ράχη των ποντικών. Για να προσδιοριστεί ο όγκος του όγκου, η μεγαλύτερη διαμήκης διάμετρος (μήκος) και η μέγιστη εγκάρσια διάμετρος (πλάτος) μετρήθηκαν με ένα εξωτερικό δαγκάνα. Οι όγκοι των όγκων με βάση τις μετρήσεις της δαγκάνας υπολογίστηκαν με τον ακόλουθο τύπο? όγκος του όγκου = μήκος Χ πλάτος

2 × 0.5. Οι όγκοι φθάνοντας περίπου 100 mm

3 σε όγκο επιλέχθηκαν για τη μελέτη. Για να μετρηθεί GFP φθορισμός μετά ΡΙΤ, δέκα εκατομμύρια κύτταρα Ν87-GFP εγχύθηκαν υποδορίως σε δύο ραχιαίου των ποντικών. Για το διαδίδονται περιτοναϊκή μοντέλο ποντικού καρκίνου, πενήντα εκατομμύρια κύτταρα Ν87-GFP με PBS (συνολικός 300 μL) ενέθηκαν εντός της περιτοναϊκής κοιλότητας.

In vivo φθορισμού απεικόνιση

In vivo

εικόνες φθορισμού ελήφθησαν με το Μαργαριταρένιο Imager (LI-COR Bioscience) για την ανίχνευση IR700 /φθορισμού IR800, και Maestro Imager (CRI, Woburn, MA, USA) για την GFP. Για GFP, χρησιμοποιήθηκαν ένα φίλτρο ζώνης πέρασμα από 445 έως 490 nm (διέγερση) και ένα μακρύ-pass φίλτρο μπλε πάνω 515 nm (εκπομπή). Το φίλτρο ρυθμιζόμενους εκπομπή αυτόματα παρενέβη σε βήματα 10 nm 500-600 nm για τα πράσινα σετ φίλτρων σε συνεχή έκθεση (500 msec). Οι εικόνες φθορισμού φασματική αποτελούνται από φασμάτων αυτοφθορισμού και τα φάσματα από GFP (Ν87-GFP όγκου), τα οποία στη συνέχεια αμιγή, με βάση το χαρακτηριστικό διάγραμμα φάσματος της GFP, χρησιμοποιώντας λογισμικό Maestro (CRI). Περιοχές ενδιαφέροντος (ROI που) ήταν το χέρι που είτε στον όγκο πλευρά ή πάνω από την κοιλιακή περιοχή ανάλογα με το μοντέλο και την ένταση φθορισμού μετρήθηκε [19].

Χαρακτηρισμός διαδίδονται περιτοναϊκή μοντέλο ποντικού

τα ποντίκια με είτε διαδίδονται καρκίνο του περιτοναίου (στις 6 εβδομάδες μετά την εμφύτευση των κυττάρων) ή όγκοι πλευρά (σε 7 ημέρες μετά την εμφύτευση των κυττάρων) εγχύθηκαν ενδοφλεβίως με 100 μα TRA-IR700 και tra-IR800. Μια μέρα μετά την ένεση, σειριακό εικόνες έγιναν με το Μαργαριταρένιο Imager για την ανίχνευση IR700 /φθορισμού IR800, και το Maestro για GFP. Λευκό φως εικόνες των ποντικών ελήφθησαν με ένα iPhone5 (Apple Inc., Cupertino, CA, USA).

In vivo PIT

Για να αξιολογηθεί η επίδραση της PIT στο μοντέλο πλευρό , Ν87-GFP ποντίκια που φέρουν όγκο χωρίστηκαν τυχαία σε 4 ομάδες των τουλάχιστον 10 ζώα ανά ομάδα ως εξής: (1) καμία αγωγή (έλεγχος)? (2) μόνο NIR έκθεση στο φως σε 50 J /cm

2 την ημέρα 1 και 100 J /cm

2 την ημέρα 2? (3) 100 μα TRA-IR700 ενδοφλεβίως, χωρίς έκθεση σε φως NIR? (4) 100 μα TRA-IR700 ενδοφλεβίως, NIR φως χορηγήθηκε σε 50 J /cm

2 την ημέρα 1 μετά την ένεση και 100 J /cm

2 την ημέρα 2 μετά την ένεση. Αυτές οι συνθήκες εφαρμόστηκαν κάθε εβδομάδα για μέχρι 3 εβδομάδες. Οι ποντικοί παρακολουθήθηκαν καθημερινά, και εικόνες φθορισμού ελήφθησαν αρχίζοντας 1 ημέρα πριν από PIT, και οι όγκοι των όγκων μετρήθηκαν τρεις φορές την εβδομάδα έως ότου η διάμετρος του όγκου έφθασε 2 cm, οπότε οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε ευθανασία με διοξείδιο του άνθρακα. Για την απεικόνιση φθορισμού, τα ποντίκια ενέθηκαν με 100 μα TRA-IR700 ή ακτινοβολημένα ως εξής: (1) φως NIR χορηγήθηκε στα 50 J /cm

2 την ημέρα 1 μετά την έγχυση και 100 J /cm

2 επί ημέρα 2 προς τα δεξιά του όγκου (2) κανένα φως NIR χορηγήθηκε στα αριστερά του όγκου που χρησίμευσε ως μάρτυρας. Έλεγχοι περιλαμβάνονται (1) μόνο NIR έκθεση στο φως σε 50 J /cm

2 την ημέρα 1 και 100 J /cm

2 την ημέρα 2 στα δεξιά του όγκου? (2) καμία επεξεργασία για την αριστερή όγκου

Για την αξιολόγηση διαδίδονται καρκίνο του περιτοναίου, τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε 4 ομάδες των 5 ζώων ανά ομάδα για τις ακόλουθες επεξεργασίες: (1). Καμία αγωγή (έλεγχος)? (2) μόνο NIR έκθεση στο φως σε 50 J /cm

2 την ημέρα 1 και 100 J /cm

2 την ημέρα 2? (3) 100 μα TRA-IR700 ενδοφλεβίως, χωρίς έκθεση σε φως NIR? (4) 100 μα TRA-IR700 IV, NIR φως χορηγήθηκε σε 50 J /cm

2 την ημέρα 1 και 100 J /cm

2 την ημέρα 2 μετά την ένεση.

Στατιστική Ανάλυση

τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσοι ± sem από ένα ελάχιστο τεσσάρων πειραμάτων, εκτός εάν υποδεικνύεται διαφορετικά. Οι στατιστικές αναλύσεις διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας ένα πρόγραμμα στατιστικής (GraphPad Prism? GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). Για πολλαπλές συγκρίσεις, χρησιμοποιήθηκε ένα μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης (ANOVA) με τη θέση δοκιμής (test Kruskal-Wallis με μετα-τεστ) και δοκιμή του Tukey. Η αθροιστική πιθανότητα επιβίωσης, που προσδιορίζεται εδώ ως η διάμετρος του όγκου παραλείποντας να φθάσει 2 cm, εκτιμήθηκε σε κάθε ομάδα με τη χρήση της ανάλυσης καμπύλης επιβίωσης Kaplan-Meier, και τα αποτελέσματα συγκρίθηκαν με την δοκιμασία log-rank και δοκιμή Wilcoxon. Μαθητή

t

δοκιμασία χρησιμοποιήθηκε επίσης για να συγκρίνει τα δύο

in vitro

μελέτη? p & lt? 0,05 θεωρήθηκε για να δείξει μια στατιστικά σημαντική διαφορά

Αποτελέσματα

Επιβεβαίωση του προφίλ έκφρασης των κυττάρων Ν87-GFP ως στόχο για PIT

Εξετάσαμε τα σήματα φθορισμού. του παν-IR700 και tra-IR700 δεσμεύεται στα κύτταρα Ν87-GFP με FACS. Μετά από 6 ώρες επώασης είτε με παν-IR700 ή TRA-IR700, κύτταρα Ν87-GFP έδειξε σταθερά υψηλότερη φωτεινότητα με tra-IR700 από pan-IR700 (Εικ. 1Α). Αυτά τα σήματα σχεδόν εξ ολοκλήρου μπλοκαριστεί από την προσθήκη περίσσειας trastuzumab ή panitumumab, υποδεικνύοντας ειδική πρόσδεση και επιβεβαιώνει την υψηλότερη έκφραση του HER2 από EGFR [21]. Αυτά τα δεδομένα πρότειναν ότι HER2 ήταν η προτιμότερη στόχος για PIT σε κύτταρα Ν87-GFP λόγω υψηλότερη έκφραση του.

(Α) Εκφραση του HER1 και HER2 σε κύτταρα Ν87-GFP εξετάστηκε με FACS. HER2 υπερεκφράζεται περισσότερο από HER1. Η ειδική σύνδεση καταδεικνύεται με το φράξιμο αντίσωμα. (Β) κύτταρα Ν87-GFP επωάστηκαν με TRA-IR700 για 6 ώρες και παρατηρήθηκαν με μικροσκόπιο (πριν και μετά την ακτινοβολία NIR φωτός? 2 J /cm

2). Νεκρωτικό θάνατο των κυττάρων παρατηρήθηκε κατά τη διέγερση με NIR φως (μετά από 30 λεπτά). Bar = 25 μm. χρώση ΡΙ έδειξε τη ζημιά μεμβράνη. (N = 4, * ρ & lt? 0.001, έναντι μη επεξεργασμένου ελέγχου, t test Student) βλάβη (C) Μεμβράνη που προκαλείται από ΡΙΤ μετρήθηκε με την καταμέτρηση νεκρών κυττάρων με τη χρήση χρώσης ΡΙ, οι οποίες αυξήθηκαν κατά έναν τρόπο που εξαρτάται από την δόση φωτός. (D) κύτταρα Ν87-GFP επωάστηκαν με TRA-IR700 για 6 ώρες και ακτινοβολείται με NIR-φωτός (0,5 J /cm

2). ένταση GFP-φθορισμού μειώθηκε σε νεκρά κύτταρα, αλλά παρέμεινε αμετάβλητη σε ζωντανά κύτταρα σε 1 ημέρα μετά την PIT (*). Bar = 200 μm. Η μαύρη γραμμή στο πάνω δεξιά γωνία ήταν ο δείκτης για τον προσδιορισμό της θέσης της παρατήρησης. (Ε) ένταση Μείωση GFP-φθορισμού στα 1 ημέρα μετά την PIT συνέβησαν κατά έναν τρόπο που εξαρτάται από την δόση φωτός (σύνολο εικονοστοιχείων φθορισμού GFP στον ίδιο) (n = 12 πεδία) (** Ρ & lt? 0,0001, έναντι μη επεξεργασμένου ελέγχου, t τεστ Student). (F) μειώνεται GFP ένταση φθορισμού που προκαλείται από PIT, όπως μετρήθηκε με FACS, επιβεβαιώνει NIR-φως δοσοεξάρτηση. (N = 4, *** P & lt? 0,0001, έναντι μη επεξεργασμένο μάρτυρα, του Student t test)

Η

Μικροσκοπίας των in vitro PIT

Serial μικροσκόπιο φθορισμού των κυττάρων Ν87-GFP. διεξήχθη πριν και μετά την τάφρο. Μετά από έκθεση σε φως NIR (cm

2 2 J /) κυτταρική διόγκωση, σχηματισμός κύστης και ρήξη του λυσοσώματος παρατηρήθηκαν, με αποτέλεσμα την εξώθηση του κυτταροπλάσματος εξωκυτταρικά (Εικ. 1Β). χρώση ΡΙ έδειξε βλάβη οξεία κυτταροτοξική μεμβράνη που προκαλούνται από PIT. Οι περισσότερες από αυτές τις κυτταρικές αλλαγές παρατηρήθηκαν μέσα σε 30 λεπτά από την έκθεση στο φως (Υποστηρικτικά βίντεο Πληροφορίες S1 και S2). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές αλλαγές ανιχνεύθηκαν σε EGFR-αρνητικούς 3Τ3 κύτταρα ακτινοβολούνται με φως NIR, υποδηλώνοντας ΡΙΤ επάγεται καμία ζημιά στα κύτταρα μη στόχους (Εικ. S1).

Αξιολόγηση της in vitro PIT επίδραση

για να ποσοτικοποιηθεί η επίδραση του

in vitro

ΡΙΤ, πραγματοποιήσαμε μια δοκιμασία κυτταροτοξικότητας που βασίζεται στην ενσωμάτωση των ΡΙ, η οποία κατέδειξε ότι ο κυτταρικός θάνατος αυξανόταν με την αύξηση της δόσης του φωτός (Σχ. 1 C). Καμία σημαντική κυτταροτοξικότητα ανιχνεύθηκε με NIR έκθεση στο φως ή TRA-IR700 μόνο. ​​

Αξιολόγηση με GFP φθορισμού in vitro μετά από PIT

Μια μέρα μετά την έκθεση στο φως NIR των 0,5 J /cm

2, περίπου το 50% των κυττάρων έδειξαν οξεία κυτταροτοξικότητα (Εικ. 1C), και η ένταση φθορισμού της GFP ήταν πολύ μειωμένη σε νεκρά κύτταρα (χρωματίστηκαν θετικά με ΡΙ), ενώ ο φθορισμός GFP διατηρήθηκε σε επιζώντα κύτταρα (Σχ. 1D). Αυτές οι μελέτες προτείνουν ότι GFP εξωθήθηκε από την κυτταρική μεμβράνη μετά τη θραύση. Προκειμένου να διερευνηθεί η μεταβολή του φθορισμού GFP, συγκρίναμε το συνολικό pixels GFP στον ίδιο τομέα πριν και μία μέρα μετά PIT (Εικ. S2). Η αναλογία φθορισμού GFP μειώνεται άμεσα με το φως της δόσης, ενώ καμία μείωση ανιχνεύθηκε με την έκθεση στο φως NIR ή TRA-IR700 μόνο (Εικ. 1 Ε). Τα αποτελέσματα αυτά επιβεβαιώθηκαν με ανάλυση FACS (Σχ. 1 F και Εικ. S3) και προτείνουν ότι PIT οδηγεί σε μείωση του φθορισμού GFP εξής νεκρωτικό κυτταρικό θάνατο σε 1 ημέρα μετά PIT με τρόπο που εξαρτάται από την δόση φωτός.

In vivo PIT μειώνει τον όγκο του όγκου σε μοντέλο ξενομοσχεύματος πλευρό

στη συνέχεια, εξετάσαμε την επίδραση της PIT

in vivo

σε όγκο πλευρά φέρουν τα ποντίκια (Εικ. 2Α). PIT επάγεται σημαντικές μειώσεις στον όγκο του όγκου (η = 10 σε κάθε ομάδα, * ρ = 0.0456 & lt? 0,05, δοκιμή του Tukey). Τέσσερα ποντίκια από δέκα στην ομάδα ΡΙΤ πλήρως θεραπευτεί με την κατεργασία (Σχ. 2Β). Η επιβίωση παρατάθηκε σημαντικά στην ομάδα ΡΙΤ συγκριτικά με την ομάδα ελέγχου (n = 10 σε κάθε ομάδα, ** ρ & lt? 0,0001, δοκιμή μακράς-rank και Wilcoxon τεστ) (Σχήμα 2C).. Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι PIT προκάλεσε σημαντική μείωση του όγκου και παρατεταμένη επιβίωση

in vivo

.

(Α) σχήμα PIT. (Β) ΡΙΤ οδηγεί σε Ν87-GFP μείωση του όγκου του όγκου πλευρό (n = 10 ποντίκια σε κάθε ομάδα θεραπείας? * Ρ = 0.0456 & lt? 0,05, έναντι APSC), δοκιμή Tukey με ANOVA). Η θεραπεία ενδείκνυται κάτω από το γράφημα. (Γ) Η επανειλημμένη PIT οδηγεί σε παρατεταμένη επιβίωση σε Ν87-GFP ποντικούς που φέρουν όγκο (η = 10 ποντίκια σε κάθε ομάδα θεραπείας, ** Ρ & lt? 0,0001), δοκιμή Long-rank και Wilcoxon τεστ). Πλήρης δολοφονία του όγκου επιτεύχθηκε για 4 ποντίκια του 10 στην ομάδα PIT μετά την επανάληψη της θεραπείας.

Η

GFP φθορισμού απεικόνισης μετά In vivo PIT στο μοντέλο ξενομοσχεύματος πλευρό

Για την παρακολούθηση

in vivo

ΡΙΤ, σε πραγματικό χρόνο απεικόνιση GFP έγινε σε ποντικούς με Ν87-GFP όγκους οι διμερείς πλευρό (Εικ. 3Α). φθορισμού GFP αποδεικνύεται φορτίο του όγκου και την ανταπόκριση σε PIT. φθορισμός GFP συσχετίστηκε με IR700 φθορισμό, οι οποίες μειώθηκαν ταχέως μετά PIT (Σχ. 3C). Σύνολο απεικόνισης φθορισμού (TFI) της GFP σε ακατέργαστα όγκους (έλεγχος) και σε όγκους λήψη φωτός αυξήθηκε μόνο λόγω της ανάπτυξης του όγκου. Σε όγκους που έλαβαν θεραπεία με ΡΙΤ, TFI του GFP μειώθηκε σταδιακά στο κατεργασμένο όγκο, ενώ το αντίθετο του όγκου με τον ίδιο ποντικό (iv μόνο, χωρίς φως) έδειξαν αυξημένο φθορισμό GFP (Σχ. 3Β).

(Α) PIT σχήμα. εικόνες φθορισμού ελήφθησαν σε κάθε χρονικό σημείο όπως υποδεικνύεται. (Β)

In vivo GFP

φθορισμού σε πραγματικό χρόνο απεικόνιση των διμερών όγκου πλευρά φέρουν τα ποντίκια σε απάντηση PIT. Ο όγκος αντιμετωπίζεται από PIT έδειξαν μείωση του φθορισμού GFP μετά την PIT. (Γ) Η ποσοτική ανάλυση των εντάσεων φθορισμού GFP (συνολική ένταση /όγκου) σε Ν87-GFP όγκου ποντικών που φέρουν έδειξαν μειώθηκε σημαντικά φθορισμού μεταξύ της ομάδας ελέγχου και της ομάδας ΡΙΤ (η = 5 ποντίκια σε κάθε ομάδα, (* ρ = 0,0118 & lt? 0,05, έναντι ελέγχου) (* p = 0,0016 & lt? 0,01, έναντι NIR φως) (* p = 0,0012 & lt? 0,01, έναντι APSC) (** p = 0,0010 & lt? 0,01, έναντι του ελέγχου) (** p = 0,0003 & lt? 0.001, έναντι NIR φως) (** p = 0,0003 & lt? 0.001, έναντι APSC) (*** p = 0,0049 & lt? 0,01, έναντι του ελέγχου) (*** p = 0,0039 & lt? 0.01, έναντι NIR-φως) (*** ρ = 0.0012 & lt?. 0.01, έναντι APSC), δοκιμή του Tukey με ANOVA)

η

η ποσοτικοποίηση της συνολικής έντασης φθορισμού GFP αποκάλυψε ότι υπήρχε σημαντική μείωση μετά PIT (η = 5 ποντίκια σε κάθε ομάδα, * ρ = 0.0118 & lt? 0,05, ** ρ = 0.0010 & lt? 0,01, *** ρ = 0.0049 & lt? 0,01, δοκιμή Tukey με ANOVA) (Εικ. 3C) . Λόγω του όγκου εκ νέου ανάπτυξη, ο λόγος GFP αυξήθηκε και πάλι από την ημέρα 4 μετά ΡΙΤ, παρόλο που ήταν χαμηλότερη από ό, τι άλλες ομάδες ελέγχου. Η σε πραγματικό χρόνο απεικόνιση φθορισμού GFP και ποσοτικοποίηση της επέτρεψε σε πραγματικό χρόνο σύγκριση των ομάδων και έδειξε μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της τριτοβάθμιας φθορισμού GFP και την εξέλιξη του όγκου σε κάθε ομάδα.

Για να επιβεβαιώσετε αυτό το αποτέλεσμα,

ex vivo

ανάλυση εκτελέστηκε (Σχ. 4Α). Η επίδραση ΡΙΤ επιβεβαιώθηκε με μία μείωση στην IR700 φθορισμού (Σχ. 4Β). Υπό αυτές τις συνθήκες, η ένταση GFP του

ex vivo

όγκοι μειώθηκαν μετά την PIT (Εικ. 4Β). Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι σε πραγματικό χρόνο GFP ζωντανή απεικόνιση είναι σύμφωνη με το

ex vivo

απεικόνισης. Σχήμα PIT

(Α). εικόνες φθορισμού του

ex vivo

όγκοι ελήφθησαν σε κάθε χρονικό σημείο όπως υποδεικνύεται. (Β)

Ex vivo

φθορισμού απεικόνισης του Ν87-GFP όγκου σε απάντηση PIT. Οι μεταβολές φθορισμού παρατηρήθηκε με τόσο GFP και ο φθορισμός IR700 σε απόκριση σε λάκκο. εικόνων (C) φθορισμού λήφθηκαν σε κάθε χρονικό σημείο όπως υποδεικνύεται. (D)

In vivo

φθορισμού σε πραγματικό χρόνο απεικόνιση των διμερών όγκου πλευρά φέρουν τα ποντίκια σε απάντηση στις επανειλημμένες PIT. ένταση GFP-φθορισμού του όγκου ήταν σχεδόν εξαλειφθεί μετά το δεύτερο PIT.

Η

Όταν PIT επαναλήφθηκε εβδομαδιαία δραστηριότητα φθορισμού GFP τελικά εξαφανίστηκαν (Εικ. 4C και D), υποδεικνύοντας πλήρη θανάτωση του όγκου.

Χαρακτηρισμός του διαδίδονται περιτοναϊκή μοντέλο με απεικόνιση φθορισμού

για να προσδιοριστεί η φυσική ιστορία της διαδίδονται περιτοναϊκή μοντέλου, το σειριακό απεικόνιση φθορισμού έγινε. Οι εμφυτευμένων όγκων κατέδειξαν υψηλό σήμα φθορισμού με IR700, IR800, και GFP, τα οποία συν-εντοπισμένη με την άλλη (IR800 χρησιμοποιήθηκε για να αποφευχθεί η εντερική αυτοφθορισμό) (Εικ. 5). Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι αυτό το μοντέλο της διάχυτης καρκίνο του περιτοναίου μπορεί να παρακολουθείται σε ζωντανά ποντίκια χρησιμοποιώντας φθορισμό GFP.

In vivo

GFP φθορισμού απεικόνιση ενός Ν87-GFP όγκου πλευρό και διαδίδονται περιτοναϊκή μοντέλο. Colocalization της tra-IR700 και tra-IR800 επιβεβαιώθηκε στην περιτοναϊκή διαδίδονται όγκου με απεικόνιση φθορισμού. Ενδοφλέβια ένεση του παράγοντα μπορεί να φτάσει εξαπλωμένη όγκους στην περιτοναϊκή κοιλότητα. Για να αποφύγετε την αυτόματη φθορισμού στο έντερο, tra-IR800 χρησιμοποιήθηκε καθώς και tra-IR700.

Η

GFP φθορισμού απεικόνισης μετά In vivo PIT στην διάδοση περιτοναϊκή μοντέλο

Σε πραγματικό χρόνο απεικόνιση φθορισμού GFP πραγματοποιήθηκε με τον διαδίδονται περιτοναϊκή μοντέλο πριν και μετά την PIT (Σχ. 6Α). IR700 φθορισμού μειώθηκε μετά την PIT (Εικ. S4). GFP TFI αυξάνεται σταδιακά στις ομάδες μη-PIT λόγω της ανάπτυξης του όγκου. Στην ομάδα που έλαβε ΡΙΤ, GFP TFI μειώθηκε από 1 ημέρα έως 3 ημέρα μετά την PIT (Εικ. 6Β). Ποσοτικοποίηση της συνολικής έντασης φθορισμού GFP αποκάλυψε μια σημαντική μείωση μετά PIT (η = 5 ποντίκια σε κάθε ομάδα, * ρ = 0.0295 & lt? 0,05, ** ρ = 0.0355 & lt? 0,05, δοκιμή με post-test Kruskal-Wallis) (Σχ. 6C). Λόγω του όγκου εκ νέου ανάπτυξη, ο λόγος GFP αυξήθηκε εκ νέου από 4 ημέρα μετά ΡΙΤ, αν και διατήρησε χαμηλότερο από άλλες ομάδες, όπως παρατηρείται με το μοντέλο πλευρό όγκου. Έτσι, PIT προκάλεσε σημαντικές στοχευμένες όγκου σκοτώνοντας επίδραση τόσο στο πλευρό και διαδίδονται μοντέλα περιτοναϊκή όγκου και αυτό θα μπορούσε να παρακολουθείται με GFP TFI.

(Α) σχήμα PIT. Σε πραγματικό χρόνο απεικόνιση φθορισμού GFP ελήφθη σε κάθε χρονικό σημείο που υποδεικνύεται. (Β)

In vivo

σε πραγματικό χρόνο απεικόνιση φθορισμού σε απάντηση PIT. (Γ) Η ποσοτική ανάλυση των εντάσεων φθορισμού GFP έδειξαν σημαντικές μειώσεις από την ημέρα 3 μετά ΡΙΤ μεταξύ της ομάδας ελέγχου και της ομάδας PIT (η = 5 ποντίκια σε κάθε ομάδα, (* ρ = 0,0295 & lt? 0,05 vs. NIR φωτός) (** ρ = 0,0489 & lt? 0,05 έναντι ελέγχου) (** p = 0,0355 & lt?. 0,05 έναντι APSC), Kruskal-Wallis τεστ με post-test)

Η

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη καταδεικνύει ότι η επίδραση της ΡΙΤ μπορεί να παρακολουθείται με απεικόνιση φθορισμού GFP. Σε αντίθεση με την απόπτωση [12], [13], στην οποία GFP και συναφή φθορίζουσες πρωτεΐνες γίνει λόγω φωτεινότερο από τη μείωση του κυτταροπλασματική όγκο, κατά τη διάρκεια της νεκρωτικό κυτταρικό θάνατο με PIT, βλάβη της μεμβράνης οδηγεί σε απελευθέρωση των κυτταροπλασματικών περιεχόμενο, συμπεριλαμβανομένων GFP. Αυτό το μοναδικό χαρακτηριστικό της GFP και συναφών φθορίζουσες πρωτεΐνες τα καθιστά χρήσιμα βιοδείκτες για PIT.

In vivo

απεικόνιση φθορισμού GFP επιτρέπει την πλήρη διαδικασία της ογκογένεσης, θεραπεία, παλινδρόμηση, μετάσταση, ή επανάληψης, να να ανιχνευθεί στο ίδιο ζώο χωρίς επεμβατικές διαδικασίες [10], [11]. Με τη χρήση κυττάρων που εκφράζουν GFP κυτταροπλασματική, τα αποτελέσματα κατά των όγκων που προκαλούνται από ΡΙΤ θα μπορούσε να παρακολουθείται εύκολα λόγω εξώθηση του GFP από τα επεξεργασμένα κύτταρα.

Η έννοια της χρήσης στοχευμένη θεραπεία με φως είναι πάνω από τρεις δεκαετίες [22]. Λόγω της υδροφοβικότητας της παραδοσιακής φωτοδυναμική θεραπεία (PDT) ευαισθητοποιητές, η φαρμακοκινητική της αντισώματος συζευγμένου παραγόντων ΡϋΤ είναι εξαιρετικά περιορισμένη στην ικανότητά της να παρέχει προϊόντα σύζευξης με τον στόχο. Ως εκ τούτου, PDT ευαισθητοποιητές στοχευμένη με αντισώματα έχει μόνο επιτυχής σε μοντέλα όπου το προϊόν σύζευξης εγχύθηκε απευθείας εντός του όγκου ή του περιτοναίου [23]. Για να παραδώσει ένα συζευγμένο αντίσωμα-φωτοευαισθητοποιητή (APSC) συστηματικά, το φωτοευαισθητοποιητή θα πρέπει να είναι κατά προτίμηση υδρόφιλες. Το υδρόφιλο φθαλοκυανίνης που βασίζεται φωτοευαισθητοποιητή, IR700DX όταν συζευχθεί σε ένα αντίσωμα γίνεται ένα APC που μπορεί να χορηγηθεί ενδοφλεβίως. Αυτή η μορφή θεραπείας, που ονομάζεται ΡΙΤ, διαφέρει από την παραδοσιακή PDT όχι μόνο στην υδροφιλικότητα του φωτοευαισθητοποιητή, αλλά και στην εξάρτησή της από NIR φως για την ενεργοποίηση του φωτοευαισθητοποιητή. NIR φως έχει καλύτερη διείσδυση ιστού από το χαμηλότερο μήκος κύματος φωτός που χρησιμοποιούνται στην PDT. Αυτή η νέα γενιά των APC επιδεικνύει παρόμοιες ενδοφλέβια φαρμακοκινητική για γυμνά αντισώματα, με αποτέλεσμα την υψηλή στόχευση συσσώρευση όγκου με δεσμευτικό ελάχιστη μη-στόχου και μπορεί να εφαρμοστεί σε ένα ευρύ φάσμα αντισωμάτων, επιτρέποντας πολλές πιθανές εφαρμογές σε όλο το σώμα.

Παρά κυτταροτοξική χημειοθεραπεία, το αποτέλεσμα για το προχωρημένο στάδιο καρκίνου του γαστρικού παραμένει φτωχή. Επειδή, η πλειοψηφία των ασθενών με μεταστάσεις περιτοναϊκή παρόν με ύπουλο συμπτώματα όπως ανορεξία, απώλεια βάρους, φούσκωμα αίσθηση, πόνος ή διάγνωση αναιμίας συχνά καθυστερεί και οι τοπικές θεραπείες είναι πλέον εφικτή [24]. ΡΙΤ είναι μια πολλά υποσχόμενη μέθοδος για τη θεραπεία του καρκίνου διαδίδονται περιτοναϊκής. Προκειμένου να εκτελέσει αποτελεσματικά ΡΙΤ, ο APSC θα πρέπει να παρέχεται συστηματικά και το φως θα πρέπει να εφαρμοστεί επιλεκτικά στο περιτόναιο. Υπό αυτές τις συνθήκες υπάρχει επαρκής παροχή APSCs να οδηγήσει σε μείωση του διαδίδονται όγκων μετά λάκκο. Αυτή η διαδικασία μπορεί να παρακολουθείται σε πραγματικό χρόνο

in vivo

GFP φθορισμού απεικόνισης.

Υπάρχουν διάφοροι περιορισμοί σε αυτήν την μελέτη. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι δεν είναι όλες οι γαστρικών καρκίνων εκφράζουν HER2 και ως εκ τούτου, το TRA-IR700 μπορεί να μην είναι ομοιόμορφα αποτελεσματικές στην διαδίδονται γαστρικό καρκίνο.