Αφηρημένο

Κερσετίνη και 2-μεθοξυοιστραδιόλη (2-ΜΕ) είναι πολλά υποσχόμενη αντικαρκινική ουσίες. προηγούμενο μας

in vitro

μελέτη έδειξε ότι η κερκετίνη synergized με 2-μεθοξυοιστραδιόλη εμφανίζουν αυξημένη αντιπολλαπλασιαστική και προαποπτωτική δραστικότητα σε αμφότερες τις ανδρογονο-εξαρτώμενη LNCaP και ανεξάρτητου από ανδρογόνο κυτταρικές γραμμές καρκίνου ανθρώπινου προστάτη PC-3. Στην παρούσα μελέτη, καθορίζεται εάν ο συνδυασμός τους θα μπορούσε να αναστείλει LNCaP και PC-3 ανάπτυξη του όγκου ξενομοσχεύματος

in vivo

και εξερεύνησε τον υποκείμενο μηχανισμό. Ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη LNCaP και PC-3 κύτταρα εμβολιάστηκαν υποδορίως σε αρσενικούς BALB /c γυμνά ποντίκια. Όταν ξενομοσχεύματος όγκοι έφθασαν περίπου 100 mm

3, τα ποντίκια κατανεμήθηκαν τυχαία σε έλεγχο του οχήματος, κερσετίνη ή 2-μεθοξυοιστραδιόλη μεμονωμένα θεραπεία και θεραπεία συνδυασμού ομάδων. Μετά θεραπευτική παρέμβαση για 4 εβδομάδες, ο συνδυασμός θεραπείας της κερκετίνης και 2-ΜΕ i) αναστέλλεται σημαντικά τον καρκίνο του προστάτη ξενομοσχεύματος ανάπτυξη του όγκου κατά 46,8% για LNCaP και 51,3% για PC-3 σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου του οχήματος, πιο αποτελεσματικό από το quercetin (28,4% για LNCaP, 24,8% για PC3) ή 2-ΜΕ (32,1% για LNCaP, 28,9% για PC3) και μόνο? ii) ήταν καλά ανεκτή από BALB /c ποντίκια και δεν υπάρχουν εμφανείς τοξικές αντιδράσεις παρατηρήθηκαν? iii) οδήγησε σε υψηλότερες Bcl-2 αναλογία Βαχ /, που διασπάται έκφραση πρωτεΐνης κασπάσης-3 και ο ρυθμός της απόπτωσης? και iv) είχε ως αποτέλεσμα χαμηλότερες φωσφορυλιωμένη ΑΚΤ (ρΑΚΤ) επίπεδο πρωτεΐνης, αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα πρωτεΐνη και mRNA έκφραση, την πυκνότητα και μικροαγγειακή ρυθμό πολλαπλασιασμού από ενιαία φαρμακευτική αγωγή. Αυτά τα αποτελέσματα ήταν πιο αξιοσημείωτη σύγκριση με την ομάδα οχήματος. Ως εκ τούτου, ο συνδυασμός βαλανοκετόνης και 2-ΜΕ μπορεί να χρησιμεύσει ως μία νέα θεραπευτική κλινική θεραπεία κατέχουν το δυναμικό για την ενίσχυση του όγκου αποτέλεσμα επί του καρκίνου του προστάτη

in vivo

και μειώνοντας τη δόση και παρενέργειες είτε κερκετίνης ή 2-ΜΕ μόνος . Αυτές

in vivo

αποτελέσματα θα θέσει ένα ακόμη στέρεη βάση για τις μεταγενέστερες έρευνες σχετικά με αυτό το μυθιστόρημα θεραπευτική αγωγή σε ανθρώπινο καρκίνο του προστάτη

Παράθεση:. Yang F, Τραγούδι L, Wang Η, Wang J, Xu Ζ, Xing Ν (2015) Συνδυασμός κερσετίνη και 2-μεθοξυοιστραδιόλη ενισχύει την αναστολή του Ανθρώπου Καρκίνος του προστάτη LNCaP και PC-3 κύτταρα ξενομοσχεύματος ανάπτυξη του όγκου. PLoS ONE 10 (5): e0128277. doi: 10.1371 /journal.pone.0128277

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Antimo Migliaccio, ΙΙ Università di Napoli, Ιταλία

Ελήφθη: 9 Δεκ 2014? Αποδεκτές: 23 Απρίλη, 2015? Δημοσιεύθηκε: May 26, 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:.. το έργο υποστηρίζεται από το Πεκίνο Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών (. δεν 7122075)

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι η δεύτερη κύρια αιτία θνησιμότητας από καρκίνο στους άνδρες, με κατ ‘εκτίμηση 233.000 νέες περιπτώσεις και 29.480 θάνατοι στις Ηνωμένες Πολιτείες το 2014 [1]. Παρά το γεγονός ότι μπορεί να θεραπευτεί με τη ριζική προστατεκτομή ή ακτινοθεραπεία σε πρώιμο στάδιο, οι περισσότεροι ασθενείς θα υποφέρουν από τοπική υποτροπή και μακρινή μετάσταση αργότερα [2]. Μετά αποτελεσματική θεραπεία της ανδρογόνων στα πρώτα 1-3 χρόνια, αναπτύσσεται γενικά σε ευνουχισμό ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη (CRPC), που χαρακτηρίζεται με αυξημένη ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA), υψηλότερο ποσοστό μετάστασης, περισσότερο επιθετικότητα κλπ [3]. Συνδυασμός docetaxel και πρεδνιζόνη, το πρότυπο πρώτης γραμμής συστηματική χημειοθεραπεία για CRPC, δεν είναι θεραπευτική και παρατείνει μόνο το συνολικό χρόνο επιβίωσης για ένα σύντομο χρονικό διάστημα. Επιπλέον, κάνει τους ασθενείς υποφέρουν από σοβαρές παρενέργειες [4]. Ως εκ τούτου, είναι επιτακτική ανάγκη για την ανάπτυξη νέων φαρμακευτικών θεραπειών που μπορούν να ξεπεραστούν αυτές οι ελλείψεις που εργάζονται μεμονωμένα ή σε συνδυασμό για CRPC.

Κερσετίνη (3, 3 ‘, 4’, 5, 7-pentahydroxyflavone, Que), ένα βιοενεργό φλαβονοειδές άφθονη σε λαχανικά και φρούτα, ιδίως στα κρεμμύδια, τα μήλα, το τσάι και το κόκκινο κρασί, εξέθεσε πολλά υποσχόμενη ιδιότητα κατά του όγκου σε πολλές ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του προστάτη τόσο in vitro όσο και in vivo [5,6]. Ωστόσο, λόγω της χαμηλής βιοδιαθεσιμότητας, αντικαρκινική δράση του έχει περιοριστεί σε μεγάλο βαθμό. Για να ξεπεραστεί αυτό το ελάττωμα, η κερκετίνη έχει συνδυαστεί με άλλα αντικαρκινικά φάρμακα για να ενισχύσει την αναστολή διαφόρων όγκων συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη [6,7,8].

2-μεθοξυοιστραδιόλη (2-ΜΕ), ένα φυσικές ενδογενείς παράγωγο της 17β-οιστραδιόλης (Ε2) σπάνια παρουσιάζει οιστρογονική δραστικότητα, έχει αναφερθεί ότι επιδεικνύουν δράση κατά του καρκίνου σε ένα ευρύ φάσμα όγκων [9]. Όσον αφορά τον καρκίνο του προστάτη, 2-ΜΕ μπορεί να αναστείλει τόσο ανδρογόνο-εξαρτώμενη και ανεξάρτητη από ανδρογόνο καρκινικών κυττάρων in vitro και in vivo [10,11]. Παρ ‘όλα αυτά, 2-ΜΕ έχει το μειονέκτημα των περιορισμένων βιολογικών προσβασιμότητας και ταχείας αποικοδόμησης [12]. Έτσι ώστε να λύσει το πρόβλημα, του συνδυασμού φαρμάκων έχει προταθεί και ξύπνησε αυξημένη αντικαρκινική δράση με λιγότερες παρενέργειες σε σύγκριση με ενιαία φαρμακευτική θεραπεία [10,13].

Ως εκ τούτου, παρά την κοινή μειονέκτημα της χαμηλής βιοδιαθεσιμότητας για τόσο quercetin και 2-μΕ, φαίνεται αισιόδοξη, όταν συνδυάστηκαν με άλλες ουσίες, λόγω καρκίνου αντιμετωπίζονται αποτέλεσμα. Προηγουμένως, πραγματοποιήσαμε μια συνδυασμένη χρήση της κερκετίνης και 2-ΜΕ σε αμφότερες τις ανδρογονο-εξαρτώμενη LNCaP και ανδρογόνο-ανεξάρτητων PC-3 κυτταρικές γραμμές καρκίνου ανθρώπινου προστάτη και βρήκε μια συνεργική αντι-πολλαπλασιαστική και προαποπτωτική δράση σε σύγκριση με κερκετίνη ή 2-ΜΕ και μόνο [14] . Η παρούσα μελέτη ήταν η διερεύνηση της συνδυασμένης επίδρασης της quercetin και 2-ΜΕ σε LNCaP και PC-3 ξενομοσχεύματος όγκου in vivo και τη μελέτη του μηχανισμού για πρώτη φορά.

Υλικά και Μέθοδοι

Χημικά αντιδραστήρια

κερκετίνη, 2-μεθοξυοιστραδιόλη, υδροξυπροπυλ-β-κυκλοδεξτρίνης (ΗΡβΟϋ) και καρβοξυμεθυλο κυτταρίνη (CMC) αγοράστηκαν από την Sigma (St. Louis, ΜΟ, USA). RPMI-1640, 0.25% θρυψίνη-ΕϋΤΑ και εμβρυϊκό βόειο ορό είχαν πήρε από Hyclone (Logan, UT, USA), και Matrigel ήταν από την BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA).

κυτταρικές γραμμές και Cell Culture

καρκίνος του προστάτη Ανθρώπινο ανδρογόνο-εξαρτώμενη LNCaP και ανεξάρτητου από ανδρογόνο κυτταρικές γραμμές PC-3 (δύο συνήθως χρησιμοποιούνται κυτταρικές σειρές που έχει χρησιμοποιηθεί από πολλούς άλλους ερευνητές [15,16,17]), που ελήφθη από Πεκίνο Ένωση Medical College, καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI-1640 (Hyclone, Logan, UT) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Hyclone) και τοποθετήθηκαν σε επωαστήρα που περιέχει 95% αέρα και 5% CO

2 στους 37 ° C.

μελέτη των ζώων

Όλες οι διαδικασίες πείραμα που σχετίζονται με τα ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή των πειραμάτων σε ζώα και της Επιτροπής ηθική του Κεφαλαίου Ιατρικό Πανεπιστήμιο (Αριθμός άδειας: 2013-X-83). Αρσενικό BALB /c γυμνά ποντίκια ηλικίας 4-6 εβδομάδων δόθηκαν από το υπουργείο των πειραματόζωων του Κεφαλαίου Ιατρικό Πανεπιστήμιο και διατηρούνται σε παθογόνο περιβάλλον ελεύθερο με 12-ωρη φωτός /σκότους, ελεγχόμενη υγρασία και θερμοκρασία. Τα ποντίκια αφέθηκαν να συνηθίσουν στο νέο περιβάλλον για μία εβδομάδα πριν από την έναρξη του πειράματος.

Πριν από την επίσημη in vivo πειράματα, που αξιολόγησε την τοξικότητα των δύο συνδυασμό φαρμάκων και των οχημάτων που θα χορηγείται ταυτόχρονα με τη χρήση δύο ομάδες των ανδρών BALB /c γυμνά ποντίκια (η = 5 καθεμία). Διαλύτης για κερκετίνη ήταν 25% υδροξυπροπυλ-β-κυκλοδεξτρίνη (ΗΡβΟϋ, w /v σε αναπτυξιακής δυσπλασίας του ισχίου

2O) και για 2-μεθοξυοιστραδιόλη ήταν 25% ΗΡβΟϋ που περιέχει 0,5% καρβοξυμεθυλοκυτταρίνη (CMC, w /v σε αναπτυξιακής δυσπλασίας του ισχίου

2O ) [10,18]. ομάδα φαρμάκου χορηγήθηκαν τα δύο φάρμακα, δηλαδή διαλυμένο quercetin και 2-ΜΕ, και ομάδα ελέγχου φορέα δόθηκαν δύο χωρίς ναρκωτικά οχημάτων, ήτοι το 25% ΗΡβΟϋ περιέχουν ή δεν περιέχουν 0,5% CMC. Μετά τη λειτουργία, τοξική αντίδραση παρατηρήθηκε στα ποντίκια και των δύο ομάδων που αντιπροσωπεύονται ως κακή ψυχική κατάσταση, ελαφρά συστροφή του σώματος, σπασμοί και περιστασιακές μέτρια αιματουρία που ήταν σε σύμφωνα με την περιγραφή του Ehteda Α και μπορεί να αποδοθεί στην υψηλή συγκέντρωση ΗΡβΟϋ [10 ]. Για το λόγο αυτό, στη μεταγενέστερη πείραμα, ο συνδυασμός βαλανοκετόνης και 2-ΜΕ διεξήχθη με αυτόν τον τρόπο: quercetin δόθηκε την ημέρα 1, που ακολουθείται από 2-ΜΕ δεδομένη την ημέρα 2.

Ποντίκια εμβολιάστηκαν υποδορίως με 5 × 10

5 PC-3 κύτταρα αιωρούνται σε 100 μl PBS και 2 × 10

8 κύτταρα LNCaP αιωρούνται σε 100 μl matrigel και μίγματος PBS (1: 1) στην πίσω δεξιά. Όταν ξενομοσχεύματος όγκοι έφθασαν έναν όγκο περίπου 100 χιλιοστά

3, τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες (η = 8 εκάστη ομάδα) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία ενδοπεριτοναϊκά. Θεραπευτικό πρόγραμμα με βάση μας in vitro αποτελέσματα, προκαταρκτικά πειράματα και μελέτες πολλών άλλων ερευνητών ήταν ως ακολούθως: (1) Ομάδα ελέγχου: οχήματα του quercetin την ημέρα 1, όχημα του 2-ΜΕ την ημέρα 2, (2) ομάδα Quercetin αγωγή : 75mg quercetin /kg την ημέρα 1, όχημα των 2-ΜΕ την ημέρα 2, ομάδα (3) 2-ΜΕ αντιμετωπίζονται: όχημα της quercetin την ημέρα 1, 2-ΜΕ 150mg /kg την ημέρα 2, (4) ομάδα θεραπείας συνδυασμού : quercetin 75mg /kg την ημέρα 1, 2-ΜΕ 150mg /kg την ημέρα 2. Δύο ημέρες ήταν ένα κύκλο θεραπείας και η όλη διαδικασία επεξεργασίας κράτησε για 4 εβδομάδες [13,19,20,21,22,23]. Τα μεγέθη των όγκων παρακολουθούνται κάθε 2 ημέρες χρησιμοποιώντας παχύμετρο και ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο: L × S

2 χ 0,5, στις οποίες το L αντιπροσωπεύει την μεγαλύτερη διάμετρο και S αντιπροσωπεύει την πιο κοντή διάμετρο όγκου [10]. Τα ποντίκια ζυγίστηκαν, καθώς και. Στο τέλος της διαδικασίας επεξεργασίας, την 29η ημέρα, οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με χλωράλη ένυδρη και θυσιάστηκαν με αυχενική εξάρθρωση. Ξενομοσχεύματος όγκοι αφαιρέθηκαν γρήγορα και ζυγίστηκαν. Ένα μέρος από αυτό τέθηκε σε υγρό άζωτο αμέσως για μελλοντική ανάλυση βιοδεικτών και το άλλο μέρος σταθεροποιήθηκε σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη για ανοσοϊστοχημική ανάλυση. Ορός βιοχημικές παραμέτρους όπως ALT, AST, της κρεατινίνης και ουρίας που αντανακλάται τοξικότητα των φαρμάκων ανιχνεύθηκαν επίσης.

ανάλυση Western blot

ιστούς όγκων αναμίχθηκαν με RIPA ρυθμιστικού Λύσης (Applygen Inc., το Πεκίνο , Κίνα) που περιέχει κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης (Roche, Ελβετία). Τα κυτταρολύματα φυγοκεντρήθηκαν και το υπερκείμενο συλλέχθηκε. Μετά ποσοτικά χρησιμοποιώντας BCA κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης (Pierce, Rockford, USA), 80 μg πρωτεΐνη διαχωρίστηκε με 6% -12% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε φθοριούχο πολυβινυλιδένιο (PVDF) (Pall, ΝΥ, USA) το οποίο στη συνέχεια μπλοκαριστεί από 5% γάλα χωρίς λιπαρά και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα: Bcl-2 (1: 1000, Cell Signaling, Beverly, ΜΑ), Βαχ (1: 1000, Cell Signaling), κασπάση-3 (1: 1000, Cell Signaling), ΑΚΤ και ρΑΚΤ (1: 1000, Cell Signaling), VEGF (1: 500, Abcam) στους 4 ° C όλη τη νύκτα, GAPDH (1: 10.000, Sigma) σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα, που ακολουθείται από υπεροξειδάση horseradish συζευγμένη δευτερογενή αντισώματα (1: 2000, Cell Signaling) επώαση για άλλη 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Το συγκρότημα ζώνες αντιγόνου-αντισώματος ανιχνεύθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια κιτ (ECL-Plus, Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, USA). GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Αντίστροφη πραγματικό χρόνο αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης μεταγραφής-ποσοτική (RT-qPCR)

Ολικό RNA από ιστό όγκου εκχυλίζεται χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, USA) και την πρώτη -strand cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit (Roche, Germany) με ολιγο- (dT) αρχικά τεμάχια. Ακολουθίες του VEGF και β-ακτίνης εναρκτήρες είχαν ως εξής: Ανθρώπινο VEGF: Forward: 5′-TCTACCTCCACCATGCCAAGT-3 ‘, αντίστροφος: 5′-GATGATTCTGCCC TCCTCCTT-3’. β-ακτίνης: Forward: 5′-CGGGAAATCGTGCGTGAC-3 ‘, αντίστροφη: 5′-GTGGCCAT CTCTTGCTCGAA-3’. Ακρίβεια των PCR προϊόντων επιβεβαιώθηκε με αλληλούχιση του DNA.

Σύνολο 20 μL μίγματος αντίδρασης αποτελούνταν από 10 μL SYBR πράσινο κύριου μείγματος PCR (Applied Biosystems), 8 μΐ DDH

2O, 1 μΙ cDNA εκμαγείου και 1 μλ εκκινητές αντέδρασε ακολουθώντας τις συνθήκες θερμικού κύκλου: ένας κύκλος στους 50 ° C για 2 λεπτά, που ακολουθείται από 95 ° C για 10 λεπτά, 40 κύκλοι των 95 ° C για 20 δευτερόλεπτα και 60 ° C για 1 λεπτό, κάθε δείγμα ήταν εις τριπλούν (VIIa 7 Σύστημα PCR σε πραγματικό χρόνο, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). επίπεδο VEGF mRNA υπολογίστηκε σύμφωνα με την 2

-. Μέθοδος (ΔΔCt) και στη συνέχεια κανονικοποιούνται σε β-ακτίνης έκφραση

Ανοσοϊστοχημεία

ιστούς όγκων πρώτα σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη . Μετά παραφίνη απομακρύνθηκε χρησιμοποιώντας ξυλόλιο σειρά, τα πλακίδια επανυδατώθηκαν με σειρά αιθανόλης και επωάζονται με 3% Η

2O

2 προκειμένου να εξαλειφθεί η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης. Μετά ανάκτηση αντιγόνου, τα πλακίδια επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα CD31 (1:50, Abcam), CD34 (1: 100, Abcam), κασπάσης-3 (1: 500, Cell Signaling) και Κί67 (1: 500, Abcam) στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Οι τομές πλύθηκαν με PBS 3 φορές και επωάστηκαν με δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση αρμορακίας (1: 100, Cell Signaling) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Σήματα έγιναν ορατές με διαμινοβενζιδίνη αντίδρασης και αντίθετα με αιματοξυλίνη. Αριθμός CD31, CD34 βάφονται τα πλοία και κασπάσης-3, Ki67 θετικά κύτταρα αναλύθηκαν από 3 τυχαία πεδία υψηλής ισχύος της κάθε διαφάνεια. Τμήματα με πρωτογενές αντίσωμα απουσιάζει και την ίδια συγκέντρωση του δευτερογενούς αντισώματος χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος.

Στατιστική ανάλυση

δεδομένα Πείραμα εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± SD. SPSS 17.0 και Sigma Plot 10,0 χρησιμοποιήθηκαν για στατιστική ανάλυση και την πλοκή. Οι συγκρίσεις μεταξύ των ομάδων που υπέστησαν αγωγή και τον έλεγχο του οχήματος πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση Ανεξάρτητη t-test. P-value & lt? 0.05 θεωρήθηκε ότι είναι σημαντικά διαφορετική.

Αποτελέσματα

Συνδυασμός quercetin και 2-ΜΕ αυξημένη αναστολή του καρκίνου του προστάτη ξενομοσχεύματος ανάπτυξης όγκου

Αρσενικά BALB /c γυμνά ποντίκια με PC -3 και LNCaP κύτταρα ξενομοσχεύματος όγκοι υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα, Que ή 2-μΕ και ο συνδυασμός τους και η διαδικασία διήρκεσε 4 εβδομάδες. Όταν αφαιρέθηκαν όγκοι, ήταν προφανές ότι και οι δύο PC-3 και LNCaP ξενομοσχεύματος όγκων σε Que ή ομάδα θεραπείας 2-ΜΕ ήταν μικρότερες από τον έλεγχο, και η αναστολή ήταν πιο αξιοσημείωτη στις Que και 2-ΜΕ συν-θεραπεία ομάδα (Σχ 1Α και 2Α). PC-3 όγκους ξενομοσχεύματος σε Que, 2-ΜΕ και συνδυαστική θεραπεία ομάδες ανεστάλησαν κατά 24,8%, 28,9% και 51,3% αντίστοιχα, σε σύγκριση με το έκδοχο ελέγχου (Εικόνα 1Β και 1C), και για LNCaP, ο ρυθμός αναστολής ήταν 28,4%, 32,1 % και 46.8% αντίστοιχα (Σχήμα 2Β και 2C). Κατά τη διάρκεια της όλης διαδικασίας παρέμβαση, Que, 2-ΜΕ και ο συνδυασμός τους ήταν καλά ανεκτά από ποντικούς στη επιλεγμένη δόση, απώλεια βάρους και στις τρεις ομάδες θεραπείας δεν ήταν σημαντικά διαφορετικές από τον μάρτυρα (Σχήματα 1D και 2D). Δεν υπήρχε διαφορά στην καθημερινή κατανάλωση τροφής και νερού μεταξύ των ομάδων, καθώς και. Άλλες τοξική αντίδραση που σχετίζονται με τα ναρκωτικά και τα οχήματα όπως είναι η κακή κατάσταση μετάλλου, δεν παρατηρήθηκαν αιματουρία. Σημαντικές διαφορές δεν βρέθηκαν σε βιοχημικές παραμέτρους του ορού, όπως ALT, AST, της κρεατινίνης και ουρίας που απεικονίζουν την τοξικότητα του φαρμάκου στο ήπαρ και τους νεφρούς μεταξύ πριν και μετά τη θεραπεία.

(Α) PC-3 όγκους ξενομοσχεύματος ήταν μικρότερα σε ομάδα θεραπείας Que ή 2-ΜΕ από τον έλεγχο του οχήματος, και η αναστολή ήταν πιο αξιοσημείωτη στις Que και ομάδα 2-ΜΕ συν-θεραπεία. Το βάρος του όγκου (Β) και τον όγκο του όγκου (Γ) μειώθηκαν σημαντικά από τη θεραπεία συνδυασμού, πιο προφανής από Que ή 2-ΜΕ και μόνο. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο βάρος μεταξύ των ομάδων ποντικού (D). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD. * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο, # Ρ & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και της ομάδας αντιμετωπίζονται quercetin, ※ P & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και η ομάδα 2-ΜΕ αντιμετωπίζονται

Η.

(Α) όγκους LNCaP ξενομοσχεύματος ήταν μικρότερες σε Que ή 2-ΜΕ ομάδα θεραπείας από τον έλεγχο του οχήματος, και η αναστολή ήταν πιο αξιοσημείωτη σε ομάδα θεραπείας συνδυασμού. Que και 2-ΜΕ θεραπεία συνδυασμού βάρος μειώνεται όγκου (Β) και ο όγκος του όγκου (Γ) σε μεγάλο βαθμό, πιο αποτελεσματικό από Que ή 2-ΜΕ και μόνο. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση επί του βάρους ποντικού παρατηρήθηκε μεταξύ των ομάδων (D). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD. * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο, # Ρ & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και της ομάδας αντιμετωπίζονται quercetin, ※ P & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και η ομάδα 2-ΜΕ αντιμετωπίζονται

Η.

Επίδραση του quercetin με 2-μΕ θεραπείας συνδυασμού επί Βαχ και έκφραση της πρωτεΐνης Bcl-2

κηλίδας Western έδειξε ότι ο συνδυασμός του Que και 2-μΕ ενισχυμένη επαγωγή απόπτωσης με ρύθμιση προαποπτωτικά πρωτεΐνη Bax και αντι-αποπτωτική πρωτεΐνη Bcl-2 έκφρασης. Όπως σχήμα 3Α δείχνει, Bax αυξηθεί και Bcl-2 μειώθηκαν σε απλή ή συνδυασμένη θεραπεία ομάδες φάρμακο τόσο PC-3 και LNCaP ιστούς ξενομοσχεύματος όγκου. Επίδραση της απόπτωση που επάγεται προσδιορίζεται από την αναλογία του Βαχ /Bcl-2, η οποία ήταν αυξημένη σε Que ή 2-ΜΕ ομάδα αγωγής σε σύγκριση με τον έλεγχο, και η συνδυασμένη θεραπεία οδήγησε σε περαιτέρω αύξηση (σχήμα 3Β και 3C).

(Α) Western στύπωμα ανιχνεύθηκε Βαχ και έκφραση της πρωτεΐνης Bcl-2. (B, C) αναλογία Bax /Bcl-2 παριστάνεται ως μέσο ± SD (μέση εις τριπλούν). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο μάρτυρα, # Ρ & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και της ομάδας αντιμετωπίζονται quercetin, ※ P & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και η ομάδα 2-ΜΕ αντιμετωπίζονται

Επίδραση του quercetin με 2-μΕ θεραπείας συνδυασμού με την αναλογία της διασπασμένης κασπάσης-3 /κασπάσης-3

Επίδραση του quercetin και 2-μΕ σε διασπασμένο αναλογία κασπάσης-3 /κασπάσης-3 προσδιορίστηκε με κηλίδα western. Όπως φαίνεται στο Σχ 4Α και 4Β, διασπασμένη κασπάση 3 /κασπάσης-3 αναλογία αυξημένα σε quercetin ή 2-ΜΕ αγωγή PC-3 ιστό όγκου και αυτό το αποτέλεσμα ήταν περισσότερο εμφανής στην ομάδα συν-θεραπεία. Το ίδιο φαινόμενο παρατηρήθηκε σε ιστό του όγκου LNCaP (Σχ 4Α και 4C).

(Α) Western στύπωμα ανιχνεύθηκε διασπάται έκφραση πρωτεΐνης κασπάσης-3 και κασπάσης-3. (B, C) Διασπασμένη αναλογία κασπάσης-3 /κασπάσης-3 παριστάνεται ως μέσοι ± SD (μέση εις τριπλούν). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο μάρτυρα, # Ρ & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και της ομάδας αντιμετωπίζονται quercetin, ※ P & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και η ομάδα 2-ΜΕ αντιμετωπίζονται

η επίδραση της quercetin με τη θεραπεία με 2-μΕ συνδυασμό επί του πολλαπλασιασμού των όγκων (Ki67) και την απόπτωση (κασπάσης-3)

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση έδειξε ότι το ποσοστό του πολλαπλασιασμού των PC-3 και LNCaP καρκινικών ιστών μειώθηκαν κατά 36,2 % και 44.5% αντίστοιχα στις ομάδες συν-θεραπεία σε σύγκριση με τον έλεγχο (ρ & lt? 0,05 και 0,01 αντίστοιχα), περισσότερο προφανές από κερκετίνη (22,6% για PC-3, 27,3% για LNCaP) και 2-μΕ (26,7% για PC-3 , 32% για LNCaP) μόνη (Σχήμα 5Α-5C). Ενώ η κερκετίνη ή 2-ΜΕ μόνο θεραπεία αυξήθηκε σε μεγάλο βαθμό κασπάσης-3 θετικά κύτταρα (Κερσετίνη: 1,35 φορές για PC-3, 1.77 φορές για LNCaP 2-ME:. 1,8 φορές για PC-3, 1,95 φορές για LNCaP, σε σύγκριση με τον έλεγχο) , συν-θεραπεία οδήγησε σε περισσότερες της κασπάσης-3 θετικά κύτταρα (2,43 φορές για PC-3, 2.56 φορές για LNCaP, σε σύγκριση με τον έλεγχο) (ρ & lt? 0,01) (Σχ 5D-5F). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η κερκετίνη συνδυάσθηκε με 2-ΜΕ ανέστειλε πολλαπλασιασμό και προώθησε την απόπτωση των δύο PC-3 και LNCaP όγκου του ιστού σε ένα μεγαλύτερο βαθμό.

(Α, D) Ανοσοϊστοχημική ανίχνευση έδειξε Κί67 και κασπάσης-3 θετικά κύτταρα τόσο PC-3 και LNCaP ξενομοσχεύματος όγκου. Αριθμός Κί67 (B, C) και κασπάσης-3 (Ε, F) θετικά κύτταρα που παρουσιάζονται ως ± SD, αριθμός ήταν από τρία τυχαία πεδία υψηλής ισχύος ανά slide (οπτική μικροσκοπία, HPF, 400 Χ). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο, # Ρ & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και της ομάδας αντιμετωπίζονται quercetin, ※ P & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και η ομάδα 2-ΜΕ αντιμετωπίζονται

Η.

η επίδραση της quercetin με 2-μΕ θεραπεία συνδυασμού για φωσφατιδυλοϊνοσιτόλης 3-κινάση (PI3K) /AKT οδό σήμα

κηλίδα Western έδειξε ότι δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές στην έκφραση της πρωτεΐνης ΑΚΤ μεταξύ των ομάδων και στα δύο PC-3 και LNCaP ξενομοσχεύματος ιστού όγκου (Σχ 6Α, 6ϋ και 6Ε). Ότι, ρΑΚΤ πρωτεΐνη απορρίφθηκε σημαντικά στις ομάδες μονοθεραπείας, σε σύγκριση με την ομάδα χορηγήθηκε φορέας και η αναστολή ήταν πολύ πιο αξιοσημείωτο quercetin και 2-ΜΕ ομάδα που υπέστη αγωγή συνδυασμού (Σχήμα 6Α-6C).

(Α) και ρΑΚΤ έκφραση ΑΚΤ πρωτεΐνης εξετάστηκαν με κηλίδα western. Οι τιμές του ρΑΚΤ (Β, C) και ΑΚΤ (D, E) εκπροσωπείται ως μέσοι ± SD (τιμές από τρία ανεξάρτητα πειράματα). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο μάρτυρα, # Ρ & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και της ομάδας αντιμετωπίζονται quercetin, ※ P & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και η ομάδα 2-ΜΕ αντιμετωπίζονται

Επίδραση του quercetin και 2-ΜΕ συνδυασμένη θεραπεία για την πρωτεΐνη VEGF και της έκφρασης του mRNA

από το Σχ 7Α-7C, θα μπορούσε να φανεί ότι ο συνδυασμός βαλανοκετόνης και 2-ΜΕ σημαντικά μειωμένη έκφραση της πρωτεΐνης VEGF σε σύγκριση με ατομική θεραπεία, η οποία με τη σειρά τους εμφάνισαν ισχυρότερη αναστολή από τον έλεγχο του οχήματος. Όσο για τον VEGF mRNA, Q-PCR έδειξε ένα χαμηλότερο επίπεδο σε μεμονωμένες ομάδες θεραπείας από τον έλεγχο, και η επίδραση καταστολής ενισχύθηκε περαιτέρω σε ομάδα συν-θεραπεία, ανεξάρτητα σε PC-3 ή ιστούς όγκων LNCaP (ρ & lt? 0,01) (Εικ 7D και 7Ε ).

πρωτεΐνη VEGF (Α) και του mRNA (D, E) έκφραση εξετάστηκαν με κηλίδα western και ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR. Οι τιμές του VEGF πρωτεΐνης (Β, C) και mRNA (D, E) εκπροσωπείται ως μέσοι ± SD (τιμές από τρία ανεξάρτητα πειράματα). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο μάρτυρα, # Ρ & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και της ομάδας αντιμετωπίζονται quercetin, ※ P & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και η ομάδα 2-ΜΕ αντιμετωπίζονται

η επίδραση της quercetin με 2-μΕ θεραπεία συνδυασμού για μικροαγγειακή πυκνότητα

επίδραση Αναστολή στην μικροαγγειακή πυκνότητα αντιπροσωπεύεται από CD31 και CD34 σε PC-3 και LNCaP ξενομοσχεύματος ιστού του όγκου των quercetin και 2-μΕ ερευνήθηκε περαιτέρω με ανοσοϊστοχημεία. Σε ιστούς PC-3 όγκου, συνδυασμένη θεραπεία οδήγησε σε αξιοσημείωτη μείωση των CD31 και CD34 (60,87% και 56,1% αντίστοιχα) έκφραση σε comparision με ομάδα που υπέστη αγωγή οχήματος (Ρ & lt? 0,01), ενώ ο ρυθμός μειωθεί ήταν 26,09% για CD31, 39.02 % για CD34 σε quercetin εφαρμόζεται ομάδα και 43,38% για το CD31, 36.59% για CD34 σε 2-μΕ χρησιμοποιήθηκε ομάδα (Σχήμα 8Α, 8Β, 8D και 8Ε). Σε ιστούς όγκων LNCaP, CD31 και CD34 ήταν μειώθηκαν κατά 50% και 49,09% αντίστοιχα στην ομάδα θεραπείας συνδυασμού σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος (Ρ & lt? 0,01), και την ίδια στιγμή, η κερκετίνη ή 2-ΜΕ και μόνο επιφέρει και ρύθμιση προς τα κάτω των CD31 και CD34 (Quercetin: 27,45% για CD31, 30% για CD34 2-ΜΕ:. 29,41% για CD31, 32,73% για CD34). (Σχήμα 8Α, 8C, 8D και 8F)

(Α, D) ανοσοϊστοχημική εξέταση εκτίθενται CD31 και CD34 θετικών αγγείων σε δύο PC-3 και LNCaP ιστό ξενομοσχεύματος όγκου. Αριθμός CD31 (Β, C) και CD34 (Ε, F) θετικών αγγείων αντιπροσωπεύθηκαν ως μέσοι ± SD, αριθμός ήταν από τρία τυχαία πεδία υψηλής ισχύος ανά slide (οπτική μικροσκοπία, HPF, 400 Χ). * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο, # Ρ & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και της ομάδας αντιμετωπίζονται quercetin, ※ P & lt? 0,05 υποδηλώνει μία σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας θεραπείας συνδυασμού και η ομάδα 2-ΜΕ αντιμετωπίζονται

Η.

Συζήτηση και Συμπεράσματα

Με την αυξημένη επίπτωση και τη θνησιμότητα του καρκίνου του προστάτη και με βάση την τρέχουσα δυσμενή κατάσταση θεραπεία για τον ευνουχισμό ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη (CRPC) [1,4], ο συνδυασμός φαρμάκων έχει προσελκύσει μεγάλη προσοχή λόγω της αυξημένης πλεονέκτημα της αντικαρκινικό αποτέλεσμα, λιγότερο δόση του φαρμάκου, μειωμένες παρενέργειες, κλπ Εδώ, μετά από προηγούμενο in vitro έρευνα μας [14], πραγματοποιήσαμε μια μελέτη συνδυασμού quercetin με 2-μΕ να ενεργεί για ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη LNCaP και PC-3 ξενομοσχεύματος όγκου σε αρσενικούς BALB /c γυμνό ποντίκι και βρήκαν ότι η συνδυασμένη χρήση ενισχυμένη αναστολή της ανάπτυξης του ξενομοσχεύματος όγκου που αποδόθηκε στην επαγωγή της απόπτωσης, η αναστολή της φωσφατιδυλινοσιτόλης 3-κινάσης (ΡΙ3Κ) /σηματοδοτικό μονοπάτι Akt και την αγγειογένεση.

Κερσετίνη και 2-ΜΕ υπόσχονται αντι-καρκίνου του προστάτη ουσιών. Ως μονοθεραπεία, κερκετίνη έχει επαληθευθεί ότι αναστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη τόσο in vitro όσο και in vivo [5,6]. προηγούμενη μελέτη μας διαπίστωσε επίσης ότι η κερκετίνη ανέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων LNCaP μέσα κάτω ρύθμιση των υποδοχέων ανδρογόνων και επαγώγιμων γονιδίων του [24]. Αυτό που είναι περισσότερο, η κερκετίνη είναι πολύ χαμηλής τοξικότητας και σπάνια παράγουν οποιεσδήποτε παρενέργειες ακόμη και σε υψηλή δόση των 200 mg /kg χορηγήθηκε σε αρουραίους και ποντίκια SCID [19,20] και κλινικές δοκιμές έδειξαν ότι η συνολική κατανάλωση των 1000mg quercetin ανά ημέρα θα μπορούσε είναι καλά ανεκτές σε ανθρώπινα δεν σχετίζεται με οποιεσδήποτε παρενέργειες [25,26]. 2-ΜΕ, επίσης ανέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων καρκίνου του προστάτη και ξενομοσχεύματος όγκου δεν παράγουν αιματολογικές τοξικότητες και άλλα MTAs [10,11,13]. Υψηλή δόση των 150 mg /kg για τα ζώα σε προκλινικές μονοπάτια [13] και 1000 mg ή 1500 mg από το στόμα τέσσερις φορές την ημέρα για την ανθρώπινη σε φάση Ι και ΙΙ δοκιμές θα μπορούσαν να είναι καλά ανεκτή χωρίς προφανή τοξικά αποτελέσματα [27,28].

Ωστόσο, παρά αυτά τα ενθαρρυντικά αποτελέσματα για τον καρκίνο του προστάτη, quercetin και 2-ΜΕ και οι δύο έχουν το μειονέκτημα της χαμηλής βιοδιαθεσιμότητας που προεξοφλεί αντι-προστάτη επίδραση του καρκίνου τους. Ως εκ τούτου, έχουν συνδυαστεί με άλλους παράγοντες, για παράδειγμα, η κερκετίνη με πράσινο τσάι, διαιτητικές φυτοοιστρογόνα και ταμοξιφαίνη [6,20,29,30], 2-ΜΕ με αλβενδαζόλη, docetaxel και ευγενόλη [10,13,31], και όλα έδειξαν αυξημένη αντι-προστάτη επίδραση του καρκίνου ακόμα και σε χαμηλή δόση, η οποία σε μεγάλο βαθμό τρελός μέχρι την ανεπαρκή βιοδιαθεσιμότητα. Chang et al ανέφεραν ότι ο συνδυασμός βαλανοκετόνης και 2-ΜΕ αυξημένη κυτταροτοξική επίδραση σε κύτταρα ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (HCC) σε σύγκριση με κερκετίνη ή 2-ΜΕ και μόνο [32]. Πιθανολογείται ότι η ταυτόχρονη χρήση του quercetin και 2-ΜΕ θα δημιουργούσε μεγαλύτερη αντι-προστάτη επίδραση του καρκίνου με περισσότερη ασφάλεια και μικρότερη τοξικότητα. προηγούμενες in vitro πείραμα μας έδειξαν ότι η συνδυασμένη χρήση του quercetin και 2-ΜΕ εμφάνισαν συνεργιστική αναστολή του πολλαπλασιασμού και διέγερση απόπτωσης σε αμφότερες τις ανδρογονο-εξαρτώμενη LNCaP και ανδρογόνο-ανεξάρτητων PC-3 ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη κυτταρικών γραμμών σε σύγκριση με μόνο φάρμακο, και αποδόθηκε στην σύλληψη κυτταρικού κύκλου και μειώνοντας Bcl-2 αναλογία /Bax [14]. Αλλά είναι άγνωστο για την in vivo επίδραση στον καρκίνο του προστάτη και in vitro αποτελέσματα δεν μπορούν να εφαρμοστούν άμεσα στην κλινική. Ως εκ τούτου, συνδυάσαμε quercetin με 2-ΜΕ να ενεργεί για LNCaP και PC3 ξενομοσχεύματος όγκου και διαπιστώθηκε ότι η αύξηση συνδυασμός θεραπείας αναστάλθηκε ξενομοσχεύματος του όγκου κατά 46,8% για LNCaP και 51,3% για PC3 σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος, πιο αποτελεσματικό από το quercetin (28,4% για LNCaP, 24,8% για PC3) ή 2-ΜΕ (32,1% για LNCaP, 28,9% για PC3) και μόνο. Επιπλέον, ήταν καλά ανεκτή και κανένας προφανής τοξική αντίδραση παρατηρήθηκε στην όλη διαδικασία της θεραπείας. Είναι επαληθεύεται ότι ο συνδυασμός βαλανοκετόνης και 2-ΜΕ θα μπορούσε να αναστείλει την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη σε βιολογικό περιβάλλον σε ένα μεγαλύτερο βαθμό με μεγαλύτερη αποτελεσματικότητα και ασφάλεια.

στοχευμένη θεραπεία έχει θεωρηθεί κρίσιμη για χημειοθεραπευτική επίδραση των φυσικών προϊόντων και φυτοχημικά [33 ]. Κερσετίνη και 2-ΜΕ μπορεί να δράσει σε ορισμένες οδούς σήματος που οδηγεί σε αποτελεσματική αναστολή της ανάπτυξης του καρκίνου του προστάτη, ιδίως όταν συνδυάζονται.

οικογένειας Bcl-2 πρωτεϊνών, συμπεριλαμβανομένης αντιαποπτωτικό Bcl-2 και Bax προαποπτωτικά, είναι σημαντικός μεσολαβητής του μιτοχονδριακού απόπτωση μονοπάτι. Ενεργοποιημένος Βαχ βοηθά δευτερόλεπτα προέρχονται μιτοχόνδρια ενεργοποιητής της κασπάσης (Smac) και την απελευθέρωση κυτοχρώματος-c που με τον τρόπο αυτό ενεργοποιούν κασπάσης-3 σε διασπασμένη κασπάση 3 που οδηγούν σε απόπτωση κυττάρων, ενώ αντιαποπτωτικό πρωτεΐνη Bcl-2 παρεμποδίζει την ενεργοποίηση Βαχ με σύνδεση και απομόνωσης θα αφήσει τα καρκινικά κύτταρα ξεφύγουν από την απόπτωση [30,34]. Έτσι, η αναλογία Bax /Bcl-2 και το επίπεδο της διασπασμένη κασπάση 3 δείχνουν την θεραπευτική ανταπόκριση και είναι πολύ σημαντικά στην επαγωγή απόπτωσης [33]. Quercetin αυξημένη αναλογία Bax /Bcl-2 με 1,3 φορές του ανδρογόνου ευαίσθητων LAPC-4 κυττάρων καρκίνου του προστάτη ξενομοσχεύματος όγκου [6]. Kumar et al ανέφεραν ότι η θεραπεία quercetin αυξηθεί σημαντικά αναλογία Bax /Bcl-2 και δραστικότητα κασπάσης-3 σε κύτταρα PC-3 [30]. 2-ΜΕ ανέστειλε πολλαπλασιασμό και την απόπτωση που επάγεται από LNCaP και PC3 κύτταρα in vitro και in vivo μέσω φωσφορυλίωσης του Bcl-2 [35,36]. παρούσα μελέτη μας έδειξε ότι η κερκετίνη και 2-ΜΕ χρησιμοποιηθούν μόνα αυξημένη προ-αποπτωτικών πρωτεϊνών Bax, μειωμένη αντιαποπτωτικό πρωτεΐνη Bcl-2 και αυξημένα αναλογία Bax /Bcl-2 οδηγώντας έτσι σε κασπάσης-3 ενεργοποίησης, τα οποία με τη σειρά της απόπτωση που επάγεται από και ανέστειλε την ανάπτυξη ξενομοσχεύματος όγκου. Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν περαιτέρω με ανοσοϊστοχημική ανάλυση της κασπάσης-3 και θετικά κύτταρα Κί67. Επιπλέον, όλες αυτές οι επιδράσεις ενισχύθηκαν με συνδυασμό της κερκετίνης και 2-ΜΕ οδηγώντας σε αναστολή του όγκου σε μεγαλύτερη έκταση.

ΑΚΤ, μια πρωτεϊνική κινάση σερίνης /θρεονίνης που ανήκει στην οδό /ΑΚΤ επιβίωση ΡΙ3Κ, διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην επιβίωση των κυττάρων και την απόπτωση όταν ενεργοποιείται σε φωσφορυλιωμένη ΑΚΤ (ρΑΚΤ). ρΑΚΤ αυξορρυθμίζεται και παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό των ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του προστάτη [37]. Υψηλό επίπεδο ρΑΚΤ σχετίζεται με υψηλής ποιότητας και υψηλή βαθμολογία Gleason των όγκων του προστάτη και χρησιμεύει ως ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης της βιοχημικής υποτροπής [38]. Ως εκ τούτου, η ΑΚΤ έχει θεωρηθεί ως μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτικό στόχο για τον καρκίνο του προστάτη. Kim et al έδειξαν ότι η κερκετίνη ελαττωμένη pAkt πρωτεΐνη διευκόλυνση ρυμουλκουμένων επαγόμενη απόπτωση σε κυτταρικές σειρές LNCaP και DU145 [39]. Lee et al αποκάλυψε ότι η κερκετίνη μειωμένο επίπεδο ρΑΚΤ αποτέλεσμα την καταστολή της φωσφορυλιωμένης Bad και επηρεάζοντας σχέση μεταξύ Bcl-xL και Bax, η οποία στη συνέχεια αυξημένη δραστηριότητα του Βαχ και τελικά οδήγησε σε LNCaP κυτταρική απόπτωση [40]. 2-ΜΕ ευαισθητοποιημένα κύτταρα PC-3 με FAS απόπτωση μέσω αναστολής της ρΑΚΤ [41]. Στο πείραμά μας, quercetin και 2-ΜΕ μπορεί να μειωθεί αντίστοιχα ρΑΚΤ έκφραση πρωτεΐνης σε αμφότερα LNCaP και PC-3 ιστό όγκου ξενομοσχεύματος, αλλά ρΑΚΤ μειώθηκε κατά πολύ περισσότερο προφανώς όταν εφαρμόστηκε η θεραπεία συνδυασμού. Μέσω της αναστολής της οδού σήματος ρΑΚΤ, ανάπτυξη όγκου κατεστάλη πιο αποτελεσματικά.

Η αγγειογένεση αναφέρεται σε δημιουργία νέων αιμοφόρων αγγείων από προϋπάρχον αγγειακό σύστημα που εξασφαλίζει όγκους να αποκτήσουν αρκετό οξυγόνο και θρεπτικά συστατικά και ρυθμίζεται από πολλούς αγγειογενετικούς παράγοντες, μεταξύ των οποίων αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) είναι το πιο κρίσιμο όνη [42]. Αντικαρκινικά φάρμακα μπορούν να αναστέλλουν την αγγειογένεση με προς τα κάτω ρύθμιση του VEGF μέσω της οποίας αναστέλλεται η ανάπτυξη του όγκου. Pratheeshkumar et al βρήκαν ότι η κερκετίνη μειωμένα επίπεδα VEGF σε κύτταρα PC-3 και το σχηματισμό αιμοφόρων αγγείων αναστέλλεται τόσο in vitro όσο και in vivo. Με αυτόν τον τρόπο, κύτταρα PC-3 και ξενομοσχεύματος όγκοι ανεστάλησαν [43]. Quercetin επίσης σημαντικά μειωμένη έκκριση VEGF σε κύτταρα LNCaP [44]. Mabjeesh et al φωτίζεται ότι 2-ΜΕ αξιοσημείωτα μειωμένο επίπεδο VEGF με δοσοεξαρτώμενο τρόπο σε κύτταρα PC-3, και, στη συνέχεια, την αγγειογένεση και την ανάπτυξη όγκων ανεστάλησαν [45].