Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η 5η κύρια αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με θανάτους γυναικών. τα ποσοστά πενταετούς επιβίωσης για τη νόσο πρώιμο στάδιο είναι μεγαλύτερη από 94%, ωστόσο οι περισσότερες γυναίκες διαγιγνώσκονται σε προχωρημένο στάδιο με πέντε χρόνια επιβίωσης λιγότερο από 28%. Τα βελτιωμένα μέσα για την έγκαιρη ανίχνευση και αξιόπιστη παρακολούθηση των ασθενών που χρειάζονται για την αύξηση της επιβίωσης.

Μεθοδολογία και ΚΥΡΙΟΤΕΡΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Εφαρμόζοντας μάζας πρωτεομική φασματομετρία-based, επιδιώξαμε να διαφωτίσει ένα αναπάντητο ερώτημα της έρευνας βιοδείκτη όσον αφορά την ικανότητα να προσδιοριστεί το φορτίο του όγκου ανιχνεύσιμη από μια ωοθηκική πρωτεΐνη καρκίνος βιοδείκτη που προέρχονται απ ‘ευθείας από τα κύτταρα του όγκου. Από επιθετική ορώδες επιθηλιακών καρκίνων των ωοθηκών αντιπροσωπεύουν το μεγαλύτερο μέρος της θνησιμότητας, ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος χρησιμοποιώντας ανθρώπινα SKOV-3 ορώδες καρκίνο των ωοθηκών κύτταρα ιδρύθηκε για να διαμορφώσει την εξέλιξη σε διαδίδονται καρκινομάτωση. Χρησιμοποιώντας μια μέθοδο για εμπλουτισμό πρωτεΐνης χαμηλού μοριακού βάρους, ακολουθούμενη από υγρή χρωματογραφία και μαζική ανάλυση φασματομετρίας, ένα ανθρώπινο-ειδική πεπτιδική αλληλουχία του S100A6 ταυτοποιήθηκε σε ορούς από ποντικούς με προχωρημένο στάδιο πειραματικό καρκίνωμα των ωοθηκών. έκφραση S100A6 τεκμηριώθηκε σε ξενομοσχεύματα καρκίνου, καθώς και από τους ιστούς ασθενούς με καρκίνο των ωοθηκών. Διαμήκης μελέτη αποκάλυψε ότι η συγκέντρωση στον ορό S100A6 έχει άμεση σχέση με τις προβλέψεις του φορτίου του όγκου από ένα αντίστροφο ανάλυση παλινδρόμησης βαθμονόμησης των δεδομένων που λαμβάνονται από ένα απορρυπαντικό συμπληρωμένο αντιγόνο σύλληψης ανοσοδοκιμασία και σε ολόκληρο το ζώο βιοφωταύγειας οπτικής απεικόνισης. Το αποτέλεσμα από την ζωικό μοντέλο επιβεβαιώθηκε σε ανθρώπινες κλινικές υλικό όπως διαπιστώθηκε S100A6 να είναι σημαντικά αυξημένα στους ορούς από γυναίκες με προχωρημένο καρκίνο των ωοθηκών στάδιο σε σύγκριση με εκείνους με νόσο πρώιμο στάδιο.

Συμπεράσματα

S100A6 εκφράζεται σε ωοθήκης και άλλους ιστούς του καρκίνου, αλλά δεν έχει τεκμηριωθεί προηγουμένως σε ορούς ασθένεια καρκίνου των ωοθηκών. S100A6 βρίσκεται στον ορό σε συγκεντρώσεις που συσχετίζονται με πειραματικά φορτίο του όγκου και με το στάδιο της κλινικής νόσου. Τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι S100A6 μπορεί να αποδειχθεί χρήσιμη στην ανίχνευση ή /και την παρακολούθηση του καρκίνου των ωοθηκών, όταν χρησιμοποιείται σε συνεννόηση με άλλους βιοδείκτες

Παράθεση:. Wei BR, Hoover SB, Ross MM, Zhou W, Meani F, Edwards JB , et al. (2009) του ορού S100A6 Συγκέντρωση Προβλέπει Περιτοναϊκής φορτίο όγκου σε ποντίκια με επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών και σχετίζεται με προχωρημένο στάδιο σε ασθενείς. PLoS ONE 4 (10): e7670. doi: 10.1371 /journal.pone.0007670

Επιμέλεια: Ειρήνη Oi-Lin Ng, Το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 25 Ιουνίου του 2009? Αποδεκτές: 29 Σεπτέμβρη 2009? Δημοσιεύθηκε: 30, Οκτωβρίου 2009

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της δήλωσης Creative Commons Public Domain που ορίζει ότι, μόλις τοποθετηθεί στο δημόσιο τομέα, το έργο αυτό μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο σκοπό

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή υποστηρίζεται από το εσωτερικό ερευνητικό πρόγραμμα, το Κέντρο Έρευνας για τον Καρκίνο, Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, National Institutes of Health, Bethesda , Μέριλαντ, και με επιχορήγηση από το Instituto Superiore di Sanita, της Ιταλίας υπό την Oncoproteomics Προγράμματος ΗΠΑ-ΙΤΑΛΙΑ. BRW και ΔΔΚ είναι υπάλληλοι των επιστημονικών εφαρμογών International Corporation, Frederick, Inc., Frederick, Maryland, με σύμβαση με το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου εσωτερικό ερευνητικό πρόγραμμα (Βραβείο N01-CO-12400). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών (OVCA) αντιπροσωπεύει μόνο το 4% των περιπτώσεων καρκίνου στις γυναίκες, αλλά είναι η πέμπτη συχνότερη αιτία θανάτου από καρκίνο και η πιο θανατηφόρα γυναικολογική καρκίνου στον πληθυσμό αυτό [1]. Το 2008, υπήρχαν περίπου 21.650 νέες περιπτώσεις και 15.520 θάνατοι στις ΗΠΑ [1]. Σισπλατίνη, ένα χημειοθεραπευτικό με βάση την πλατίνα θεσπίστηκε το 1978, έχει γίνει ένα σημαντικό μέρος της OVCA χημειοθεραπευτικού σχήματος και έχει βελτιωθεί σε μεγάλο βαθμό το αποτέλεσμα της πρόωρης OVCA σταδίου [2]? το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για τους ασθενείς σταδίου Ι είναι μεγαλύτερη από 94% (http //: seer.cancer.gov/csr/1975_2006). Δυστυχώς, OVCA σπάνια διαγιγνώσκεται σε πρώιμο στάδιο, όταν η νόσος περιορίζεται και συχνά ασυμπτωματική. Σχεδόν το 70% των περιπτώσεων OVCA ανιχνεύονται σε διαδίδονται στάδια, δηλαδή τα στάδια III και IV, κατά την οποία το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών μειώνεται στο 30% ή και λιγότερο.

Μια επείγουσα OVCA ερευνητική προτεραιότητα είναι η ανακάλυψη και η επικύρωση των βιοδείκτες χρήσιμα για τη διάγνωση των πιο θανατηφόρα είδη των OVCA, τα οποία συχνά προχωρούν με ταχείς ρυθμούς [3]. Η μόνη διαθέσιμη FDA-εγκεκριμένο μη-επεμβατική διαδικασία για τη διάγνωση του καρκίνου των ωοθηκών μέχρι σήμερα είναι η μέτρηση των επιπέδων CA-125 στον ορό. Ακόμη και αν το 80% των ασθενών με προχωρημένο OVCA έχουν αυξημένα CA-125 στον ορό, υπάρχει ένα υψηλό ποσοστό ψευδώς θετικών που συνδέεται με τη δοκιμή CA-125 [4] – [6]. Φυσικές συνθήκες όπως η εγκυμοσύνη, φλεγμονώδης νόσος της πυέλου, καλοήθεις κύστεις, ινομυώματα της μήτρας, ή λοίμωξη μπορεί επίσης να αυξήσει τα επίπεδα CA-125 στον ορό [7], [8]. Άλλες κακοήθειες συμπεριλαμβανομένων του παγκρέατος, των πνευμόνων, του μαστού, του στομάχου και του κόλου καρκίνους έχουν επίσης αποδειχθεί ότι αυξάνουν ορού CA-125 [4], [8].

Η εμφάνιση της φασματομετρίας μάζας (MS) τεχνολογία πρωτεομικής έφερε νέα ευκαιρίες για την ανακάλυψη συγκεκριμένων πρωτεϊνικών δεικτών για την έγκαιρη ανίχνευση OVCA. Ανθρώπινος ορός στέκεται ως ένα ελκυστικό υπόδειγμα για την ανακάλυψη βιοδεικτών χρησιμοποιώντας MS επειδή απόκτηση δείγμα είναι ελάχιστα επεμβατική, και του ορού είναι το πρότυπο φυσιολογικό ρευστό που χρησιμοποιείται για διαγνωστικούς σκοπούς. Ωστόσο, η πολυπλοκότητα και μεγάλο δυναμικό εύρος της συγκέντρωσης πρωτεΐνης ορού κάνει ανάλυση του συνολικού proteome ορού προκλητική? Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης ορού ποικίλλουν & gt? 9 τάξεις μεγέθους και το 99% της συνολικής μάζας πρωτεΐνης ορού αποτελείται από μόνο περίπου 22 είδη πρωτεΐνη [9]. Τέτοιες προκλήσεις που συνδέονται με την πρωτεομική ορό για ανακάλυψη βιοδεικτών δεν θα είναι εύκολο να ξεπεραστούν [8], [10]. Ως εκ τούτου, επιπλέον πειραματικές προσεγγίσεις που ενσωματώνουν την τεχνολογία MS και την επεξεργασία του δείγματος ορού θα πρέπει να εξεταστούν προκειμένου να ανακαλύψει κλινικά σχετικές OVCA βιοδεικτών. Πράγματι, μέθοδοι όπως η εξάντληση των άφθονες πρωτεΐνες χρησιμοποιώντας στήλες συγγένειας και της πρωτεΐνης κλασματοποίηση έχουν χρησιμοποιηθεί για να αυξήσει την πιθανότητα της αποκάλυψης πρωτεϊνικών ειδών που προέρχονται από όγκους, τα οποία είναι συχνά σε χαμηλή αφθονία [11]. Μια προσέγγιση που κατέχουν σημαντικές δυνατότητες είναι η ανάλυση του χαμηλού ορού βάρους proteome /πεπτιδιώματος μοριακή [12]. Χαμηλού μοριακού βάρους (LMW) πρωτεϊνών και πεπτιδίων συχνά συνδέονται προς υψηλού μοριακού βάρους πρωτεΐνες ορού, παρατείνοντας έτσι ημιζωές του κλάσματος LMW σε κυκλοφορία [13] – [15]. Έτσι, ο ορός πρωτεώματος LMW αντιπροσωπεύει μία ελκυστική δεξαμενή όπου προέρχονται από όγκους χαμηλής άφθονες πρωτεΐνες και πεπτίδια μπορούν να συντηρηθούν καλύτερα και να ανιχνευθούν δυνητικά.

Η ανάπτυξη και η χρήση των ζωικών μοντέλων OVCA μπορούν να χρησιμεύσουν ως συμπληρωματική βοηθήματα για τον εντοπισμό και την επιβεβαίωση πρόβλεψης βιοδείκτες ορό. Η χρήση ζωικών μοντέλων έχει την προοπτική της ελαχιστοποίησης μερικά από τα βαθιά γενετικών και περιβαλλοντικών μεταβλητότητα που συναντώνται συχνά σε μελέτες της ανθρώπινης proteome όπου τα δείγματα αμερόληπτη ελέγχου είναι συχνά δύσκολο να ληφθούν [16]. Τέτοιες μελέτες χρησιμοποιώντας μοντέλα ξενομοσχεύματος ανθρώπινου καρκίνου έχουν δημοσιευθεί προηγουμένως [17] – [20]. Μεταμόσχευση ανθρώπινου καρκίνου σε ανοσοανεπαρκείς ποντικούς είναι ένα χρήσιμο μοντέλο για την ανακάλυψη της πρωτεομικής προφίλ ορού ή πλάσματος που συσχετίζονται με το φορτίο του όγκου. Αυτά τα μοντέλα έχουν το πρόσθετο πλεονέκτημα της παροχής μέσων για να καθορίσει εάν ο βιολογικός δείκτης ενδιαφέροντος προέρχεται απευθείας από το καρκινικό κύτταρο ή είναι ένα προϊόν της απόκρισης ξενιστή επειδή κάποιος μπορεί να εξετάσει την παρουσία όγκου που προέρχεται από κύτταρα του ανθρώπου ειδικές πρωτεΐνες. βιοδείκτες Target προσδιορίζονται από MS μπορεί στη συνέχεια να επικυρωθεί περαιτέρω σε τέτοια μοντέλα, αυξάνοντας έτσι την πιθανότητα απόκτησης ενός παθολογικά σχετικό δείκτη. Κατά συνέπεια, ένα ανθρώπινο μοντέλο ποντικού OVCA ιδρύθηκε σε μια προσπάθεια να διακρίνει τον καρκίνο των ωοθηκών που προέρχεται από πρωτεΐνες στον ορό χρησιμοποιώντας ανακάλυψη MS-based. Αυτή η προσέγγιση αποκάλυψε την παρουσία S100A6, εκτός από άλλες ανθρώπινες πρωτεΐνες, σε ορούς από ποντικούς με OVCA. Η έκφραση του S100A6 εξετάστηκε περαιτέρω σε ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές και ιστούς που προέρχονται από OVCA ασθενείς. Επιπλέον, ζητήθηκε ένα σύστημα να συσχετίσει ποσότητα S100A6 ορού και φορτίο όγκου στο μοντέλο. Οι τελευταίες προσπάθειες προκειμένου να ξεκινήσει η αντιμετώπιση σημαντικά αναπάντητα ερωτήματα σχετικά με το μέγεθος του όγκου είναι απαραίτητο για την

de novo

ανίχνευση της πρωτεΐνης υπογραφές της μάζας στο αίμα. Τέλος, προσπαθήσαμε να επικυρώσει το προφίλ έκφρασης των S100A6 σε ανθρώπινους ορούς χρησιμοποιώντας μια καλά ελεγχόμενη κλινική σύνολο μελέτη των γυναικών με πρώιμη και προχωρημένη καρκίνων των ωοθηκών στάδιο.

Αποτελέσματα

Μια γενική πειραματική προσέγγιση για την ανακαλύπτοντας πρωτεΐνες ορού LMW με ενδεχόμενη σημασία για την ανθρώπινη OVCA σε ένα μοντέλο ποντικού με τη χρήση MS απεικονίζεται στο Σχήμα 1. Μετά ενδοπεριτοναϊκή ένεση (ίρ) των ποντικών με ανθρώπινη ορώδες SKOV-3 κύτταρα OVCA ή ελέγχου φυσιολογικού ορού, αίματος ελήφθησαν δείγματα σε διάφορα χρονικά σημεία, ενώ νωρίς και προοδευτική καρκινωμάτωσης είχε διαμορφωθεί. Η πρωτεώματος ορός LMW αναλύθηκε για τον εντοπισμό πρωτεϊνών ειδικών για, ή πιο άφθονη σε, καρκίνο ποντικών που φέρουν. Η παρουσία του που προέρχεται από όγκο πρωτεΐνη S100A6 στον ορό μελετήθηκε περαιτέρω ως υποψήφια βιοδείκτη χρησιμοποιώντας αναλύσεις που βασίζονται σε αντισώματα. φορτίο του όγκου συσχετίστηκε με την παρουσία ή το επίπεδο της πρωτεΐνης ορού S100A6 στο μοντέλο, το οποίο με τον τρόπο αυτό θα μπορούσε να θεωρηθεί ως ένα υποθετικό βιοδείκτη. Η θεμέλια για περαιτέρω επικύρωση της κλινική σημασία αυτών των ευρημάτων για OVCA ασθενών που ανιχνεύοντας πιο άφθονη S100A6 σε ορούς από γυναίκες με προχωρημένο στάδιο της νόσου, σε σύγκριση με το αρχικό στάδιο της νόσου.

Για να διαπιστώσετε εάν ο καρκίνος που προέρχονται από πρωτεΐνες έχουν δυναμικό βιοδεικτών υποψήφιος, (α) ένα βιοφωταύγειας μοντέλο ξενομοσχεύματος, (Β) ECLISA, (C) κηλίδα Western, και (Δ) OVCA συστοιχίας ιστού ανοσοϊστοχημεία (IHC) χρησιμοποιούνται. Αυτό ακολουθήθηκε για S100A6 από την ανάλυση των ανθρώπινων ορών ασθενών.

Η

Ανακάλυψη OVCA Associated πρωτεΐνες ορού

Η πειραματική ασθένεια προχωρήσει από νεοπλασματική κυτταρική σπορά του περιτοναίου κατά τη διάρκεια της μεταμόσχευσης για να διαδοθούν καρκινομάτωση , μιμούμενη την εξέλιξη από περιφερειακή σε μακρινές προχωρημένο στάδιο OVCA στις γυναίκες. Όλα SKOV-3-εμβολιασθέντες ποντικούς παρουσίασαν πολλαπλές, μεταβλητώς μεγέθους διηθητικής μαύρισμα, στερεά οζίδια όγκων κατανεμημένα σε όλο το περιτόναιο από 4 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό (ρ.ί.). Αυτό συνοδεύτηκε από νεοπλασματικές συλλογές στην κοιλιακή κοιλότητα των πιο SKOV-3-εμβολιάζονται ποντίκια. Ιστολογικά, μεσεντερικοί μάζες αποτελούνται από ένα μορφολογικά μεταβλητής πληθυσμό νεοπλασματικών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών. Αυτά τα κύτταρα εμφανίστηκαν ως επεκτατική, θηλώδη αναπτύξεις με δοκίδες 2-3 κύτταρα παχύ, ή ως στερεές πυκνά κυτταρικά μαζών υποστηρίζεται από περιορισμένη ινώδη ιστό (Σχήμα 2Α και Β). Όλα τα ποντίκια ελέγχου φυσιολογικού ορού-εμβολιάστηκαν παραμείνει απαλλαγμένες από τη νόσο.

(Α) Εκπρόσωπος OVCA εκθέματα ανάπτυξη κυρίως των στερεών όγκων, με ενδείξεις θηλώδους προβλέψεις και κύστεις περιστασιακή λεπτό (bar = 25 μm). Ένθετο, υψηλότερη μικροφωτογραφία ανάλυση απεικονίζει κυβοειδές με πολυγωνική πλειομορφικές μικροκυστική επιθηλίου με anisokaryosis και άτυπες μιτώσεις των πυρήνων των ωοθηκών καρκινικών κυττάρων (bar = 50 μm). (Β) OVCA όγκου οζίδιο εμφύτευμα επί της μήτρας infundibulo-ωοθηκών σύνδεσμος (κεφαλή βέλους) δίπλα στην ωοθήκη (βέλος) (bar = 25 μm). εμφυτεύματα όγκου συνέβη σε ολόκληρη την περιτοναϊκή κοιλότητα, περι-ωοθηκών συνδετικούς ιστούς, και εισέβαλαν περιβάλλοντες ιστούς όπως τα έντερα, το συκώτι και το διάφραγμα. Αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η & amp? Ε). Χρωματισμένο, παραφίνη-ενσωματωμένες τομές ιστών

Η

ορών Δείκτης συλλέγονται από ποντίκια με τελικού σταδίου καρκινωμάτωσης στις 4 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό του 1 × 10

6 SKOV- 3 ανθρώπινα OVCA κύτταρα αναλύθηκαν με MS και σε σύγκριση με τον έλεγχο ορών ποντικού (πρώτη από τις 3 ομάδες της μελέτης των ζώων). Τα στοιχεία εξετάστηκαν για τον προσδιορισμό των πεπτιδίων /πρωτεϊνών με μεγαλύτερη αφθονία στον καρκίνο εναντίον δείγματα ελέγχου (φασματική ανάλυση καταμέτρηση). Συνολικά οι αναλύσεις απέδωσε ταυτοποίηση των περίπου 400 πεπτιδίων που αντιστοιχούν σε περίπου 300 πρωτεΐνες (συνδυασμένα αποτελέσματα αναζήτησης ανθρώπου και ποντικού βάση δεδομένων). Για τον προσδιορισμό των πρωτεϊνών με υψηλή πιθανότητα απόκλιση αφθονία, τα αποτελέσματα της φασματικής ανάλυσης καταμέτρηση της αναζήτησης ανθρώπινης βάση δεδομένων πρωτεϊνών διηθήθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό Ικρίωμα για να δώσει πρωτεΐνες με ένα ελάχιστο 10 MS /φάσματα MS ανατεθεί (σύνολο όλων των επαναληπτικές αναλύσεις) και μια στατιστικά σημαντική διαφορά στον αριθμό των εκχωρημένων φασμάτων (καρκίνος & gt? έλεγχος) όπως μετράται με t-test (ρ-τιμή & lt? 0,05), ή τουλάχιστον διαφορά 100% στα φασματικά μετρήσεις ((μετρήσεις του καρκίνου – μετρήσεις ελέγχου) /(μέσος όρος του καρκίνου και μετρήσεις ελέγχου) × 100%). Αυτά τα αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 1.

Η

Μετά την ταυτοποίηση των υποψηφίων αυτών διαφορικά άφθονη (καρκίνος & gt? έλεγχος) ανθρώπινες πρωτεΐνες, ανθρώπινες αλληλουχίες πεπτιδίου που προσδιορίζονται από τα MS /MS φάσματα στη συνέχεια αναζητηθεί σε μια βάση δεδομένων του ποντικιού για να να εξετάσει αν η πεπτιδική αλληλουχία ήταν ομόλογη μεταξύ ανθρώπου και ποντικού και να ελέγχει την καταλληλότητα της κλήσης ακολουθία (ή αν υπήρχε ασάφεια στο χαρακτηρισμό αμινοξύ). Οι πρωτεΐνες ταξινομήθηκαν από την κατοχή (1) ανθρώπινα-ειδικά πεπτίδια μόνο, (2) πεπτίδια ομόλογα με τόσο ανθρώπου και ποντικού, και (3), και τα δύο 1 και 2 (Πίνακας 1). Πρωτεΐνες που προσδιορίζονται από τα ανθρώπινα-ειδικά πεπτίδια είναι πιθανώς μεγαλύτερη αξία δεδομένου ότι πιθανότατα προήλθε από τα ξενομόσχευμα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα.

επιλέχθηκε S100A6 για περαιτέρω μελέτη. Εκτός από την εκπλήρωση των κριτηρίων για τη σημασία που καθορίστηκε για τη διαφοροποίηση του καρκίνου που σχετίζονται πρωτεΐνες ορού από δείγματα ελέγχου (Πίνακας 1), S100A6 θεωρήθηκε ως υποψήφιος για επιπλέον επικύρωση λόγω της αυξημένης έκφρασής του σε μία ποικιλία ανθρώπινων καρκίνων και σχετικά μικρό μέγεθος (10,5 kDa ). Στην τελευταία αυτή άποψη, S100A6 ήταν ελκυστική για τη δυνατότητά της να είναι μία ανέπαφη πρωτείνη που απέδωσε η στρατηγική διαχωρισμού LMW χρησιμοποιούνται για τον εμπλουτισμό για πρωτεΐνες με μοριακό βάρος μικρότερο από -25 kDa. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, ταυτοποιήθηκαν τρεις S100A6 πεπτίδια? δύο κοινές με τις εκδόσεις ανθρώπου και ποντικού αυτής της πρωτείνης (κόκκινο και μπλε γραμματοσειρές) ακολουθίες, και ένα πεπτίδιο μοναδική για την ανθρώπινη εκδοχή (πράσινο γραμματοσειρά) (Σχήμα 3Α). Το φάσμα MS /MS χρησιμοποιείται για να προσδιορίσει το μοναδικό ανθρώπινο πεπτίδιο, LMEDLDR, δείχνεται στο Σχήμα 3Β. Η αντίστοιχη αλληλουχία ποντικού έχει ένα ασπαρτικό οξύ στην τρίτη θέση υπολείμματος, αντί του γλουταμικού οξέος στην ανθρώπινη αλληλουχία. Η παρουσία αυτού του ανθρώπου-ειδικό πεπτίδιο επιβεβαιώθηκε στη συνέχεια σε μια δεύτερη ανάλυση MS /MS πραγματοποιούνται σε δείγματα ορού που συλλέγονται από τους ποντικούς που φέρουν όγκο στην τρίτη ομάδα των ζώων (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι).

(Α ) ευθυγραμμισμένο ανθρώπου και ποντικού S100A6 αλληλουχίες που απεικονίζει 3 διαφορές αμινοξέων μεταξύ των δύο ειδών (κάθετες γραμμές). Τρία πεπτίδια ανιχνεύθηκαν με LC-LTQ MS /MS από όγκο που φέρουν ορούς ποντίκι? Οι αλληλουχίες που παρουσιάζονται σε γραμματοσειρά χρώμα. Τα πεπτίδια σε κόκκινο και μπλε γραμματοσειρά είναι ομόλογα για ανθρώπινη και ποντικού, ενώ η αλληλουχία πεπτιδίου στο πράσινο γραμματοσειρά είναι μοναδική στην ανθρώπινη S100A6, λόγω της διαφοράς ένα αμινοξύ. (Β) MS /MS φάσμα του πεπτιδίου S100A6 ανθρώπινη-συγκεκριμένες, LMEDLDR. Αυτή η αλληλουχία δεν ανιχνεύτηκε σε φυσιολογικό ορό-εμβολιάστηκαν ποντίκια ελέγχου ορών.

Η

Έκφραση S100A6 σε OVCA

Ένα αντι-S100A6 ανοσοστύπωμα διεξήχθη για να επιβεβαιωθεί η παρουσία άθικτων S100A6 σε ποντίκι ορούς που χρησιμοποιούνται στο MS αναλύσεις. Χρησιμοποιώντας μια προσαρμοσμένη αντι-ανθρώπινο αντίσωμα S100A6, C1, μια ζώνη 10.5 kDa που αντιστοιχεί στο μοριακό βάρος του S100A6 ανιχνεύθηκε σε συνενωμένους ορούς που συλλέγονται 4 εβδομάδες ρ.ί. από ποντίκια που φέρουν όγκο που χρησιμοποιείται για την αρχική MS αναλύσεις (Σχήμα 4Α). S100A6 δεν ανιχνεύθηκε σε ορούς από ποντικούς με φυσιολογικό ορό ελέγχου συμφωνημένα-μελέτη. Το C1 αντι-S100A6 ανοσοστύπωμα εκτελέστηκε επίσης επί επιπλέον σειρά ορών δείγματος από άτομο SKOV-3 κύτταρα ένεση ζώα με πειραματικούς νόσο τελικού σταδίου, όπως επίσης και οι οροί από ζώα ελέγχου αφελείς? η ζώνη S100A6 10,5 kDa παρατηρήθηκε μόνο σε ορούς από ζώα με όγκους, όχι σε ορούς ποντικών ελέγχου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αποδεικτικά στοιχεία για την έκφραση της πρωτεΐνης S100A6 στην OVCA ξενομοσχεύματα και το ποντίκι κοιλιακά όργανα εξετάστηκε χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία (IHC). S100A6 ανοσοσήμανση παρατηρήθηκε σε ιστό όγκου, αλλά όχι σε περιβάλλοντα μεσεντέριο ή κοιλιακών οργάνων (έντερα, το συκώτι, τα νεφρά, την ουροδόχο κύστη, σπλήνα, πάγκρεας, της μήτρας και των ωοθηκών) (Σχήμα 4Β και C).

(Α) η ανάλυση ανοσοστυπώματος για την παρουσία S100A6 σε συγκεντρωμένων πρώτων ορούς από ποντικούς καρκίνο έδρανο (1) και τα ποντίκια ελέγχου αλατούχου διαλύματος (2). Οι οροί χρησιμοποιήθηκαν σε LMW προετοιμασία κλάσμα πρωτεΐνης για ανάλυση MS στην ανακάλυψη βιοδεικτών. (Β) OVCA ξενομοσχευμάτων εκφράζουν S100A6 όπως αναλύεται από την IHC. Όγκου ξενομοσχεύματος εμφύτευμα στην εντερική μεσεντέριο αποκαλύπτει S100A6 πρωτεΐνη περιορίζεται σε όγκο, με την έλλειψη ανοσοϊστοχημικής σε παρακείμενες εντέρων και του μεσεντερίου. (C) Serial τμήμα από τον ιστό φαίνεται στο Β, που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο της αντίδρασης IHC, αποκαλύπτει έλλειψη ανοσοδραστικότητας όταν πρωτογενές αντίσωμα S100A6 παραλείπεται από την IHC. Ανοσοϋπεροξειδάσης, αιματοξυλίνης (Μπαρ = 50 μm).

Η

Η πιθανή κλινική σημασία της εξεύρεσης S100A6 στους ορούς των ποντικών με SKOV-3 ξενομοσχεύματα ερευνήθηκε περαιτέρω εξετάζοντας την έκφραση S100A6 σε άλλες OVCA ανθρώπινης δείγματα ασθενών που προέρχονται από τη χρήση κηλίδος Western. Σε ζεύγη καρκινικών και συμφωνημένα προϊόντα λύσης κανονική ωοθήκη από 2 ασθενείς, S100A6 ανυψώθηκε σε ιστό καρκινώματος σε σύγκριση με συμφωνημένα μη νεοπλασματικών ιστών ωοθήκης της (Σχήμα 5Α και Β). Ανθρώπινη OVCA κυτταρικές γραμμές που παράγονται εκφράζονται διάφορα επίπεδα S100A6 (Σχήμα 5C και D). Όλα OVCA κύτταρα που δοκιμάστηκαν, εκτός από OVCAR-4 και η κυτταρική γραμμή που λαμβάνεται από καρκίνωμα ωοθηκών σαφής κυττάρων (ACI-89-2), που εκφράζεται S100A6 πάνω από το επίπεδο υποβάθρου (κανονική ωοθήκη).

λύματα (Α και Β) ζευγαρωμένο του OVCA (καρκίνος) και παρακείμενο φυσιολογικό ιστό ωοθήκης (φυσιολογικό) από 2 ασθενείς OVCA κηλιδώθηκαν για έκφραση S100A6. SKOV-3 κυτταρόλυμα χρησιμοποιήθηκε για σύγκριση. (Γ και Δ) έκφραση S100A6 σε κυτταρικές σειρές OVCA από NCI60 (SKOV-3, OVCAR-3, 4 και 5), καθώς και κυτταρικές σειρές που προέρχονται από OVCA ασθενείς (βλέπε επίσης Υλικά και Μέθοδοι).

Η

Για την περαιτέρω οριοθετηθούν διαφορική έκφραση S100A6 σε ανθρώπινους ιστούς των ασθενών OVCA, η εξέταση των κακοήθων, οριακά, καλοήθεις και μη καρκινικούς ιστούς των ωοθηκών πραγματοποιήθηκε με τη χρήση IHC. Τομές ιστού που στερούνται S100A6 ανοσοαντιδραστικότητα, παρόμοια με τις παρατηρήσεις στον αρνητικό έλεγχο αντίδραση IHC, θεωρήθηκαν αρνητικά. Ανοσολογική αντίδραση σαφώς πάνω αρνητικός μάρτυρας τοποθετήθηκε ως θετική. Δείγματα με μικρό αριθμό ασθενώς θετικά κύτταρα θεωρήθηκαν διφορούμενα. Μεταξύ 140 κακοήθη OVCA δείγματα, 116 (83%) ήταν θετικά για S100A6 ανοσοσήμανση (Πίνακας 2). Υψηλή S100A6 θετική επίπτωση (πάνω από 80%) παρατηρήθηκε σε όλες τις κακοήθεις τύπους OVCA με την εξαίρεση των σαφών κυτταρικού καρκινώματος, εκ των οποίων μόνο 2 από τα 4 δείγματα ήταν θετικά S100A6. Σχεδόν το 85% των καλοήθων αδενωμάτων έδειξαν θετική αντιδραστικότητα S100A6, καθώς και? η ένταση επισήμανσης ήταν συγκρίσιμη με εκείνη των κακοήθων OVCA. Δεν παρατηρήθηκε εμφανής σχέση μεταξύ της έντασης επισήμανση και το στάδιο του καρκίνου ή βαθμό. Αντιθέτως, η κανονική ωοθηκών ιστούς και μη νεοπλασματικό ιστό δίπλα σε όγκους παρουσίασαν περιορισμένη ή καθόλου επισήμανση S100A6. Αυτά τα αποτελέσματα, επιδεικνύοντας έκφραση S100A6 σε μια ποικιλία από ασθενή που προέρχεται επιθηλιακών καρκινικών κυτταρικών γραμμών και των ιστών των ωοθηκών, αποδεικνύουν ότι η έκφραση του S100A6 σε OVCA είναι αρκετά συχνή. Σε αυτό το πλαίσιο, η εύρεση πεπτιδική αλληλουχία ανθρώπινης-ειδική S100A6 σε ορό από ανθρώπινα ποντίκια OVCA φέρουν υποδεικνύει ότι μπορεί να έχουν S100A6 όφελος ως υποψήφια πρωτεΐνη για την παρακολούθηση OVCA. Επιπλέον, θετική έκφραση της S100A6 σε καλοήθεις και κακοήθεις OVCA, σε αντίθεση με την ουσιαστική ανυπαρξία του στην επιφάνεια των φυσιολογικών ωοθηκών, προτείνει S100A6 μπορεί να είναι κατάλληλο ως ένας δείκτης στη διαγνωστική απεικόνιση για να σας βοηθήσει να εντοπίσετε και να επιβεβαιώνουν ωοθηκών πολλαπλασιαστικές αλλαγές.

ορός S100A6 Επίπεδο συσχετίζεται με OVCA όγκου βάρος

για να καθοριστεί αν η ποσότητα των S100A6 στον ορό θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως συσχετισμός για την εκτίμηση της επιβάρυνσης του όγκου,

in vivo

bioluminescent απεικόνισης και εφαρμόστηκαν τροποποιημένη δοκιμασία ELISA (ECLISA). Πρώτον, για να παρέχουν εκτιμήσεις της επιβάρυνσης του όγκου σε αριθμό κυττάρων, 35 ζώα εγχύθηκαν με ποικίλους αριθμούς κυττάρων που εκφράζουν λουσιφεράση SKOV-3 (SKOV-3-Luc) και

in vivo

βιοφωταυγή σήματα φωτονίων ποσοτικοποιήθηκαν (δεύτερη ομάδα , Human καρκίνο των ωοθηκών Animal Model, Υλικά και Μέθοδοι). Η ανάλυση παλινδρόμησης πραγματοποιήθηκε σε vs. (log

10) εξόδου φωτόνιο (log

10) του αριθμού των εμβολιασμένων κυττάρων να παράγουν ένα πρότυπο καμπύλη βαθμονόμησης (Σχήμα 6Α). Μια αντίστροφη εξίσωση προβλέψεως (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι) προήλθε από την ανάλυση παλινδρόμησης για να ληφθούν εκτιμήσεις του αριθμού των κυττάρων, δηλαδή, προέβλεψε το φορτίο του όγκου από την έξοδο ροής φωτονίων από ζώντα ζώα.

(Α) ροής φωτονίων μετρήσεων που λαμβάνονται από ποντίκια που φέρουν ορίζεται αριθμούς κυττάρων βιοφωταυγούς SKOV-3-Luc μέσα στην περιτοναϊκή κοιλότητα. Η ανάλυση παλινδρόμησης πραγματοποιήθηκε σε vs. (log

10) εξόδου φωτόνιο (log

10) του αριθμού των εμβολιασμένων κυττάρων να παράγουν ένα πρότυπο καμπύλη βαθμονόμησης χρησιμοποιώντας μια αντίστροφη εξίσωση προβλέψεως (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι). Αυτό χρησιμοποιήθηκε για να προβλέψει το φορτίο του όγκου από μετρήσεις ροή φωτονίων (βλέπε επίσης Σχήμα 6C). (Β) Οι συγκρίσεις των S100A6 ορού σε φέροντα όγκο (Τ, κλειστοί κύκλοι) και ποντικούς ελέγχου φυσιολογικού ορού-εμβολιασμένα (SC, ανοικτοί κύκλοι). Οι συγκεντρώσεις στον ορό S100A6, ελέγχονται ως μεμονωμένα δείγματα από πολλαπλές ποντίκια με ECLISA (παρίσταται ως μεμονωμένες τιμές με οριζόντια γραμμή στη μέση τιμή), ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των Τ εναντίον SC σε κάθε μία από τρεις φορές δοκιμάζονται μετά τον εμβολιασμό, 9 ημέρες (p = 0,015) , 15 ημέρες (ρ = 0.036), και 21 ημέρες (ρ = 0.0031) (δοκιμή Wilcoxon Rank Sum). (Γ) Συσχέτιση μεταξύ εκτίμηση της επιβάρυνσης του όγκου σε OVCA καρκινωμάτωση και συγκέντρωση S100A6 ορού, όπως μετράται με ECLISA από ποντίκια που φέρουν όγκο (r = 0,79, ρ & lt? 0,0001).

Η

Για να καθοριστεί εάν ορού επίπεδα S100A6 κλιμακώθηκε ως φορτίο του όγκου αυξήθηκε με το χρόνο για τη μελέτη, τα ποντίκια ενέθηκαν με SKOV-3-Luc ή φυσιολογικό ορό (τρίτη ομάδα, Human καρκίνο των ωοθηκών ζωικό μοντέλο, Υλικά και Μέθοδοι). Τις ημέρες 9, 15, 21 και 28 μετά την μόλυνση, όλα τα SKOV-3-Luc-εμβολιάστηκαν ποντικοί ήταν οπτικά εκτυπωμένων να προσδιοριστεί η παραγωγή φωτονίων από αναπτυσσόμενους καρκίνους. δεδομένα Photon ροή στη συνέχεια μετατρέπονται σε εκτιμήσεις του

in vivo

κυττάρου όγκου επιβάρυνση. Δέκα ζώα το καθένα από φέροντα όγκο και ελέγχου ομάδες αφαιμάσσονται και να απομακρύνονται από τη μελέτη σε κάθε χρονικό σημείο? επίπεδο S100A6 ορού ποσοτικά με ECLISA για όλα τα ποντίκια της μελέτης. Συγκρίσεις της συγκέντρωσης S100A6 ορού από ποντίκια που φέρουν όγκο και φυσιολογικό ορό ελέγχους προέκυψε ότι, ήδη από 9 ημέρες μετά τον εμβολιασμό, υπήρχε σημαντικά μεγαλύτερη συγκέντρωση S100A6 ορού στα ποντίκια που φέρουν όγκο, πολύ πριν από οποιαδήποτε αναγνωρίσιμες μάζες όγκου ήταν παρούσες? η σημαντική διαφορά επιπέδου S100A6 ορό επέμεινε έως την ημέρα 15 έως την ημέρα 21 μετά τον εμβολιασμό (Σχήμα 6Β). Οι περισσότεροι ημέρα 28 ρ.ί. δείγματα ορού χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση MS /MS, και οι αριθμοί των υπόλοιπων δειγμάτων ορού ήταν ανεπαρκείς για αυτή τη στατιστική σύγκριση.

Η συσχέτιση μεταξύ του φορτίου του όγκου και του επιπέδου S100A6 ορού σε δείγματα από αυτά τα ίδια SKOV-3-Luc -εγχυθέντα ποντίκια ζητήθηκε η επόμενη. Όταν το φορτίο του όγκου (αριθμός κυττάρων) σχεδιάστηκε έναντι συγκέντρωσης ορού πρωτεΐνης S100A6 σε αυτά τα ζώα, τα αποτελέσματα έδειξαν μια πολύ σημαντική συσχέτιση (r = 0.79, ρ & lt? 0.0001)? συγκέντρωση ορού S100A6 ήταν μεγαλύτερη καθώς το φορτίο του όγκου αυξήθηκε με την πάροδο του χρόνου για τα ζώα δίνεται SKOV-3-Luc (Σχήμα 6C). Το ποσό των S100A6 σε ποντίκια ελέγχου φυσιολογικό ορό παρέμεινε κοντά σε ένα βασικό επίπεδο σε όλα τα χρονικά σημεία της μελέτης, συνήθως προσεγγίζει το κατώτερο όριο του S100A6 ECLISA ανίχνευσης (Σχήμα 6Β, SC). Κλιμάκωση συγκεντρώσεις S100A6 παρατηρήθηκαν επίσης σε ορούς που συλλέγονται σειριακά σε 1, 2 και 4 εβδομάδες μετά την μόλυνση από μεμονωμένους ποντικούς εντός του αρχικού ομάδα των 20 ποντίκια στα οποία χορηγήθηκε η γονική γραμμή SKOV-3 κύτταρα (τα δεδομένα δεν φαίνονται).

Serum S100A6 Επίπεδα σε Σετ Human OVCA Μελέτη συνδέονται με νόσο Σταδίου

προκειμένου να διαπιστωθεί αν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της αυξημένης πρωτεΐνης S100A6 και το φορτίο του όγκου σε γυναίκες με OVCA, πραγματοποιήσαμε ένα πιλοτικό πείραμα χρησιμοποιώντας μια καλά-ελεγχόμενες ανθρώπινες κλινικές σύνολο μελέτη των 66 διαγνωστικά δείγματα ορού που ήταν στη διάθεσή μας μέσα από τις ΗΠΑ-ΙΤΑΛΙΑ Oncoproteomics Πρόγραμμα. Οι οροί είχαν ληφθεί πριν από τη θεραπεία από γυναίκες με πρώιμο στάδιο (Ι-IIb) και οριακά OVCA (n = 23), και από γυναίκες με προχωρημένο στάδιο (IIc-IV) νόσο (n = 43). Ανοσοστυπώματα, με το C1 αντι-S100A6, διεξήχθησαν σε μία πρωτεΐνη microarray αντίστροφης φάσης (RPMA) διαφάνεια. Χρησιμοποιώντας αυτή την τεχνική, τα επίπεδα του S100A6 βρέθηκαν να είναι αυξημένα στατιστικά στους ορούς των γυναικών με προχωρημένο στάδιο της νόσου σε σύγκριση με εκείνους με όγκους πρώιμο στάδιο (p = 0,031), καταδεικνύοντας τη σύνδεση μεταξύ κλινικά χαρακτηριστικά μεγαλύτερο βάρος όγκου και αυξημένα επίπεδα S100A6 σε OVCA ασθενείς (Εικόνα 7).

Scatterplot εμφανίζει σχετική ένταση των αξιών S100A6 ορού στις γυναίκες με πρώιμο στάδιο (ανοικτοί κύκλοι, η = 23) και προχωρημένο στάδιο (κλειστοί κύκλοι, η = 43) OVCA. Η ομάδα πρώιμο στάδιο της νόσου περιλαμβάνει 2 όγκους διαγνώστηκε ως οριακά OVCA. Τα μέσα των σχετικών τιμών έντασης των συγκεντρώσεων αναλύτη εμφανίζονται (οριζόντιες γραμμές) είναι σημαντικά διαφορετικές για τις δύο ομάδες (ρ = 0,031, δύο δειγμάτων t-test), και απεικονίζουν σχετικά μεγαλύτερη μέση συγκέντρωση S100A6 σε ορούς ασθενών προχωρημένο στάδιο.

η

Συζήτηση

S100A6 εντοπίστηκε στους ορούς των ποντικιών με ανθρώπινα OVCA χρησιμοποιώντας ένα MS /MS-based στρατηγική πρωτεομική κάτω προς τα πάνω, σε μια προσπάθεια να ανακαλύψουν τις υποψήφιες βιοδείκτες που προέρχονται από καρκινική μάζα . Το ανθρώπινο όγκο προέλευση του S100A6 καθορίστηκε για το μοντέλο, και η συγκέντρωση του S100A6 ορού συσχετίζεται με την ποσότητα του πειραματικού καρκίνου του παρόντος. Περαιτέρω κλινική σημασία καταδείχθηκε μέσω της ανακάλυψης των δυνατοτήτων για S100A6 ορό συσχετίζεται με το φορτίο του όγκου με χρήση ανθρώπινων συνόλων κλινική μελέτη.

Κατά τη διάρκεια της φάσης ανακάλυψης, μια μέθοδος διαχωρισμού του ορού για την απομόνωση του πρωτεώματος LMW χρησιμοποιήθηκε για τον εμπλουτισμό πρωτεϊνών /πεπτίδια που κυκλοφορούν σε σχετικά χαμηλές αφθονία, στην αντιμετώπιση της πολυπλοκότητας του όλου πρωτεώματος ορό. Το ανθρώπινο SKOV-3 μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού κύτταρο έδωσε την ευκαιρία να αξιολογήσουν τις διαφορές των ειδών στην προσπάθεια να κατατάξει καρκινο-συναφές πρωτεώματος ως είτε προέρχεται από όγκο (ανθρώπινο) έναντι απόκριση του ξενιστή (ποντίκι). Περισσότερα σε βάθος οι κλινικές μελέτες επικύρωσης δικαιολογείται να εξετάσει το ενδεχόμενο ορό S100A6 να χρησιμεύσει ως υποψήφιο βιοδείκτη για την αξιολόγηση των γυναικών με OVCA, ιδίως για την παρακολούθηση της υποτροπής. Αυτή η προϋπόθεση υποστηρίζεται από τα ακόλουθα στοιχεία: (1) παρουσία ενός πεπτιδίου αλληλουχία ανθρώπινου ειδικά του S100A6 σε ορούς, (2) ανίχνευση της έκφρασης πρωτεΐνης S100A6 σε πειραματικούς όγκους, αλλά όχι στα περιβάλλοντα μη-νεοπλασματικών ιστών ποντικού, (3) ένα θετική και άμεση συσχέτιση μεταξύ της συγκέντρωσης στον ορό S100A6 και φορτίο όγκου στο μοντέλο ξενομοσχεύματος, (4) επίδειξη της αυξημένης έκφρασης S100A6 σε ιστούς και κυτταρικές σειρές από OVCA ασθενείς, αλλά σπάνια σε φυσιολογική ωοθήκη, σε αυτή και άλλες μελέτες [21], [22 ], και τέλος, (5) σημαντική αύξηση του αναλύτη στους ορούς των γυναικών με προχωρημένο στάδιο OVCA εναντίον γυναικών με νόσο πρώιμο στάδιο. Ο περιορισμός αρχική διαλογή σε ποντίκια με την κυτταρική γραμμή SKOV-3 σε αυτήν την περίπτωση, επομένως, δεν αποκλείει την αναγνώριση ενός πιθανές κλινικές υποκατάστατο βιοδείκτη για περαιτέρω επικύρωση. Πρόσθετες ανθρώπινες πρωτεΐνες OVCA ιστού που σχετίζονται με αναφέρθηκαν επίσης στον ορό με τη χρήση αυτής της προσέγγισης, και αυτά μπορεί να ελεγχθεί περαιτέρω για πιθανές βιοδείκτη υποψήφιο χρησιμοποιώντας τη στρατηγική που εφαρμόζεται εδώ.

S100A6 συνεχίστηκε για αρχική επικύρωση ως βιοδείκτη υποψήφιος του ορού, λόγω για τη σχέση της με την εξέλιξη του καρκίνου [22], [23]. S100A6 είναι μια μικρή πρωτεΐνη δέσμευσης ασβεστίου που ανήκει στην οικογένεια πρωτεϊνών S100. Τα περίπου 25 μέλη της οικογένειας S100 που χαρακτηρίζεται από 2 δομές EF-χέρι και είναι πιθανόν να έχει η λειτουργία του αισθητήρα ασβεστίου [24]. Οι S100 πρωτεΐνες έχουν εμπλακεί σε ένα ευρύ φάσμα φυσιολογικών και παθολογικών διαδικασιών συμπεριλαμβανομένης κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη διαφοροποίηση και την ενδοκυτταρική σηματοδότηση, αν και η ακριβής λειτουργίες τους παραμένουν να προσδιοριστούν περαιτέρω [24] – [27]. Όσον αφορά την S100A6, η έκφρασή του βρίσκεται κανονικά σε ινοβλάστες και επιθηλιακά κύτταρα [28], και αυξημένα S100A6 έχει αναφερθεί σε έναν αριθμό ανθρώπινων καρκινικών τύπων περιλαμβανομένων των καρκινωμάτων του παχέος εντέρου, του παγκρέατος, του μαστού, των ωοθηκών, του πνεύμονα και του θυρεοειδούς αδένα [29] – [35]

υπάρχουν αντικρουόμενες αναφορές σχετικά με το ρόλο S100A6 παίζει στον καρκίνο.. Vimalachandran et. al. [29] μελέτησαν την μορφή έκφρασης του S100A6, καθώς αφορούσαν την κλινική έκβαση σε καρκίνο του παγκρέατος και της έκφρασης S100A6 ήταν ένας αρνητικός προγνωστικός παράγοντας. Υψηλή, ειδικά πυρηνικός, η έκφραση του S100A6 συσχετίστηκε με κακή πρόγνωση. Επιπλέον, μια σταδιακή αύξηση του S100A6 κατά τη διάρκεια του παγκρέατος καρκινογένεση, έχει αναφερθεί [36]. Αντίθετα, τα αυξημένα επίπεδα του S100A6 μείωσε την κινητικότητα των κυττάρων οστεοσαρκώματος και συσχετίστηκαν με μειωμένη κλινικά έκδηλη μεταστάσεων [37]. Παρομοίως, αυξημένη έκφραση S100A6 συσχετίστηκε με όφελος επιβίωσης για μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [35]? S100A6 καταδείχθηκε σε ορούς 2 ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα, και στην υπεζωκοτική συλλογή του ένα. Στην παρούσα μελέτη, έχουμε επεκτείνει την αξία της S100A6 να συμπεριληφθεί ως OVCA βιοδείκτη ορό αποδεικνύοντας θετική έκφραση σε ανθρώπινο OVCA χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία, καθώς και μια σύνδεση μεταξύ του επιπέδου ορού S100A6 και το φορτίο του όγκου και στις δύο ποντίκια και ανθρώπους ασθενείς. Το γεγονός ότι S100A6 έχει καταρτιστεί από έναν αριθμό ανθρώπινων καρκίνων, δείχνει ότι η χρήση του ως μοναδικός βιολογικός δείκτης μπορεί να συναντήσει το δυναμικό ψευδώς θετικά περιστατικά, παρόμοια με CA-125. Ως εκ τούτου, ενσωματώνοντας S100A6 σε ένα πάνελ βιοδεικτών του καρκίνου αποτελεί μια λογική προσέγγιση που πρέπει να επιδιωχθούν.

Η χαμηλή συχνότητα των OVCA κάνει τη θέσπιση και την επικύρωση των κλινικών βιοδείκτες που χρησιμοποιούν ανθρώπινα δείγματα δύσκολη. Μόνο 1 στα 2.500 μετεμμηνοπαυσιακές γυναίκες εκτιμάται ότι θα επηρεαστούν από OVCA ετησίως [38], [39]. Λόγω αυτής της χαμηλής συχνότητας, διαλογή πληθυσμός απαιτεί ένα μεγάλο αριθμό ασθενών και επομένως είναι πολύ ακριβό για OVCA βιοδεικτών ανακάλυψη και επικύρωσης. Για το λόγο αυτό, η χρήση ενός ζώου το μοντέλο μπορεί να είναι ένα αποδοτικό μέσο για την παροχή προκλινικά δεδομένα για να δικαιολογήσει μια μεγάλη κλινική μελέτη επικύρωσης. Αξιοποιώντας OVCA ζωικά μοντέλα για το σκοπό αυτό απαιτεί πίστη και στις δύο πειραματικές στόχους και ανακεφαλαιώνει κύρια χαρακτηριστικά της βιολογίας ανθρώπινων ασθενειών.