Αφηρημένο

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μικρές (~ 22 νουκλεοτιδίων) μη-κωδικοποίησης RNA που ρυθμίζουν μια μυριάδα των βιολογικών διεργασιών και συχνά απορρυθμιστεί στον καρκίνο. έχουν microRNAs σχετίζονται με τον καρκίνο έχουν ανιχνευθεί στον ορό και στο πλάσμα και κρατήστε την υπόσχεση ως ελάχιστα επεμβατική βιοδείκτες του καρκίνου, ενδεχομένως για την αξιολόγηση των χαρακτηριστικών της νόσου σε ασθενείς με μεταστατική νόσο που είναι δύσκολο να βιοψία. Εδώ χρησιμοποιήσαμε miRNA προφίλ για τον εντοπισμό του καρκίνου που σχετίζονται με miRNAs που εκφράζονται διαφορικά σε ορούς από ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο του ευνουχισμού ανθεκτικά προστάτη (mCRPC) σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες. 365 miRNAs προφίλ, εντοπίσαμε πέντε miRNAs ορού (miR-141, miR-200A, miR-200c, miR-210 και miR-375), η οποία ήταν αυξημένα σε περιπτώσεις σε σύγκριση με τους μάρτυρες σε δύο ανεξάρτητες ομάδες. Ένας από αυτούς, miR-210, είναι ένας γνωστός μεταγραφικός στόχος του μονοπατιού σηματοδότησης HIF-1α υποξία-απόκρισης. Η έκθεση των καλλιεργημένων κυττάρων καρκίνου του προστάτη σε υποξία οδήγησε στην επαγωγή του miR-210 και η απελευθέρωση του εντός του εξωκυτταρικού περιβάλλοντος. Επιπλέον, βρήκαμε ότι τα επίπεδα miR-210 στον ορό διέφεραν σημαντικά μεταξύ των ασθενών που υποβάλλονται σε θεραπεία mCRPC, και συσχετίζεται με ανταπόκριση στη θεραπεία όπως εκτιμήθηκε από την αλλαγή του PSA. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι (i) τον καρκίνο που σχετίζεται με υποξία είναι μια συχνή, στο παρελθόν από τις πιο παρεξηγημένες χαρακτηριστικό mCRPC, και (ii) στον ορό miR-210 μπορεί να αναπτυχθεί περαιτέρω ως προγνωστικό βιοδείκτη σε ασθενείς με αυτή την ξεχωριστή βιολογία της νόσου.

Παράθεση: Cheng HH, Μίτσελ PS, Kroh EM, Dowell ΑΕ, Chery L, Siddiqui J, et al. (2013) Κυκλοφορούν microRNA Profiling Προσδιορίζει ένα υποσύνολο του μεταστατικού καρκίνου του προστάτη ασθενών με αποδεικτικά στοιχεία σχετίζονται με τον καρκίνο υποξία. PLoS ONE 8 (7): e69239. doi: 10.1371 /journal.pone.0069239

Επιμέλεια: Rajvir Dahiya, UCSF /VA Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 23 Απρίλη του 2013? Αποδεκτές: 6 του Ιουνίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 30, Ιούλ 2013

Copyright: © 2013 Cheng et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Χρηματοδότηση ήταν που παρέχονται από Καναρίων Ίδρυμα (σε τόνους), Damon Runyon-Rachleff Βραβείο Καινοτομίας (σε τόνους), DOD Καρκίνος του προστάτη Νέο βραβείο Ερευνητής (σε τόνους), Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (NIH) CA093900 (σε KJP), ΝΙΗ CA143055 (σε KJP) , ΝΙΗ PO1 CA085859 (σε RLV), ΝΙΗ SPORE P50 CA69568 (σε KJP και AMC), ΝΙΗ SPORE P50 CA97186 (σε PSN, MT, και RLV), ΝΙΗ TR01 5R01DK085714 (σε τόνους), ΝΙΗ T32CA009515-28 (σε HHC) , καρκίνο του προστάτη Ίδρυμα δημιουργικότητα βραβείο (σε τόνους), και Richard Ίδρυμα Μ Lucas (σε RLV). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Muneesh Tewari είναι το όνομα εφευρέτης για την εκκρεμή αίτηση διπλώματος ευρεσιτεχνίας με τίτλο «Χρήση Εξωκυττάρια RNA στο Μέτρο Νοσημάτων, «# 12/993828. H.H.C., P.S.M., E.M.K., A.E.D., L.C., J.S., P.S.N., B.S.K., R.L.V., A.M.C., K.J.P. και Ο.Μ. δηλώνουν κανένα ανταγωνιστικά συμφέροντα. Οι συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι αυτό δεν μεταβάλλει την προσκόλλησή τους σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Η φυσική ιστορία των ασθενών με καρκίνο ανθεκτικό μεταστατικό ευνουχισμό του προστάτη (mCRPC) ποικίλλει ευρέως, γεγονός που υποδηλώνει μια ετερογενή βιολογία της νόσου σε αυτόν τον πληθυσμό ασθενών. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τη βιολογική ετερογένεια στην mCRPC και προσεγγίσεις για την κλινική διαστρωμάτωση των ασθενών περιορίζονται, σε μεγάλο βαθμό επειδή μεταστατικό ιστός δεν είναι συνήθως διαθέσιμο για μελέτη. Ελάχιστα επεμβατική (π.χ., με βάση το αίμα) προσεγγίσεις που μπορούν να βοηθήσουν διαστρωμάτωση των ασθενών με βάση διακριτές βιολογία του όγκου θα μπορούσε να βοηθήσει να ενημερώσει την επιλογή της θεραπείας, η οποία είναι ιδιαίτερα σχετική με την πρόσφατη εισαγωγή πολλαπλών νέων αποτελεσματικών θεραπειών για mCRPC.

Κυκλοφορούν microRNAs (miRNAs) είναι μια αναδυόμενη τάξη των βιοδεικτών με βάση το αίμα με τη δυνατότητα να παρέχουν πληροφορίες σχετικά με διακριτά βιολογία του όγκου σε κάθε ασθενή [1]. miRNAs είναι μικρές (~ 22 νουκλεοτιδίων), μη-κωδικοποίησης των μορίων RNA που ρυθμίζουν μετα-μεταγραφικά γονιδιακής έκφρασης από μεταφραστικά καταστολή ή την αποικοδόμηση στοχευμένων μεταγραφές [2]. Ειδικές miRNAs έχουν βρεθεί να ρυθμίζει μία ποικιλία κρίσιμες διαδικασίες στη φυσιολογία του όγκου, συμπεριλαμβανομένης της αγγειογένεσης [3], επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβαση [4], μετάσταση [5] και η ανταπόκριση του όγκου σε υποξία [6]. έχουν miRNAs αποδειχθεί ότι είναι αποτελεσματική με βάση το χαρτί καρκίνος βιοδείκτες-στη διάγνωση καρκίνων άγνωστης προέλευσης ιστού και στην πρόβλεψη της κλινικής έκβασης [7] – [9]. Εμείς και άλλοι έχουν δείξει ότι κυκλοφορούν, ελεύθερο κυττάρων, miRNAs προέρχονται από όγκους είναι εξαιρετικά σταθερό και ανιχνεύσιμη στον ορό των ασθενών με καρκίνο [1]. Σε προηγούμενη εργασία, χρησιμοποιήσαμε έναν υποψήφιο προσέγγιση miRNA να εντοπίσει σημαντική αύξηση του miR-141 σε ορό από ασθενείς με μεταστατικό ευνουχισμό ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη (mCRPC) [1].

Για τον εντοπισμό πληρέστερα τον καρκίνο του προστάτη -associated κυκλοφορούν miRNAs, στην παρούσα μελέτη έχουμε προφίλ miRNAs ορού από ασθενείς με mCRPC. Έχουμε εντοπίσει πέντε miRNAs ορού που ήταν σημαντικά αυξημένα σε περιπτώσεις σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες, συμπεριλαμβανομένης και της υποξίας που σχετίζονται με miR-210. Προκειμένου να καθοριστεί εάν τα κύτταρα του καρκίνου του προστάτη μπορεί να απελευθερώσει miR-210 σε απόκριση προς υποξία, εκθέσαμε προστάτη καρκινικές κυτταρικές γραμμές σε υποξικές συνθήκες και διαπίστωσε ότι miR-210 προκλήθηκε και απελευθερώνεται στο εξωκυτταρικό περιβάλλον. Στην ανάλυση των κλινικών δειγμάτων και αποτελεσμάτων, βρήκαμε ενδείξεις ότι ένα υποσύνολο των ασθενών mCRPC έχουν αυξημένα επίπεδα miR-210 και ότι αυτό συσχετίζεται με ανταπόκριση στη θεραπεία, γεγονός που υποδηλώνει ότι η αύξηση της υποξίας είναι ένα χαρακτηριστικό της mCRPC που μπορεί να ορίζει ένα υποσύνολο των ασθενών με μια ξεχωριστή βιολογία της νόσου.

Υλικά και Μέθοδοι

Cell Culture

LNCaP (ATCC® CRL-1740 ™) και vCap [10] ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 και DMEM, αντίστοιχα, κάθε συμπληρωμένο με 10% FBS (ή υπό συνθήκες χωρίς ορό, όπως σημειώνεται), στους 37 ° C σε ένα 5% CO

2 θερμοκοιτίδα. Συνθήκες υποξίας (1% O

2) έχουν συσταθεί σε ένα Thermo Scientific 3595 Incubator (ThermoFisher), με τα κύτταρα διατηρούνται υπό ορθοξικές συνθήκες (20% O

2) παράλληλα.

Απομόνωση RNA από καλλιεργημένα κύτταρα και Ρυθμισμένα Media

ρυθμισμένα μέσα απομακρύνθηκαν από τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για 24, 48 ή 72 ώρες υπό ορθοξικές ή υποξικές συνθήκες. Τα κύτταρα πλύθηκαν με 5 ml PBS και λύθηκαν επί πάγου απευθείας στο πιάτο καλλιέργειας με 600 μΐ ρυθμιστικού Λύσης /βιβλιοδεσίας από το

Mir

Βάνα miRNA κιτ απομόνωσης (Ambion). Τα προϊόντα λύσης συλλέχθηκαν με το χέρι με ένα αποστειρωμένο ξέστρο κυττάρων και μεταφέρεται σε ένα RNase- /άνευ ϋΝάσης σωλήνα μικροφυγοκέντρησης 2 ml. RNA εκχυλίστηκε από κυτταρολύματα εξής συνιστώμενο πρωτόκολλο του κατασκευαστή για πλήρη απομόνωση RNA. Τα κυτταρικά υπολείμματα απομακρύνθηκαν από ένα κλάσμα 500 μΐ ρυθμισμένων μέσων (10 ml ολικός όγκος) με διήθηση μέσω μονάδας διήθησης 0,2 μm NanoSep (Millipore) στα 14.000 χ

g

, 5 λεπτά, σε θερμοκρασία δωματίου. 400 μλ διηθήθηκαν δείγμα συνδυάσθηκε με 400 μl 2Χ διάλυμα μετουσίωσης (Ambion) και στροβιλίστηκε.

C. elegans

spiked-in ολιγονουκλεοτίδια εισήχθησαν (ως ένα μίγμα 25 fmol του κάθε ολιγονουκλεοτιδίου σε 5 μΐ συνολικός όγκος ανά δείγμα υγρού) μετά μετουσίωση και χρησιμοποιούνται για ομαλοποίηση της μεταβλητότητας σε απομόνωση RNA απέναντι δείγματα όπως περιγράφηκε προηγουμένως [1]. Το RNA που εξάγεται από κλιματιζόμενα λύματα μέσα χρησιμοποιώντας το

mir

κιτ Βάνα ΠΑΡΙΣΙ (Ambion) ακολουθώντας το συνιστώμενο πρωτόκολλο του κατασκευαστή για πλήρη απομόνωση RNA.

Δήλωση Ηθικής

Όλα τα κλινικά δείγματα ήταν λαμβάνεται από άτομα που με την προϋπόθεση έγγραφη συγκατάθεση. Μελέτες διεξήχθησαν σύμφωνα με τη δήλωση των κατευθυντήριων γραμμών του Ελσίνκι και με την έγκριση της δεοντολογίας από τους Institutional Review Boards στο Πανεπιστήμιο της Ουάσιγκτον, Έρευνας Καρκίνου Fred Hutchinson Center και το Πανεπιστήμιο του Michigan.

Επεξεργασία αίματος και Απομόνωση ορού από κλινικές δείγματα

Όλα τα κλινικά δείγματα που λαμβάνονται στο Πανεπιστήμιο της Ουάσιγκτον και το Πανεπιστήμιο του Michigan συλλέχθηκαν και επεξεργάστηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [1], [11].

Απομόνωση RNA από κλινικά δείγματα ορού

Ολικό RNA απομονώθηκε από 400 μΙ ορού που συλλέγονται στο Πανεπιστήμιο της Ουάσιγκτον χρησιμοποιώντας το κιτ mirVana Παρίσι (Ambion) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [1]. Ίσοι όγκοι από κάθε τύπο δείγματος συνενώθηκαν για να δημιουργήσουν mCRPC και υγιή δεξαμενές ορού δότη (n = 25 για κάθε ομάδα) για TLDA προφίλ. Ολικό RNA απομονώθηκε από δείγματα ορού που συλλέγονται στο Πανεπιστήμιο του Michigan χρησιμοποιώντας το κιτ απομόνωσης RNA miRNeasy (Qiagen) ως ακολούθως: 400 μl ορού χωρίστηκε σε τέσσερα, δείγματα 100 μλ. Κάθε κλάσμα μετουσιώθηκε χρησιμοποιώντας όγκο 10Χ (1 ml) Qiazol, το οποίο περιδινήθηκε και επωάστηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά.

C. elegans

spiked-in ολιγονουκλεοτίδια εισήχθησαν (ως ένα μίγμα 25 fmol του κάθε ολιγονουκλεοτιδίου σε 5 μΐ συνολικός όγκος ανά δείγμα υγρού) μετά μετουσίωση, τα οποία χρησιμοποιήθηκαν για ομαλοποίηση της μεταβλητότητας σε απομόνωση RNA απέναντι δείγματα όπως περιγράφηκε προηγουμένως [1] . RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας χλωροφόρμιο 0,2Χ όγκο (220 μλ) και το ολικό RNA απομονώθηκε ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Για ένα δεδομένο δείγμα, RNA απομονώθηκε από κάθε δείγμα 100 μΙ συγκεντρώθηκε και συμπυκνώθηκε σε όγκο 100 μΐ επί Microcon ΥΜ-3 μονάδες φίλτρου (Millipore) στα 14.000 χ

g

, 1,5 ώρα, 4 ° C, οι οποίες ήταν φορτωθεί αναστρέφεται εντός προζυγισμένα σωλήνες μικροφυγοκέντρησης 1,5 ml και εκλούεται σε 1.000 ×

g

, 3 λεπτά, 4 ° C. Σωλήνες συν έκλουσμα ζυγίζεται σε αναλυτική κλίμακα και φέρθηκε σε 100 μΙ με ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης. Το RNA αποθηκεύεται στους -80 ° C.

Συλλογή και επεξεργασία των Κλινικών τμημάτων ιστού

Laser-σύλληψη μικρο-ανατομή (LCM) των τμημάτων κατεψυγμένου ιστού.

Ενότητες του φλας-καταψύχθηκαν προστάτη και των λεμφαδένων που προέρχονται από ριζική προστατεκτομή και ταχεία αυτοψία, αντίστοιχα, αξιολογήθηκαν από έναν παθολόγο να καθορίσει τις περιοχές των επιθηλιακών κυττάρων του όγκου. Για σύλληψη λέιζερ μικροδιατομής 5 μm τομές κατεψυγμένου ιστού έγιναν σε κρυοστάτη Leica ™ CM3050S στους -20 ° C (Leica, Wetzlar, Γερμανία), που τοποθετείται επάνω σε διαφάνειες Frame ΡΕΝ Membrane (MDS Inc., Ontario, Canada) και στην συνέχεια βάφονται και σταθερό σύμφωνα με το πρωτόκολλο HistoGene ™ LCM Κατεψυγμένα τμήμα χρώσης Kit (MDS Inc.). Για κάθε δείγμα περίπου 2000 κύτταρα σταματούν λέιζερ σε μεγέθυνση 200χ (Veritas, Αρκτούρος MDS Inc., Ontario, Canada). Το συλληφθέν δείγμα τοποθετήθηκε σε 300 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος λύσεως από το RNAqueous® Απομόνωση RNA Kit (Ambion, Austin, Texas), επωάστηκαν για 30 λεπτά στους 42 ° C και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι διεξήχθη απομόνωση RNA. miRNA στη συνέχεια απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το RNAqueous® RNA κιτ απομόνωσης (Ambion).

απομόνωση RNA από δείγματα ιστών LCM.

Ολικό RNA απομονώθηκε από δείγματα ιστού LCM χρησιμοποιώντας το κιτ απομόνωσης RNA Micro-RNAqueous (Ambion) ως εξής: Κατεψυγμένα προϊόντα λύσης τήχθηκαν σε πάγο, στροβιλίζεται και φυγοκεντρείται στα 16.100 χ g, 30 sec, θερμοκρασία δωματίου.

C. elegans

εμβολιάζεται-in ολιγονουκλεοτίδια εισήχθησαν (ως ένα μίγμα 25 fmol του κάθε ολιγονουκλεοτιδίου σε 5 μΐ συνολικός όγκος ανά υγρό δείγμα) και χρησιμοποιήθηκε για ομαλοποίηση της μεταβλητότητας σε απομόνωση RNA απέναντι δείγματα όπως περιγράφηκε προηγουμένως [1], που ακολουθείται από προσθήκη 3 μl LCM Πρόσθετη. RNA καταβυθίστηκε από το μίγμα λύμα με 1,25 όγκους 100% μοριακό βαθμού EtOH, και στη συνέχεια συνδέεται με το συγκρότημα Micro φίλτρου (προϋγραμένου με 30 μl Διάλυμα Λύσης για 5 λεπτά) με φυγοκέντρηση στα 10.000 χ g, 1 λεπτό. Το φίλτρο πλύθηκε (Λύση 180 μλ Wash 1, 10000 ×

g

, 1 λεπτό? Λύση 2 × 180 μl Wash 2/3, 16100 ×

g

, 30 δευτερόλεπτα? Αέρα μόνο, 16100 ×

g

, 30 sec). RNA εκλούσθηκε από την στήλη δύο φορές με 10 μλ 95 ° C Ρυθμιστικού Έκλουσης σε προζυγισμένο σωλήνες. Τα εκλούσματα ζυγίστηκαν σε μια αναλυτική κλίμακα και φέρθηκε σε 20 μΐ με ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης. Το RNA αποθηκεύεται στους -80 ° C.

microRNA προφίλ χρησιμοποιώντας TaqMan Low-Density Array miRNA qRT-PCR και βιοδεικτών υποψήφια Επιλογής

RNA από συγκεντρώνονται στον ορό των ασθενών mCRPC ή υγιείς μάρτυρες (που αποτελείται από ίσο όγκο RNA από κάθε ένα από 25 δείγματα ανά ομάδα) μεταγράφηκε αντίστροφα εις διπλούν αντιδράσεις από 2 μΙ των συγκεντρωμένων RNA χρησιμοποιώντας το TaqMan miRNA Reverse Transcription Kit και το TaqMan miRNA Multiplex RT δοκιμασίες (Human πισίνα Set). Μία συγκεντρωτική προσέγγιση δείγμα επιλέχθηκε για οικονομικά αποδοτική ανακάλυψη των miRNA βιοδεικτών. έκφραση miRNA σκιαγραφήθηκε από κάθε επανάληψη της αντίδρασης RT χρησιμοποιώντας το TaqMan Low-Density Array (TLDA, v1.0) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [1]. Multiplex αντίστροφη μεταγραφή TLDA qRT-PCR πραγματοποιήθηκε σε θερμοκυκλοποιητή Applied BioSystems 7900HT χρησιμοποιώντας τις συνιστώμενες συνθήκες ποδηλασίας του κατασκευαστή. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με την έκδοση SDS Σχετική Ποσοτικοποίηση λογισμικού 2.2.2 (Applied Biosystems), με εκχωρείται αυτόματα ελάχιστο όριο, το οποίο ήταν πάνω από την αρχική τιμή όλων των δοκιμασιών που να δείχνουν μετρήσιμα ενίσχυση πάνω από το υπόβαθρο. Αξίες που ήταν κάτω από το ελάχιστο όριο τα αυθαίρετα μία τιμή κατωφλίου κύκλου (CT) του 40.

P

-τιμές ορίστηκαν από t-test του Student αξιολόγηση αναπαράγουν προφίλ δεδομένα από κάθε πισίνα να καθορίσει σημαντικές διαφορές στην έκφραση των miRNAs μεταξύ πισίνα mCRPC και υγιή δείγματα RNA πισίνα ελέγχου. Διπλώστε αλλαγής τιμών (FC) προήλθαν από τον υπολογισμό 2

∧ (AveCT

mCRPC πισίνα AveCT

υγιή πισίνα ελέγχου). υποψήφιος microRNA βιοδείκτες επιλέχθηκαν με κριτήριο την ομάδα FC & gt? 5 και

P

& lt?. 0.05

Μέτρηση των miRNA και mRNA επίπεδα Ατομική TaqMan Ποσοτική αντίστροφη μεταγραφή PCR (qRT-PCR)

miRNA προερχόμενα από δείγματα ορού μεταγράφηκε αντίστροφα χρησιμοποιώντας το κιτ TaqMan miRNA αντίστροφη Μεταγραφή (Applied Biosystems) και ποσοτικοποιήθηκε με TaqMan miRNA qRT-PCR χρησιμοποιώντας miRNA-συγκεκριμένα σύνολα εκκινητών /ανιχνευτών (Applied Biosystems) όπως περιγράφεται προηγουμένως [ ,,,0],1]. Μια πλήρης περιγραφή των δοκιμασιών TaqMan χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη παρέχονται στον Πίνακα S4.

miRNAs προέρχονται από δείγματα ορού που λαμβάνονται από το Πανεπιστήμιο του Michigan ποσοστώθηκαν με TaqMan miRNA qRT-PCR με χρήση συνθετικών πρότυπες καμπύλες miRNA για την απόλυτη ποσοτικοποίηση πανομοιότυπα με αυτή που περιγράφεται για το σύνολο του δείγματος του Πανεπιστημίου της Ουάσινγκτον [1] με την εξαίρεση ότι το στάδιο προ-ενίσχυσης αποκλείστηκε από όλα ποσοτικοποίησης miRNA πλην miR-210 (αυτό βασίστηκε σε εμπειρική απόδειξη ότι οι προ-ενίσχυσης δεν αυξάνει την απόλυτη αντίγραφο αριθμός των miRNA ανιχνεύσιμα για άλλες δοκιμασίες TaqMan miRNA χρησιμοποιούνται εδώ, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται)

Gene-έκφραση ποσοτικοποιήθηκε με TaqMan qRT-PCR ως εξής: α. RNA εισόδου μεταγράφηκε αντίστροφα χρησιμοποιώντας το TaqMan Gene Expression-Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems) σε ένα μικρής κλίμακας αντίδραση RT [αποτελείται από 0,5 μΙ 10Χ Reverse-Μεταγραφή Buffer, 0,5 μΙ 10Χ Random Primers, 0.2 μΐ 100 mM dNTPs με dTTP, 0.25 μλ Multiscribe ανάστροφης τρανσκριπτάσης και 3,55 μΙ RNA εισόδου? συστατικά εκτός από το RNA εισόδου παρασκευάστηκαν ως ένα μεγαλύτερο όγκο κύριο μείγμα], χρησιμοποιώντας ένα Tetrad2 Peltier Thermal Cycler (BioRad) στους 50 ° C για 2 λεπτά, ακολουθούμενη από 30 κύκλους των 95 ° C για 10 λεπτά, 95 ° C για 15 sec και 60 ° C για 60 sec. CDNA που προέκυψε σε συνδυασμό με τα αντιδραστήρια δοκιμασίας πριν την ενίσχυση 3,75 μl [αποτελείται από 2,5 μΙ TaqMan προενισχυτή Master Mix και 1,25 μl TaqMan Gene Expression-Δοκιμασία (GUSB ή KRT18) αραιωμένο 1:100 στην ΤΕ? συστατικά εκτός από το cDNA εισόδου παρασκευάστηκαν ως ένα μεγαλύτερο κύριο όγκο μείγματος για την παραγωγή ενός 5,0 μΙ συνολικός όγκος αντίδρασης PCR], χρησιμοποιώντας ένα Tetrad2 Peltier Thermal Cycler (BioRad) στους 95 ° C για 10 λεπτά που ακολουθείται από 14 κύκλους των 95 ° C για 15 sec και 60 ° C για 4 λεπτά. GUSB ή KRT18 προενίσχυσης προϊόντα αντίδρασης συνδυάστηκαν με 2,75 μΙ αντιδραστηρίων PCR δοκιμασία [που αποτελείται από 2,5 μΙ TaqMan 2Χ καθολική PCR Master Mix, αριθ AmpErase UNG και 0,25 μΙ 20Χ TaqMan Gene-Expression Assay) για να δημιουργήσει ένα 5.0 μΐ συνολικού όγκου PCR αντίδραση για GUSB ή KRT18, αντίστοιχα. Real-time PCR διεξήχθη σε θερμοκυκλοποιητή Applied BioSystems 7900HT στους 95 ° C για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από 40 κύκλους των 95 ° C για 15 sec και 60 ° C για 1 λεπτό. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με την έκδοση SDS Σχετική Ποσοτικοποίηση λογισμικού 2.2.2 (Applied Biosystems), με την αυτόματη ρύθμιση CT για την ανάθεση βάσης και ορίου για CT προσδιορισμού (Βλέπε Πίνακα S3 για τα αποτελέσματα των μετρήσεων αγγελιαφόρο RNA).

Αποτελέσματα και συζήτηση

για να ανακαλύψετε αποτελεσματικά miRNAs ορού που είναι διαφορικά άφθονα μεταξύ των περιπτώσεων εναντίον τους ελέγχους, χρησιμοποιήσαμε PCR πραγματικού χρόνου που βασίζεται σε πίνακες miRNA TaqMan χαμηλής πυκνότητας (TLDA) για την οθόνη για διαφορική αφθονία των 365 miRNAs καρκίνου στο RNA ορού συγκεντρώθηκαν από ασθενείς mCRPC (

n = Τετάρτη 25) έναντι ηλικίας της ομάδας ελέγχου (

n = Τετάρτη 25? όλοι οι έλεγχοι είχαν φυσιολογικό PSA και φυσιολογική δακτυλική ευρήματα των εξετάσεων). Μετά την κανονικοποίηση των δεδομένων με τη χρήση ακίδα-in miRNAs τον έλεγχο και τη σύγκριση των συγκεντρωμένων RNA ορού από περιπτώσεις mCRPC με εκείνη του ελέγχου (Εικ. 1

Μια

και

ένθετο

), εντοπίσαμε εννέα miRNAs επιδεικνύοντας μια μεγαλύτερη από 5 φορές αλλαγή στην αφθονία (αδιόρθωτη

P

& lt? 0,05, Student t-test). Είμαστε δίπλα ατομικά μετριέται αυτά τα εννέα miRNAs από το RNA των μεμονωμένων περιπτώσεων mCRPC και τους ελέγχους με τη χρήση miRNA-συγκεκριμένες δοκιμασίες Taqman qRT-PCR ορού. Τα επίπεδα ορού των πέντε miRNAs επιβεβαιώθηκαν να είναι σημαντικά αυξημένα σε περιπτώσεις mCRPC σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (miR-141:

P

& lt? 0,0001, miR-200a:

P = 0,007

, miR-200c :

P = 0,017

, miR-375:

P = 0,009

, και miR-210: ανάλυση

P =

0.022, Wilcoxon signed-rank). Η μέση πτυσσόμενο διαφορά μεταξύ ασθενών και μαρτύρων κυμάνθηκε από 4,6 (miR-375) σε 27,9 (miR-141) (Εικ. 1

Β

,

πάνω

και τον πίνακα S1). Επιπλέον, δέκτης-λειτουργικό χαρακτηριστικό (ROC) οικόπεδα αποδεικνύουν την ικανότητα αυτών των miRNAs να διακρίνουν μεταξύ των δύο ομάδων (miR-141 Περιοχή Κάτω από την Καμπύλη (AUC) = 0,899? MiR-200a AUC = 0,699? MiR-375 AUC = 0.773 ? miR-200c AUC = 0.721 και miR-210 AUC = 0,678) (Εικόνα 1

Β

,

κάτω

).. Είναι σημαντικό, διαπιστώσαμε ότι miRNAs ελέγχου δεν εκφράστηκαν διαφορικά μεταξύ των δύο πληθυσμών (Εικ. S1).

(

Α)

Μέτρηση των κυκλοφορούντων miRNAs σε ορούς συγκεντρώθηκαν από τους ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο του προστάτη, όπως σε σύγκριση με υγιείς δότες (που περιλαμβάνει μια Discovery Set) από TLDA προφίλ. Καταρροϊκό πυρετό και καφέ-μαύροι κύκλοι αντιπροσωπεύουν miRNAs ορού αυξάνεται ή μειώνεται (με μη διορθωμένη τιμή p & lt? 0.05), αντίστοιχα, σε ασθενείς mCRPC σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες.

Ένθετο:

Εννέα miRNAs κατέδειξε & gt? 5-φορές αλλαγή (μη προσαρμοσμένες

P

& lt? 0,05, Student t-test). FC, διπλώστε αλλαγή. (

Β)

Επιβεβαίωση της mCRPC που σχετίζονται με miRNAs ορού σε επιμέρους δείγματα από το Discovery Set από τα δείγματα του Πανεπιστημίου της Ουάσιγκτον.

Άνω

: οι υποψήφιοι βιοδείκτη miRNA μετρήθηκαν σε μεμονωμένα δείγματα από TaqMan miRNA qRT-PCR (

P

αξία ανατεθεί από Wilcoxon signed-rank test), όπου miRNA αφθονία δίνεται από την άποψη των miRNA αντιγράφων /μl ορού. Κόκκινες γραμμές, σημαίνει +/- SEM των miRNA αντίγραφα /μl ορού για κάθε ομάδα.

Κάτω

: λειτουργικό χαρακτηριστικό (ROC) καμπύλη Receiver οικόπεδο ευαισθησία εναντίον του (1 – ειδικότητα) για να αξιολογήσει την ικανότητα του κάθε βιοδείκτη miRNA να διακρίνει τις περιπτώσεις από τους ελέγχους.

(C)

Επικύρωση mCRPC που σχετίζονται με miRNAs ορού σε ανεξάρτητη επικύρωση Set.

Άνω

: συγκέντρωση στον ορό (αντίγραφα /μl) του miR-141, miR-375, miR-200c, miR-200a και miR-210 μετρήθηκε με TaqMan miRNA qRT-PCR. Dot-πλοκή που συνδέονται

P τιμές

είχαν ανατεθεί από Wilcoxon signed-rank test. Dot οικόπεδα και καμπύλες ROC παράχθηκαν όπως περιγράφεται για το Σχ. 1.

Κάτω

:

Κόκκινο

, τα αποτελέσματα από το σύνολο του δείγματος επικύρωσης που λαμβάνεται από το Πανεπιστήμιο του Michigan.

Μαύρο

, τα αποτελέσματα από την πρωτογενή σύνολο του δείγματος που ελήφθη από το Πανεπιστήμιο της Ουάσιγκτον αναπαράγεται από το Σχ. 1

Β

, κάτω

. AUC, περιοχή κάτω από την καμπύλη? mCRPC, προστάτη ορούς ασθενή με καρκίνο? FC, πολλαπλή μεταβολή? CTL, οροί ελέγχου (από ίδιας ηλικίας αρσενικά άτομα με φυσιολογικό PSA και αρνητική δακτυλική εξέταση).

Η

Για να επικυρώσετε τα ευρήματα αυτά σε ένα ανεξάρτητο σύνολο του δείγματος που συλλέγονται σε διαφορετικό ίδρυμα, μετρήσαμε miR-141 , miR-200A, miR-200c, miR-375 και miR-210 από τους ορούς επιπλέον 21 ασθενείς mCRPC και 20 ίδιας ηλικίας υγιείς μάρτυρες που συλλέγονται στο Πανεπιστήμιο του Michigan. Όλες οι πέντε miRNAs ήταν αυξημένα σε ορούς από περιπτώσεις mCRPC σχέση με τους μάρτυρες σε αυτό το ανεξάρτητο σύνολο επικύρωσης. MiR-141, miR-375 και miR-210 ήταν σημαντικές σε

P

-τιμή κατωφλίου των & lt? 0.01 στην δεύτερη ομάδα (

P =

0.001,

P =

0.021,

P =

0.022, αντίστοιχα) και miR-200a και miR-200c έτειναν προς τη σημασία (

P =

0.073,

P =

0.055, αντίστοιχα) (Εικ. 1

C

,

πάνω

). καμπύλες ROC ήταν γενικά συμφωνούσαν μεταξύ των συνόλων δείγμα από τα δύο θεσμικά όργανα (Εικ. 1

C

,

κάτω

). Ανάλυση των δεικτών miRNA ορού σε διάφορους συνδυασμούς απέδειξε ότι η προσθήκη επιπλέον miRNAs σε ορό miR-141 (η οποία είχε μόνη την καλύτερη απόδοση) δεν βελτίωσε την ικανότητα να διακρίνουν μεταξύ περιπτώσεων και ελέγχων (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Συνεπής με αυτή την παρατήρηση, διαπιστώσαμε ότι μεταξύ των περιπτώσεων καρκίνου στις οποίες η έκφραση του miR-141, miR-200A, miR-200c, και miR-375 ήταν υψηλότερο από όλες τις υγιείς μάρτυρες, αυτά τα miRNAs επίσης συσχετίστηκε σημαντικά με το άλλο και με ορό PSA (Πίνακας S2). Σε αντίθεση, miR-210 δεν έδειξε σημαντική συσχέτιση με οποιαδήποτε από αυτές τις τέσσερις miRNAs (Πίνακας S3), ούτε με την PSA στον ορό, γεγονός που υποδηλώνει ότι παρέχει ξεχωριστές πληροφορίες για τη βιολογία της νόσου.

Για να προσδιοριστεί κατά πόσον οι πέντε δείκτες miRNA ορού του mCRPC εκφράζονται σε ιστό καρκίνου του προστάτη και ως εκ τούτου θα μπορούσε να είναι εύλογα καρκινικών κυττάρων που προέρχονται από, μετρήσαμε την έκφρασή τους σε επιθηλιακά κύτταρα που είχαν σύλληψη λέιζερ μικρο-ανατομή από ιστούς πρωτοπαθή καρκίνο του προστάτη (

n =

8) και μεταστάσεις στους λεμφαδένες (

n =

8). Διαπιστώσαμε miR-141, miR-200A, miR-200c, miR-375 και miR-210 σε όλους τους τύπους ιστών αξιολογήθηκαν (Πίνακας S3), γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτές οι πέντε miRNAs, όταν βρίσκονται στην κυκλοφορία, μπορεί να προέρχονται από τον καρκίνο του προστάτη, αν και άλλες πρόσθετες πηγές δεν μπορεί να αποκλειστεί.

Τρεις του προστάτη ορού σχετίζονται με τον καρκίνο miRNAs προσδιορίζονται (mIR-141, miR-200Α και miR-200c) είναι επιθηλιακά ειδικά, πολύ σχετικές με τη σειρά και να έχουν ρόλους σε γνωστές τη διατήρηση της επιθηλιακής κατάσταση με καταστολή της μετάβασης επιθηλιακών-to-μεσεγχυματικά [4]. Υποθέτουμε ότι τα αυξημένα επίπεδα κυκλοφορούντων του miR-141, miR-200a και miR-200c αντανακλούν την επιθηλιακής προέλευσης των καρκινικών κυττάρων του προστάτη.

Η παρουσία αυξημένα κυκλοφορούν miR-141 και miR-375 σε ασθενείς mCRPC έχει επίσης έχουν παρατηρηθεί τα τελευταία mCRPC κυκλοφορούν μελέτες βιοδεικτών miRNA [12] – [16]. Είναι ενδιαφέρον, αυξημένα miR-210 δεν έχει αναφερθεί σε αυτές τις άλλες μελέτες, παρά το γεγονός ότι παρατηρήσαμε αυτό σε ανεξάρτητα σύνολα δείγμα από δύο διαφορετικά όργανα. Αυτό θα μπορούσε να οφείλεται σε διάφορες ομάδες σύγκρισης που χρησιμοποιούνται (π.χ., εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη και όχι υγιείς μάρτυρες ως συγκριτή να mCRPC), η χρήση του πλάσματος αντί του ορού, οι διαφορές όσον αφορά την προσέγγιση αναλυτική δεδομένα που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό εκφράζονται διαφορικά miRNAs, καθώς και πιθανές διαφορές στα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών mCRPC σε διαφορετικές μελέτες.

τα αυξημένα επίπεδα του miR-210 σε ορό από ασθενείς με mCRPC ήταν ιδιαίτερα ενδιαφέρουσα επειδή αυτή miRNA είναι καλά γνωστό ότι ενεργοποιείται μεταγραφικά από τον υποξία -inducible παράγοντας 1 άλφα (HIF-1α) [17], [18] και μπορούν να συμβάλλουν στην προσαρμογή στην υποξία σε όγκους [19], [20]. Αυτό εγείρει την πιθανότητα ότι miR-210 παράγεται και απελευθερώνεται από υποξικά κύτταρα στον καρκίνο του προστάτη (ή /και από το μικροπεριβάλλον του όγκου), μια πιθανή εξήγηση για τα αυξημένα επίπεδα του miR-210 που παρατηρήσαμε στον ορό ένα υποσύνολο ασθενών με mCRPC.

Για να ελέγξετε αν η υποξία μπορεί να τονώσει την παραγωγή και την απελευθέρωση του miR-210 στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη, θα χαρακτηρίζεται miR-210 αφθονία σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη LNCaP και vcap (καθώς και σε φιλτράρεται ρυθμισμένο μέσο) υπό ορθοξικές (20% O

2) και υποξική (1% O

2) προϋποθέσεις κατά τη διάρκεια μιας 72-ωρη χρονική πορεία (Εικ. 2). επίπεδα miR-210 αυξήθηκαν από υποξία σε σύγκριση με τη φυσιολογική οξυγόνωση με αρχική επαγωγή σε κύτταρα LNCaP που ακολουθείται από μετέπειτα αυξημένο επίπεδο στον ρυθμισμένα μέσα (Εικ. 2). Σε κύτταρα vcap, εμείς δεν τηρούν την ίδια αύξηση στο miR-210 αντίγραφα /ng του RNA και τα επίπεδα μειώθηκαν σε 72 ώρες. Υποθέτουμε ότι αυτό θα μπορούσε να οφείλεται σε κυτταρικό θάνατο ή, εναλλακτικά, ότι η ρύθμιση της miR-210 σε απόκριση προς υποξία σε κύτταρα VCAP μπορεί να είναι κατά κύριο λόγο συμβαίνει στο επίπεδο της απελευθέρωσης. Ωστόσο, κάναμε παρατηρούμε μια σταδιακή, εξαρτώμενη από το χρόνο αύξηση του επιπέδου του εξωκυτταρικού miR-210 στο ρυθμισμένο μέσο των κυττάρων VCAP (Εικ. 2). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα αυξημένα επίπεδα του miR-210 ανιχνεύθηκε στον ορό θα μπορούσε να αντικατοπτρίζει την υποξία του όγκου.

αριστερή στήλη,

miR-210 αντίγραφα /ng RNA σε LNCaP και vcap ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε ορθοξικές (20% O

2) (λευκές ράβδοι) ή υποξικό (1% O

2) (μπλε γραμμές) οι προϋποθέσεις για 24, 48 ή 72 ώρες.

δεξιά στήλη,

miR-210 αντίγραφα /μl σε φιλτράρεται ρυθμισμένο μέσο που αντιστοιχεί στο κυτταρικών δειγμάτων. *,

P

αξία & lt? 0,05? **

P

αξία & lt? 0,01? ***

P

αξία & lt?. 0.001 (έλεγχος τ)

Η

όγκων υποξία είναι μια καλά χαρακτηρίζεται διαδικασία που συμβάλλει στην εξέλιξη του καρκίνου και της μετάστασης σε πολλούς ανθρώπινους καρκίνους [21]. Αξιολόγηση της υποξίας όγκου σε mCRPC έχει περιοριστεί μέχρι σήμερα λόγω της σπάνιας δειγματοληψία των μεταστάσεων για τη συνήθη κλινική φροντίδα. Σε μια μελέτη ανοσοϊστοχημείας έκφρασης HIF-1α που ενσωματώνεται ένα μικρό σύνολο των μεταστάσεων του καρκίνου του προστάτη, ο HIF-1α έκφραση παρατηρήθηκε να ποικίλλουν ευρέως σε μεταστατικές αλλοιώσεις [22]. Εδώ, δείχνουμε ότι ένα υποσύνολο των ασθενών με μεταστατικό καρκίνο του προστάτη έχουν αυξημένα επίπεδα ορού miR-210, παρέχοντας στοιχεία για προηγουμένως από τις πιο παρεξηγημένες υποξία στο mCRPC. Αν και μη-καρκινικά πηγές ιστού του miR-210, δεν μπορεί να αποκλειστεί το γεγονός ότι η συστηματική υποξαιμία δεν είναι ένα τυπικό χαρακτηριστικό της mCRPC συνάδει με ένα μοντέλο στο οποίο υποξία των ιστών του όγκου είναι η προέλευση της περίσσειας ορού miR-210. Αξιοσημείωτα, αυξημένα κυκλοφορούντα miR-210 έχει επίσης παρατηρηθεί σε ασθενείς με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα [23], μια ασθένεια στην οποία υποξία όγκου είναι καλά αναγνωρισμένο και οφείλεται στην υψηλή διάμεση πίεση λόγω της απόκρισης δεσμοπλαστικού ξενιστή.

Μια καλά τεκμηριωμένη φαινόμενο που σχετίζεται με υποξία του όγκου είναι η σύνδεση με αντίσταση στη θεραπεία με ακτινοθεραπεία, χημειοθεραπεία και άλλες θεραπείες [21]. Για να καθοριστεί εάν τα επίπεδα miR-210 που παρατηρείται στον ορό συσχετίστηκαν με αντοχή θεραπεία, μπορούμε αναδρομικά αξιολογηθεί κατά πόσον οι ασθενείς να ανταποκρίνεται ή ανθεκτικά στη συνεχιζόμενη θεραπεία με τον υπολογισμό% μεταβολή του PSA /ημέρα χρησιμοποιώντας τις διαθέσιμες τιμές κλινική PSA μετρήθηκε πιο πρόσφατα, πριν από και κατά τη στιγμή της ορό miR-210 κλήρωση. Θεραπείες ποικίλει μεταξύ των ασθενών σε αυτή την αναδρομική του πληθυσμού, αλλά τυπικά εμπλέκονται θεραπεία στέρησης ανδρογόνων χρησιμοποιείται ένας αγωνιστής GnRH σε συνδυασμό με χημειοθεραπευτικό παράγοντα (π.χ., docetaxel, μιτοξαντρόνη). Βρήκαμε ότι στον ορό των επιπέδων του miR-210 συσχετίζονταν σημαντικά με την αλλαγή% PSA /ημέρα κατά τη διάρκεια της θεραπείας (Εικ. 3

Μια

, Pearson r = 0,46,

P =

0,029). Για να μειωθεί το δυναμικό του θορύβου από ασθενείς οι οποίοι είναι λιγότερο κατατοπιστική λόγω των χαμηλών επιπέδων του καρκίνου που σχετίζονται με miRNAs ορού, αναλύσαμε επίσης ένα υποσύνολο των ασθενών με υψηλά επίπεδα mCRPC που σχετίζονται με miRNAs ορού (δηλαδή, «miRNA-υψηλής υποσύνολο», που ορίζονται ως οι ασθενείς των οποίων ορό miR-141, miR-200A, miR-200c και /ή των επιπέδων του miR-375 ήταν μεγαλύτερη από την υψηλότερη τιμή που παρατηρείται σε οποιαδήποτε από τις 25 υγιείς μάρτυρες). Στην ομάδα αυτή, η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων του miR-210 και την αλλαγή% PSA /ημέρα ήταν ακόμη μεγαλύτερη (Εικ. 3

Μια

, Pearson r = 0,61,

P

= 0,029). Επιπλέον, τα επίπεδα του miR-210 στον ορό ήταν εντυπωσιακά χαμηλότερα σε ασθενείς των οποίων η νόσος ανταποκρίνεται στη θεραπεία (σταθερή ή μειώνεται PSA), σε σύγκριση με εκείνα των οποίων η νόσος ήταν ανθεκτική σε θεραπεία (PSA αυξάνεται κατά ≥25%) (Σχ. 3

Β,

P

=

0.001). Είναι σημαντικό, εμείς δεν παρατηρούμε αυτή τη συσχέτιση με τις άλλες τέσσερις miRNAs ορού που προσδιορίζονται στη μελέτη μας (Εικ. 3

C

). Τα δεδομένα μας δείχνουν ένα μοντέλο στο οποίο αυξημένη σηματοδότηση απάντηση υποξία είναι παρούσα σε μια υποομάδα ασθενών mCRPC, με αποτέλεσμα την αύξηση του ορού miR-210 και η αντίσταση θεραπεία

Άνω:.

miR-210 αντίγραφα /μl ορού έναντι% PSA αλλαγή /ημέρα. % Μεταβολή PSA /ημέρα αντιπροσωπεύει ένα μέτρο της ανταπόκρισης στη θεραπεία και υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας διαθέσιμες τιμές κλινικών PSA μετρήθηκαν πιο πρόσφατα προ, και κατά τη στιγμή της ορό miR-210 κλήρωση. Μέσος χρόνος μεσολάβησε μεταξύ των δύο αίματος ισοπαλίες ήταν 30 ημέρες. Οι κλειστοί κύκλοι αντιπροσωπεύουν το υποσύνολο των ασθενών που ορίζεται ως «miRNA-high» με βάση υψηλότερη αφθονία του mCRPC σχετιζόμενη miRNAs ορού σε σύγκριση με όλα τα άτομα ελέγχου (όπως περιγράφεται στο Αποτελέσματα και Συζήτηση). Ανοικτοί κύκλοι αντιπροσωπεύουν τους ασθενείς με mCRPC που δεν πληρούν τον ορισμό για «miRNA-υψηλό». Συνεχής γραμμή αντιπροσωπεύει γραμμή τάσης της υποομάδα ασθενών miRNA-υψηλή, διακεκομμένη γραμμή αντιπροσωπεύει γραμμή τάσης από όλους τους ασθενείς.

Μέση:

miR-210 αντίγραφα /μl ορού σε ασθενείς είτε με Response PSA (R) ή και καμία, απάντηση PSA (NR). PSA απόκριση ορίζεται ως μια μείωση ή σταθεροποίηση PSA (καμία αλλαγή λιγότερο από 25% αύξηση) και αριθ Response PSA ορίζεται ως αύξηση του PSA του 25% ή περισσότερο, παρόμοια με τα κριτήρια Ομάδα Εργασίας του καρκίνου του προστάτη.

Κάτω:.

Αντίγραφα /μl ορού του miR-141, miR-200A, miR-200c και miR-375 σε ασθενείς, R και NR

Η

Για τις γνώσεις μας, αυτό είναι η πρώτη έκθεση των κυκλοφορούντων miR-210 σε συνδυασμό με mCRPC. Τα αποτελέσματά μας εγείρουν την πιθανότητα ότι ο ορός επίπεδα miR-210 θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για την ταυτοποίηση ενός βιολογικώς διακριτή, υποσύνολο των ασθενών mCRPC με υποξία που σχετίζονται με όγκους, για τους οποίους θα μπορούσε να θεωρηθεί η ανάπτυξη εναλλακτικών θεραπευτικών προσεγγίσεων. Για παράδειγμα, έχουν το πλάσμα επίπεδα miR-210 έχουν αναφερθεί ότι είναι αυξημένα σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος και ως δείκτης της υποξίας [23], [24], καθώς και συσχετίζεται με απόκριση σε trastuzumab σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού [25]. Επιπλέον, οι αναστολείς mTOR μελετηθούν σε καρκίνο του προστάτη, και προ-κλινικές μελέτες έχουν δείξει ότι η αναστολή mTOR μπορεί να οδηγήσει σε ενεργοποίηση ΑΚΤ και HIF-1α μεταγραφικής ενεργοποίησης [26].