Αφηρημένο

Είναι όλο και περισσότερο αναγνωρίζεται ότι το μικροπεριβάλλον του όγκου διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην έναρξη και εξέλιξη του καρκίνου του πνεύμονα. Ειδικότερα αλληλεπίδραση των καρκινικών κυττάρων, μακροφάγων, και φλεγμονώδη απόκριση στο μικροπεριβάλλον του όγκου έχει αποδειχθεί ότι διευκολύνει την προσβολή καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση. Οι ειδικές μοριακές οδοί σε μακροφάγα που immunoedit ανάπτυξη του όγκου δεν είναι σαφώς καθορισμένες. Προκαλώντας υποδοχέα που εκφράζεται σε μυελοειδή κύτταρα 1 (TREM-1) είναι ένα μέλος της υπερ-οικογένειας ανοσοσφαιρίνης που εκφράζεται σε μια επίλεκτη ομάδα των μυελοειδή κύτταρα κυρίως μονοκύτταρα /μακροφάγα. Πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι η έκφραση του TREM-1 σε όγκους μπορεί να προβλέψει την επιθετικότητα του καρκίνου και της νόσου αποτελέσματα στο ήπαρ και ο καρκίνος του πνεύμονα, ωστόσο ο μηχανισμός της TREM-1 έκφραση στον καθορισμό του καρκίνου δεν έχει οριστεί. Στη μελέτη αυτή αποδεικνύει ότι ο ιστός του όγκου από ασθενείς με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα εμφανίζουν αυξημένη έκφραση του TREM-1 και PGE

2. Ανοσοϊστοχημεία και ανοσοφθορισμού επιβεβαίωσε ότι η έκφραση του TREM-1 επιλεκτικά φαίνεται στο CD68 θετικών μακροφάγων. Με τη χρήση ενός

in vitro

μοντέλο επιβεβαιώσαμε ότι η έκφραση του TREM-1 είναι αυξημένη σε μακροφάγα που είναι συν-καλλιεργήθηκαν με ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα. Μελέτες με αναστολείς COX-2 και siCOX-2 έδειξε ότι η έκφραση του TREM-1 σε μακροφάγα σε μικροπεριβάλλον του όγκου εξαρτάται από την COX-2 σηματοδότηση. Οι μελέτες αυτές για πρώτη φορά ορίζουν μια σύνδεση μεταξύ του όγκου της COX-2 επαγωγή, PGE

2 παραγωγή και έκφραση του TREM-1 σε μακροφάγα σε μικροπεριβάλλον του όγκου και υποδηλώνουν ότι TREM-1 θα μπορούσε να είναι ένας νέος στόχος για ανοσοδιαμόρφωση όγκου.

Παράθεση: Yuan Ζ, Mehta HJ, Mohammed K, Nasreen Ν, Ρωμαϊκή R, Brantly M, et al. (2014) TREM-1 επάγεται στο σχετιζόμενο με όγκο μακροφάγα από κυκλοοξυγενάση Διαδρομή στην Ανθρώπινη μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 9 (5): e94241. doi: 10.1371 /journal.pone.0094241

Επιμέλεια: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanità, Ιταλία

Ελήφθη: 4 Σεπ 2013? Αποδεκτές: 14, Μαρτίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 19 Μάη, 2014

Copyright: © 2014 Yuan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε από το Υπουργείο Υποθέσεων Βετεράνων (MR σε RTS). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι μία από τις πλέον θανατηφόρες των καρκίνων σε όλο τον κόσμο. Μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC) αντιπροσωπεύει περισσότερο από το 80% όλων των καρκίνων του πνεύμονα. Κατά μέσο όρο, το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για NSCLC είναι περίπου 15% [1]. Αν και έχει σημειωθεί σημαντική πρόοδος με τις συμβατικές θεραπείες, η χαμηλή συνολική επιβίωση και κακή πρόγνωση για τους ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα υποδεικνύει την ανάγκη να αναπτυχθούν νέες θεραπευτικές επιλογές για αυτή την καταστροφική ασθένεια [2]. Ως αποτέλεσμα, υπήρξε συνέχισε αναζήτηση για να καθορίσει τις δυνητικές οδούς που οδηγούν την δημιουργία όγκων στον καρκίνο του πνεύμονα, με την ελπίδα για την ανάπτυξη εναλλακτικών ή /και συμπληρωματικές θεραπείες για τον καρκίνο του πνεύμονα.

Είναι όλο και περισσότερο αναγνωρίζεται ότι το μικροπεριβάλλον του όγκου διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην έναρξη και την εξέλιξη του καρκίνου του πνεύμονα. ανάπτυξη όγκων εξαρτάται από παράγοντες στο μικροπεριβάλλον? αλληλεπιδράσεις μεταξύ κακοήθη κύτταρα, στρωματικά κύτταρα, συστατικά εξωκυτταρικής μήτρας-, διάφορα φλεγμονώδη κύτταρα, καθώς και μια σειρά διαλυτών μεσολαβητών συμβάλει στην ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου [3] [4] [5] [6]. Τα μακροφάγα σε όγκους αναφέρονται συνήθως τα μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους (ΤΑΜ) και η παρουσία τους μπορεί να είναι σημαντική (έως 60% του στρώματος του όγκου). Ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα των μακροφάγων είναι πλαστικότητας τους, μια ικανότητα είτε ενίσχυσης ή καταπολέμηση όγκων, ανάλογα με το περιβάλλον του όγκου, η οποία τους έδωσε τη φήμη ενός δίκοπο μαχαίρι στη βιολογία του όγκου [7] [8] [9] [10] [ ,,,0],11] [12]. Υπάρχουν συσσωρευμένα στοιχεία ότι τα καρκινικά κύτταρα να προσλάβουν και να ανατρέψει τα μακροφάγα να χρησιμεύσει ως ενεργοί συνεργάτες στο νεοπλασματικές πρόγραμμά τους. Επίμονη ενεργοποίηση των μακροφάγων προκαλεί τοπική χρόνια φλεγμονή, την παραγωγή κυτοκινών και χημειοκινών που προάγει την ογκογένεση [3] [4] [6] [9] [13] [14]. Ωστόσο, οι μοριακοί μηχανισμοί με τους οποίους οι όγκοι ενεργοποιούν τα μακροφάγα για την προώθηση της ανάπτυξης του όγκου δεν είναι σαφώς καθορισμένες.

πρωτεΐνες TREM (Πυροδότηση υποδοχείς που εκφράζονται επί μυελοειδή κύτταρα) είναι μία οικογένεια υποδοχέων κυτταρικής επιφάνειας ανοσοσφαιρίνη εκφράζεται σε μυελοειδή κύτταρα [15]. Η οικογένεια TREM των υποδοχέων της πρωτεΐνης αποτελείται από TREM-1, TREM-2, TREM-3 (ποντίκι), TREM-όπως μεταγραφή (TLT) -1, και TLT-2. Η συστάδα γονιδίων TREM βρίσκεται στο ανθρώπινο χρωμόσωμα 6p21 και ποντικού χρωμόσωμα 17C3 [16] [17]. TREM-1 ήταν η πρώτη TREM ταυτοποιηθεί και αρχικές μελέτες απέδειξαν TREM-1 ως ενισχυτής του συνδρόμου συστηματικής φλεγμονώδους απόκρισης και σηψαιμία [18] [19] [17] [20]. Η ακριβής συνδετήρας για TREM-1 είναι άγνωστος, ωστόσο εμείς και άλλοι έχουν δείξει ότι βακτηριακές και ιογενείς προϊόντων [21] [19] επάγουν την έκφραση του TREM-1. Επιπλέον, έχουμε δείξει ότι εξαρτάται και ανεξάρτητη MyD88 μονοπάτια ενεργοποιήσετε TREM-1 για την αντιμετώπιση ειδικών συνδετήρων TLR [21]. Οι λειτουργικές συνέπειες της αποσιώπησης TREM-1 γονιδίου σε μακροφάγα περιλαμβάνουν μια αλλαγμένη διαθεσιμότητα βασικών σηματοδότησης (CD14, ΙκΒα, MyD88) και μόρια τελεστών (MCP-1, IL-1β, IL-6, IL-23) κατάντη της ενεργοποίησης TLR [22]. Πρόσφατες μελέτες έχουν επίσης δείξει ότι λιπιδικών μεσολαβητών όπως οι προσταγλανδίνες ρυθμίζουν την έκφραση του TREM-1. Ειδικότερα PGE

2 επάγει ενώ PGD

2 και PGJ

2 αναστέλλει την έκφραση του TREM-1 [23] [24]. Μαζί αυτές οι μελέτες έχουν προτείνει έναν κεντρικό ρόλο για TREM-1 στην ενίσχυση της TLR που προκαλούνται αντιδράσεις. Ωστόσο, ο ρόλος του TREM-1 σε φλεγμονή και μικροπεριβάλλον που σχετίζονται με όγκο δεν έχει τεκμηριωθεί.

Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι TREM-1 εκφράζεται εξαιρετικά σε κόλον, ηπατοκυτταρικό και πνευμονικό ιστό καρκινώματος [25] [26] [27] [5]. Επιπλέον, TREM-1 έκφραση σε ασθενείς με NSCLC έχει συσχετιστεί με υποτροπή του καρκίνου και την κακή επιβίωση των ασθενών που υποδηλώνει ότι TREM-1 μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου [27]. Ωστόσο ο μηχανισμός με τον οποίο TREM-1 επάγεται στον ιστό του όγκου δεν έχει οριστεί.

Διενεργήσαμε αυτή τη μελέτη για να καθοριστεί η ειδική κυτταρική έκφραση του TREM-1 σε ανθρώπινο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) ιστού και να καθορίσει το μηχανισμό με τον οποίο κύτταρα όγκου επάγει την έκφραση του TREM-1. Υποθέσαμε ότι TREM-1 ενεργοποίηση σε μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους μπορεί να προκληθεί από PGE

2 που παράγεται από κυκλο-οξυγενάσης-2 από τα κύτταρα του όγκου. Ερευνήσαμε την υπόθεση μας χρησιμοποιώντας ένα σύστημα συν-καλλιέργειας των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων με ανθρώπινα μονοκύτταρα /μακροφάγα

in vitro

.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

η ανθρώπινη φυσιολογική πνεύμονα και NSCLC λήφθηκαν τόσο σε κατεψυγμένη μορφή και ως κύτταρο τετράγωνα μακριά από την κλινική και μεταγραφική έρευνα ινστιτούτο (CTSI) στο Πανεπιστήμιο της Φλόριντα η οποία παρέχει μια τράπεζα ιστών για ερευνητικούς σκοπούς. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς των οποίων οι ιστοί έχουν κλίση. Οι γραπτές συγκαταθέσεις κατατεθεί για όλους τους συμμετέχοντες στη μελέτη. Η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή Δεοντολογίας και το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review στο Πανεπιστήμιο της Φλόριντα. Αριθμός έγκρισης (# IRB201200392).

Αντιδραστήρια

ορό εμβρύου μόσχου (FBS) (10%) λήφθηκε από AmericanType Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). RPMI-1640 ελήφθη από τη Gibco (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA). φορβόλη 12-μυριστικό 13-οξικό άλας (ΡΜΑ), NS398 ελήφθησαν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ). ΕΡ1, ΕΡ2, ΕΡ4, ανταγωνιστές των υποδοχέων (GW848687, AH6809, AH 23848) και ανασυνδυασμένη PGE2 και PGD2 αγοράστηκαν από την Cayman χημικές ουσίες. ανταγωνιστή EP1 (L-798 – 106) αγοράστηκε από Tocris Bioscience. cAMP agaonist (φορσκολίνη) αγοράστηκε από Sigma-Aldrich. COX-2 και αντισώματα ακτίνης, μη στοχεύοντας στην πισίνα siRNA (NS siRNA) και siRNA που στοχεύει COX-2 ελήφθησαν από την Santa Cruz Biotechnologies (Santa Cruz, CA).

Cell Culture και Πειράματα Co-κουλτούρα

Ανθρώπινα μονοκυτταρική κυτταρική σειρά U937, καρκίνο του πνεύμονα κυτταρική σειρά Α549, H23 ή H838 αγοράστηκαν από την ATCC και διατηρήθηκαν σε RPMI-1640 μέσο συμπληρωμένο με 10% FBS. Α549, Η23 ή H838 κύτταρα απλώθηκαν σε δίσκους των έξι φρεατίων (1,5 έως 2-× 10

6 κύτταρα ανά φρεάτιο) στα μέσα καλλιέργειας. U937 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ΡΜΑ (10 ng /ml) για 48 ώρες για να τα διαφοροποιηθούν σε μακροφάγα. U937 κύτταρα (2 έως -2,5 × 10

6 κύτταρα ανά ένθεμα), ανθρώπινα μακροφάγα (10

6 κύτταρα ανά ένθεμα) απλώθηκαν απευθείας στα ένθετα transwell (0.4 μm, BD Biosciences) σε μέσο καλλιέργειας. Πριν από την συγκαλλιέργεια, πνεύμονα καρκινικά κύτταρα και μακροφάγα πλύθηκαν με RPMI που περιέχει 0.1% αλβουμίνη βόειου ορού (βασικό μέσο). Μετά την τελευταία πλύση, η κατάλληλη βασικό μέσο προστέθηκε στα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα και ένθετα που περιέχουν μακροφάγα τοποθετήθηκαν σε κάθε φρεάτιο.

Παρασκευή ανθρώπινα μακροφάγα από περιφερικά μονοκύτταρα αίματος

Ανθρώπινα μονοκύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) απομονώθηκαν από φλεγμονώδεις πλακούντες φυσιολογικών δοτών πάνω από ένα Ficoll-Paque PLUS (GE Healthcare) κλίση. PBMCs διαφοροποιήθηκαν σε μακροφάγους με καλλιέργεια σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% FBS (Gibco) σε πυκνότητα 10

6 /ml για επτά ημέρες. Για ωρίμανση των ανθρώπινων μακροφάγων, 50 ng /ml ανθρώπινο M-CSF (Κ & amp? Συστήματα D) συμπληρώθηκε εντός πλήρους μέσου. Η καθαρότητα των μακροφάγων ελέγχονταν με κυτταρομετρία ροής (& gt? 90% CD14

+)

Ανοσοϊστοχημεία Ανάλυση

Ο καρκίνος του πνεύμονα και τα δείγματα φυσιολογικού ιστού από την περιοχή καρκίνωμα para ελήφθησαν από τρεις ασθενείς με. μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. Τομές παραφίνης (4 μm) βάφτηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη για ιστολογική αξιολόγηση. Ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ενός τροποποιημένου αβιδίνης-βιοτίνης υπεροξειδάσης μέθοδο. 4 μm τομές από σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, εγκλεισμένοι σε παραφίνη ιστοί τοποθετήθηκαν σε πλακίδια με πολυ-L-λυσίνη και έπειτα αποπαραφινοποιήθηκαν. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% επί 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά ανάκτηση αντιγόνου σε hier (ρΗ 6.0) για 4 λεπτά, οι τομές επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 ° C με αντι-TREM-1 αντίσωμα (HPA005563, Sigma-Aldrich) ή ισότυπου αντίσωμα ελέγχου κατά την αραίωση του 1:500, τότε ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας EnVision ™ System-HRP (DAB) (Dako). Η ειδικότητα της ανοσοϊστοχημείας επαληθεύτηκε χρησιμοποιώντας ένα ισότυπο αναφοράς αντίσωμα που αντικαθιστά τον πρωταρχικό αντιορού με ένα πανομοιότυπο συγκέντρωση του μη ανοσοποιημένα ποντικού ή ορό κουνελιού. Οι τομές προβληθεί σε × 100 μεγέθυνση για να προσδιορίσει τις περιοχές μεγαλύτερους αριθμούς TREM-1-θετικά κύτταρα. Ανοσοχρώση TREM-1 αναλύθηκε στα τυφλά από δύο σκάφους επικυρωμένο παθολόγους. Τα κύτταρα μετρήθηκαν σε πυκνότητα στους × 400 μεγέθυνση σε τουλάχιστον τρεις περιοχές με τις μεγαλύτερες αριθμούς TREM-1-θετικά κύτταρα.

Η έμμεση ανοσοφθορισμού

Τμήματα από φορμόλη σταθερό, παραφίνη-ενσωματωμένες πνεύμονα καρκινικούς ιστούς και όγκους παρακείμενο φυσιολογικό ιστό αποπαραφινοποιήθηκαν, έπειτα αποκλείσθηκαν με 2% ορό αλόγου σε ρυθμιστικό PBST για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά τον αποκλεισμό, τα πλακίδια επωάστηκαν με αντι-TREM-1 αντίσωμα (HPA005563, Sigma) σε αραίωση 1:500 όλη τη νύκτα στους 4 ° C, μετά από τρεις πλύσεις σε ψυχρό PBS, κηλιδώθηκαν με δευτερεύον αντίσωμα (Alexa Fluor 594 γαϊδάρου αντι-κουνελιού IgG, 1:500? Molecular Probes) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Για διπλή χρώση, τα πλακίδια πλύθηκαν και πάλι, με διάλυμα αποκλεισμού, και επωάστηκαν με αντίσωμα αντι-ανθρώπινης CD68 (κλώνος KP1, 1:100? Abcam) και ενός άλλου φθορο-συζευγμένο δευτερεύον αντίσωμα (Alexa Fluor 488 γαϊδάρου αντι-ποντικού IgG, 1: 500? Molecular Probes). ΫΑΡΙ περιέχουν μέσο στερέωσης (Molecular Probes) χρησιμοποιήθηκε για την πυρηνική χρώση. Εικόνες σε ένα μόνο επίπεδο κυττάρων παρατηρήθηκαν και φωτογραφήθηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού εξοπλισμένο με Χρέωση κάμερα Ζευγάρι Συσκευών (Leica SP5, Γερμανία).

παρεμβολή RNA

Τα κύτταρα επιμολυσμένα με siRNA ολιγονουκλεοτίδια που στοχεύουν την ανθρώπινη COX-2 mRNA, και ένα μη-σχετικό έλεγχο siRNA (Santa Cruz), μέσω ειδικών αντιδραστηρίων διαμόλυνσης LONZA (LONZA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα κύτταρα επωάστηκαν με σύμπλοκα siRNA για 24 h-72 h πριν την ανάλυση.

Κυτταρομετρίας Ροής

Ανθρώπινα μακροφάγα και U937 διαχωριζόμενες μακροφάγα εξετάστηκαν για επίπεδα έκφρασης υποδοχέα χρησιμοποιώντας FACS με αντι-ανθρώπινο CD14 APC /Cy7 (eBioscience) και TREM-1 (R &? συστήματα D) αντι-ανθρώπινη. Ισότυπο μονοκλωνικά αντισώματα (eBioscience) χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί έλεγχοι. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως σχετικά ποσοστά για τον έλεγχο.

Western Blotting

Ανοσοκηλίδωση για την ανίχνευση της COX-2 και ακτίνης, όπως διενεργείται όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28].

αντίστροφη μεταγραφή αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (RT-PCR)

Ολικό RNA από κυτταρολύματα απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ RNeasy Mini (QIAGEN). RNA (1 μ§) μεταγράφηκε αντίστροφα χρησιμοποιώντας τον ιό λευχαιμίας ποντικού αντίστροφη μεταγραφάση και ολίγο ά (Τ) 16 εκκινητή. PCR εναρκτήρες για την ανθρώπινη COX-2 ήταν προς τα εμπρός, 5′-CCCTTGGGTGTCAAAGGTAA-3 ‘και αντίστροφος, 5′-GCCCTCGCTTATGATCTGTC-3’. Αστάρια για ανθρώπινη TREM-1 ήταν προς τα εμπρός, 5′-GGCCACACCAACCTT CTG – 3 ‘και να αντιστραφεί, 5′-AGTGCCTGCCTC AATGTCTCCA-3’. Εκκινητές για ακτίνη ήταν προς τα εμπρός, 5′-AGAAAATCTGGCACCACACC-3 ‘και αντίστροφος, 5′-AGAGGCGTACAGGGATAGCA-3’. Για πραγματικού χρόνου PCR αντίδραση, τα ανθρώπινα TREM-1 και ακτίνη εκκινητές, καθώς και Taqman καθολική Master Mix II ελήφθησαν από την Applied Biosystems, και όλες οι αναλύσεις PCR έγιναν σε έναν ΑΒΙ Prism 7900HT. Τα επίπεδα αγγελιοφόρου RNA (mRNA) κανονικοποιήθηκαν προς ακτίνη. Σχετική έκφραση προσδιορίστηκε με CT ανάλυση (σε σχέση ποσοτικού προσδιορισμού).

ELISA

Διαφοροποιημένες μακροφάγα διεγέρθηκαν με κατάλληλες συγκεντρώσεις του ερεθίσματος για 12 ώρες. Τα υπερκείμενα της πολιτιστικής μέσου ελέγχθηκαν για την παρουσία της PGE

2 χρησιμοποιώντας ένα εμπορικά διαθέσιμο ELISA (R &? D Systems).

Στατιστική Ανάλυση

t-tests του Student έγιναν για να προσδιοριστεί στατιστικώς σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων χρησιμοποιώντας GraphPad Prism (GraphPad Software, CA, USA). Τα μέσα επίπεδα του TREM-1, COX-2 mRNA, PGE

2 συγκέντρωση συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση διασποράς. P-value & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

TREM-1 αυξάνεται στα σχετίζεται με όγκο μακροφάγα στην Ανθρώπινη μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα

Είναι δεδομένο ότι TREM. -1 ρυθμίζεται αυξητικά σε μόλυνση και φλεγμονώδεις ιστούς. Δεδομένου ότι η χρόνια φλεγμονή συνδέεται στενά με τον καρκίνο ρωτήσαμε αν TREM-1 εκφράζεται σε NSCLC ιστό. Πραγματοποιήσαμε πρώτα RT-PCR και RT-qPCR από πνευμονικό ιστό των ασθενών με NSCLC. Είχαμε τη δυνατότητα να ανιχνεύσουν μια αύξηση TREM-1 μήνυμα από ανθρώπινο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα ιστό ενώ η έκφραση δεν ανιχνεύθηκε σε κανονικό ιστό πνεύμονα (Σχήμα 1Α και Β). Δεδομένου ότι η έκφραση του TREM-1 περιορίζεται σε μυελοειδή κύτταρα τα οποία εμείς αμφισβήτηση τύπους κυττάρων εκφράζουν TREM-1 σε ιστό καρκίνου του πνεύμονα. Προκειμένου να προσδιοριστούν οι συγκεκριμένους τύπους κυττάρων που εκφράζουν TREM-1 σε μικροπεριβάλλον του όγκου εκτελέσαμε ανοσοϊστοχημική ανάλυση (χρησιμοποιώντας τροποποιημένα αβιδίνης-βιοτίνης υπεροξειδάσης μέθοδο, αντι-TREM-1 αντίσωμα πρωτογενές αντίσωμα και αντίσωμα ελέγχου ταιριαστού ισότυπου) από δείγματα ανθρώπινου καρκίνου του πνεύμονα από ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. Ανοσοϊστοχημεία και immunoflorescent χρώση από τους όγκους του πνεύμονα έδειξαν ότι TREM-1-θετικά κύτταρα είναι τα μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους (Σχήμα 1 C). TREM-1 θετικά κύτταρα είναι μακροφάγα επιβεβαιώθηκε χρησιμοποιώντας CD68 χρώση ενός ειδικού μακροφάγων δείκτη η οποία επιβεβαίωσε ότι τα κύτταρα είναι πράγματι μακροφάγα (Σχήμα 1 D). Επιπλέον πρέπει επίσης να καθοριστεί εάν ο καρκίνος του πνεύμονα (κύτταρα Α549) εκφράζουν πρωτεΐνη TREM-1. Δεν ήταν σε θέση να ανιχνεύσουν την έκφραση του TREM-1 μήνυμα ή πρωτεΐνης σε κύτταρα όγκου μόνο (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Συλλογικά, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι TREM-1 έκφραση ρυθμίζεται αυξητικά σε μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους στον ανθρώπινο καρκίνο του πνεύμονα μη μικρών κυττάρων.

Α) RNA που εκχυλίζεται από δείγματα ανθρώπινου καρκίνου του πνεύμονα έδειξαν αύξηση στην TREM-1 μήνυμα. Β) Real time RT PCR επιβεβαίωσαν την αύξηση της TREM-1 μήνυμα (η = 3, * ρ & lt? 0,05). C) Αντιπροσωπευτικά ανοσοϊστοχημεία εικόνα καταδεικνύοντας αυξημένη έκφραση πρωτεΐνης TREM-1 σε μακροφάγα σε στρώματος του όγκου D) συνεστιακή μικροσκοπία με CD68 ειδικό μακροφάγων δείκτη και TREM-1 επιβεβαίωσε ότι τα κύτταρα που εκφράζουν TREM είναι ΤΑΜ.

Η

TREM-1 επάγεται σε ανθρώπινα μακροφάγα συν-καλλιεργήθηκαν με αδενοκαρκίνωμα πνεύμονα κύτταρα

Επειδή τα στοιχεία μας αποδεικνύουν ότι TREM-1 εκφράζεται σε μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους σε αδενοκαρκίνωμα ανθρώπινου πνεύμονα αναπτύξαμε ένα

in vitro

μοντέλο συν-καλλιέργειας για να προσδιορισθεί αν η έκφραση του TREM-1 σε ΤΑΜ στον όγκο σχετίζεται ειδικά με τα κύτταρα του όγκου. πειράματα συν-καλλιέργειας διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας ανθρώπινα μακροφάγα (ανθρώπινα μονοκύτταρα από το αίμα είχαν ωριμάσει σε μακροφάγα, όπως περιγράφεται στις μεθόδους) και Α549, Η23 και H838 καρκινικά κύτταρα ανθρώπινου πνεύμονα. Για τα πειράματα αυτά τα κύτταρα όγκου ή φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα (NL-20, ATCC) συν-καλλιεργήθηκαν με ωρίμανση ανθρώπινα μακροφάγα για 48 ώρες. Η έκφραση του TREM-1 προσδιορίστηκε με ανάλυση FACS. Συν-καλλιέργεια των κυττάρων όγκου με μακροφάγα οδήγησε σε επαγωγή του TREM-1 όπως προσδιορίστηκε ανάλυση FACS (Σχήμα 2Α). Από την άλλη μακροφάγα χέρι που συν-καλλιεργήθηκαν με φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα δεν δείχνουν αύξηση στην έκφραση πρωτεΐνης TREM-1 (Σχήμα 2Α και Β) υποδεικνύοντας ότι η έκφραση του TREM-1 σε ΤΑΜ είναι ένα αποτέλεσμα των κυττάρων όγκων στην μακροφάγα. Πραγματοποιήσαμε επίσης πρόσθετα πειράματα για την επιβεβαίωση της αυξημένης έκφρασης του TREM-1 μήνυμα. Φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα, και καρκινικά κύτταρα Α549, Η23 και H838 κύτταρα συν-καλλιεργήθηκαν με τα ανθρώπινα μακροφάγα για 48 ώρες ύστερα από την οποία το RNA εκχυλίστηκε από τα μακροφάγα. TREM-1 μήνυμα ανιχνεύθηκε με RT-PCR. Σε συμφωνία με τα δεδομένα μας με μακροφάγα TREM-1 έκφραση πρωτεΐνης η οποία συν-καλλιεργήθηκαν με καρκινικά κύτταρα έδειξαν αύξηση στην TREM-1 μήνυμα το οποίο δεν ανιχνεύτηκε σε μακροφάγα που καλλιεργήθηκαν με φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα (Σχήμα 2C). Μαζί, αυτά τα δεδομένα επιβεβαιώνουν ότι τα καρκινικά κύτταρα μπορούν να επάγουν την έκφραση του TREM-1 μήνυμα και πρωτεΐνης σε μακροφάγα.

Α) Τα μακροφάγα συνκαλλιεργήθηκαν με NL-20 (φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα) ή καρκινικά κύτταρα πνεύμονα (Α549, Η23 ή H838) για 48 ώρες. TREM-1 εκφράσεως είναι αυξημένο σε μακροφάγα που είχαν συν-καλλιεργήθηκαν με τα καρκινικά κύτταρα όπως καταδεικνύεται με ανάλυση FACS Β) ποσοστό των κυττάρων που χρωματίζονται θετικά για TREM-1, n = 3-4, * ρ & lt? 0,05) C) Αντιπροσωπευτικά ΚΤ- PCR από μακροφάγα συν-καλλιεργήθηκαν με κύτταρα όγκου έδειξαν έδειξαν αυξημένη έκφραση του TREM-1 μήνυμα.

η

Επαγωγή TREM-1 σε μακροφάγα που σχετίζεται με όγκο εξαρτάται από COX-2

Εμείς επόμενο ήθελε να διερευνήσει το μηχανισμό με τον οποίο κύτταρα όγκου επάγει την έκφραση του TREM-1 σε μακροφάγα. Αυξημένα cyclooygenase-2 (COX-2) έκφραση έχει συχνά παρατηρηθεί σε ανθρώπινο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [10], [29]. Εμείς και άλλοι έχουν δείξει ότι οι προσταγλανδίνες τροποποιούν την έκφραση του TREM-1 σε απόκριση σε LPS, ιδιαίτερα PGE2 διεγείρει ενώ PGD

2 και PGJ

2 αναστέλλουν την έκφραση του TREM-1 [23] [24]. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι η έκφραση του TREM-1 σε μεταλλάξεις TAM μπορεί να επάγεται από PGE

2 παραγωγή από τα κύτταρα του όγκου μέσω οδού κυκλοοξυγενάσης. Πρέπει πρώτα επιβεβαίωσε ότι ιστό όγκου και κύτταρα εκφράζουν COX-2 (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα επίπεδα της PGE

2 αυξήθηκαν σε πνευμονικό ιστό του όγκου (Σχήμα 3Α). Στη συνέχεια κατεργάζεται του μυελού των οστών που προέρχονται από μακροφάγα ποντικών άγριου τύπου με ανασυνδυασμένο PGE

2 και PGD

2 (10 μmοl) και εκτελείται RT-qPCR για να προσδιοριστεί η έκφραση του TREM-1 μήνυμα. Η θεραπεία με PGE

2 είχε σαν αποτέλεσμα την έκφραση της PGE

2 ενώ τα κύτταρα σε αγωγή με φορέα και PGD

2 δεν έδειξαν επαγωγή TREM-1 (Σχήμα 3Β).

Α) PGE

2 επίπεδα μετράται από τον ιστό ανθρώπινου πνεύμονα όγκου έδειξαν αύξηση στην PGE sub> 2 μήνυμα

2 ή PGD

2 (10 μιτιοΙ) για 12 ώρες και ανιχνεύτηκε TREM-1 έκφρασης. BMDM κατεργάζεται με PGE

2 έδειξαν αύξηση στην TREM 1-μήνυμα σε απόκριση προς PGE

2 θεραπεία (n = 3-4, ρ & lt? 0,05) ωστόσο TREM-1 μήνυμα δεν ανιχνεύθηκε σε κύτταρα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με PGD ​​

2.

η

για να επιβεβαιώσουν το ρόλο των COX-2 στην επαγωγή TREM-1 πραγματοποιήσαμε πειράματα όπου συν-καλλιεργημένα κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα με μονοκύτταρα /μακροφάγα για 48 ώρες η παρουσία των αναστολέων της COX-2 ή θεραπεία οχήματος. μακροφάγα ελέγχου συν-καλλιεργήθηκαν με φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα NL-20. Η έκφραση του TREM-1 προσδιορίστηκε με ανάλυση FACS. Όπως φαίνεται στο Σχ 4Α μονοκύτταρα (U937) κύτταρα που συν-καλλιεργήθηκαν με καρκινικά κύτταρα (κύτταρα Α549) έδειξαν αυξημένη έκφραση πρωτεΐνης TREM-1 η οποία δεν ανιχνεύεται όταν τα κύτταρα U937 συνκαλλιεργήθηκαν με NL-20 φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα. Η θεραπεία με αναστολέα της COX-2 (NS-398, 100 μπιοΙ) είχε ως αποτέλεσμα την κατάργηση της επαγωγής του TREM-1 (Σχήμα 4Α και 4Β). Προκειμένου να καθορίσει οριστικά το ρόλο των COX-2 επαγωγή TREM-1 που γκρέμισε την έκφραση της COX-2 σε μακροφάγα με τη χρήση siCOX-2. Τα μακροφάγα επιμολύνθηκαν με siCOX-2 ή ελέγχου siRNA για 48 ώρες πριν από την συν-καλλιέργεια με τα καρκινικά κύτταρα ή φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα (NL20) και η έκφραση της πρωτεΐνης TREM-1 ανιχνεύθηκε με ανάλυση FACS. Επιβεβαιώσαμε πρώτα ότι η έκφραση του COX-2 ήταν εξασθενημένος στα κύτταρα knockdown COX-2, όπως προσδιορίζεται με ανάλυση κηλίδος western για την COX-2 (Σχήμα 5Α). Όπως φαίνεται στο σχήμα 5Β και C TREM-1 πρωτεΐνη ρυθμίζεται αυξητικά στα μακροφάγα εκφράζουν siRNA ελέγχου που συν-καλλιεργήθηκαν με κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα (Α549, Η23 και H838 κύτταρα) αλλά όχι σε μακροφάγα που καλλιεργήθηκαν με φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα. Ωστόσο, η έκφραση της πρωτεΐνης TREM-1 καταργήθηκε το μακροφάγα επιμολυσμένα με COX-2 siRNA που ήταν συν-καλλιεργήθηκαν με καρκινικά κύτταρα (Α549, H23 ή H838 κύτταρα) (Σχήμα 5Β, 5C). Η έκφραση του TREM-1 μήνυμα επίσης καταργήθηκε το μακροφάγα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με siCOX-2 και συν-καλλιεργήθηκαν με κύτταρα όγκου (Εικόνα 5D). Μαζί αυτά τα στοιχεία δείχνουν σαφώς ότι η έκφραση του TREM-1 είναι COX-2 εξαρτώνται και διαμεσολαβείται από την παραγωγή της PGE

2.

Α) αντιπροσωπευτική εικόνα των μονοκυττάρων FACS ανάλυση-U937 ήταν συν-ultured με NL-20 ή Α549 κύτταρα με την παρουσία ή απουσία NS-398 (100 μmοl) (ειδικός αναστολέας COX-2). Η έκφραση του TREM-1 αυξήθηκε σε κύτταρα U937 συν-καλλιεργήθηκαν με κύτταρα Α549. Η θεραπεία με NS-398 ανέστειλε Αυτή η αυξημένη έκφραση Β) Ποσοστό κυττάρων που βάφτηκαν θετικά με TREM-1 (n = 4-5, ρ & lt?. 0.5)

Η

Α) ανάλυση κηλίδας Western από ανθρώπινα μακροφάγα με COX-2 siRNA επιβεβαίωσε γκρεμίσουμε πρωτεΐνης COX-2 σε κύτταρα με siCOX-2 σε σύγκριση με την ψευδο (ελέγχου) siRNA. Β) εικόνες FACS αποδεικνύοντας TREM-1 έκφραση από ανθρώπινα μακροφάγα εκφράζουν siRNA ελέγχου ή COX-2 siRNA συν-καλλιεργήθηκαν με NL-20 κύτταρα ή καρκινικά κύτταρα (Α549, H23 ή Η 838 κύτταρα). Η έκφραση του TREM-1 ήταν αυξημένη σε μακροφάγα εκφράζουν siRNA ελέγχου συν-καλλιεργήθηκαν με τα καρκινικά κύτταρα ενώ τα μακροφάγα με siCOX-2 έδειξε μία εξασθενημένη έκφραση του TREM-1. C) Ποσοστό κυττάρων που χρωματίζονται θετικά για TREM-1 χρώσης n = 3, ρ & lt? 0,05). Δ) Εκπρόσωπος RT-PCR από τα μακροφάγα με siCOX-2 παρουσιάζουν μειωμένη TREM-1 μήνυμα σε σύγκριση με τα μακροφάγα με τον έλεγχο του siRNA.

Η

Είμαστε δίπλα ήθελε να καθοριστεί ο μηχανισμός με τον οποίο PGE

2 μεσολαβεί η έκφραση του TREM-1 σε μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους. PGE συμπεριφορά των κυττάρων

2 επιρροές μέσω της σύνδεσης του τέσσερις διακριτές G-πρωτεΐνη συζευγμένη E-προστανοειδούς υποδοχέων του, αριθμημένα EP1-4 [30], [31]. Προκειμένου να προσδιοριστούν οι υποδοχείς μέσω των οποίων PGE

2 μεταβάλλει την έκφραση του TREM-1 πραγματοποιήσαμε πειράματα με την ΕΡ1 μέσω ανταγωνιστές ΕΡ4. Τα μακροφάγα υποβλήθηκαν σε αγωγή με το αντίστοιχο ανταγωνιστή (10, 50 μmοl) πριν από την συν-καλλιέργεια με κύτταρα Α549. ΕΡ1 (GW848687) και ΕΡ3 ανταγωνιστές (L-978-106) δεν είχε σημαντική επίδραση στην έκφραση του TREM-1 (τα δεδομένα δεν φαίνονται), ωστόσο τα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με ΕΡ2 (AH6809) και ΕΡ4 (ΑΗ23848) ανταγωνιστής έδειξε ένα μειωμένο έκφραση της πρωτεΐνης TREM-1 όπως προσδιορίστηκε με ανάλυση FACS (Σχ 6Α και Β). ΕΡ2 και ΕΡ4 υποδοχείς είναι ισχυρά ανοσορυθμιστικά μόρια που μοιράζονται την ικανότητα να αυξήσει ενδοκυτταρικές συγκεντρώσεις της κυκλικής μονοφωσφορικής αδενοσίνης (cAMP) μέσα σε δευτερόλεπτα έως λεπτά της PGE

2 δεσμευτική. Έτσι θελήσαμε να προσδιοριστεί εάν αυτές οι επιδράσεις διαμεσολαβούνται μέσω αύξησης των επιπέδων cAMP. Ως εκ τούτου, πραγματοποιήθηκαν πειράματα με φορσκολίνη cAMP αγωνιστή (10 μmοl) και σε συμφωνία με τα δεδομένα μας με αποκλεισμό ΕΡ2 βρήκαμε μια σημαντική αύξηση στην έκφραση του TREM-1 σε απόκριση σε φορσκολίνη (Εικόνα 6Α και 6Β). Συλλογικά τα δεδομένα αυτά δείχνουν ότι η έκφραση του TREM-1 σε μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους που επάγεται από PGE

2 προκαλείται μέσω ΕΡ2 και ΕΡ4 υποδοχείς και οδηγείται από την αύξηση του επιπέδου της cAMP.

A ) εικόνες FACS αποδεικνύοντας ότι η έκφραση TREM-1 είναι εξασθενημένος σε μακροφάγα που είναι συν-καλλιεργήθηκαν με κύτταρα όγκου παρουσία του ΕΡ2 και ΕΡ4 ανταγωνιστής (AH6809 και ΑΗ23848) ότι είναι αυξημένη με την παρουσία φορσκολίνης. Β) Ποσοστό κύτταρα που βάφονται θετικά με TREM-1 (n = 4-5, * ρ & lt?. 0.05)

Η

Συζήτηση

Η μελέτη μας δείχνει πειστικά ότι TREM-1 εκφράζεται στον ανθρώπινο ιστό NSCLC και ότι η έκφραση επιλεκτικά φαίνεται στα μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους στο στρώμα του καρκίνου. Δεν ήταν σε θέση να ανιχνεύσουν την έκφραση του TREM-1 σε φυσιολογικό ιστό πνεύμονα ή σε απομονωμένα κύτταρα όγκου. Επιπλέον δείχνουμε ότι καρκινικός ιστός έχει αυξημένη έκφραση της COX-2 με PGE

2 παραγωγής και ότι μακροφάγα που υποβάλλονται σε θεραπεία με PGE

2 δείχνουν μια αυξημένη έκφραση του TREM-1. Επιπλέον θεραπεία με αναστολείς COX-2 και knockdown του COX-2 σε μακροφάγους εξασθένησε την έκφραση του TREM-1 σε ένα μοντέλο συν-καλλιέργειας των κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα με μακροφάγα. Μαζί αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι TREM-1 μπορεί να είναι ένας κρίσιμος σύνδεσμος στο μικροπεριβάλλον του όγκου μεταξύ της ενεργοποίησης που σχετίζεται με όγκο μακροφάγων, φλεγμονώδη απόκριση, και εξέλιξη του καρκίνου.

σχετίζονται με τον καρκίνο φλεγμονή αναγνωρίζεται πλέον ως σήμα κατατεθέν των όγκων και η σύνδεση μεταξύ των πνευμόνων καρκινογένεση και χρόνιας ενεργοποίησης του ανοσοποιητικού συστήματος είναι καλά εδραιωμένη [32] [33] [34] [35] [36]. Η φλεγμονή που υπάρχει στο μικροπεριβάλλον του όγκου χαρακτηρίζεται από διήθηση λευκοκυττάρων που περιλαμβάνει σχετιζόμενο με τον όγκο μακροφάγων μαστοκύτταρα, δενδριτικά κύτταρα, κύτταρα φυσικοί φονείς, ουδετερόφιλα, ηωσινόφιλα και λεμφοκύτταρα [37] [38] [32]. Είναι, επίσης, όλο και περισσότερο αναγνωρίζεται ότι η αλληλεπίδραση των καρκινικών κυττάρων, μακροφάγων, και φλεγμονώδη απόκριση στο μικροπεριβάλλον του όγκου μπορεί να διευκολύνει καρκινικών κυττάρων εισβολή και τη μετάσταση [39] [40] [41] [42] [43] [44]. Προηγουμένως, έχουμε δείξει ότι διαμένουν τα μακροφάγα πνεύμονα είναι κρίσιμα τελεστές της ευαισθησίας στην μεταστατική ανάπτυξη καρκίνου του πνεύμονα [45]. Αρκετές ποντικού και ανθρώπινες μελέτες έχουν δείξει ότι η υψηλή πυκνότητα ΤΑΜ συνδέεται κυρίως με κακή πρόγνωση και την αντίσταση του ασθενούς σε θεραπείες σε ποικιλία καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων των μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [46] [47] [40] [41] [42] [ ,,,0],48] [44] [49]. Επιπλέον, η εξάντληση των μονοκυττάρων /μακροφάγων σε πειραματικό ρυθμίσεις ήταν επιτυχής στον περιορισμό της ανάπτυξης του όγκου και τη μεταστατική εξάπλωση και στην επίτευξη καλύτερες απαντήσεις σε συμβατική χημειοθεραπεία και αντιαγγειογόνο θεραπεία [50] [13]. Αν και ΤΑΜ συμβάλλουν σημαντικά στην παραγωγή του VEGF, IL-1β, ΤΝΡ-α, IL-6, IL-23, IL-8, ΜΜΡ που έχουν προ-αγγειογενετική και ανάπτυξη ιδιότητες, ειδικών μοριακών οδών σε μακροφάγα που immunoedit την ανάπτυξη του όγκου δεν είναι καλά καθορισμένες [37]. Βρήκαμε άφθονα μακροφάγα στο στρώμα του ιστού του όγκου η οποία έδειξε τόσο TREM-1 και CD68 εκφράσεις. CD68 είναι ένα μακροφάγο δείκτη για σχετιζόμενο με όγκο μακροφάγων που παίζει σημαντικό ρόλο στην αγγειογένεση και μετάσταση. Αύξηση των CD68 θετικών μακροφάγων στη μελέτη μας υποστηρίζει την υπόθεση ότι φλεγμονώδη μακροφάγα εκφράζουν TREM-1 μπορεί να συνεισφέρει στη συνέχιση της παραγωγής των μεσολαβητών που μπορούν να προωθήσουν την ανάπτυξη του όγκου.

Η ενεργοποίηση των υποδοχέων που εκφράζονται σε μυελοειδή κύτταρα 1 (TREM-1) είναι ένα μέλος της υπερ-οικογένειας ανοσοσφαιρίνης που εκφράζεται σε μια επίλεκτη ομάδα των μυελοειδή κύτταρα κυρίως μονοκύτταρα /μακροφάγα. Η έκφραση του TREM-1 έχει συσχετισθεί με ανοσολογική φλεγμονώδη απόκριση. Φλεγμονή προωθεί πολλαπλά χαρακτηριστικά του καρκίνου, όπως παρατεταμένη πολλαπλασιαστική σηματοδότηση, αντοχή σε κυτταρικό θάνατο και την επαγωγή της αγγειογένεσης [51] [35] [36]. Πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι η έκφραση του TREM-1 σε όγκους μπορεί να προβλέψει την επιθετικότητα του καρκίνου και της νόσου αποτελέσματα στο ήπαρ και πνεύμονα καρκίνος εμπλέκουν ότι η έκφραση του TREM-1 σε μακροφάγα μπορεί να είναι μία που σχετίζεται με την ανάπτυξη του όγκου και την εξέλιξη [25] [26] [27] . Έχουμε δείξει ότι οι λειτουργικές συνέπειες φίμωση TREM-1 γονιδίου σε μακροφάγα περιλαμβάνουν μια αλλαγμένη διαθεσιμότητα βασικών σηματοδότησης (CD14, ΙκΒα, MyD88) και μόρια τελεστών (MCP-1, IL-1β, IL-6, IL-23) κατάντη της ενεργοποίησης TLR [22] [21] [19]. Ειδικότερα η παραγωγή της IL-6 και IL-23 είναι υπερβολική από TREM-1 ενεργοποίησης [22], [52]. IL-6 και IL-23 έχει αποδειχθεί ότι εμπλέκονται στην ανοσο-μοντάζ σε μικροπεριβάλλοντα καρκίνωμα και συσχετίζεται με κακή πρόγνωση [53] [54] [55] [56]. Παρά το γεγονός ότι οι κερδοσκοπικές η υπερβολική παραγωγή αυτών των μεσολαβητών από TREM-1 μπορεί να είναι ένας μηχανισμός με τον οποίο TREM-1 έκφραση σε ΤΑΜ μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου. Τρέχουσες και μελλοντικές μελέτες θα καθορίσει τον ρόλο του TREM-1 στην ανάπτυξη του όγκου και να καθορίσει τους μηχανισμούς με τους οποίους TREM-1 ρυθμίζει την ανάπτυξη του όγκου [27] [56].

Σε αυτή τη μελέτη εξέτασε επίσης το μηχανισμό με τον οποίο TREM-1 εκφράζεται σε ΤΑΜ. Δεδομένου ότι η έκφραση του TREM-1 διαμορφώνεται από λιπίδιο μεσολαβητές ιδιαίτερα προσταγλανδίνης διερευνήσαμε το ρόλο της οδού κυκλοοξυγενάσης. Δείχνουμε ότι η αναστολή της COX-2 οδήγησε σε εξασθένηση της έκφρασης του TREM-1 σε μακροφάγα. Απ ‘όσο γνωρίζουμε αυτή είναι η πρώτη μελέτη που δείχνει ότι η έκφραση του TREM-1.Στην Tams σε μικροπεριβάλλον του όγκου εξαρτάται από την οδό σηματοδότησης της COX-2. Δείχνουμε επίσης ότι πνευμονικό ιστό του όγκου έχει αυξημένη παραγωγή της PGE

2, η οποία πιθανώς συμβάλλει στην έκφραση του TREM-1 σε ΤΑΜ. Επιπλέον μελέτες μας με τους ανταγωνιστές του υποδοχέα ΕΡ δείχνουν ότι τα αποτελέσματα της PGE2 σε όγκο μικρο-περιβάλλον που προκαλούνται από ΕΡ2 και ΕΡ4 υποδοχέα και είναι αποτέλεσμα της αύξησης της cAMP.