Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι μετατροπείς σήματος και ενεργοποιητές της μεταγραφής 3 (STAT3) μονοπατιού σηματοδότησης παίζει σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση, την αγγειογένεση, την ασυλία, και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων. Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε η συσχέτιση της ιντερλευκίνης (IL) -6 /STAT3 σηματοδοτικό μονοπάτι με Τ-λεμφοκύτταρα και κλινικές επιπτώσεις σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου.

Μέθοδοι

Εβδομήντα ένας ασθενείς που υποβλήθηκαν σε γαστρεκτομή λόγω αδενοκαρκίνωμα στομάχου μελετήθηκαν. Συλλέχθηκαν δείγματα αίματος πριν και μετά τη χειρουργική γαστρεκτομή για την ποσοτικοποίηση των επιπέδων της IL-6, IL-10 και VEGF χρησιμοποιώντας ένα ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία, καθώς και υποσύνολα Τ-λεμφοκυττάρων (CD3

+, CD4

+, CD8

+, CD4

+ /CD8

+) και φυσικά κύτταρα φονείς (ΝΚ) με κυτταρομετρία ροής. Επιπλέον, η έκφραση της IL-6, survivin, STAT3, φωσφορυλίωση STAT3 (ρ-STAT3), και VEGF προσδιορίστηκαν σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο και γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο μέσω κηλίδος Western και ανοσοϊστοχημεία.

Αποτελέσματα

επίπεδα Μετεγχειρητική της IL-6, IL-10 και VEGF στον ορό ήταν σημαντικά χαμηλότερες από προεγχειρητική επίπεδα. Ποσοστά των Τ-κυττάρων υποσύνολα και ΝΚ κυττάρων στο αίμα ήταν σημαντικά αυξημένη μετά μετεγχειρητική εβδομάδα 1 σε σύγκριση με την προεγχειρητική ομάδα, η οποία περαιτέρω επαυξημένης σε 1 μήνα μετά γαστρεκτομή. Επιπλέον, η έκφραση της IL-6, survivin, STAT3, ρ-STAT3, και VEGF αυξήθηκαν σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με παρακείμενο φυσιολογικό βλεννογόνο. Η έκφρασή τους συσχετίστηκε με το στάδιο ΤΝΜ του γαστρικού καρκίνου. Το επίπεδο ενεργοποίησης STAT3 σε κλινικά δείγματα συσχετίστηκε με IL-6 έκφραση. Όλα τα γαστρικά δείγματα όγκων, η οποία εκφράζεται ρ-STAT3, εξέφρασε επίσης IL-6 με ασθενή έκφραση ανιχνεύθηκε σε γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο.

Συμπέρασμα

Αυξημένη IL-6 που προκαλείται από την ενεργοποίηση του STAT3 παρατηρήθηκε σε νεοπλαστικό γαστρικού ιστού, η οποία συσχετίζεται θετικά με την εξέλιξη του όγκου. Επιπλέον, IL-6 και STAT3 κατάντη σήματα όπως η IL-10 και VEGF ήταν μειωμένη σε ασθενείς μετά την απομάκρυνση του γαστρικού καρκίνου, σε σύγκριση με πριν από τη λειτουργία. Ως εκ τούτου, η αναστολή του μονοπατιού σηματοδότησης IL-6 /STAT3 μπορεί να παρέχει μια νέα θεραπευτική στρατηγική κατά του καρκίνου του στομάχου

Παράθεση:. Wang Z, Si Χ, Xu Α, Meng Χ, Gao S, Qi Y, et al . (2013) Η ενεργοποίηση της STAT3 σε ανθρώπινα κύτταρα Γαστρικός Καρκίνος μέσω ιντερλευκίνη (IL) -6-Type κυτοκίνης Σηματοδοσίας συσχετίζεται με Κλινικές Επιπλοκές. PLoS ONE 8 (10): e75788. doi: 10.1371 /journal.pone.0075788

Επιμέλεια: Raya Khanin, Memorial Sloan Kettering,, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 7 Οκτώβρη 2012? Αποδεκτές: 21 του Αυγούστου 2013? Δημοσιεύθηκε: 7 Οκτωβρίου 2013

Copyright: © 2013 Dong et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη , που εκτελούνται στο εργαστήριο των συγγραφέων », υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από Εκπαιδευτικής Επιτροπής της επαρχίας Anhui, Κίνα (Grant Νο kj2011Z210) .Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου .

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του στομάχου είναι η δεύτερη πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται με, και σχεδόν 1 τα εκατομμύρια νέες περιπτώσεις διαγιγνώσκονται κάθε χρόνο παγκοσμίως [1]. Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης δεν βελτιώνεται σημαντικά, μολονότι η έγκαιρη διάγνωση και θεραπευτική θεραπείες είναι σε ανάπτυξη. Αυτό οφείλεται εν μέρει στην ελλιπή κατανόηση του μηχανισμού υποκείμενων ογκογένεση και τη μετάσταση του καρκίνου του στομάχου.

μορφοτροπέα σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής 3 (STAT3) είναι ένας παράγοντας μεταγραφής, η οποία μπορεί να ενεργοποιηθεί με φωσφορυλίωση τυροσίνης σε απόκριση σε ανάπτυξη παράγοντες και κυτοκίνες (δηλαδή, ιντερλευκίνη [IL] -6). IL-6, η οποία αρχικά χαρακτηρίστηκε ως Β κύτταρο επαγωγής διαφοροποίησης κυτοκίνης, είναι μία κυτοκίνη που παίζουν σημαντικό ρόλο σε μια πληθώρα βιολογικών λειτουργιών συμπεριλαμβανομένης της φλεγμονής, πλασμακυτώματος γένεση, ανοσοσφαιρίνη παραγωγή μεσολαβώντας την κυτταρική ανάπτυξη, τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την επιβίωση των κυττάρων [ ,,,0],2-4]. Ανάλογα με τον τύπο του κυττάρου, IL-6 έχει την ικανότητα να δρουν μέσω διαφορετικών οδών κλασικό πρωτεϊνικής κινάσης, συμπεριλαμβανομένης κινάσης μιτογόνο ενεργοποιημένη πρωτεΐνη (ΜΑΡΚ) και phoshatidylinositol-τριφωσφορική κινάσης (ΡΙ-3 κινάση) [5]. IL-6 συνδέεται με τον υποδοχέα IL-6 (IL-6R), που συνδέει με gp130, επομένως ενεργοποιεί παράγοντες μεταγραφής STAT1 και STAT3, μέσω της Janus σχετιζόμενη κινάση (JAK), οδηγώντας σε σοβαρές απροσδόκητες συνέπειες σε νεοπλασματική ανάπτυξη [6, 7]. Κατά την ενεργοποίηση, STAT3 μετατοπίζεται γρήγορα σε πυρήνα, και δεσμεύεται με αλληλουχία αναγνώρισης στον προαγωγό των γονιδίων στόχων (π.χ., κυκλίνη D1, Bcl-2, Bcl-xL, μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα [VEGF]), αυξάνοντας έτσι την μεταγραφή τους [8-10]. Όλα αυτά τα γονίδια-στόχους που εμπλέκονται στη ρύθμιση της κυτταρικής επιβίωσης, της αγγειογένεσης, το ανοσοποιητικό φοροδιαφυγής, και φλεγμονή στον microenvionment όγκου.

ενεργοποίηση STAT3 συμβάλλει στην τόνωση της ανάπτυξης, αντι-απόπτωση, και την αγγειογένεση, η οποία είναι signi fi μαντικά που σχετίζονται με τη φλεγμονή, ασυλία, και ογκογένεση [7,11,12]. Κατά συνέπεια, συστατική ενεργοποίηση του STAT3 είναι υπεύθυνη για μία ποικιλία ανθρώπινων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου των ωοθηκών, του καρκίνου του μαστού, της λευχαιμίας, του καρκίνου του προστάτη, καρκίνο κεφαλής και λαιμού, καρκίνο του παγκρέατος και [13-17]. Ο αποκλεισμός του σήματος /STAT3 JAK μπορεί να αναστέλλει την ανάπτυξη των ανθρώπινων καρκίνων [17]. Πρόσφατα, STAT3 έχει αποδειχθεί ότι παίζουν κεντρικό ρόλο στη διατήρηση του γαστρικού καρκίνου κυττάρων επιβίωσης [18-22]. Συστατική ενεργοποίηση STAT3 είναι προβλεπτική κακή πρόγνωση σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο [23-25]. Ωστόσο, εξακολουθεί να παραμένει άγνωστο το πώς ενεργοποιούνται STAT3 μέσω ιντερλευκίνης -6-τύπου (IL) κυτοκίνης συνδέεται με Τ λεμφοκύτταρο μεταβολή σηματοδοσίας κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του ανθρώπινου γαστρικού καρκίνου. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να καθοριστεί εάν η IL-6 /STAT3 μονοπάτι σηματοδότησης συνεργάτες με τις αλλαγές των Τ λεμφοκυττάρων, και συσχετίζεται με την πρόοδο του ανθρώπινου γαστρικού καρκίνου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς, Experimental Σχεδιασμός και Θεραπεία

η έρευνα αυτή είναι σύμφωνη με τους κανονισμούς που προβλέπονται από επιτροπή δεοντολογίας Anhui Medical University, το οποίο ακολουθεί το πρωτόκολλο που περιγράφεται στο WMA Διακήρυξη του Ελσίνκι-Ηθικές Αρχές για την ιατρική έρευνα σε ανθρώπους. Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε διαλογή και επεξεργασία για τους σκοπούς της μελέτης στο Ενταγμένο Νοσοκομείο Anhui Medical University, Hefei, Κίνα, και υπέγραψαν έντυπο συγκατάθεσης. Οι κατευθυντήριες γραμμές ανθρώπινη ηθική στην κλινική έρευνα του έργου Νο kj2011Z210 (Επιχορηγήσεις από Εκπαιδευτική Επιτροπή της επαρχίας Anhui, Κίνα, PI: Δρ ZHENGGUANG Wang) συζητήθηκε και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ανθρωπίνων Δεοντολογίας στην Πρώτη Ενταγμένο Νοσοκομείο Anhui Medical University στις Μαρτίου 25, 2011. Όλες οι εγγεγραμμένοι ασθενείς υποβλήθηκαν σε ολική ή υφολική γαστρεκτομή. Μετά τη χειρουργική επέμβαση, κάθε ασθενής έλαβε τέσσερις κύκλους ή περισσότερα από χημειοθεραπεία (χημειοθεραπευτικά σχήματα: το πρόγραμμα FOLFOX4).

Οι επιλέξιμοι ασθενείς ενήλικες (18 ετών έως 75 ετών) με αδενοκαρκίνωμα στομάχου βιοψία επιβεβαίωσε, ο οποίος είχε προηγουμένως ολοκληρώσει τουλάχιστον τέσσερις κύκλους χημειοθεραπείας. Σύμφωνα με μια τυχαία διαδικασία (αναλογία 1: 1) στην έρευνα, όλοι οι ασθενείς είχαν φυσιολογική ηπατική, νεφρική και μυελού των οστών λειτουργία (που περιγράφεται ως αριθμός λευκών ≥3.5 × 10

9 κύτταρα /L, αιμοπετάλια ≥80 × 10

9 κύτταρα /L, ολικής χολερυθρίνης ≤ 2 × ανώτερο φυσιολογικό όριο, αιμοσφαιρίνης ≥9.0 g /dL και η κρεατινίνη ≤170 μmol /L), και κατάσταση απόδοσης ECOG μεταξύ 0-2. Οι ασθενείς εξαιρέθηκαν για σοβαρές διαταραχές, περιφερική νευροπάθεια (επίπεδο NCI-CTC1 και άνω), η εγκυμοσύνη, ή το θηλασμό. Οι ασθενείς που είχαν επαληθευτεί απομακρυσμένες μεταστάσεις αποκλείστηκαν.

Κλινική

Παρακολούθησης

Οι απαντήσεις των θεραπευτική αγωγή αξιολογήθηκαν από τη λειτουργία του ανοσοποιητικού σε, πριν και μετά από κάθε θεραπεία. την ποιότητα της ζωής του καρκίνου του ασθενούς σκοράρει από τις 60 μονάδες, όπου μια κακή ποιότητα ζωής ήταν λιγότερο από 20 πόντους, και των φτωχών για 21 έως 30 λεπτά, συνήθως 31 έως 40 βαθμούς, καλό για 51 έως 60 λεπτά.

Τα δείγματα ορού

Περιφερειακά ορό (5 ml) συλλέχθηκε πριν από τη θεραπεία και μετεγχειρητική εβδομάδα 1, καθώς και μετά από ένα μήνα. Ο ορός υποβλήθηκε σε φυγοκέντρηση σε 2000 rpm ανά λεπτό για 10 λεπτά, και το ανώτερο υγρό (ορός) συλλέχθηκε.

Προσδιορισμός κυτοκινών του ορού

Όλα τα δείγματα αίματος χωρίς EDTA φυγοκεντρήθηκαν αμέσως, και στη συνέχεια τα υπερκείμενα ήταν όλα αποθηκεύονται στους -80 ° C μέχρι να αναλυθεί. Οι συγκεντρώσεις στον ορό της ανθρώπινης IL-10, IL-6 και VEGF προσδιορίστηκαν ποσοτικά με προσδιορισμό ανοσορροφητική συνδεδεμένη με ένζυμο (ELISA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα κιτ της IL-10, IL-6 και VEGF παρασχέθηκαν από R &? D Systems (R &? D Systems, CA).

Προσδιορισμός των υποσυνόλων λεμφοκυττάρων Τ

T υποσύνολα λεμφοκυττάρων στο αίμα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα κυτταρόμετρο ροής [26,27]. Η αναγνώριση των Τ-κυττάρων υποσύνολα βασίστηκαν στην έκφραση των CD3, CD4, και CD8, Εν συντομία, 100 μΙ EDTA αντιπηκτικό αίμα επωάστηκε με 20 μΙ μονοκλωνικού σχετικών αντιδραστηρίου που περιέχει αντι-CD4-FITC, αντι-CD8- ΡΕ, και αντι-CD3-PE-Cy5 (Beckman Coulter), ακολουθούμενο από την προσθήκη 2 ml διαλύματος ερυθροκυττάρων λύσης. Τα δείγματα προστατευμένο από το φως σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά. Λευκοκυττάρων ακεραιότητα της κυτταρικής επιφάνειας διατηρήθηκε από ένα απαλό, χωρίς πλύση μέθοδο λύση των ερυθροκυττάρων. Το μίγμα υποβλήθηκε σε φυγοκέντρηση σε 4 ° C για 12 000 rpm /min για 5 λεπτά και το υπερκείμενο απομακρύνθηκε. Τα σφαιρίδια του κυττάρου πλύθηκαν με διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο διάλυμα (PBS) και συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση. Τέλος, το δείγμα επαναιωρήθηκε σε 1 ml PBS, και μετρήθηκε με μια ροή FACSCalibur ™ κυτταρόμετρο. Η απόκτηση και η ανάλυση δείγματος που λαμβάνεται με κυτταρόμετρο ροής και ένα πλήρως αυτοματοποιημένο συνδυασμό λογισμικού-αντιδραστήριο.

Η ανοσοϊστοχημεία

Τμήματα (5 μm πάχους) της φορμόλης-σταθερό, παραφίνη-ενσωματωμένες πρωτογενή γαστρικού δείγματα από γαστρεκτομή βάφτηκαν με αντι-STAT3 αντίσωμα (STAT3 F-2: SC-8019, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) [22,25]. Τα επίπεδα του VEGF, survivin, και IL-6 στα γαστρικά δείγματα προσδιορίστηκαν με ένα αντι-VEGF αντίσωμα (αραίωση 1: 100? Santa Cruz Biotechnology), ένα αντι-survivin αντίσωμα (αραίωση 1: 100? Santa Cruz Biotechnology), και ένα αντίσωμα αντι-IL-6 (1:50 αραίωση? Santa Cruz Biotechnology), αντίστοιχα. Οι αρνητικοί έλεγχοι ήταν τομές ιστού ανοσοχρώση με μη ειδικό IgG αντίσωμα. χρώση ειδικό αντίσωμα οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας κιτ υποστρώματος διαμινοβενζιδίνης. Τα πλακίδια παρατηρήθηκαν κάτω από ένα μικροσκόπιο φωτεινού πεδίου. Και στη συνέχεια αναλύονται με το ολοκλήρωμα τιμή οπτικής πυκνότητας (OD) όλων των εικόνων, τα σχετικά επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης ήταν ποσοτικοί fi ed πυκνομετρικώς και εκφράζεται στο μέση οπτική πυκνότητα (MOD) μονάδες.

Western ανάλυση κηλίδος

Σύνολο Προϊόντα λύσης ιστού παρασκευάστηκαν από ανθρώπινο γαστρικό ιστούς με ρυθμιστικό RIPA. Κηλίδωση Western πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα αντι-IL-6, αντι-VEGF, αντι-survivin, αντι-STAT3 και φωσφορυλιωμένο STAT3 (Tyr705) αντισώματα (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) [22]. Οι πρωτεΐνες ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας το ενισχυμένο σύστημα χημειοφωταύγειας σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Tañon 4500, Shandong Aibo τεχνολογία Co., Κίνα). Ίση φόρτωση του δείγματος προσδιορίστηκε με ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης, καθώς και από της ανιχνεύσεως μεμβράνες για β-ακτίνη ως πρωτεΐνη καθαριότητας.

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± SD. Όλα στατιστική ανάλυση εκτελέστηκε σε SPSS 15.0 πακέτο λογισμικού. Η σύγκριση των πολλαπλών ομάδων αναλύθηκαν με μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) που ακολουθείται από δοκιμή LSD και δοκιμή Dunnett.

P

& lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Τα δημογραφικά χαρακτηριστικά των ασθενών

Οκτώ ένας ασθενείς είχαν προσληφθεί για τη μελέτη, και 10 περιπτώσεις αποσύρθηκαν λόγω της αποτυχίας της παρακολούθησης και του θανάτου. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, σαράντα έξι ασθενείς ήταν άνδρες και εικοσιπέντε ασθενών ήταν γυναίκες. Με την τιμή Τ, 8 υποθέσεις που περιλαμβάνονται στο Τ1, 12 περιπτώσεις στις Τ2, 7 περιπτώσεις Τ3, και 54 περιπτώσεις Τ4. Ιστοπαθολογικές παρατηρήσεις έδειξαν 62 περιπτώσεις παρουσίασαν περιφερειακών λεμφαδένων εισβολή και 9 περιπτώσεις hade καμία μετάσταση στους λεμφαδένες. Σύμφωνα με TNM στάσης, 5 ασθενείς ήταν σταδίου Ι, 7 ασθενείς του σταδίου ΙΙ, 8 ασθενείς σταδίου ΙΙΙ και 51 ασθενείς σταδίου IV.

Η n

Ποσοστό

SexMale4664.8Female2535.2Age (έτη) & lt? 501521.1≥505678.9Primary όγκου siteGastric cardia3346.5Gastric antrum1723.9Gastric body1926.8Gastric fundus22.8Diameter του όγκου & lt? 5 cm2433.8≥5 cm4766.2AdenocarcinomaModerately differentiated2332.4Poorly differentiated4867.6T stageT189.9T21214.8T378.6T45466.7TNM stageI57.0II79.9III811.3IV5171.8Lymph κόμβο metastasisPresent6287.3Absent912.7Length της μετεγχειρητικής θεραπείας & lt?. 3w5374.6≥3w1825.4Extent της gastrectomyTotal gastrectomy4969.0Subtotal gastrectomy2231.0Table 1. Δημογραφικά χαρακτηριστικά των 71 γαστρικού ασθενείς

CSV Λήψη CSV

Ανάλυση των δειγμάτων ορού ποσοτικοποίηση της IL-6, IL-10 και VEGF

Σε αυτή τη μελέτη, 71 ασθενείς ήταν επιλέξιμοι. Πριν και κατά το τέλος κάθε χειρουργική επέμβαση, δείγματα ορού των ασθενών ποσοτικοποιήθηκαν για τα επίπεδα κυτοκίνης. Σε αυτή τη μελέτη, τα επίπεδα της IL-6, IL-10 και VEGF ποσοτικοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί οποιαδήποτε σημαντική διαφορά μεταξύ των συγκεντρώσεων κυτοκίνης στον ορό προεγχειρητικά και μετεγχειρητικά. Πίνακας 2 έδειξαν σημαντική μείωση της συγκέντρωσης κυτοκίνης της IL-6, IL-10 και VEGF σε μετεγχειρητικούς δείγματα ορού σε σύγκριση με τα επίπεδα προεγχειρητική (ρ & lt? 0,05). Τα επίπεδα αυτών των κυτοκινών περαιτέρω μειώθηκαν σε μετεγχειρητικούς μήνες 1, σε σύγκριση με εκείνες στις μετεγχειρητικές εβδομάδες 1 (Πίνακας 2). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα επίπεδα της IL-6, IL-10 και VEGF μειώθηκε μετά γαστρεκτομή.

Variable

n

IL-6 (ng /L)

IL-10 (ng /mL )

VEGF (ng/L)

Preoperative23498.9±90.7983.6±212.08347.8±1937.4Postoperative-week123380.2±87.5

*779.7±166.7

*7011.3±2044.8Postoperative-month125312.9±80.2

**731.9±144.6

*6275.5±2029.6

*Table 2. Σύγκριση των επιπέδων ορού της κυτοκίνης IL-6, IL-10 και VEGF σε ασθενείς με γαστρικό καρκίνο.

Δεδομένα είναι μέσες ± SD. Σε σύγκριση με την προεγχειρητική ομάδα,

* * P & lt? 0,01,

* P & lt? 0,05. CSV Λήψη CSV

Ανάλυση των υποσυνόλων Τ-κυττάρων σε ασθενείς και έλεγχοι

Τα ποσοστά των Τ-κυττάρων υποσύνολα αναλύθηκαν στο αίμα του μια σειρά ασθενών με γαστρικό καρκίνο πριν και μετά από γαστρεκτομή μέσω κυτταρομετρίας ροής. Βρήκαμε ότι τα ποσοστά των Τ-κυττάρων υποσύνολα (CD3

+, CD4

+), και CD4

+ /CD8

+ αναλογία καθώς και κύτταρα ΝΚ ήταν σημαντικά αυξημένα μετά μετεγχειρητική εβδομάδα 1, το οποίο περαιτέρω επαυξημένης σε μετεγχειρητικούς-μήνα 1 σε σύγκριση με εκείνα πριν γαστρεκτομή (Πίνακας 3). Ωστόσο, το ποσοστό των CD8

+ μειώθηκε σε 1 μήνα μετά την αφαίρεση του γαστρικού καρκίνου (Πίνακας 3). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το ανοσοποιητικό κατάσταση βελτιώνεται μετά την αφαίρεση του γαστρικού καρκίνου.

Μεταβλητό

n

CD3

+ (%)

CD4

+ (%)

CD8

+ (%)

CD4

+/CD8

+

NK

Preoperative2350.5±6.431.6±7.227.8±7.31.1±0.626.9±8.1Postoperative-week12354.3±7.636.8±8.1

*24.3±8.41.5±0.9

*30.4±9.3Postoperative-month12562.6±5.4

**42.1±6.3

**22.5±7.9

*1.9±0.8

**34.2±7.9

**Table 3. Σύγκριση των υποσυνόλων Τ-λεμφοκυττάρων κατά τη διάρκεια διαφορετικών φορά σε ασθενείς με γαστρικό καρκίνο.

Δεδομένα είναι μέσες ± SD. Σε σύγκριση με την προεγχειρητική ομάδα,

** P & lt? 0,01,

* P & lt? 0,05. CSV Λήψη CSV

Έκφραση και κυτταρική κατανομή της IL-6, survivin STAT3, και VEGF σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς

Η έκφραση και η κυτταρική κατανομή της IL-6, survivin, STAT3 και VEGF σε γαστρικό ιστούς και τα γειτονικά φυσιολογικό βλεννογόνο ασθενών με γαστρεκτομή εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική χρώση. Διαπιστώθηκε ότι η expreesion της STAT3 αυξήθηκε στην εστίες γαστρικών καρκινικών ιστών σε σύγκριση με την ασθενή έκφραση της STAT3 σε γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο (Σχήμα 1). Η χρώση STAT3 ήταν εντοπισμένη κυρίως στους πυρήνες των γαστρικών καρκινικών κυττάρων. Ομοίως, η έκφραση της IL-6, που επιβιώνουν και VEGF ήταν επίσης ιδιαίτερα αυξημένη σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με εκείνους σε γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο (Σχήμα 1).

Η έκφραση και ο εντοπισμός των STAT3, IL-6, VEGF, και survivin σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική χρώση. Υπήρξε αδύναμη ή αρνητική έκφραση του STAT3 σε γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο. Ωστόσο, δεν υπήρχε ισχυρή έκφραση της φωσφορυλιώθηκαν STAT3 σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Η χρώση STAT3 ήταν εντοπισμένη κυρίως στους πυρήνες των επιθηλιακών κυττάρων του όγκου, το οποίο υποδεικνύεται από τα πολυάριθμα κιτρινωπό κόκκους. STAT3 υπερέκφραση συνδέθηκε με με αυξημένη έκφραση της IL-6, που επιβιώνουν, και VEGF καθώς και με αυξημένη πυκνότητα σκάφος (Αρχική μεγέθυνση του Α1-Α3 και Β1-Β3, × 400? Α4 και Β4, χ 200) ..

για περαιτέρω con fi rm η αυξημένη έκφραση του STAT3, ρ-STAT3, IL-6, survivin και VEGF σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς, εκτελέσαμε επίσης κηλίδωση Western για τον προσδιορισμό των επιπέδων τους χρησιμοποιώντας αντι-STAT3, αντι-φωσφορυλιωμένο STAT3 (Tyr705), αντι-IL-6, αντι-survivin, αντισώματα αντι-νΕΟΡ, αντίστοιχα. Όπως ήταν αναμενόμενο, μια απλή ταινία παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας κάθε αντίσωμα (Σχήμα 2Α), και τα επίπεδα πρωτεΐνης της IL-6, survivin, STAT3, ρ-STAT3 και VEGF σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικούς ιστούς ήταν σημαντικά υψηλότερες από εκείνες στο γειτονικό φυσιολογικούς ιστούς βλεννογόνου (όλα τα P & lt? 0.001, Σχήμα 2Β). Αυτά τα αποτελέσματα εμπλέκουν ότι οι IL-6 σήματα /STAT3 ενεργοποιείται σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς.

επίπεδα πρωτεΐνης IL-6, Survivin, ρ-STAT3, STAT3, και VEGF σε φυσιολογικούς γαστρικά και του όγκου του ιστού προσδιορίσθηκαν χρησιμοποιώντας δυτική λέκιασμα. Βήτα-ακτίνη ήταν ένας έλεγχος φόρτωσης. Σχετική έκφραση πρωτεΐνης IL-6 (Α), VEGF (Β), που επιβίωσαν (C), ρ-STAT3 (D) κανονικοποιήθηκε προς την αντίστοιχη βήτα-ακτίνης επίπεδο. Θετική ανοσοαντιδραστικές ζώνες ήταν ποσοτικοί fi ed πυκνομετρικώς και εκφράζεται ως IL-6, Survivin, ρ-STAT3, STAT3, και VEGF σε μονάδες οπτικής πυκνότητας, αντιστοίχως. * Ρ & lt?. 0.01 ιστούς όγκων έναντι των φυσιολογικών ιστών του γαστρικού με μονόδρομη ANOVA με post-hoc τεστ Tukey για

Η

ενεργοποίηση IL-6 /STAT3 συσχετίζεται με το στάδιο TNM σε γαστρικό καρκίνο

Όπως φαίνεται στον πίνακα 4, η αυξημένη έκφραση του STAT3 με ανοσοϊστοχημεία συσχετίστηκε σημαντικά με το στάδιο ΤΝΜ του γαστρικού καρκίνου. Ομοίως, το ποσοστό των IL-6, που επιβιώνουν, και η έκφραση του VEGF ήταν σημαντικά αυξημένη σε υψηλότερο στάδιο TNM σε σύγκριση με χαμηλό στάδιο ΤΝΜ του γαστρικού καρκίνου (Πίνακας 4). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η ενεργοποίηση της IL-6 οδός /STAT3 σχετίζεται με το στάδιο TNM του καρκίνου του στομάχου.

Η STAT3

P

αξία

Survivin

P

αξία

IL-6

P

αξία

VEGF

P

αξία

Η +

–

+

– καλής +

– καλής +

– καλής Κανονική γαστρικό tissue4 (13,3%) 269 (30%) 213 ( 10%) 272 (6,7%) 28Gastric I2 καρκινικού ιστού (40%) 34 (80%) 11 (20%) 43 (60%) 2II5 (71,4%) 2P & lt? 0,057 (100%) 0p & lt? 0.054 (57,1%) 3P & lt? 0.055 (71,4%) 2P & lt? 0.01III7 (87,5) 16 (75%) 27 (87,5%) 17 (87,5%) 1IV46 (90.2%) 551 (100%) 047 (92.2%) 444 (86.2%) 7Table 4. Συσχέτιση STAT3, survivin, IL-6, η έκφραση του VEGF και τα στάδια ΤΝΜ σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου.

CSV Λήψη CSV

Συζήτηση

IL-6 και κατάντη σήματα της, όπως STAT3, διαδραματίσει ουσιαστικό ρόλο στη διαδικασία στο fl ammation και παρεκκλίνουσα ασυλία, καθώς και καρκινογένεση [28-30]. STAT3 ενεργοποιείται για μερικά δευτερόλεπτα ή ώρες και στη συνέχεια απενεργοποιείται για να διατηρηθεί ομοιόσταση υπό κανονικές συνθήκες. Ωστόσο, η ενεργοποίηση STAT3 συνεχίζει, η οποία πυροδοτεί ογκογονίδιο τη μεταγραφή υπό μη κανονικές συνθήκες [25,31]. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν αυξημένη έκφραση και ενεργοποίηση της STAT3 στην ανθρώπινη γαστρικού καρκινώματος [18-25,32]. Παραμένει ασαφές εάν η αυξημένη ενεργοποίηση IL-6 /STAT3 συσχετίζεται με παρεκκλίνουσα ασυλία στην εξέλιξη και την εισβολή του καρκίνου του στομάχου. Στην παρούσα μελέτη, παρατηρήθηκαν τα επίπεδα της IL-6, IL-10 και VEGF στον ορό ήταν σημαντικά μειωμένη μετά την απομάκρυνση του γαστρικού καρκίνου. Αυτό συνδέεται με αυξημένα ποσοστά CD3

+ και CD4

+ Τ λεμφοκύτταρα όπως επίσης και κύτταρα ΝΚ. Επιπλέον, τα σήματα IL-6 /STAT3 συμπεριλαμβανομένων επιβιώνουν και VEGF ήταν σημαντικά επαυξημένη σε ιστούς γαστρικό καρκίνωμα σε σύγκριση με παρακείμενο φυσιολογικό βλεννογόνο. Συνολικά, τα ευρήματά μας παρέχουν την πρώτη απόδειξη ότι η αυξημένη IL-6 ενεργοποίηση /STAT3 συσχετίζεται με παρεκκλίνουσα ανοσία, που οδηγεί στην πρόοδο και την εισβολή του καρκίνου του στομάχου.

IL-6 έχει αποδειχθεί ότι ενισχύει την εισβολή των γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω συνεχών ενεργοποίηση STAT3 [33,34]. Αυτό είναι σύμφωνο με τα ευρήματα μας ότι η IL-6 έκφραση ήταν σημαντικά σχετίζεται με STAT3, και ήταν και οι δύο υπερ-εκφράζεται σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο. Ασθενής έκφραση αμφότερων των IL-6 και STAT3 βρέθηκε σε γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο. Αυξημένη VEGF και της έκφρασης της survivin λόγω της εξαιρετικά ενεργοποίηση της IL-6 /STAT3, βοηθά γαστρικά καρκινικά κύτταρα να μεγαλώνουν γρηγορότερα και να προωθήσει μακρινή μετάσταση [22,35-37]. Η απομάκρυνση του γαστρικού καρκίνου οδηγεί στη μείωση της IL-6 και VEGF. Αυτό υποδηλώνει ότι μικροπεριβάλλον του όγκου παίζει επίσης σημαντικό ρόλο στην ενεργοποίηση της IL-6 /μονοπάτι STAT3, το οποίο σχηματίζει ένα φαύλο κύκλο για την προώθηση της ογκογένεσης και της εισβολής. Immunesurveillance

Ο καρκίνος είναι μια σημαντική διαδικασία για την εξάλειψη των κυττάρων του όγκου [38]. Αυτό επιβεβαιώνεται ότι η αύξηση του αριθμού των Τ lympocytes σε ιστούς όγκων συσχετίστηκε σημαντικά με χαμηλότερη συχνότητα της μετάστασης, υποτροπής και μακρά επιβίωση, παρά να υπάρχουν αμφιλεγόμενες εκθέσεις [27,39] [34]. Ωστόσο, οι όγκοι έχουν την ικανότητα να ξεφύγουν immunesurveillance. IL-10 είναι ένα από τα ανοσοκατασταλτικών κυτοκινών, οι οποίες είναι αυξημένη στο αίμα σε προχωρημένο γαστρικό καρκίνο [40-42]. Αυτό οδηγεί σε αδυναμία να εξαλειφθούν τα κύτταρα του όγκου σε μικροπεριβάλλον του όγκου. Πράγματι, γαστρικό καρκίνο ίδια τα κύτταρα μπορούν να εκκρίνουν IL-10, το οποίο μπορεί να εξηγήσει τη μείωση της σε ασθενείς μετά την απομάκρυνση του γαστρικού καρκίνου, σε σύγκριση με πριν από τη λειτουργία στην παρούσα μελέτη. IL-10 έχει διπλή επίδραση στα Τ λεμφοκύτταρα και κύτταρα ΝΚ [42-44]. Αυτό είναι σύμφωνο με τα ευρήματα μας ότι ο αριθμός των Τ λεμφοκυττάρων και των κυττάρων ΝΚ είναι αυξημένες σε σύστημα κυκλοφορίας των ασθενών μετά την αφαίρεση του γαστρικού καρκίνου, σε σύγκριση με πριν από τη λειτουργία. Οι μελέτες μας υποστηρίζουν επίσης την άποψη ότι οι ασθενείς με γαστρικό καρκίνο μετά μετεγχειρητική εβδομάδα 1 εξακολουθούν να έχουν μια ανισορροπία σε Τ-κυττάρων υποσύνολα τους, αλλά κοντά στο φυσιολογικό μετά μετεγχειρητική-μηνών 1. Ωστόσο, η έκφραση της IL-10 και διήθηση των Τ λεμφοκυττάρων ( π.χ., CD3

+, CD4

+, CD8

+), καθώς και η συσχέτισή τους μέσα στους ιστούς του όγκου δεν είναι γνωστές, η οποία χρειάζεται περαιτέρω έρευνα.

έχει αποδειχθεί ότι η ενεργοποίηση STAT3 σε καρκινικά κύτταρα μπορούν να μεσολαβήσουν μία ανοσολογική απόκριση αναστέλλοντας την δραστηριότητα των κυττάρων του ανοσοποιητικού μέσω φλεγμονωδών κυτταροκινών πιθανώς απελευθερώνει από την εισβολή καρκινικό ιστό [12,45]. Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι STAT3 οδών σηματοδότησης διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην επίσπευση ανοσολογική ανοχή. Οι περισσότερες από τις προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι η ενεργοποίηση STAT3 σε επιθετικές κακοήθειες και άλλα καρκινώματα είναι ένας αρνητικός προγνωστικός παράγοντας. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν επίσης ότι μια πιο επιθετική κλινική συμπεριφορά του γαστρικού καρκίνου με ενεργοποιημένο STAT3, όπως πιο συχνές μεγάλες εισβολή σκάφος, και χαμηλότερα ποσοστά πλήρους τέλεσης οπισθοεκτομής. Οι ρόλοι των STAT3 σε ανοσοαποκρίσεις, ανάπτυξη όγκου, και η μείωση της διήθησης των Τ κυττάρων σε καρκινικά κύτταρα δείχνουν ένα νέο μηχανισμό για αυτή την κυτταρική παράγοντας [45,46]. Η ενεργοποίηση της STAT3 ήταν ένας δείκτης θετικής κλινικής συμπεριφοράς. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι STAT3 μπορεί να λειτουργεί ως ρυθμιστής του γαστρικού καρκίνου λόγω της σύνδεσης του με την IL-6. Με αυτά τα δεδομένα στο μυαλό και άλλες νέες μελέτες σχετικά με STAT3 μονοπάτι σηματοδότησης, αξίζει να εξερευνήσετε μια νέα θεραπεία STAT3-στόχο για καρκίνο του στομάχου [47-49].

Εν κατακλείδι, η IL-6 που προκαλείται από την ενεργοποίηση της STAT3 παρατηρείται σε νεοπλασματικές γαστρικό ιστό, η οποία συσχετίζεται θετικά με την εξέλιξη του όγκου. Επιπλέον, IL-6 και STAT3 κατάντη σήματα όπως η IL-10 και VEGF ήταν μειωμένη σε ασθενείς μετά την απομάκρυνση του γαστρικού καρκίνου, σε σύγκριση με πριν από τη λειτουργία, αυτό συνδέθηκε με ανάκτηση των λεμφοκυττάρων Τ και των κυττάρων ΝΚ σε περιφερική κυκλοφορία σε αυτούς τους ασθενείς. Ως εκ τούτου, η αναστολή του μονοπατιού σηματοδότησης IL-6 /STAT3 μπορεί να παρέχει μια νέα θεραπευτική στρατηγική κατά του καρκίνου του στομάχου.

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε όλους τους ασθενείς και τις οικογένειές τους. Μπορούμε επίσης να ευχαριστήσω όλα τα μέλη του εργαστηρίου μας για την τεχνική βοήθεια τους, πολύτιμα σχόλια και ενθάρρυνση. Ευχαριστούμε τον Δρ David J. Blake από Fort Lewis College για την κριτική ανάγνωση αυτού του χειρογράφου.