Αφηρημένο

Η ιντερλευκίνη-26 (IL-26) είναι μία από τις κυτοκίνες που εκκρίνονται από κύτταρα Th17 του οποίου ο ρόλος σε ανθρώπινους όγκους παραμένει άγνωστη. Εδώ, ερευνήσαμε την έκφραση και τον δυνητικό ρόλο της IL-26 σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο (GC). Η έκφραση της IL-26 και των σχετικών μορίων όπως IL-20R1, STAT1 και STAT3 εξετάστηκε με PCR πραγματικού χρόνου και immunohistochemisty. Τα αποτελέσματα της IL-26 επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και τη σισπλατίνη απόπτωση που επάγεται αναλύθηκαν με δοκιμασία συνεργασία BrdU και V συν-χρώση ΡΙ-αννεξίνης, αντίστοιχα. Λεντοϊών μεσολάβηση siRNA χρησιμοποιήθηκε για να διερευνήσει τον μηχανισμό δράσης της, και σηματοδότηση IL-26 συναφών αναλύθηκε με κηλίδωση Western. Ανθρώπινοι ιστοί GC έδειξε αυξημένα επίπεδα της IL-26 και των σχετικών μορίων και ενεργοποίηση της σηματοδότησης STAT3 της, ενώ η ενεργοποίηση STAT1 δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ GC και φυσιολογική γαστρική ιστούς. Επιπλέον, η IL-26 παράγεται κυρίως από τα κύτταρα Th17 και ΝΚ. IL-26 προήγαγαν τον πολλαπλασιασμό και την επιβίωση των ΜΚΝ45 και SGC-7901 γαστρικών καρκινικών κυττάρων με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Επιπλέον, IL-20R2 και IL-10R1, τα οποία είναι δύο βασικά υποδοχείς για IL-26 σηματοδότηση, εκφράστηκαν σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές. IL-26 ενεργοποιείται STAT1 και STAT3 σηματοδότησης? Εν τούτοις, η προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης Bcl-2, Bcl-XL και c-myc έδειξε ότι η επίδραση του IL-26 προκαλείται από την ενεργοποίηση STAT3. Εξόντωση STAT1 και STAT3 έκφρασης πρότεινε ότι οι πολλαπλασιαστικές και αντι-αποπτωτικά αποτελέσματα της IL-26 μεσολαβείται από την ρύθμιση της ενεργοποίησης /STAT3 STAT1. Εν ολίγοις, τα αυξημένα επίπεδα της IL-26 σε ανθρώπινο GC προωθήσει τον πολλαπλασιασμό και την επιβίωση διαμορφώνοντας σηματοδότησης STAT1 /STAT3

Παράθεση:. Μπορείτε W, Tang Q, Zhang C, Wu J, Gu C, Wu Ζ, et al. (2013) IL-26 προάγει τον πολλαπλασιασμό και την επιβίωση των Ανθρωπίνων Καρκίνου γαστρικά κύτταρα με τη ρύθμιση της Ισορροπία των STAT1 και STAT3 ενεργοποίηση. PLoS ONE 8 (5): e63588. doi: 10.1371 /journal.pone.0063588

Επιμέλεια: Salvatore V. Pizzo, του Πανεπιστημίου Duke Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 11 Οκτωβρίου 2012? Αποδεκτές: 2 του Απρίλη 2013? Δημοσιεύθηκε: May 21, 2013

Copyright: © 2013 Μπορείτε et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών (81170415 για XC) και του Προγράμματος Ταλέντα Βασικά Επαρχιακό επαρχίας Jiangsu (RC2011079 για QT και RC2007056 για XC). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος στομάχου (GC) είναι η δεύτερη πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται με τον κόσμο. GC είναι δύσκολο να θεραπεύσει ακόμη και στις δυτικές χώρες, γιατί συχνά δεν ανιχνεύεται μέχρι προχωρημένα στάδια της νόσου. [1] Παρά το γεγονός ότι ένας αριθμός παραγόντων που σχετίζονται με την ανάπτυξη και την εξέλιξη του GC, ενός συνδέσμου μεταξύ χρόνιου γαστρικού φλεγμονής όπως ατροφική γαστρίτιδα που προκαλείται από το Helicobacter pylori και τον κίνδυνο GC έχει καταστεί προφανής κατά τα τελευταία χρόνια [2]. Η χρόνια φλεγμονή που οδηγεί σε GC είναι μια μακρά και πολύπλοκη διαδικασία που συμβαίνει κατά τη διάρκεια πολλών ετών και χαρακτηρίζεται από φλεγμονώδεις βλάβες στο γαστρικό βλεννογόνο, η σύνθεση του DNA κυτοκίνης που επάγεται και κυτταρικού πολλαπλασιασμού, υπερπλασία και την καρκινογένεση [3].

συσχέτιση μεταξύ της χρόνιας φλεγμονής και του ανοσοποιητικού συστήματος έχει μελετηθεί καλά, και τα λεμφοκύτταρα είναι οι κύριοι μεσολαβητές της φλεγμονής-προωθείται καρκινογένεση [4]. κύτταρα Th17 είναι ένας νέος τύπος των Τ λεμφοκυττάρων που εκφράζουν και εκκρίνουν RORγT διάφορες κυτοκίνες συμπεριλαμβανομένων IL-17Α, IL-17F, IL-21, IL-22 και IL-26. Η διαφοροποίηση των κυττάρων Th17 ρυθμίζεται από αρκετές κυτοκίνες συμπεριλαμβανομένων των IL-1β, IL-6, IL-23, παράγοντα νέκρωσης όγκων άλφα (TNF-α), και αυξητικό παράγοντα μετασχηματισμού βήτα (ΤΟΡ-β) [5], [6] . Πρόσφατες κλινικές μελέτες έδειξαν ότι τα κύτταρα Th17 μπορεί να σχετίζεται στενά με ελικοβακτηρίδιο του πυλωρού σχετίζεται παθολογία και την καρκινογένεση του GC [7], [8], [9], [10]. Παρά το γεγονός ότι αρκετές σχετίζονται Th17 κυτοκίνες έχουν μελετηθεί, λίγα είναι γνωστά για την ιντερλευκίνη-26 (IL-26) σε σχέση με γαστρικών όγκων.

IL-26 είναι μία εκκρινόμενη πρωτεΐνη που λειτουργεί είτε ως ένα μονομερές ή ομοδιμερές. Αρχικά περιγράφηκε από Knappe et al. [11] με την επωνυμία AK155. IL-26 έχει ασθενή, αλλά σημαντική ομολογία αλληλουχίας με IL-10, και η κωδικοποιημένη πρωτεΐνη του είναι ως εκ τούτου ένα μέλος της IL-10 οικογένεια των κυτοκινών, οι οποίες ανήκουν ως επί το πλείστον στην οικογένεια κυτοκινών κατηγορίας-2. IL-26 μπορεί να εκκρίνεται από πρωτογενή Τ-λεμφοκύτταρα, κύτταρα ΝΚ και κλώνοι Τ κυττάρων και είναι συνήθως συνεκφράζεται με άλλα σημαντικά IL-10 που σχετίζονται με κυτοκίνες όπως η IL-22 [12], [13]. IL-26 συνδέεται προς μια διακριτή συμπλόκου υποδοχέα κυτταρικής επιφάνειας που αποτελείται από τις αλυσίδες IL-20R1 και IL-10R2, και λειτουργικές δραστηριότητες είναι διαφορετικές από εκείνες που προκαλούνται από IL-10. IL-20R1 λειτουργεί ως ειδική αλυσίδα δέσμευσης συνδέτη για IL-26 και IL-10R2 είναι ένα ουσιαστικό δεύτερη αλυσίδα να ολοκληρώσει τη συναρμολόγηση του ενεργού συμπλέγματος υποδοχέα. Αντισώματα εξουδετέρωσης έναντι είτε IL-20R1 ή αλυσίδες IL-10R2 μπορεί να μπλοκάρει την επαγωγή της IL-26 σηματοδότηση [12]. Μόλις συναρμολογηθεί πλήρως, το σύμπλεγμα υποδοχέα υφίσταται μια διαμορφωτική μεταβολή (ες) που επάγει ενεργοποίηση του υποδοχέα που σχετίζεται Janus κινάσες τυροσίνης, Jak1 και Tyk2, και την επακόλουθη παροδική σύνδεσης και φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών STAT, STAT1 και STAT3 [14], [15 ].

Ως σχετίζονται Th17 κυτοκίνη, ο ρόλος της IL-26 σε όγκους δεν έχει διερευνηθεί. Εδώ, εξετάσαμε την πιθανή εμπλοκή της IL-26 στην ανθρώπινη GC για πρώτη φορά και να διερευνηθούν προ-επιβίωσης και πολλαπλασιαστικές επιδράσεις

in vitro

.

Υλικά και Μέθοδοι

Οι ασθενείς

Η παρούσα μελέτη συμπεριέλαβε 60 ασθενείς με GC που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση 2006-2009 στην Πρώτη Ενταγμένο Νοσοκομείο Ιατρικό Πανεπιστήμιο Nanjing, Nanjing, Jiangsu επαρχία (Πίνακας 1). Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις αρχές που διατυπώνονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Γραπτή συγκατάθεση ενημερωθεί για γονιδιακή έκφραση αναλύσεις σε ιστούς ελήφθησαν από όλους τους ασθενείς πριν την εγχείρηση ή ενδοσκοπική εξέταση. Οι διαδικασίες πρωτοκόλλου και συγκατάθεση της μελέτης εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Πρώτου Ενταγμένο Νοσοκομείο Ιατρικό Πανεπιστήμιο Nanjing. Η διάγνωση και η σταδιοποίηση του καρκίνου του στομάχου διεξήχθη σύμφωνα με την AJCC (ΤΝΜ) σύστημα σταδιοποίησης.

Η

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR

Οι αντιδράσεις αντίστροφης μεταγραφής πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το SuperScript First-Strand Σύνθεση System (Invitrogen, CA) μετά από την επεξεργασία του RNA εκμαγεία με ϋΝάση Ι για να αποφευχθεί η μόλυνση γονιδιωματικό DNA. Για τον προσδιορισμό του σχετικού επιπέδου cDNA με την αντίστροφη μεταγραφεί δείγματα, σε πραγματικό χρόνο PCR πραγματοποιήθηκε με την Roche LightCycler480 (Roche Diagnostics ΙΝ, USA) χρησιμοποιώντας εκκινητές για IL-26 ως εξής: προς τα εμπρός, AAGCAACGATTCCAGAAGACC και αντίστροφη, AAGTCCTCCACAAAGCGTATTTT, με ένα ενισχυμένο μήκος 175 bp. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος με τους ακόλουθους εκκινητές: προς τα εμπρός, AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC? αντιστραφεί, GGGGTCATTGATGGCAACAATA? ενισχύεται μήκος, 102 bp. Η αντίδραση PCR πραγματικού χρόνου πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες που περιλαμβάνονται στο κιτ SYBR® Πρόμιγμα Εχ Taq ™ (Takara, Ιαπωνία). Τα δεδομένα ομαλοποιήθηκαν στα επίπεδα GAPDH στα δείγματα.

ELISA

IL-26 συγκέντρωσης στον ορό των ασθενών GC και υγιείς μάρτυρες μετρήθηκε χρησιμοποιώντας εμπορικώς διαθέσιμα κιτ ELISA σάντουιτς (Biotang Inc., ΜΑ).

Ανάλυση Western Blot

οι πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν από ΜΚΝ45, SGC7901 και STAT1 τους και STAT3 siRNA τροποποιημένες κυτταρικές σειρές, και να ποσοτικοποιούνται χρησιμοποιώντας μία αποτίμηση πρωτεΐνης (Bio-Rad Laboratories, CA). Δείγματα πρωτεΐνης (30 μg) κλασματώθηκαν με SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μια μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Ανοσοκηλίδωση διεξήχθη χρησιμοποιώντας αντισώματα κατά της IL-26, IL-20R1, IL-10R2, ρ-STAT3 (S727), STAT3, ρ-STAT1 (Y701), STAT1, Bcl-2, Bcl-XL, c-Myc και α- τουμπουλίνης (όλα αγοράζονται από Abcam, ΜΝ). Τα αποτελέσματα έγιναν ορατά με ένα σύστημα ανίχνευσης χημιφωταύγειας (σύστημα ανίχνευσης στυπώματος Pierce ECL υποστρώματος Western, Thermo Scientific, IL) και έκθεση σε φιλμ αυτοραδιογραφίας (Kodak XAR φιλμ).

ανοσοϊστοχημεία (IHC)

οι ιστοί συλλέχθηκαν και μονιμοποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη όλη τη νύκτα στους 4 ° C, επεξεργασία και κόπηκαν σε 5 μm πάχους τομές. Ανοσοϊστοχημική χρώση τομών πραγματοποιήθηκε με αντισώματα κατά της IL-26, IL-20R1, ρ-STAT3 (S727), και ρ-STAT1 (Y701) χρησιμοποιώντας τεχνικές που περιγράφηκαν προηγουμένως [16].

Δοκιμασία Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού BrdU

τα καλλιεργημένα κύτταρα απλώθηκαν σε πυκνότητα 1 × πλακών 10

4 κύτταρα /φρεάτιο σε 96 φρεατίων. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων σε 0, 12, 24, 48, 60 και 72 ώρες αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ δοκιμασίας πολλαπλασιασμού BrdU κυττάρων. διάλυμα BrdU (Cell Technology σηματοδότηση, ΜΑ) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή για 12 ώρες. Ο ρυθμός πολλαπλασιασμού των κυττάρων προσδιορίστηκε με μέτρηση της απορρόφησης στα 450 nm χρησιμοποιώντας έναν υπολογιστή που ελέγχεται μικροπλάκα-reader.

απομόνωση και καλλιέργεια του Ανθρώπου GC διεισδύσει Λευκοκύτταρα

Φρέσκα ιστούς όγκων πλύθηκαν δύο φορές σε RPMI 1640 . Λιπαρά, συνδετικός, και νεκρωτικό ιστό απομακρύνθηκε. Οι ιστοί τεμαχίστηκαν σε κομμάτια 1-2 mm σε RPMI 1640, μεταφέρθηκαν σε κωνικά σωληνάρια 15 ή 50 ml, και επωάστηκαν με μέσο πέψη τριπλή ενζύμου που περιέχει DNase (30 U /mL), υαλουρονιδάση (0,1 mg /mL), και κολλαγενάσης (1 mg /mL) για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου με ήπια ανακίνηση. Οι ιστοί εναιωρούνται εκ νέου εντός 10 mL RPMI 1640 και διηθήθηκε μέσα από ένα σουρωτήρι κύτταρο 70-μm (BD Pharmigen). Κύτταρα που παγιδεύεται από το σουρωτήρι τοποθετήθηκαν σε ατομικά φρεάτια που περιέχουν 1 κ.εκ. μέσου ανάπτυξης Τ-κυττάρων σε ένα 24-φρεατίων για περαιτέρω ανίχνευση με κυτταρομετρία ροής.

Th17 και ΝΚ κυττάρων Απομόνωση, διέγερση, και Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής κύτταρα

Th17 ελήφθησαν με

in vitro

διέγερση των CD4 θετικών μονοπύρηνων κυττάρων περιφερικού αίματος (PBMCs), τα οποία απομονώθηκαν με κυτταρομετρία ροής κάτω από τις συνθήκες (20 ng /ml IL-1β, 20 ng /mL IL-6, 20 ng /ml IL-23, 5 ng /mL ΤΟΡ-β, 5 μg /mL αντι-IL-12, και 5 μg /mL αντι-IL-4) που περιγράφηκε προηγουμένως [17]. ΝΚ κύτταρα ελήφθησαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ απομόνωσης ΝΚ κυττάρων που αγοράστηκαν από τη Miltenyi Biotec (Cat. 130-092-657). διατηρήθηκαν Th17 και τα κύτταρα ΝΚ

in vitro

και διεγείρεται από 100 ng /mL LPS και

H. pylori

λύματα, αντίστοιχα, και αναλύθηκαν με χρώση ενδοκυτταρικής κυτοκίνης.

Για τη χρώση ενδοκυτταρικής κυτοκίνης, τα κύτταρα διεγέρθηκαν στους 37 ° C για 5 ώρες με ένα κοκτέιλ Ενεργοποίησης Λευκοκυττάρων (BD Pharmingen). Τα κύτταρα στη συνέχεια χρωματίστηκαν με επιφανειακούς δείκτες, σταθερό, και διαπερατά με αντιδραστήριο IntraPre (Beckman Coulter) και τελικά χρωματίστηκαν με ενδοκυτταρικά δείκτες. Τα δεδομένα αποκτήθηκαν σε FACSVantage SE και αναλύθηκαν με το λογισμικό CellQuest. Συζευγμένο με ένα φθοριόχρωμα mAbs έναντι IL-26, CD3, CD4, CD8, CD16, CD56 και RORγT αγοράσθηκαν από BD Pharmingen.

Cisplatin επαγόμενη απόπτωση και ροής Ανάλυση κυτταρομετρίας

Τα αναλύθηκαν κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε πλήρες μέσο με 1 μg /mL σισπλατίνης για 24 ώρες. Τα κύτταρα αναλύθηκαν περαιτέρω με κυτταρομετρία ροής (FACSCalibur ™? BD Biosciences, NJ). Χρησιμοποιώντας ένα κιτ χρώσης ΡΙ /αννεξίνη (BD Biosciences)

siRNA Σχεδιασμός και Lentivirus Παραγωγής και Μεταγωγή

Τα siRNAs που στοχεύουν STAT1 και STAT3 σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν από Genscript Co. (Nanjing, Κίνα) ως εξής: siRNA που στοχεύει STAT1, GGACAAGGTTATGTGTATA? και siRNA που στοχεύει STAT3, GGACATCAGCGGTAAGACC. Οι συντίθεται siRNAs υποκλωνοποιήθηκαν στον φορέα λεντοϊού pLL3.7 από

Hapi

και

XhoI

(New England Biolab, Ηνωμένο Βασίλειο) μαζί με τον έλεγχο του siRNA και ονομάζεται pLL3.7-cs, pLL3. 7-STAT1-siRNA και pLL3.7-STAT3-siRNA. Η ανασυνδυασμένη φακοϊό δημιουργήθηκε από 293Τ κύτταρα [16]. Οι ανθρώπινες κυτταρικές σειρές GC ΜΚΝ45 και SGC7901 αγοράστηκαν από Kaiji Biotech Co (Nanjing, Κίνα) και αναπτύχθηκαν σε τροποποιημένο μέσο Dulbecco Eagle (ϋΜΕΜ) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 100 U /mL πενικιλλίνη και 100 U /mL στρεπτομυκίνη (Gibco , CA), και μεταγωγή με φακοϊό χρησιμοποιώντας πολυβρένιο (8 μg /mL).

Στατιστική Ανάλυση

Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SD από σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. Συγκρίσεις μεταξύ των ομάδων έγιναν με τη Mann-Whitney U. Η συσχέτιση της έκφρασης IL-26 και διάφορα κλινικά χαρακτηριστικά αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το Chi-square τεστ. τιμές P & lt? 0,05 θεωρήθηκαν ως στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

1.. Αυξημένη ενεργοποίηση της IL-26 και Συναφών STAT3 Σηματοδοσίας σε ανθρώπινο γαστρικό Cancer

IL-26 έκφραση σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο εξετάστηκε σε 60 φρέσκο ​​καρκινικούς ιστούς και αντιστοιχισμένο παρακείμενων φυσιολογικών ιστών στομάχου από 60 ασθενείς GC. Real-time PCR ανάλυση έδειξε σημαντική υπερ-έκφραση της IL-26 mRNA σε ανθρώπινο GC σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς γαστρικό (Ρ = 0,004, με Mann-Whitney test U) (Σχήμα 1Α). Ορός IL-26 επίπεδα ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερη σε ασθενείς GC ό, τι σε υγιείς ελέγχους (Ρ = 0,0064, με Mann-Whitney test U) (Σχήμα 1Β). Επιπλέον, η ανάλυση της έκφρασης πρωτεΐνης IL-26 σε 60 δείγματα ιστού ενσωματωμένα σε παραφίνη έδειξαν θετική έκφραση σε 47 δείγματα GC, και ασθενώς θετικό (n = 14) ή αρνητική (n = 46) έκφραση σε παρακείμενες φυσιολογικούς ιστούς. Οι IL-26 θετικά κύτταρα που βρίσκονται κυρίως σε μη παρεγχυματικά ιστούς, η οποία μπορεί να αποτελείται από κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος που περιβάλλουν και διηθητικά σε καρκίνο ή φυσιολογικό γαστρικό ιστούς. Επιπλέον, ο ποσοτικός προσδιορισμός των αποτελεσμάτων χρώσης IHC με Image-Pro Plus (ver 5,0) σε πέντε τυχαία πεδία ανά slide έδειξαν ότι η IL-26 έκφραση ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς GC σε σχέση με το γειτονικό φυσιολογικούς ιστούς (Ρ = 0,0087, με Mann-Whitney U δοκιμή). Ανίχνευση και ποσοτικοποίηση της έκφρασης του IL-20R1, ενός υποδοχέα της IL-26, έδειξε ότι εκφράστηκε σε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα σε ανθρώπινα GC σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς (P = 0,0041, με Mann-Whitney U test). Η κατάσταση ενεργοποίησης του STAT1 και STAT3, τα οποία είναι σημαντικά κατάντη παράγοντες σηματοδότηση της IL-26, διερευνήθηκε με IHC χρησιμοποιώντας ειδικά αντισώματα εναντίον των φωσφορυλιωμένα υπολείμματα. Μια σημαντική αύξηση του ρ-STAT3 (S727) ανιχνεύθηκε σε ιστούς GC, ενώ τα επίπεδα στατιστικά σημαντικές διαφορές σε ρ-STAT1 (Y701) ανιχνεύθηκαν μεταξύ ανθρώπινων ιστών GC και φυσιολογικούς ιστούς (P = 0.0094 για STAT3 και Ρ = 0.392 για STAT1 , με Mann-Whitney U test) (Σχήμα 1 C, D)

Α:. IL-26 έκφραση mRNA σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο (GC) (n = 60) και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών (n = 60) ανιχνεύθηκαν από την Real-time PCR. Τα δεδομένα σε Α αντιπροσωπεύουν mRNA έκφρασης σε σχέση με εκείνη του GAPDH, που εκφράζεται ως μέση ± SD. Β: Ανίχνευση της IL-26 σε ανθρώπινους ορούς υγιών ελέγχων (n = 30) και ασθενείς GC (n = 60) με ELISA. C: αντιπροσωπευτική εικόνα της έκφρασης και της διανομής της IL-26, IL-20R1 ρ-STAT3 (S727) και ρ-STAT1 (Y701) σε ανθρώπινους ιστούς GC, φυσιολογικούς ιστούς στομάχου και αρνητικοί μάρτυρες βάφτηκαν με ισότυπο IgG. Οι μικρογραφίες σε μεγαλύτερη μεγέθυνση δείχνουν το ειδικό εντοπισμό των διαφόρων δεικτών. D. Μέση ολοκληρωμένη οπτική πυκνότητα (IOD) ελήφθη με ανάλυση πέντε πεδία για κάθε διαφάνεια αξιολογείται με την εικόνα-Pro Plus λογισμικό (ver5.0) για IHC χρώση IL-26, IL-20R1 ρ-STAT3 (S727) και π- STAT1 (Y701) στον ανθρώπινο GC και φυσιολογικό γαστρικό ιστούς. Στατιστικές αναλύσεις στα στοιχεία Α, Β και D πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney U.

Η

Η ανάλυση της συσχέτισης μεταξύ της IL-26 έκφρασης και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά έδειξαν στατιστικά σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ της IL-26 έκφρασης και το μέγεθος του όγκου και

H. pylori

μόλυνση (Πίνακας 1).

2. Th17 και ΝΚ κύτταρα είναι τα κύρια κυτταρικές πηγές της IL-26 σε ανθρώπινο γαστρικό Cancer

Οι κυτταρικές πηγές της IL-26 είναι πρωτογενή Τ κύτταρα, φυσικά φονικά κύτταρα (ΝΚ) και οι κλώνοι Τ κυττάρων μετά από διέγερση με ειδικά αντιγόνα ή μιτογόνο λεκτίνες [14]. Ως εκ τούτου, να καθορίσει την πηγή της IL-26 σε ανθρώπινο GC, λευκοκύτταρα που διηθούν όγκο (TILs) απομονώθηκαν από 20 φρέσκα δείγματα ανθρώπινου ιστού GC και συν-χρώση με διαφορετικούς δείκτες. IL-26 έκφραση ήταν σημαντικά υψηλότερη σε CD3 θετικά κύτταρα (Τ κύτταρα) από ανθρώπινο TILs GC σε σχέση με τα κύτταρα Τ που προέρχονται από μονο-πυρηνικό κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) (16,52 ± 9,32% για τα Τ-TILs έναντι 3,78 ± 2,91% για T-PBMCs, Ρ & lt? 0,0001) η οποία ήταν σύμφωνη με τα αποτελέσματα του πραγματικού χρόνου PCR και IHC (Σχήμα 2Α1, Α2). Μεταξύ του συνολικού αριθμού των Τ κυττάρων, 13.5 ± 3.71% των CD4 θετικών Τ κυττάρων εξέφρασαν την IL-26, ενώ μόνο 3,21 ± 2,61% των CD8 Τ κυττάρων ήταν θετικά για την IL-26 (Σχήμα 2Α3, Α4). Περαιτέρω, συν-χρώση της IL-26 με CD4 και RORγt, έναν δείκτη για κύτταρα Th17, παρατηρήθηκε, με 53,21 ± 16,82% των κυττάρων που εκφράζουν Th17 IL-26 σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο δείγματα (Σχήμα 2Α5, Α6). Η έκφραση της IL-26 σε κύτταρα ΝΚ, ένας άλλος συχνά αναφερόμενη κυτταρική πηγή της IL-26, αναλύθηκε με μέτρηση του αριθμού των CD3-, CD16 +, CD56 + κύτταρα συν-χρώση με IL-26, η οποία έδειξε ότι 43,81 ± 19,44% του συνολικής ΝΚ κύτταρα εκκρίνουν IL-26 (Σχήμα 2a7, Α8). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι οι κύριες κυτταρικές πηγές της IL-26 σε ανθρώπινα GC ήταν κύτταρα Th17 και ΝΚ και το ποσοστό του κάθε συστατικού έχουν συνοψιστεί σε ένα γράφημα πίτας (Σχήμα 2a9 και Α10).

Α1 -a8: Μια αντιπροσωπευτική περίπτωση της IL-26 έκφραση σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο (GC) λευκοκύτταρα που διηθούν όγκο (n = 20) που ανιχνεύεται με κυτταρομετρία ροής μετά από συν-χρώση με αντισώματα έναντι CD4, CD8, RORγT, και CD3 + CD16 + CD56. Α9. Σύγκριση του ποσοστού της IL-26 θετικών κυττάρων σε CD3 θετικά κύτταρα Τ μεταξύ PBMCs ως μάρτυρες, CD3, CD4, CD8 θετικά, Th17 και ΝΚ κυττάρων που προέρχονται από ιστούς GC. Το πείραμα πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν. A10: Ένα γράφημα πίτας για το ποσοστό των διαφόρων συστατικών συμβάλλει στην IL-26 στην παραγωγή. b1-b4: Αντιπροσωπευτικά CD4 + Τ κύτταρα,

in vitro

διεγερμένα κύτταρα Th17 και απομονωμένα κύτταρα ΝΚ εξετάστηκαν με κυτταρομετρία ροής. C1-C8: Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της IL-26 έκφρασης σε Th17 και ΝΚ κύτταρα διεγείρονται με LPS και

H.pylori

λύματα. C9: Σύγκριση της έκφρασης IL-26 σε κάθε ομάδα. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. Οι στατιστικές αναλύσεις στο σχήμα Α9 και C9 διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney U και σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. ** P & lt?. 0.01

Η

Για να διερευνήσει περαιτέρω την έκκριση της IL-26 στα κύτταρα Th17 και ΝΚ, PBMCs συλλέχθηκαν από 20 υγιείς εθελοντές και διεγείρονται υπό Th17 πολωτικό συνθήκες. Η άλλη κύρια πηγή της IL-26, τα κύτταρα ΝΚ, ελήφθη από PBMCs χρησιμοποιώντας ένα εμπορικό κιτ απομόνωσης ανθρώπινο ΝΚ. Τα χαρακτηριστικά της επαγόμενης ή απομονωμένα κύτταρα Th17 και ΝΚ επαληθεύθηκαν με χρώση ενδοκυτταρικής κυτοκίνης και περαιτέρω αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής (σχήμα 2Β1, β2). Η διέγερση των κυττάρων Th17 και ΝΚ με LPS και

H.pylori

λύματα είχε ως αποτέλεσμα μια σημαντική αύξηση της έκκρισης της IL-26, υποδεικνύοντας ότι η IL-26 είναι ένα ζωτικής σημασίας απόκριση κυτοκίνης σε γαστρικό καρκίνο (Σχήμα 2C).

3.

In vitro

πολλαπλασιαστικών και αντι-αποπτωτικά αποτελέσματα της IL-26

Η επίδραση της IL-26 διερευνήθηκε περαιτέρω με μια σειρά από

in vitro

μελέτες που πραγματοποιήθηκαν σε δύο ανθρώπινες κυτταρικές σειρές GC, ΜΚΝ45 και SGC-7901. Η επίδραση της IL-26 επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων εκτιμήθηκε με τη δοκιμασία incooperation BrdU σε κύτταρα επεξεργασμένα με διαφορετικές συγκεντρώσεις IL-26 (1, 10 και 50 ng /mL). Δεν ανιχνεύθηκαν σημαντικές διαφορές στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό μεταξύ ακατέργαστα κύτταρα και εκείνων που έλαβαν θεραπεία με 1 ng /ml IL-26. Ωστόσο, ο ρυθμός του πολλαπλασιασμού των κυττάρων αυξήθηκε σημαντικά σε απόκριση σε 10 και 50 ng /ml IL-26 σε σύγκριση με εκείνη σε μη επεξεργασμένα κύτταρα (Σχήμα 3Α). Περαιτέρω, η εκτίμηση του αντι-αποπτωτικό αποτέλεσμα του IL-26 με ΡΙ-Αηηβχίην συν-χρώση σε κύτταρα κατεργασμένα με την σισπλατίνη φάρμακο χημειοθεραπείας για διάφορα σημεία του χρόνου έδειξε ότι η IL-26 είχε σημαντική αντι-αποπτωτικό αποτέλεσμα ακόμη και σε μία δόση 1 ng /mL. Το αντι-αποπτωτικό αποτέλεσμα αυξήθηκε με την αύξηση των συγκεντρώσεων της IL-26 έως 10 και 50 ng /mL (Σχέδιο 3Β1, Β2). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η IL-26 έχει πολλαπλασιαστική και αντι-αποπτωτικά αποτελέσματα επί ανθρώπινες κυτταρικές σειρές GC, γεγονός που εξηγεί εν μέρει τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης της IL-26 και τα διαφορετικά κλινικά χαρακτηριστικά που παρατηρήθηκαν σε κλινικές μελέτες. Ωστόσο, η υποκείμενη μοριακός μηχανισμός χρειάζεται να αναλυθεί περαιτέρω

Α:. Καμπύλη ανάπτυξης των γαστρικού καρκίνου (GC) κυτταρικές γραμμές ΜΚΝ45 και SGC7901 παρουσία ή απουσία IL-26 στις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις, όπως καθορίζεται από η δοκιμασία BrdU συνεργασίας. Το πείραμα πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν. Β1: Ανάλυση της σισπλατίνης (1 μg /ml) επήγαγε απόπτωση σε ΜΚΝ45 και SGC7901 κύτταρα και σε κύτταρα επεξεργασμένα με τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις IL-26 για 24 ώρες. Τα κύτταρα αναλύθηκαν με ΡΙ-αννεξίνης V συν-χρώση. Τα μη επεξεργασμένα κύτταρα ΜΚΝ45 και SGC7901 χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. Β2: Σύγκριση του ποσοστού των αποπτωτικών κυττάρων σε διάφορα σημείο φορά σε κάθε ομάδα (τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν). Στατιστικές αναλύσεις στα σχήματα Α και Β2 πραγματοποιήθηκαν με Αμφίδρομο ANOVA και σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. ** P & lt?. 0.01

Η

4. Οι πολλαπλασιαστικών και Αντι-αποπτωτικά αποτελέσματα της IL-26 συσχετίζεται με STAT3 ενεργοποίηση

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η πρόσδεση της IL-26 σε σύμπλοκο υποδοχέα του μπορεί να επάγει την ταχεία ενεργοποίηση STAT3 και σε μικρότερο βαθμό, STAT1 [ ,,,0],12]. Ως εκ τούτου, προσδιορίζεται πρώτα η έκφραση του συμπλέγματος υποδοχέα IL-26 (IL-20R1 και IL-10R2) σε ΜΚΝ45 και SGC7901 κύτταρα και επαλήθευσε ότι και οι δύο υποδοχείς ήταν παρόντα στις κυτταρικές σειρές GC για να επιβεβαιωθεί ότι μεταγωγή της IL-26 σήματα ήταν δυνατή (Σχήμα 4Α). Στη συνέχεια εξετάστηκε η ενεργοποίηση των STAT1 και STAT3 σηματοδότηση και έδειξε ότι η φωσφορυλίωση του υπολείμματος S727 της STAT3 και Y701 του STAT1 αυξήθηκε σε απόκριση σε 10 ng /ml IL-26. IFN-γ (10 ng /mL) και IL-6 (30 ng /mL) χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχοι ενεργοποίησης για STAT1 και STAT3, αντίστοιχα (Σχήμα 4Β). Με βάση τις προηγούμενες μελέτες που δείχνουν ότι STAT1 και STAT3 οδών σηματοδότησης έχουν αντίθετες επιπτώσεις στην ογκογένεση [18], ερευνήσαμε κατάντη στόχοι της STAT1 και STAT3 για την περαιτέρω διαλεύκανση των μηχανισμών που διέπουν τις πολλαπλασιαστικές και pro-επιβίωσης αποτελέσματα της IL-26 που προκαλείται από STAT1 και STAT3 σηματοδότησης σε κυτταρικές γραμμές GC. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η IL-26 διέγερση απορυθμίζεται την έκφραση της Bcl-2, Bcl-XL και c-myc, υποδηλώνοντας ότι η IL-26 έχει ισχυρότερη επίδραση στην ενεργοποίηση STAT3 παρά στην STAT1 σηματοδότησης άμεσα ή έμμεσα (Σχήμα 4Β). Αυτό το αποτέλεσμα συμβάλλει επίσης στην κατανόηση της προ-επιβίωσης και πολλαπλασιαστική επίδραση της IL-26 σε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές GC

Α:. Έκφραση της IL-20R1 και IL-10R2 σε ΜΚΝ45, SGC7901, γαστρικό καρκίνο και φυσιολογικό γαστρικό ιστό ανιχνεύεται με κηλίδωση Western. Β: ΜΚΝ45 και SGC7901 κύτταρα διεγέρθηκαν ή όχι με IL-26 (10 ng /ml), IL-6 (30 ng /ml) και IFN-γ (10 ng /ml), πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν και αναλύθηκαν με κηλίδωση Western για την ενεργοποίηση STAT3 και STAT1 (φωσφορυλιωμένη S727 για STAT3 και Y701 για STAT1) και έκφραση κατάντη πρωτεΐνη Bcl-2, Bcl-XL και c-myc.

Η

5. Ο όγκος δράση προαγωγής της IL-26 εξαρτάται από την STAT1 /STAT3 Balance

Η επίδραση της IL-26 στην ισορροπία μεταξύ STAT1 και ενεργοποίηση STAT3 διερευνήθηκε χρησιμοποιώντας τη μεσολάβηση λεντοϊού siRNA αποσιώπηση του STAT1 και STAT3 σε ΜΚΝ45 και SGC-7901 κύτταρα. Το αντίστοιχο siRNAs αποτελεσματικά κάτω-ρυθμιζόμενη την έκφραση της STAT1 και STAT3 στις δύο κυτταρικές σειρές (Σχήμα 5Α). Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων εκτιμήθηκε με δοκιμασία συνεργασία BrdU σε siRNA ελέγχου επιμολυσμένα κύτταρα και κυτταρικές σειρές αντιμετωπίζονται GC STAT1 και STAT3 siRNA αναπτύχθηκαν σε μέσα που περιέχουν 10 ng /ml IL-26. Knockdown έκφρασης STAT3 ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη του ΜΚΝ45 και SGC-7901 κύτταρα, ενώ STAT1 knockdown δεν είχε καμία επίδραση επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού (Σχήμα 5Β1, Β2). Η σισπλατίνη απόπτωση που επάγεται εκτιμήθηκε με ΡΙ-αννεξίνης V συν-χρώση στα ίδια κύτταρα διατηρούνται σε μέσο με 10 ng /ml IL-26, και τα αποτελέσματα έδειξαν σημαντική μείωση στην επίδραση προ-επιβίωσης της IL-26 σε STAT3 knockdown κυττάρων , ενώ στατιστικά σημαντικές αλλαγές στο ποσοστό της απόπτωσης ανιχνεύθηκαν σε απόκριση STAT1 σίγηση (Σχήμα 5C1, C2). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η IL-26 έχει προ-επιβίωσης και πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα επί ανθρώπινων κυτταρικών σειρών GC μεσολαβεί τουλάχιστον εν μέρει από STAT1 σηματοδότηση /STAT3

Α:. Έκφραση STAT1 και STAT3 σε ΜΚΝ45 και SGC7901 κύτταρα επιμολυσμένα με έλεγχο siRNA (υποδεικνύεται ως MKN45cs και SGC7901cs) ή ειδικές siRNAs που στοχεύουν STAT1 και STAT3, όπως καθορίζεται από κηλίδωση western. Β: Η κυτταρική ανάπτυξη του MKN45cs και SGC7901cs και STAT1 και STAT3 siRNA κύτταρα υποβάλλονται σε επεξεργασία, όπως προσδιορίζεται με δοκιμασία BrdU συνεργασίας. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. C1: Η σισπλατίνη (1 μg /ml) προκάλεσε απόπτωση MKN45cs, SGC7901cs και STAT1 και STAT3 siRNA κύτταρα υποβάλλονται σε επεξεργασία όπως προσδιορίζεται με ΡΙ-αννεξίνης V συν-χρώση. Β2: Σύγκριση του ποσοστού της απόπτωσης σε κάθε ομάδα (τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν). Στατιστικές αναλύσεις στα σχήματα Β και C2 πραγματοποιήθηκαν με τη Mann-Whitney U και σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. ** Ρ & lt?. 0.01

Η

Συζήτηση

Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι το IL-26 συν-εκφράζεται με ένα άλλο σημαντικό IL-10 που σχετίζονται με κυτοκίνη, IL-22, η οποία είναι επίσης εκκρίνονται από κύτταρα Th17 [19], [20]. Εντούτοις, η έκφραση και ο ρόλος της IL-26 σε ανθρώπινο καρκίνο δεν έχουν διερευνηθεί λεπτομερώς. Εδώ, εξετάσαμε για πρώτη φορά την έκφραση της IL-26 σε ανθρώπινους ιστούς GC και έδειξαν ότι η IL-26 και των σχετικών μορίων όπως IL-20R1 υπερεκφράζονται σε ανθρώπινους ιστούς GC.

IL-26 είναι co -expressed με ΙΡΝ-γ και IL-22 σε ανθρώπινο κλώνους Th1, αλλά όχι σε Th2 κλώνοι. Επιπλέον, η IL-26 είναι συν-εκφράζεται με IL-17 και IL-22 από κύτταρα Th17, ένα σημαντικό υποσύνολο των CD4 + Τ-βοηθητικά κύτταρα που είναι διακριτή από Th1 και Th2 κυττάρων [12], [21]. Στην παρούσα μελέτη, η IL-26 βρέθηκε να παράγεται κυρίως από CD4 θετικά Τ βοηθητικά κύτταρα στο ανθρώπινο GC, μεταξύ των οποίων σχεδόν το ήμισυ των κυττάρων Th17 εκκρίνεται IL-26. Εξετάσαμε μια άλλη πιθανή κυτταρική πηγή, τα κύτταρα ΝΚ, τα οποία αναφέρονται ότι σχετίζονται με τον όγκο του όγκου και τη διάδοση στον ανθρώπινο GC [22], [23] και έδειξε ότι τα κύτταρα ΝΚ ήταν επίσης σημαντικές πηγές της IL-26 της παραγωγής. Τα αποτελέσματά μας υποστηρίζονται από μία πρόσφατη μελέτη στην οποία βρέθηκε μία νέα υποσύνολο κυττάρων CD56 + NKp44 + ΝΚ να συν-εκφράζει IL-22 και IL-26, ειδικά σε απόκριση σε θεραπεία με IL-23 [24]. Hughes

et al

. περιγράφεται ένα διαφορετικό υποσύνολο των ανώριμων κυττάρων ΝΚ που δεν εκφράζουν CD56 ή NKp44 αλλά εκφράζουν CD117 και CD161 και συστατικώς εκφράζουν IL-22 και IL-26 [25]. Επιπλέον, τα αποτελέσματα μας έδειξαν για πρώτη φορά ότι η IL-26 προάγει τον πολλαπλασιασμό των ανθρώπινων κυττάρων GC επηρεάζοντας την ισορροπία των STAT1 και ενεργοποίηση STAT3, παρέχοντας έτσι νέα στοιχεία της σχέσης μεταξύ των κυττάρων ΝΚ και ο όγκος του όγκου σε ανθρώπινα GC.

IL-26 έχει αναφερθεί να σηματοδοτήσει μέσω ενός ετεροδιμερικού συμπλόκου υποδοχέα που αποτελείται από τις αλυσίδες IL-20R1 και IL-10R2. IL-20R1 λειτουργεί ως ειδική αλυσίδα δέσμευσης συνδέτη για IL-26, και τις λειτουργίες της IL-10R2 ως ουσιώδες δεύτερη αλυσίδα για να ολοκληρωθεί η συναρμολόγηση του ενεργού συμπλέγματος υποδοχέα. Αντισώματα εξουδετέρωσης έναντι είτε των αλυσίδων IL-20R1 ή IL-10R2 είναι ικανά να αποκλείουν την IL-26 σηματοδότηση. Μόλις συναρμολογηθεί πλήρως, το σύμπλεγμα υποδοχέα υφίσταται μια διαμορφωτική μεταβολή (ες) που επάγει την ενεργοποίηση του υποδοχέα που σχετίζεται Janus κινάσες τυροσίνης, Jak1 και Tyk2, και την επακόλουθη παροδική σύνδεσης και φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών STAT, STAT1 και STAT3 [26], [27]. Ως ένα από τα κατάντη παράγοντες σηματοδότηση της IL-26, STAT3 είναι πιο συχνά συνδέεται με ογκογένεση και θεωρείται επίσης ως ένα ογκογονίδιο. STAT3, η οποία θεωρείται ένα σημείο σύγκλισης για πολλές οδούς ογκογόνο σηματοδότηση, ιδιοσυστατικά ενεργοποιημένα τόσο σε καρκινικά κύτταρα και σε κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος στο μικροπεριβάλλον του όγκου [28], [29], [30]. Ειδικότερα, η ενεργοποίηση STAT3 έχει αναφερθεί σε σχεδόν το 70% των στερεών και αιματολογικών όγκων, συμπεριλαμβανομένου του πολλαπλού μυελώματος, αρκετές λεμφωμάτων και λευχαιμίας, του καρκίνου του μαστού, καρκίνο κεφαλής και λαιμού, καρκίνο προστάτη, καρκίνωμα των ωοθηκών, μελάνωμα, νεφρικό καρκίνωμα, ορθοκολικό καρκίνωμα και θυμική επιθηλιακών όγκων [31]. STAT3 είναι γνωστό ότι προάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την αγγειογένεση και παίζουν ένα ρόλο στην ογκοάνοση-διαφυγής, αλλά παρεμποδίζει επίσης την ικανότητα διήθησης και μετάστασης των όγκων. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι STAT3 ενεργοποιείται σε ανθρώπινους ιστούς GC και η ενεργοποίηση του μπορεί να σχετίζονται με την υπερβολική έκκριση IL-26. Από την άλλη πλευρά, δεν υπάρχουν σημαντικές διαφορές ανιχνεύθηκαν στην άλλη προς τα κάτω στόχος της IL-26, STAT1, μεταξύ του όγκου και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών. STAT1 και STAT3 πιστεύεται ότι παίζουν αντίθετο ρόλο στην ογκογένεση [18]. STAT1 έχει μια σύνθετη σειρά από λειτουργίες και στις δύο καρκινικά κύτταρα και το ανοσοποιητικό σύστημα και είναι συνήθως θεωρείται ως καταστολέας των όγκων, λόγω του ρόλου της στην αναστολή της ανάπτυξης και της προώθησης της απόπτωσης [32].

Με λίγα λόγια, δείξαμε ότι η IL -26 προωθεί την ανάπτυξη των κυττάρων και αποτρέπει την απόπτωση των ανθρώπινων γαστρικών καρκινικών κυττάρων με ρύθμιση της ισορροπίας της σηματοδότησης STAT1 /STAT3, υποδεικνύοντας ότι η IL-26 μπορεί να είναι ένα πολύτιμο προγνωστικό δείκτη και θεραπευτικός στόχος σε ασθενείς με γαστρικό καρκίνο.