Αφηρημένο

Το τρίτο μέλος του μετασχηματισμού όξινης πρωτεΐνης διπλής ελίκωσης (TACC) οικογένεια, TACC3, έχει αποδειχθεί ότι είναι ένας σημαντικός παίκτης στην η ρύθμιση της δυναμικής κεντροσωμάτων /μικροσωληνίσκων κατά τη μίτωση και βρέθηκε να απελευθερωθεί σε μια ποικιλία ανθρώπινων κακοηθειών. προηγούμενες μελέτες μας έχουν δείξει ότι TACC3 μπορεί να εμπλέκεται στην αυχενική εξέλιξης του καρκίνου και χημειοαντίσταση, και η υπερέκφραση του μπορεί να διεγείρει επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ) με ενεργοποίηση της φωσφατιδυλοϊνοσιτόλης 3-κινάσης (ΡΙ3Κ) /Akt και εξωκυτταρικό σήμα ρυθμιζόμενη πρωτεϊνικών κινασών (ERKs ) μονοπάτια μεταγωγής σήματος. Ωστόσο, οι ανάντη μηχανισμοί TACC3 μεσολάβηση EMT και λειτουργικό /κλινική σημασία του στον ανθρώπινο καρκίνο του τραχήλου της μήτρας παραμένουν ασαφείς. Ο επιδερμικός αυξητικός παράγοντας (EGF) έχει δειχθεί ότι είναι ένας ισχυρός διεγέρτης του ΕΜΤ στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και σχετίζεται με την εισβολή όγκου και μετάσταση. Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι TACC3 υπερεκφράζεται στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και μπορεί να προκληθεί κατά τη διέγερση EGF. Η επαγωγή της TACC3 με EGF εξαρτάται από τη δραστικότητα κινάσης τυροσίνης του υποδοχέα EGF (EGFR). Περιέργως, η εξάντληση των TACC3 καταργεί EGF-μεσολάβηση EMT, γεγονός που υποδηλώνει ότι TACC3 απαιτείται για τη διαδικασία EMT EGF /EGFR-οδηγείται. Επιπλέον, σαλιγκάρι, ένας βασικός παράγοντας στην ΕΤΠ με τη μεσολάβηση EMT, βρέθηκε να συσχετίζεται με την έκφραση της TACC3 στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Συλλογικά, η μελέτη μας καταδεικνύει μια νέα λειτουργία για TACC3 στη διαδικασία EMT EGF-μεσολάβηση και προτείνει ότι η στόχευση των TACC3 μπορεί να είναι μια ελκυστική στρατηγική για την αντιμετώπιση καρκίνων του τραχήλου οδηγούνται από EGF /EGFR σηματοδότηση μονοπατιών

Παράθεση:. Ha GH, Kim JL, Breuer E-ΚΥ (2013) TACC3 είναι απαραίτητη για EGF-διαμεσολαβείται EMT στον Καρκίνο του Τραχήλου της Μήτρας. PLoS ONE 8 (8): e70353. doi: 10.1371 /journal.pone.0070353

Επιμέλεια: Antimo Migliaccio, ΙΙ Università di Napoli, Ιταλία

Ελήφθη: 18 Μάρτη 2013? Αποδεκτές: 17 του Ιουνίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 1 Αυγούστου του 2013

Copyright: © 2013 Ha et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Τα επιθηλιακά-mensenchymal μετάβασης (EMT) είναι μια ιδιαίτερα. διατηρημένη βιολογική διαδικασία η οποία οδηγεί σε μια μετατροπή του πολωμένου επιθηλιακά κύτταρα να μεσεγχυματικά τύπους κυττάρων που χαρακτηρίζεται από την απώλεια των επαφών κυττάρου-κυττάρου Ε-καδερίνης μεσολάβηση, καθώς και την απόκτηση αυξημένης μεταναστευτικής και επεμβατικές δυνατότητες [1] – [9]. Μεταγραφικοί παράγοντες σαλιγκάρι, γυμνοσάλιαγκας, Twist και Zeb1 έχουν αναγνωριστεί ως αρνητικοί ρυθμιστές της E-cadherin και θεωρούνται ότι είναι ισχυροί επαγωγείς του ογκογόνο EMT [10] – [14]

Παρά τη μεγάλη επιτυχία της πρώιμης ανίχνευσης. προγράμματα, ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας εξακολουθεί να είναι η κύρια αιτία των γυναικολογικών θανάτου μεταξύ των γυναικών σε όλο τον κόσμο [15], [16]. Οι ιοί των ανθρωπίνων θηλωμάτων του ανθρώπου (HPVs) πιστεύεται ότι είναι η κύρια αιτία του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας? Ωστόσο, μελέτες έχουν δείξει ότι ο ιός από μόνη της δεν είναι αρκετή για να αναπτύξουν καρκίνο [15], [17], [18]. Ο επιδερμικός αυξητικός παράγοντας (EGF) έχει δειχθεί ότι είναι ένας από τους πιο ισχυρούς επαγωγείς του ΕΜΤ στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και του τραχήλου της μήτρας που σχετίζονται με εισβολή στρωματικά και κομβικών μετάσταση [15], [19]. Η χρόνια αγωγή με EGF επάγει ΕΜΤ μέσω αυξητική ρύθμιση του ΕΜΤ-προκαλώντας παράγοντα μεταγραφής σαλιγκάρι σε τραχήλου καρκινικά κύτταρα, και EGF μεσολάβηση EMT συσχετίζεται με τον υποδοχέα EGF (EGFR) υπερέκφραση και την κλινική εξέλιξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας [15], [20]. Η έκφραση του EGFR έχει βρεθεί ότι υπερεκφράζεται σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας [21].

Η μετατροπή οικογένεια όξινη πρωτεΐνη συσπειρωμένης σπείρας (TACC) χαρακτηρίζεται από μια διατηρημένη Ο-τερματικό «περιοχή TACC», απαραίτητη για τη αλληλεπίδραση με τουμπουλίνη και μικροσωληνίσκους [22] – [24] και είναι γνωστό ότι παίζουν ένα ρόλο κλειδί στη ρύθμιση της κεντρόσωμα και μικροσωληνίσκων δυναμική [22], [25] – [29]. Υπάρχουν τρεις TACC πρωτεΐνες ταυτοποιήθηκαν σε ανθρώπινες: TACC1, TACC2 και TACC3 [24], [30] – [32]. TACC3 εμπλέκεται στην συναρμολόγηση και την οργάνωση των μικροσωληνίσκων και της ευθυγράμμισης των χρωμοσωμάτων κατά τη διάρκεια της μίτωσης, η διατήρηση της δομής πυρηνικού φακέλου και η ρύθμιση της κυτταρικής ανάπτυξης /διαφοροποίησης και μεταγραφή γονιδίου [24], [26], [27], [29], [ ,,,0],33] – [38]. Εξάντληση των

TACC3

προκαλεί καθυστέρηση της ανάπτυξης των εμβρύων και θνησιμότητα σε ποντίκια οφείλεται σε αυξημένη απόπτωση [39].

Αν και ο ρόλος της TACC3 στον ανθρώπινο καρκίνο δεν είναι σαφής, τοποθέτηση στοιχεία δείχνουν ότι η απορρύθμιση των TACC3 μπορεί να συνδέεται άμεσα ή έμμεσα με ορισμένους τύπους καρκίνου του ανθρώπου [24]. Γενετικές παραλλαγές στο χρωμόσωμα 4p16.3, η περιοχή που κωδικοποιεί

TACC3

, βρίσκονται σε διάφορους ανθρώπινους καρκίνους [9], [24], [40] – [48]. Η ανάπτυξη ινοβλαστών υποδοχέα του παράγοντα 3 γονίδιο (

FGFR3

) και

TACC3

είναι στενά εντοπίζεται στο χρωμόσωμα 4p16.3 [9], [32]. Πρόσφατα, μια πρωτεΐνη σύντηξης TACC3-FGFR3 αναφέρθηκε σε ένα υποσύνολο πολύμορφο γλοιοβλάστωμα (GBM) [49] και τους ιστούς όγκου κύστης και κυτταρικές σειρές [50]. Αυτή η πρωτεΐνη σύντηξης προκαλεί μιτωτική ελαττώματα και ανευπλοειδίας και ενεργοποιεί ενεργοποιείται από μιτογόνο κινάσης πρωτεΐνης (ΜΑΡΚ) [49] σηματοδότησης, [50]. Μέχρι στιγμής, η σωματική μετάλλαξη (E680K) και δύο συνταγματικές μεταλλάξεις (S93L και G514E) του

TACC3

έχουν εντοπιστεί στην GBM και τον καρκίνο των ωοθηκών, αντίστοιχα [40], [51], [52]. Μελέτες έχουν δείξει ότι τα πάνω ρύθμιση του TACC3 βρίσκεται στο γλοιοβλάστωμα, μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) και πολλαπλό μυέλωμα [40], [53], [54] και μπορούν να συμβάλλουν στην lymphomagenesis [55], [56]. Η γονιδιακή έκφραση προφίλ ανάλυση αποκάλυψε ότι

TACC3

ρυθμίζεται προς τα πάνω κατά τη διάρκεια της μετάβασης του πορογενές καρκίνωμα

in situ

να διηθητικό καρκίνωμα του μαστού και στον καρκίνο των ωοθηκών [57] – [59]. Έχουμε προηγουμένως προταθεί ότι μπορεί να TACC3 άμεσα ή έμμεσα σχετίζονται με την εξέλιξη του όγκου και της αντοχής στα φάρμακα του καρκίνου του τραχήλου, με βάση τα δεδομένα που αποκτήθηκαν από την ανάλυση μικροσυστοιχιών για την ταυτοποίηση γονιδίων που ρυθμίζονται από TACC3 [24], [60]. Επιπλέον, πρόσφατη μελέτη μας έδειξε ότι η έκτοπη έκφραση της TACC3 ενισχύει τον πολλαπλασιασμό, τα μεταναστευτικά /επεμβατική ικανότητα και την ικανότητα μετασχηματισμού των HeLa καρκίνου του τραχήλου της μήτρας κυττάρων και εμφανίζει μια περισσότερο μεσεγχυματικά φαινότυπο, που συνοδεύεται από τα κάτω ρύθμιση επιθηλιακών δείκτη Ε-καδερίνης και πάνω ρύθμιση δείκτες μεσεγχυματικά Ν-καντερίνης και βιμεντίνης, καθώς και επαγωγείς EMT σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα [9]. Από την άλλη πλευρά, η εξάντληση των TACC3 είναι ικανός αντιστροφής /καταστολής ΕΜΤ [9]. Αν και το εύρημα μας δείχνει ότι TACC3 μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην EMT, οι ανάντη γεγονότα σηματοδότησης υπεύθυνο για TACC3 μεσολάβηση EMT μένει να καθοριστεί.

Εδώ, έχουμε αποδείξει ότι TACC3 υπερεκφράζεται στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. TACC3 μπορεί να προκληθεί από EGF, και επαγωγή TACC3 EGF μεσολάβηση εξαρτάται από την ενεργοποίηση του EGFR. Είναι σημαντικό ότι, σε περίπτωση απουσίας του TACC3, EGF δεν είναι σε θέση να επάγει EMT, γεγονός που υποδηλώνει ότι TACC3 είναι απαραίτητη για EGF μεσολάβηση ΕΜΤ στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Επιπλέον, θα βρείτε μια συσχέτιση μεταξύ TACC3 και EGF επαγωγέα Σαλιγκάρι στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Τα ευρήματά μας, ως εκ τούτου, να εντοπίσει ένα νέο μηχανισμό που μεσολαβεί EGF /EGFR που προκαλείται από EMT και ένα δυνητικό θεραπευτικό στόχο για τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Υλικά και Μέθοδοι

ιστικές μικροσυστοιχίες και ανοσοϊστοχημεία

μικροσυστοιχίες καρκίνος του τραχήλου ιστού (CR805, CR1003 και CR1501) αγοράστηκαν από την US Biomax (Rockville, MD). Tissue μικροσυστοιχιών πληροφορίες ασθενών παρουσιάζεται στον Πίνακα 1. slides Tissue μικροσυστοιχιών αποπαραφινοποιήθηκαν, επανυδατώθηκαν και θερμικά επεξεργασμένο για ανάκτηση αντιγόνου πριν από τη σήμανση του αντισώματος [61]. Οι πλάκες επωάστηκαν με ένα αντι-TACC3 αντίσωμα (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, που ακολουθείται από επώαση με δευτερεύον βιοτινυλιωμένο αντίσωμα και το Αβιδίνης Βιοτίνης σύμπλεγμα (ABC), σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κιτ Vectastain ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Μετά την ανάπτυξη χρώματος με διαμινοβενζιδίνη (DAB), οι διαφάνειες εκτιμήθηκαν ανεξάρτητα από τους συντάκτες. Η ένταση της χρώσης καταγράφηκε ως εξής: 0 για αρνητική έκφραση? 1+ για ασθενώς θετική έκφραση? 2+ για μεσαίου θετική έκφραση? και 3+ για εξαιρετικά θετική έκφραση. Μικροφωτογραφία (μεγέθυνση χ 100) λήφθηκε από DP12 μικροσκόπιο (Olympus, Tokyo, Japan) εφοδιασμένο με σύστημα DP71 ψηφιακής απεικόνισης (Όλυμπος).

Η

Cell Culture, Αντισώματα και Αντιδραστήρια

Η ανθρώπινου τραχηλικού καρκίνου (HeLa, CaSki, SiHa και C33A) και HPV-αθανατοποιημένα εξωτραχηλικά επιθήλιο (Ect1 /E6E7) κυτταρικές γραμμές αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC) (Manassas, VA). κύτταρα HeLa αναπτύχθηκαν σε κατά Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) (HyClone, Logan, UT) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) (Gemini Bio-Products, Woodland, CA) και 1% διάλυμα πενικιλλίνης /στρεπτομυκίνης (Thermo Fisher Scientific , Waltham, ΜΑ). CaSki κύτταρα διατηρήθηκαν σε RPMI-1640 (Hyclone) που περιέχει 10% FBS και 1% στρεπτομυκίνη διάλυμα πενικιλλίνης /. SiHa και C33A κύτταρα αναπτύχθηκαν σε ΜΕΜ (HyClone) συμπληρωμένο με 10% FBS και 1% στρεπτομυκίνη διάλυμα πενικιλλίνης /. Ect1 /E6E7 κύτταρα αναπτύχθηκαν σε κερατινοκύτταρα μέσο ελεύθερο ορού (Ker-SFM? GIBCO /BRL Life Technologies, Gaithersburg, MD) με 0,1 ng /ml ανθρώπινου ανασυνδυασμένου EGF, 0,05 mg /ml βόειας εκχύλισμα υπόφυσης και επιπλέον χλωριούχο ασβέστιο 44,1 mg /L (τελική συγκέντρωση 0,4 mM). Τα κύτταρα επωάστηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένο επωαστή με 5% CO

2. αντίσωμα αντι-TACC3 αγοράστηκε από Santa Cruz Biotechnology. Αντισώματα έναντι E-cadherin, N-cadherin, βιμεντίνη, σαλιγκάρι, Slug και EGFR αγοράσθηκαν από τη Cell Signaling Technology (Beverly, ΜΑ). Αντι-β-ακτίνης αντίσωμα και EGF αγοράστηκαν από τη Sigma (St. Louis, ΜΟ). Ο αναστολέας κινάσης EGFR AG1478 αγοράστηκε από Selleckchem (Houston, ΤΧ).

shRNA και διαμόλυνση

Τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με ένα TACC3 ειδικό ή όργανα ελέγχου shRNA (Santa Cruz Biotechnology) χρησιμοποιώντας FuGENE 6 (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, ΙΝ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Ανάλυση Western Blot

φυσιολογικού τράχηλου προϊόντα λύσης ανθρώπινου ιστού αγοράσθηκαν από Imgenex (San Diego, CA). Κυτταρικά εκχυλίσματα παρασκευάζονται σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης αποτελείται από 50 mM Tris-Cl (ρΗ 7,4), 1% εννεανυλο phenoxypolyethoxylethanol (ΝΡ-40), 0,25% δεοξυχολικό νάτριο, 150 mM χλωριούχο νάτριο (NaCl), 1 mM αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA) , 1 mM φθοριούχο φαινυλμεθυλσουλφονύλιο (PMSF), 1 mM φθοριούχο νάτριο (NaF) και Πλήρες κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης (Roche Molecular Biochemicals). Τα κυτταρολύματα διαυγάστηκαν με φυγοκέντρηση στις 13.000 rpm για 10 λεπτά, και τα υπερκείμενα υποβλήθηκαν σε ανάλυση κηλίδος Western. Ίσες ποσότητες πρωτεΐνης διαχωρίστηκαν με δωδεκυλικό θειικό νάτριο (SDS) πολυακρυλαμιδίου ηλεκτροφόρηση πηκτής (PAGE) και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Μετά από αποκλεισμό με αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris (TBS) /0.1% Tween 20 (TBS-T) συμπληρωμένο με 5% άπαχο ξηρό γάλα για 1 h, οι μεμβράνες επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα αραιωμένα σε ρυθμιστικό διάλυμα μπλοκαρίσματος για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου ή όλη τη νύχτα σε 4 ° C, που ακολουθείται από επώαση με υπεροξειδάση (HRP), συζευγμένης δευτερεύοντα αντισώματα (Bio-Rad, Hercules, CA) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Τέλος, τα σύμπλοκα αντιγόνου-αντισώματος ανιχνεύθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK). Συγκροτήματα ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageJ (https://rsb.info.nih.gov/ij/, ΝΙΗ, Bethesda, MD) και ομαλοποιήθηκε ως προς β-ακτίνη.

Ποσοτική Real Time-Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qRT -PCR)

Ολικά RNAs από κύτταρα εκχυλίστηκαν χρησιμοποιώντας το κιτ RNeasy® mini (Qiagen Sciences, Germantown, MD) και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε σύνθεση cDNA χρησιμοποιώντας την RevertAid ™ First Strand cDNA Synthesis Kit (Fermentas Life Sciences Ευρώπη, Βρέμη, Γερμανία). Η έκφραση των γονιδίων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας μια iQ ™ SYBR

R Πράσινη Supermix (Bio-Rad) και ένα πραγματικού χρόνου σύστημα ανίχνευσης PCR iCycler iQ5 (Bio-Rad). Χρησιμοποιήθηκαν οι ακόλουθες συνθήκες κύκλων: 95 ° C για 5 λεπτά και 30 δευτερόλεπτα, που ακολουθείται από 40 κύκλους των 15 sec στους 95 ° C και 1 λεπτό στους 60 ° C. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με μία κανονικοποιημένη μέθοδο γονιδιακής έκφρασης (ΔΔ Ct) [62] χρησιμοποιώντας το λογισμικό οπτικής Σύστημα iQ5 (Bio-Rad), και το

β-ακτίνης

χρησιμοποιήθηκε ως αναφορά για ομαλοποίηση. Οι αλληλουχίες των ζευγών εκκινητών ήταν ως εξής:

TACC3

5′-gaactggggaagatcatgga-3 ‘και 5′-ctcttcgttcttgcggtagc-3’ [63]?

β-ακτίνης

5actinINK \\ l \\ o «Ulisse, 2007 # 484» gtagc-3 ‘CGG-3i [64]. Όλες οι μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν.

Δοκιμασία Transwell Μετανάστευση

ένθετα κυτταρικής καλλιέργειας χωρίς επίχριση (8-μm πόρους, 24 φρεατίων) (Greiner Bio-One, Monroe, NC) σπάρθηκαν με 1 × 10

5 κύτταρα σε 200 μΙ μέσου χωρίς ορό. Τα χαμηλότερα θάλαμοι πληρώθηκαν με 750 μΙ πλήρους μέσου που περιέχει 10% FBS. Μετά από 16 ώρες επώασης, τα κύτταρα επί της άνω επιφάνειας του φίλτρου σκουπίζεται, και τα κύτταρα που είχαν μεταναστεύσει στην κάτω επιφάνεια του φίλτρου μονιμοποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη ή παγωμένης μεθανόλης για 5 λεπτά, βάφονται με 0.05% κρυσταλλικό ιώδες για 20 λεπτά και να ποσοτικοποιηθεί φασματοφωτομετρικά στα 490 nm.

εισβολή δοκιμασία

δοκιμασίες Invasion διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας τα κιτ QCM ECMatrix κύτταρο εισβολή δοκιμασίας (Millipore, Temecula, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Στατιστική Ανάλυση

οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση GraphPad Prism 5.0 (GraphPad, San Diego, CA). Η σημαντικότητα προσδιορίστηκε με

t-test

και μονόδρομη ανάλυση διασποράς (ANOVA), ακολουθούμενη από την δοκιμή πολλαπλής σύγκρισης Tukey. συντελεστής συσχέτισης Pearson χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί η συσχέτιση μεταξύ των δύο μεταβλητών. Ένα

p-value

μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε ως στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

TACC3 υπερεκφράζεται στον καρκίνο του τραχήλου

Για να διερευνηθεί η κλινική σημασία του TACC3 στον ανθρώπινο καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, εξετάσαμε πρώτα την έκφραση του mRNA σε TACC3 καρκίνου του τραχήλου με τη χρήση της διαθέσιμης στο κοινό Oncomine βάση δεδομένων (www.oncomine.org, Compendia Bioscience, Inc., Αηη Arbor, ΜΙ) [65] και προσδιορίστηκε ότι είναι TACC3 εντόνως εκφρασμένο σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας [66], [67]. Η υπερέκφραση του TACC3 στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας επιβεβαιώθηκε περαιτέρω σε αρκετές κυτταρικές σειρές τραχήλου της μήτρας, συμπεριλαμβανομένων των Ect1 /E6E7 (HPV-16 Ε6 /Ε7 μετασχηματισμένων εξωτραχηλικά επιθήλιο), CaSki (HPV-16), C33A (HPV-αρνητικά), HeLa (HPV-18 ) και SiHa (HPV-16) σε σύγκριση με τρία φυσιολογικό ανθρώπινο τράχηλο ιστούς. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, η έκφραση του TACC3 σε αυτές τις κυτταρικές γραμμές ήταν υψηλότερη από εκείνη της κανονικής τραχήλου ιστών. Είναι ενδιαφέρον, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην έκφραση των TACC3 μεταξύ HPV-αρνητικών C33A και άλλα κύτταρα που φέρουν HPV ογκογονίδια (Ect1 /E6E7, CaSki, HeLa και SiHa), υποδηλώνοντας ότι η HPV λοίμωξη δεν μπορεί να είναι υπεύθυνη για την υπερέκφραση του TACC3. Έχουμε, επίσης, ανοσοϊστοχημικά ανέλυσε την έκφραση της TACC3 χρήση του τραχήλου της μήτρας microarrays καρκινικού ιστού. TACC3 ήταν σχεδόν μη ανιχνεύσιμη σε φυσιολογικό τράχηλο, ενώ παρατηρήθηκε έντονη έκφραση του σε καρκινικούς ιστούς του τραχήλου της μήτρας (Σχήμα 1Β). Ωστόσο, δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση της έκφρασης TACC3 με κλινικό στάδιο ή βαθμό της ασθένειας (Εικόνα 1 C, 1 D και S1). Με βάση τα ευρήματά μας ότι η έκφραση του TACC3 είναι αυξημένη σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας σε σύγκριση με φυσιολογικό τράχηλο, αλλά δεν συνδέονται σημαντικά με την πρόοδο της νόσου, προτείνουμε ότι η αυξημένη έκφραση του TACC3 μπορεί να συμβεί στα πρώτα στάδια της ανάπτυξης του όγκου, καθώς και να είναι ουσιώδη για τη διατήρηση του τραχήλου της μήτρας ογκογένεση.

(Α) Η έκφραση της TACC3 σε Ect1 /E6E7 (HPV-απαθανάτισε εξωτραχηλικά επιθηλιακά), CaSki (HPV-16), C33A (HPV-αρνητικά), SiHa (HPV-16) και HeLa ( HPV-18) κυτταρικές γραμμές προσδιορίστηκε με ανάλυση κηλίδας Western. Τα επίπεδα έκφρασης σε σύγκριση με τρία φυσιολογικού τράχηλου ιστούς. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Η ένταση των ζωνών ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό ImageJ και ομαλοποιήθηκε ως προς β-ακτίνης. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέσα ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. (Β) Εκπρόσωπος ανοσοϊστοχημική χρώση για τραχήλου της μήτρας μικροσυστοιχιών καρκινικού ιστού. Ποσοτική ανάλυση του τραχήλου της μήτρας μικροσυστοιχιών καρκινικού ιστού έδειξε ότι η έκφραση του TACC3 είναι υψηλότερη σε καρκίνο του τραχήλου σε σχέση με το φυσιολογικό τράχηλο, αλλά η έκφραση του δεν συσχετίζεται με το στάδιο του όγκου (Γ) ή Βαθμός (D). Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέσα ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. *,

σ

& lt? 0,05? **

σ

& lt?. 0.001

Η

EGF διέγερση Προκαλεί ενδογενής TACC3 Έκφραση σε EGFR κύτταρα που εκφράζουν

προηγούμενη μελέτη μας έδειξε ότι η υπερέκφραση της TACC3 προκαλεί EMT , συνοδευόμενη από τα κάτω ρύθμιση της E-cadherin και up-ρύθμιση των σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα, ενώ η εξάντληση των TACC3 αντιστρέφει EMT [9]. Επιπλέον, η ενεργοποίηση της Akt και ERK οδών σηματοδότησης είναι απαραίτητη για TACC3 μεσολάβηση ΕΜΤ [9]. Εδώ, επιδιώξαμε να καθορίσουν τον τρόπο TACC3 συμμετέχει στην EMT. Διαφορετικές αυξητικούς παράγοντες, όπως EGF, αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού β (ΤΟΡ-β) και όμοιος με ινσουλίνη αυξητικός παράγοντας 1 (IGF-1) έχουν δειχθεί ότι επάγουν ΕΜΤ και είναι σημαντικά συνδέονται με τη διεισδυτικότητα, μετάσταση και υποτροπής του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας [ ,,,0],15], [68] – [70]. EGF έχει αποδειχθεί ότι επάγει EMT μέσω άνω ρύθμιση του σαλιγκαριού σε τραχήλου καρκινικά κύτταρα [15] και την ενεργοποίηση Akt και ERK μονοπάτια σηματοδότησης [71], [72]. Με βάση αυτές τις μελέτες, υποθέσαμε ότι TACC3 μπορεί να εμπλέκεται σε EGF-μεσολάβηση EMT. Για να ελεγχθεί η υπόθεση μας, αντιμετωπίζονται HeLa, CaSki και SiHa κυττάρων με 50 ng /ml EGF επί 24 ώρες και στη συνέχεια εξέτασαν τις μορφολογικές μεταβολές των κυττάρων και την έκφραση των δεικτών EMT. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α, κύτταρα κατεργασμένα με EGF εμφανίζονται μορφολογικά και φαινοτυπικά χαρακτηριστικά του EMT. Περιέργως, αμφότερα πρωτεΐνη (Σχήμα 2Β) και mRNA (Σχήμα 2C) επίπεδα TACC3 αυξήθηκαν σημαντικά κατά τη διέγερση EGF, που συνοδεύεται από τα κάτω ρύθμιση επιθηλιακών δείκτη Ε-καδερίνης και ανοδική ρύθμιση των μεσεγχυματικών δείκτη βιμεντίνης καθώς και επαγωγείς EMT σαλιγκάρι και Slug σε HeLa, CaSki και SiHa κύτταρα (Σχήμα 2Β). πειράματα χρονική πορεία διεξήχθησαν επίσης για να ελέγξει την επαγωγή της TACC3 μετά από διέγερση EGF. EGF προκάλεσε μια παρατεταμένη έκφραση του TACC3 σε CaSki και SiHa κύτταρα έως 48 ώρες, ενώ μια προσωρινή αύξηση στην έκφραση TACC3 βρέθηκε σε κύτταρα HeLa (Εικόνα S2). Βρήκαμε επίσης ότι το ΕΤΠ προώθησε τις μεταναστευτικές και επεμβατικές δυνατότητες των κυττάρων HeLa και SiHa (Σχήμα 2D και 2Ε), σύμφωνα με άλλες μελέτες [15], [73]. Δεν είδαμε οποιεσδήποτε σημαντικές αλλαγές στη μορφολογία των κυττάρων (Εικόνα 3Α), την έκφραση της TACC3 και άλλων δεικτών EMT (Εικόνα 3Β), ή την κινητικότητα (Εικόνα 3C) στην EGF-θεραπεία C33A κύτταρα. Αυτό είναι πιο πιθανό επειδή C33A εκφράζει πολύ χαμηλά ή μη ανιχνεύσιμα επίπεδα του EGFR (Εικόνα 3D). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι EGFR απαιτείται για EGF-μεσολάβηση επαγωγή TACC3 και μετέπειτα EMT.

(Α) του τραχήλου της μήτρας τα καρκινικά κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με EGF έδειξε μια μορφολογική αλλαγή που συνδέεται με την EMT. (Β και Γ) Και τα δύο επίπεδα του mRNA (C) του TACC3 πρωτεΐνης (Β) και up-ρύθμιση κατά την διέγερση EGF, μαζί με την ρύθμιση προς τα κάτω της E-cadherin και up-ρύθμιση της βιμεντίνης, σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Η ένταση των ζωνών ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό ImageJ και ομαλοποιήθηκε ως προς β-ακτίνης. Το επίπεδο του mRNA της TACC3 εκπροσωπήθηκε σε σχέση με την β-ακτίνη μεταγραφές. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέσα ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. κύτταρα (D και Ε) HeLa και SiHa κατεργάζεται με ή χωρίς EGF υποβλήθηκαν σε transwell μετανάστευση (D) και δοκιμασίες εισβολή Matrigel (Ε) (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι). Τα κύτταρα επωάστηκαν με ή χωρίς 50 ng /ml EGF επί 24 ώρες. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέσα ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. *,

σ

& lt? 0,05? **

σ

& lt? 0,01? ***

σ

& lt? 0.005? ****,

σ

& lt?. 0.001

Η

C33A κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με EGF δεν δείχνουν σημαντικές αλλαγές στη μορφολογία των κυττάρων (Α), την έκφραση της TACC3 και δεικτών EMT (Β ), ή την κινητικότητα (C). Τα κύτταρα επωάστηκαν με ή χωρίς 50 ng /ml EGF επί 24 ώρες και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε δοκιμασίες κηλίδος και τη μετανάστευση transwell Western. Η ένταση των ζωνών ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό ImageJ και ομαλοποιήθηκε ως προς β-ακτίνης. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέσα ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. (D) Η έκφραση του EGFR σε Ect1 /E6E7, CaSki, C33A, SiHa και HeLa κυτταρικές γραμμές προσδιορίστηκε με ανάλυση κηλίδας Western. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Η ένταση των ζωνών ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό ImageJ και ομαλοποιήθηκε ως προς β-ακτίνης. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέσοι όροι ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Ενεργοποίηση του EGFR απαιτείται για EGF-μεσολάβηση Πρόκληση TACC3

Καθώς τα δεδομένα μας δείχνουν ότι η θεραπεία EGF μπορεί να αυξήσει το έκφραση TACC3 σε κύτταρα που εκφράζουν EGFR-, έχουμε το ερώτημα κατά πόσον EGF-διαμεσολαβούμενη επαγωγή της TACC3 εξαρτάται από τη δραστικότητα κινάσης τυροσίνης του EGFR. AG1478 είναι ένας αναστολέας τυροσινικής κινάσης του EGFR, που μπλοκάρει EGFR μεσολάβηση γεγονότων σηματοδότησης [74], [75]. Η θεραπεία με 5 μΜ του AG1478 κατήργησε EGF επαγόμενη μορφολογικές αλλαγές (Σχήμα 4Α) και επαγωγή TACC3 (Σχήμα 4Β), και κατά συνέπεια, EGF-διαμεσολαβούμενη EMT ανεστάλη (Σχήμα 4Β). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η ενεργοποίηση του EGFR απαιτείται για επαγωγή TACC3 EGF μεσολάβηση.

Η αναστολή της δραστηριότητας της κινάσης τυροσίνης του EGFR κατάργησε μια μορφολογική αλλαγή που σχετίζεται με EMT (Α) και επαγωγή TACC3 EGF μεσολάβηση (Β). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με EGF ή EGF + AG1478 για 24 ώρες και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε ανάλυση κηλίδος Western. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Η ένταση των ζωνών ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό ImageJ και ομαλοποιήθηκε ως προς β-ακτίνης. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέσα ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. *,

σ

& lt?. 0.001

Η

TACC3 απαιτείται για το ΕΤΠ με τη μεσολάβηση της διαδικασίας EMT

Δεδομένου ότι τόσο TACC3 και EGF μπορεί να προωθήσει EMT μέσω της ενεργοποίησης της PI3K /Akt και ERK μονοπάτια σηματοδότησης [9], [71], [72], και TACC3 μπορεί να ρυθμίζεται προς τα πάνω κατά την EGF διέγερση (Σχήμα 2Β, 2C και S2), εμείς το ερώτημα κατά πόσον TACC3 παίζει ένα σημαντικό ρόλο σε EGF-διαμεσολαβούμενη EMT . Για να απαντηθεί αυτό το ερώτημα, θα εξαντληθεί TACC3 χρήση ενός φορέα λεντοϊού παράδοση shRNA ειδικά για TACC3 σε κύτταρα HeLa και SiHa και κατεργάζεται με ή χωρίς EGF. Όπως έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν [9], η εξάντληση του TACC3 οδήγησε στην αυξητική ρύθμιση της Ε-καδερίνης και προς τα κάτω ρύθμιση βιμεντίνης, σαλιγκάρι και Slug σε HeLa και SiHa κύτταρα σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Εικόνα 5Α). Περιέργως, η θεραπεία EGF επί TACC3 εξαντλημένο κύτταρα δεν ήταν σε θέση να επανέλθει η έκφραση του ΕΜΤ δείκτες (Σχήμα 5Α), μορφολογία κυττάρων (Σχήμα 5Β), μετανάστευση κυττάρων (Σχήμα 5C) ή ικανότητα εισβολής (Εικόνα 5D). Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι TACC3 μπορεί να διαδραματίσει καίριο ρόλο στην ΕΤΠ με τη μεσολάβηση EMT.

Σε περίπτωση απουσίας TACC3, ΕΤΠ δεν ήταν σε θέση να ρυθμίζουν δείκτες EMT (Α), μεταβάλλουν τη μορφολογία των κυττάρων (Β), ή να ενισχύσουν κυττάρων μετανάστευση και εισβολή ικανότητες (C και D). Τα κύτταρα παροδικά επιμολυσμένα με Τα siRNAs κατά τον έλεγχο (ομελέτα,

shCon

) ή TACC3 (

shTACC3

) και κατεργάζεται με ή χωρίς EGF για 24 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε κηλίδα western, μετανάστευση transwell και προσδιορισμούς εισβολής Matrigel. Η ένταση των ζωνών ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό ImageJ και ομαλοποιήθηκε ως προς β-ακτίνης. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέσα ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

*

,

p & lt?

0,01?

**, σ

& lt?. 0.001

Η

Μια θετική συσχέτιση υπάρχει μεταξύ TACC3 και σαλιγκάρι έκφραση σε καρκίνο του τραχήλου

σαλιγκάρι έχει γίνει γνωστό ότι προκαλείται από το ΕΤΠ , έτσι Σκανδάλιση EGF-μεσολάβηση EMT [15], [76]. Βρήκαμε ότι TACC3 επίσης επάγεται κατά τη διέγερση EGF (Σχήμα 2Β και 2C) και θετικά ρυθμίζει την έκφραση σαλιγκάρι [9]. Ως εκ τούτου, το ερώτημα εάν υπάρχει κάποια συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης TACC3 και σαλιγκάρι σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Είναι σημαντικό ότι, βρήκαμε ότι η έκφραση του σαλιγκάρι ανυψώθηκε σε καρκίνο του τραχήλου (Εικόνα 6Α και 6Β) και συσχετίζεται με την έκφραση TACC3 (Σχήμα 6C). Ωστόσο, η έκφραση TACC3 δεν συσχετίστηκε με την έκφραση του Slug, ένα άλλο μέλος της οικογένειας σαλιγκαριού (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(Α) Αντιπροσωπευτική ανοσοϊστοχημική χρώση TACC3 και σαλιγκάρι για τραχηλικό καρκίνο μικροσυστοιχία ιστού. Ποσοτική ανάλυση του τραχήλου της μήτρας μικροσυστοιχιών καρκινικού ιστού έδειξε ότι (Β) η έκφραση σαλιγκάρι είναι υψηλότερη σε καρκίνο του τραχήλου από ότι στα φυσιολογικά τράχηλο. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέσα ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. *,

σ

& lt? 0.001 (C) σαλιγκάρι έκφραση συσχετίζεται με την έκφραση TACC3 (r = 0,80383,

p & lt? 0,0001

).

Η

Συζήτηση

έχει υποψία ότι η απορρύθμιση (τόσο πάνω και κάτω-ρύθμιση) των TACC3 μπορεί να σχετίζεται με την ανάπτυξη των διαφόρων τύπων του ανθρώπινου καρκίνου [24], [77], [78]. Μέχρι στιγμής, είτε TACC3 δρα ως καταστολέας όγκου ή ένα ογκογονίδιο δεν έχει σαφώς καθορισμένη λόγω των διαφορών μεταξύ των μελετών [24], [79]. Εναλλακτικά, TACC3 μπορεί να έχουν διαφορετικές λειτουργίες, ανάλογα με τον τύπο του κυττάρου ή οργάνου. Σε αυτή τη μελέτη, με στόχο να διερευνήσει τη λειτουργική σημασία των TACC3 στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. του τραχήλου της μήτρας ανάλυση μικροσυστοιχιών καρκινικού ιστού μας αποκάλυψαν ότι η έκφραση της πρωτεΐνης είναι TACC3 πάνω ρυθμισμένα σε καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας πλακωδών κυττάρων, ο πιο κοινός τύπος καρκίνου του τραχήλου (περίπου 80-90%) [80]. Αυτό είναι συνεπές με τα δεδομένα που λαμβάνονται από Oncomine [67] και προτείνει δυνάμει ρόλο της ως ογκογονίδιο στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Η μελέτη μας δείχνει επίσης ότι η έκφραση του TACC3 δεν μπορεί να ρυθμιστεί από τον ιό HPV Ε6 /Ε7 ογκογονίδια, όμως, αυτή τη στιγμή, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε το ενδεχόμενο ότι η έκφραση TACC3 ρυθμίζεται από HPV ογκογονίδια ή συσχετίζονται με τους τύπους του HPV.

EGF πυροδοτεί μια σειρά γεγονότων σηματοδότησης μέσω αλληλεπίδρασης με τον υποδοχέα της, EGFR [81], και έχει αποδειχθεί ότι είναι ένας ισχυρός επαγωγέας της ΕΜΤ στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας [15]. Τα γεγονότα σηματοδότησης EGF /EGFR σχετίζεται με επιταχυνόμενη εξέλιξης του όγκου του καρκίνου του τραχήλου [15], [19], [82]. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι TACC3 ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω κατά την διέγερση EGF, και η εξάντληση των TACC3 καταργηθεί EGF-μεσολάβηση διαδικασία EMT στην τραχήλου της μήτρας τα καρκινικά κύτταρα. Επιπλέον, η επαγωγή TACC3 με EGF αναστέλλεται επιτυχώς με τον αναστολέα EGFR AG1478, υποδεικνύοντας ότι EGF-διαμεσολαβούμενη επαγωγή TACC3 και επακόλουθη EMT εξαρτώνται από την ενεργοποίηση του EGFR. Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε ότι σε κύτταρα C33A, η έκφραση TACC3 ήταν πολύ υψηλότερο από ό, τι σε κύτταρα CaSki ή SiHa, παρά την απουσία της έκφρασης EGFR. Αν και η μελέτη μας δείχνει ότι η ενεργοποίηση του EGFR μπορεί να είναι ένας από τους μηχανισμούς που είναι υπεύθυνοι για τη ρύθμιση της έκφρασης των TACC3, ανάντη σηματοδότηση η οποία ρυθμίζει την έκφραση του TACC3 δεν έχει ακόμη σαφώς καθορισμένες. Δεν έχει μέχρι στιγμής μόνο μία δημοσιεύονται αποδεικνύουν μελέτη μειωμένη σταθερότητα της πρωτεΐνης TACC3 σε Cdh1-εξαρτώμενο τρόπο [83]. TACC3 αλληλεπιδρά με έναν ενεργοποιητή της Ε3 λιγκάσης της ουμπικουϊτίνης ανάφαση-προώθηση σύμπλοκο /κυκλόσωμα (APC /C), Cdh1, και την αλληλεπίδρασή του μειώνει την σταθερότητα της πρωτεΐνης TACC3 μέσω Cdh1 μεσολάβηση ουβικιτινίωση και η υποβάθμιση κατά τη διάρκεια της προόδου του κυτταρικού κύκλου. Μια πιθανότητα που θεωρούμε είναι ότι τα κύτταρα C33A μπορούν να εκφράζουν χαμηλότερα επίπεδα Cdh1 από ό, τι άλλες κυτταρικές σειρές, διατηρώντας έτσι υψηλά επίπεδα TACC3. Είναι ενδιαφέρον ότι, σε αντίθεση με κυτταρικές σειρές HeLa SiHa, CaSki και, κύτταρα C33A δεν τρέφουν HPV γονιδιωμάτων, αλλά περιέχουν μεταλλαγμένο p53 [84] και pRb [85]. Επιπλέον, διάφορα υποδοχείς αυξητικού παράγοντα που εκφράζονται σε C33A είναι κάπως διαφορετικές από SiHa, CaSki και HeLa κύτταρα [86], [87]. Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι η έκφραση TACC3 μπορούν να ρυθμίζονται από διαφορετικές οδούς σηματοδότησης ανάλογα με τον τύπο του κυττάρου.

Υπάρχει ένα αυξανόμενο σώμα της στοιχεία που να αποδεικνύουν τη σύνδεση της TACC3 με οδούς EGFR σηματοδότησης. TACC3 έχει ταυτοποιηθεί ως αλληλεπιδρά εταίρος του μετατροπέα σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής 5 (STAT5) [39], και η έκφρασή του έχει δειχθεί ότι συσχετίζεται με Aurora Α έκφραση σε ορισμένους τύπους καρκίνων [40], [63]. Περιέργως, ο EGFR είναι επίσης συνεργάτες και συνεργάζεται με STAT5 να στοχεύσει και να αυξήσει την έκφραση του Aurora Α, και η έκφρασή του βρέθηκε να συσχετίζεται με Aurora Μια έκφραση σε μαστού και του παχέος εντέρου [81]. Ως εκ τούτου, είναι λογικό να σκεφτούμε ότι TACC3 μπορεί να σχηματίσει ένα σύμπλοκο με EGFR άμεσα ή έμμεσα μέσω της αλληλεπίδρασής της με STAT5, και με τον τρόπο αυτό να εμπλέκονται σε μονοπάτια σηματοδότησης EGFR. TACC3 ανακαλύφθηκε επίσης ως πυρηνική μεταθέτη υποδοχέα αρυλο υδρογονανθράκων (AhR) (ARNT) -interacting πρωτεΐνη [88]. ARNT ανήκει στη βασική έλικα-βρόχος-έλικα (bHLH) -Κατά-ARNT-Sim (PAS) της οικογένειας που διμερίζεται με AhR και υποξία παράγοντα α (HIF α) κατά το περιβαλλοντικό στρες [89], [90]. Ως συμπαράγοντας μεταγραφής, TACC3 είναι σε θέση να ρυθμίζουν την μεταγραφική ενεργοποίηση του HIF μέσω άμεσης αλληλεπίδρασης με ARNT [91]. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι ARNT παίζει σημαντικό ρόλο στην επιδερμική διαφοροποίηση μέσω της ρύθμισης των μονοπατιών σηματοδότησης EGFR-ΕΚΚ [92]. Έτσι, είναι δελεαστικό να υποθέσουμε μια πιθανή εμπλοκή των TACC3 στο δίκτυο του ARNT-EGFR-ΕΚΚ για τη ρύθμιση της διαφοροποίησης των κερατινοκυττάρων.

EGFR εκφράζεται σε μέτρια έως υψηλά επίπεδα σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, και η έκφρασή της σχετίζεται με κλινικό στάδιο και φτωχή πρόγνωση [93], [94]. Μεταλλάξεις σε

EGFR

έχουν δειχθεί ότι είναι σπάνιες σε υψηλής ποιότητας διηθητικού καρκίνου του τραχήλου [95]. Μέχρι στιγμής, έχουν μόνο μερικές κλινικές δοκιμές μικρής κλίμακας έχουν δοκιμαστεί για να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα των αναστολέων EGFR για τη θεραπεία του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Δυστυχώς, η μονοθεραπεία με αναστολείς του EGFR δεν ήταν αποτελεσματική σε ασθενείς με επαναλαμβανόμενα locoregionally προχωρημένο ή μεταστατικό καρκίνο του τραχήλου της μήτρας [94], [96]. Οι συνδυασμοί των αναστολέων EGFR με χημειοθεραπεία ή χημειοραδιοθεραπεία βρίσκονται υπό διερεύνηση.

Από TACC3 υπερεκφράζεται σε τραχήλου της μήτρας και άλλων καρκίνων και φαίνεται να είναι ένας βασικός παράγοντας στην /διαδικασία EMT EGF EGFR με γνώμονα, είναι πιθανό ότι η εξάντληση της TACC3 μπορεί να είναι μια καλή προσέγγιση για τη θεραπεία του καρκίνου που οδηγούνται από EGF /EGFR μονοπάτια ή ανθεκτικά σηματοδότησης σε αντι-EGFR θεραπείας. Παρά το γεγονός ότι οι μεταλλάξεις στο

EGFR

σε υψηλής ποιότητας διηθητικού καρκίνου του τραχήλου της μήτρας είναι σπάνιες, θα ήταν σημαντικό να μελετήσουμε τη σύνδεση μεταξύ της έκφρασης TACC3 και

EGFR

μεταλλάξεις. Συνολικά, τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι TACC3 παίζει σημαντικό ρόλο στην ΕΤΠ με τη μεσολάβηση EMT και μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα ελκυστικό θεραπευτικό στόχο για καρκίνους του ανθρώπου καθοδηγείται από EGF /EGFR σηματοδότηση μονοπατιών.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Η έκφραση του TACC3 σε καρκίνο του τραχήλου σε σχέση με το στάδιο της νόσου και ιστολογική διαβάθμιση. Η έκφραση των TACC3 με διαφορετικά στάδια της νόσου και τον βαθμό του όγκου παρουσιάστηκε. *,

σ

& lt? 0,05? **

σ

& lt? 0,01? ***

σ

& lt? 0.001

doi: 10.1371 /journal.pone.0070353.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

EGF διέγερση προκαλεί ενδογενή έκφραση TACC3. TACC3 προκλήθηκε από αγωγή με EGF. Τα κύτταρα επωάστηκαν με ή χωρίς 50 ng /ml και στη συνέχεια συλλέγονται στα δεικνυόμενα χρονικά σημεία για την ανάλυση κηλίδος western.