Αφηρημένο

Ιστορικό και Στόχοι

Διαδερμική ενδοαρτηριακές τεχνικές μπορούν να προσφέρουν αποτελεσματικά χημειοθεραπευτικών παραγόντων σε όγκο και να βελτιώσει την αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας. Η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να αξιολογήσει την επίδραση του καθετήρα ενδοαρτηριακές τεχνικές σχετικά με την κατανομή της doxorubicin σε σχέση με τα αιμοφόρα αγγεία σε καρκίνο του ήπατος.

Μέθοδοι

όγκους VX2 εμφυτεύθηκαν στο συκώτι των 32 κουνέλια . Τα ζώα χωρίστηκαν σε 4 ομάδες των 8 ζώων εκάστη. Ομάδα 1 (DOXO iv) τα ζώα έλαβαν δοξορουβικίνη ενδοφλέβια ένεση? Ομάδα 2 (ϋΟΧΟ ia) έλαβαν δοξορουβικίνη ηπατική ενδοαρτηριακή έγχυση? ομάδα 3 (ϋΟΧΟ ia + Ε) έλαβαν δοξορουβικίνη ηπατική ενδοαρτηριακή έγχυση ακολουθείται από εμβολισμό? ομάδα 4 (ϋΟΧΟ + L ia + Ε) έλαβε ηπατική ενδοαρτηριακή έγχυση δοξορουβικίνη αναμιγνύεται με ΠΡΙΟϋΟΕ ακολουθείται από εμβολισμό. Δέκα λεπτά ή 4 ώρες μετά την αγωγή, τα ζώα θανατώθηκαν και ελήφθησαν δείγματα όγκων. τεχνικές ανοσοφθορισμού χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθεί η κατανομή της doxorubicin σε σχέση με αιμοφόρα αγγεία.

Αποτελέσματα

δοξορουβικίνη φθορισμός διανέμονται γύρω από τα αιμοφόρα αγγεία του όγκου και μειώθηκε με την απόσταση από τα αιμοφόρα αγγεία. καρκινικά κύτταρα σε ανάγγειο και γειτονικές περιοχές δεν είχαν εκτεθεί σε ανιχνεύσιμες συγκεντρώσεις ντοξορουμπικίνης. Οι όγκοι στην ομάδα 2, 3 και 4 είχαν σημαντική αύξηση της διείσδυσης doxorubicin σύγκριση με την ομάδα 1 όγκους (

P

& lt? 0,05). Μεταξύ των τριών ομάδων των θεραπειών διακαθετήρα, απόσταση διείσδυση δοξορουβικίνη στην ομάδα 3 ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από ότι στην ομάδα 2 και 4 (

P

& lt? 0,05), και δεν βρέθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας 2 και 4 όγκους (

P

& gt? 0,05) σε 10 λεπτά. Σε αντίθεση, στις 4 ώρες και συνολικά, και οι δύο ομάδες 3 και 4 όγκοι είχαν σημαντικές αυξήσεις στην διείσδυση του φαρμάκου σε σύγκριση με την ομάδα 2 (

P

& lt? 0,05), και δεν υπάρχει σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε μεταξύ της ομάδας 3 και 4 όγκοι (

P

& gt? 0,05).

Συμπέρασμα

Διαδερμική ενδοαρτηριακή θεραπείες βελτίωση της διείσδυσης δοξορουβικίνη σε καρκίνο του ήπατος? Παρ ‘όλα αυτά η επίδρασή τους στην κατανομή του φαρμάκου είναι κάπως περιορισμένη

Παράθεση:. Liang Β, Xiong F, Wu Η, Wang Υ, Dong Χ, Cheng S, et al. (2013) Επίδραση της Διαδερμική Ενδοαρτηριακή Θεραπείες για τη διανομή των δοξορουβικίνη σε καρκίνο του ήπατος σε ένα μοντέλο κουνελιού. PLoS ONE 8 (10): e76388. doi: 10.1371 /journal.pone.0076388

Επιμέλεια: Gayle Ε Woloschak, Northwestern University Feinberg School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 21 του Μάρτη 2013? Αποδεκτές: 30 Αυγούστου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 8 Οκτωβρίου 2013

Copyright: © 2013 Liang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορήγηση από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 81101134). Οι χρηματοδότες είχαν ένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του ήπατος παραμένει μια σημαντική πρόκληση για την υγεία σε όλο τον κόσμο. Αν και εκτομή, μεταμόσχευση ήπατος και κατάλυσης είναι θεραπευτική θεραπείες, μόνο μια μικρή μειοψηφία των ασθενών είναι υποψήφιοι για αυτές τις θεραπείες [1]. Οι καθετήρα ενδοαρτηριακή θεραπείες που χρησιμοποιούνται ευρέως παρηγορητική θεραπεία για ανεγχείρητο πρωτογενή και μεταστατικό καρκίνο του ήπατος [2] και έχουν παρουσιάσει ενθαρρυντικά αποτελέσματα από την άποψη της επιβίωσης [3], [4]. Το σκεπτικό για ενδοαρτηριακή θεραπείες πηγάζει από την παρατήρηση ότι η παροχή αίματος των προηγμένων καρκίνων του ήπατος εξαρτάται κυρίως από την ηπατική αρτηρία [5]. Ηπατική έγχυση χημειοθεραπευτικών αρτηρία, που ορίζεται ως ένεση της χημειοθεραπείας με ή χωρίς ΠΡΙΟϋΟΕ στην ηπατική αρτηρία μέσω επιλεκτικής τοποθέτησης καθετήρα, είναι ένα σημαντικό συστατικό των θεραπειών καθετήρα για τον καρκίνο του ήπατος [6]. Αν και ο καρκίνος του ήπατος είναι ανθεκτικό σε συστηματική χημειοθεραπεία, ο όγκος έχει αποδειχθεί να ανταποκριθεί σε κάποιο βαθμό στην ηπατική αρτηρία χημειοθεραπευτικό έγχυση. Η ένεση χημειοθεραπευτικών φαρμάκων προκαλεί κυτταροτοξική δράση [7], και όταν συνδυάζεται με την ακόλουθη εμβολισμό του σκάφους όγκου τροφοδοσίας, δηλαδή καθετήρα αρτηριακής χημειοεμβολισμός (TACE), έχει ως αποτέλεσμα σημαντική νέκρωση του όγκου [8]. Η αυξημένη ευαισθησία του καρκίνου του ήπατος σε χημειοθεραπεία υποθετικώς αποδίδεται στην αποτελεσματική παροχή της υψηλής συγκέντρωσης δόση των χημειοθεραπευτικών φαρμάκων στον όγκο.

Ωστόσο, η αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας για τον καρκίνο του ήπατος παραμένει αμφιλεγόμενη. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι η χημειοθεραπεία χωρίς εμβολισμό φάνηκε να επιτευχθεί ένα χαμηλότερο ποσοστό νέκρωσης όγκου σε σύγκριση με το TACE [9], και ότι η προσθήκη χημειοθεραπείας προς εμβολισμού δεν είχε ως αποτέλεσμα καλύτερη αποτελεσματικότητα από τον εμβολισμό και μόνο [10]. Είναι γνωστό ότι για τη μεγιστοποίηση των κυτταροτοξικών επιδράσεων χημειοθεραπευτικών παραγόντων πρέπει να διεισδύσει βαθιά να φτάσει σε όλα τα καρκινικά κύτταρα σε μια θεραπευτικά αποτελεσματική συγκέντρωση. πρότεινε Προηγούμενη δεδομένα ότι όταν χορηγείται υποδορίως ή ενδοφλεβίως αντικαρκινικό φάρμακο που σχηματίζονται κλίσεις εντός του όγκου, με υψηλές συγκεντρώσεις στην περιφέρεια και χαμηλές συγκεντρώσεις στο κέντρο του όγκου [11], [12]. Παρά το γεγονός ότι η συγκέντρωση του φαρμάκου στον ιστό του όγκου έχει δείξει ότι είναι πολύ υψηλότερη από ότι στο φυσιολογικό ηπατικό παρέγχυμα [13], [14], αντικαρκινικό φάρμακο παραδίδεται μέσω μιας ενδοαρτηριακή οδό βρισκόταν κυρίως γύρω από τα εμβολίζεται σκάφη σε καρκίνους του ήπατος που υποβάλλονται σε TACE [15 ], [16]. Η περιορισμένη κατανομή των αντικαρκινικών φαρμάκων σε όγκους μπορεί να ευθύνεται για την εξασθενημένη αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας. Η εξέταση της κατανομής του φαρμάκου για τον καρκίνο του ήπατος μετά καθετήρα ενδοαρτηριακή θεραπείες θα μπορούσε να βοηθήσει να κατανοήσουν τη θεραπευτική δράση των χημειοθεραπευτικών έγχυσης και να αναπτύξουν στρατηγικές για να τροποποιήσει τη διανομή του φαρμάκου.

Η δοξορουβικίνη είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο και μόνο χημειοθεραπευτικό παράγοντα στη θεραπεία καθετήρα για το συκώτι Καρκίνος. Η έγχυση του φαρμάκου εμφάνισαν ευνοϊκές ποσοστό απόκρισης και την επιβίωση σε επιλεγμένους υποψηφίους [17]. Επιπλέον, το φάρμακο είναι επιδεκτική σε άμεση ανίχνευση με μικροσκοπία φθορισμού λόγω της φθορίζουσας ιδιοκτησίας της. Η δοξορουβικίνη έχει χρησιμοποιηθεί για τη μελέτη της διανομής του φαρμάκου σε σχέση με αιμοφόρα αγγεία του όγκου, που αναγνωρίζονται από το CD31 δείκτη ενδοθηλιακών κυττάρων, σε ζωικά και ανθρώπινους όγκους [11], [12]. Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήσαμε τον φθορισμό της doxorubicin να μελετήσει την επίδραση των τεχνικών καθετήρα για τη διανομή του φαρμάκου σε ένα μοντέλο VX2 όγκου του καρκίνου του ήπατος.

Υλικά και Μέθοδοι

Πειραματικός σχεδιασμός

Ένα σύνολο 32 ενηλίκων Λευκά κουνέλια Νέας Ζηλανδίας που ζυγίζουν 2,5-3,0 κιλά χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. όγκοι VX2 εμβολιάστηκαν στα ήπατα των ζώων. Δεκαεπτά μέρες μετά τον εμβολιασμό του όγκου, κάθε ζώο υποβλήθηκε σε μαγνητική τομογραφία (MR) για την ανίχνευση του σχηματισμού όγκων. Μία ημέρα μετά την απεικόνιση MR, τα κουνέλια που φέρουν όγκο χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες των 8 ζώων εκάστη και υποβλήθηκαν σε αγωγή. Στην ομάδα 1 (DOXO iv), τα ζώα έλαβαν δοξορουβικίνη ενδοφλέβια ένεση. Στην ομάδα 2 (ϋΟΧΟ ia), τα ζώα υποβλήθηκαν σε δοξορουβικίνη ηπατική ενδοαρτηριακή έγχυση. Στην ομάδα 3 (ϋΟΧΟ ia + Ε), τα ζώα υποβλήθηκαν σε ηπατική ενδοαρτηριακή έγχυση ντοξορουμπικίνης που ακολουθείται από εμβολισμό με αγγειακές παράγοντα απόφραξης. Στην ομάδα 4 (ϋΟΧΟ + L ia + Ε), τα ζώα έλαβαν ηπατική ενδοαρτηριακή έγχυση της δοξορουβικίνης αναμιγνύεται με ΠΡΙΟϋΟΕ που ακολουθείται από την εμβολή. Δέκα λεπτά ή 4 ώρες μετά την παρεμβατική θεραπεία, τέσσερα ζώα σε κάθε ομάδα θυσιάστηκαν, αντίστοιχα, και τα δείγματα όγκων συλλέχθηκαν για ανοσοφθορισμό.

ενοφθαλμισμό των νεοπλασματικών

Τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τον Οδηγό για η φροντίδα και χρήση των πειραματόζωων της Huazhong Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας, όπως εγκρίθηκε από την Επιτροπή Φροντίδας ζώων της επαρχίας Hubei, Κίνα. Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν με μία ενδοφλέβια ένεση πεντοβαρβιτάλης νατρίου (30 mg /kg σωματικού βάρους), και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία. VX2 όγκος είναι ένα εξαιρετικά κακοήθης καρκίνωμα προέρχεται από έναν ιό του θηλώματος επαγόμενη από κουνέλια. Ο όγκος μπορεί να αναπτυχθεί στο ήπαρ των κουνελιών και δείχνουν κάποιες βιολογικές ομοιότητες με την ανθρώπινη ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, το οποίο έχει γίνει ένα βέλτιστο μοντέλο όγκου του ήπατος σε ζώα για την ανάπτυξη του καθετήρα κατευθυνόμενης θεραπείες [18]. Το στέλεχος VX2 διατηρήθηκε με διαδοχική μεταμόσχευση στο οπίσθιο άκρο των κουνελιών φορέα. Για τον εμβολιασμό του όγκου, ο όγκος πρώτα συλλέγεται από το κουνέλι φορέα και κιμά σε 1-mm

3 σε διάλυμα Hanks. Στη συνέχεια, το ήπαρ του λήπτη κουνέλι εξετέθη μέσω ενός subxiphoid κοιλιακή τομή, και τα θραύσματα του όγκου ενσωματωμένο 10-mm βαθιά μέσα στο αριστερό συκώτι λοβού. Ένα μικρό κομμάτι σπόγγου ζελατίνης τοποθετήθηκε στην πληγή για να ληφθεί αιμόσταση και το κοιλιακό τοίχωμα κλείστηκε μετά.

απεικόνισης MR

απεικόνιση MR διεξήχθη με τη χρήση μίας μονάδας 1.5-T (Magnetom Avanto ? Siemens Medical Solutions, Erlangen, Γερμανία). Τα κουνέλια απεικονίστηκαν σε ύπτια θέση με το συνδυασμό ενός σώματος έξι καναλιών πηνίο συγχρονισμένης συστοιχίας και της σπονδυλικής στήλης δύο καναλιών πηνίο συγχρονισμένης συστοιχίας. Όλα τα ζώα υποβλήθηκαν σε Τ2-turbo ακολουθία spin-echo με τις ακόλουθες παραμέτρους απεικόνισης: TR /TE = 3700/87 ms, πάχος τομής 4-mm, 15% κενό διασταύρωση, 168-Hz /pixel BW, 200 × 200 mm

2 οπτικό πεδίο, 320 × 320 πλέγμα, παράγοντας turbo = 11, κατά μέσο όρο = 2.

Διαδερμική τεχνικές

διαδικασία Διαδερμική πραγματοποιήθηκε στα ζώα υπό την καθοδήγηση του ψηφιακή αγγειογραφία αφαίρεσης (Άλτις Zee ακυρώνοντας, η Siemens Medical Solutions, Muenchen, Γερμανία). Εν συντομία, η δεξιά μηριαία αρτηρία προσεγγιστεί μέσω ανοικτού puncturation με μία βελόνα 18-gauge και καθετηριάστηκε με ένα 4-F αγγειακό περίβλημα (Terumo, Tokyo, Japan). Ένα 4-F Cobra σπλαχνικού καθετήρα (Terumo) χρησιμοποιήθηκε για πρώτη φορά για να επιλέξετε τον άξονα από κοιλιοκάκη, και στη συνέχεια ένα σύστημα ομοαξονικού καθετήρα 2,7-F (Terumo) προωθήθηκε ομοαξονικά μέσω του καθετήρα 4-F για τη σωστή ηπατική. Αφού το εμβολιάστηκε όγκος επιβεβαιώθηκε να λάβουν την παροχή αίματος από την ηπατική αρτηρία με την ψηφιακή αφαιρετική αγγειογραφία της ορθής ηπατικής αρτηρίας, μετέπειτα επεξεργασίες διεξήχθησαν. Η δοξορουβικίνη δόθηκε ενδοαρτηριακά ή ενδοφλεβίως σε δόση των 8 mg /kg να διευκολυνθεί η ανίχνευση και τον ποσοτικό προσδιορισμό του φαρμάκου auto-φθορισμού. Για υλικό προετοιμασίας, 8-mg /kg σκόνη doxorubicin διαλύθηκε σε 1-mL αλατούχο νερό ή να αναμιχθεί με 0,4-mL ΠΡΙΟϋΟΕ, και PVA σωματίδια 150-250 μm σε μέγεθος (PVA, Cook, Bloomington, USA), συσκευασμένο ως φιαλίδιο ξηρών σωματιδίων, ανασυστάθηκαν με 10 mL μέσα αντίθεσης. Τα ζώα στην ομάδα 2 έλαβε την ηπατική ενδοαρτηριακή έγχυση του διαλύματος ντοξορουμπικίνης. Ομάδα 3 ζώα έλαβαν την έγχυση διαλύματος ντοξορουμπικίνης που ακολουθείται από εμβολισμό με 0,2-0,4 μίγμα mL PVA. Ομάδα 4 ζώα έλαβαν έγχυση του μίγματος δοξορουβικίνης /ΠΡΙΟϋΟΕ, ακολουθούμενο από την εμβολισμό PVA. Το τελικό σημείο εμβολισμού για τις ομάδες 3 και 4 ήταν η πλήρης στάση της ορθόδρομη ροή του αίματος. Για την ομάδα 1 ζώα, λύση δοξορουβικίνη εγχύθηκε μέσω της φλέβας του αυτιού, χωρίς επεμβατική διαδικασία.

ανοσοφθορισμού και την εικόνα ανάλυσης

Τα ζώα είναι ανθρωπίνως θυσιάστηκαν 10 λεπτά ή 4 ώρες μετά τη χορήγηση doxorubicin με ενδοφλέβια χορήγηση υπερδοσολογίας του νατρίου πεντοβαρβιτάλη (100 mg /kg σωματικού βάρους). Η επιλογή των δύο χρονικών σημείων θυσία βασίστηκε στην προηγούμενη παρατήρηση ότι η δοξορουβικίνη μπορεί να μεταφερθεί αποτελεσματικά σε καρκινικά κύτταρα μέσω των αιμοφόρων αγγείων σε έναν χρόνο κύκλου 10 λεπτά όταν χρησιμοποιείται μόνο του [19], και ότι, όταν αναμιγνύεται με ΠΡΙΟϋΟΕ, όλα δοξορουβικίνη μπορεί εκλούονται από το γαλάκτωμα ΠΡΙΟϋΟΕ σε λιγότερο από 4 ώρες [20]. Τα δείγματα που περιελάμβαναν τη μεγαλύτερη διάμετρο του όγκου συλλέχθηκαν και στη συνέχεια ενσωματώνεται αμέσως σε βέλτιστη ένωση θερμοκρασίας κοπής και καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο. Τομές κρυοστάτη 10 μm πάχους κόπηκαν στη μεγαλύτερη διάμετρο του όγκου, τοποθετήθηκαν σε γυάλινες πλάκες, και αφέθηκε να στεγνώσει στον αέρα.

δοξορουβικίνη auto-φθορισμός ανιχνεύθηκε με τη χρήση της Nikon TE2000 ανεστραμμένο μικροσκόπιο φθορισμού 465 έως 495 nm διέγερση και 510 – 555 φίλτρα εκπομπής nm, και εικόνες του τμήματος ιστού συνελήφθησαν με μια φωτογραφική μηχανή Nikon DS-U3. Τα αιμοφόρα αγγεία αναγνωρίστηκαν από την έκφραση της πρωτεΐνης μεμβράνης CD31 σε ενδοθηλιακά κύτταρα. Μετά απεικόνισης δοξορουβικίνη, τομές ιστών μονιμοποιήθηκαν σε παραφορμαλδεΰδη για 10 λεπτά, πλύθηκαν σε PBS, και αποκλείστηκαν με ορό εμβρύου μόσχου (αραίωση, 1:20? Roche) για 20 λεπτά για την αποτροπή μη ειδικής σύνδεσης αντισώματος. Τα δείγματα επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με αντι-ανθρώπινα μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού CD31 (αραίωση 1:20? Dako), μετά πλύθηκαν σε PBS και χρωματίστηκαν με δευτερεύον αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού FITC (αραίωση, δύο παρα δέκα? Jakson) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, μετά από αυτό χρωματίστηκαν με ϋΑΡΙ πυρηνική βαφή για 10 λεπτά. Τέλος, οι τομές συγκάλυψη έκανε με ένα μέσο στερέωσης που περιέχει αντι-φλουορεσκεΐνη αποσβέστη. Αντι-CD31 φθορισμού αντιπροσωπεύουν ενδοθηλιακών κυττάρων ανιχνεύθηκε με 510 έως 560 nm διέγερση και 590 φίλτρα εκπομπής nm, και DAPI-βάφονται εντοπισμό πυρηνικό DNA ανιχνεύθηκε με φίλτρα εκπομπής 330-380 nm διέγερση και 420 nm.

Composite εικόνες της δοξορουβικίνης και CD31 φθορισμού παρήχθησαν χρησιμοποιώντας Image Pro Plus λογισμικό. Για εικόνες CD31, μικροαγγειακή πυκνότητα (MCD) αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο μέτρησης που θεσπίστηκε με Weidner et al [21]. Τα τμήματα των όγκων πρώτον σαρωθεί σε χαμηλή πεδίο μεγέθυνση (χ 40 μεγέθυνση, 6,82 mm

2) για να βρείτε τις περιοχές που έδειξε την πιο έντονη αγγείωση και στη συνέχεια ατομική μικροαγγεία μετρήθηκαν σε τρία διαφορετικά πεδία υψηλής μεγέθυνσης (Χ 200 μεγέθυνση, 0,27 mm

2). Το τελικό MVD ήταν η μέση τιμή των μετρήσεων από τα τρία πεδία. Για την αξιολόγηση της δοξορουβικίνης, τρία διαφορετικά πεδία υψηλής μεγέθυνσης (Χ 100 μεγέθυνση, 1,09 mm

2) με επιλέχθηκαν υψηλό φθορισμό δοξορουβικίνη. Περιοχές νέκρωσης και χρώση τεχνούργημα αποκλείστηκαν.

Η διείσδυση της doxorubicin μετρήθηκε χρησιμοποιώντας την Image Pro Plus λογισμικό εφαρμογών και προσαρμοσμένες αλγορίθμων. Εν συντομία, μια εικόνα δοξορουβικίνη και μια ξεχωριστή εικόνα των αιμοφόρων αγγείων του ίδιου τομέα ήταν πρώτον συλληφθεί. Για να γίνει η εικόνα του αιμοφόρου αγγείου το ίδιο μέγεθος με την εικόνα δοξορουβικίνη, ένα επιπλέον αντίγραφο της εικόνας doxorubicin έγινε, και επικαλύφθηκε πάνω από την εικόνα του αιμοφόρου αγγείου. Η εικόνα αιμοφόρο αγγείο κατόπιν καλυμμένη, έτσι ώστε όλα τα αιμοφόρα αγγεία μπορούν να ταυτοποιηθούν και να μετατραπεί σε λευκό χρώμα με ένταση 255. Τα υπόλοιπα εικονοστοιχεία σε αυτή την εικόνα είχε μια ένταση 0. Αυτό ονομάζεται δυαδική εικόνα. Κάθε pixel που δεν ήταν μηδέν θεωρήθηκε ως ένα αιμοφόρο αγγείο. Η εικόνα στη συνέχεια μετετράπη και μια νέα εικόνα σχηματίσθηκε με τη χρήση της λειτουργίας του φίλτρου απόσταση. Σε αυτήν την εικόνα, το γκρι τιμή κάθε σημείου αντιπροσώπευε την απόσταση από το σημείο στο πλησιέστερο σκάφος. Η εικόνα δοξορουβικίνη επίσης αλλάξει με την δυαδική εικόνα στην οποία κάθε δοξορουβικίνη θετικό σημείο παρουσιάστηκε ως το κέντρο του. Με τη χρήση της ελάχιστης λειτουργία του λογισμικού, μετρήθηκε η απόσταση κάθε doxorubicin κηλίδα από το πλησιέστερο αιμοφόρο αγγείο. Τα δεδομένα συνοψίζονται στο μέσο όρο έξω την δοξορουβικίνη απόσταση διείσδυση του γηπέδου. Η μέση απόσταση διείσδυσης των τριών πεδίων ελήφθη ως το τελικό απόσταση διείσδυσης doxorubicin για κάθε ζώο [22]. Η καταμέτρηση της doxorubicin ειδικές φθορίζουσες σημείο σε κάθε τομέα ήταν υπολογίζονται ταυτόχρονα.

Η στατιστική ανάλυση

Τα στοιχεία συνοψίζονται ως μέση τιμή ± τυπική απόκλιση (SD). Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης ακολουθούμενη από LSD-

t

δοκιμής.

P

& lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

VX2 όγκου και τη διαδικασία καθετήρα

VX2 όγκου αναπτύχθηκε επιτυχώς στο αριστερό του ήπατος λοβού της κάθε κουνέλι (Σχήμα 1). Οι όγκοι κυμαίνονταν από 1.16-2.12 cm σε διάμετρο. Οι μέσες διάμετροι των ομάδων 1, 2, 3, και 4 ήταν 1,53 cm ± 0,27, 1,58 ± 0,30 cm, 1,63 cm ± 0,25, και 1,49 cm ± 0,20, αντίστοιχα, χωρίς σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων (

P

= 0,679). διαδικασίες καθετήρα πραγματοποιήθηκαν με επιτυχία σε όλα τα ζώα (Σχήμα 2).

Τ2-MR εικόνα δείχνει μια υπερ-ένταση VX2 όγκου στο λοβό αριστερά ήπαρ (βέλος).

Η

Επιλεκτική αριστερή αγγειογραφία ηπατική αρτηρία παρουσιάζει ένα υπεραγγειακών όγκου (βέλος) που λαμβάνουν την παροχή αίματος από την αριστερή ηπατική αρτηρία (βέλος).

η

μικροαγγειακή πυκνότητα

στις τομές κρυοστάτη, μικροαγγείων αποδείχθηκε ως πράσινος φθορισμός του διαχωρισμένου ξεχωριστού ενδοθηλιακών κυττάρων ή συνδεδεμένο σύμπλεγμα κυττάρων (Σχήμα 3). Τα μικροαγγεία είχαν ετερογενή τρόπο εντός του όγκου VX2, και η πιο έντονη αγγείωση παρατηρήθηκε στην άκρη του όγκου. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην MVD μεταξύ των τεσσάρων ομάδων (

P

= 0,543) (Πίνακας 1).

Μικροφωτογραφία μίας αντιπροσωπευτικής όγκου VX2 δείχνει πολυάριθμα αιμοφόρα αγγεία (πράσινο, που αναγνωρίζεται από CD31) στην άκρη του όγκου.

η

διανομής δοξορουβικίνη και η σχέση της με μικροαγγείων

η δοξορουβικίνη φθορισμό κόκκινο στα τμήματα του όγκου. Ο φθορισμός φάρμακο ειδικό ανιχνεύτηκε κυρίως σε πυρήνες κυττάρων αν και προήλθε από όλους τους ιστούς του όγκου (Σχήμα 4). Σε γενικές γραμμές, η δοξορουβικίνη διανέμονται γύρω από τα αιμοφόρα αγγεία του όγκου και μειώθηκε με την απόσταση από τα αιμοφόρα αγγεία (Σχήμα 5). Η ένταση φθορισμού της δοξορουβικίνης σάπιων επίσης με απόσταση από τα αιμοφόρα αγγεία. Σημειώθηκε ότι ακόμη και στις ομάδες που έλαβαν καθετήρα πολλές περιοχές των καρκινικών κυττάρων δεν είχαν εκτεθεί σε ανιχνεύσιμες συγκεντρώσεις ντοξορουμπικίνης. Αυτά τα καρκινικά κύτταρα που βρίσκονται κυρίως σε άσηπτη και τις γειτονικές περιοχές. Επιπλέον, υπήρχαν λίγες CD31-θετικά μικροαγγείων χωρίς γύρω ανιχνεύσιμη δοξορουβικίνη.

Μικροφωτογραφία του αντιπροσωπευτικού όγκου VX2 δείχνει δοξορουβικίνη auto-φθορισμού (κόκκινο) στην άκρη του όγκου.

Η

αιματοξυλίνη-ηωσίνη (Α), ανοσοφθορισμού (Β, πυρήνας? C, δοξορουβικίνη? D, τα αιμοφόρα αγγεία) και σύνθετα (Ε, αρχική σύνθετη? F, τροποποιημένες composite) εικόνες δείχνουν την κατανομή της δοξορουβικίνης (κόκκινο) σε σχέση με όγκο αιμοφόρα αγγεία (πράσινο).

Η

Ο Πίνακας 1 και το Σχήμα 6 συνοψίζει την απόσταση διείσδυσης δοξορουβικίνη σε τέσσερις ομάδες ανάλογα με το χρόνο της θυσίας. Οι όγκοι στην ομάδα 2, 3 και 4 είχαν μία σημαντική αύξηση στην διείσδυση δοξορουβικίνη σε σύγκριση με την ομάδα 1 όγκων σε 10 λεπτά (

P

= 0.032, 0.001 και 0.046, αντίστοιχα), 4 ώρες (

P

= 0,046,

P

& lt? 0.001 και

P

& lt? 0.001, αντίστοιχα) και στο σύνολο (

P

= 0,09,

P

& lt? 0.001 και

P

& lt? 0.001, αντίστοιχα). Μεταξύ των τριών ομάδων των θεραπειών διακαθετήρα, ομάδα 3 όγκοι εμφάνισαν τη μεγαλύτερη απόσταση διείσδυσης δοξορουβικίνη, με σημαντική διαφορά σε σχέση με την ομάδα 2 και 4 (

P

= 0,010 και 0,007, αντίστοιχα), και δεν βρέθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας 2 και 4 όγκους (

P

= 0,846) σε 10 λεπτά. Σε αντίθεση, στις 4 ώρες και στο σύνολο, τόσο η ομάδα 3 και 4 όγκοι είχαν σημαντική αύξηση στην διείσδυση του φαρμάκου σε σύγκριση με την ομάδα 2 (

P

= 0.004 και 0.001, στις 4 ώρες?

P

& lt? 0.001 και

P

= 0.023, συνολικά, αντίστοιχα), και καμία σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε μεταξύ της ομάδας 3 και 4 όγκους (

P

= 0,454, σε 4 ώρες?

P

= 0.138, συνολικά, αντίστοιχα).

Εικόνες δείχνει τη διαφορά στη διείσδυση doxorubicin μεταξύ της ομάδας 1 (Α, Ε), 2 (Β, F), 3 (C, G) και 4 (D, H) όγκων σε 10 λεπτά (Α-Δ) και 4 ωρών (Ε-Η) χρονικό σημείο.

Η

Ο αριθμός των δοξορουβικίνη-συγκεκριμένο σημείο φθορισμού μεταξύ των τεσσάρων ομάδων έδειξε μια τάση αλλαγής παρόμοια με την τάση που παρατηρείται σε δοξορουβικίνη απόσταση διείσδυσης (Πίνακας 1). Οι μετρήσεις του φθορισμού doxorubicin στην ομάδα 2, 3 και 4 ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από εκείνη στην ομάδα 1 (

P

& lt? 0,05). Μεταξύ των τριών ομάδων των θεραπειών διακαθετήρα, υπήρξε μια αύξηση στην φθορίζουσα φάρμακο μετρούν μεταξύ της ομάδας 2 και 3 και μεταξύ 2 και 4, αν και το τελευταίο δεν ήταν στατιστικά σημαντική στα 10 λεπτά (

P

= 0,568). Δεν βρέθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας 3 και 4 σε φάρμακο φθορισμού καταμέτρηση σε 4 ώρες (

P

= 0.170) και στο σύνολο (

P

= 0.286), αν και η διαφορά ήταν σημαντική σε 10 λεπτά (

P

= 0,001).

Συζήτηση

είναι γνωστό ότι για να είναι πιο αποτελεσματική χημειοθεραπευτικούς παράγοντες πρέπει να εισχωρούν βαθιά για να φτάσει όλα τα καρκινικά κύτταρα σε μια θεραπευτικά αποτελεσματική συγκέντρωση . Οι στόχοι της ηπατικής έγχυση χημειοθεραπευτικών αρτηρία, με ή χωρίς επακόλουθη εμβολισμού, είναι να μεγιστοποιηθούν τα κυτταροτοξικά αποτελέσματα των χημειοθεραπευτικών παραγόντων και την ελαχιστοποίηση συστηματική τοξικότητα. Αν και προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι οι διακαθετηριακή ενδοαρτηριακή τεχνικές αυξάνουν τη συγκέντρωση εντός του όγκου του φαρμάκου [11], [12] και παρατείνει τον χρόνο επαφής του φαρμάκου με κύτταρα όγκου [23], η οποία μπορεί εν μέρει ευθύνονται για τη βελτιωμένη χημειοθεραπευτική αποτελεσματικότητα, ο ρόλος αυτών των τεχνικών για ναρκωτικά διανομής παραμένει σε μεγάλο βαθμό απροσδιόριστη. Τα δεδομένα εδώ δείχνουν ότι καθετήρα ενδοαρτηριακές τεχνικές βελτιωθεί η κατανομή της doxorubicin σε καρκίνο του ήπατος.

Αυτή η μελέτη δείχνει ότι καθετήρα ενδοαρτηριακές τεχνικές συμβάλλει στη διείσδυση της doxorubicin. Πιστεύεται ευρέως ότι η παράδοση των χημειοθεραπευτικών παραγόντων σε καρκινικά κύτταρα περιλαμβάνει κλασικά τρεις διαδικασίες: μεταφορά μέσω των αιμοφόρων αγγείων, των μεταφορών από τα αιμοφόρα αγγεία στον όγκο ενδιάμεσου χώρου, και των μεταφορών μέσω ενδιάμεσου χώρου [24]. Οι διαδικασίες αυτές προσδιορίζονται με πολλαπλούς παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων των φυσικοχημικών ιδιοτήτων του φαρμάκου και τις βιολογικές ιδιότητες ενός όγκου. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι η transvascular μεταφοράς φαρμάκου επηρεάζεται κυρίως από την πίεση μικροαγγειακές και της ροής του αίματος σε όγκο, και ότι η μεταφορά μέσα από διάμεσο του φαρμάκου χαμηλού μοριακού βάρους, όπως η δοξορουβικίνη επηρεάζεται κυρίως από τη διάχυση η οποία εξαρτάται από την ικανότητα διαχύσεως και συγκέντρωση βαθμίδα ναρκωτικών [24], [25]. Όπως φαίνεται στα αποτελέσματα μας, η απόσταση διείσδυσης της φθορισμός doxorubicin ήταν σημαντικά μεγαλύτερη στις τρεις ομάδες των θεραπειών καθετήρα από εκείνο στο φλεβικής ομάδα ένεση δοξορουβικίνη. Το εύρημα αυτό πιθανώς οφείλεται στις βελτιωμένες διαδικασίες μεταφοράς του φαρμάκου που παράγεται από καθετήρα ενδοαρτηριακή παράδοσης. Πρώτον, η έγχυση του φαρμάκου μέσω ενός ενδοαρτηριακώς εισάγεται καθετήρας μπορεί να παραδώσει άμεσα τα ναρκωτικά μέσα στις αρτηρίες του όγκου-σίτιση, διευκολύνοντας τη μεταφορά μέσω των αιμοφόρων αγγείων. Δεύτερον, η έγχυση αυξάνει τη ροή του αίματος θεωρητικά σε ιστούς όγκου, η οποία μπορεί να βελτιώσει την transvascular μεταφοράς φαρμάκου. Τέλος, η ενδοαρτηριακή παράδοση της υψηλής συγκέντρωσης δόσεις χημειοθεραπείας αυξάνει την κλίση συγκέντρωσης, η οποία μπορεί να ενισχύσει τη μεταφορά ναρκωτικών μέσω διάμεσου όγκου.

Επιπλέον, η μελέτη μας προτείνει ότι καθετήρα ενδοαρτηριακή εμβολισμό μετά από ενδοαρτηριακή έγχυση δοξορουβικίνη βοηθά την περαιτέρω διείσδυση των ναρκωτικών . Σε ένα προηγούμενο άρθρο ανασκόπησης, Geschwind [26] σκέφτηκαν ότι ο εμβολισμός των σωματιδίων των αγγείων του όγκου-διατροφή θα μπορούσε να επιτρέψει φάρμακο να διεισδύσει σε όγκο με μεγαλύτερη ευκολία. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι και οι δύο ομάδες 3 και την ομάδα 4 όγκοι είχαν μεγαλύτερη μέση απόσταση δοξορουβικίνη διείσδυση σε σύγκριση με την ομάδα 2, τα οποία υποστηρίζουν την υπόθεση. Έχει δειχθεί ότι μια μεγαλύτερη πίεση μικροαγγειακή ή /και ένα κάτω πίεση ενδιάμεσου υγρού μπορεί να αυξήσει transvascular διήθηση ρευστό, και με τη σειρά, να οδηγήσει σε ενίσχυση της transvascular μεταφορά φαρμάκου σε όγκο [24]. Πιστεύουμε ότι η σημαντική αύξηση της απόστασης διείσδυσης doxorubicin στην ομάδα 3 και 4 όγκους πιθανώς να είναι το αποτέλεσμα της αύξησης της διαφοράς πίεσης που δημιουργείται από επακόλουθη εμβολισμό των καρκινικών αγγείων-σίτιση.

Ένα ενδιαφέρον εύρημα ήταν ότι η απόσταση διείσδυσης δοξορουβικίνη σε ομάδα 4 όγκους ήταν σημαντικά μικρότερη από ότι στην ομάδα 3 στα 10 λεπτά, αλλά ήταν ελαφρώς μεγαλύτερη από την ομάδα 3 στις 4 ώρες. Αυτό μπορεί να οφείλεται στις διαφορετικές χρονικά διαστήματα μεταξύ χορήγησης φαρμάκων και νεκροψία. Προηγούμενες πειραματικές μελέτες έχουν δείξει ότι ΠΡΙΟϋΟΕ, ως φορέας των αντικαρκινικών φαρμάκων, μπορεί να αυξήσει τη συγκέντρωση του φαρμάκου εντός του όγκου [27], αλλά ότι το υλικό συγκρατείται κυρίως σε microarterioles και φλεβίδια μετά ενδοαρτηριακή έγχυση, ως αποτέλεσμα της λιποδιαλυτότητα του [28]. Lewis και συνεργάτες [20] διεξάγεται πρόσφατα πείραμα αποδέσμευσης δοξορουβικίνης in vitro χρησιμοποιώντας μία συσκευή Τ-κυττάρων και διαπίστωσε ότι το φάρμακο εκλούεται από μίγμα δοξορουβικίνη /ΠΡΙΟϋΟΕ σε λιγότερο από 4 ώρες, με χρόνο ημίσειας ζωής 1 ώρας. Σε αυτή τη μελέτη, η εξαγωγή ιστού του όγκου και 10 λεπτά μετά τη θεραπεία θα υποτιμήσουμε αναπόφευκτα τη διείσδυση του φαρμάκου σε όγκους που λαμβάνουν ΠΡΙΟϋΟΕ. Σε αντίθεση, το χρονικό διάστημα 4 ωρών επιτρέπει δοξορουβικίνη για την έκλουση από γαλάκτωμα ΠΡΙΟϋΟΕ, με αποτέλεσμα την αύξηση της διείσδυσης του φαρμάκου.

Με τη χρήση μικροσκοπίας φθορισμού, δείξαμε επίσης σημαντικά αυξημένη καταμέτρηση της δοξορουβικίνης φθορίζουσα κηλίδα σε τρεις ομάδες θεραπειών καθετήρα σύγκριση με την ομάδα ένεση φλέβα. Είναι ανάλογο με τα ευρήματα που παρατηρούνται με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης σε προηγούμενες μελέτες [11], [12], [29], οι οποίες επιβεβαιώνουν ότι καθετήρα ενδοαρτηριακή τεχνικές βελτίωση της συγκέντρωσης του φαρμάκου σε καρκίνο του ήπατος. Μεταξύ των τριών ομάδων καθετήρα ενδοαρτηριακή θεραπεία, η τάση του αριθμού των φθορισμού δοξορουβικίνη αλλαγή ήταν παρόμοια με εκείνη της απόστασης διείσδυσης δοξορουβικίνη, η οποία πιθανότατα εξηγείται επίσης από την εμβολισμό που σχετίζονται με τη μεταφορά των ναρκωτικών και ΠΡΙΟϋΟΕ-που προκαλείται κατακράτηση του φαρμάκου.

Σε από την άλλη πλευρά, η μελέτη μας έδειξε ότι τα κύτταρα του όγκου σε ανάγγειο και γειτονικές περιοχές των όγκων που λαμβάνουν θεραπεία καθετήρα δεν είχαν εκτεθεί σε ανιχνεύσιμες συγκεντρώσεις ντοξορουμπικίνης. Είναι παρόμοια με τα ευρήματα που παρατηρήθηκαν σε πρόσφατες μελέτες. Ναμύρ και οι συνεργάτες εκτελείται μεταμόσχευση ήπατος εξής ΤΑΟΕ σε ασθενείς με ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα και διαπίστωσε ότι η συγκέντρωση δοξορουβικίνης σε καρκινικό ιστό μειώθηκε με την απόσταση από τα αποφραγμένη σκαφών και της διείσδυσης του φαρμάκου συσχετίστηκε με νέκρωσης όγκου [15]. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η επίδραση του καθετήρα ενδοαρτηριακή τεχνικές που χρησιμοποιούνται σήμερα για τη διανομή του φαρμάκου θα μπορούσε να είναι κάπως περιορισμένη. Διαδερμική ενδοαρτηριακή τεχνικές, επειδή εξαρτώνται από την υπάρχουσα αγγείωση, μπορεί να βελτιώσει την παροχή φαρμάκου σε αγγειακά περιοχές του όγκου, αλλά αποτυγχάνουν να βελτιώσουν την παράδοση χωρίς αγγεία περιοχές. Υπό το φως των ευρημάτων αυτών, είναι σαφές ότι θα πρέπει να εισαχθούν επιπλέον μεθόδους για την τροποποίηση της διανομής ναρκωτικών σε καθετήρα ενδοαρτηριακή θεραπείες για την επίτευξη καλύτερων χημειοθεραπευτικών αποτελεσματικότητα.

Αυτή η μελέτη είχε αρκετούς περιορισμούς. Πρώτον, χρησιμοποιήσαμε μια υπερβολική δόση της δοξορουβικίνης για τη διευκόλυνση της ανίχνευσης του φαρμάκου ειδικά ταξιανθία, ειδικά σε όγκους που έλαβαν δοξορουβικίνη ενδοφλέβια ένεση, η οποία θα μπορούσε να υπερεκτιμήσει την επίδραση του καθετήρα ενδοαρτηριακή τεχνικών σε διείσδυση φαρμάκου. Η κατανομή της doxorubicin δίνεται σε μια ρουτίνα δόση μέσω καθετήρα ενδοαρτηριακή διαδρομή πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω. Δεύτερον, επιλέξαμε 10 λεπτά και 4 ώρες μετά τη χορήγηση δοξορουβικίνης όπως τα χρονικά σημεία θυσία για να εξασφαλιστεί η αποτελεσματική διείσδυση του φαρμάκου [19], [20]. Λαμβάνοντας υπόψη το γεγονός ότι η παράδοση του φαρμάκου στον όγκο είναι μια δυναμική διαδικασία, είναι πιθανό ότι περισσότερο χρονικά σημεία των μετρήσεων μπορεί να παρέχει πρόσθετες πληροφορίες σχετικά με δοξορουβικίνη διείσδυση σε όγκο. Τέλος, χρησιμοποιήσαμε ένα δείγμα του όγκου για την αξιολόγηση διανομή δοξορουβικίνη όλο τον όγκο. Το μήκος διείσδυσης σε δισδιάστατες εικόνες θα μπορούσαν να υπερεκτιμούν την πραγματική απόσταση ενός δοξορουβικίνη φθορίζουσα κηλίδα στο πλησιέστερο σκάφος του από το πλησιέστερο σκάφος μπορεί να είναι έξω από το τμήμα. Οι μελλοντικές μελέτες χρησιμοποιώντας την τεχνική ανοσοφθορισμού πρέπει να στοχεύει στην ποσοτικοποίηση χρώση καθ ‘όλη όγκου.

Εν περιλήψει, αυτή η μελέτη παρέχει στοιχεία που αποδεικνύουν ότι ηπατικής αρτηρίας χημειοθεραπευτικό έγχυση, ειδικά όταν συνδυάζεται με εμβολή, βελτιώνει τη διείσδυση του φαρμάκου, καθώς και τη συγκέντρωση του φαρμάκου στο ήπαρ Καρκίνος. Αυτό θα μπορούσε, τουλάχιστον εν μέρει, αντιπροσωπεύουν το μηχανισμό με τον οποίο καθετήρα ενδοαρτηριακή τεχνικές είναι αποτελεσματικές θεραπείες για τον καρκίνο του ήπατος. Από την άλλη πλευρά, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η επίδραση των τεχνικών αυτών σχετικά με τη διανομή του φαρμάκου είναι κάπως περιορισμένη, παρά την υπερβολική δόση της δοξορουβικίνης. Περαιτέρω μελέτες είναι απαραίτητο να αναπτυχθούν επιπλέον στρατηγικές για τη βελτίωση της κατανομής της doxorubicin.