Αφηρημένο

Η πρόκληση πολυπλοειδίας θεωρείται η αναπαραγωγική τέλος των κυττάρων, αλλά υπάρχουν ενδείξεις ότι πολυπλοειδών καρκίνου γιγαντιαία κύτταρα (PGCCs) συμβάλλει στην κυτταρική ανανέωση του πληθυσμού κατά τη διάρκεια της υποτροπής του όγκου. Ωστόσο, ο ρόλος αυτών των κυττάρων στην ανάπτυξη, την πρόοδο και την απόκριση στη θεραπεία σε καρκίνο του παχέος εντέρου παραμένει απροσδιόριστη. Ως εκ τούτου, ο κύριος στόχος αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η γενιά των PGCCs σε καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου και τον εντοπισμό των μηχανισμών του σχηματισμού. Θεραπεία της HCT-116 και Caco-2 κύτταρα καρκίνου κόλου με την υποξία μιμούνται CoCl

2 προκάλεσε το σχηματισμό των κυττάρων με μεγαλύτερο κελί και πυρηνική μεγέθους (PGCCs), ενώ τα κύτταρα με φυσιολογική μορφολογία επιλεκτικά εξαλειφθεί. Κυτομετρική ανάλυση έδειξε ότι CoCl

2 θεραπεία επαγόμενης G2 διακοπή του κυτταρικού κύκλου και η παραγωγή ενός κυττάρου πολυπλοειδών υποπληθυσμό με αυξημένη περιεκτικότητα σε κυτταρικό DNA. Πολυπλοειδία της υποξίας που προκαλείται PGCCs επιβεβαιώθηκε με ανάλυση FISH. Επιπλέον, CoCl

2 θεραπεία επαγόμενης αποτελεσματικά την σταθεροποίηση του HIF-1α, η διαφορική έκφραση μιας κολοβωμένης μορφής του ρ53 (ρ47) και μειωμένα επίπεδα της κυκλίνης D1, υποδεικνύοντας μοριακοί μηχανισμοί που συνδέονται με την διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε G2. Παραγωγή PGCCs συνέβαλε επίσης στην επέκταση ενός κυττάρου υποπληθυσμού με καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) χαρακτηριστικά, όπως υποδεικνύεται από colonosphere προσδιορισμούς σχηματισμού, και ενισχυμένη χημειοαντίσταση σε 5-φθοριοουρακίλη και οξαλιπλατίνη. Εν κατακλείδι, η φαρμακολογική επαγωγή της υποξίας σε κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου προκαλεί το σχηματισμό PGCCs, την επέκταση ενός κυττάρου υποπληθυσμού με χαρακτηριστικά CSC και χημειοαντίσταση. Οι μοριακοί μηχανισμοί που εμπλέκονται, συμπεριλαμβανομένης της σταθεροποίησης του HIF-1 α, τη συμμετοχή της p53 /Ρ47 ισομορφή και διακοπή του κυτταρικού κύκλου στη G2, προτείνουν νέους στόχους για την πρόληψη της υποτροπής του όγκου και της αποτυχίας της θεραπείας στον καρκίνο του παχέος εντέρου

Αιτιολογική αναφορά.: Lopez-Sánchez LM, Χιμένες C, Valverde Α, Hernandez V, Peñarando J, Martinez A, et al. (2014) CoCl

2, ένα μιμητικό της υποξία, επάγει το σχηματισμό των πολυπλοειδών Giant κύτταρα με χαρακτηριστικά Βλαστικά στον Καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 9 (6): e99143. doi: 10.1371 /journal.pone.0099143

Επεξεργαστής: Ο Carl G. Μάκη, του Πανεπιστημίου Rush Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 31 Μαρτίου του 2014? Αποδεκτές: 9 Μαΐου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 16 Ιουνίου, 2014

Copyright: © 2014 Lopez-Sánchez et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα στοιχεία που περιλαμβάνονται στο χειρόγραφο

Χρηματοδότηση:. Υποστηρίζεται από επιχορηγήσεις σε A.R.-A. από Programa de Promocion de la Investigación en Salud del Ministerio de Economía y Competitividad, Instituto de Salud Carlos III (PI10 /00428 και PI13 /00553) (https://www.isciii.es/). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η δεύτερη πιο κοινή μορφή καρκίνου με 1.234.000 περιπτώσεις σε όλο τον κόσμο το 2008, σύμφωνα με GLOBOCAN [1]. CRC αντιπροσωπεύει το 13% όλων των καρκίνων και σχεδόν 1000 νέες CRC περιπτώσεις διαγνώστηκαν το 2012 στην Ευρώπη [2], όπου είναι η τρίτη συχνότερη μορφή καρκίνου και μετά τον καρκίνο του πνεύμονα είναι η δεύτερη πιο συχνή αιτία θανάτου [3]. Παρά το γεγονός ότι τα ποσοστά θανάτου από CRC έχουν μειωθεί ελαφρώς από το 1990 μέχρι σήμερα, και παρά τις προόδους στον τομέα της ανίχνευσης και χειρουργική θεραπεία, δεν υπάρχει καμία γνωστή θεραπεία για μεταστατικό CRC, και το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών αυτούς τους ασθενείς είναι απογοητευτικά χαμηλή (περίπου 8%) . Η ύπαρξη μια σχετικά σπάνια αργά πολλαπλασιαζόμενα ή ανάπαυσης των κυττάρων υποπληθυσμό, ιδιαίτερα ανθεκτικό στα φάρμακα, με παρόμοιες ιδιότητες με τα βλαστικά κύτταρα και είναι γνωστή ως καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ), έχει προταθεί ως μια κύρια αιτία της την ανησυχητική αναποτελεσματικότητα του προτύπου θεραπείες του καρκίνου [ ,,,0],4], [5]. Κατά την τελευταία δεκαετία, έχει δείξει ότι αυτά τα ΚΕΠ είναι σε θέση να πολλαπλασιάζονται και να παράγουν το σύνολο της μάζας του όγκου. Αυτό οδήγησε να προτείνει ένα μοντέλο ΚΕΠ, ή όγκου ιεραρχικό μοντέλο, στο οποίο τα κύτταρα όγκου είναι ετερογενής, και μόνο ένα μικρό πληθυσμό κυττάρων, η οποία βρίσκεται στην κορυφή της ιεραρχικής πυραμίδας, είναι υπεύθυνη για την έναρξη και τη διατήρηση της ανάπτυξης του όγκου [5] . Ωστόσο, πιο πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι η βλαστική ικανότητα του καρκίνου μπορεί να αποκτηθεί με την αλλαγή των προγραμμάτων της γονιδιακής έκφρασης και ως εκ τούτου CSC βιολογίας πρέπει να μετατοπιστεί από μια άκαμπτη ιεραρχική σε ένα πιο ευέλικτο μοντέλο [6], [7]. ΚΕΠ είναι πολύ πιο ανθεκτικά από διαφοροποιημένα κύτταρα όγκου στους θεραπείες που χρησιμοποιούνται στην κλινική [4], [8] και, αν και η θεραπεία είναι σε θέση να απομακρύνει αποτελεσματικά τα περισσότερα από τα κύτταρα του όγκου και ο όγκος του όγκου μειώνεται, ΚΕΠ δεν επηρεάζονται και μια φορά η θεραπεία σταματά να είναι σε θέση να επαναλάβει την ανάπτυξη και τη διαφοροποίηση του όγκου, εξηγώντας τα γεγονότα όπως επανεμφάνιση του όγκου. Ετσι, έχει δειχθεί ότι ο κίνδυνος υποτροπής του CRC είναι ανάλογη με την έκφραση στον πρωτογενή όγκο γονιδίων ειδικών για εντερικά βλαστικά κύτταρα τα οποία προσδιορίζουν επίσης έναν πληθυσμό CSC στον όγκο [9]. Εκτός αυτού, ΚΕΠ φαίνεται να παίζουν σημαντικό ρόλο στη διαδικασία διάδοσης, λήθαργο και μετάσταση όγκου [10].

Η υποξία είναι ένα από τα πιο σημαντικά παθολογικά χαρακτηριστικά των στερεών όγκων, επειδή είναι το αποτέλεσμα μιας ανισορροπίας μεταξύ πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων και την παροχή οξυγόνου [11]. Tumor υποξία αντιπροσωπεύει όχι μόνο ένα σημαντικό πρόβλημα που επηρεάζει θεραπευτικές προσπάθειες, αλλά υπάρχουν πειραματικές αποδείξεις που αποτελεί μια φυσιολογική επιλεκτική προαγωγή της επιθετικότητας του όγκου [12] πίεση. Σημαντικά, υποξία συνδέεται με τη διατήρηση και το σχηματισμό του ΚΕΠ [11], [13], την προώθηση φαινότυπο και ογκογένεση [14] τους. Πολλές από τις κυτταρικές αποκρίσεις στην υποξία διαμεσολαβούνται μέσω αλλαγών στη γονιδιακή έκφραση ρυθμίζεται από την υποξία διεγέρσιμο παράγοντα (HIF-1α), η οποία έχει γίνει ένα πολύ ελκυστικό στόχο για την ανάπτυξη νέων θεραπειών του καρκίνου [11]. Κάτω από συνθήκες ορθοξικές πρωτεΐνη HIF-1α συνεχώς αποικοδομείται μετά υδροξυλίωση με υδροξυλάσες προλυλ δύο βασικών υπολειμμάτων προλίνης σε οξυγόνο του τομέα που εξαρτώνται από την υποβάθμιση [15]. Ωστόσο, κάτω από υποξικές συνθήκες HIF-1α σταθεροποιείται, μετατοπίζεται στον πυρήνα και, κατά την πρόσδεση σε υπομονάδα HIF-1β, σχηματίζει ένα δραστικό παράγοντα μεταγραφής ικανή να ενεργοποιεί την έκφραση των γονιδίων στόχων που διευκολύνουν την κυτταρική προσαρμογή στην υποξία [13]. χλωριούχο κοβάλτιο (COCI

2) είναι ένας παράγοντας που χρησιμοποιείται μιμητικό

in vitro

να επάγουν κυτταρικές αποκρίσεις που προκαλούνται από υποξία. Πιστεύεται ότι CoCl

2 σταθεροποιεί HIF-1α προλυλ με αναστολή ενζύμων υδροξυλάσης [16].

Έχει προταθεί ότι, ομοίως με φυσιολογικών αρχέγονων κυττάρων, η τοπική μικροπεριβάλλον είναι κρίσιμη για τη διατήρηση της επιβίωσης των ΚΕΠ σε «θέση» τους, όπου η λήψη των συγκεκριμένων μοριακών σημάτων ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση [17] τους. Παραδόξως, αν και αρκετές μελέτες έχουν δείξει πρόσφατα ένα σημαντικό ρόλο των ενδοθηλιακών κυττάρων (ECs), και περιαγγειακή κόγχη στην ρύθμιση των φυσιολογικών αρχέγονων κυττάρων και ΚΕΠ, άλλες μελέτες υποδεικνύουν ότι η υποξία παίζει επίσης καθοριστικό ρόλο [17]. Η σημασία ενός περιαγγειακή θέση στη ρύθμιση ΚΕΠ, αφενός, και ο ρόλος της υποξίας στην άλλη μπορεί να φαίνεται εκ πρώτης όψεως παράδοξο. Παρ ‘όλα αυτά, ECs στο μικροπεριβάλλον του όγκου μπορεί να υποβληθεί σε λειτουργικές μεταβολές που οδηγούν στην παραγωγή ενός μικροπεριβάλλοντος υποξική. Έτσι, οι ΚΕΠ γλοιοβλάστωμα βρίσκονται σε στενή επαφή με το αγγειακό σύστημα του όγκου παρεκκλίνουσα [18]. Πρόσφατα αναφέρθηκε ότι η υποξία μπορεί να επιλέξει πολυπλοειδών καρκίνο γιγαντιαία κύτταρα, (PGCCs) που συμβάλλουν ενεργά στην ανάπτυξη του όγκου με την παραγωγή ΚΕΠ [19]. Στην πραγματικότητα, η πλειονότητα των ανθρώπινων όγκων είναι κυτταρικά ετερογενείς [20], και για πάνω από έναν αιώνα, οι παθολόγοι έχουν παρατηρήσει γιγαντιαία όγκοι κυττάρων, σημαντικά πιο συχνά μετά από κάποια μορφή θεραπευτικής παρέμβασης [19]. Αυτά τα κύτταρα συμβάλλουν στην ετερογένεια των όγκων, αλλά οι περισσότερες από τις λειτουργίες τους δεν έχουν ακόμη οριστεί. Αν και η πρόκληση πολυπλοειδίας έχει παραδοσιακά θεωρείται το αναπαραγωγικό τέλος των κυττάρων, υπάρχουν ενδείξεις ότι η γιγαντιαία κύτταρα συμβάλλουν στην κυτταρική ανανέωση του πληθυσμού κατά τη διάρκεια της υποτροπής του όγκου [21], [22].

Αν και υπάρχουν στοιχεία σχετικά με την παραγωγή PGCCs στον καρκίνο των ωοθηκών και του μαστού, ο ρόλος αυτών των κυττάρων στην ανάπτυξη, την πρόοδο και την απόκριση στη θεραπεία σε CRC παραμένει απροσδιόριστη. Ως εκ τούτου, ο κύριος στόχος αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η

in vitro

PGCCs γενιά σε καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου και τον εντοπισμό των μηχανισμών του σχηματισμού.

Υλικά και Μέθοδοι

Πολιτισμός τηλέφωνα και colonosphere δοκιμασία σχηματισμού

Caco-2 κύτταρα (ECACC, Salisbury, UK) αναπτύχθηκαν σε ΜΕΜ με άλατα Earle (ΡΑΑ Laboratories GmbH, Pasching, Αυστρία) που περιέχει 15% ορό εμβρύου μόσχου. ΗΟΤ-116 κύτταρα (DSMZ, Braunschweig, Germany) αναπτύχθηκαν σε μέσο του McCoy 5Α (Biowest, Nuaillé, Γαλλία) που περιέχει 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (ΡΑΑ Laboratories). Τα μέσα καλλιέργειας συμπληρώθηκαν με 2 mM γλουταμίνη, 1% μη απαραίτητα αμινοξέα, πενικιλλίνη (100 U /ml), στρεπτομυκίνη (100 μg /ml) και αμφοτερικίνη Β (2,5 μg /ml). Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα στους 37 ° C και 5% CO

2. Ένα διάλυμα φρέσκο ​​απόθεμα 0,4 Μ χλωριούχο κοβάλτιο (COCI

2) παρασκευάστηκε σε νερό και προστίθεται στο μέσο για να ληφθεί επιθυμητές τελικές συγκεντρώσεις.

Για την δοκιμασία σχηματισμού colonosphere, μετά από θεραπεία με διάφορες δόσεις CoCl

2 για 48 ώρες, τα κύτταρα tripsinized, μετρήθηκαν και εκ νέου σπάρθηκαν σε κλωνική πυκνότητα (1 κύτταρο /μl) σε 96-φρεατίων με εξαιρετικά χαμηλή επιφάνεια προσάρτησης (Costar, Corning, ΝΥ, USA) με ελεύθερη Dulbecco ΜΕΜ ορού Θρεπτικό Μείγμα F + 12 μέσο Ham συμπληρωμένο με 10 ng /ml βασικό αυξητικό παράγοντα ινοβλαστών, 20 ng /ml επιδερμικού αυξητικού παράγοντα και 1% ν /ν μεθυλοκυτταρίνης (R (Green) και έχουν κύτταρα πριν την εκτέλεση του προσδιορισμού σχηματισμού colonosphere οδήγησε στο σχηματισμό σφαιρών που περιέχουν μόνο το ένα ή το άλλο σήμα (Σχήμα S1)

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6, η προθεραπεία με CoCl

2 και εν συνεχεία εμπλουτισμό στη PGGCs αυξήθηκε τόσο HCT-116 και Caco-2 κύτταρα την ικανότητα να σχηματίσει colonospheres, γεγονός που υποδηλώνει ότι η παραγωγή PGCCs συμβάλλει στην επέκταση του υποπληθυσμού CSC σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές. Στη συνέχεια, οι σχηματίζονται colonospheres διασκορπίσθηκαν και το προκύπτον κυτταρικός πληθυσμός καλλιεργήθηκε πάλι σε κλωνική πυκνότητα για το σχηματισμό δευτερογενών colonospheres. (Σχήμα 6). Κύτταρα που προέρχονται από πρωτογενή colonospheres σχηματίζεται από CoCl

2-θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου κύτταρα διατηρούνται μεγαλύτερη ικανότητα να σχηματίζουν colonospheres, επιβεβαιώνοντας μια ανώτερη ικανότητα αυτο-ανανέωσης. Επιπλέον, το παράγωγο colonospheres προέρχονται από colonospheres σχηματίζονται από κύτταρα υποβάλλονται σε υποξία ήταν σημαντικά μεγαλύτερα σε μέγεθος σε σύγκριση με εκείνα που προέρχονται από τα κύτταρα μάρτυρες (Σχήμα 7). Αυτή η αύξηση του μεγέθους επιβεβαιώνεται ότι η ΚΕΠ που παράγεται σε ένα κυτταρικό πληθυσμό εμπλουτισμένο σε PGCCs κατείχε επίσης μια μεγαλύτερη ικανότητα για αυτο-ανανέωση, και ως εκ τούτου είχαν πιο έντονη βλαστική ικανότητα χαρακτηριστικά [25].

Μετά τον εμπλουτισμό σε PGCCs από θεραπεία για 48 μΜ CoCl

2, επιζώντα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε κλωνική πυκνότητα με μέσο χωρίς ορό σε πλάκες χαμηλού προσκόλληση και τον αριθμό των πρωτογενών σχηματίστηκε colonospheres αξιολογήθηκε μετά από επτά ημέρες. Πρωτογενή colonospheres ήταν αναλυτικά και το προκύπτον κυτταρικός πληθυσμός καλλιεργήθηκε πάλι σε κλωνική πυκνότητα για το σχηματισμό δευτερογενών colonospheres. Γραφικά δείχνουν τους αριθμούς των πρωτογενών (γκρι ράβδοι) και δευτερεύον (μαύρες ράβδοι) colonospheres σχηματίζονται από κύτταρα Caco-2 HCT-116 και μετά από κάθε θεραπεία. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD τριών ανεξαρτήτων καλλιεργειών. (* Ρ & lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο)

Η

Η δοκιμασία δευτερογενούς σχηματισμού colonosphere διεξήχθη όπως περιγράφεται στο Σχήμα 6 υπόμνημα και υπό Υλικά και μεθόδους. (Τελική μεγέθυνση, χ 200). Κλίμακα ράβδου αντιστοιχεί σε 10 μικρά.

Η

Η παραγωγή PGCCs σε καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου σχετίζεται με την αντίσταση σε 5-φθοριοουρακίλη και οξαλιπλατίνη

Σε σύγκριση με περισσότερο νορμοξικό όγκους, όγκους με ένα υψηλότερο υποξική κλάσμα είναι πιο ανθεκτικές σε ραδιοθεραπεία και χημειοθεραπεία [12]. Επίσης, και οι δύο PGCCs [19], όπως ΚΕΠ [5] έχουν συσχετιστεί με αντίσταση στη χημειοθεραπεία. Επομένως, δίπλα αποφασίσαμε να αναλύσουμε σε καλλιέργειες καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου εμπλουτισμένο σε PGCCs την αντιπολλαπλασιαστική δραστικότητα της 5-φθοροουρακίλης και οξαλιπλατίνη, δύο φάρμακα που χρησιμοποιούνται συχνά στη χημειοθεραπεία καρκίνου του παχέος εντέρου. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 8, οι εν λόγω καλλιέργειες κυττάρων που είχαν εμπλουτιστεί σε PGCCs με κατεργασία με CoCl

2, έδειξε μια αυξημένη αντίσταση στην αντιπολλαπλασιαστικό αποτέλεσμα των δύο φαρμάκων.

Τόσο HCT-116 και Caco-2 κύτταρα προεπωάστηκαν για 48 ώρες παρουσία ή απουσία CoCl

2 για εμπλουτισμό PGCC και στη συνέχεια εκτέθηκαν για 72 ώρες σε διαφορετικές δόσεις 5-φθοριοουρακίλη (Α) ή οξαλιπλατίνη (Β). Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων παρουσιάζεται σαν ποσοστό των κυττάρων ελέγχου που δεν έχουν εκτεθεί σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD τριών ανεξάρτητων πειραμάτων (* p & lt? 0,05, σε σύγκριση με τα κύτταρα χωρίς CoCl

2 θεραπεία)

Η

Συζήτηση

Η υποξία σε όγκους έχει από καιρό. έχουν συσχετιστεί με αυξημένη επιθετικότητα του όγκου, χειρότερη πρόγνωση και μεγαλύτερη αντίσταση στην ακτινοθεραπεία και χημειοθεραπεία [26]. Στην παρούσα μελέτη αποδείξαμε ότι μιμούνται υποξία in vitro με τη χρήση CoCl

2, η οποία σταθεροποιεί πρωτεΐνη HIF-1α με αναστολή αποικοδόμησης της, είναι σε θέση να παράγει PGCCs σε καλλιέργεια κόλου καρκινικό κύτταρο. PGCCs που προκαλείται από τη θεραπεία με CoCl

2 είναι σταθερές και διέθετε διακριτική μορφολογία αλλά γενιάς τους υπό φυσιολογικές

in vivo

συνθήκες υποξίας μένει να καθοριστεί. Στα πειράματά μας, η μορφολογία των PGCCs επάγεται από υποξία ποικίλει μεταξύ των κυττάρων Caco-2 (Σχήμα 1) HCT-116 και. Αυτή η εξάρτηση από κυτταρική γραμμή συμπίπτει με την μελέτη των Zhang et al [19], όπου PGCCs προερχόμενες κυτταρικές γραμμές όγκου HEY (ωοθηκών) και MDA-231 -ΜΒ (μαστού) είχε μια νευρωνική μορφολογία παρόμοια, ενώ PGGCs που προέρχεται από κύτταρα SKOV3 (ωοθήκη ), έδειξε μια στρογγυλεμένες μορφολογία χωρίς κυτταροπλασματική επεκτάσεις ή υποκαταστήματα. Στη μελέτη μας, η μορφολογία των PGCCs προέρχονται από HCT-116 κύτταρα συμπίπτει με εκείνα από ΗΕΥ και MDA -ΜΒ-231, ενώ αυτές που δημιουργούνται σε Caco- 2 ήταν περισσότερο παρόμοιες με εκείνες που περιγράφονται για τα κύτταρα SKOV3. Θα πρέπει να τονιστεί ότι Hey, MDA -MB- 231 και HCT-116 είναι αισθητά επεμβατικές κυτταρικές γραμμές, που είναι αντιπροσωπευτική της επιθηλιακής μετάβασης μεσεγχυματικά διαδικασία (ΕΜΤ), η οποία πάσχουν μερικές υποπληθυσμών των κυττάρων του όγκου [27]. Ως εκ τούτου, ή τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το γενετικό πρόγραμμα που ελέγχει ΕΜΤ σε καρκινικά κύτταρα επίσης μπορεί να είναι ένας σημαντικός παράγοντας στην παραγωγή PGCCs με μεγαλύτερη χωρητικότητα από διήθηση και διασποράς.

Τα αποτελέσματά μας έδειξαν επίσης ότι ο σχηματισμός της PGCCs σε καρκινικά κύτταρα κόλου συνδέεται με αλλαγές σε κυτταρικό κύκλο και την επακόλουθη πολυπλοειδία (Εικόνες 2 και 3). Μονοκύτταρους προκαρυωτικά και ευκαρυωτικά κύτταρα διαιρούνται με αμιτωτική διαδικασίες. Στο συγκρότημα ευκαρυωτικά κύτταρα, αν και μίτωση επικρατεί, καλά τεκμηριωμένες αλλαγές στην μιτωτική κυτταρικού κύκλου εμφανίζεται να επιτύχουν την ανάπτυξη των κυττάρων και την ανάπτυξη κάτω από στρεσογόνες συνθήκες. Μεταξύ αυτών των παραλλαγών είναι η διαδικασία ενδοδιπλασιασμό, μια παραλλαγή της κανονικής μιτωτικής κυτταρικού κύκλου η οποία περιλαμβάνει πολλαπλούς γύρους αντιγραφής του DNA χωρίς τη συμμετοχή του σταδίου της μίτωσης [28]. γιγαντιαία κύτταρα του όγκου που παρατηρείται από παθολόγους έχουν παραδοσιακά θεωρηθεί ως αδρανής από την άποψη της αποκατάστασης του πληθυσμού των όγκων. Ωστόσο, τα νέα δεδομένα δείχνουν ότι αυτά τα κύτταρα είναι ικανά να παράγουν απογόνους κλωνογόνων με ασύμμετρη διαίρεση και εκβλάστηση [19]. Έτσι, μία μέθοδος έχει περιγραφεί στην οποία τα κύτταρα να ξεφύγουν μιτωτικά καταστροφή που προκαλείται από τον κυτταρικό θάνατο με το να γίνει PGCCs που, πριν πεθάνουν, να προκύπτουν διάφορα κύτταρα μέσω πυρηνικής εκβλάστηση και ασύμμετρη κυτοκίνηση. Αυτός ο τρόπος κυτταρικής διαίρεσης στον καρκίνο έχει ονομαστεί neosis, και έχει συσχετισθεί με την προέλευση των καρκινικών βλαστικών κυττάρων [29], [30].