Abstract

Over-ενεργοποίηση των μετατροπέων σήματος και ενεργοποιητές μεταγραφής 3 (Stat3) μονοπάτι σε πνεύμονα κυψελιδικά τύπου ΙΙ (ΑΤ II) επιθηλιακά κύτταρα προκαλεί χρόνια φλεγμονή και αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα του CCSP-rtTA /(ίείΟ)

7-CMV-Stat3C bitransgenic ποντίκια. Ένα από Stat3 κατάντη γονιδίων προϊόντα, χιτινάση 3-σαν 1 πρωτεΐνη (CHI3L1), παρουσίασαν αυξημένη συγκέντρωση τόσο βρογχοκυψελιδικού έκπλυμα (BAL) και το αίμα του δοξυκυκλίνη επεξεργασμένο CCSP-rtTA /(ίείΟ)

7-CMV-Stat3C bitransgenic ποντίκια. Όταν δοκιμάστηκε σε άλλες φλεγμονή που προκαλείται από μοντέλα ποντικών με καρκίνο του πνεύμονα, η συγκέντρωση πρωτεΐνης CHI3L1 επίσης σε μεγάλο βαθμό αυξημένη σε BALF και το αίμα αυτών των μοντέλων με όγκους. Η ανοσοϊστοχημική χρώση έδειξαν ισχυρή χρώση των CHI3L1 πρωτεΐνης γύρω από τις περιοχές του όγκου σε αυτά τα μοντέλα ποντικών. Ανάλυση κανονικών αντικειμένων και των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα αποκάλυψε μια σημαντική αύξηση της συγκέντρωσης πρωτεΐνης CHI3L1 σε δείγματα ανθρώπινου ορού από όλες τις κατηγορίες των καρκίνων του πνεύμονα. Επιπλέον, η ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη CHI3L διεγείρει τον πολλαπλασιασμό και την ανάπτυξη των Lewis καρκίνου του πνεύμονα κύτταρα. Ως εκ τούτου, εκκριτική CHI3L1 παίζει σημαντικό ρόλο στο σχηματισμό της φλεγμονής που προκαλείται από τον καρκίνο του πνεύμονα και πιθανώς χρησιμεύουν ως βιοδείκτη για την πρόβλεψη του καρκίνου του πνεύμονα. Με βάση την προηγούμενη δημοσίευση μας και αυτό το έργο, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που συνδέει ζώο υπερέκφραση του CHI3L1 σε διάφορα μοντέλα ποντικών όγκου του πνεύμονα. Τα μοντέλα αυτά θα διευκολύνει την αναγνώριση των πρόσθετων βιοδεικτών για να προβλέψει και να ελέγξει τον καρκίνο του πνεύμονα υπό διάφορες συνθήκες παθογόνα, τα οποία κανονικά δεν μπορεί να γίνει σε ανθρώπους

Παράθεση:. Γιαν C, Ding Χ, Wu L, Yu Μ, Qu P, du Η (2013) Stat3 μεταγενέστεροι Gene προϊόντων χιτινάση 3-Like 1 είναι μια πιθανή βιοδεικτών της φλεγμονής που προκαλείται από τον καρκίνο του πνεύμονα σε πολλαπλά μοντέλα όγκου ποντικού πνεύμονα και άνθρωποι. PLoS ONE 8 (4): e61984. doi: 10.1371 /journal.pone.0061984

Επιμέλεια: Jian-Xin Gao, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, η Κίνα

Ελήφθη: 12, Νοεμβρίου 2012? Αποδεκτές: 16 Μαρτίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 22 Απρ 2013

Copyright: © 2013 Yan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Χρηματοδότηση ήταν που παρέχεται από NIH CA138759, CA152099 (C. Yan) και HL087001 (η Du). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο θανατηφόρα αιτία του πληθυσμού καρκίνου στον άνθρωπο. Το ποσοστό πενταετούς επιβίωσης είναι μόνο περίπου 15%. Υπάρχει επείγουσα ανάγκη για την ταυτοποίηση βιοδεικτών που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την πρόβλεψη εμφάνισης καρκίνου του πνεύμονα. Πρόσφατα, αποδείξαμε ότι και οι δύο πνεύμονες των επιθηλιακών κυττάρων που ενεργοποιείται περιφερειακή φλεγμονή και μυελοειδούς κυττάρου που ενεργοποιείται συστημική φλεγμονή μπορεί να προκαλέσει αυθόρμητες ογκογένεση του πνεύμονα σε πολλαπλά ζωικά όγκου πνεύμονα μοντέλα [1], [2], [3], [4], [5] , υποδεικνύοντας ότι φλεγμονώδη μόρια είναι πιθανώς χρήσιμες για την πρόβλεψη του καρκίνου του πνεύμονα. Αυτά φλεγμονή που προκαλείται όγκου πνεύμονα ζωικά μοντέλα είναι ιδανικά και πολύτιμα συστήματα για την αναγνώριση και την επαλήθευση των βιοδεικτών του καρκίνου του πνεύμονα. Κατά τη διάρκεια της παθογόνου διεργασίας της χρόνιας φλεγμονής και των πνευμόνων ογκογένεση σε αυτά τα μοντέλα ζώων, ένα κοινό χαρακτηριστικό είναι Stat3 υπερ-ενεργοποίηση σε φλεγμονώδεις μυελοειδή προέρχονται κατασταλτική κύτταρα (MDSCs) και πνευμονικά επιθηλιακά κύτταρα, υποδηλώνοντας ότι Stat3 διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στη φλεγμονή του πνεύμονα που προκαλείται ογκογένεση . Πράγματι, όταν μια συστατική δραστική μορφή Stat3C υπερεκφράζεται στα κυψελιδικά επιθηλιακά κύτταρα τύπου II, επάγει κατάντη φλεγμονωδών γονιδίων. Στη συνέχεια, πάνω ρύθμιση αυτών των φλεγμονωδών μορίων διεγείρει και στρατολογεί φλεγμονώδη κύτταρα (όπως MDSCs) στον πνεύμονα για να σχηματίσει μια φλεγμονώδη περιβάλλον. Επίμονη παρουσία αυτών των φλεγμονωδών κυττάρων διευκολύνει την αυθόρμητη αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα CCSP-rtTA /(ίείΟ)

7Stat3C bitransgenic ποντίκια [1], [6].

Με βάση αυτές τις παρατηρήσεις, υποθέτουμε ότι Stat3 κατάντη γονίδια χρησιμεύουν ως πιθανοί βιοδείκτες για την πρόβλεψη του καρκίνου του πνεύμονα που προκαλείται από φλεγμονή. ανάλυση μικροσυστοιχιών Affymetrix GeneChip αποκαλύπτει περίπου 800 Stat3 κατάντη γονιδίων στον πνεύμονα του CCSP-rtTA /(ίείΟ)

7Stat3C bitransgenic ποντικούς όπως αναφέραμε προηγουμένως [1]. Όταν δοκιμάστηκε σε ζώα και ανθρώπους, μερικοί από αυτά τα γονίδια μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βιοδείκτες για τον καρκίνο του πνεύμονα [1], [7]. Δεδομένου ότι τα περισσότερα από αυτά τα γονίδια είναι ενδοκυτταρικές πρωτεΐνες, είναι δύσκολο να τα χρησιμοποιήσουν για το σκοπό της κλινικής διάγνωσης και στην πρόγνωση χωρίς να περάσει από βιοψία. Ως εκ τούτου, υπάρχει μια ανάγκη για τον εντοπισμό διαλυτές και εκκρινόμενες πρωτεΐνες όπως βιοδείκτες σε βρογχοκυψελιδικού εκπλύματος (BALF) δείγματα ορού ή για την πρόβλεψη και την επαλήθευση του καρκίνου του πνεύμονα. Εδώ, αναφέρουμε ότι εκκριτική πρωτεΐνη χιτινάση 3-Like 1 (CHI3L1), μεταγενέστερος γονιδιακό προϊόν Stat3, είναι ένας πιθανός βιολογικός δείκτης για την πρόβλεψη του καρκίνου του πνεύμονα σε διάφορα μοντέλα όγκων σε ζώα και ανθρώπους.

Μέθοδοι

Φροντίδα ζώων

Όλα τα επιστημονικά πρωτόκολλα που περιλαμβάνουν τη χρήση ζώων έχουν εγκριθεί από την Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και χρήση (IACUC) του Indiana University School of Medicine και ακολούθησε τις κατευθυντήριες γραμμές καθορίζονται από την ομάδα για την ευθανασία της αμερικανικής κτηνιατρικής Ιατρικός Σύλλογος. Τα πρωτόκολλα που αφορούν τη χρήση του ανασυνδυασμένου DNA ή βιολογικά επικίνδυνα υλικά έχουν εγκριθεί από την Επιτροπή για την Βιοασφάλεια του Indiana University School of Medicine και ακολούθησε τις κατευθυντήριες γραμμές καθορίζονται από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας. Τα ζώα στεγάστηκαν κάτω (IACUC) -approved συνθήκες σε ασφαλή εγκατάσταση ζώων στο Indiana University School of Medicine. Όλες οι κυτταρικές ειδικές διαγονιδιακά ποντίκια έχουν περιγραφεί προηγουμένως [1], [2], [3], [4], [5].

ELISA

Για συλλογή ορού ποντικού, το κοιλιακό κοιλότητες δοξυκυκλίνη-επεξεργασμένο ή CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3, CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-ΜΜΡ 12, CCSP-rtTA /(TetO)

7 -CMV-Api6, c-fms-rtTA /(TetO)

7-CMV-Api6 και c-fms-rtTA /(TetO)

7-CMV-ΜΜΡ 12 bitransgenic ποντίκια άνοιξαν μετά από αναισθητοποίηση με τριπλό ηρεμιστικό από ενδοπεριτοναϊκή (ΙΡ) ένεση. Τα δείγματα αίματος ποντικού συλλέχθηκαν από το εσωτερικό κοίλη φλέβα (IVC). Οι οροί διαχωρίστηκαν με φυγοκέντρηση στις 1500 rpm για 10 λεπτά στους 4 ° C. Για τη συλλογή βρογχοκυψελιδικού έκπλυμα (BAL), η τραχεία απομονώθηκε και διασωληνώθηκε με έναν προσαρμογέα luer στέλεχος 20 gauge. Χρησιμοποιώντας μια σύριγγα 1 cc, βρογχοκυψελιδικού εκπλύματος υγρού (BALF) συλλέχθηκε με διάχυση στον πνεύμονα με 1 ml από 0.9% χλωριούχο νάτριο και ανάκλησης πίσω υγρά. BAL υγρά φυγοκεντρήθηκαν για 5 λεπτά στις 1000 rpm και 4 ° C για απομάκρυνση κυτταρικά ιζήματα. Οι συγκεντρώσεις CHI3L1 σε ποντικού και ανθρώπου ορού (50-100 μl) προσδιορίστηκαν με Mouse χιτινάση 3-σαν 1 Quantikine Kit ELISA και Ανθρωπίνων χιτινάση 3-σαν 1 Quantikine ELISA Κιτ σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ) . Τα ανθρώπινα δείγματα ορού των κανονικών αντικειμένων και των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα ελήφθησαν από το Μηχανισμό βιολογικό δείγμα Repository πυρήνα (BRCF) του Αντικαρκινικού Κέντρου Fox Chase στη Φιλαδέλφεια (που υποστηρίζεται από NCI). Τα δείγματα ανθρώπινου ορού αραιώνονται σε 1:100 πριν από τη δοκιμασία.

Δυτική Blotting

Για Stat3C-Flag ανίχνευση πρωτεΐνη σύντηξης, CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3 bitransgenic ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν και οι πνεύμονες αφαιρέθηκαν και ομογενοποιήθηκαν σε δοκιμασία ραδιοανοσοκατακρήμνισης ρυθμιστικό (RIPA). Προϊόντα λύσης του πνεύμονα (10 μg) κλασματώθηκαν επί Novex® 4-20% Τπδ-Γλυκίνης Mini Gel (Invitrogen, Carlsbad, CA). Μετά τη μεταφορά στη μεμβράνη διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου (Bio-Rad, Hercules, CA), η μεμβράνη στυπώθηκε με 5% άπαχο ξηρό γάλα PBS και υβριδοποιήθηκαν με αντι-Flag αντίσωμα κουνελιού (Sigma, St Louis, ΜΟ). Μετά την επώαση με δευτερογενές αντίσωμα, οι πρωτεΐνες ανιχνεύθηκαν με υπόστρωμα χημιφωταύγειας (SuperSignal, Rockford, IL). Για την ανίχνευση της πρωτεΐνης CHI3L1, BALFs από δοξυκυκλίνη-επεξεργασμένο ή CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3 bitransgenic ποντίκια συλλέχθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω και αραιώνεται με Laemmli ρυθμιστικό διάλυμα δείγματος (Bio-Rad, Hercules, CA) σε 1:01, στη συνέχεια θερμάνθηκε σε βραστό νερό για 5 λεπτά. ηλεκτροφόρηση γέλης και υβριδισμού αντισώματος διεξήχθησαν ακολουθώντας την ίδια διαδικασία όπως παραπάνω εκτός του ότι αντι-ποντικού αρουραίου ChI3L1 πρωτογενές αντίσωμα (1:1,000, R &? D, Minneapolis, ΜΝ) και αντι αρουραίου IgG δευτερεύον αντίσωμα αίγας (1:3000, Vector Laboratories, Burlingame, CA) χρησιμοποιήθηκαν. Οι ζώνες πρωτεΐνης έγιναν ορατές με ένα κιτ Vectastain Elite ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA) μετά από μια διαδικασία που συνιστάται από τον κατασκευαστή.

Ανοσοϊστοχημεία και χρώση ανοσοφθορισμού

για ανοσοϊστοχημική χρώση, οι πνεύμονες από δοξυκυκλίνη-επεξεργασμένο ή CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3, CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-ΜΜΡ 12, CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV -Api6, c-fms-rtTA /(TetO)

7-CMV-Api6 και c-fms-rtTA /(TetO)

7-CMV-ΜΜΡ 12 bitransgenic ποντίκια είχαν διογκωθεί με σταθεροποιητικό διάλυμα (4% παραφορμαλδεΰδη , 1 χ PBS), τεμαχίστηκαν, και αποθηκεύεται σε στερεωτικό στους 4 ° C για 24 ώρες όπως περιγράφεται προηγουμένως [8]. Μετά από σταθεροποίηση και ενσωμάτωση σε παραφίνη, κόπηκαν σε τομές ιστών στους 5-μm σε πάχος. . Πολλαπλά τμήματα από κάθε πνεύμονα αποκλείστηκαν με άπαχο γάλα (4% σε 1 χ PBS) για 30 λεπτά, στη συνέχεια επωάστηκαν με αντι-ποντικού αρουραίου CHI3L1 (1:100? R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ) στους 4 ° C όλη τη νύκτα . Τομές ιστού πλύθηκαν και επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένο δευτερεύον αντίσωμα αίγας IgG αντι-αρουραίου. Τα σήματα ανιχνεύτηκαν με ένα κιτ Vectastain Elite ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA) μετά από μια διαδικασία που συνιστά ο κατασκευαστής

Για τη χρώση ανοσοφθορισμού, οι τομές υβριδοποιήθηκαν με αντι-ποντικού ChI3L1 αντίσωμα αρουραίου (R &?. D System) και αντι-ποντικού /80 (Abcam, Cambridge, ΜΑ) αντίσωμα κουνελιού F4 ως πρωτεύοντα αντισώματα. Ένα συζευγμένο με FITC IgG γαϊδάρου αντι-αρουραίου (Santa Cruz, Ντάλας, Τέξας) και μια Cy3-συζευγμένο IgG γαϊδάρου αντι-κουνελιού (Jackson ImmunoResearch, West Grove, ΡΑ) σε αραίωση 1/200 χρησιμοποιήθηκαν ως δεύτερα αντισώματα. Οι τομές συν-βαμμένα με DAPI. Τα πλακίδια εξετάστηκαν κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού Nikon.

Καθαρισμός της πρωτεΐνης σύντηξης Ανασυνδυασμένα CHI3L1

Το μυϊκό πλήρους μήκους

Chi3l1

κωδικοποιητική περιοχή ενισχύθηκε με PCR, και υποκλωνοποιήθηκαν εντός του pEGX 4Τ-1 φορέα (GE επιστημών της ζωής, Pittsburgh, ΡΑ) στις θέσεις ενζύμου περιορισμού NotI /BamHI. πρωτεΐνη σύντηξης CHI3L1 εκφράστηκε σε BL21 Ε coli με 50 μΜ IPTG επαγωγή και καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας γλουταθειόνη Sepharose 4 Fast Flow kit (GE επιστήμη ζωής) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού LLC και προσδιορισμού αννεξίνης V

Lewis του πνεύμονα (LLC) κύτταρα (5 × 10

3 /φρεάτιο) σπάρθηκαν σε 96 πηγαδιών πλάκα με μέσο καλλιέργειας (ϋΜΕΜ + 10% FBS + 1 × PSA, Invitrogen). πρωτεΐνη σύντηξης GST ή GST CHI3L1 (τελική συγκέντρωση 100 ng /ml) προστέθηκε στο μέσο καλλιέργειας. Μετά από 72 ώρες, μετρήθηκαν οι αριθμοί των κυττάρων του πολλαπλασιασμού. Για αποπτωτικών δοκιμασία, κύτταρα LLC (2×10

5 /φρεάτιο) σπάρθηκαν σε 6-πηγαδιών πλάκα με μέσο καλλιέργειας (ϋΜΕΜ + 10% FBS + 1 × PSA, Invitrogen). πρωτεΐνη σύντηξης GST ή GST CHI3L1 (τελική συγκέντρωση 100 ng /ml) προστέθηκε στο μέσο καλλιέργειας. Μετά από 72 ώρες, ο πληθυσμός αποπτωτικό κυτταρικό προσδιορίστηκε με ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη-σημασμένο-αννεξίνης V (FITC-Αηηβχίην) (απόπτωση Detection Kit? BD PharMingen, Bedford, ΜΑ). κύτταρα LLC σε επεξεργασία με GST ή πρωτεΐνη σύντηξης GST-CHI3L1 συλλέχθηκαν και πλύθηκαν δύο φορές με PBS. Μετά την επαναιώρηση των κυττάρων σε ρυθμιστικό V-δέσμευσης αννεξίνης περιέχει FITC-συζευγμένο αννεξίνης V (1:20 αραίωση) και επώαση σε θερμοκρασία δωματίου για 15 λεπτά, βαμμένα κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής όσο το δυνατόν συντομότερα (εντός 1 ώρας).

Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα ήταν μέσες τιμές των πολλαπλών ανεξαρτήτων πειραμάτων και εκφράζονται ως μέσος όρος ± SD. ANOVA και Tukey για μέθοδο που βασίζεται στο επίπεδο συγκέντρωσης log-μετασχηματισμένα χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση της σημασίας των διαφορών. Το ημερολόγιο του μετασχηματισμού σταθεροποιηθεί διακύμανσης και έκανε τα στατιστικά υποθέσεις με τη μέθοδο ANOVA και Tukey είναι πιο πιθανή. ROC (Receiver Operating Χαρακτηριστική) ανάλυση καμπύλης χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της διαγνωστικής ικανότητας του CHI3L1, η οποία ποσοτικοποιείται με την περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC). Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το πακέτο proc στη γλώσσα R [9]. επίπεδο στατιστικής σημαντικότητας ορίστηκε στο p & lt? 0,05. Διαστήματα Εμπιστοσύνης (ΠΙ) κατασκευάστηκαν επίσης για όλες τις εκτιμήσεις. Για την ανάλυση ROC, όταν AUC είναι 1, το 95% CI έχει τόσο κατώτερα και ανώτερα όρια του 1, επειδή η AUC = 1 αντιστοιχεί σε πλήρη διαχωρισμό των δύο ομάδων από CHI3L1 και η κατασκευή CI βασίζεται στην bootstrap διαδικασία.

Αποτελέσματα

Ανάλυση Western Blot της CHI3L1 Έκφραση σε BALF των CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3C Ποντίκια

Όπως έχει ήδη αναφερθεί, CCSP-rtTA /( TetO)

7-CMV-Stat3C ποντίκια είναι μια αυθόρμητη πνεύμονα όγκου ζωικό μοντέλο. Σε αυτό το μοντέλο, η πρωτεΐνη σύντηξης Stat3C-Flag ήταν ιδιαίτερα επάγεται από θεραπεία δοξυκυκλίνη (Σχήμα 1Α), η οποία επιβεβαίωσε προηγούμενες παρατηρήσεις μας με ανοσοϊστοχημική χρώση στον πνεύμονα [1]. Επαγωγή Stat3C επάγεται κατάντη γονίδια (συμπεριλαμβανομένων CHI3L1), πνευμονική φλεγμονή και αδενοκαρκίνωμα [1], [6]. Για να δοκιμαστεί εάν CHI3L1 είναι μία εκκριτική πρωτεΐνη σε αυτό το μοντέλο ποντικού, ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε σε BALF των

7-CMV-Stat3C ποντικούς CCSP-rtTA /(TetO). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, το επίπεδο έκφρασης της πρωτεΐνης CHI3L1 ήταν ανιχνεύσιμη σε BALF δοξυκυκλίνης-χωρίς θεραπεία ποντικούς (-ΟΟΧ, λωρίδες 1, 2, και 3) ως μία ζώνη στα 39 kDa μοριακού βάρους. Σε σύγκριση, το επίπεδο έκφρασης πρωτεΐνης CHI3L1 ήταν αυξημένη σε μία από τις τρεις ποντικούς υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκου (+ DOX, λωρίδα 5), υποδεικνύοντας ότι CHI3L1 έκφραση ανυψώθηκε πριν από τον σχηματισμό του όγκου, και σε όλα τα τέσσερα υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3C ποντικών με όγκο (καρκίνο του πνεύμονα, λωρίδες 7, 8, 9, και 10).

Α) Έκφραση Stat3C-Flag σε ολόκληρη πνεύμονα CCSP-rtTA /(ίείΟ) 7-CMV-Stat3C διπλό διαγονιδιακά ποντίκια. Η ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. WT: άγριο πνεύμονες τύπου ποντίκι? -Dox: Δοξυκυκλίνη ανεπεξέργαστων δίκλινα διαγονιδιακών πνεύμονες ποντίκι? + Dox1 & amp? + Dox2: δοξυκυκλίνη αντιμετωπίζονται πνεύμονες ποντικιού. Β) Η έκφραση της πρωτεΐνης CHI3L1 σε BALF των

7-CMV-Stat3C διπλά διαγονιδιακά ποντίκια CCSP-rtTA /(TetO). Λωρίδα 1-3, δοξυκυκλίνη, χωρίς θεραπεία ποντικούς (Dox-)? Lane 4-6, η δοξυκυκλίνη ποντίκια με αγωγή χωρίς να δείχνει όγκου πνεύμονα (Dox +)? Λωρίδα 7-10, δοξυκυκλίνη αγωγή ποντίκια δείχνει όγκου πνεύμονα (Lung Cancer).

Η

CHI3L1 Συγκέντρωση Πρωτεΐνης σε BALF και ορό από CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3C Ποντίκια

για περισσότερες ποσοτική ανάλυση και ακριβή πρόβλεψη, ELISA χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η συγκέντρωση CHI3L1 σε BALF των άγριου τύπου, δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία, θεραπεία χωρίς όγκο, και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με όγκο CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3C ποντίκια. Η μέση συγκέντρωση ήταν CHI3L1 8.3 ± 6.4 ng /ml σε ποντικούς άγριου τύπου, 8.8 ± 10 ng /ml σε δοξυκυκλίνη-ανεπεξέργαστων

7-CMV-Stat3C ποντικούς CCSP-rtTA /(TetO). Συγκριτικά, η μέση CHI3L1 συγκέντρωση αυξήθηκε περισσότερο από 11 φορές (100,0 ± 49,0 ng /ml, ρ & lt? 0.001) σε ντοξυκυκλίνη αγωγή ποντικούς χωρίς όγκο, υποστηρίζοντας περαιτέρω ότι CHI3L1 έκφραση ανυψώθηκε πριν από τον σχηματισμό του όγκου, και αυξήθηκε περισσότερο από 17 φορές (151,8 ± 67,3 ng /ml, ρ & lt? 0.001) σε ποντίκια που υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη με όγκου (Σχήμα 2, άνω πάνελ). Οι AUCs των καμπυλών ROC είναι 1 (95% CI: 1-1, σ & lt? 0.001) για τη διάκριση ποντίκια δοξυκυκλίνη-αγωγή με όγκο έναντι δοξυκυκλίνη-μη θεραπευμένα ποντίκια, 1 (95% CI: 1-1, σ & lt? 0.001) για δοξυκυκλίνη αγωγή ποντικούς χωρίς όγκο vs. δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς, και 0,74 (95% CI: 0,56 – 0,93, ρ = 0,1). δοξυκυκλίνη αγωγή ποντικών με όγκο έναντι δοξυκυκλίνη ποντίκια με αγωγή χωρίς όγκο

αριστερά: CHI3L1 συγκεντρώσεις πρωτεΐνης σε BALF και ορό της δοξυκυκλίνης-επεξεργασμένων και μη επεξεργασμένων bitransgenic ποντικούς. Δεξιά: ROC (Receiver Operating Χαρακτηριστική) καμπύλη αναλύσεις για να προσδιοριστεί η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC). Dox-: δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς? Dox +: δοξυκυκλίνη ποντίκια με αγωγή χωρίς να δείχνει όγκου πνεύμονα? Καρκίνος, δοξυκυκλίνη ποντίκια με αγωγή με πνευμονική όγκου. Μέση τιμή ± SD στο BAL (n & gt? 13), DOX -: 8,8 ± 10,0, DOX +: 100,0 ± 49,0, Καρκίνος: 151,8 ± 67,3. Μέση τιμή ± SD στον ορό (n & gt? 13), DOX -: 6.2 ± 3.7, DOX +: 33,5 ± 35,6, Καρκίνος: 159,0 ± 90,0. Οι γκρι γραμμές αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές.

Η

Έχουμε δοκιμαστεί περαιτέρω την CHI3L1 συγκέντρωση στο αίμα. Σε σύγκριση με δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς (6.2 ± 3.7 ng /ml), η μέση CHI3L1 συγκέντρωση αυξηθεί περισσότερο από 5 φορές (33,5 ± 35,6 ng /ml, ρ & lt? 0.001) σε ποντίκια που υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκου (σχηματισμός πριν όγκων ), και αυξήθηκε περισσότερο από 26 φορές (159,0 ± 90,0 ng /ml, ρ & lt? 0.001) σε ποντίκια που υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη με όγκου (Σχήμα 2, κάτω τμήμα). Οι AUCs των καμπυλών ROC είναι 0,95 (95% CI: 0,87 – 1, p & lt? 0.001) για τη διάκριση ποντίκια δοξυκυκλίνη-αγωγή με όγκο έναντι δοξυκυκλίνη επεξεργασμένο χωρίς όγκο ποντίκια, 1 (95% CI: 1-1, σ & lt? 0.001) για δοξυκυκλίνη αγωγή ποντικών με όγκο έναντι δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς, και 0,89 (95% CI: 0,77 έως 1, ρ & lt? 0.001) για δοξυκυκλίνη ποντίκια με αγωγή χωρίς όγκο vs. δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς. Το αποτέλεσμα αυτό αποδεικνύει σαφώς ότι η αύξηση του CHI3L1 συγκέντρωση πρωτεΐνης σε BALF και αίμα σχετίζεται με Stat3C προκαλούμενη φλεγμονή και όγκου πνεύμονα. Φαίνεται ότι η αύξηση της πρωτεΐνης CHI3L1 συνέβη πριν από αυθόρμητο σχηματισμό όγκου πνεύμονα στο CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3C μοντέλο ποντικού, ως εκ τούτου, ενδεχομένως να χρησιμεύει ως βιοδείκτες.

CHI3L1 Συγκέντρωση Πρωτεΐνης σε BALF και ορό του περιφερειακού φλεγμονή που προκαλείται από πνεύμονα ζωικά μοντέλα όγκων

Για να δοκιμαστεί εάν εκκριτική πρωτεΐνη CHI3L1 είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω σε μια ευρύτερη εφαρμογή, άλλοι φλεγμονή που προκαλείται από την αυθόρμητη πνεύμονα μοντέλα όγκου ποντικού ελέγχθηκαν. Μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας 12 (ΜΜΡ12) είναι μια προκαλούμενη από το κάπνισμα μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας. Υπερ-έκφραση του ΜΜΡ12 τύπου πνεύμονα κυψελιδικά II επιθηλιακά κύτταρα επάγεται τοπική φλεγμονή, εμφύσημα και όγκου του πνεύμονα [3]. Στην CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-ΜΜΡ12 αυθόρμητης πνεύμονα μοντέλο ποντικού όγκου, η μέση CHI3L1 συγκέντρωση σε BALF δοξυκυκλίνης αγωγή ποντικών με όγκο ήταν 3 φορές υψηλότερη (159.7 ± 22.4 ng /ml) σε σύγκριση με ότι σε BALF δοξυκυκλίνης-χωρίς θεραπεία ποντικούς (49,6 ± 22,8 ng /ml, ρ & lt? 0.001, Σχήμα 3Α, πάνω αριστερά πάνελ). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ ποντικών υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκου (49,4 ± 18,1 ng /ml, ρ = 0.954) και δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς. Ένα παρόμοιο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε στον ορό των ποντικών που προκαλείται από ΜΜΡ12 όγκου (Σχήμα 3Α, κάτω αριστερά πλαίσιο). ανάλυση ROC έδειξε εντυπωσιακή ικανότητα συγκέντρωσης CHI3L1 σε διάκριση με την ομάδα του όγκου με την ομάδα μη-όγκου και την δοξυκυκλίνη-ομάδα άνευ αγωγής. Οι AUCs είναι 1 (95% CI: 1-1, ρ & lt? 0.001) στην ομάδα δοξυκυκλίνη αγωγή με όγκο εναντίον ομάδα υπό αγωγή χωρίς όγκο και σε υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη ομάδα με όγκο έναντι δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ομάδα, και 0,52 (95% CI: 0,29 – 0,75, p = 0,46) στην ομάδα δοξυκυκλίνη αγωγή χωρίς όγκο έναντι dxycycline-χωρίς θεραπεία ομάδα (Σχήμα 3Α, πάνω δεξιά πάνελ). Ένα παρόμοιο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε στον ορό CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-ΜΜΡ12 μοντέλο ποντικού αυθόρμητη όγκου πνεύμονα (Σχήμα 3Α, κάτω δεξιά πλαίσιο)

Αριστερά:. CHI3L1 συγκεντρώσεις πρωτεΐνης σε BALF και ορό της δοξυκυκλίνης-επεξεργασμένων και μη επεξεργασμένων bitransgenic ποντικούς. Δεξιά: ROC (Receiver Operating Χαρακτηριστική) καμπύλη αναλύσεις για να προσδιοριστεί η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC). Dox-: δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς? Dox +: δοξυκυκλίνη ποντίκια με αγωγή χωρίς να δείχνει όγκου πνεύμονα? Καρκίνος, δοξυκυκλίνη ποντίκια με αγωγή με πνευμονική όγκου. Α) CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-ΜΜΡ12 ποντίκια. Μέση τιμή ± SD στο BAL (n & gt? 7), DOX -: 49,6 ± 22,8, DOX +: 49.4 ± 18.1, Καρκίνος: 159,7 ± 22,4. Μέση τιμή ± SD στον ορό (n & gt? 7), DOX -: 18,6 ± 10,9, DOX +: 18.2 ± 4.6, Καρκίνος: 61,4 ± 33,5. Οι γκρι γραμμές αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές? Β) CCSP-rtTA /(TetO)

ποντίκια 7-CMV-Api6. Μέση τιμή ± SD στο BAL (n & gt? 3), DOX -: 82,4 ± 37,1, DOX +: 93,8 ± 23,0, Καρκίνος: 409,8 ± 49,2. Μέση τιμή ± SD στον ορό (n & gt? 3), DOX -: 14.0 ± 7.2, DOX +: 30,7 ± 43,1, Καρκίνος: 295.2 ± 194.0. Οι γκρι γραμμές αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές.

Η

Η απόπτωση αναστολέα 6 (Api6) είναι μια άλλη προ-φλεγμονώδης μόριο που επάγει φλεγμονή και όγκου πνεύμονα όταν υπερ-εκφράζονται σε τύπου πνεύμονα κυψελιδικά II επιθηλιακά κύτταρα [5]. Στην CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Api6 αυθόρμητης όγκου πνεύμονα μοντέλο ποντικού, η μέση CHI3L1 συγκέντρωση σε BALF δοξυκυκλίνης αγωγή ποντικών με όγκο ήταν 409,8 ± 49,2 ng /ml, σε σύγκριση με ότι σε BALF των δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς (82,4 ± 37,1 ng /ml, ρ & lt? 0.001, Εικόνα 3Β, το ανώτερο αριστερό πλαίσιο). Ομοίως, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ ποντικών υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκου (93,8 ± 23,9 ng /ml, ρ = 0.364) και δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς. Ένα παρόμοιο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε επίσης στον ορό του Api6 επαγόμενης όγκους ποντίκια (Σχήμα 3Β, κάτω αριστερά πλαίσιο). Οι AUCs από την ανάλυση ROC είναι 1 (95% CI: 1-1, ρ & lt? 0.001) σε ντοξυκυκλίνη αγωγή ομάδα με όγκο έναντι ομάδα υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκο και σε υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη ομάδα με όγκο έναντι δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ομάδα και 0,68 (95% CI: 0,45 – 0,90, ρ = 0,22) για την ομάδα υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκο έναντι δοξυκυκλίνη-ομάδα άνευ αγωγής (Σχήμα 3Β, το ανώτερο δεξί πάνελ). Ένα παρόμοιο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε επίσης στον ορό του CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Api6 αυθόρμητης όγκου πνεύμονα μοντέλο ποντικού, Εικόνα 3Β, κάτω δεξιά πλαίσιο).

CHI3L1 Συγκέντρωση Πρωτεΐνης σε BALF και ορό συστηματικής φλεγμονής που προκαλείται από πνεύμονα ζωικά μοντέλα όγκων

σε αντίθεση με πνευμονική περιφερειακή φλεγμονώδη ζωικά μοντέλα, όταν ΜΜΡ12 ή Api6 υπερεκφράστηκε σε μυελοειδή κύτταρα, συστηματική φλεγμονή ξεκινά από δυσμορφία και δυσλειτουργία του μυελοποίησης από το μυελού των οστών. σχηματισμό όγκου πνεύμονα παρατηρήθηκε σε τόσο ΜΜΡ12 και Api6 bitransgenic μοντέλα ποντικών [2], [4]. Αυτό αντιπροσωπεύει ένα διαφορετικό κυτταρικός μηχανισμός για το σχηματισμό του καρκίνου του πνεύμονα. Στην c-fms-rtTA /(TetO)

7-CMV-ΜΜΡ12 αυθόρμητης όγκου πνεύμονα μοντέλο ποντικού, η μέση CHI3L1 συγκέντρωση σε BALF δοξυκυκλίνης αγωγή ποντικών με όγκο (70,9 ± 36,5 ng /ml) 4-πλάσια αυξάνουν σε σύγκριση με εκείνη σε BALF δοξυκυκλίνης-χωρίς θεραπεία ποντικούς (17,7 ± 13,8 ng /ml, ρ = 0.027, Εικόνα 4Α, άνω αριστερό πλαίσιο). Η δοξυκυκλίνη αγωγή ποντικούς χωρίς όγκο (42,1 ± 67,9 ng /ml, ρ = 0.043, Εικόνα 4 Α) έδειξαν επίσης την αυξημένη συγκέντρωση CHI3L1 σύγκριση με δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς. Ένα παρόμοιο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε στον ορό του c-fms-rtTA /(ίείΟ)

7-CMV-ΜΜΡ12 αυθόρμητο μοντέλο ποντικού όγκου πνεύμονα με όγκου (Σχήμα 4, κάτω αριστερά πλαίσιο), στην οποία ο μέσος CHI3L1 συγκέντρωση ήταν πιο από 6 φορές υψηλότερη σε ποντικούς όγκου από εκείνη των ποντικών ελέγχου δοξυκυκλίνης-χωρίς θεραπεία. Οι AUCs από την ανάλυση ROC ήταν 0,82 (95% CI, 0,62 – 1, p = 0,05) στην ομάδα δοξυκυκλίνη-αγωγή με όγκο εναντίον ομάδας δοξυκυκλίνη επεξεργασμένο χωρίς όγκο, 0,94 (95% CI, 0,82 – 1, p & lt? 0.001 ) σε ντοξυκυκλίνη αγωγή ομάδα με όγκο έναντι δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ομάδα, και 0,45 (95% CI, 0,17 – 0,73, ρ = 0,57) για την ομάδα υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκο έναντι δοξυκυκλίνη-ομάδα άνευ αγωγής (Σχήμα 4Α, πάνω δεξιά πάνελ ). Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν για δείγματα ορού του c-fms-rtTA /(ίείΟ)

7-CMV-ΜΜΡ12 αυθόρμητο μοντέλο ποντικού όγκου πνεύμονα (Σχήμα 4Α, κάτω δεξί πάνελ)

Αριστερά:. Συγκεντρώσεις CHI3L1 πρωτεΐνη σε BALF και ορό της δοξυκυκλίνης-επεξεργασμένων και μη επεξεργασμένων bitransgenic ποντικούς. Δεξιά: ROC (Receiver Operating Χαρακτηριστική) καμπύλη αναλύσεις για να προσδιοριστεί η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC). Dox-: δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς? Dox +: δοξυκυκλίνη ποντίκια με αγωγή χωρίς να δείχνει όγκου πνεύμονα? Καρκίνος, δοξυκυκλίνη ποντίκια με αγωγή με πνευμονική όγκου. Α) c-fms-rtTA /(TetO)

ποντίκια 7-CMV-ΜΜΡ12. Μέση τιμή ± SD στο BAL (n & gt? 7), DOX -: 17,7 ± 13,8, DOX +: 42,1 ± 67,9, Καρκίνος: 70,9 ± 36,5. Μέση τιμή ± SD στον ορό (n & gt? 7), DOX -: 39,1 ± 25,6, DOX +: 57,7 ± 55,5, Καρκίνος: 232,3 ± 110,6. Οι γκρι γραμμές αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές? Β) γ-FMS-rtTA /(TetO)

ποντίκια 7-CMV-Api6. Μέση τιμή ± SD στο BAL (n & gt? 6), DOX -: 69,6 ± 16,6, DOX +: 73,2 ± 28,1, Καρκίνος: 189,9 ± 47,2. Μέση τιμή ± SD στον ορό (n & gt? 6), DOX -: 25.2 ± 7.3, DOX +: 21,0 ± 11,7, Καρκίνος: 69,5 ± 19,1. Οι γκρι γραμμές αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές.

Η

Στο γ-FMS-rtTA /(TetO)

7-CMV-Api6 αυθόρμητη πνεύμονα μοντέλο ποντικού όγκου, η μέση CHI3L1 συγκέντρωση σε BALF των δοξυκυκλίνη κατεργασμένα ποντίκια με όγκο (189,6 ± 47,2 ng /ml) ήταν -3 φορές υψηλότερη από ότι σε BALF δοξυκυκλίνης-χωρίς θεραπεία ποντικούς (69,6 ± 16,6 pg /ml, ρ = 0.002, Εικόνα 4Β, άνω αριστερό πλαίσιο). Ομοίως, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ ποντικών υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκου (73,2 ± 28,1 ng /ml, ρ & lt? 0.001) και δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς. Ένα παρόμοιο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε επίσης στον ορό του Api6 επαγόμενης όγκους ποντίκια (Σχήμα 4Β, κάτω αριστερό πλαίσιο), στην οποία ο μέσος CHI3L1 συγκέντρωση ήταν 3 φορές υψηλότερη σε ποντικούς όγκου από εκείνη των ποντικών ελέγχου δοξυκυκλίνης-χωρίς θεραπεία. Οι AUCs από την ανάλυση ROC είναι 1 στις υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη ομάδα με όγκο έναντι ομάδα υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκο, 1 στην υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη ομάδα με όγκο έναντι δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ομάδα, και 0,6 (95% CI, 0,34 – 0,86, p = 0,35) για την ομάδα υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη χωρίς όγκο vs. ομάδα άνευ αγωγής (Σχήμα 4Β, άνω δεξιά πάνελ). Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν για δείγματα ορού του c-fms-rtTA /(TetO)

7-CMV-Api6 αυθόρμητο μοντέλο ποντικού όγκου πνεύμονα (Σχήμα 4Β, κάτω δεξιά πλαίσιο).

Lung Ανοσοϊστολογία

είναι σημαντικό να εντοπίσετε όπου CHI3L1 εκφράζεται στον πνεύμονα του παραπάνω αυθόρμητη πνεύμονα μοντέλα ποντικιών όγκου. τομές πνεύμονα ιστού από δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς, κατεργασμένους χωρίς όγκο, και τα επεξεργασμένα με με τα ποντίκια όγκου ανοσοϊστοχημικά χρωματίστηκαν με αντι-CHI3L1 αντίσωμα. Σε δοξυκυκλίνη-μη επεξεργασμένα CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3C ποντικούς, CHI3L1 εκφράστηκε κυρίως σε επιθηλιακά κύτταρα κατά μήκος των αγώγιμων αναπνευστικών οδών (Σχήμα 5 Α α), περιφερική βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα (Σχήμα 5Α β), και κυψελιδικά τύπου II επιθηλιακά κύτταρα (Σχήμα 5 Α γ) (κόκκινα βέλη). CHI3L1 εκφράστηκε επίσης στα κυψελιδικά μακροφάγα. Σε υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη CCSP-rtTA /(TetO) ποντικοί

7-CMV-Stat3C όταν φλεγμονή προκλήθηκε αλλά χωρίς εμφάνιση όγκων, κάποιες περιοχές έδειξαν αναδιαμόρφωση ιστού (Σχήμα 5Α ε) και το εμφύσημα (Σχήμα 5Α στ). Σχεδόν όλα διείσδυση μακροφάγων βάφτηκαν θετικά με CHI3L1 (Σχήμα 5Α e, πράσινο βέλος). Σε υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη

7-CMV-Stat3C ποντικών με εμφάνιση όγκων CCSP-rtTA /(TetO), CHI3L1 έκφραση ανιχνεύθηκε σε κύτταρα όγκου και του περιβάλλοντος των μακροφάγων (Σχήμα 5Α g, h, i). Συν-εντοπισμό των CHI3L1 στα κυψελιδικά μακροφάγα επιβεβαιώθηκε περαιτέρω στον πνεύμονα δοξυκυκλίνης αγωγή bitransgenic ποντικών με αντι-CHI3L1 και αντι-F4 /80 αντισώματα σε χρώση ανοσοφθορισμού. Ένα αντιπροσωπευτικό αποτέλεσμα από CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3C ποντίκια παρουσιάστηκε στο σχήμα 6.

Α) Η ανοσοϊστοχημική χρώση στους πνεύμονες δοξυκυκλίνης-επεξεργασμένα ή μη επεξεργασμένα CCSP-rtTA /( TetO)

7-CMV-Stat3C ποντίκια? Β) Η ανοσοϊστοχημική χρώση των περιοχών του όγκου στους πνεύμονες των υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη

7-CMV-ΜΜΡ12 ποντίκια, c-fms-rtTA /(TetO)

7-CMV-ΜΜΡ12 ποντικούς CCSP-rtTA /(TetO), και γ-FMS-rtTA /(TetO)

ποντίκια 7-CMV-Api6. -Dox: Δοξυκυκλίνη-χωρίς θεραπεία ποντικούς? + Dox:. Ποντίκια δοξυκυκλίνη επεξεργασμένο

Η

CCSP-rtTA /(TetO)

7-CMV-Stat3C bitransgenic ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή (+ ΔΟΞ) ή χωρίς θεραπεία (-ΟΟΧ) με δοξυκυκλίνη. χρώση ανοσοφθορισμού των τμημάτων του πνεύμονα διεξήχθη χρησιμοποιώντας αντι-CHI3L1 και F4 /80 αντισώματα. Συν-εντοπισμό και των δύο χρώσης παρατηρήθηκε στην συγχωνευθείσα εικόνα. Ράβδος αντιπροσωπεύει 20 μm.

Η

Οι παρατηρήσεις αυτές ήταν σε μεγάλο βαθμό επαναλαμβανόμενη σε άλλες ΜΜΡ 12 και Api6 που προκαλείται από την αυθόρμητη πνεύμονα μοντέλα ποντικιών όγκου. Ανεξάρτητα από όγκου πνεύμονα κινήθηκε από κυψελιδικά κύτταρα τύπου II ή μυελοειδή κύτταρα, CHI3L1 ήταν υπερ-εκφράζεται σε κύτταρα όγκου αυτών των ΜΜΡ12 και Api6 επαγόμενη αυθόρμητη πνεύμονα μοντέλα ποντικιών όγκου. Τα μακροφάγα που περιβάλλει το εμφύσημα (Σχήμα 5Β c, g, k) και κυττάρων όγκου (Σχήμα 5Β b, e, f, i) έχουν επίσης έντονα χρωματισμένο με αντι-CHI3L1 αντίσωμα (πράσινο βέλος). Αυτό μπορεί να εξηγήσει γιατί η συγκέντρωση CHI3L1 ήταν υψηλότερη τόσο BALF και το αίμα των ποντικών όγκου.

CHI3L1 διέγερση σε καρκινικά κύτταρα

Για να ελέγξετε εάν CHI3L1 κατέχει τη διεγερτική επίδραση στον καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων, ανασυνδυασμένη CHI3L1 -GST πρωτεΐνη σύντηξης και της πρωτεΐνης GST παρασκευάστηκαν και καθαρίστηκαν από τα βακτήρια (Σχήμα 7Α). Η ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη σύντηξης CHI3L1-GST ή GST ελέγχου πρωτεΐνη επωάστηκε με κύτταρα LLC. πρωτεΐνη σύντηξης CHI3L1-GST διεγείρεται σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων σε σύγκριση με εκείνη των πρωτεϊνών ελέγχου GST (Σχήμα 7Β). Η αποπτωτική δραστικότητα του CHI3L1-GST κύτταρα LLC αγωγή πρωτεΐνη σύντηξης ήταν μειωμένη σε σύγκριση με εκείνη των πρωτεϊνών ελέγχου GST (Σχήμα 7C). Αυτό υποστηρίζει μια έννοια που CHI3L1 διεγείρει τον πολλαπλασιασμό και την ανάπτυξη του καρκίνου του πνεύμονα

Α) Καθαρότητα της ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη σύντηξης CHI3L1-Flag (πάνω βέλος).? Β) πολλαπλασιασμός κυττάρων LLC σε επεξεργασία με GST πρωτεΐνη σύντηξης ή CHI3L1-GST? Γ) Η αποπτωτική δραστικότητα των κυττάρων LLC σε επεξεργασία με GST πρωτεΐνη σύντηξης ή CHI3L1-GST με δοκιμασία επισήμανση Annexin V. *, P & lt? 0,05, **, Ρ & lt?. 0.01

Η

CHI3L1 Πρωτεΐνη Συγκέντρωση στον ορό από το Human καρκίνο του πνεύμονα

Από συγκέντρωση CHI3L1 πρωτεΐνης συσχετίζεται πολύ καλά με την εμφάνιση όγκων σε δύο περιφερειακών φλεγμονή και συστηματική φλεγμονή που ξεκίνησε αυθόρμητα πνεύμονα μοντέλα ποντικών όγκου, είναι ενδιαφέρον να προσδιοριστεί αν η παρατήρηση αυτή μπορεί να επαναληφθεί σε ανθρώπους. Περίπου 30 δείγματα ορού από ασθενείς ανθρώπους του αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα, του πνεύμονα πλακώδους καρκινώματος και μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα δοκιμάστηκαν με ELISA. Σε σύγκριση με δείγματα ανθρώπινου ορού χωρίς καρκίνο (κανονικό), η συγκέντρωση πρωτεΐνης CHI3L1 ήταν σημαντικά αυξημένα σε δείγματα ανθρώπινου ορού από όλες τις κατηγορίες των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα (Σχήμα 8, άνω πάνελ). Οι τιμές AUC είναι 0,83 (95% διάστημα εμπιστοσύνης, 0,69 – 0,92, P = 0,005) για αδενοκαρκίνωμα έναντι του ελέγχου, 0,87 (95% διάστημα εμπιστοσύνης, 0,77 – 0,97, P & lt? 0.001) για πλακώδες καρκίνωμα έναντι του ελέγχου, και 0,81 (95 % διάστημα εμπιστοσύνης, 0,72 έως 0,94, Ρ = 0,001) για μικροκυτταρικό καρκίνωμα vs ελέγχου (Σχήμα 8, κάτω πλαίσιο)

Επάνω:. CHI3L1 συγκεντρώσεις πρωτεΐνης σε ανθρώπινο ορό. Κάτω: ROC (Receiver Operating Χαρακτηριστική) ανάλυση καμπύλη να προσδιοριστεί η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC). Μέση τιμή ± SD στον έλεγχο (n & gt? 30): 17.3 ± 7.8. Μέση τιμή ± SD σε αδενοκαρκίνωμα (n & gt? 30): 66,9 ± 64,8. Η μέση ± SD σε πλακώδες καρκίνωμα (n & gt? 30): 69,3 ± 69,0. Η μέση ± SD σε μικροκυτταρικό καρκίνο (n & gt? 30): 56,3 ± 58,8. Οι γκρι γραμμές αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές. Ελέγχου:. Κανονική ανθρώπινη χωρίς καρκίνο

Η

Συζήτηση

CHI3L1 εντοπίστηκε για πρώτη φορά ως κατάντη γονίδιο της Stat3 στην CCSP-rtTA /(ίείΟ)

7Stat3C αυθόρμητη πνεύμονα ποντικού όγκου μοντέλο από Affymetrix GeneChip μικροσυστοιχιών [1].