Αφηρημένο

Ιστορικό

Η οικογένεια του δάκτυλο ψευδαργύρου που περιέχουν μεταγραφή GATA παράγοντες θεατρικά έργα κρίσιμους ρόλους στην προδιαγραφή κυτταρική γραμμή κατά τη διάρκεια της πρώιμης εμβρυϊκής ανάπτυξης και σχηματισμού οργάνων. GATA4 και GATA6 βρέθηκαν να χαθεί συχνά στον καρκίνο των ωοθηκών, και η απώλεια προτείνεται να λογοδοτήσουν για αποδιαφοροποίηση των καρκινικών κυττάρων.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Εμείς διερευνηθεί περαιτέρω η έκφραση της GATA4 και GATA6 σε βλάβες των ωοθηκών επιφάνεια του επιθηλίου και ιστολογική υποτύπους των καρκινωμάτων των ωοθηκών με ανοσοχρώση. GATA4 και GATA6 βρέθηκαν να είναι απούσα σε υψηλά ποσοστά (80 έως 90%) του ορώδες, σαφείς κυττάρων, και καρκίνο των ωοθηκών ενδομητριοειδές εξετάστηκαν. Σε αντίθεση, και οι δύο βρέθηκαν θετικά σε 11 από 12 περιπτώσεις βλεννώδες καρκίνωμα, προτείνοντας την έκφραση των παραγόντων GATA μπορεί να διακρίνει τον καρκίνο βλεννώδες από άλλες ιστολογικές υποτύπους. GATA4 ήταν συχνά χάνεται σε προ-νεοπλασματικών αλλοιώσεων όπως μορφολογικά φυσιολογικό κύστες ένταξης και της επιθηλιακής υπερπλασίας δίπλα σε κακοήθη κύτταρα. Η απώλεια GATA6 συσχετίζεται στενά με νεοπλασματική μορφολογικό μετασχηματισμό των επιθηλίων επιφανείας των ωοθηκών. Στον πολιτισμό, η έκφραση GATA4 προοδευτικά μειώθηκε κατά επανεμφυτεύοντας επιθηλιακά κύτταρα του πρωτογενούς επιφάνεια των ωοθηκών, που συσχετίζεται με τις αλλαγές στην ιστόνης τροποποίηση του τόπου GATA4. Μια μειωμένη γονίδιο GATA6 δοσολογία όπως και στην GATA6 (+/-) ποντίκια οδήγησε σε μια αύξηση της προ-νεοπλασματικές αλλοιώσεις και κύστεις ένταξη στις ωοθήκες, γεγονός που υποδηλώνει την απώλεια GATA6 συμβάλλει στην ανάπτυξη του καρκίνου των ωοθηκών.

Συμπεράσματα /Σημασία

Αυτή η μελέτη δείχνει ότι η κατάσταση έκφρασης του GATA4 και GATA6 μπορεί να υπαγορεύουν διακριτές παθολογικές οδούς που οδηγούν σε ορώδες ή βλεννώδες καρκίνωμα ωοθηκών. Το εύκολα απώλεια της έκφρασης GATA4 μέσω αλλαγών στη χρωματίνη διαμόρφωση υποδηλώνει μια πιθανή μη φαινοτυπική την έναρξη της εκδήλωσης, που οδηγεί σε επακόλουθη απώλεια GATA6, μορφολογικό μετασχηματισμό, και την τελική ογκογένεση

Παράθεση:. Cai KQ, Caslini C, Capo- Chichi CD, Slater C, Smith ER, Wu H, et al. (2009) Απώλεια GATA4 και GATA6 Έκφραση Καθορίζει καρκίνου των ωοθηκών ιστολογική υπότυποι και προηγείται νεοπλασματικό μετασχηματισμό των ωοθηκών Surface επιθήλια. PLoS ONE 4 (7): e6454. doi: 10.1371 /journal.pone.0006454

Επιμέλεια: Sudhansu Kumar Dey, Ίδρυμα Έρευνας Σινσινάτι των παιδιών, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 24 Απριλίου του 2009? Αποδεκτές: 23 Ιούν 2009? Δημοσιεύθηκε: 31 Ιουλ 2009

Copyright: © 2009 Cai et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτές οι μελέτες υποστηρίχθηκαν από τα ταμεία από επιχορηγήσεις R01 CA095071, CA79716 και CA75389 να XX Xu, και κονδύλια από καρκίνο των ωοθηκών SPORE P50 CA83638 (RF Ozols, PI), και Core Grant # CA006927. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ωοθηκών επιθηλιακού καρκίνου γενικά πιστεύεται ότι προκύπτουν από την coelomic επιθήλιο που καλύπτει την επιφάνεια της ωοθήκης [1], [2] ή από κύστεις συμπερίληψη που επίσης πιστεύεται ότι προέρχονται από την επιφάνεια επιθήλιο των ωοθηκών [3], [4 ]. Ωστόσο, υπάρχουν επίσης ισχυρά επιχειρήματα ότι τουλάχιστον μερικά από τα επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών προέρχονται από κύτταρα πλην της επιφάνειας επιθήλια [5], [6], [7]. Πολλές διαφορετικές ιστολογικές υποτύπους μπορούν να ταξινομηθούν με βάση την μορφολογία των κυττάρων: αυτοί είναι ορώδες, βλεννώδες, σαφείς κυττάρων, και endometroid υποτύπους [8], [9]. Μια ιδέα για να εξηγήσει τις διαφορετικές ιστολογικές υποτύπους είναι ότι η επιφάνεια των ωοθηκών επιθηλιακά κύτταρα υφίστανται μεταπλασία να υιοθετήσουν διάφορα ιστολογικά χαρακτηριστικά κατά τη διάρκεια του μετασχηματισμού [2], [8]. Μια άλλη ιδέα είναι ότι ο καρκίνος των ωοθηκών μπορεί να προκύψουν από τα υπολείμματα των πόρων του Muller δομές αγωγού [6], η οποία είναι πρόδρομοι των σαλπίγγων, του τραχήλου, της μήτρας, κλπ, και μπορεί να παρουσιάσει ως το σύνολο των ιστολογικών υποτύπων σε όγκους. Πράγματι, πρόσφατες παρατηρήσεις οδηγούν στην υπόθεση ότι ένα σημαντικό μέρος των ορώδες καρκίνωμα των ωοθηκών μπορεί να προέρχονται από τις σάλπιγγες [5], [7], οι οποίες έχουν ορώδες όπως επιθηλιακά κύτταρα.

Παρά το γεγονός ότι ορισμένα χαρακτηριστικά των πρόδρομων κυττάρων μπορεί να διατηρούν, η διάκριση των καρκινικών κυττάρων από πρόδρομα κύτταρα είναι προφανής, και αρκετές χαρακτηριστικά των νεοπλασματικών κυττάρων έχουν αναγνωριστεί [10]. Μοναδικά γενετικές μεταλλάξεις είναι η βάση για τις νεοπλασματικές φαινοτύπους [11] – [13], και επιπροσθέτως τα καρκινικά κύτταρα εμφανίζονται συχνά σε ένα ακατάλληλα διαφοροποιημένη στάδιο, και ο όρος «αποδιαφοροποίηση» χρησιμοποιείται συχνά [14] – [16]. Ο φαινότυπος που περιγράφεται ως «αδιαφοροποίητα» ή «αποδιαφοροποιημένα» του καρκίνου των ωοθηκών, αναφέρεται συχνά στις εμφανείς μεταβολές των καρκινικών κυττάρων προς μία λιγότερο σαν επιθηλιακά μορφολογία ή παρασυρόμενο από τα πρόδρομα κύτταρα. Προκειμένου να υπάρξει ένα μοριακό ερμηνεία του «αποδιαφοροποίηση» των καρκινικών κυττάρων, μπορεί κανείς να εξετάσει την έννοια της διαφοροποίησης των κυττάρων γράμμωσης εξέχουσα στην αναπτυξιακή βιολογία, στην οποία ένα αρχέγονο κύτταρο υφίσταται αλλαγές στην παγκόσμια προφίλ γονιδιακής έκφρασης του προς ένα συγκεκριμένο ώριμο κυτταρικό τύπο. Κατ ‘αναλογία, αποδιαφοροποίηση των καρκινικών κυττάρων μπορεί να προκληθεί από την απώλεια ενός ή περισσότερα κρίσιμα γονίδια που είναι βασικά στην επαγωγή της διαφοροποίησης ενός αρχέγονου κυτταρικού τύπου για να δώσουν τα επιφανειακά επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών. Πρόσφατες μελέτες δείχνουν την απώλεια της GATA6 παράγοντα μεταγραφής και GATA4 στον καρκίνο των ωοθηκών μπορεί να ευθύνεται για την απώλεια των επιθηλιακών χαρακτηριστικά και μπορεί να είναι ο υποκείμενος μηχανισμός του «αποδιαφοροποίηση» των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών [17], [18].

Οι παράγοντες μεταγραφής ΟΑΤΑ δεσμεύουν μία αλληλουχία /TGATAA /G συναίνεση Α σε υποκινητές και διατηρούνται σε έντομα και σπονδυλωτά, από μύγα στον άνθρωπο [19]. GATA4 και GATA6 εκφράζονται στα περισσότερα όργανα, και να παίξει κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη αυτών των οργάνων [20], [21]. GATA4 και GATA6 πρώτα εκφράζονται κατά την διάρκεια του σχηματισμού του extraembryonic ενδοδέρματος διαφοροποιούνται από τα πολυδύναμα εμβρυϊκά βλαστοκύτταρα της εσωτερικής κυτταρικής μάζας κατά τη διάρκεια της πρώιμης εμβρυϊκής ανάπτυξης [22] – [25]. GATA παράγοντες δεν είναι ιστο-ειδική, αλλά μάλλον λειτουργία στην περιγραφή και διαφοροποίηση των κυτταρικών γραμμών μέσα σε ένα όργανο, όπως η διαφοροποίηση ενός επιθηλιακού κυττάρου γράμμωσης από στρωματικά κύτταρα. GATA4 και GATA6 εκφράζονται σε ανθρώπινα κύτταρα ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακών [17], [18], και κατά πάσα πιθανότητα, GATA4 και GATA6 είναι σημαντικά για το σχηματισμό και τη διατήρηση του διαφοροποιημένου κατάσταση των επιφανειακών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών. GATA4 και GATA6 συχνά χάνονται σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών [17], [26], και πιθανολογείται ότι η απώλεια αυτών των εξελικτικά σημαντικούς παράγοντες μεταγραφής μπορεί να είναι ο υποκείμενος μηχανισμός του αποδιαφοροποίηση [17], [18].

Είτε GATA6 είναι σημαντική για το σχηματισμό της επιφάνειας επιθηλίου των ωοθηκών είναι άγνωστη, αφού λίγα είναι γνωστά για την παραγωγή των επιφανειακών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών. Και οι δύο πρωτεΐνες GATA4 και GATA6 εκφράζεται σε κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακών αλλά απουσιάζει στα περισσότερα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών [17], [18], [26]. Βρήκαμε με δοκιμασία τσιπ που ο Η3 και Η4 ιστόνης ακετυλίωση της θέσεως GATA4 μειωθεί σημαντικά σε καρκινικά κύτταρα σε σύγκριση με τα κύτταρα GATA4 θετικών μη-όγκου [18]. Σε αντίθεση, ιστόνη Η3 και Η4 ακετυλίωση του τόπου GATA6 σε πολλά καρκινικά κύτταρα δεν μειώθηκε και ίχνη GATA6 mRNA θα μπορούσε να ανιχνευθεί με RT-PCR, υποδεικνύοντας ότι το γονίδιο GATA6 δεν μεταγραφικώς σίγαση αλλά το μήνυμα καταστέλλεται από άλλο μηχανισμό (s ) [18].

Λίγες στόχους μεταγραφή για τους παράγοντες GATA έχουν εντοπιστεί, και άτομα με ειδικές ανάγκες-2 (dAb2) είναι ένα γνωστό στόχο μεταγραφή του GATA6 [27]. DAb2 επίσης βρέθηκε χάνεται στον καρκίνο των ωοθηκών [28], συσχετίζοντας με την απουσία GATA6 και μορφολογικό μετασχηματισμό [18]. DAb2 ανεπάρκεια σε ποντίκια οδηγεί σε πρώιμη εμβρυϊκή θνησιμότητα [29] – [31], και ετερόζυγα dAb2 μεταλλαγμένα ποντίκια αναπτύσσουν προ-νεοπλασματικές αλλοιώσεις από την επιφάνεια επιθήλια των ωοθηκών [32]. DAb2 είναι μια πρωτεΐνη προσαρμογέα που εμπλέκονται στην ενδοκυτταρική διακίνηση και dAb2 παίζει ρόλο στην ίδρυση επιθηλιακά πολικότητα και την επιφάνεια τοποθέτησης [33]. Απώλεια dAb2 πιστεύεται ότι προκαλεί μορφολογικό μετασχηματισμό των επιφανειακών επιθηλίων των ωοθηκών [34], [35]. Έτσι, η κερδοσκοπία είναι ότι η απώλεια της GATA6 θα οδηγήσει σε απώλεια της dAb2 και νεοπλασματικών μορφολογική μετατροπή των επιθήλια επιφάνεια των ωοθηκών.

Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε περαιτέρω τις λεπτομέρειες της GATA4 και της έκφρασης GATA6 στη ωοθηκών ιστούς και τον καρκίνο και εξέτασε τον αντίκτυπο της μείωσης των GATA6 σε ποντίκια για μετατροπή της επιφάνειας του επιθηλίου των ωοθηκών.

Αποτελέσματα

η έκφραση της GATA4 και GATA6 στον καρκίνο των ωοθηκών ιστολογικών υποτύπων

στο παρελθόν, τόσο GATA4 και GATA6 παρατηρήθηκαν να εκφράζονται έντονα σε πρωτογενή κύτταρα επιφάνεια επιθηλιακών ωοθηκών αλλά απουσιάζει σε καλλιεργημένα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών τόσο κηλίδος Western για να εξετάσει την πρωτεΐνη ή Northern blot για τη μέτρηση mRNA [17], [18].

Με περαιτέρω ανάπτυξη αντισωμάτων και τελειοποίηση της διαδικασίας χρώσης, διενεργήσαμε ανοσοϊστοχημική ανάλυση για την έκφραση GATA4 και GATA6 σε ένα πάνελ των ωοθηκών μη νεοπλασματικών και καρκινικούς ιστούς σε μικροσυστοιχία ιστού (Πίνακας 1). Πρόσθετες 26 μη καρκίνο των ωοθηκών ιστοί από την προφυλακτική σαλπιγγοωοθηκεκτομή χρησιμοποιήθηκαν επίσης στη μελέτη αυτή. Αυτοί οι ιστοί ωοθηκών ελήφθησαν από υψηλές και κανονικές γυναίκες κινδύνου, αλλά όχι μικροσκοπική καρκίνος βρέθηκε [36]. Τα 111 πληροφοριακό καρκινώματα των ωοθηκών σε μικροσυστοιχία ιστού που χρησιμοποιείται σε αυτή τη μελέτη αποτελείται από 82 ορώδες, 12 βλεννώδες, 12 σαφείς κυττάρων, και 5 υπότυπων ενδομητριοειδές (Πίνακας 1). Στην επιφάνεια των ωοθηκών κανονική μονοστιβάδας επιθήλια, όλα τα επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια χρώσθηκαν θετικά για την πυρηνική GATA4 και GATA6 (Σχήμα 1Α). Ενώ GATA4 και χρώση GATA6 απουσιάζουν ή σε μεγάλο βαθμό μειωμένη σε καρκινώματα πλέον των ωοθηκών (Πίνακας 1). Μεταξύ των κατατοπιστική περιπτώσεις απώλεια GATA4 βρέθηκε σε 81/82 (99%) του ορώδες καρκίνωμα, 1/12 (8,3%) από βλεννώδες καρκίνωμα, 11/12 (92%) διαυγούς καρκινώματα, και 5/5 ( 100%) του endometroid καρκινωμάτων. Απώλεια GATA6 βρέθηκε σε 55/82 (67%) του ορώδες καρκίνωμα, 1/12 (8,3%) από βλεννώδες καρκίνωμα, 10/12 (83%) διαυγούς καρκίνωμα, και 5/5 (100%) του endometroid καρκινωμάτων. Παραδείγματα των ανοσοκηλιδώσεις φαίνεται στο Σχήμα 1, για ένα GATA4- και GATA6 αρνητικών ορώδες καρκίνωμα (Εικόνα 1Β), ένα GATA4-αρνητικά αλλά GATA6-θετικά ορώδες καρκίνωμα (Εικόνα 1C), ένα GATA6-αρνητικά αλλά GATA4-θετικά ορώδες καρκίνωμα (Σχήμα 1 D), και ένα GATA4 και GATA6-θετικών βλεννώδες καρκίνωμα (Σχήμα 1 Ε). Είναι επίσης αξιοσημείωτο ότι κάποια χρώση GATA4 ή /και GATA6 είναι παρόν σε στρωματικά κύτταρα και σε φυσιολογικά και δειλός ωοθηκών, αν και τα περισσότερα από αυτά χρώσης δεν είναι τόσο έντονες όσο εκείνες των επιθηλιακών κυττάρων. Σε ορισμένες περιπτώσεις, όπως φαίνεται στον όγκο που φαίνεται στο Σχήμα 1Β, μερικά μικρά στρωματικά κύτταρα, πιθανόν του ανοσοποιητικού και λεμφοκυττάρων, δείχνουν ισχυρή πυρηνική χρώση των GATA4.

ανοσοκηλιδώσεις του GATA4 και GATA6 διεξήχθησαν σε 111 καρκινώματα των ωοθηκών, συμπεριλαμβανομένης της 4 ιστολογικών υποτύπων. Τα αποτελέσματα συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Α φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια είναι θετικά τόσο για GATA4 και GATA6 στον πυρήνα. 200 × μεγέθυνση. B. Ένα παράδειγμα των δύο GATA4- και GATA6 αρνητικά ορώδες καρκίνωμα. 40 × μεγέθυνση. C. Ένα παράδειγμα GATA4-αρνητικών και θετικών GATA6-ορώδες καρκίνωμα. 40 × μεγέθυνση. Δ Ένα παράδειγμα GATA4-θετικών και αρνητικών GATA6 ορώδες καρκίνωμα. 40 × μεγέθυνση. Ε Ένα παράδειγμα των δύο GATA4- και GATA6 θετικά βλεννώδες καρκίνωμα. 40 × μεγέθυνση. Ε, επιθήλιο? Τ, όγκου? S, στρώμα.

Η

Ένα εντυπωσιακό χαρακτηριστικό του GATA4 και χρώση GATA6 είναι ότι αν και GATA4 και GATA6 χάνονται στον καρκίνο των ωοθηκών οι περισσότεροι (κυρίως ορώδες υπότυπο), καρκινώματα του βλεννώδες υποτύπου είναι ως επί το πλείστον GATA4 – και GATA6-θετικό (Πίνακας 1). Έτσι, η έκφραση της GATA4 και GATA6 διακρίνει βλεννώδες καρκίνωμα από άλλες ιστολογικές υποτύπους.

Απώλεια GATA4 προηγείται απώλεια GATA6 σε προ-νεοπλασματικές επιφάνεια και κύστεων ωοθηκών επιθήλια

έκφραση GATA4 απουσιάζει στο πλειοψηφία ορώδους καρκίνου των ωοθηκών, και GATA6 είναι επίσης απούσα σε πολλά, αλλά επίσης θετικές σε ορισμένες περιπτώσεις (Πίνακας 1). Αρνητική GATA6 και θετική GATA4 υπάρχουν μόνο σε σπάνιες περιπτώσεις ωοθηκών καρκινώματα. Έτσι, η απώλεια του GATA4 φαίνεται να είναι πιο διαδεδομένη από απώλεια GATA6 στον καρκίνο των ωοθηκών.

Προηγουμένως, μικροσκοπική καρκινώματα και προ-νεοπλασματικών μορφολογικές αλλαγές παρατηρήθηκαν σε προφυλακτική σαλπιγγοωοθηκεκτομή, που δείχνει τη χρησιμότητα αυτών των ιστών στη μελέτη της έναρξης του επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών [37]. Στην τρέχουσα ανάλυση, οι 26 περιπτώσεις ωοθηκών ιστών από προφυλακτική σαλπιγγοωοθηκεκτομή βρέθηκαν να περιέχουν μικροσκοπικές όγκους, αλλά δεν παρουσιάζουν μορφολογικά μεταβάλλεται αλλοιώσεις που παρήχθησαν από ωοθηκικό επιφάνεια ή κύστη επιθήλια [36]. Σε ορισμένες προφανείς καρκινώματα των ωοθηκών, μορφολογικά φυσιολογικό μονοστιβάδες των επιθηλιακών κυττάρων μπορεί να βρεθεί δίπλα στην κακοήθη κύτταρα. Ακριβώς λόγω της φυσικής εγγύτητας, αυτές οι μορφολογικές φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα μπορεί να έχουν ορισμένα χαρακτηριστικά με τα νεοπλασματικά κύτταρα. Με ανοσοχρώση, βρήκαμε ότι, στην πλειονότητα των περιπτώσεων GATA4 απουσιάζει και GATA6 είναι θετική στην ενιαία στρωματική, μορφολογικά καλοήθεις αλλοιώσεις, όπως φαίνεται από ένα παράδειγμα (Σχήμα 2Α). Σε ένα δεύτερο παράδειγμα, τα επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών που καλύπτουν την επιφάνεια είναι θετικά για GATA6 και αρνητικά για GATA4, και τα επιθηλιακά κύστεις κάτω από την επιφάνεια χάνεται τόσο GATA4 και GATA6 έκφρασης (Σχήμα 2Β).

Κάθε slides από τα 26 δείγματα περιέχει μεταβλητούς αριθμούς των βλαβών με ποικίλους βαθμούς μορφολογικές μεταβολές. Εξετάσαμε περίπου 80 από αυτές τις βλάβες για να κάνει διάφορες γενικές περιγραφές: GATA4 είναι αρνητική σε περίπου 80% της επιφάνειας του επιθηλίου, και GATA4 είναι απούσα σε όλες σχεδόν τις προφανείς αλλοιώσεις καθώς επίσης και για τα μισά από τα μορφολογικά φυσιολογικό μονοστιβάδες. GATA6 υπάρχει γενικά (70%) στα επιθηλιακά βλάβες, και απώλεια GATA6 συσχετίζεται με νεοπλαστική μορφολογικές αλλαγές (πολλαπλή επιθηλιακά στρωματοποίησης) σε περίπου 90% των περιπτώσεων. Έτσι, η απώλεια GATA4 προηγείται συχνά απώλεια GATA6, και απώλεια GATA4 και GATA6 εμφανίζεται πριν από την κακοήθη εξαλλαγή των επιφανειακών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών.

Ανοσοβαφή GATA4 και GATA6 σε μορφολογικώς φυσιολογικά επιφάνεια των ωοθηκών ή /και κύστη επιθήλια βρέθηκαν σε ωοθηκών καρκινωμάτων. A. Μια επιθήλιο επιφάνεια των ωοθηκών είναι θετική για GATA6 και αρνητικά για GATA4. Θετική χρώση GATA4 στο στρώμα σημειώνεται. B. Μια επιθήλιο επιφάνεια των ωοθηκών είναι θετικό για GATA6 και αρνητικό για GATA4. Τόσο GATA4 και GATA6 χάνονται στα επιθηλιακά κύτταρα κύστη δίπλα στην επιφάνεια. 200 × μεγέθυνση. Ε, επιθήλιο? C, κύστη? S, στρώμα.

Η

Απώλεια GATA4 ή /και GATA6 συσχετίζεται στενά με τα επιθηλιακά μορφολογικό μετασχηματισμό

Με τα χρόνια, έχουμε συγκεντρώσει μια συλλογή από 12 καρκινώματα των ωοθηκών που περιέχουν αλλοιώσεις των συνεχόμενων επιθήλια συνδέοντας μορφολογικά καλοήθη επιθηλιακά κύτταρα σε έκδηλο καρκινικά κύτταρα [35]. Τέτοιες βλάβες έχουν επίσης περιγραφεί προηγουμένως για βλεννώδες και ορώδες cystadenocarcinomas ωοθηκών [38]. Εμείς αιτιολογημένη ότι η παρουσία μιας μετάβασης από καλοήθεις σε κακοήθη μπορεί να είναι χρήσιμη για τον προσδιορισμό της συμμετοχής των υποψηφίων γονιδίων στα επιθηλιακά ογκογένεση ωοθηκών. Πράγματι, σε όλες τις 12 περιπτώσεις καλοήθους να νεοπλασματικών μεταβάσεις αναλυθεί, απώλεια GATA4 ή /και GATA6 συνδέει στενά με νεοπλασματική μορφολογικό μετασχηματισμό. Στο πρώτο παράδειγμα (Σχήμα 3Α), GATA4 είναι ήδη απούσα στο καλοήθη μονοστιβάδα? GATA6 είναι θετική στα κύτταρα μονοστιβάδα αλλά χάνεται στα γειτονικά καρκινικά κύτταρα. Απώλεια GATA6 συσχετίζεται στενά με την απώλεια της στόχου μεταγραφής του dAb2 (Σχήμα 3Α). Σε ένα δεύτερο παράδειγμα, GATA4 και έκφραση GATA6 χάνονται ταυτόχρονα, που συνδέονται στενά με την απώλεια της dAb2 και μορφολογικό μετασχηματισμό (Σχήμα 3Β). Η διευρυμένη καλοήθης σε νεοπλασματικά μετάβαση θέση (Σχήμα 3Β, κάτω πάνελ) δείχνει ότι GATA4 απότομα χαθεί, και GATA6 μειώνεται σημαντικά στη μετάβαση.

Παραδείγματα καρκίνου ωοθηκών ανθρώπου χρωματίστηκαν για GATA4, GATA6, και dAb2 σε γειτονικών τμημάτων του όγκου. A. Μια επιθήλιο επιφάνεια των ωοθηκών που αποτελείται από έναν μορφολογικό κανονική επιφάνεια επιθήλιο (κεφαλή βέλους) εφαπτόμενα συνδέει κακοήθη κύτταρα (βέλος) που έχουν είτε εισβάλει στον στρώμα ή να επεκταθεί σε περιοχές γύρω από την ωοθήκη. GATA4 είναι αρνητικό σε αμφότερες τις μορφολογικές κανονική ή νεοπλαστικών επιθηλιακών κυττάρων. Τα επιθηλιακά κύτταρα του μορφολογικά φυσιολογικό επιθήλιο είναι θετικά για GATA6 και dAb2, και τα κακοήθη κύτταρα είναι αρνητικά για GATA6 και dAb2. Μερικά διάσπαρτα κύτταρα στο στρώμα είναι dAb2 θετικά αλλά αρνητικά για GATA6. Αυτά τα κύτταρα είναι μακροφάγα στα οποία η έκφραση dAb2 δεν είναι GATA6-εξαρτώμενη. B. Σε αυτό το καρκίνωμα των ωοθηκών, τα επιθηλιακά κύτταρα του μορφολογικά φυσιολογικό επιθήλιο είναι θετικά για GATA4, GATA6, και dAb2, και τα γειτονικά κακοήθη κύτταρα είναι αρνητικά για GATA4, GATA6, και dAb2. Οι εικόνες ελήφθησαν κάτω από ένα μικροσκόπιο με 100 × μεγέθυνση. Οι χρώσεις για GATA4 και GATA6 κατά τη μετάβαση στο πάνελ Β εμφανίζεται σε μια μεγαλύτερη μεγέθυνση (400 ×) στο κάτω πάνελ. Ε, επιθήλιο? C, κύστη? S, στρώμα? Τ, όγκου.

Η

Έτσι, η απώλεια της έκφρασης GATA6 συσχετίζεται στενά με νεοπλαστικό μετασχηματισμό της επιφάνειας επιθηλίου των ωοθηκών, όπως παρατηρήθηκε σε συνεχόμενη επιφάνεια των ωοθηκών επιθήλιο συνδέουν μορφολογικά φυσιολογικό να κακοήθη κύτταρα (Σχήμα 3). Σε προηγούμενες μελέτες [18], [35], το επιφανειακό επιθήλιο των ωοθηκών αμέσως δίπλα σε περιοχές του όγκου θεωρήθηκε προ-νεοπλασματικές. Αυτά τα προ-νεοπλασματικές αλλοιώσεις συχνά στερούνται ενός άθικτου βασικής μεμβράνης, όπως υποδεικνύεται από την απουσία του κολλαγόνου IV και χρώση λαμινίνη, καθώς και η απώλεια της έκφρασης dAb2 [35]. Στα μορφολογικά φυσιολογικό επιθήλιο αμέσως δίπλα σε περιοχές του όγκου, τόσο GATA6 και dAb2 είναι θετικές. Ωστόσο, οι συνεχόμενα συνδεδεμένο νεοπλασματικά κύτταρα είναι αρνητικά τόσο για GATA6 και dAb2 χρώση. Τα νεοπλασματικά κύτταρα στο μετασχηματισμένο επιθήλιο που συνδέεται άμεσα με τα μορφολογικά φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια είναι πιθανόν περισσότερο παρόμοια με την κανονική, και ως εκ τούτου θεωρούνται νωρίς καρκινικά κύτταρα. Η ανάλυση αυτή υποδηλώνει την πιθανότητα ότι η απώλεια της GATA6 είναι ένας από τους αιτιολογικούς παράγοντες των επιθηλιακών μετασχηματισμού των ωοθηκών.

Οι παρατηρήσεις από ανθρώπινους ιστούς καρκίνου των ωοθηκών υποδηλώνει ότι η απώλεια της έκφρασης GATA4 προηγείται συχνά την απώλεια GATA6, και της απώλειας της GATA6, συσχετίζονται με την απώλεια της dAb2, συνεργάτες με επιθηλιακά μορφολογικό μετασχηματισμό.

Μείωση της έκφρασης παράγοντα GATA κατά την διαβίβαση των κυττάρων των ωοθηκών επιφάνεια των επιθηλιακών σε πρωτογενείς καλλιέργειες

κατά τη διάρκεια των τελευταίων 5 ετών στην μελέτες των παραγόντων GATA σε επιφανειακών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών και του πολιτισμού, βρήκαμε ότι GATA4 είναι απούσα σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου ωοθηκών και πλέον επίσης SV-40-επιμολυσμένα, «αθανατοποιημένα» κύτταρα ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακών [17], [18]. Επιπλέον, η έκφραση GATA4 ήταν μεταβλητή σε πρωτογενείς καλλιέργειες ανθρώπινων κυττάρων επιφανείας επιθηλιακών ωοθηκών. Έτσι, εικάζουν ότι η έκφραση του GATA4 δεν είναι σταθερό σε επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια και μπορεί να μειώσει σταδιακά την πάροδο του χρόνου.

Για να δοκιμαστεί αυτή η ιδέα, που ακολουθούνται προσεκτικά τα χωρία των πρωτογενών επιφανειακών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών στην παράταση του πολιτισμού και της παρακολουθείται η έκφραση της GATA4, GATA6 και dAb2 γονίδια. Τα επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια συλλέχθηκαν από ωοθήκες από την προφυλακτική σαλπιγγοωοθηκεκτομή όπως περιγράφηκε προηγουμένως [17], [18]. Οι ιστοί εξετάστηκαν και προσδιορίστηκαν να είναι μορφολογικά φυσιολογικά και άκυρη μικροσκοπικών όγκων. Το κύτταρο χρόνος διπλασιασμού ήταν περίπου δύο εβδομάδες αρχικά και συντομεύεται σε μία εβδομάδα έως 5 ημέρες αργότερα στη περάσματα. Έχουμε πραγματοποιήσει τα αποσπάσματα ενός παρασκευάσματος ΣΩΛΗΝΑ κυττάρων (ROE 1.005.816) για το πέρασμα 10 για μια περίοδο δύο μηνών και τα κύτταρα ήταν ακόμη πολύ πολλαπλασιασμού στο τέλος. Τυπικά, τα κύτταρα μπορούν να αναπτυχθούν σε καλλιέργεια επί περίπου 20 περάσματα σε μία περίοδο 6 μηνών πριν υποστεί αντιγραφική γήρανση. Σε κάθε πέρασμα, το ήμισυ των κυττάρων συλλέχθηκαν και χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση έκφρασης, και το άλλο μισό διατηρήθηκε συνεχώς σε καλλιέργεια.

Πρώτον, οι αλλαγές στην μορφολογία των επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών επιφάνεια ήταν προφανής. Αρχικά, τα κύτταρα φαίνεται να είναι στρογγυλά και επίπεδα, με μορφολογία «λιθόστρωτο», και όλο και περισσότερο τα κύτταρα έγιναν επιμήκεις και άτρακτο-όπως, και οι πιο δραματικές μεταβολές παρατηρήθηκαν στο πέρασμα 4 (Σχήμα 4Α). επίπεδα GATA4 mRNA βρέθηκαν να μειώνονται ταχέως, και έγινε μη ανιχνεύσιμο με πέρασμα 4 (Σχήμα 4Β, C). Η έκφραση του GATA6 και του στόχου μεταγραφή του dAb2, μειώνεται σταδιακά με το χρόνο, και τα επίπεδα του mRNA των δύο γονίδια ήταν 20-30% των αρχικών κυττάρων (Σχήμα 4C). Ως μάρτυρας, σπίτι διατήρησης γονιδίων TBP (ΤΑΤΑ δεσμευτική πρωτεΐνη, αριθμός ένταξης NM_003194) επίπεδο έκφρασης είχε ασήμαντες αλλαγές κατά τη διάρκεια της καλλιέργειας, και η διαφοροποίηση αυτή πιθανώς απηχεί το εύρος των σφαλμάτων του προσδιορισμού.

ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια απομονώθηκαν από μορφολογικά φυσιολογικό ανθρώπινο ωοθήκες που λαμβάνονται από χειρουργική ωοθηκεκτομή. Τα κύτταρα περάστηκαν 10 φορές κατά τη διάρκεια μιας περιόδου 3 μηνών, και τα κύτταρα συλλέχθηκαν από κάθε πέρασμα για ανάλυση mRNA. Α μορφολογία των κυττάρων σε πέρασμα # 1, 2, 4, 6, 8, 10. Β Το συνολικό RNA χρησιμοποιήθηκε για ποσοτική πραγματικού χρόνου RT-PCR για προσδιορισμό επιπέδων mRNA. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως «θερμο-map». C. Η ποσότητα του mRNA σε σχέση με το πέρασμα 1 ποσοτικοποιήθηκε και παρουσιάζεται ως ραβδόγραμμα.

Η

Έτσι, όλες οι GATA4, GATA6, και τα επίπεδα mRNA dAb2 μειωμένη κατά πέρασμα των πρωτογενών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών επιφάνεια στον πολιτισμό. Η απώλεια GATA4 προηγείται της απώλειας GATA6 (και dAb2), παρόμοια με την παρατήρηση των προ-νεοπλαστικών επιθήλια των ωοθηκών παρακείμενα καρκινώματα ωοθηκών, όπου GATA4 συχνά χάνεται πριν την GATA6. Προηγουμένως, η απώλεια της GATA4 και GATA6 στον καρκίνο των ωοθηκών και επιθηλιακά κύτταρα καταδείχθηκε ως από το μηχανισμό του υποακετυλίωση ιστονών Η3 και Η4 και την απώλεια της ιστόνης Η3 /λυσίνης Κ4 trimethylation στο υποκινητές τους [18]. Η γονιδιακή έκφραση καθορίζεται από το πρότυπο που σχετίζεται τροποποίηση ιστόνης, που είναι γνωστή ως κωδικούς ιστόνης [39]. Απώλεια ακετυλίωσης ιστόνης οδηγεί σε μια πιο συμπαγή διαμόρφωση χρωματίνης και την απώλεια της μεταγραφικής δραστηριότητας [40], και της ιστόνης Η3 /λυσίνης Κ4 μεθυλίωση συνδυάζεται με ενεργά γονίδια [41], [42]. Το εύκολα απώλεια της έκφρασης GATA4 και GATA6 προτείνει την αστάθεια της διάπλασης επιγενετικών μελών /χρωματίνης, συνεπής με την πρόωρη απώλεια των παραγόντων GATA στην ωοθηκική καρκινογένεση.

Αλλαγή της τροποποίησης της χρωματίνης σε θέση GATA4 που σχετίζονται με την απώλεια της έκφρασης κατά την πέρασμα των κυττάρων των ωοθηκών επιφάνεια των επιθηλιακών σε πρωτογενείς καλλιέργειες

Για να προσδιορίσετε την αιτία της μείωσης της έκφρασης παράγοντα GATA σε πρωτογενείς καλλιέργειες, έχουμε καθορίσει για πρώτη φορά την έκφραση σε μια μεγάλη ομάδα επιφανειακά επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών και των καρκινικών κυττάρων. Ολικό RNA απομονώθηκε από 8 παρασκευάσματα πρωτογενών κυττάρων σωλήνα (από 7 άτομα, εδώ, C.47 και D.47 χωρίστηκαν από τις ίδιες παρασκευάσματα ΣΩΛΗΝΑ αλλά καλλιεργήθηκαν με διαφορετικό προσωπικό εργαστήριο), 6 ΟΑΥ γραμμές που είναι κύτταρα επιμολυσμένα με ΣΩΛΗΝΑ SV40-T-antigent να παρατείνει διάρκεια καλλιέργειας ζωή, και 6 γραμμές καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών (Εικόνα 5). Το RNA υποβλήθηκε σε ημι-ποσοτική RT-PCR (Σχήμα 5Α) και σε πραγματικό χρόνο RT-PCR (Σχήμα 5Β) για τον προσδιορισμό των επιπέδων mRNA για GATA4, GATA6, dAb2, και GAPDH ή BHD ως έλεγχοι φόρτωσης. έκφραση GATA4 μειώνεται σε μερικές παρασκευές σωλήνα και τις γραμμές ΟΑΥ, και απουσιάζει σε όλες τις γραμμές του καρκίνου, όπως προσδιορίζεται τόσο από ημι-ποσοτική RT-PCR και πραγματικού χρόνου RT-PCR (Σχήμα 5Α, Β). Μείωση των GATA6 και dAb2 έκφραση σε ΟΑΥ και σειρές καρκίνου είναι περισσότερο εμφανής με πραγματικού χρόνου RT-PCR (Σχήμα 5Β).

Ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια απομονώθηκαν από μορφολογικά φυσιολογικό ανθρώπινο ωοθήκες που λαμβάνονται από χειρουργική ωοθηκεκτομή. Αρκετές γραμμές ΟΑΥ επίσης θεσπίστηκε με την επιμόλυνση των πρωτογενών κυττάρων με SV-40 Τ-αντιγόνου να παρατείνει τη διάρκεια ζωής σε καλλιέργειες. Ολικό RNA απομονώθηκε από μια συλλογή πρωτογενούς ΣΩΛΗΝΑ, ΟΑΥ, και τα κύτταρα του καρκίνου χρησιμοποιήθηκαν για: Α Ημι-ποσοτική RT-PCR, και Β ποσοτική πραγματικού χρόνου RT-PCR, για να προσδιοριστεί επίπεδα mRNA για GATA4, GATA6, dAb2, και GAPDH (ημι-ποσοτική RT-PCR) ή BHD (σε πραγματικό χρόνο RT-PCR) ως έλεγχοι φόρτωσης. Επαρκής RNA ελήφθησαν από HOSE.96 (ή C.96), πέρασμα # 3? HOSE.47 κύτταρα, πέρασμα # 5? και HOSE.63 κύτταρα, απόσπασμα # 12? για την δοκιμασία CHIP. C. Η θέση των εκκινητών F3 και R3 στο γονίδιο GATA4 για PCR στην ανίχνευση τσιπ απεικονίζεται. Δ Κυτταρολύματα από HOSE.96, HOSE.47, HOSE.63, ES2, SKOV3, Α2780, OVCAR3 και OVCAR10 ετοιμάστηκαν για δοκιμασία CHIP. Χρωματίνης καθιζήσεις από αντισώματα για να Ac Η3, Η4 Ac, Me

2H3K4, Me

3H3K4, Me

2H3K9, Me

2H3K27 και HPγ1 χρησιμοποιήθηκαν για να ενισχύσουν με PCR χρησιμοποιώντας τους εκκινητές F3 και R3. συμπεριλήφθηκαν Το σήμα εισόδου ( «in», 2% του συνόλου των χρωματίνη που χρησιμοποιούνται για την ανοσοκατακρήμνιση), κανένας έλεγχος αντισωμάτων ( «όχι»), και κανένας έλεγχος πρότυπο ( «H

2O»). Οι φωτεινές εικόνες πεδίο των ημι-ποσοτική PCR προϊόντων που εμφανίζονται. Ε Η θέση των εκκινητών F2 και Β2 στο γονίδιο GATA6 για PCR στην ανίχνευση CHIP δείχνεται. F. Το λύμα από HOSE.96, HOSE.47, Α2780, OVCAR3 και OVCAR10 ετοιμάστηκαν για δοκιμασία CHIP. Οι φωτεινές εικόνες τομέα των ημιποσοτική PCR προϊόντων εμφανίζεται.

Η

Δεν ήταν σε θέση να αποκτήσει επαρκή ποσότητα των 3 πρωτογενών κυττάρων σωλήνα (HOSE.96, HOSE.47, και HOSE.63) για περαιτέρω μελέτη των μεταβολών χρωματίνης τροποποίηση της GATA4 και GATA6 locus με δοκιμασία ChIP διάρκεια πέρασμα των κυττάρων σε καλλιέργειες. Τα επίπεδα έκφρασης του GATA4 αντιστρόφως συσχετίζονται με τον αριθμό πέρασμα των κυττάρων: HOSE.96 (ή C.96) κύτταρα, πέρασμα # 3, έχουν υψηλή έκφραση GATA4? HOSE.47 κύτταρα, απόσπασμα # 5, έχουν χαμηλότερο επίπεδο GATA4? και HOSE.63 κύτταρα, απόσπασμα # 12, έχει μια πολύ μειωμένο επίπεδο έκφρασης (Εικόνα 5Β).

Μετά την προηγουμένως καθιερωμένο πρωτόκολλο για τη δοκιμασία ChIP για GATA4 και GATA6 γονίδια [18], διαπιστώσαμε ότι, πράγματι, σε μία θέση αμέσως ανάντη του GATA4 εξόνιο 1 (Σχήμα 5C), η μείωση των επιπέδων έκφρασης GATA4 συσχετίζεται με την απώλεια της ακετυλίωσης ιστόνης Η3 και Η4 (Εικόνα 5D). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές αλλαγές παρατηρήθηκαν για δι και τρι μεθυλίωση H3K4, δείκτες για δραστικές χρωματίνη διάπλαση [41], [42]. Ωστόσο, διμεθυλίωση της ιστόνης Η3 σε λυσίνη 9 και 27 (Me

2H3K9, Me

2H3K27) και ΗΡ1 απουσιάζει, γεγονός που υποδηλώνει τη σιωπή γονίδιο GATA4 δεν έχει ενσωματωθεί σε ετεροχρωματίνη [43].

Εκτός από την μειωμένη ακετυλίωση της ιστόνης Η3 και Η4 στην Α2780 κύτταρα, τα μοτίβα της τροποποίησης ιστόνης στον τόπο GATA6 (Σχήμα 5Ε) είναι παρόμοια μεταξύ των κυττάρων σωλήνα και καρκίνο γραμμές OVCAR3 και OVCAR10 (Σχήμα 5F), γεγονός που υποδηλώνει την αλλαγή της τροποποίησης ιστόνης στο GATA6 τόπος δεν είναι μια γενική εκδήλωση στην επιθηλιακά κύτταρα και τον καρκίνο των ωοθηκών.

ωοθηκών όγκου επιρρεπείς φαινότυπο GATA6 ετερογενών ποντίκια

η εύρεση μια στενή συσχέτιση μεταξύ της απώλειας του GATA6 και επιθηλιακών μετασχηματισμό μας ώθησε να υποθέσουμε ότι η απώλεια της GATA6 μπορεί να είναι αιτιολογικός στο μετασχηματισμό των επιφανειακών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών. Οι ανωτέρω παρατηρήσεις υποδηλώνουν επίσης ότι η απώλεια GATA6 μπορεί να είναι περισσότερο κρίσιμη από την απώλεια της GATA4 στην προώθηση των ωοθηκών επιθηλιακά μετασχηματισμού. Για τον προσδιορισμό της συνέπεια για την απώλεια των GATA6 στα επιφανειακά επιθήλια των ωοθηκών, διερευνήσαμε την ωοθηκική φαινότυπο του GATA6 (+/-) ποντίκια, αφού τα ομόζυγα ποντίκια είναι εμβρυϊκά θανατηφόρα [24], [25]. Έχουμε λάβει και να διατηρηθεί μια αποικία των ποντικών GATA6 νοκ-άουτ κατά τη διάρκεια των τελευταίων 2 ετών. Ωοθηκών ιστοί συλλέχθηκαν από τους ποντικούς σε περίπου ένα έτος της ηλικίας, και της μορφολογίας των ωοθηκών από νεογνά του GATA6 (+/-) και άγριου τύπου συγκρίθηκαν. Εντυπωσιακά, όλοι οι ωοθήκες του GATA6 (+/-) γονότυπο επέδειξαν κάποια ανωμαλίες (Πίνακας 2): Μερικά ωοθήκες έχουν εκτενή πολλαπλασιαστικές αλλοιώσεις της επιφάνειας επιθήλια (Σχήμα 6Α), και οι άλλοι έχουν μεγάλες κύστεις των ωοθηκών που είναι θετικά για κυτοκερατίνη (Σχήμα 6Β ). Ο φαινότυπος των ωοθηκών μοιάζει με εκείνα του

DAB2

(+/-) ποντίκια [32], συνάδει με dAb2 ως στόχος μεταγραφής GATA6 και μεσολαβητής [27].

Ο ωοθηκών μορφολογία του GATA6 (+ /-) και αδερφάκια άγριου τύπου περίπου ένα έτος της ηλικίας συγκρίθηκε. Cytokeratin χρώση χρησιμοποιήθηκε ως δείκτης για επιθηλιακά κύτταρα. A. Ένα τυπικό παράδειγμα μιας ωοθήκης άγριου τύπου δείχνει πολυάριθμα ωοθυλάκια σε διάφορα αναπτυξιακά στάδια που περικλείεται μέσα σε ένα στρώμα της επιφάνειας του επιθηλίου. Ένα αντιπροσωπευτικό GATA6 (+/-) ωοθήκη δείχνει την παρουσία έκφυση των επιθηλιακών κυττάρων από την επιφάνεια (βέλος). B. Ένα μεγάλο μέρος του GATA6 (+/-) ωοθήκες παρουσιάζει επίσης μεγάλες κύστεις μέσα στις ωοθήκες. Τα κύτταρα που ευθυγραμμίζουν τις κύστεις είναι κυτοκερατίνης θετικά (κάτω πάνελ). Όλες οι εικόνες ελήφθησαν κάτω από ένα μικροσκόπιο με 100 × μεγέθυνση.

Η

Έτσι, αυτό το αποτέλεσμα υποδηλώνει επιρροές ανεπάρκεια GATA6 επιφάνεια των ωοθηκών επιθήλια, πιθανώς την προώθηση του μετασχηματισμού αν και ιστού ειδική απαλοιφή GATA6 σε επιφανειακά επιθηλιακά ωοθηκών κύτταρα θα είναι μια καλύτερη δοκιμή, όταν GATA6 knockout ποντίκια όρους καταστούν διαθέσιμα.

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη εξέτασε την έκφραση του GATA 4 και GATA6 στα κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακά καρκινώματα και λεπτομερώς, και βρήκε ότι η απώλεια της GATA4 είναι πιο διαδεδομένη και συχνά προηγείται GATA6 στο μετασχηματισμό της επιθήλια επιφάνεια των ωοθηκών. Η απώλεια GATA6, ωστόσο, συσχετίζεται στενά με το μορφολογικό μετασχηματισμό των επιθηλίων. Η εύκολα μείωση της έκφρασης GATA4 και GATA6 κατά την καλλιέργεια των επιφανειακών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών προτείνει την αστάθεια του επιγενετικών κράτους /χρωματίνης διαμόρφωση του GATA4 και GATA6 τόπου, σύμφωνα με τις αρχές απώλεια των ωοθηκών ογκογένεση. Η πρόωρη απώλεια του GATA4 και GATA6 και η στενή συσχέτιση με το νεοπλαστικό μετασχηματισμό των επιφανειακών επιθηλίων των ωοθηκών προτείνει ένα αιτιατό ρόλο, η οποία υποστηρίζεται από την επικράτηση της ωοθηκικής επιθηλιακών αλλοιώσεων σε GATA6 ετερόζυγα ποντίκια με έλλειψη [32].

αντίθεση με άλλες ιστολογικές υποτύπους, βλεννώδες καρκίνωμα ωοθηκών γενικά είναι θετικά για GATA4 και έκφραση GATA6. Πράγματι, η μορφολογία του βλεννώδους καρκινώματος των ωοθηκών είναι πολύ μοναδικό στο ότι τα καρκινικά κύτταρα φαίνεται να διατηρούν την κορυφαία πολικότητα και συχνά υφίστανται ως επιθήλια μονοστοιβάδα.

Η απώλεια γρήγορα από GATA4 στο πέρασμα των πρωτογενών κυττάρων σε καλλιέργεια είναι ενδιαφέρουσα. Η απώλεια της έκφρασης GATA4 σε ανακαλλιέργεια των πρωτογενών κυττάρων σε συγγενείς καλλιέργεια με απώλεια Η3 και Η4 ιστόνης ακετυλίωση στον τόπο GATA4 υποκινητή. Η απώλεια GATA4 σε καρκινικές κυτταρικές γραμμές φαίνεται επίσης διαμεσολαβείται από την περιστολή της Η3 και Η4 ιστόνης ακετυλίωση της θέσεως υποκινητή.