Αφηρημένο

Ιστορικό

οικογένειας CCN, η οποία περιλαμβάνει έξι μέλη (Cyr61, CTGF, Νοε, WISP-1, WISP-2, WISP-3), εμπλέκεται στην διέγερση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, η μετανάστευση, προσκόλληση, την αγγειογένεση, και ογκογένεση. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι η έκφραση του Cyr61, CTGF, και WISP-1 επηρεάζει την ογκογόνο δυναμικό του καρκίνου του πνεύμονα κυττάρων in vitro. Ωστόσο, η συσχέτιση της έκφρασης των πρωτεϊνών της οικογένειας CCN και κλινικά χαρακτηριστικά του καρκίνου του πνεύμονα παραμένει άγνωστη.

Μεθοδολογία και ΚΥΡΙΟΤΕΡΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Στην παρούσα εργασία, ποσοτικά τα επίπεδα του mRNA της

Cyr61

,

CTGF

, και

WISP-1

σε δείγματα από 60 πρωτογενείς καρκίνους του πνεύμονα και συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων τους με ποσοτική PCR δοκιμασία πραγματικού χρόνου. Προς τα κάτω ρύθμιση της

Cyr61

και

CTGF

γονίδια και αυξορρύθμιση του

WISP-1

γονίδιο βρέθηκε σε πρωτογενείς καρκίνους του πνεύμονα σε σύγκριση με τα ζεύγη φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων. ανάλυση Ανοσοϊστοχημεία αποκαλύπτεται επίσης ένα παρόμοιο πρότυπο έκφρασης του Cyr61, CTGF, και πρωτεΐνη WISP-1 σε ζευγαρωμένα ιστούς καρκίνου του πνεύμονα. Η στατιστική ανάλυση έδειξε σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης είτε

Cyr61

ή

CTGF

με το στάδιο του όγκου, την ιστολογία του όγκου, μετάσταση, το κάπνισμα και το οικογενειακό ιστορικό κατά τη διάγνωση. Μια σημαντική συσχέτιση υπήρχε επίσης μεταξύ έκφραση WISP-1 με ιστολογία του όγκου, και την ηλικία του ασθενούς. Επιπλέον, τα επίπεδα έκφρασης του

Cyr61

και

CTGF

συσχετίζεται με την επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα.

Συμπεράσματα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι

Cyr61

,

CTGF

, και

WISP-1

μπορεί να εμπλέκονται στην ανάπτυξη και την εξέλιξη των πρωτογενών καρκίνων του πνεύμονα, και τα επίπεδά τους θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως πολύτιμη προγνωστικοί δείκτες, καθώς και τις πιθανές στόχοι για θεραπευτική παρέμβαση

Παράθεση:. Chen PP, Λι WJ, Wang Υ, Zhao S, Li DY, Feng LY, et al. (2007) Έκφραση του

Cyr61

,

CTGF

, και

WISP-1

συσχετίζεται με κλινικά χαρακτηριστικά του καρκίνου του πνεύμονα. PLoS ONE 2 (6): e534. doi: 10.1371 /journal.pone.0000534

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Anja-Katrin Bielinsky, Πανεπιστήμιο της Μινεσότα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 16 Μάρ 2007? Αποδεκτές: 24, Μάη του 2007? Δημοσιεύθηκε: 20 Ιουνίου 2007

Copyright: © 2007 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών της Κίνας (Νο 30370690, 30470847, και 30528003 για Xie, D .; Νο 30200143 για Tong, Χ), κινεζική Ακαδημία Επιστημών (Εκατό Ταλέντα Πρόγραμμα? Grant KSCX-YW-R -73 για Xie, Δ), Science & amp? Τεχνολογίας της Επιτροπής της Σαγκάης Δήμου 04DZ14007 και 05DJ14009 (Xie, Δ)? Κίνα Ίδρυμα Μεταδιδακτορικός Science (Wang, Υ), και Κινεζική Ακαδημία Επιστημών Κ.Ο. Wong Μεταδιδακτορικός υποτροφίες (Wang, Υ)

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνου

πνεύμονα είναι η πιο κοινή. αιτία θανάτου από καρκίνο στον κόσμο [1]. Η πλειονότητα των καρκίνων του πνεύμονα είναι καρκίνωμα μη-μικρών κυττάρων του πνεύμονα (NSCLC), η οποία υποδιαιρείται σε αδενοκαρκίνωμα (AC), ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (SC), και καρκίνωμα μεγάλου κυττάρου [2]. Η υψηλή θνησιμότητα που σχετίζεται με NSCLC οφείλεται εν μέρει σε μετάσταση πριν από τη χειρουργική αφαίρεση του πρωτογενούς όγκου. μετάσταση όγκου περιλαμβάνει απόσπαση των κυττάρων όγκου από τον πρωτογενή μάζα όγκου, microinvasion των κυττάρων του όγκου σε στρωματικό ιστό, ενδαγγείωση των καρκινικών κυττάρων στα αιμοφόρα αγγεία, και εξαγγείωση και την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων σε δευτερογενείς θέσεις [3], [4]. Για να γίνει μεταστατικά καρκινικά κύτταρα πρέπει να αυξήσει την έκφραση των γονιδίων μετάσταση-προώθηση και /ή να μειώσουν την έκφραση των γονιδίων μετάστασης-καταστολή. Χρησιμοποιώντας ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα, πλούσια σε κυστεΐνη πρωτεΐνη 61 (Cyr61) και αυξητικού παράγοντα του συνδετικού (CTGF) έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλουν την μετάσταση και εισβολή των καρκινικών κυττάρων, και ως εκ τούτου έχουν θεωρηθεί ως πιθανοί καταστολείς της μετάστασης [5], . [6]

Τόσο CTGF και Cyr61 ανήκουν στην οικογένεια CCN, που ονομάστηκε για τα τρία πρώτα περιγράφονται τα μέλη της – Cyr61 (CCN1), CTGF (CCN2) και Νοέμβριο (νεφροβλάστωμα υπερεκφράζεται, CCN3) [7]. οικογένεια CCN έχει έξι μέλη: Cyr61, CTGF, Νοε, WISP-1 (Wnt-1 που προκαλείται από εκκριτική πρωτεΐνη 1) (CCN4), WISP-2 (CCN5) και WISP-3 (CCN6) [8] – [11]. Αυτές οι πρωτεΐνες είναι αρθρωτή δομή, που αποτελείται από μια Ν-τερματική αλληλουχία σήματος που ακολουθείται από τομείς με ομοιότητα αλληλουχίας προς την πρωτεΐνη ινσουλινοειδής αυξητικός παράγοντας-δεσμευτική, παράγοντα νοη Willebrand C, τύπος θρομβοσπονδίνη 1, και ένα σύμπλεγμα κυστεΐνης στο Ο άκρο με ένα εξαίρεση του WISP-2, η οποία δεν έχει την περιοχή C άκρο [12]. Όλα τα μόρια που εκκρίνονται CCN, εξωκυττάρια μήτρα πρωτεΐνες που συνδέονται και εμπλέκονται στην εσωτερική και εξωτερική κυτταρικής σηματοδότησης για τη ρύθμιση κυτταρική προσκόλληση, η μετανάστευση, μιτογένεση, τη διαφοροποίηση και την επιβίωση [13]. Μπορούν επίσης να ρυθμίζουν την αγγειογένεση [13] – [15]. Προηγούμενες μελέτες πρότειναν ότι Cyr61 επάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την προσκόλληση των κυττάρων και την αγγειογένεση μέσω της ενεργοποίησης ιντεγρίνης (ανβ3) σε ενδοθηλιακά κύτταρα [16]. CTGF παίζει βασικό ρόλο στα κατάντη του ΤΟΡ-β και SMAD σηματοδότησης και διεγείρει την παραγωγή κολλαγόνου και ινονεκτίνης, η οποία είναι σημαντική για την επούλωση του τραύματος [17], [18]. WISP-1 εκφράζεται ισχυρά στην ινοαγγειακού στρώμα του όγκων του μαστού αναπτύσσονται σε Wnt-1 διαγονιδιακά ποντίκια [10]. Εξαναγκασμένη υπερέκφραση WISP-1 σε φυσιολογικό νεφρό αρουραίου ινοβλαστών (NRK-49F) ήταν αρκετή για να επάγει την μετατροπή τους [11]. Επιπλέον, αυξανόμενες ενδείξεις πρότεινε ότι οι CCN πρωτεΐνες που εμπλέκονται στην ογκογένεση, και μεταβολή της έκφρασης αυτών των μορίων έχει παρατηρηθεί σε διάφορους τύπους καρκίνων [8], [9].

Έχουμε αποδείξει ότι Cyr61 ενήργησε ως ένα ογκοκατασταλτικό στην ανάπτυξη των κυττάρων NSCLC. Cyr61 κατέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων NSCLC ενεργοποιώντας ένα μονοπάτι μεταγωγής σήματος μέσω προς τα πάνω ρύθμιση της ρ53 [6], [19]. CTGF και WISP-1 επηρέασε επίσης την ογκογονικότητα των κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα [5], [20] – [22]. Ωστόσο, οι συσχετίσεις μεταξύ των τριών μορίων με κλινικά χαρακτηριστικά του καρκίνου του πνεύμονα είναι ανεξερεύνητη. προηγούμενη εργασία μας πρότεινε ότι η έκφραση των πρωτεϊνών της οικογένειας CCN έχει προγνωστική αξία για την εξέλιξη γλοιώματος και η συνολική επιβίωση των ασθενών [23]. Στις παρούσες μελέτες, εκτελέσαμε πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR και ανοσοϊστοχημεία για να μετρηθούν τα επίπεδα του mRNA και της πρωτεΐνης τριών γονιδίων CCN στην πρωτοβάθμια δείγματα NSCLC και συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων τους. Επιπλέον, καθορίζεται εάν τα επίπεδα αυτών των γονιδίων CCN συσχετίστηκαν με κλινικά χαρακτηριστικά των δειγμάτων NSCLC από διάφορα μοντέλα στατιστική ανάλυση.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και δείγματα

Αυτή η μελέτη ανέλυσε την πρωτοπαθή καρκίνο και συμφωνημένα φυσιολογικών ιστών από 60 ασθενείς με NSCLC αγωγή στην Πρώτη Ενταγμένο Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Zhengzhou (Henan, Κίνα) 2002-2005 μετά από γραπτή συγκατάθεση τους. Δείγματα Καρκίνου αποκόπηκαν χειρουργικά χωρίς νεο-επικουρική θεραπεία και αντίστοιχα μη καρκινικών ιστών, οι οποίες ήταν τουλάχιστον 3-4 cm μακριά από τον καρκίνο, ελήφθησαν επίσης. Κάθε δείγμα διαιρέθηκε σε 2 μέρη: το ένα ήταν χωρισμένο και εξετάστηκε ιστολογικά με παραδοσιακές Η &? Ε χρώση για την παρουσία των κυττάρων περισσότερο από 80% του όγκου (δείγμα καρκίνος) ή μόνο φυσιολογικά κύτταρα χωρίς φλεγμονώδη ή ενδοδιηθητικά όγκου περιοχές (αντιστοιχούν φυσιολογικό δείγμα) ? το άλλο καταψύχθηκε σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι την ανάλυση. Η δουλειά μας εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Ινστιτούτου Διατροφικής Επιστημών, Κινεζική Ακαδημία Επιστημών.

εκχύλιση RNA και σύνθεση cDNA

Το συνολικό RNA εξήχθη από φρέσκο-κατεψυγμένα δείγματα NSCLC και συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων με αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Life Technologies, Inc.) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Η ποιότητα των RNA δειγμάτων προσδιορίστηκε με ηλεκτροφόρηση μέσω πηκτών αγαρόζης και χρώση με βρωμιούχο αιθίδιο, οι ζώνες 18S και 28S RNA κατέστησαν ορατά υπό υπεριώδες φως. 2 μg ολικού RNA υποβλήθηκε σε επεξεργασία άμεσα σε cDNA με αντίστροφη μεταγραφή με Superscript II (Life Technologies, Inc.) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή σε ένα συνολικό όγκο 50 μΙ.

Real-time PCR αντίστροφης μεταγραφής (RT -PCR)

RT-PCR χαρακτηρίστηκε στο σημείο κατά τη διάρκεια της ποδηλασίας, όταν εντοπίστηκε για πρώτη φορά ενίσχυση του προϊόντος PCR, και όχι από την ποσότητα του προϊόντος PCR συσσωρευτεί μετά από ένα σταθερό αριθμό κύκλων. Η παράμετρος Ct ορίστηκε ως ο αριθμός κλασματικών κύκλος στον οποίο ο φθορισμός που δημιουργείται με το πέρασμα ενός σταθερού κατωφλίου πάνω από την αρχική τιμή. Το επίπεδο του γονιδίου-στόχου σε άγνωστα δείγματα προσδιορίστηκε ποσοτικά με μέτρηση της τιμής Ct: Επίπεδο (στόχος) = 2

Ct (στόχος). Η τιμή Ct των β-

ακτίνη

μετρήθηκε επίσης όπως και η ενδογενής έλεγχος RNA: Επίπεδο (β-

ακτίνης

) = 2

Ct (β

ακτίνης

). Τα επίπεδα των γονιδίων στόχων σε κάθε δείγμα ομαλοποιήθηκαν βάσει της β

β-ακτίνης

περιεχομένου μέσω του τύπου: Κανονικοποιημένο επίπεδο (NL) = Επίπεδο (στόχος) /Επίπεδο (β-

ακτίνης

) = 2

Ct (στόχος) /2

Ct (β-

ακτίνης

) = 2

Ct (στόχος) -Ct (β-

ακτίνης

) = 2

ΔCt. Επιπλέον, τα σχετικά επίπεδα (RL) των γονιδίων στόχων σε δείγματα καρκίνου του έναντι συμφωνημένα φυσιολογικών ιστών υπολογίστηκαν σύμφωνα με τον τύπο: RL = NL (καρκίνος) /NL (φυσιολογικό) = 2

ΔCt (καρκίνος) /2

ΔΟΙ (κανονική) = 2

[ΔΟΙ (καρκίνος) -ΔCt (κανονική)] = 2

ΔΔCt. Επειδή και οι δύο NL και RL παρουσιάζονται ως 2

Ct, εμείς, ως εκ τούτου χρησιμοποιούνται ΔΟΙ και ΔΔCt ως NL και RL, αντίστοιχα, για την κλινική στατιστική ανάλυση.

Αστάρια για πραγματικού χρόνου PCR για

Cyr61

(5′-GAGTGGGTCTGTGACGAGGAT-3 ‘και 5′-GGTTGTATAGGATGCGAGGCT-3’),

CTGF

(5′-CGACTGGAAGACACGT TTGG-3 ‘και 5′-AGGCTTGGAGATTTTGGGAG-3’),

WISP -1

(5′-AGAGCCGC CTCTGCAACTT-3 ‘και 5′-GGAGAAGCCAAGCCCATCA-3’) και β-

ακτίνης

(5′-G ATCATTGCTCCTCCTGAGC-3 ‘και 5′-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3’ ) σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας Primer3 λογισμικού και αγοράστηκε από τη Σαγκάη Sangon Βιολογικής Μηχανικής Τεχνολογίας & amp? Υπηρεσίες CO., Ltd. Amplification αντιδράσεις διεξήχθησαν σε ένα όγκο 20 μΙ του μείγματος LightCycler-DNA κύριο SYBR Green Ι (Roche Diagnostics Ltd., Applied Science, Penzberg, Γερμανία) με 10 pmol του κάθε εκκινητή, MgCl

2 συγκέντρωση βελτιστοποιημένη μεταξύ 2 και 5 mM, 200 μΜ από κάθε dNTP, 0.5 U Taq DNA πολυμεράση, και 1 χ ρυθμιστικό διάλυμα. Όλες οι αντιδράσεις εκτελέστηκαν εις τριπλούν σε ένα σύστημα iCycler iQ (Bio-Rad, Hercules, CA), και αρχική μετουσίωση στους 95 ° C για 3 λεπτά ακολουθήθηκε από 40 κύκλους ενός μετουσίωση στους 95 ° C για 30 s, ένας στάδιο αναδιάταξης μεταξύ 55 ° C και 58 ° C για 20 s, και ένα στάδιο επέκτασης στους 72 ° C για 30 s. Ένα τελικό στάδιο επέκτασης στους 72 ° C για 7 λεπτά προστέθηκε. Για να επιβεβαιωθεί η εξειδίκευση ενίσχυσης, τα προϊόντα PCR από κάθε ζεύγος εκκινητών υποβλήθηκαν σε ανάλυση καμπύλης τήξης και μεταγενέστερες επιθεώρηση μετά από ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης.

Η στατιστική ανάλυση

T-test και ANOVA εγκρίθηκαν με μελέτη της έκφρασης των 60 ζευγών NSCLC και των φυσιολογικών ιστών του πνεύμονα για κάθε γονίδιο CCN και την ένωσή τους με ενιαία κλινικούς παράγοντες (οικογενειακό ιστορικό, η μετάσταση, το κάπνισμα, το στάδιο του όγκου, ιστολογία, φυματίωση, το φύλο, το μέγεθος του όγκου και την ηλικία του ασθενούς). ανάλυση συσχέτισης Pearson χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί σχετικό βαθμό από την ποσότητα της έκφρασης των τριών γονιδίων. συσχέτισης Pearson αντικατοπτρίζει το βαθμό γραμμική σχέση μεταξύ των δύο μεταβλητών. Κυμαίνεται 1 έως -1. Οι σχετικές τιμές (όγκος /ελέγχου) ήταν σε σχέση με την ακτίνη απεικονίζονται. Για κάθε γονίδιο, καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier για τους ασθενείς με υψηλή έκφραση του γονιδίου

έναντι

χαμηλή έκφραση του γονιδίου χαράχθηκαν και τεστ log-rank χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση της ισότητας των δύο καμπυλών επιβίωσης. Πολυπαραγοντική ανάλυση με το Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων χρησιμοποιήθηκαν για την εκτίμηση των αποτελεσμάτων των κλινικών χαρακτηριστικών και την έκφραση των τριών γονιδίων στην επιβίωση. Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν σημαντικές σε Ρ & lt? 0,05 ή ιδιαίτερα σημαντική σε Ρ & lt? 0,01. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα SPSS for Windows (SPSS, Chicago, IL).

Ανοσοϊστοχημεία

Για ανοσοϊστοχημεία, καρκινικούς και αντίστοιχοι φυσιολογικοί ιστοί των πνευμόνων καταψύχθηκαν σε ένα θάλαμο κρυοστάτη και 10 μm τομές συλλέχθηκαν σε γυάλινες πλάκες. Οι τομές σταθεροποιήθηκαν σε παγωμένο ακετόνη για 30 λεπτά, πλύθηκαν σε 0.01 Μ PBS για 3 χ 5 λεπτά, αποκλείστηκαν για 1 ώρα σε 0,01 Μ PBS συμπληρωμένο με 0,3% Triton Χ-100 και 5% φυσιολογικό ορό, και μετά επωάστηκαν με κουνελιού αντι-ανθρώπινης Cyr61 (πολυκλωνικά, 1:500? Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), αντι-ανθρώπινο CTGF (πολυκλωνικά, 1:500? Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), ή αίγα αντι-ανθρώπινο WISP-1 (πολυκλωνικά, 1:500? Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), αντίστοιχα, στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Μετά από σύντομη πλύσεις σε 0.01 Μ PBS, οι τομές επωάστηκαν για 2 ώρες σε 0,01 Μ PBS με ραφανιδική υπεροξειδάση-συζευγμένο κατσίκας αντι-κουνελιού IgG ή IgG αντι-κατσίκας κονίκλου (1:1000? Chemicon, Temecula, CA, USA), που ακολουθείται από οπτικοποίηση με 0,003% Η

2O

2 και 0,03% DAB σε 0,05 Μ Tris-HCl (ρΗ 7.6). Οι αρνητικοί έλεγχοι αποτελούνταν από την υποκατάσταση του πρωτεύοντος αντισώματος με φυσιολογικό ορό στην ίδια αραίωση. Ανοσοϊστοχημεία για κάθε μεμονωμένο πραγματοποιήθηκε τουλάχιστον 3 φορές και όλα τα τμήματα κηλιδώνονται αντιθέτως με αιματοξυλίνη. Βαθμολόγησης της χρώσης ανοσοϊστοχημεία πραγματοποιήθηκε ανεξάρτητα από τρεις παθολόγος δεν γνώριζε τις κλινικές παραμέτρους του ασθενούς. Όλες οι τομές χρωματίστηκαν βαθμολογήθηκαν τόσο στον όγκο και παρακείμενες περιοχές μη-όγκου τουλάχιστον σε 10 τομείς πεδίο υψηλής ισχύος με τουλάχιστον 300 διατηρημένων κυττάρων αξιολογείται σε κάθε περιοχή. Το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν πρωτεΐνη-στόχο εκτιμήθηκε διαιρώντας τον αριθμό των θετικών κυττάρων με τον αριθμό των συνολικών κυττάρων ανά έκταση πεδίο υψηλής ισχύος. επιθηλιακά κύτταρα πνεύμονα που φέρουν εμφανή καφέ σήμα στο κυτταρόπλασμα σε σύγκριση με αρνητικό έλεγχο ορίστηκαν ως θετικά κύτταρα. Paired-δείγματα t-test χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η διαφορά μεταξύ των επιπέδων πρωτεΐνης του Cyr61, CTGF, ή WISP-1 σε δείγματα καρκίνου του σε σύγκριση με συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων. Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν στατιστικά πολύ σημαντική σε Ρ & lt? 0,01. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του προγράμματος SPSS για Windows (SPSS, Chicago, IL).

Αποτελέσματα

Η έκφραση του

Cyr61

,

CTGF

, και

WISP-1

γονιδίων σε NSCLC και συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων

Για τη μελέτη του προτύπου έκφρασης των γονιδίων CCN στον NSCLC, τα επίπεδα του

Cyr61

,

CTGF

και

WISP-1

mRNA ποσοτικοποιήθηκαν σε 60 ζεύγη των όγκων και των φυσιολογικών ιστών συμφωνημένα πνευμόνων τους με πραγματικού χρόνου PCR. επίπεδο έκφρασης εμφανίζεται ως αναλογία μεταξύ

Cyr61

,

CTGF

, ή

WISP-1

και το γονίδιο αναφοράς β-

ακτίνης

για τη διόρθωση η διακύμανση των ποσών του RNA. Προς τα κάτω ρύθμιση του

Cyr61

και

CTGF

mRNA συνέβη σε 48 από 60 (80%) και 39 από 60 (65%) δείγματα NSCLC σε σύγκριση με τα ζεύγη φυσιολογικούς ιστούς του πνεύμονα, αντίστοιχα. Αντίθετα, προς τα πάνω ρύθμιση των επιπέδων του

WISP-1

mRNA παρατηρήθηκε σε 50 από 60 (83%) δείγματα NSCLC σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς τους (Σχ. 1). Η μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι το επίπεδο του mRNA είτε

Cyr61

,

CTGF

, ή

WISP-1

γονίδια διέφεραν σημαντικά μεταξύ των δειγμάτων καρκίνου και σε συνδυασμό κανονικές τιμές (Πίνακας 1) . Έκφραση του

Cyr61

και

CTGF

σε πρωτογενείς καρκίνους του πνεύμονα ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ό, τι ταιριάζει φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων (P & lt? 0.001 και P = 0,016, αντίστοιχα). Σε αντίθεση, τα επίπεδα του

WISP-1

σε καρκίνους ήταν σημαντικά υψηλότερα από εκείνα στα συμφωνημένα κανονικές τιμές (P & lt? 0.001) (Πίνακας 1). ανάλυση συσχέτισης Pearson έδειξε, επίσης, ότι η έκφραση του

Cyr61

και

CTGF

ήταν ιδιαίτερα θετική συσχέτιση (R = 0.604? P & lt? 0.001), ενώ η έκφραση του

WISP-1

και

CTGF

έδειξε σημαντική αρνητική συσχέτιση (R = -0,299? P = 0,020). Η έκφραση του

WISP-1

και

Cyr61

δεν συσχετιζόταν σημαντικά (R = -0,182? Ρ = 0,164) (Πίνακας 2). Επειδή τα τρία γονίδια είναι όλα τα μέλη της οικογένειας CCN, είναι πιθανό ότι η έκφρασή τους μπορεί να ελέγχεται από ορισμένες κοινές ρυθμιστικές αρχές (για

Cyr61

και

CTGF

) ή ανταγωνίστηκε από κάθε άλλη (για

WISP-1

και

CTGF

).

Σχετικά επίπεδα έκφρασης του mRNA της

Cyr61

,

CTGF

, και

WISP -1

παρουσιάζονται σε 60 ζεύγη των πρωτογενών ιστών NSCLC και να συνδυαστούν φυσιολογικά δείγματα πνεύμονα. Η έκφραση εμφανίζεται ως μια αναλογία της έκφρασης των γονιδίων CCN στον καρκίνο

έναντι

συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς. Κάθε ράβδος είναι η τιμή log2 του λόγου των επιπέδων έκφρασης CCN μεταξύ όγκων του πνεύμονα (Τ) και συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς (Ν) από τους ίδιους ασθενείς. Λιγότερο από 2-φορές αλλαγή: η αναλογία μεταξύ όγκου και φυσιολογικών είναι & lt? 2. Επειδή Log2 2 = 1, μπαρ τιμή & gt? 1 αντιπροσωπεύει & gt? 2-φορές αύξηση (T & gt? Ν), ενώ το μπαρ αξίας & lt? -1 Αντιπροσωπεύει & gt? 2-φορές μείωση (T & lt? Ν).

Η

η

η ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιήθηκε για την παρακολούθηση της πρωτεΐνης έκφρασης του Cyr61, CTGF, και WISP-1 στα 60 ζεύγη των ιστών του πνεύμονα. Paired-δείγματα t-test έδειξαν ότι η έκφραση της πρωτεΐνης του Cyr61 (Ρ & lt? 0.001) και CTGF (Ρ & lt? 0.001) ήταν δραματικά προς τα κάτω σε καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με τα φυσιολογικά τους αντίστοιχα (Σχήμα 2). Επιπλέον, σημαντική ρύθμιση προς τα άνω του WISP-1 βρέθηκε στα δείγματα καρκίνου (Ρ & lt? 0.001) σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς συμφωνημένα (Σχήμα 2). Αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες έδειξαν ότι Cyr61 ήταν ιδιαίτερα εκφράζονται στο κυτταρόπλασμα των επιθηλιακών κυττάρων του πνεύμονα στους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων των ασθενών με καρκίνωμα του πνεύμονα (Εικ. 3Α), αλλά τα επίπεδα ήταν σημαντικά μειωμένη στις καρκινικές ομολόγους (Εικ. 3Β). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η προς τα κάτω ρύθμιση του Cyr61 οφείλεται κυρίως στη μεγάλη μείωση του επιπέδου έκφρασης Cyr61 σε μεμονωμένα κύτταρα και όχι ένα μειωμένο αριθμό Cyr61-θετικών κυττάρων του πνεύμονα επιθηλιακά. CTGF εμφανίζεται μεγαλύτερη ένταση χρώσης στο κυτταρόπλασμα των φυσιολογικών κυττάρων του πνεύμονα επιθηλιακών (Εικόνα 3D.) Από εκείνο στα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα (Εικ 3Ε.)? η αναλογία του CTGF-θετικό σε -αρνητικοί κύτταρα σε καρκινικούς ιστούς ήταν σαφώς χαμηλότερη σε σύγκριση με τα αντίστοιχα φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων. Αν και η έκφραση του WISP-1 ήταν χαμηλά στο κυτταρόπλασμα των επιθηλιακών κυττάρων που προέρχονται από τους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων (Εικ. 3G), ήταν αξιοσημείωτα αυξημένη στα συμφωνημένα ιστούς καρκίνο του πνεύμονα (Εικ. 3Η). Στο σύνολό τους, το αποτέλεσμα της ανοσοϊστοχημείας παραλληλίζεται εκείνες του πραγματικού χρόνου RT-PCR.

Το γράφημα απεικονίζει κατανομές των δειγμάτων σύμφωνα με το ποσοστό των κυττάρων που είναι θετικά για Cyr61, CTGF, και WISP-1 σε 60 ζεύγη NSCLC και συμφωνημένα μη καρκινικούς ιστούς των πνευμόνων. τιμές Ρ (ζεύγη δειγμάτων t-test) που απαριθμούνται προτείνοντας τη διαφορά μεταξύ των δειγμάτων NSCLC έναντι συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς.

Η

Σε μη-καρκινικούς ιστούς των πνευμόνων από ασθενείς με ΜΜΚΠ, έντονη Cyr61 ανοσοαντιδραστικότητα (καφέ) είναι παρατηρήθηκαν στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων, καθώς και εξωκυττάριο χώρο (Α). Σε αντίστοιχη NSCLC ιστούς, Cyr61 ανοσοαντιδραστικότητα είναι μικρότερη (Β) σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό πνεύμονα. Παρόμοια με Cyr61, πολλές CTGF-θετικά κύτταρα (καφέ) είναι ορατά σε ιστούς του πνεύμονα μη-όγκου (D), και θετικά σήματα μόνο αραιά διανέμονται στους ιστούς NSCLC (Ε). WISP-1 ανοσοϊστοχημεία, ωστόσο, εμφανίζει ένα διαφορετικό πρότυπο έκφρασης. WISP-1 ανοσοαντιδραστικότητα (καφέ) είναι μόλις ανιχνεύεται σε φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων από ασθενείς NSCLC (G), αλλά είναι σημαντικά αυξημένη σε NSCLC ιστούς (Η). C, F, και Ι είναι αρνητικοί μάρτυρες του Cyr61, CTGF, και WISP-1, αντίστοιχα. Όλα τα πλακίδια με αιματοξυλίνη (μπλε). μπαρ κλίμακας = 60 μm.

Η

Σχέση μεταξύ της έκφρασης των Cyr61 σε καρκίνους του πνεύμονα και τα κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά των ατόμων

Η μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του

Cyr61 έναντι

στάδιο του όγκου, μετάσταση, η ιστολογική υποτύπου, το κάπνισμα και το οικογενειακό ιστορικό (Πίνακας 3). Επίπεδο

Cyr61

έκφραση ήταν σημαντικά μειωμένη σε υψηλή όγκους στάδιο σε σύγκριση με χαμηλή όγκους σταδίου (P = 0,014). Πολλαπλές συγκρίσεις (LSD t-test) ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση του

Cyr61

μεταξύ όγκων των φάσεων Ι και III ήταν σημαντικά διαφορετικές (Ρ = 0,004)? αλλά καμία σημαντική διαφορά στο

Cyr61

έκφραση εμφανίστηκαν σε δείγματα NSCLC σύγκριση είτε στάδια Ι και ΙΙ (P = 0.063) ή τα στάδια ΙΙ και ΙΙΙ (P = 0,17). Η ιστολογική ανάλυση έδειξε ότι υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των SC, AC, καρκίνωμα πλακώδους αδενο-(ASC) και άλλων παθολογικών τύπος σε επίπεδο έκφρασης του

Cyr61

(Ρ = 0,001). Επιπλέον, πολλαπλή σύγκριση (LSD t-test) έδειξε ότι η έκφραση του

Cyr61

μεταξύ SC

έναντι

ASC (Ρ = 0,009) ή SC

έναντι

άλλες παθολογικές τύπου (Ρ = 0.001) ήταν σημαντικά διαφορετική. Ομοίως, σημαντικές διαφορές των

Cyr61

έκφρασης παρατηρήθηκαν επίσης μεταξύ των AC

έναντι

ASC (P = 0,015) ή AC

έναντι

άλλες παθολογικές τύπου (P = 0,002). Το κάπνισμα σχετίστηκε με χαμηλή έκφραση του

Cyr61

(P = 0,009). Σε αντίθεση, η έκφραση του

Cyr61

δεν ήταν συσχετίζονται με τη φυματίωση, το φύλο, την ηλικία και το μέγεθος του όγκου (Πίνακας 3).

Η

Σχέση μεταξύ της έκφρασης του

CTGF

σε καρκίνους του πνεύμονα και τα κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά των ατόμων

η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση του

CTGF

συνδέθηκε έντονα με κάποια κλινικά χαρακτηριστικά των NSCLC, συμπεριλαμβανομένων στάδιο του όγκου, τη μετάσταση, ιστολογία, το κάπνισμα , και το οικογενειακό ιστορικό (Πίνακας 3). Επίπεδο

CTGF

μειώθηκε σημαντικά σε όγκους υψηλής στάδιο σε σύγκριση με τους όγκους χαμηλής στάδιο (Ρ = 0,040). Επιπλέον, σημαντική διαφορά των

υπήρχαν CTGF

έκφρασης μεταξύ των όγκων, το στάδιο I

έναντι

σταδίου ΙΙΙ (P = 0,013) και το στάδιο ΙΙ

έναντι

σταδίου ΙΙΙ (P = 0,024) ? Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε καμία σημαντική στατιστική διαφορά μεταξύ των όγκων, το στάδιο Ι και II (Ρ = 0,077). Για μετάσταση, την έκφραση του

CTGF

στο μεταστατικό NSCLC ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ό, τι σε μη μεταστατικό NSCLC (P = 0,039)? σημαντικά, το κάπνισμα σχετίστηκε με εξέχουσα καταστολή του

CTGF

έκφραση σε NSCLC (Ρ = 0,017) (Πίνακας 3). Επιπλέον, μια σημαντική διαφορά σημειώθηκε μεταξύ SC, AC, ASC και άλλες παθολογικές τύποι στο επίπεδο του CTGF (Ρ = 0,005). Επιπλέον, το επίπεδο του

CTGF

στους ασθενείς ήταν σημαντικά χαμηλότερες από εκείνες των οποίων τα μέλη της οικογένειας δεν έχουν καρκίνο (P = 0,038). Ωστόσο, το φύλο, το μέγεθος του όγκου, την ηλικία και ιστολογία της φυματίωσης δεν έδειξαν σημαντικές συσχετίσεις με την έκφραση του

CTGF

(Πίνακας 3).

Σχέσεις μεταξύ έκφραση του

WISP-1

στο NSCLC και τα κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά των ατόμων

η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση του

WISP-1

συσχετίστηκε σημαντικά με ιστολογία του όγκου, καθώς και η ηλικία των ασθενών με NSCLC κατά τη διάγνωση ( Πίνακας 3). Μονόδρομη ανάλυση ANOVA έδειξε ότι υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των SC, AC, ASC και άλλα ιστολογικό τύπο στην έκφραση τους

WISP-1

(P = 0,017). Επίπεδο

WISP-1

το ASC ήταν πολύ υψηλότερες από αυτές που είτε SC (P = 0,002) ή AC (P = 0,015). Επιπλέον, οι νεότεροι ασθενείς (ηλικίας, 35-50) είχαν σημαντικά υψηλότερο επίπεδο των

WISP-1

στους όγκους τους από ηλικιωμένα άτομα (ηλικίας, 50-65 ή ≥65) (P = 0.018 και P = 0.036 , αντίστοιχα). Σε αντίθεση, άλλες κλινικές παραμέτρους (οικογενειακό ιστορικό, μετάσταση, ιστορικό καπνίσματος, της φυματίωσης, το φύλο, τον τύπο του όγκου, και το μέγεθος του όγκου) δεν συνδέθηκαν με έκφραση του

WISP-1

.

Έκφραση του

Cyr61

,

CTGF

,

WISP-1

γονιδίων και την κλινική έκβαση των NSCLC

ανάλυση

μονοπαραγοντική επιβίωσης έδειξε ότι η έκφραση του

Cyr61

,

CTGF

, μετάσταση, και το κάπνισμα σχετίζονταν σημαντικά με την επιβίωση (Πίνακας 4). Καμπύλες Kaplan-Meier πρότεινε ότι οι ασθενείς με την υψηλή έκφραση του

Cyr61

έδειξαν σημαντικά επεκταθεί μέσο χρόνο επιβίωσης σε σύγκριση με τους άλλους ασθενείς (Σχ. 4Α) (Ρ = 0.001). Ομοίως, τα υψηλά επίπεδα του

CTGF

σχετίστηκαν με παρατεταμένη επιβίωση (Σχ. 4Β) (Ρ = 0,031). Αντιθέτως, καμία σημαντική συσχέτιση του

WISP-1

έκφρασης και επιβίωση παρατηρήθηκε (Εικ. 4C) (Ρ = 0,214). Μετά τον έλεγχο των κλινικών και παθολογικών χαρακτηριστικά (ηλικία, φύλο, μετάσταση, τον καπνό, το στάδιο του όγκου, τη φυματίωση, το μέγεθος του όγκου), ανάλυση επιβίωσης πολυπαραγοντική (Cox παλινδρόμησης) διεξήχθη για την αξιολόγηση των πιθανών επιπτώσεων των τριών γονιδίων CCN στην πρόγνωση του καρκίνου. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι και τα δύο

Cyr61

και

CTGF

ήταν σημαντικά ανεξάρτητοι θετικοί προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση των ασθενών με NSCLC, και ο σχετικός κίνδυνος ήταν 0.047 για

Cyr61

και 0,0357 για

CTGF

(Πίνακας 5). Ωστόσο, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση εμφανίστηκε μεταξύ

WISP-1

έκφρασης και επιβίωσης (Πίνακας 5).

Η

Η

Συζήτηση

Cyr61, CTGF, και WISP-1 παίζουν σημαντικούς ρόλους στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, μετανάστευση και διαφοροποίηση. Η έκφρασή τους φαίνεται να ρυθμίζεται διαφορετικά σε διάφορους τύπους όγκων. Προκειμένου να διερευνηθεί η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των γονιδίων CCN και NSCLC, χρησιμοποιήσαμε PCR πραγματικού χρόνου και ανοσοϊστοχημεία για την αξιολόγηση των επιπέδων mRNA και πρωτεΐνης αυτών των τριών γονιδίων σε NSCLC και συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων τους. Προς τα κάτω ρύθμιση του

Cyr61

και

CTGF

και προς τα πάνω ρύθμιση WISP-1 εμφανίστηκε στα δείγματα NSCLC σύγκριση με τα φυσιολογικά αντίστοιχά τους, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτά τα μόρια θα μπορούσαν να σχετίζονται με το σχηματισμό του όγκου και της εξέλιξης σε NSCLC.

Cyr61 είναι το πρώτο κλωνοποιημένο μέλος της οικογένειας CCN και ρυθμιστικούς ρόλους της στα κύτταρα όγκου έχουν αναφερθεί ευρέως σε πολλούς τύπους καρκίνων. Σε καρκίνους του μαστού, Cyr61 υπερεκφράζεται και μπορούν να διεγείρουν την εξέλιξη του όγκου [24] – [27]. Μια γαστρική κυτταρική γραμμή αδενοκαρκινώματος έγινε πιο ογκογόνα όταν τα κύτταρα γενετικά τροποποιημένα ώστε να εκφράζουν υψηλά επίπεδα Cyr61 [16]. Η έκφραση του Cyr61 ήταν υψηλή σε ραβδομυοσαρκώματα και κυτταρικές σειρές που προέρχονται από κακοήθη μελανώματα, αδενοκαρκινώματα του παχέος εντέρου, και θηλώματα κύστη [16], [28]. Τα κακοήθη γλοιώματα έχουν συχνά υψηλά επίπεδα Cyr61 συνδέονται ενισχυμένη καρκινογέννεση προκαλείται μέσω της ιντεγκρίνης-συνδεδεμένη οδού σηματοδότησης κινάσης [29]. Προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης Cyr61 ταυτοποιήθηκε πρόσφατα σε περιτοναϊκή μεταστάσεις από ανθρώπινο παγκρεατικό καρκίνο [30]. Παραδόξως, Cyr61 φαίνεται να έχει το αντίθετο ρόλο στον καρκίνο του πνεύμονα. Έχουμε αναφέρει ότι Cyr61 ήταν προς τα κάτω σε τέσσερα από 5 δείγματα του καρκίνου του πνεύμονα, και καρκίνου του πνεύμονα κύτταρα σταθερά επιμολυσμένα με ένα φορέα έκφρασης Cyr61 ήταν λιγότερο ογκογονικά από το φορέα μόνο επιμολυσμένα κύτταρα ελέγχου [19]. περαιτέρω μελέτες μας έδειξαν ότι η αναγκαστική έκφραση Cyr61 σε καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα οδήγησε σε διακοπή του κυτταρικού κύκλου τους σε φάση G1 προκαλούνται από ρ53 [6]. Εδώ, βρήκαμε ότι η έκφραση του

Cyr61

μειώνεται σε δείγματα NSCLC σε σύγκριση με μάρτυρες τους, η οποία υποστηρίζει σθεναρά πρώην υπόθεσή μας. Cyr61 αναφέρθηκε επίσης να αναστέλλουν την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη [31], καρκίνος του ενδομητρίου [32] και λειομυώματα [33]. Λαμβανόμενα μαζί, τα δεδομένα πρότειναν ότι Cyr61 μπορεί να συμπεριφερθεί ως καταστολέας όγκου υπό ορισμένες συνθήκες σε διάφορους τύπους ιστών, συμπεριλαμβανομένων των NSCLC.

CTGF αναγνωρίστηκε ως μιτογόνο βρέθηκε στο ρυθμισμένο μέσο των ανθρώπινων ομφάλιων φλεβικών ενδοθηλιακών κυττάρων [34 ]. Κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη 349 αμινοξέων με 43% ταυτότητα αλληλουχίας προς Cyr61, και όλα τα 38 κυστεΐνες σε CTGF και Cyr61 διατηρούνται πλήρως. CTGF βρέθηκε να υπερεκφράζεται σε όγκους μαστού [26], [35], μελανώματα [36], καρκίνους του παγκρέατος [37], τα σαρκώματα συμπεριλαμβανομένων χονδροσαρκώματα [38], [39]? ενώ μια αντίστροφη συσχέτιση έχει αναφερθεί μεταξύ της κακοήθη φαινότυπο και το επίπεδο της έκφρασης του CTGF σε ινοβλάστες και όγκους των ενδοθηλιακών κυττάρων [40]. Στα πειράματά μας, βρήκαμε ότι το επίπεδο της έκφρασης του

CTGF συστήματα In NSCLCs ήταν χαμηλότερη από ό, τι στα φυσιολογικά δείγματα συμφωνημένα πνεύμονα, υπονοώντας συνάρτηση δυναμικού καταστολής όγκου της. Σε συμφωνία με το εύρημα μας, μια πρόσφατη μελέτη από Chien

et al.

[20] έδειξε ότι CTGF κατέστειλε πνεύμονα ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων με επαγωγή του ρ53, καθώς και από την αναστολή της ινσουλινοειδούς αυξητικού παράγοντα-Ι εξαρτώμενων Akt φωσφορυλίωση και επιδερμικό παράγοντα που εξαρτάται από εξωκυτταρικό σήμα κινάση ρυθμιζόμενη 1/2 φωσφορυλίωση ανάπτυξη.

Από την άλλη πλευρά, βρήκαμε ότι

WISP-1

υπερεκφράστηκε σε δείγματα NSCLC σε σύγκριση με φυσιολογικά τους πνεύμονα ομολόγους ιστό, υποδηλώνοντας ότι το WISP-1 θα μπορούσε να δράσει ως ογκοπρωτείνης σε NSCLC. WISP-1 ταυτοποιήθηκε ως ένα γονίδιο που ρυθμίζεται αυξητικά σε Wnt-1 μαστικά επιθηλιακά κύτταρα μετασχηματισμένα C57 MG ποντίκι? Έχει πλήρη διατήρηση όλων των 38 καταλοίπων κυστεΐνης με εκείνες των Cyr61 και CTGF [10]. WISP-1 έχει συσχετισθεί με είτε την ενίσχυση ή την αναστολή της ανάπτυξης των όγκων. Για παράδειγμα, εκφράζεται ισχυρά σε ανθρώπινους καρκίνους του μαστού και του παχέος εντέρου [10]. Εξαναγκασμένη υπερέκφραση WISP-1 σε φυσιολογικό νεφρό αρουραίου ινοβλαστών (NRK-49F) ήταν αρκετή για να επάγει την μετατροπή τους [11]. Αντίθετα, έκφραση WISP-1 ήταν αντιστρόφως ανάλογη με τον πολλαπλασιασμό, τη μετάσταση και την ανάπτυξη των κυττάρων μελανώματος [41], [42]. Επιπλέον, αποτέλεσμα μας ότι προς τα πάνω ρύθμιση του WISP-1 συσχετίστηκε θετικά με μετάσταση καρκίνου του πνεύμονα ήταν συνεπές με τα ευρήματα από ένα μοντέλο ποντικού [21]. Παραδόξως, Σύντομα

et al.

Βρεθεί ότι

in vitro

υπερέκφραση WISP-1 μειωμένη κινητικότητα του καρκίνου του πνεύμονα κυττάρων [22]. Από WISP-1 είναι μια εκκρινόμενη πρωτεΐνη και λειτουργεί κυρίως από την αλληλεπίδραση με το ECM, η διαφορά ευρήματα μπορεί να αντανακλά τη διαφορά στην ECM

in vivo

και

in vitro

.

μονοπαραγοντική στατιστική ανάλυση αποκαλύπτεται επίσης ότι τα χαμηλά επίπεδα είτε

Cyr61

ή

CTGF

είχαν σχέση με την εξέλιξη των NSCLC, και η προς τα κάτω ρύθμιση των

Cyr61

και

CTGF

ήταν πιο αξιοσημείωτη σε ασθενείς με οικογενειακό ιστορικό από εκείνους που δεν το οικογενειακό ιστορικό. Αυτά τα δεδομένα συνεπάγεται ότι Cyr61 και CTGF θα μπορούσε να είναι γονίδια καταστολής όγκου στον καρκίνο του πνεύμονα. Μέσα από τις αναλύσεις πολλαπλής γραμμικής παλινδρόμησης, εξάλλου, βρήκαμε ότι κλινικά χαρακτηριστικά συνδέονται στενά με τα επίπεδα έκφρασης του

Cyr61

,

CTGF

και

WISP-1

. επίπεδο έκφρασης του

Cyr61

στο 71% δείγματα καρκίνου του πνεύμονα προσδιορίστηκε από οκτώ ανεξάρτητες μεταβλητές, κυρίως από AC, SC, και την ηλικία. Επίπεδα

CTGF

στο NSCLCs ήταν επίσης σημαντικά που συνδέονται με τα κλινικά χαρακτηριστικά, αλλά με ορισμένες διαφορές. Το φύλο φάνηκε να παίζουν ρόλο στην έκφραση του

CTGF

, αλλά όχι

Cyr61

.