Αφηρημένο

κυτταροτοξική χημειοθεραπεία του καρκίνου περιορίζεται από σοβαρές, μερικές φορές απειλητικές για τη ζωή, τις παρενέργειες που προκύπτουν από τοξικότητες σε ευαίσθητους φυσιολογικά κύτταρα επειδή οι θεραπείες δεν είναι εκλεκτικές για κακοήθη κύτταρα. Έτσι, πώς μπορούν να βελτιωθούν επιλεκτικά; Εναλλακτικές φαρμακοτεχνικές μορφές της αντικαρκινικών παραγόντων έχουν διερευνηθεί με σκοπό να βελτιωθεί η συμβατική θεραπεία χημειοθεραπείας. Αυτά τα σκευάσματα που σχετίζονται με προβλήματα, όπως σοβαρές τοξικές παρενέργειες επί υγιών οργάνων, αντοχή φαρμάκου και περιορισμένη πρόσβαση του φαρμάκου στις καρκινικές περιοχές πρότεινε την ανάγκη να επικεντρωθεί σε συστήματα χορήγησης φαρμάκων ελεγχόμενης site-specific. Σε απάντηση σε αυτές τις ανησυχίες, έχουμε αναπτύξει ένα νέο σύστημα χορήγησης φαρμάκων με βάση μαγνητική ερυθροκύτταρα μηχανικής με ιική πρωτεΐνη σύντηξης ακίδα. Αυτό το νέο σύστημα παροχής φαρμάκου ερυθροκυττάρων που βασίζονται έχει το δυναμικό για μαγνητική ελεγχόμενη τοπο-ειδικό εντοπισμό και άκρως αποτελεσματική ικανότητα σύντηξης με τα στοχευόμενα κύτταρα. Εδώ μπορούμε να δείξουμε ότι το σύστημα παροχής φαρμάκου ιοσώματα ερυθρο-μαγνητο-HA είναι σε θέση να αποδίδουν και σύντηξη με τα κύτταρα-στόχους και να απελευθερώνει αποτελεσματικά θεραπευτικών ενώσεων εντός των κυττάρων. Η αποτελεσματικότητα του αντικαρκινικού φαρμάκου που χρησιμοποιείται είναι αυξημένη και η απαιτούμενη δόση είναι 10 ώρα μικρότερη από εκείνη που χρειάζεται με τη συμβατική θεραπεία

Παράθεση:. Cinti C, Τάραντα Μ, Ν & ΐάί Ι, Grimaldi S (2011) πρόσφατα κατασκευασμένο μαγνητική ερυθροκύτταρα για τη διαρκή και στοχευμένη χορήγηση αντικαρκινικών θεραπευτικών ενώσεων. PLoS ONE 6 (2): e17132. doi: 10.1371 /journal.pone.0017132

Επιμέλεια: Steven Ellis, του Πανεπιστημίου του Louisville, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 12η, Οκτωβρίου 2010? Αποδεκτές: 21 Ιανουαρίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: 23 Φεβρουαρίου, 2011

Copyright: © 2011 Cinti et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η επιτυχία κάθε ιατρική θεραπεία δεν εξαρτάται μόνο από η φαρμακοκινητική /φαρμακοδυναμική δράση του θεραπευτικού παράγοντα, αλλά σε μεγάλο βαθμό, από τη βιοδιαθεσιμότητά της στο σημείο της δράσης στο ανθρώπινο σύστημα [1] – [4]. Στο παρελθόν, έχουν εναλλακτικές φαρμακευτικά σκευάσματα της αντικαρκινικών παραγόντων έχουν διερευνηθεί με σκοπό να βελτιωθεί η συμβατική θεραπεία χημειοθεραπείας. Σε συμβατικές /τρέχουσα θεραπεία του στόματος δισκίο, κάψουλα και ενέσιμα σκευάσματα χρησιμοποιούνται για την παράδοση αντικαρκινικά φάρμακα. Αυτά τα σκευάσματα που σχετίζονται με προβλήματα, όπως σοβαρές τοξικές παρενέργειες σε υγιή όργανα, δυσκολίες στην κλινική διαχείριση, αντίσταση στα φάρμακα και την περιορισμένη πρόσβαση των ναρκωτικών στους χώρους του όγκου πρότεινε την ανάγκη να επικεντρωθεί σε συγκεκριμένα συστήματα ελεγχόμενης χορήγησης φαρμάκων ιστοσελίδα.

συστήματα παροχής φαρμάκων (DDSs) όπως λιπιδίων ή με βάση πολυμερές νανοσωματίδια έχουν σχεδιαστεί για να βελτιώσει τις φαρμακολογικές και θεραπευτικές ιδιότητες των φαρμάκων που χορηγούνται παρεντερικά. Η πλειοψηφία της DDS σήμερα εγκεκριμένο για παρεντερική χορήγηση εμπίπτει στην κατηγορία των λιποσωμικών σκευασμάτων ή βασιζόμενα σε λιπίδια ή θεραπευτικά μόρια που συνδέονται με πολυαιθυλενογλυκόλη (PEG) [5] – [7]. Αν και η διαλυτότητα του φαρμάκου δεν μπορεί να είναι ένας περιοριστικός παράγοντας για συστήματα όπως προϊόντα σύζευξης πολυμερούς-φαρμάκου, στην οποία το φάρμακο συνδέεται χημικώς με τον φορέα, μπορεί να είναι ένας σημαντικός παράγοντας στην λιποσωμική DDS. Φέρουσα ικανότητα των λιποσωμάτων δεν είναι αποτελεσματική για τις πολύ μεγάλες θεραπευτικών μορίων όπως οι πρωτεΐνες, ιδιαίτερα όταν μικρές διαμέτρους λιποσώματος είναι επιθυμητές για λόγους βιοκατανομής. Βιοδιασπώμενα νανο /μικροσωματίδια πολυ (D, L-λακτίδιο-συν-γλυκολίδιο) (PLGA) και PLGA πολυμερή που βασίζονται ευρέως διερευνηθεί ως φορείς για ελεγχόμενη χορήγηση μακρομοριακών θεραπευτικά όπως πρωτεΐνες, πεπτίδια, εμβόλια, τα γονίδια, τα αντιγόνα και αυξητικούς παράγοντες . Βιβλιογραφία αναφέρει πολλά πλεονεκτήματα και τα μειονεκτήματα του PLGA και συστημάτων απελευθέρωσης που βασίζονται σε PLGA για την παράδοση μακρομοριακών φαρμάκων [8], [9]. ενθυλάκωση Drug, το μέγεθος των σωματιδίων, πρόσθετα προστίθενται κατά τη διάρκεια της σύνθεσης, μοριακού βάρους, αναλογία λακτιδίου προς γλυκολίδιο τμήματα σε PLGA και μορφολογία της επιφάνειας θα μπορούσε να επηρεάσει τα χαρακτηριστικά απελευθέρωσης [10]. PLGA έχει αρνητική επίδραση στην σταθερότητα της πρωτεΐνης κατά τη διάρκεια της παρασκευής και αποθήκευσης, κυρίως λόγω της όξινης κατάλυσης φύση της αποικοδόμησης της [11]. Επιπλέον, οι συνθήκες επεξεργασίας που χρησιμοποιούνται στην κατασκευή των οχημάτων διανομής φαρμάκου PLGA έχει επιβλαβή αποτελέσματα επί ορισμένων δευτερεύουσες δομές πρωτεΐνη [12].

Τα τελευταία χρόνια, τα συστήματα διανομής που βασίζονται σε κύτταρα έχουν επίσης αναπτυχθεί. Η χρήση κυττάρων ως θεραπευτικών φορέων έχει αναπτυχθεί ως μια διακριτή έννοια και τη μέθοδο παράδοσης [13] – [17]. οχήματα κυψελών που βασίζεται είναι ιδιαίτερα ελκυστικές για την παράδοση των βιολογικών θεραπευτικών παραγόντων που είναι δύσκολο να συντεθεί, έχουν μειωμένη ημίσεια ζωή, διείσδυση περιορισμένη ιστός ή απενεργοποιούνται γρήγορα με βάση τον άμεσο

in vivo

εισαγωγή. Ως θέμα των γεγονότων, το σύστημα χορήγησης που βασίζεται σε κύτταρα διαθέτει έναν αριθμό πλεονεκτημάτων, συμπεριλαμβανομένων παρατεταμένους χρόνους παράδοσης, τη στόχευση φαρμάκων σε εξειδικευμένο κύτταρο διαμερίσματα και βιοσυμβατότητα. Η χρήση ενός φυσιολογικό φορέα για να παραδώσει θεραπευτικά σε όλο το σώμα να βελτιώσει τόσο την αποτελεσματικότητά τους, ελαχιστοποιώντας ταυτόχρονα αναπόφευκτες αρνητικές παρενέργειες, αποτελεί μια ελκυστική προοπτική που μπορεί να εφαρμοστεί σε πολλές κλινικές ρυθμίσεις. Η συμπεριφορά των κυττάρων του αίματος, ως σύστημα χορήγησης για αρκετές κατηγορίες μορίων (δηλαδή, πρωτεΐνες, συμπεριλαμβανομένων των ενζύμων και πεπτίδια, θεραπευτικούς παράγοντες υπό μορφή αναλόγων νουκλεοτιδίου, γλυκοκορτικοειδή ανάλογα), έχει μελετηθεί εκτεταμένα ως αυτοί έχουν πολλές ιδιότητες, οι οποίες καθιστούν μοναδικά και χρήσιμοι φορείς [18] – [20]. Στο πλαίσιο της εξωσωματικής φαρμακοθεραπείας, η πλέον υποσχόμενη προσέγγιση είναι η χρήση των autoerythrocytes που διαθέτουν μοναδικές μορφολογικά και φυσιολογικά χαρακτηριστικά. Εφαρμογή των ερυθροκυττάρων ως δοχεία διάφορα φάρμακα μειώνει τον κίνδυνο παρενεργειών και παθολογικές αντιδράσεις του ανοσοποιητικού έναντι έγκλειστα παράγοντες και, επιπλέον, επιτρέπει την τροποποίηση των φαρμακοκινητικών τους και φαρμακοδυναμικές ιδιότητες για τη μείωση των δόσεων και χρονικά διαστήματα μεταξύ τους. Η αποτελεσματικότητα και η ασφάλεια των φαρμακευτικών παραγόντων εισάγονται σε ερυθροκύτταρα έχουν επιβεβαιωθεί σε πολυάριθμες

in vivo

μελέτες [20]. Τα μαγνητικά ερυθροκύτταρα, που προκύπτει από την συν-ενθυλάκωση των φαρμάκων με κάποια ferrofluids όπως το κοβάλτιο-φερρίτη και μαγνητίτη, έχουν αναφερθεί για να κατευθύνουν την ενθυλακωμένο φάρμακο κατά κύριο λόγο στις επιθυμητές θέσεις του σώματος μέσω ενός εξωτερικού μαγνητικού πεδίου [21] – [23]. Εφαρμόζοντας κύματα υπερήχων στην περιοχή όπου μαγνητικού ερυθροκύτταρα συσσωρεύονται μπορεί να προκαλέσει καταστροφή του οχήματος και την απελευθέρωση ενός φαρμάκου στο επίπεδο του οργάνου ή του ιστού [24], [25]. Εκτός από την στόχευση του φαρμάκου, η μέθοδος αυτή έχει αξιολογηθεί για την επαγωγή της τοπικής ισχαιμίας σε όγκους, η οποία μπορεί κατά συνέπεια να συμβάλει στην προώθηση υποχώρηση του όγκου, λόγω της μειωμένης τοπική ροή αίματος [22]. Ωστόσο, η πιθανή ικανότητα των μεταφορέων κυττάρων για να παρέχει τη συγκεκριμένη τοποθεσία ή στοχευμένη παράδοση των θεραπευτικών έχει ακόμη διερευνηθεί πλήρως. Ανάπτυξη των κυττάρων που στοχεύουν στρατηγικές θα εφαρμογών περαιτέρω εκ των προτέρων των κυττάρων του οχήματος, να διευρύνουν τη δυνατότητα εφαρμογής αυτής της προσέγγισης παράδοσης και ενισχύει θεραπευτικά αποτελέσματα.

Σε μια προσπάθεια να βελτιωθεί η στόχευση και η αποτελεσματική απελευθέρωση των θεραπευτικών ενώσεων στην ενδο-κυτταρικό επίπεδο των κυττάρων στόχων, έχουμε αναπτύξει ένα νέο σύστημα παροχής φαρμάκου ερυθροκυττάρων που βασίζεται μαγνητικό πεδίο που ελέγχεται. Στερέωση ιικό ακίδα γλυκοπρωτεϊνη σύντηξης επί της μεμβράνης των ερυθροκυττάρων και ενθυλάκωσης υπερπαραμαγνητικά νανοσωματίδια και φαρμάκου σε ερυθροκύτταρα, έχουμε παράγονται νέο σύστημα χορήγησης φαρμάκων ερυθροκύτταρα βάση, οι ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα, τα οποία έχουν τη δυνατότητα για μαγνητική ελεγχόμενη τοπο-ειδική εντοπισμός και εξαιρετικά αποτελεσματική ικανότητα σύντηξης με τα στοχευόμενα κύτταρα. Η παρουσία του ιικού γλυκοπρωτεΐνης σύντηξης καθιστά την εφαρμογή των υπερήχων κυμάτων περιττό για την επαγωγή «όχημα» καταστροφή για την απελευθέρωση θεραπευτικών ενώσεων στην θέση-στόχο. Εδώ μπορούμε να δείξουμε πώς τα ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων συμπεριφέρονται κάπως παρόμοια με ένα ιό στην ικανότητά τους να εισβάλουν κύτταρα ξενιστές. Αυτές μηχανικής ερυθροκύτταρα είναι σε θέση να συντήκονται με την κυτταροπλασματική μεμβράνη των κυττάρων-στόχων σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα και να απελευθερώσει τα μαγνητικά νανοσωματίδια και θεραπευτική ένωση μέσα αυτών των κυττάρων. Το συνολικό ποσό του αντικαρκινικού φαρμάκου 5-Αζα-2-δεοξυκυτιδίνη έχει θεραπευτικό αποτέλεσμα 10 φορές μικρότερη από εκείνη της συνήθους θεραπείας, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτό το νέο σύστημα παροχής φαρμάκου μπορεί να είναι σε θέση να μειώσει κυτταροτοξικά αποτελέσματα φαρμάκων με την αύξηση της βιοδιαθεσιμότητας των θεραπευτικών ενώσεων στο σημείο της δράσης και τη βελτίωση της φαρμακοκινητικής. Αυτό το νέο σύστημα παροχής φαρμάκου ερυθροκυττάρων που βασίζεται μπορεί ενδεχομένως να εφαρμοστεί σε πολλές κλινικές ρυθμίσεις, συμπεριλαμβανομένης της νεοπλασματικής παθολογιών, των παθολογιών που προκαλούνται από τη μόλυνση ενός ανθρώπου ή ζώου ιούς και καρδιαγγειακών παθήσεων.

Υλικά και Μέθοδοι

ανάπτυξη ιός της γρίπης και την απομόνωση των αιμαγλουτινίνη (ΗΑ) γλυκοπρωτεΐνη

του ιού της γρίπης που προέρχονται από το αλλαντοϊκό υγρό 10-ημερών-old γονιμοποιημένα αυγά (αυγά ελήφθησαν από το εργοστάσιο κοτόπουλο στη Ρώμη, Ιταλία) ιζηματοποιήθηκε με υπερφυγοκέντρηση και το σφαιρίδιο επανααιωρήθηκε σε οκτα (αιθυλενογλυκόλη) –

n-δωδεκύλιο

μονοαιθέρα (C

12Ε

8) και αφέθηκε όλη τη νύχτα για να επιτραπεί η πλήρης διαλυτοποίηση της ιικής μεμβράνης. Η αναστολή ήταν προσεκτικά ομογενοποιημένο και ultracentrifugated να ιζηματοποιηθούν τις ιογενείς νουκλεοκαψίδια. Στη συνέχεια, το εναιώρημα ιοσώματος (υπερκείμενο που περιέχει την πρωτεΐνη ΗΑ) καθαρίστηκε με υπερφυγοκέντρηση σε μια ασυνεχή βαθμίδωση σακχαρόζης-(50% και 10% σακχαρόζης). Κατά τη διασύνδεση των στρωμάτων σακχαρόζης, η γλυκοπρωτεΐνη ΗΑ συμπυκνώματα. Μετά την απομάκρυνση αυτού του στρώματος, το ΗΑ έχει διαπίδυση έναντι ρυθμιστικού και αποστειρώνεται με διήθηση.

ερυθροκύτταρα λύσης και την ενσωμάτωση του ΗΑ γλυκοπρωτεΐνης, σούπερ παραμαγνητικά νανοσωματίδια και 5-αζα-2-άΟ φάρμακο

ανθρώπινα ερυθρά αιμοσφαίρια (RBCs) ελήφθησαν από αίμα υγιών δοτών με φυγοκέντρηση στις 1700 rpm για 10 λεπτά στους 4 ° C. Προσφάτως συλλέγεται RBCs πλύθηκαν δύο φορές σε φυσιολογικό φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα (1Χ PBS) (1.37 Μ NaCl, 57 mM KCl, 54 mM Να

2HPO

4, 45 mM ΚΗ

2 ΡΟ

4 ρΗ 7,4 ).

2 × 10

9 RBCs υπέστησαν λύση σε 300 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος λύσης (10 mM TRIS, 0,1 mM EDTA, 1 mM MgCl

2 σε ρΗ 7.2) για 60 λεπτά στους 0 ° C . Η ισοτονικότητα ακολούθως αποκαταστάθηκε με την προσθήκη 65 μΐ ​​1 Χ ρυθμιστικού επανασφράγισης (1,37 Μ NaCl, 57 mM KCl, 54 mM Να

2HPO

4, 45 mM ΚΗ

2 ΡΟ

4, 15 mM MgCl

2 ρΗ 7.4), συμπληρωμένο με 0.1 mg των 100 nm κόκκινο-επισημασμένου υπερπαραμαγνητικά νανοσωματιδίων (νανο-screenMAG, Chemicell Company), 1 μg ΗΑ γρίππης ιική γλυκοπρωτεΐνη ακίδα, και 0,38 ή 30,5 μg 5-Αζα-2-dC ( Sigma-Aldrich, St Louis, ΜΟ, USA).

Το εναιώρημα επωάστηκε για 45 λεπτά στους 37 ° C υπό ήπια ανάδευση. Σφραγισμένο RBCs (φαντάσματα), που περιέχει πρωτεΐνη ΗΑ σύντηξης για λιπιδική μεμβράνη και οι δύο 5-Αζα-2-DC και υπερπαραμαγνητικά νανοσωματιδίων μέσα (ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματος), συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση στις 10.000 rpm για 15 λεπτά στους 4 ° C. Τα ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα πλύθηκαν δύο φορές με 1Χ PBS με φυγοκέντρηση στις 9000 rpm για 15 λεπτά στους 4 ° C και επανεναιωρήθηκαν σε 1 Χ PBS που περιείχε 1% FCS.

Κινητική ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ ιοσωμάτων σύντηξης με κύτταρα HeLa: Φασματοφθορισμόμετρο ανάλυση

ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων παρασκευάστηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω και επισημάνθηκαν με προσθήκη δεκαοκτυλίου ροδαμίνη (R18). Τα ιοσώματα ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ /R18 φορτωμένα προστέθηκαν σε κύτταρα HeLa. Ολικό λιπίδιο σε ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων /R18 ποσοτικοποιήθηκε με την ποσότητα του δεκαοκτυλίου ροδαμίνης (R18) σε μεμβράνη τους, με βάση το γεγονός ότι αντιπροσωπεύει το R18 για το 15% του συνολικού βάρους των λιπιδίων σε αυτό. Τα ερυθρο-μαγνητο-HA-ιοσώματα /R18 διαλυτοποιήθηκαν με προσθήκη 0.1% (τελική συγκέντρωση) Triton Χ-100 σε PBS, και ο φθορισμός του R18 (διέγερση στα 560 nm και εκπομπή στα 590 nm) μετρήθηκε με τη χρήση ενός κλάσματος του διάλυμα με φασματοφθοριόμετρο Perkin Elmer 650-40), βαθμονομημένη με πρότυπα διαλύματα R18 που περιέχει 0.1% Triton Χ-100. Ο βαθμός R18 αυτο-σβέσης σε κάθε ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ ιοσωμάτων εξετάστηκε με σύγκριση του φθορισμού R18 πριν και μετά την διαλυτοποίηση των ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων με 0,1% Triton Χ-100 σε PBS. Ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ ιοσωμάτων προστέθηκαν σε κύτταρα HeLa. Η κινητική του ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων σύντηξη με κύτταρα HeLa υπολογίστηκε ως% του R18 dequenching φθορισμού (FDQ) χρησιμοποιώντας 560 και 590 nm όπως διέγερσης και εκπομπής μήκη κύματος, αντίστοιχα. Όπως έλεγχο ετοιμάσαμε R18-επισημασμένο μαγνητική ερυθροκύτταρα χωρίς να ανασυσταθεί πρωτεΐνη σύντηξης ΗΑ. Η κινητική της σύντηξης αυτών των μαγνητικών ερυθροκυττάρων με κύτταρα HeLa αναλύθηκε επίσης.

HPLC ανάλυση της ενσωμάτωσης 5-Αζα-2-DC IN ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων

Χημικά και λύσεις.

5-Αζα-2-δεοξυκυτιδίνη (5-Αζα-2-dC, Decitabine) αγοράστηκε από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ, USA). οξικού αμμωνίου από Carlo Erba (Milan, Italy). Βαθμός HPLC ακετονιτρίλιο (MeCN) ήταν από Rathburn (Walkerburn, UK).

ανάλυση

HPLC ιοσωμάτων ερυθρο-μαγνητο-HA περιέχει Decitabine.

2 × 10

9 ερυθρο-μαγνητο- ΗΑ ιοσωμάτων επωάσθηκαν με 200 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος λύσης για να απελευθερώσει το ενσωματωθεί 5-Αζα-2-άΟ φάρμακο και φυγοκεντρήθηκε στις 10.000 rpm για 15 λεπτά στους 4 ° C. Το υπερκείμενο ανακτήθηκε και χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση HPLC ή αποθηκεύονται σε -80 ° C καταψύκτη μέχρι την ανάλυση.

Στοκ πρότυπα διαλύματα του δεκιταβίνη σε συγκέντρωση 114, 228, 456 και 1140 ng /ml, παρασκευάστηκαν ατομικά σε υδατικό διάλυμα ή ρυθμιστικό διάλυμα λύσης και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι την ανάλυση.

Η αναλογία εμβαδού της κορυφής του δείγματος /5-Αζα-2-dC (δεκιταβίνη, πρότυπο) χρησιμοποιήθηκε για ποσοτικοποίηση. Το όριο ανίχνευσης (LOD) ορίστηκε ως τρεις φορές το λόγο σήματος προς θόρυβο. Το χαμηλότερο όριο ποσοτικοποίησης (LLOQ) ορίστηκε ως το χαμηλότερο επίπεδο της εξεταζόμενης ουσίας που θα μπορούσε να ανιχνευθεί αξιόπιστα και να αναπαραχθούν με ακρίβεια ≤20% και η ακρίβεια των 80-120%.

Όργανα.

Το σύστημα HPLC αποτελείται από ένα Dionex (Sunnyvale, CA, USA) 3000 Ultimate σειρά LC συνδέεται με μία γραμμική παγίδα ιόντων LTQ-Orbitrap (Thermo Fisher Scientific, USA) φασματόμετρο μάζας, εξοπλισμένο με μία πηγή ιόντων ηλεκτροψεκασμού. Τα δεδομένα αποκτήθηκαν και επεξεργασία με Excalibur 2.1 του λογισμικού. Οι ενώσεις διαχωρίστηκαν σε Gemini C18 (150 ΜΜ-2.0 mm ΙΟ) και 3 μm μέγεθος σωματιδίου (Phenomenex, Torrance, CA, USA) προστατεύεται από ένα Phenomenex Gemini C18 (4,0 ΜΜ-2.0 mm ΙΟ) και 3 μm σωματιδίων φυσίγγιο φύλακα μέγεθος . Η μέθοδος HPLC που χρησιμοποιείται βαθμιδωτή έκλουση? κινητή φάση διαλύτης Α ήταν νερό με 0,1% μυρμηκικό οξύ και κινητή φάση Β ήταν ακετονιτρίλιο με 0,1% μυρμηκικό οξύ. Η αρχική σύνθεση κινητής φάσης από 92% διαλύτη Α και 8% διαλύτη Β διατηρήθηκε για 2 λεπτά. Μεταξύ 2 και 9 λεπτά το ποσοστό της κινητής φάσης Β αυξήθηκε σε 35% και στη συνέχεια πίσω στην αρχική της σύνθεσης κινητής φάσης εντός 0,1 λεπτών, με συνολικό χρόνο 14 λεπτών. Η στήλη ορίστηκε σε ένα ρυθμό ροής 0,2 ml min-1 και σε θερμοκρασία 36 ° C. όγκος δείγματος 10 μΙ χρησιμοποιήθηκαν για όλα τα πειράματα LC-MS. Το φασματόμετρο μάζας λειτούργησε σε θετικό τρόπο ηλεκτροψεκασμού. Η θερμοκρασία τριχοειδή ήταν 275 ° C και χρησιμοποιήθηκε η τάση ψεκασμού 4,5 kV.

Tumor HeLa κύτταρα θεραπείες

Ανθρώπινα κύτταρα HeLa αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (Rockville, MD).

Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε μέσο ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό, 2 mM Ε-γλουταμίνη, σε αναλογία διαχωρισμού των 1:04 δύο φορές την εβδομάδα.

Για θεραπείες, 3 ml κυττάρων σε πυκνότητα 5 χ 10

5 σπάρθηκαν σε πλάκες μικροτιτλοδότησης 6 φρεατίων. Δύο ομάδες πειραμάτων διεξήχθησαν παράλληλα για τόσο συνεστιακής Laser Scanning Microscopy (CLSM) και ανάλυση FACS. Για την ανάλυση CLSM, στο κάτω μέρος των πλακών καλλιέργειας εκεί τοποθετήθηκαν γυάλινες καλυπτρίδες επί των οποίων τα κύτταρα αφέθηκαν να αναπτυχθούν.

Μετά από 24 ώρες, το μέσο καλλιέργειας αλλάχθηκε με μέσο που περιέχει 2,5 μΜ 5-αζα- 2-dC μόνα ή 1 × 10

9 5-Αζα-άΟ-φορτωμένο ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ ιοσώματα ή ρυθμιστικό στο οποίο επαναιωρήθηκαν τα ερυθρο-μαγνητο-HA-ιοσώματα (υπερκείμενο, έλεγχος-2). Μετά από 30 λεπτά, 1, 6, 24, 48 και 96 ώρες επώασης, επεξεργασμένων και μη επεξεργασμένων (έλεγχος-1) τα κύτταρα αναλύθηκαν με CLSM και ανάλυση FACS.

συνεστιακής Laser Scanning Microscopy (CLSM) ανάλυση της σύντηξης εκδηλώσεις του ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων με καρκινικά κύτταρα

τα καρκινικά κύτταρα αναπτύχθηκαν σε πλακίδια σε παρουσία 5-Αζα-2-άΟ-φορτωμένο ιοσωμάτων ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ πλύθηκαν σε 1Χ PBS ρυθμιστικό διάλυμα και σταθεροποιήθηκαν με 4 % παραφορμαλδεΰδη. Οι κυτταρικοί πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με DAPI και τοποθετούνται σε μέσον αντιξεθωριάσματος. Φθορισμού και φωτεινού πεδίου εικόνες ελήφθησαν με ένα σύστημα ανεστραμμένο μικροσκόπιο Leica TCS SP5, εξοπλισμένη με πέντε λέιζερ που εκπέμπουν από την υπεριώδη στο ορατό (405 Diode, Αργό, HeNe 543, HeNe 594 και HeNe 633). Ο φθορισμός DAPI ανιχνεύθηκε σε διέγερση των 405 nm και εκπομπής 454 nm, ενώ το κόκκινο φθορισμό των υπερπαραμαγνητικών νανοσωματιδίων σε διέγερση των 543 nm και εκπομπής 613 nm.

κυτταροφθορισμομετρικής ανάλυση (ανάλυση FACS)

ανάλυση FACS εκτελέστηκε σε κύτταρα HeLa σε επεξεργασία με 2,5 μΜ 5-αζα-dC ή 1Χ 10

9 5-Αζα-2-άΟ-φορτωμένο ερυθρο-μαγνητο-HA-ιοσωμάτων και σε σύγκριση με εκείνους χωρίς αγωγή (έλεγχος -1) μετά από 24, 48 και 96 ώρες καλλιέργειας. FACS ανάλυση πραγματοποιήθηκε επίσης σε κύτταρα HeLa σε επεξεργασία με ρυθμιστικό διάλυμα στο οποίο τα ερυθρο-HA-ιοσωμάτων επαναιωρήθηκαν να ελεγχθεί η απουσία του μη ενσωματωμένου 5-Αζα-2-dC φάρμακο (έλεγχος-2). Κατεργασμένα και μη κατεργασμένα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν σε αιθυλική αλκοόλη και οι πυρήνες βάφτηκαν με 10 μg /ml ιωδιούχου προπιδίου και επωάζονται με 100 μg /ml ΚΝάσης για 1 ώρα στους 37 ° C. Το περιεχόμενο πυρηνικό DNA, που εισάγει διακρίσεις τις φάσεις του κυτταρικού κύκλου, προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας την Becton-Dickinson FACScan CentroII.

καταστάσεων Δεοντολογίας

Για την παρούσα μελέτη δεν χρειάζεται ηθική έγκριση από το το έργο δεν περιλαμβάνουν μελέτες του ανθρώπου, ούτε σε ζώα.

η παρούσα μελέτη διεξήχθη χωρίς την χρήση δωρητών από άνθρωπο εθελοντή υλικό, ανθρώπινο αίμα ελήφθη από μεταγγίσεων τσάντα από την τράπεζα αίματος, για τους λόγους αυτούς δεν χρειαζόμαστε επιγνώσει συναίνεση .

Αποτελέσματα

Συμπεριφορά του ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων

Ένα νέο σύστημα ερυθροκυττάρων που βασίζεται χορήγησης φαρμάκων που περιγράφεται εδώ είναι δυνητικά ικανή να παρέχει φάρμακα στους ιστούς-στόχους την αύξηση της βιοδιαθεσιμότητας θεραπευτικών ενώσεων στη θέση δράσης που οδηγεί σε μια καλύτερη θεραπευτική δράση με ελάχιστες παρενέργειες. Ανθρώπινα ερυθροκύτταρα απομονώθηκαν από το αίμα ενός υγιούς δότη και υποβάλλεται σε επεξεργασία με ένα υποτονικό διάλυμα για να προκληθεί το άνοιγμα των πόρων της μεμβράνης και την απελευθέρωση της αιμοσφαιρίνης. Ένα μείγμα που περιέχει αιμαγλουτινίνη (ΗΑ) πρωτεΐνες ιικού ακίδα σύντηξης, φθορίζοντα νανοσωματίδια υπερπαραμαγνητικά και τη θεραπευτική ένωση προστέθηκε κατά τη διάρκεια της επανασφράγιση των ερυθροκυττάρων «φάντασμα». Λόγω της υψηλής συγγένειας για μεμβράνες, αιμοσυγκολλητίνη δεσμεύεται με την κυτταροπλασματική μεμβράνη των ερυθροκυττάρων, ενώ μαγνητικών νανοσωματιδίων (πράσινο φθορισμό) και φαρμάκου διεισδύουν μέσω των πόρων μέσα στα ερυθροκύτταρα «φάντασμα» (Εικ. 1).

συνεστιακής Laser Scanning Microscopy ( CLSM) εικόνες erytro-μαγνητο-HA ιοσωμάτων εγκλεισμού 100 nm φθορισμό σημασμένο υπερπαραμαγνητικά νανοσωματίδια (πράσινο) και 5-Αζα-2-dC.

η

Για να επαληθεύσετε την αποτελεσματική παγίδευση των 5-Aza-2 -dC (Decitabine) σε ερυθροκύτταρα που βασίζεται σύστημα χορήγησης φαρμάκου μας και να προσδιοριστεί ποσοτικά η απόδοση θεραπευτικής ένωσης έγκλειστα, εκτελέσαμε ανάλυση HPLC (Σχ. 2). Υγρή χρωματογραφία /διαδοχική φασματομετρία μάζας μέθοδος ποσοτικού προσδιορισμού (QTOF /MS) έχει χρησιμοποιηθεί για να ποσοτικοποιήσει και να εντοπίσει τα ισόμορφα 5-Αζα-2-DC και τα προϊόντα αποσύνθεσής τους υπό φυσιολογικές συνθήκες ρΗ και θερμοκρασίας όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26], [ ,,,0],27].

(Α) κορυφές των 1,14 ng 5-Αζα-dC (στάνταρ). (Β) Κορυφές του 5-Αζα-dC έγκλειστα σε 2 × 10

9 ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα. RT: χρόνος κατακράτησης? ΑΑ: κορυφής μετράει περιοχή. (C) Βαθμονόμηση καμπύλη 5-Αζα-DC. Οι τιμές των εμβαδών των κορυφών των προτύπων τέθηκαν σε σχέση με την ng /10 μΐ 5-Αζα-2-dC δείγμα έτρεξε. Πρότυπα διαλύματα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν 1,14, 2,28, 4,56 και 11,40 ng 5-Αζα-dC (μαύρη ρόμβους). Γκρι τρίγωνα δείχνουν τις συγκεντρώσεις 5-αζα-dC βρίσκονται εντός των δειγμάτων των δύο ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ ιοσώματα που χρησιμοποιούνται σε

in vitro

πειράματα.

Η

Στο σχήμα 2 Α και Β, η κορυφές τόσο του 5-Αζα-2-dC (πρότυπο) και 5-Αζα-2-dC φορτώνονται σε 2 × 10

9 ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα απεικονίζονται. Τα δείγματα παρακολουθούνταν σε θετικό τρόπο, με αποτέλεσμα τα είδη του 1 μονάδα μάζας υψηλότερο από τα ουδέτερα μόρια. Τα δεδομένα απεικονίστηκαν με εκχύλιση των χρωματογραφήματα ιόν σε m /z = 229. Στο πρότυπο διάλυμα (Εικ. 2) δύο κορυφές που αντιστοιχούν σε δύο μονά χρεώνονται β- (Ι) και α-μορφές (II) 5-Αζα-2 -dC (m /z = 229) είναι παρόντα. Στο δείγμα, μια άλλη κορυφή είναι προφανής εκτός από 5-αζα-2-άΟ β- και α-μορφές (Ι και II). Αυτή η κορυφή αντιστοιχεί σε ένα γουανυλουρία παράγωγο (III) (m /z = 219). Όπως φαίνεται προηγουμένως, εκχυλίζεται χρωματογραφήματα ιόντων στο z = 219 (παράγωγα γουανυλουρία, ενιαία φορτισμένα μονομερή είδη) m /δεν είναι μοναδικές ως αναγνωριστικό παραγώγων γουανυλουρία ως ενώσεις με m /z = 229 παράγουν επίσης θραύσματα με m /z = 219, όταν οπτικοποιείται με φασματογράφο μάζας [28]. β-μορφές (Ι) 5-Αζα-2-dC καθίστανται ενυδατωμένα στη θέση C-6 και ο δακτύλιος ανοίγει για να παραχθεί ένα δακτύλιο-open-φορμυλίωση παράγωγο, που ακολουθείται από την απώλεια του μυρμηκικού οξέος, το οποίο στη συνέχεια παράγει ένα παράγωγο γουανυλουρία (III). Αποφορμυλίωση οποιασδήποτε από τις φορμυλιωμένο παραγώγων ανοικτού-δακτυλίου σε παράγωγα γουανυλουρία (III) έχει ως αποτέλεσμα την απώλεια της Η-6 πρωτονίων ως μυρμηκικό οξύ. Οι χρόνοι κατακράτησης (RT) καθώς και οι τιμές εμβαδού (ΑΑ) για κάθε κορυφή που φαίνεται στο Σχήμα 2 Α και Β

Για να ποσοτικοποιηθεί η ποσότητα της 5-Αζα-2-dC περιέχονται στο erythrocyte- με βάση το σύστημα παράδοσης, 10 μΐ κάθε προτύπου και του δείγματος ενέθηκαν σε HPLC. Διαφορετικές συγκεντρώσεις του προτύπου, που εκτείνονται από 0.114 ng /μl (0,5 μΜ) σε 1,14 ngμl (5 μΜ) 5-Αζα-2-dC, παρασκευάστηκαν και το εμβαδόν κάθε δείγματος 10 μΐ υπολογίσθηκε με HPLC . Οι τιμές των εμβαδών των κορυφών των προτύπων τέθηκαν σε σχέση με την ng του 5-Αζα-2-DC και μια καμπύλη βαθμονόμησης σχεδιάστηκε (Εικ. 2 C). Το σχήμα 2 Α δείχνει την τιμή ζώνης (ΑΑ: 660.834) που ανιχνεύεται με HPLC που αντιστοιχεί στο 1,14 ng (0,5 μΜ) του προτύπου διαλύματος 5-Αζα-2-DC. Διαφορετικά δείγματα του ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ ιοσωμάτων παρασκευάστηκαν και διαφορετικές ποσότητες 5-Αζα-2-dC, που εκτείνεται από 0,5 ng /μl (2,5 μΜ) έως 42 ng /μl (200 μΜ), προστέθηκαν κατά την διάρκεια η επανασφράγιση. Για να αξιολογηθεί η αποτελεσματική ποσότητα του 5-Αζα-2-dC εγκλωβισμένη στα ερυθροκύτταρα για κάθε παρασκεύασμα, 2 × 10

9 ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα λύθηκαν σε 200 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος λύσης. Η συνολική ποσότητα του φαρμάκου που ενσωματώνεται σε 2 × 10

9 ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα ήταν 3,6 ng ή 360 ng όταν 2,5 μΜ ή 200 μΜ 5-αζα-2-άΟ προστέθηκαν σε ερυθροκύτταρα κατά τη διάρκεια της επανασφράγισης , αντίστοιχα (Εικ. 2 C). Ως εκ τούτου, η αποτελεσματικότητα της ενσωμάτωσης για κάθε δείγμα ήταν περίπου 1%.

Για να ελέγξετε την αποτελεσματική ενσωμάτωση των αιμαγλουτινίνη (ΗΑ) στις μεμβράνες των ερυθροκυττάρων και τη δραστηριότητα στον τομέα της σύντηξης, αξιολογήσαμε την κινητική της σύντηξης της μηχανικής μας ερυθρο-μαγνητο -HA ιοσωμάτων με κύτταρα-στόχους. Οκταδεκυλ ροδαμίνη (R18) επισήμανση χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η σύντηξη του ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων με κύτταρα HeLa. Fusion έχει αναφερθεί ως% του R18 dequenching φθορισμού (FDQ) χρησιμοποιώντας 560 και 590 nm όπως διέγερσης και εκπομπής μήκη κύματος, αντίστοιχα. Η σύντηξη του ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων με κύτταρα HeLa ξεκινά μετά από πολύ σύντομο χρονικό διάστημα (λίγα λεπτά) και το ποσοστό της σύντηξης αυξάνει εκθετικά με το χρόνο (εικ. 3). Σε αντίθεση, τα μαγνητικά ερυθροκύτταρα χωρίς αιμοσυγκολλητίνη (ΗΑ) δεν παρουσιάζουν δραστηριότητα σύντηξη με κύτταρα HeLa. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η γλυκοπρωτεΐνη ιικό ακίδα (ΗΑ) καθαρίζεται από ιό γρίπης και επανασυστάθηκε σε μαγνητικά οχήματα ερυθροκυττάρων διατηρεί συντηκογόνα του ιδιότητες με τις μεμβράνες κυτταροπλασματική των κυττάρων-στόχων και προσδίδει σε μαγνητικό ερυθροκύτταρα την ικανότητα να συντηχθούν με κύτταρα-στόχους.

Τα 5-Αζα-2-άΟ-φορτωμένο ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων σημάνθηκαν με δεκαοκτυλίου ροδαμίνη (R18) και επωάστηκαν με κύτταρα HeLa. Fusion έχει αναφερθεί ως% του R18 dequenching φθορισμού (FDQ) χρησιμοποιώντας 560 και 590 nm όπως διέγερσης και εκπομπής μήκη κύματος, αντίστοιχα. RBC: 5-αζα-2-άΟ-φορτωμένο μαγνητική ερυθροκυττάρων χωρίς ανασύσταση πρωτεΐνη σύντηξης ΗΑ (Control)? RBC-HA: 5-Αζα-2-ΟΟ-φορτωμένο ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων

Η

Επίδραση της Decitabine-φορτωμένο ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων σε καρκινικά κύτταρα

Για να. επαληθευτεί η αποτελεσματικότητα και η αποτελεσματικότητα του ερυθροκυττάρων που βασίζεται σύστημα παροχής φαρμάκου μας, υποβάλλαμε σε αγωγή καρκινικά κύτταρα HeLa είτε με 5-Αζα-2-dC μόνα ή ενθυλακώνονται σε ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα. 5 × 10

5 κύτταρα όγκου υπέστησαν αγωγή είτε με 1,800 ng του 5-Αζα-2-dC (2,5 μΜ), μία συγκέντρωση που φαίνεται να έχει θεραπευτικό αποτέλεσμα

in vitro

, ή με 1 × 10

9 ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα που περιέχει 10 φορές λιγότερο 5-Αζα-2dC (180 ng).

Η πρόσληψη στο κύτταρο στόχο και την παράδοση της θεραπευτικής ένωσης στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων του όγκου είναι φαίνεται στο Σχ. 4. Σε πολύ σύντομους χρόνους (από 30 λεπτά έως 1 ώρα) είναι ακόμα δυνατό να γίνει διάκριση μεταξύ μηχανικής ερυθροκύτταρα που αρχίζουν να εναρμονίζονται με κύτταρα στόχους (Εικ. 4 Α και Β). Μετά από 6 ώρες τα περισσότερα από τα κύτταρα-στόχους δείχνουν τις ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων εντός του κυτταροπλάσματος (Εικ. 4 C). Το ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματος, εσωτερικεύεται μέσα στο κύτταρο «ξενιστή», μοιάζει με μια ιογενή ενδοσώματος. Η μεμβράνη του ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων αρχίζει να συντήκονται με την μεμβράνη του κυττάρου-στόχου μεταξύ 12 και 24 ώρες, οπότε τα φθορίζοντα νανοσωματίδια και το φάρμακο να αρχίσει να διαχέονται στο εσωτερικό των κυττάρων του όγκου. Μετά από 24 ώρες όλα τα καρκινικά κύτταρα παρουσίασαν ισχυρό φθορισμό στο κυτταρόπλασμα και μερικά έχουν την τυπική μορφολογία της πρόωρης απόπτωσης. Σε 96 ώρες τα περισσότερα των κυττάρων του όγκου παρουσιάζουν την χαρακτηριστική μορφολογία μικροπυρήνων καθυστερημένης απόπτωσης (Σχ. 4 D).

Στο αριστερό σχηματοποιείται το χρονισμό και το μηχανισμό δράσης των ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα, ενθυλάκωσης 100 nm φθορισμό σημασμένο μαγνητικά νανοσωματίδια (πράσινο) και 5-Αζα-2-dC. Στο δεξιό δείχνονται CLSM εικόνες των ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα (πράσινο) μετά από 30 λεπτά (Α), 1 ώρα (Β), 6 ώρες (C), 24 και 96 ώρες (D) της επώασης με κύτταρα HeLa τονίζεται από χρώση DAPI (μπλε). κύτταρα (CTRL) Ακατέργαστο HeLa (έλεγχος).

Η

Η αποτελεσματικότητα της 5-αζα-2-άΟ ανασυσταθεί σε ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ ιοσώματα στην προώθηση της απόπτωσης σε σχέση με το ελεύθερο φάρμακο φαίνεται στο Σχήμα 5. κύτταρα HeLa χωρίς αγωγή (έλεγχος) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 1,800 ng 5-Αζα-2-dC ή με ιοσώματα 1 × 10

9 ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ που περιέχει 180 ng του Decitabine αναλύθηκαν με FACS. Ως έλεγχοι για την αξιολόγηση πιθανών τοξικών επιδράσεων του μόνος του οχήματος σε κύτταρα, τα κύτταρα HeLa καλλιεργήθηκαν επίσης παρουσία του ρυθμιστικού διαλύματος στο οποίο 5-Αζα-2-άΟ-φορτωμένο ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα είχαν ανασταλεί (υπερκείμενο) και με ερυθρο -magneto-HA ιοσωμάτων εγκλεισμού μόνο τα φθορίζοντα νανοσωματίδια μαγνητο-

Ctrl (έλεγχος) μη επεξεργασμένα κύτταρα.? Αζα: κύτταρα κατεργασμένα με 1800 ng (2,5 μΜ) 5-Αζα-2-dC? Ερυθρο Αζα: κύτταρα κατεργασμένα με ιοσώματα ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ που περιέχει 180 ng του 5-Αζα-2-dC? Ερυθρο: εκφορτώνονται ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων 5-Αζα-2-dC? Υπερκείμενο: κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με ρυθμιστικό όπου επανααιωρήθηκαν τα ιοσώματα ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ (έλεγχος 2)

Η

Μετά από 96 ώρες, μόνον το 12,6% των κυττάρων που έλαβαν θεραπεία με 1800 ng της ελεύθερης 5-αζα-. 2-dC εμφανίζονται αποπτωτικών σύγκριση με 96% των κυττάρων όταν τα κύτταρα υποβάλλονται σε επεξεργασία με 180 ng σε ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα. Επιπλέον, στις 24 ώρες σημαντική απόπτωση παρατηρείται με το σύστημα παροχής φαρμάκου ενώ ουσιαστικά καμία επίδραση παρατηρείται για φάρμακο μόνο. Αυτές οι παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι το σύστημα ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσωμάτων παράδοσης αυξάνει την αντι-νεοπλασματική επίδραση της 5-Αζα-2-άΟ μέσω της βελτίωσης της βιοδιαθεσιμότητας του φαρμάκου. Ούτε το υπερκείμενο, όπου η 5-Αζα-2-άΟ-φορτωμένο είναι ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματα ανασταλεί, ούτε ιοσώματα ερυθρο-μαγνητο-ΗΑ που περιέχει μόνο φθορίζοντα νανοσωματίδια έχουν επίδραση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αποδεικνύοντας ότι ερυθροκυττάρων που βασίζεται χορήγησης φαρμάκου μας ίδιο το σύστημα δεν έχει τοξική επίδραση στα κύτταρα. Μαζί αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι αυτό το νέο σύστημα παροχής φαρμάκου ερυθροκυττάρων που βασίζονται έχει τη δυνατότητα να αυξήσει την αποδοτικότητα και την αποτελεσματικότητα των θεραπευτικών ενώσεων.

Συζήτηση

κυτταροτοξική χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία του καρκίνου περιορίζεται από σοβαρές, μερικές φορές απειλητικές για τη ζωή, παρενέργειες λόγω της έλλειψης εξειδίκευσης σε κύτταρα στόχους μόνο. Μία στρατηγική για τη βελτίωση της ειδικότητας είναι να ενθυλακώσει τα θεραπευτικά μέσα σε ένα σύστημα παροχής φαρμάκου ικανό να κατευθύνει θεραπευτικών ενώσεων σε μία θέση στόχο.

έχουν ερυθροκύτταρα Carrier αξιολογηθεί για τη χρήση τους στη χορήγηση φαρμάκων σε ανθρώπους αποδεικνύουν την ασφάλεια και την αποτελεσματικότητά τους [ ,,,0],29]. Ερυθροκυττάρων με βάση την παράδοση των νέων και συμβατικών φαρμάκων βιώνει αυξάνοντας έτσι τα συμφέροντα στην παράδοση φαρμάκων και στη διαχείριση σύνθετων παθολογίες, ειδικά όταν παρενέργειες θα μπορούσαν να γίνουν σοβαρά ζητήματα [13], [19], [30]. Πρόσφατα, τα ερυθροκύτταρα έχουν χρησιμοποιηθεί για την ενθυλάκωση του αντιβιοτικό αμικασίνη, και αποδείχθηκε μια παρατεταμένη απελευθέρωση από φορτωμένες ερυθροκύτταρα σε μία περίοδο από 48 ώρες, γεγονός που υποδηλώνει μια πιθανή χρήση των ερυθροκυττάρων ως μια αργή σύστημα συστημικής απελευθέρωσης για αντιβιοτικά. Η χορήγηση αμικακίνης με φορτωμένων ερυθροκυττάρων σε αρουραίους οδηγεί σε σημαντικές αλλαγές στη φαρμακοκινητική συμπεριφορά του αντιβιοτικού [31], [32]. Το σύστημα παροχής φαρμάκου ερυθροκυττάρων που βασίζεται παρουσιάζει διάφορα πλεονεκτήματα: είναι ιδιαίτερα αποτελεσματική στην απελευθέρωση φαρμάκων στην κυκλοφορία για μεγάλο χρονικό διάστημα (εβδομάδες), ερυθροκύτταρα έχουν μια μεγάλη ικανότητα παγίδευσης, είναι εύκολα σε επεξεργασία και να έχουν την ικανότητα να φιλοξενήσει τις παραδοσιακές και Βιοπροϊόντα [ ,,,0],18], [30]. Τα ερυθροκύτταρα φορτωμένα με σιδηρομαγνητικό ένωση κολλοειδές μπορεί να οδηγηθεί μαγνητικά σε όργανο-στόχο /ιστού μέσω ενός εξωτερικού μαγνητικού πεδίου [21] – [23], [33] Τέλος, η διαθεσιμότητα μιας συσκευής που επιτρέπει την ενθυλάκωση των φαρμάκων μέσα αυτόλογων ερυθροκυττάρων κάνει αυτή η τεχνολογία διαθέσιμη σε πολλές κλινικές ρυθμίσεις και ανταγωνιστικές σε σχέση με άλλα συστήματα χορήγησης φαρμάκων [34].

στην παρούσα εργασία θα επισημάνω ένα νέο σύστημα χορήγησης φαρμάκων ερυθροκυττάρων βάση, η ερυθρο-μαγνητο-HA ιοσώματος