Αφηρημένο

Αν και ιωδίωση του αλατιού είναι η πιο κοινή μέθοδος που χρησιμοποιείται για τη λήψη ιωδίου-εμπλουτισμένα τρόφιμα, ιωδίου διαταραχές ανεπάρκειας είναι ακόμη ένα παγκόσμιο πρόβλημα υγείας και επηρεάζει βαθύτατα την ποιότητα της ανθρώπινης ζωής. Ιώδιο απαιτείται για την σύνθεση των ορμονών του θυρεοειδούς, τα οποία είναι ζωτικής σημασίας ρυθμιστές του ανθρώπινου μεταβολισμού, την ανάπτυξη των κυττάρων, πολλαπλασιασμό, απόπτωση και έχουν αναφερθεί ότι εμπλέκονται στην καρκινογένεση. Σε αυτή τη μελέτη, για πρώτη φορά, αξιολογήσαμε την επίδραση του ιωδίου-biofortified μαρούλι επί transcriptomic προφίλ του Caco-2 κυτταρική σειρά καρκίνου εφαρμόζοντας το Σύνολο δοκιμασία Ανθρώπινο Γονιδίωμα Microarray. Δείξαμε 1326 εκφράζονται διαφορικά Caco-2 μεταγραφές μετά τη θεραπεία με ιώδιο-biofortified (BFL) και μη εμπλουτισμένο (NFL) εκχυλίσματα μαρούλι. Αναλύσαμε οδών, μοριακής λειτουργίες, βιολογικές διεργασίες και τα μαθήματα της πρωτεΐνης βασίζεται στη σύγκριση μεταξύ της BFL και NFL συγκεκριμένα γονίδια. Ιώδιο, η οποία αναμένεται να δράσει ως ένα ελεύθερο ιόν (KI-NFL) ή τουλάχιστον εν μέρει να ενσωματωθούν σε μακρομόρια μαρούλι (BFL), διαφορετικά ρυθμιζόμενα μονοπάτια πολλούς παράγοντες μεταγραφής που οδηγούν σε διαφορετικά κυτταρικά αποτελέσματα. Σε αυτή τη μελέτη δείξαμε την αναστολή του Caco-2 κύτταρα πολλαπλασιασμού μετά αγωγή με BFL, αλλά όχι ιωδιούχο κάλιο (ΚΙ), και BFL μεσολάβηση επαγωγή της μιτοχονδριακής απόπτωσης ή /και διαφοροποίηση των κυττάρων. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το ιώδιο-biofortified φυτά μπορούν να χρησιμοποιηθούν αποτελεσματικά από τα κύτταρα ως εναλλακτική πηγή αυτού του ιχνοστοιχείου. Επιπλέον, οι παρατηρούμενες διαφορές στη δράση των δύο ιωδίου πηγές μπορεί να προτείνει ένα δυναμικό BFL στη θεραπεία του καρκίνου

Παράθεση:. Koronowicz AA, Kopec Α, Δάσκαλος Α, SMOLEŃ S, Piątkowska E, Bieżanowska-Kopec R, et al. (2016) μεταγραφικό προφίλ των Caco-2 Γραμμή Cancer Cell μετά από θεραπεία με εκχυλίσματα από Ιώδιο-Biofortified Μαρούλι (

Lactuca sativa L.

). PLoS ONE 11 (1): e0147336. doi: 10.1371 /journal.pone.0147336

Επιμέλεια: Maria Cristina Vinci, Centro Cardiologico Monzino, Ιταλία

Ελήφθη: 30 Ιουλ του 2015? Αποδεκτές: 31η Δεκεμβρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 22 Ιανουαρίου 2016

Copyright: © 2016 Koronowicz et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Τα στοιχεία είναι που διατίθεται από την Omnibus γονιδιακής έκφρασης. Ο αριθμός GEO είναι: GSE7160

Χρηματοδότηση:. Το έργο αυτό χρηματοδοτήθηκε από το πολωνικό Εθνικό Κέντρο Επιστήμης 2012-2015, δεν χορηγούν. Δεκέμβριος-2011/03 /D /NZ9 /05560, «I και Se biofortification επιλεγμένων λαχανικών, συμπεριλαμβανομένης της επίδρασης αυτών των ιχνοστοιχείων στην ποιότητα απόδοσης, καθώς και την αξιολόγηση της απορρόφησης ιωδίου και επιλεγμένα βιοχημικές παραμέτρους σε αρουραίους τρέφονται με λαχανικά biofortified με ιώδιο. «

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η ανεπαρκής πρόσληψη διαιτητικών ιωδίου μπορεί να οδηγήσει σε έλλειψη ιωδίου, η οποία μπορεί να προκαλέσει πολλές αρνητικές επιπτώσεις στην υγεία. επιδράσεις [1, 2, 3, 4]. Επί του παρόντος, ο πιο αποτελεσματικός τρόπος για τον έλεγχο ελλείψεις ιωδίου είναι μια διαδεδομένη ιωδίωση του επιτραπέζιου αλατιού. Ωστόσο, στις περισσότερες βιομηχανικές χώρες της υπερβολικής κατανάλωσης αλατιού γίνεται ένας παράγοντας κινδύνου καρδιαγγειακών νόσων, της οστεοπόρωσης ή ακόμη και καρκίνο του στομάχου [5, 6]. Επιπλέον, πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι ορισμένες ποσότητες ιωδίου μπορεί να χαθεί κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας και επεξεργασίας των τροφίμων, για παράδειγμα λόγω της χρήσης υψηλών θερμοκρασιών [7]. Ανόργανα ιώδιο είναι πτητικό και είναι δύσκολο να ελεγχθεί η απώλεια του κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης και μεταφοράς, καθώς και το μαγείρεμα, ιδιαίτερα με τη χρήση ελαίων υψηλής θερμοκρασίας. Στο πλαίσιο αυτό, biofortification των λαχανικών με ιώδιο κατά τη διάρκεια της καλλιέργειάς τους είναι ένας σημαντικός τρόπος για να αυξηθεί η κατανάλωση ιωδίου, κυρίως λόγω του ιωδίου που περιέχονται στα τρόφιμα μπορούν να εξομοιωθούν εύκολα [8] και απορροφάται σχεδόν εξ ολοκλήρου [7]. Biofortification των φυτών είναι γνωστές και πραγματοποιούνται μέσω κάποιων βιοτεχνολογικές ή αγρονομική μεθόδους [9, 8, 10, 11, 12]. Τα καρότα, ντομάτες, πατάτες, μαρούλι και καταναλώνονται καθημερινά στις περισσότερες οικογένειες. Ως εκ τούτου, οχυρώνοντας αυτά τα λαχανικά με ιώδιο είναι μια συμφέρουσα τρόπος για να βελτιωθεί το ιώδιο διατροφική κατάσταση των καταναλωτών χωρίς τον κίνδυνο της υπερβολικής πρόσληψης του. Μαρούλι είναι ένα φυλλώδες λαχανικό, που συνήθως καταναλώνονται ωμά, χωρίς κίνδυνο απώλειας ιωδίου, ως εκ τούτου, είναι μια καλή σοδειά για τη μελέτη ιώδιο-biofortification [13].

Σε προηγούμενες μελέτες μας έδειξαν υψηλή απόδοση του ιωδίου biofortification μαρούλι με λίπανση του εδάφους με ιωδιούχο κάλιο (ΚΙ). Επιπλέον, παρατηρήσαμε επίσης αυξημένη συγκέντρωση ιωδίου στα ούρα καθώς και σε επιλεγμένους ιστούς των πειραματικών αρουραίων, ως αποτέλεσμα της συμπληρώσεώς διατροφή τους με τέτοια ιώδιο-biofortified μαρούλι [14].

διαθέσιμη βιβλιογραφία υποδεικνύει ότι οι αυξήσεις ανεπάρκεια ιωδίου ο κίνδυνος του θυρεοειδούς [15, 7], το στομάχι [16, 17], του μαστού [18, 19] και του προστάτη [20] του καρκίνου. επιδράσεις κατά του όγκου του ιωδίου μπορεί να προκύψουν από τις αντιοξειδωτικές, αντι-πολλαπλασιαστική, αντι-φλεγμονώδη, καθώς και προ-αποπτωτικά και pro-διαφοροποίηση [21, 22, 23] επιδράσεις. Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι τα αποσπάσματα από το ιώδιο-biofortified μαρούλι (BFL) μείωσε τον πολλαπλασιασμό του καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρική γραμμή. Υποψιαζόμαστε, ότι μπορεί να σχετίζεται με την αλλαγή στην έκφραση των γονιδίων που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό και του κυτταρικού κύκλου.

Για την καλύτερη κατανόηση υποκείμενη μοριακό μηχανισμό της BFL δράση που εφαρμόζεται, για πρώτη φορά, μια ολόκληρη ανάλυση του γονιδιώματος των μικροσυστοιχιών της μεταγραφικής προφίλ ανθρώπινων κυττάρων Caco-2. Συγκρίναμε διαφορετικά ρυθμιζόμενα γονίδια στα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με εκχυλίσματα είτε από το ιώδιο-biofortified ή μη εμπλουτισμένα μαρούλι. Τέλος, καθορίζονται και αναλύονται δυνητικά επηρεάζονται κυτταρικά μονοπάτια, βιολογικές διεργασίες, μοριακές λειτουργίες και τις τάξεις πρωτεϊνών.

Υλικά και Μέθοδοι

Παρασκευή εκχυλισμάτων από biofortified μαρούλι

Μαρούλι »Melodion ‘ βιογραφικό. καλλιεργήθηκε και γονιμοποιούνται με ΚΙ όπως περιγράφεται από Kopec et al. [14]. Η συγκέντρωση ιωδίου ήταν 0,50 mg /100 g ξηρής μάζας (D.M.) για biofortified μαρούλι και 0,12 mg /100 g D.M. για τα μαρούλια ελέγχου [14]. Φρέσκο ​​μαρούλι (10 g) συνθλίφθηκε χρησιμοποιώντας ομογενοποιητή (τύπου CAT X 120, USA) και δίπλα μεταφέρεται στη φιάλη Erlenmaier με νερό σε θερμοκρασία 90-100 ° C. υλικά Μαρούλι εκχυλίστηκαν με ανακίνηση (Elpan, υδατόλουτρο ανακίνησης τύπου 357, Πολωνία) στους 100 ° C θερμ. για 2 ώρες, και το επόμενο διάλυμα φυγοκεντρήθηκε (τύπος Φυγόκεντρος MPW-340, Πολωνία). Στη συνέχεια, το τμήμα των εκχυλισμάτων χρησιμοποιούνται για τη μέτρηση ιώδιο και άλλα μέρη φυλάχθηκαν στους -80 ° C για μελέτες κυτταροκαλλιέργειας.

Προσδιορισμός της συγκέντρωσης εκχυλίσματος ιωδίου

Πέψη 10 cm

3 δείγματα εκχυλίσματος μαρούλι στο μείγμα 10 cm

3 65% HNO

3 (superpure, Merck, Σταθμός Whitehouse, NJ, USA) και 0,8 εκατοστά

3 70% ΗΟΊΟ

4 ( superpure, POCH, Gliwice, Πολωνία) διεξήχθη στο σύστημα μικροκυμάτων CEM MARS-5 Xpress. Η περιεκτικότητα του ιωδίου (Ι

-) αναλύθηκε με την τεχνική παραγωγή ψυχρού ατμού με τη χρήση υψηλής διασποράς ICP-OES (επαγωγικά συζευγμένου πλάσματος οπτικής εκπομπής Φασματομετρία) φασματόμετρο-Leeman Prodigy Labs, New Hampshire, Μασαχουσέτη, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής [24 25]

Συνθήκες της κυτταρικής καλλιέργειας

Ανθρώπινο κυτταρική σειρά παχέος εντέρου Caco-2 (ορθοκολικό αδενοκαρκίνωμα? ΗΤΒ-37). αγοράστηκε από τις συλλογές American Type Culture (ATCC, Manassas, VA, ΗΠΑ). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ένα επωαστή, υπό ελεγχόμενες συνθήκες (θερμοκρασία, 37 ° C?. Αέρα, 95%? CO

2, 5%), σε αετού Minimum Essential Medium (Sigma, Saint Louis, ΜΟ, USA), με ορό εμβρύου μόσχου (FBS) (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) σε μια τελική συγκέντρωση 20%, σύμφωνα με τη διαδικασία ATCC.

κύτταρα θεραπείες

τα κύτταρα σπάρθηκαν σε 96 φρεατίων πλάκες καλλιέργειας (Becton, Dickinson and Company, Βαρσοβία, Πολωνία) για τη βιωσιμότητα των κυττάρων και οι πλάκες καλλιέργειας πολλαπλασιασμό ή 6-φρεατίων (Becton, Dickinson and Company, Βαρσοβία, Πολωνία) για την απομόνωση του RNA για 24 ώρες, σύμφωνα με το πρωτόκολλο της Roche (Βασιλεία , Ελβετία) και A & amp? Μια Βιοτεχνολογίας (Gdynia, Πολωνία), αντίστοιχα. Μετά από αυτό το διάστημα, το περιβάλλον καλλιέργειας αντικαταστάθηκε με μέσο που περιέχει α) εκχύλισμα από μη εμπλουτισμένα μαρούλι (μαρούλι ελέγχου, NFL) με ιώδιο περιεκτικότητα 27,6 μg /dm

3, β) απόσπασμα από το ιώδιο-biofortifed μαρούλι (BFL) με ιώδιο περιεχόμενο 186,7 μg /dm

3, γ) ιωδιούχου καλίου προστίθενται σε NFL (KI-NFL) στη συγκέντρωση των 186,7 μg /dm

3. Η τελική συγκέντρωση ιωδίου στο μέσο καλλιέργειας ήταν 107,33 nmol /dm

3 για την NFL και 441,37 nmol /dm

3 για την BFL. Μία τελική συγκέντρωση ιωδίου στην ομάδα ΚΙ-NFL ήταν η ίδια όπως στην ομάδα BFL. Σε όλες τις μελέτες, τουλάχιστον 4 φρεάτια εξετάστηκαν ανά αγωγή. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν 3 φορές.

Κυτταρική βιωσιμότητα και τον πολλαπλασιασμό

Κυτταρική βιωσιμότητα μετρήθηκε με τη χρήση Κυτταροτοξικότητα Detection Kit (LDH) (Roche, Βασιλεία, Ελβετία), σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Η κυτταροτοξικότητα εκτιμήθηκε για αποσπάσματα από BFL με τελικές συγκεντρώσεις του ιωδίου που ανέρχονται σε 147,12? 294,25 και 441,37 nmol, σε χρονικά διαστήματα των 24, 48 και 72 ώρες και υπολογίζεται σύμφωνα με τον τύπο:

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας 5′-βρωμο-2′-δεοξυ-ουριδίνη επισήμανσης και ανίχνευσης Kit III ( Roche, Βασιλεία, Ελβετία), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ο πολλαπλασιασμός τυποποιημένη σε 100% του ελέγχου. Η ανάλυση των δειγμάτων διεξήχθη εις τριπλούν και σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση t-test δύο ουρών Student.

απομόνωση RNA, την επικύρωση, την επισήμανση και υβριδισμό

Ολικό RNA απομονώθηκε από τα κύτταρα χρησιμοποιώντας κιτ απομόνωσης RNA από κυτταρικές καλλιέργειες ( amp A &? Ένα Βιοτεχνολογίας, Gdynia, Πολωνία). ποσότητα RNA μετρήθηκε με NanoDrop (NanoDrop Technologies, USA). Η ανάλυση των τελικών ποιότητας και της ακεραιότητας του RNA πραγματοποιήθηκε με BioAnalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Για να εξασφαλιστεί η βέλτιστη ποιότητα των δεδομένων, μόνο δείγματα με αριθμό ακεραιότητα RNA (RIN) ≥8.0 συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση. Η ανάλυση του προφίλ γονιδιακής έκφρασης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SurePrint G3 Human Gene Expression 8x60K v2 Microarray (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Κάθε διαφάνεια περιείχε 8 μικροσυστοιχίες που αντιπροσωπεύουν περίπου 50000 σύνολα ελέγχων. Η χαμηλή παροχή γρήγορης Amp Labeling Kit, δίχρωμη (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε για την ενίσχυση και RNA στόχου ετικέτα για να παράγουν συμπληρωματικό RNA (cRNA) για μικροσυστοιχίες ολίγο που χρησιμοποιούνται στην δημιουργία προφίλ γονιδιακής έκφρασης. Πείραμα πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα κοινό σχέδιο αναφοράς, όπου η κοινή αναφορά ήταν μια πισίνα από ίσες ποσότητες RNA από κύτταρα ελέγχου.

Σε κάθε μία από δύο χρωμάτων μικροσυστοιχίες, είμαστε σε υβριδισμό 300 ng cRNA από την πισίνα (με την επισήμανση Cy3) και 300 ng cRNA (με την ένδειξη Cy5). Συνολικά, τρέξαμε 12 μικροσυστοιχίες-τρία για κάθε πειραματική ομάδα. υβριδοποίηση μικροσυστοιχιών εκτελέστηκε με το Expression Gene Kit Hybridization (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA), σύμφωνα με τα πρωτόκολλα του κατασκευαστή. RNA Spike Σε Kit (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Απόκτηση και ανάλυση των εντάσεων υβριδισμού διεξήχθησαν με τη χρήση του μικροσυστοιχιών σαρωτή Agilent DNA (G2565CA, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA).

ανίχνευσης σήματος και στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα εξάγονται και φόντο αφαιρούνται χρησιμοποιώντας τις τυπικές διαδικασίες που περιέχονται στο Agilent Feature Extraction (FE) έκδοση λογισμικού 10.7.3.1. FE εκτελεί μια Lowess εξομάλυνση. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού Gene Spring 12.6.1 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Δείγματα υποβλήθηκαν σε έλεγχο ποιότητας και τα αποτελέσματα έδειξαν ότι κάθε δείγμα είχε ένα παρόμοιο QC μετρικό προφίλ. Το επόμενο βήμα έγινε το φιλτράρισμα σετ καθετήρα με σημαίες για να αφαιρέσετε κακή ανιχνευτές ποιότητας (απουσιάζει σημαίες). Η στατιστική σημαντικότητα των διαφορών εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας έναν ένας τρόπος ANOVA και δοκιμή HSD post-hoc κατά Tukey (ρ & lt? 0,05). Μια διόρθωση πολλαπλές δοκιμές πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας Benjamini και Hochberg False Discovery Rate (FDR) & lt? 5%. δεδομένων των μικροσυστοιχιών είχαν κατατεθεί στο Gene Expression Omnibus αποθετήριο δεδομένων κάτω από τον αριθμό GSE71605 και ακολούθησε απαιτήσεις MIAME. Για τον εντοπισμό σηματοδότηση μονοπατιών και των λειτουργιών των γονιδίων τα δεδομένα μικροσυστοιχιών αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Panther Classification System-μια ηλεκτρονική βάση δεδομένων.

RT και Real-time PCR ανάλυση

Αντίστροφη μεταγραφή πραγματοποιήθηκε με τη χρήση 1 μg ολικού RNA απομονώνεται από τα κύτταρα με το κιτ Maxima πρώτου κλώνου cDNA Synthesis για RT-qPCR (Thermo Scientific, Waltham, ΜΑ, USA). Ποσοτική επαλήθευση των γονιδίων έγινε με τη χρήση του CFX96 Touch

™ μέσο Real-Time PCR Detection System (Bio Rad, Hercules, CA, USA), χρησιμοποιώντας το κιτ SYBR Green ακριβείας Melt Supermix (Bio-Rad). Συνθήκες επιμέρους αντιδράσεις PCR βελτιστοποιείται για δεδομένο ζεύγος ολιγονουκλεοτιδικών εκκινητών (S1 Πίνακα, τα αποδεικτικά στοιχεία) βάσει των συνθηκών ως ακολούθως: 95 ° C, 10 λεπτά? 45 κύκλους PCR στους 95 ° C, 15 s? 59 ° C, 15 s? 72 ° C, 15 s, που ακολουθείται από ανάλυση καμπύλης τήξης (65-97 ° C με 0.11 ρυθμός κλιμάκωσης ° C και 5 αποκτήσεις ανά 1 ° C). Τα αποτελέσματα ομαλοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το

GAPDH

,

ACTB

και

HPRT

γονίδια αναφοράς. Οι διαφορές στην έκφραση των γονιδίων μεταξύ BFL και NFL ομάδες αξιολογήθηκαν από t-τεστ του Student.

Αποτελέσματα

Η βιωσιμότητα των κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό

Έχουμε διαπιστώσει ότι το ιώδιο-biofortified εκχύλισμα μαρούλι κατασταλεί η πολλαπλασιασμό των Caco-2 πιο αποτελεσματικά από ό, τι το εκχύλισμα από μη εμπλουτισμένα μαρούλι (Σχήμα 1). δοκιμή κυτταροτοξικότητα LDH διαπιστώσει ότι παρατηρούμενη επίδραση δεν προκλήθηκε από νέκρωση. Βρήκαμε καμία σημαντική LDH κυτταροτοξικότητα του εκχυλίσματος BFL επί Caco-2 κυτταρική γραμμή σε οποιοδήποτε μελετήθηκαν συγκέντρωση ιωδίου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων δεν επηρεάστηκε από ΚΙ Εκτός από εκχύλισμα NFL. Επιπλέον, η επίδραση της BFL και NFL επί του πολλαπλασιασμού των φυσιολογικών κυτταρικής σειράς FHC εξετάστηκε και καμία μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων παρατηρήθηκε (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα).

Οι τιμές εκφράζονται ως μέσοι όροι ± SEM για το Ν ≥ 9 , τιτλοδοτήθηκε για NC ως 100%. Η στατιστική σημαντικότητα βασίστηκε στο Student t-test * ρ & lt? 0,05 έναντι (vs). NC και ^ p & lt? 0,05 έναντι NFL.

Η

Ιώδιο-biofortified μαρούλι συγκεκριμένων γονιδίων σε Caco-2 κυτταρική σειρά

Ένα σύνολο από 2603 μεταγραφές αναλύθηκαν. Δείξαμε ότι περίπου το 50% των μεταγραφών (1326 του 2603) εκφράστηκαν διαφορικά μεταξύ των κυττάρων σε επεξεργασία με BFL και NFL (Πίνακας 1). Ο κατάλογος των BFL συγκεκριμένες μεταγραφές παρουσιάζεται στην Υποστήριξη Πληροφοριών (S2 πίνακα, τα αποδεικτικά στοιχεία). Μεταξύ αυτών, χρησιμοποιώντας ένα Pathway Studio Program, προσδιορίσαμε (Πίνακας 2) και οπτικοποιήθηκε τις αλληλεπιδράσεις των γονιδίων και των πρωτεϊνών σε απόκριση σε ιώδιο (Σχήματα 1 και 2).

Η

Η

Genes συγκεκριμένα ρυθμίζονται από το ιώδιο-biofortified εκχύλισμα μαρούλι σε Caco-2 κυτταρική σειρά

οι αλληλεπιδράσεις της BFL συγκεκριμένα γονίδια (S2 πίνακα, τα αποδεικτικά στοιχεία) ως απάντηση σε ιώδιο (Σχήμα 2) δημιουργήθηκαν αυτόματα χρησιμοποιώντας ένα Pathway Studio Program. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2, ιωδίου επηρεάζει:

IGF1

,

TG

,

PPARG

,

GPX1

,

ΦΩΣ

,

SLC6A4

,

NOS2

, και

thrB

μέσα σε επιμήκη ανωφέρεια /κάτω ρύθμιση της έκφρασης τους ή /και σε άλλες μοριακές λειτουργίες. Ιώδιο έμμεση δράση αντικατοπτρίζεται κυρίως μέσω της θυρεοσφαιρίνης (TG), οι οποίες είναι υπολείμματα τυροσίνης ιωδιώνονται στην οδό σύνθεσης του θυρεοειδούς ορμόνης (ΤΗ). Έτσι, TG εμπλέκεται άμεσα στο μεταβολισμό του ιωδίου και έχει αναφερθεί ότι συνδέεται με πολλές ασθένειες έλλειψη ιωδίου [26, 27]. Σύμφωνα με την Pathway Studio Πρόγραμμα, ιώδιο, που είναι ομοιοπολικά συνδεδεμένο με TH και συνθετικό ανάλογο της (λεβοθυροξίνη), μπορούν να επηρεάσουν την έκφραση ή τη δραστηριότητα του

NOS2

,

HMOX1

,

NPPB

,

TXN

,

ABCB1

,

G6PD

,

MYLK

καθώς και

thrB

κωδικοποιεί θυρεοειδούς βήτα υποδοχέα ορμόνης (TRβ1). Στο επίπεδο του γονιδιώματος, TRβ1, το οποίο είναι ένα TH-liganded παράγοντα μεταγραφής, μπορεί να επηρεάσει τα επίπεδα του mRNA των πολλαπλών γονιδίων συμπεριλαμβανομένων θετικά ρυθμιζόμενων τύπου 1 ιωδοθυρονίνης deiodinase

DIØ1

και αρνητικά ρυθμίζονται

E2F1

παράγοντα μεταγραφής που εμπλέκονται στην πρόοδο του κυτταρικού κύκλου (σχήμα 2). Αυτός ο υποδοχέας είναι επίσης πιστεύεται ότι είναι ένας μεσολαβητής της μη γονιδιωματικών δράση του TH η οποία είναι υπεύθυνη για την ενεργοποίηση της μεμβράνης πλάσματος ανβ3 ιντεγκρίνης που ακολουθείται από την ενεργοποίηση των επακόλουθων οδών που οδηγούν στην φωσφορυλίωση των ERK1 /ΕΚΚ2 και πρωτεΐνες TRβ1. Επιπλέον, Τ3 μεσολάβηση σχηματισμό κυτταροπλασματικής συμπλοκών TRβ1 με ρ85 υπομονάδα της ΡΙ3Κ μπορεί να ενεργοποιήσει κατάντη του mTOR που εξαρτάται από οδούς που μπορεί να εξηγήσει πλειοτροπική δράση των TH [28]. Όλες αυτές οι άμεσες και έμμεσες σχέσεις μεταξύ των γονιδίων επηρεάζεται από τα μόρια που περιέχουν ιώδιο μπορεί να αντιστοιχεί, τουλάχιστον εν μέρει, με τα αποτελέσματά μας που δείχνουν διαφορές στην δράση του ιωδιούχου άλατος καλίου (ΚΙ) και ιώδιο που θα μπορούσαν να ενσωματωθούν σε μακρομόρια του biofortified μαρούλι.

Επιπλέον, οι αλληλεξαρτήσεις μεταξύ BFL συγκεκριμένων γονιδίων σε απάντηση ιωδίου στα κύτταρα Caco-2 (Πίνακας 2) που παρουσιάζονται στο Σχήμα 3.

Η

Real-time PCR

σε πραγματικό χρόνο ανάλυση PCR εκτελέστηκε για πυρηνικούς υποδοχείς των θυρεοειδικών ορμονών (TRS): θυρεοειδούς υποδοχέα ορμόνης, άλφα (

thrA

) που κωδικοποιεί ΤΚα ισομορφές πρωτεΐνης και του υποδοχέα θυρεοειδούς ορμόνης, βήτα (

thrB

) που κωδικοποιεί υποδοχείς ΤΡβ, καθώς και για DIØ1, ότι ρυθμίζεται θετικά από TRs και αρνητικά ρυθμίζονται E2F1. Για να προσδιορίσετε αν οι αλλαγές στην έκφραση γονιδίων σε BFL μπορεί να είναι αποτέλεσμα του ιωδιούχου ιόντος (Ι

-) δράση, ΚΙ στην ίδια συγκέντρωση όπως και στο BFL προστέθηκε στο NFL. Ως αποτέλεσμα, τα επίπεδα του mRNA TRβ1 μειώθηκαν και στις δύο εκχυλίσματα και δεν υπήρξαν σημαντικές αλλαγές στην ΤΚα μεταγραφές. Μια σημαντική αύξηση του DIØ1 mRNA παρατηρήθηκε σε κυτταρικές σειρές που έλαβαν θεραπεία με BFL και ΚΙ-NFL εκχυλισμάτων. Έκφραση του E2F1 mRNA μειώθηκε σε εκχύλισμα BFL και αυξήθηκε το εκχύλισμα ΚΙ-NFL (Πίνακας 3). Τα δεδομένα που λαμβάνονται με Real-Time PCR έδειξαν την ίδια τάση, την επαλήθευση των αποτελεσμάτων των μικροσυστοιχιών.

Η

Γονιδιακή Οντολογία μοριακή πλήρη ανάλυση

Στη συνέχεια, εξετάσαμε Gene Ontology (GO) για όλα τα BFL vs . NFL διαφορικά ρυθμίζονται μεταγραφές (S2 πίνακα, τα αποδεικτικά στοιχεία), χρησιμοποιώντας Panther σύστημα ταξινόμησης. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν από την ανάλυση των οδών σηματοδότησης που παρουσιάζονται στον Πίνακα 4. GO βιολογικές διεργασίες, μοριακές λειτουργίες και τις τάξεις πρωτεϊνών παρουσιάζονται στην Υποστήριξη Πληροφοριών (S3-S5 πίνακες).

Η

Συζήτηση

για την καλύτερη γνώση μας, η μελέτη μας είναι η πρώτη που αξιολογεί την επίδραση του ιωδίου-biofortified μαρούλι, στο προφίλ μεταγραφικό των Caco-2 κυτταρική σειρά. Είναι επίσης πρώτα να δείξει την αναστολή της κόλου καρκινικών κυττάρων πολλαπλασιασμό σε απόκριση σε θεραπεία εκχύλισμα μαρούλι ιώδιο-biofortified (Σχήμα 1). Υποπτευόμαστε ότι η μείωση της βιωσιμότητας των κυττάρων μπορεί να προκληθεί από την παρουσία ιωδίου, η οποία ενσωματώθηκε στη δομή των φυτών. Η προσθήκη του ΚΙ στο εκχύλισμα NFL δεν επηρέασε μείωση της σύνθεσης BrdU. Αυτό μπορεί να υποδηλώνει ότι στην BFL, ιώδιο συνδέεται ομοιοπολικά με λιπίδια ή πρωτεΐνες χλωροπλαστών μεμβρανών [29,30,31,32], αν και απαιτούνται περαιτέρω μελέτες. Αυτή η οργανική μορφή του ιωδίου μπορεί να παρεμβαίνει με μονοπάτια που οδηγούν σε μειωμένη κύτταρα βιωσιμότητας. Ενδείκνυται, ότι οι αγωγές ιώδιο αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων μέσω της παραγωγής ιωδο-λιπίδια συμπεριλαμβανομένων 6-ιωδο-5-υδροξυ-8,11,14-εικοσατριενοϊκό οξύ (ένα ιωδιωμένο αραχιδονικό οξύ) και iodohexadecanal [33, 34]. Αυτές οι ενώσεις έχουν ανιχνευθεί μετά ιώδιο (Ι

2) συμπλήρωση, και εικάζεται ότι μπορούν να είναι ισχυροί ενεργοποιητές του ενεργοποιείται από πολλαπλασιαστή περοξυσώματος γάμμα υποδοχέα τύπου (ΡΡΑΡγ) [35]. Στη μελέτη μας, παρατηρήσαμε το μειωμένο των PPARγ mRNA μετά τη θεραπεία με BFL, καθώς και την ίδια τάση των γονιδίων στόχων PPARγ (λιπαρών οξέων δεσμευτική πρωτεΐνη 4,

FABP4?

Η αποσύνδεση πρωτεΐνη 1,

UCP- 1

? γλυκερόλη κινάσης,

GK

) (S2 πίνακα, Συμπληρωματικές πληροφορίες). Ως εκ τούτου, παρατηρήθηκε μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων μπορεί να προκληθεί από την επαγωγή της απόπτωσης (PPARγ-ανεξάρτητων) και /ή διαφοροποίηση [36, 37, 38]. Επιπλέον, σύμφωνα με άλλους συγγραφείς, βιοδραστικών ενώσεων του μαρουλιού έχουν την ικανότητα να αναστέλλουν την βλάβη του DNA σε κύτταρα Ν2Α νευροβλαστώματος ποντικού [39]. Στην έρευνά μας, δεν είχαμε εξετάσει την επίδραση της BFL για γενετικές βλάβες. Ωστόσο, λαμβάνοντας υπόψη την παρατηρούμενη μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων Caco-2 μετά τη θεραπεία BFL μπορούμε να υποθέσουμε θετική επίδραση της σχετικά με τους μηχανισμούς της γονοτοξικότητας.

Σε αυτή τη μελέτη, από τα πρώτα, δείξαμε το Caco-2 μεταγραφές ρυθμίζονται ειδικά από εκχυλίσματα του ιωδίου-biofortified μαρούλι (S2 πίνακα, Συμπληρωματικές πληροφορίες). Με βάση αυτές τις μεταγραφές, επισημαίνουμε κάποιες χαρακτηριστικές οδών, συμπεριλαμβανομένης της σηματοδότησης απόπτωσης (Πίνακας 3). Αναλύοντας την έκφραση των δεικτών απόπτωσης, διαφορικά ρυθμίζονται σε απόκριση προς BFL εναντίον εκχυλίσματα NFL, προσδιορίσαμε την μιτοχονδριακή απόπτωση ως το πιο πιθανό μονοπάτι σηματοδότησης. Ήταν υποδεικνύεται από την αυξημένη έκφραση των προ-αποπτωτικών Casp2 και Ripk1 Τομέα περιέχουν Adaptor Με Θάνατος Τομέα (CRADD) και μειωμένη αντι-αποπτωτικών X-Linked αναστολέας της απόπτωσης (ΧΙΑΡ) και Bcl2-Associated Athanogene 3 (BAG3). Κασπάση-2 εμπλέκεται με μία μιτοχόνδρια εξαρτώμενη αποπτωτικό μονοπάτι, επάγοντας μιτοχονδριακών πρωτεϊνών δηλ Bcl-2 και Bcl-xL (που μπλοκάρουν κασπάση-2), και CRADD, η οποία επάγει κυτταρικό θάνατο [40]. ΧΙΑΡ είναι ένας άμεσος αναστολέας της δραστηριότητας κασπάσης [41], ενώ αυξημένη έκφραση του BAG3 σε καρκίνους συνδέεται με την διατήρηση της επιβίωσης των κυττάρων, αντίσταση θεραπεία, και αυξημένη μετάσταση [42]. Τα αποτελέσματά μας είναι σύμφωνα με τις αναφορές των άλλων συγγραφέων, (δηλαδή σε προστάτη και κύτταρα καρκίνου του μαστού), τα οποία δείχνουν την επαγωγή της μιτοχονδριακής αποπτωτικής παθολογικής οδού με άμεση αντιοξειδωτικό /οξειδωτικού μιτοχονδριακή δράση του ιωδιούχου (Ι

-) και ιώδιο (Ι

2) [35, 43] ή έμμεση σχηματισμό ιωδο-λιπιδίων [33, 34]. Στην κυττάρων καρκίνου του μαστού γραμμή MCF-7 Ι

2 παρελήφθη από διευκόλυνε σύστημα διάχυσης και ομοιοπολικά με λιπίδια τα οποία, με τη σειρά του, ανέστειλε πολλαπλασιασμό. Η ίδια μελέτη έδειξε ότι μόνο Ι

2 και 6-ιωδο-5-υδροξυ-8,11,14-εικοσατριενοϊκό οξύ, αλλά όχι ΚΙ, είχε τις αντιπολλαπλασιαστικές ιδιότητες [44]. Αυτές οι παρατηρήσεις συμφωνούν με τα αποτελέσματα μας δείχνουν αναστολή του πολλαπλασιασμού Caco-2 που σημειώθηκε μετά τη θεραπεία με BFL, αλλά όχι KI-NFL (Σχήμα 1).

Σε αυτή τη μελέτη έχουμε παρατηρήσει αυξημένα επίπεδα NOTCH3 και μειώθηκε έκφραση του c-myc mRNA στα εκχυλίσματα BFL (S2 πίνακα, Συμπληρωματικές πληροφορίες). Pro-διαφοροποίηση ρόλος της οικογένειας Notch, συμπεριλαμβανομένων NOTCH3 έχει περιγραφεί πρόσφατα, σε σχέση με ινοβλάστες ποντικού και ανθρώπινων νευρώνων, αντίστοιχα [45, 46]. Αν και, ρύθμιση της έκφρασης c-myc φαίνεται να παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και της κυτταρικής διαφοροποίησης. Έχει αποδειχθεί, ότι η Τ3 επαγόμενη νευρωνική διαφοροποίηση και ανάπτυξη σύλληψη του νευροβλαστώματος Ν2Α-b κυττάρων προηγείται μια μείωση της έκφρασης του γονιδίου c-myc [47]. Σε μια τέτοια περίπτωση, αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει την αναστολή της Caco-2 κύτταρα πολλαπλασιασμού μετά BFL εκχυλίσματα που παρατηρήθηκε στη μελέτη μας? Ωστόσο, απαιτείται περαιτέρω έρευνα.

Σε αυτή την εργασία παρουσιάζουμε τη λίστα των BFL εναντίον NFL συγκεκριμένων γονιδίων σε απάντηση ιώδιο (Πίνακας 2 και Σχήμα 2) και την πιθανή σχέση μεταξύ των γονιδίων /πρωτεϊνών (Σχήμα 3) . Οι λειτουργίες τους, βάσει της βάσης δεδομένων Panther Σύστημα Ταξινόμησης, που συνδέονται με ιώδιο μεταβολισμό και την κυκλοφορία σε οργανισμούς. Μια ενδιαφέρουσα αύξηση στην θυρεοσφαιρίνη (TG) mRNA, που παρατηρήθηκε στη μελέτη μας, μπορεί να σχετίζεται πιθανώς με την ενεργοποίηση του μονοπατιού της σύνθεσης που μπορεί να οδηγήσει στο σχηματισμό ιωδιωμένης-πρωτεϊνών, παρόμοια με TG, που παράγονται σε ανθρώπινα και ζωικά κύτταρα του θυρεοειδούς αδένα. Παρ ‘όλα αυτά, δεν παρατηρήσαμε μία ενισχυμένη έκφραση της ΤΡΟ υπεροξειδάσης, η οποία είναι υπεύθυνη για την ενσωμάτωση του ιωδίου σε κατάλοιπα τυροσίνης της πρωτεΐνης. Από την άλλη πλευρά, έχει αποδειχθεί ότι το ιώδιο μπορεί να δεσμεύεται με τα αμινοξέα των φυτικών πρωτεϊνών [29, 30, 31, 32], ωστόσο, υπάρχει έλλειψη πληροφοριών σχετικά με το μεταβολισμό, την αποσύνθεση τους και η βιολογική λειτουργία που θα μπορούσε να μιμηθεί την ιωδιωμένο τυροσίνες απελευθερώνεται από TG πρωτεΐνες ως θυρεοειδικές ορμόνες (THS). Η θυροξίνη (Τ4) είναι ένα από αυτά προ-ορμόνες που μετατρέπεται σε ενεργή ορμόνη-τριιωδοθυρονίνη (Τ3) σε περιφερειακά κύτταρα. Με την παρουσία της Τ3, υποδοχείς ορμόνης θυρεοειδούς (TRs) που περιλαμβάνει TRβ1 (

thrB

) και ΤΚα (

thrA

) μπορούν να μεταβάλλουν την έκφραση πολλών γονιδίων με σύνδεση προς στοιχεία του DNA που ονομάζεται θυρεοειδούς ορμόνης Response στοιχεία (TRE), ενεργώντας έτσι ως παράγοντες μεταγραφής [28]. Αν και παρατηρήθηκε μείωση των επιπέδων του mRNA TRβ1 σε απόκριση ιώδιο-biofortified μαρούλι (Πίνακας 3), οι μελέτες μας έδειξαν αυξημένη έκφραση των θετικά ρυθμιζόμενων DIØ1 και μειωμένα επίπεδα E2F1 μεταγραφής, το οποίο ρυθμίζεται αρνητικά από τις πρωτεΐνες TRβ1 (Πίνακας 3). Επιπλέον, παρατηρούνται αλλαγές στην έκφραση άλλων γονιδίων TR-ρυθμίζεται π.χ. αυξημένα επίπεδα του mRNA της β-αμυλοειδούς προδρόμου APPBP πρωτεΐνης) και μειωμένη έκφραση MYC, CCND1, PPARG (S2 Πίνακα, Συμπληρωματικές πληροφορίες). πρωτεΐνη DIØ1 λειτουργεί ως ένα ένζυμο deiodinating θυροξίνη (Τ4) στην ενεργό θυρεοειδή ορμόνη Τ3 και υπερ-έκφραση της μπορεί να συσχετιστεί με υψηλά επίπεδα ιωδίου κύκλου εργασιών στα κύτταρα. E2F1 είναι γνωστό ότι είναι ένας θετικός ρυθμιστής του κυτταρικού πολλαπλασιασμού [48, 49] και η έκφρασή του φαίνεται να υποστηρίζεται από δύο MYC και CCND1 [50] Πράγματι, η έρευνά μας έδειξε ότι η μείωση της έκφρασης E2F1 καθώς MYC και CCND1, συσχετίζεται θετικά με μειωμένη πολλαπλασιασμό των Caco-2 κυττάρων (Σχήμα 1). Η φαινομενική αντίφαση μεταξύ χαμηλότερα επίπεδα mRNA των TRβ1 και τα επίπεδα των γονιδίων στόχων του μπορεί να εξηγηθεί από την αυξημένη δραστηριότητα της πρωτεΐνης TRβ1 ως παράγοντας μεταγραφής Τ3-εξαρτώμενο (Πίνακας 3). Αυτή η εξήγηση θα μπορούσε να υποστηριχθεί από παλαιότερα αναφερθεί έλλειψη συσχέτισης μεταξύ της πρωτεΐνης /δραστηριότητας TRβ1 και τα επίπεδα του mRNA [51]. Έτσι, τα αποτελέσματα μας υποδεικνύουν ότι μπορεί να ιώδιο-biofortified μαρούλι, το οποίο ήταν σε θέση να ρυθμίζουν προς τα κάτω την μεταγραφή TRβ1, θα μπορούσε επίσης να προσφέρει μια ενίσχυση της δραστικότητας TRβ1 μόριο? Ωστόσο, η υπόθεση αυτή χρειάζεται περαιτέρω μελέτες. Αν και συμπληρωματική δράση των υποδοχέων ΤΚα θα μπορούσε να είναι μια άλλη εξήγηση των παρατηρούμενων αποτελεσμάτων, μικροσυστοιχίες μας δεν παρουσίασαν καμία σημαντική αλλαγή στα επίπεδα ΤΚα mRNA. Από την άλλη πλευρά, η αύξηση της έκφρασης DIØ1 μετά KI-NFL (Πίνακας 3) δεν αποκλείει μια άμεση επιρροή του ιωδιούχου ιόντος (Ι

-) σε μηχανισμούς που ρυθμίζουν την παρατηρούμενη DIØ1 τρανς-ενεργοποιήσεως

Εν κατακλείδι, η έρευνά μας δείχνει ότι το ιώδιο-biofortified μαρούλι ρυθμίζει τη μεταγραφή γονιδίων που σχετίζονται με τον κυτταρικό κύκλο και αποπτωτική διαδικασία που οδηγεί σε μειωμένη Caco-2 κύτταρα πολλαπλασιασμού. Αν και η έκφραση ορισμένων γονιδίων βρέθηκε να μεταβάλλεται από τις δύο: BFL και NFL μορφές ιωδίου, προσδιορίσαμε επίσης πολλαπλά γονίδια διαφορικά ρυθμιζόμενα, υποδηλώνοντας αποκλίνουσες μηχανισμοί δράσης ιωδίου ενσωματωθεί μακρομόρια μαρούλι κατά τη διάρκεια biofortificaton διαδικασία και ιώδιο προστίθεται ως ΚΙ άλας προς μη οχυρωμένη μαρούλι. Αυτό μπορεί επίσης να είναι ένα επιχείρημα για την παρουσία στην BFL οι συνδεδεμένες με ομοιοπολικούς δεσμούς μορφές ιωδίου που έχουν αναφερθεί από άλλους ερευνητές να ασκήσουν συγκεκριμένη ορμόνη-όπως δράση. Εδώ μπορούμε να δείξουμε ότι το ιώδιο-biofortified μαρούλι μπορεί να είναι ένας ελκυστικός τρόπος για την πρόληψη διαταραχών έλλειψης ιωδίου. Αν και τα παραπάνω αποτελέσματα απαιτούν επιβεβαίωση σε επίπεδα πρωτεΐνης, παρουσίασε μικροσυστοιχίες είναι ένα πολύτιμο και πολύπλευρη πηγή πληροφοριών, ιδίως για τις μελλοντικές μελέτες σχετικά με τις δυνατότητες αυτής της μορφής ιωδίου στη θεραπεία του καρκίνου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 πίνακα. νουκλεοτιδικές αλληλουχίες των εκκινητών

thrA

, υποδοχέα ορμόνης του θυρεοειδούς, άλφα.?

thrB

, υποδοχέα ορμόνης του θυρεοειδούς, βήτα?

DIØ1

, deiodinase, iodotyronine, τύπου Ι?

E2F1

, παράγοντα μεταγραφής E2F 1?

ACTB

, ακτίνη, β?

GAPDH

, αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης?

HPRT1

, φωσφοριβοσυλτρανσφεράση της υποξανθίνης 1.

doi: 10.1371 /journal.pone.0147336.s001

(DOCX)

S2 πίνακα. Ιώδιο-biofortyficated μαρούλι συγκεκριμένες μεταγραφές

Στατιστική σημαντικότητα της θεραπείας: ρ. & Lt? 0.05

doi:. 10.1371 /journal.pone.0147336.s002

(DOCX)

S3 πίνακα. GO βιολογικών διεργασιών βάσει BFL εναντίον NFL συγκεκριμένα γονίδια με διαφορετικό τρόπο ρυθμίζονται σε Caco-2 κυτταρική σειρά

Στατιστική σημαντικότητα της θεραπείας: ρ. & Lt? 0.05

doi:. 10.1371 /journal.pone.0147336.s003

(DOCX)

S4 πίνακα. GO μοριακή λειτουργίες βασίζονται στο BFL εναντίον NFL συγκεκριμένα γονίδια με διαφορετικό τρόπο ρυθμίζονται σε Caco-2 κυτταρική σειρά

Στατιστική σημαντικότητα της θεραπείας: ρ. & Lt? 0.05

doi:. 10.1371 /journal.pone.0147336.s004

(DOCX)

S5 πίνακα. τάξεις πρωτεϊνών με βάση BFL εναντίον NFL συγκεκριμένα γονίδια με διαφορετικό τρόπο ρυθμίζονται σε Caco-2 κυτταρική σειρά

Στατιστική σημαντικότητα της θεραπείας: ρ. & lt? 0.05

doi:. 10.1371 /journal.pone.0147336.s005

(DOCX)

Ευχαριστίες

Το έργο χρηματοδοτήθηκε από την πολωνική Εθνική Επιστήμης 2012-2015 Κέντρο επιχορήγηση όχι. Δεκέμβριος-2011/03 /D /NZ9 /05560 «I και Se biofortification επιλεγμένων λαχανικών, συμπεριλαμβανομένης της επίδρασης αυτών των ιχνοστοιχείων στην ποιότητα απόδοσης, καθώς και την αξιολόγηση της απορρόφησης ιωδίου και επιλεγμένα βιοχημικές παραμέτρους σε αρουραίους τρέφονται με λαχανικά biofortified με ιώδιο».