Αφηρημένο

Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι η microRNAs (miRNAs) είναι έκτροπα που εκφράζονται στον καρκίνο του ανθρώπου και συμβάλλουν στην ογκογένεση, αλλά οι ρόλοι τους στον καρκίνο του παγκρέατος είναι ακόμη σε μεγάλο βαθμό άγνωστες. Σε αυτή τη μελέτη, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι miR-130b ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε 52 ζεύγη των παγκρεατικών ιστών καρκίνου και πέντε κυτταρικές σειρές. Επιπλέον, η απορύθμιση miR-130b συσχετίστηκε με χειρότερη πρόγνωση, η αύξηση του μεγέθους του όγκου, το προχωρημένο στάδιο TNM, λεμφική εισβολή και μακρινή μετάσταση. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι το miR-130b έκφραση ήταν ένα σημαντικό και ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα πρόβλεψης για ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Λειτουργικές μελέτες έδειξαν ότι η υπερέκφραση του miR-130b κατέστειλε εντυπωσιακά τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος τόσο in vitro όσο και in vivo, η οποία θα μπορούσε να αποδοθεί στην επαγωγή της απόπτωσης και διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε φάση S. Εν τω μεταξύ, ένα υπερεκφρασμένο miR-130b ανέστειλε σημαντικά την επεμβατική ικανότητα των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος. Επιπλέον, η διπλή δοκιμασία λουσιφεράσης αποκάλυψε ότι STAT3 απευθυνόταν απευθείας από miR-130 Β, η οποία επιβεβαιώθηκε περαιτέρω από την αντίστροφη έκφραση του miR-130b και STAT3 σε παγκρεατικά δείγματα καρκίνου. Τα ευρήματά μας πρότεινε ότι το miR-130b μπορεί να έχουν σημαντικές δυνατότητες σε αναγνώριση πρόγνωση και την εφαρμογή της θεραπείας για τον καρκίνο του παγκρέατος

Παράθεση:. Zhao G, Zhang Κρ, Shi Υ, Τσιν Q, Liu Υ, Wang Β, et al. (2013) MiR-130Β είναι προγνωστικός δείκτης και αναστέλλει τον κυτταρικό Πολλαπλασιασμός και εισβολή σε καρκίνο του παγκρέατος μέσω Στόχευση STAT3. PLoS ONE 8 (9): e73803. doi: 10.1371 /journal.pone.0073803

Επιμέλεια: Johannes Haybaeck, Ιατρικό Πανεπιστήμιο του Graz, Αυστρία

Ελήφθη: 31 Δεκεμβρίου 2012? Αποδεκτές: 24 Ιούλη 2013? Δημοσιεύθηκε: 10 Σεπτεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Zhao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από την Εθνική Επιτροπή Science Foundation (NSFC) της Κίνας (αριθμοί επιχορήγηση 30972900 και 30600594). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

τα microRNAs είναι ενδογενή μη-κωδικοποίησης RNAs που αποτελείται από περίπου 22 νουκλεοτίδια. Τα microRNAs μπορεί να ρυθμίσει αρνητικά την γονιδιακή έκφραση μέσω δέσμευσης σε μερικώς συμπληρωματικές αλληλουχίες στον συγκεκριμένο στόχο mRNA 3′-αμετάφραστη περιοχή (UTR), που μπορεί να οδηγήσει είτε σε mRNA αποικοδόμηση ή μετάφραση αναστολή [1]. Οι αναδυόμενες στοιχεία δείχνουν ότι οι miRNAs παρεκκλίνοντα εκφράζονται σε διαφορετικούς τύπους όγκων και να συμμετέχουν στην καρκινογένεση στον άνθρωπο ή /και τη μετάσταση με άμεση στόχευση ογκογονίδια ή γονίδια καταστολής του όγκου [2] – [4].

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μία από τις πιο θανατηφόρα κακοήθειες. Μόνο το 10-20% των ασθενών που έχουν διαγνωστεί με καρκίνο του παγκρέατος είναι χειρουργικά εξαιρέσιμων και το συνολικό ποσοστό της επιβίωσης 5 ετών είναι μόλις 5% λόγω του υψηλού ποσοστού υποτροπής της, παρά τις θεραπείες της πολυτροπικότητας [5], [6]. Όπως και άλλες μορφές καρκίνου, η ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος είναι μια διαδικασία πολλών σταδίων με τη συσσώρευση των γενετικών και επιγενετικών αλλαγών. Altered εκφράσεις miRNA, όπως miR-34a, miR-21 και miR-20a, έχουν ταυτοποιηθεί ως ρυθμιστές της ανάπτυξης των κυττάρων, την απόπτωση, μετανάστευση ή την εισβολή σε καρκίνο του παγκρέατος [7] – [9]. Ως εκ τούτου, οι πιο εκτεταμένες έρευνες που απαιτούνται για το ρόλο των miRNAs, τα οποία δεν διέπονται από ρυθμίσεις στον καρκίνο του παγκρέατος, προκειμένου να διευκρινιστεί η λειτουργία των miRNAs στον καρκίνο του παγκρέατος.

μελέτες μικροσυστοιχιών έχουν εντοπίσει μια σειρά από microRNAs που είχαν απελευθερωθεί σε παγκρεατικά καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου miRNA-130β [10] – [12]. Μέχρι σήμερα, miR-130β έχει βρεθεί να απελευθερωθεί σε ορισμένους τύπους καρκίνων συμπεριλαμβανομένων να υπερεκφράζεται σε καρκίνο του στομάχου [13], [14], γλοίωμα [15] και καρκίνο νεφρικών κυττάρων [16], ενώ προς τα κάτω σε καρκίνο του ενδομητρίου [ ,,,0],17] και θηλώδες καρκίνωμα του θυρεοειδούς [18]. Ωστόσο, δεν έχουν διεξαχθεί ειδικές μελέτες για να αποκαλύψει το ρόλο του miR-130b στον καρκίνο του παγκρέατος. Ως εκ τούτου, η μελέτη μας είχε ως στόχο να προσδιορίσει το ρόλο του miR-130b στον καρκίνο του παγκρέατος. Στην παρούσα μελέτη, η έκφραση του miR-130b μεταξύ του καρκίνου του παγκρέατος και των κανονικών παρακείμενων παγκρέατος ιστοί αναλύθηκαν. Επιπλέον, ο πολλαπλασιασμός και εισβολής αξιολογήθηκαν σε PANC-1 και κύτταρα 1 ASPC-αφού επιμολυσμένα με miR-130β.

Η έρευνά μας προσδιορίζονται περαιτέρω το δυναμικό άμεσο στόχο με την οποία το miR-130b που ασκείται λειτουργία του στις παγκρέατος τα καρκινικά κύτταρα. Το λογισμικό πρόβλεψης microRNA ανέφερε ότι ο μετατροπέας σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής 3 (STAT3) θα μπορούσε να είναι ο μεταγενέστερος στόχος του miR-130b. STAT3 είναι ένας βασικός παράγοντας μεταγραφής κυτταροπλασματική που ενεργοποιείται από την αύξηση της κινάσης της τυροσίνης και υποδοχείς κυτοκινών. STAT3 διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στη διαμεσολάβηση διάφορες βιολογικές διεργασίες που περιλαμβάνουν: τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την απόπτωση και διαφοροποίηση [19]. STAT3 έχει αναγνωριστεί ως βασικό ογκογόνο παράγοντα σε έναν αριθμό κακοηθειών και απαιτείται για την ογκογένεση στο δέρμα και γαστρικών καρκίνων [20], [21]. Στον καρκίνο του παγκρέατος, η ενεργοποίηση του STAT3 προωθείται ανάπτυξης κυττάρου όγκου και την εισβολή, η οποία οδήγησε σε κακή επιβίωση των ασθενών [22]. Επιπλέον, STAT3 knockdown ανέστειλε την κυτταρική ανάπτυξη και διεισδυτικότητα σε καρκίνο του παγκρέατος τόσο

in vitro

και

in vivo

, και εμφανώς μειωμένη VEGF και ΜΜΡ-2 εκφράσεις [23], [24]. Ως εκ τούτου, η διπλή δοκιμασία λουσιφεράσης εφαρμόζονται για τον προσδιορισμό αν STAT3 στόχευσε άμεσα από miR-130b. Επιπλέον, η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του miR-130b και STAT3 σε παγκρεατικά καρκινικά δείγματα διερευνήθηκε περαιτέρω.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και ιστοί όγκου

Ένα σύνολο των 52 ανθρώπινου παγκρέατος καρκινικούς ιστούς (PC) και να συνδυαστούν κανονική δίπλα του παγκρέατος ιστούς (NP) ελήφθησαν κατά τη διάρκεια της χειρουργικής επέμβασης σε παγκρέατος Ινστιτούτο Νόσων, Νοσοκομείο Ένωσης (Wuhan, Κίνα) μεταξύ Ιανουαρίου 2007 και Δεκεμβρίου 2009. Η διάγνωση βασίστηκε σε παθολογικά στοιχεία και τα δείγματα αμέσως snap-κατεψυγμένα. Αυτά φυλάχθηκαν στους -80 ° C για μελλοντική miR-130Β και εκχύλιση STAT3. Κανένας από τους ασθενείς έλαβαν χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν από την χειρουργική εκτομή. Όλες οι 52 ασθενείς που παρέχονται γραπτή συγκατάθεση για τη χρήση των ιστών τους και το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Huazhong Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας, και ο αριθμός των ηθικών έγκρισης ήταν S214.

Ποσοτική πραγματικό χρόνο Αντίστροφη μεταγραφή-αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR qRT-)

Ολικό RNA απομονώθηκε από τα παγκρεατικά καρκινικούς ιστούς ή κύτταρα χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, USA). MiR-130β και U6 ήταν πολυαδενυλιωμένο τη χρήση πολυ-A First-Strand kit πολυμεράσης βασίζεται Σύνθεση (Takara Bio, Japan) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Για την ποσοτικοποίηση των επιπέδων STAT3 και GAPDH mRNA, 1 μg ολικού RNA υποβλήθηκε σε σύνθεση πρώτου κλώνου cDNA για 15 λεπτά στους 37 ° C και 5 s στους 85 ° C χρησιμοποιώντας ένα κιτ αντιδραστηρίου RT PrimeScript (Takara). Η qPCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας SYBR Green PCR κύριο μείγμα (Takara) για την 7500HT Σύστημα ABI. Η U6 ή GAPDH χρησιμοποιήθηκαν ως ένα ενδογενές ελέγχου. Οι σχετικές εκφράσεις φορές υπολογίστηκαν με τη μέθοδο -ΔΔCT 2

. Όλες οι qRT-PCR αντιδράσεις διεξήχθησαν εις τριπλούν. Ένας κατάλογος των εκκινητών που χρησιμοποιούνται στις αντιδράσεις παρουσιάζονται στον Πίνακα S1.

Γραμμές κύτταρο και καλλιέργειες

Ανθρώπινο παγκρεατικού καρκίνου PANC-1, ASPC-1, MIAPaCa-2, BXPC-3 και SW1990 κυτταρικές γραμμές ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) και διατηρήθηκαν σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό και αντιβιοτικά (100 U /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml θειική στρεπτομυκίνη). Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε υγροποιημένο επωαστή στους 37 ° C με 5% CO2.

Η επιμόλυνση

Τα microRNAs σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν με RiboBio (Ribobio Co., Guangzhou, Κίνα). Η διαμόλυνση microRNA διεξήχθη χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Τα παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 12 φρεατίων και αναπτύχθηκαν μέχρι 40% συρροή πριν από την επιμόλυνση. Το RNA και οι πρωτεΐνες εκχυλίσθηκαν σε 48 ώρες μετά την επιμόλυνση. Η τελική συγκέντρωση του miR-130b μιμούνται και αντι-miR-130b ήταν 50 nM. Λεντοϊών miR-130β (LV-miR-130Β) και άδειο φορέα λεντοϊού (LV-NC) κατασκευάστηκαν με Genechem Company (Σαγκάη, Κίνα) και διαμολύνθηκαν σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Όλες οι ολιγονουκλεοτιδικές αλληλουχίες που χρησιμοποιούνται στο πείραμα αυτό παρατίθενται στον Πίνακα S2.

Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού Δοκιμασίες

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων προσδιορίστηκε με προσδιορισμούς ΜΤΤ. Εν συντομία, τα παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (5 × 10

3 ανά φρεάτιο) επιστρώθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε RPMI 1640 και 10% FBS. Μετά από 24 ώρες να είναι στην καλλιέργεια, τα κύτταρα επιμολυσμένα με 50 nM miR-130b μιμείται, αντι-miR-130b και οι αντίστοιχες έλεγχό τους χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Τα κύτταρα στη συνέχεια καλλιεργήθηκαν στο μέσο για ένα άλλο 48 ώρες και αξιολογήθηκαν από μία χρωματομετρική ανίχνευση χρησιμοποιώντας διάλυμα ΜΤΤ (5 mg /mL) σε 570 nm. Όλα τα πειράματα εκτελέστηκαν τρεις φορές με πέντε επαναλήψεις.

Αξιολόγηση της απόπτωσης και κυτταρικού κύκλου διανομής

Η απόπτωση ρυθμό και το στάδιο του κυτταρικού κύκλου προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής FACS όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [25]. Για την ανάλυση απόπτωσης, τα κύτταρα συλλέχθηκαν, πλύθηκαν δύο φορές με αλατόνερο ρυθμισμένο με κρύο φωσφορικά (PBS) και επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα δέσμευσης σε μια κυτταρική πυκνότητα 1 × 10

6 /mL. Τα κύτταρα στη συνέχεια χρωματίστηκαν με Αννεξίνη V-FITC και ιωδιούχου propodium σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Το σήμα εξαγοράστηκε από μια ροή FACS Calibur κυτταρομετρητή (BD Biosciences) και αναλύθηκε με το λογισμικό Cellquest. Για την ανάλυση του κυτταρικού κύκλου, τα κύτταρα συλλέχθηκαν με θρυψινοποίηση, πλύθηκαν δύο φορές με κρύο PBS και σταθεροποιήθηκαν σε 70% αιθανόλη όλη τη νύκτα στους -20 ° C. Στη συνέχεια, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάλυμα χρώσης DNA που περιέχει 3.4 mM Tris-Cl (ρΗ 7.4), ιωδιούχο propodium, 0,1% triton ρυθμιστικό Χ-100 και /ml RNase ανάλυση του κύκλου Α κυττάρων 100 μα διεξήχθη με ροή FACS κυτταρομετρία.

εισβολής σε Matrigel Δοκιμασία

Ο θάλαμος εισβολή Matrigel χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει την ικανότητα των κυττάρων εισβολής (πλάκες 24-φρεατίων, 8 mm μέγεθος πόρου, Corning) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26]. Εν συντομία, κύτταρα (5 × 10

4) σπάρθηκαν στον άνω θάλαμο στους 37 ° C με τα μέσα που περιέχουν 0,1% αλβουμίνη βόειου ορού, ενώ τα μέσα που περιέχουν 20% εμβρυϊκό βόειο ορό τοποθετήθηκε στο χαμηλότερο φρεάτιο. Μετά από 48 ώρες, τα μη εισβάλλοντες κύτταρα απομακρύνθηκαν με μπατονέτες. Μεταστατικών κυττάρων στο κάτω μέρος της μεμβράνης βάφτηκαν με 0.1% κρυσταλλικό ιώδες και μετρήθηκαν υπό μικροσκοπική παρατήρηση. Οι δοκιμασίες διεξήχθησαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

Ανάλυση Western Blot

Ο καρκίνος του παγκρέατος κύτταρα συλλέχθηκαν μετά από αγωγή 48 ώρες με 50 ηΜ miR-130β μιμούνται ή αντι-miR-130Β και αντίστοιχων ελέγχων. εκχύλιση πρωτεΐνης, ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα SDS-PAGE και κηλίδωση πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράψαμε προηγουμένως [27]. Αρκετές διαφορετικές πρωτογενή αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν συμπεριλαμβανομένων: STAT3 (Cell Signaling Technology, Danvers, USA) και GAPDH (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, USA). Οι επωάσεις δευτερεύον αντίσωμα διεξήχθησαν για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου και πρωτεΐνη ζώνες έγιναν ορατές στο φιλμ ακτίνων Χ χρησιμοποιώντας ένα ενισχυμένο υπόστρωμα χημειοφωταύγειας ECL.

Διπλή δοκιμασία λουσιφεράσης

πειράματα

Η συν-επιμόλυνση ήσαν εκτελέστηκαν σε τρυβλία 96 φρεατίων. Ένα σύνολο 1 × 10

4 κύτταρα σπάρθηκαν ανά φρεάτιο σε 200 μΙ μέσου. Ένα σύνολο 100 ng φυσικού τύπου (WT) ή μεταλλαγμένου (MUT) κατασκευάσματα ανταποκριτή συν-επιμολύνθηκαν με αντιδραστήριο επιμόλυνσης Lipofectamine 2000 σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα με 50 ηΜ miR-130b ή miR-NC σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μετά από 48 ώρες, η δραστικότητα της λουσιφεράσης μετρήθηκε με το σύστημα Dual-Luciferase δοκιμασία ανταποκριτή (Promega). δραστικότητα λουσιφεράσης Firefly ήταν τότε κανονικοποιήθηκαν προς την αντίστοιχη δράση της λουσιφεράσης της Renilla.

παγκρέατος Μοντέλο ξενομοσχεύματος καρκίνου

Four-εβδομάδων θηλυκών γυμνών ποντικών (BALB /c-nude) χρησιμοποιήθηκαν για να εξεταστεί η ογκογονικότητα . Συνολικά 100 λύσεων uL κυττάρων (που περιέχει 1.5 × 10

7 PANC-1 κύτταρα) εγχύθηκαν υποδορίως στο δεξί πλευρό των ποντικών. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε με βερνιέρο κάθε τέσσερις ημέρες και οι όγκοι των όγκων υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον τύπο: μήκος Χ πλάτος

2 × 0.5 [28]. Η χρήση των άτριχων ποντικών συμμορφωθεί με τον Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των πειραματόζωων και την μελέτη εγκρίθηκε από φροντίδα των ζώων και τη χρήση επιτροπής των Tongji Ιατρικό Κολέγιο της Huazhong Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας.

Στατιστική Ανάλυση

Η έκφραση του miR-130 Β συγκρίθηκε σε παγκρεατικά καρκινικούς ιστούς και τα κύτταρα με το t τεστ αταίριαστο του Student. Οι σχέσεις μεταξύ των miR-130b και κλινικοπαθολογική παράμετροι αξιολογήθηκαν από χ

2 τεστ. Τα ποσοστά επιβίωσης για την έκφραση του miR-130b υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και τη διαφορά στις καμπύλες επιβίωσης ελέγχθηκαν με τη δοκιμασία log-rank. Τα δεδομένα επιβίωσης αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας μία πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox. Η σχέση μεταξύ του miR-130b και έκφραση STAT3 εξερευνήθηκε από συσχέτισης Spearman του. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν από το λογισμικό SPSS13.0 και τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέσοι ± τυπική απόκλιση (SD). Ένα p μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε σημαντική.

Αποτελέσματα

κλινικοπαθολογική Σημασία του miR-130b στο Παγκρέατος Καρκινοπαθών

Χρησιμοποιώντας μια μέθοδο qRT-PCR, miR-130b ανιχνεύθηκε σε όλες τις 52 ζεύγη των παγκρεατικών ιστών καρκίνου και συμφωνημένα noncancerous παγκρεατικούς ιστούς τους, καθώς και καρκίνου του παγκρέατος κυτταρικές γραμμές. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1Α, 45 ιστούς PC έδειξαν χαμηλή έκφραση του miR-130b σε σύγκριση με εκείνη των ιστών ΝΡ και το διάμεσο φορές αλλαγή ήταν 1.86 (Ρ & lt? 0,01). Εν τω μεταξύ, ο miR-130β έκφραση ήταν σημαντικά μειωμένη σε όλες τις πέντε παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν σε σύγκριση με εκείνη των κανονικών παγκρεατικών δειγμάτων (σχ. 1Β).

(Α) Το σχετικό επίπεδο έκφρασης του miR-130b σε ανθρώπινη παγκρεατική καρκινικούς ιστούς (n = 52) και συμφωνημένα παρακείμενων noncancerous παγκρεατικών ιστών (n = 52). PC: παγκρέατος καρκινικούς ιστούς? NP: δίπλα noncancerous παγκρέατος ιστούς. (Β) Το επίπεδο έκφρασης του miR-130b σε πέντε παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές (PANC-1, ASPC-1, MIAPaCa-2, BXPC-3 και SW1990). Τα δεδομένα παρουσιάζονται σε παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές σε σχέση με το μάρτυρα. Δεν υπήρχε κανονική παγκρεατική κυτταρική γραμμή, γι ‘αυτό επιλέξαμε τυχαία τρεις κανονικές παγκρέατος ιστούς, όπως τον έλεγχο. U6 χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος για RNA φόρτωση και miRNA αφθονία ομαλοποιήθηκε με εκείνη της U6 RNA. (C) Kaplan-Meier καμπύλες των συνολικών επιβιώσεις 52 ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος βαθμολογήθηκαν ως χαμηλό επίπεδο έκφρασης (κάτω από τη μέση τιμή, η = 26) και υψηλό επίπεδο έκφρασης (πάνω από τη μέση τιμή, η = 26) σύμφωνα με την miR -130b έκφρασης. Η ρύθμιση προς τα κάτω miR-130b συσχετίστηκε σημαντικά με μια συνολική μικρότερη επιβίωση. Οι τιμές P εμφανίζονται με τη χρήση δοκιμασία log-rank. (Δ) Η χ

2 ανάλυση της σχέσης μεταξύ miR-130b και την εισβολή /μετάσταση σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. *. P & lt? 0,05? **. P & lt?. 0.01

Η

Επιπλέον, η συσχέτιση του miR-130b προς τα κάτω ρύθμιση συσχετίζονται με παγκρεατική πρόγνωση του καρκίνου διερευνήθηκε. Στη συνέχεια μελετήθηκε η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του miR-130b και κλινικών παθολογικών χαρακτηριστικών του καρκίνου του παγκρέατος. Η ομάδα χαμηλού έκφραση του miR-130b παρουσίασαν υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης του αυξημένου μεγέθους του όγκου (P = 0.001), το στάδιο αργά ΤΝΜ (P = 0,005), λεμφική εισβολή (P = 0,012) και μακρινή μετάσταση (P = 0,012). Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές σε σχέση με το φύλο, την ηλικία, την τοποθεσία του όγκου, η ιστολογική βαθμό ή διείσδυση σκάφος σε καρκίνο του παγκρέατος (Πίνακας 1). Επιπλέον, η ανάλυση επιβίωσης Kapan-Meier έδειξε ότι οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση του miR-130 Β είχαν σημαντικά χειρότερη πρόγνωση από εκείνους με υψηλή έκφραση (Εικ. 1Γ). Όπως φαίνεται στο Σχ. 1D, η χ

2 ανάλυση έδειξε ότι οι ασθενείς με χαμηλότερο miR-130b έκφρασης πιο συχνά συνδέεται με την εισβολή και μετάσταση όγκου. Επιπλέον, οι ασθενείς με εισβολή και μετάσταση όγκου είχαν σημαντικά χαμηλότερη έκφραση miR-130β. Εν τω μεταξύ, πολυμεταβλητή ανάλυση Cox έδειξε ότι το miR-130b έκφρασης, το στάδιο TNM, και μακρινή μετάσταση σχετίζονταν σημαντικά με τη συνολική επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος ως ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες (Πίνακας 2). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η απορρύθμιση miR-130 συσχετιζόταν με χειρότερη πρόγνωση και συμμετείχε στην εισβολή /μετάσταση του καρκίνου του παγκρέατος.

Η

MiR-130β Καταστολής κυτταρικού πολλαπλασιασμού και

σε

vitro

και

in vivo

Η

για να προσδιοριστούν οι επιπτώσεις του miR-130b σε καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος, που επιμολύνονται PANC-1 και κύτταρα ASPC-1 με 50 nM miR-130b μιμείται, αντι-miR-130b και οι αντίστοιχες NCs τους. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2Α, ΜΙΚ-130β μιμείται προκάλεσε 63,32 και 28,75 φορές αύξηση στην miR-130β έκφραση σε PANC-1 και ASPC-1 κύτταρα, αντίστοιχα. Εν τω μεταξύ, το αντι-miR-130β μείωσε την έκφραση miR-130β με 2,34 και 2,88 πτυχώσεις σε PANC-1 και κύτταρα ASPC-1, αντίστοιχα. Μετά την επιμόλυνση με miR-130β μιμείται, ο πολλαπλασιασμός αναστάλθηκε σημαντικά σε PANC-1 και κύτταρα ASPC-1 με 30,35 ± 2,90% και 22,03 ± 7,64%, αντίστοιχα (Ρ & lt? 0,01). Ωστόσο, αντι-miR-130β προώθησε την ανάπτυξη των PANC-1 και κύτταρα ASPC-1 με 15,23 ± 7,40% και 16,70 ± 3,56%, αντίστοιχα (Ρ & lt? 0,01? Εικ. 2Β).

(Α) Το επίπεδο έκφρασης του miR-130b ελέγχθηκε για 48 ώρες σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα επιμολυσμένα με miR-130β μιμείται (mIR-130β), αντι-miR-130Β και των αντίστοιχων NCs τους (50 ηΜ) με qRT-PCR. (Β) Η επίδραση της παροδική επιμόλυνση του miR-130b ή αντι-miR-130b (50 ηΜ) για 48 ώρες εξετάστηκε επί της ανάπτυξης PANC-1 και κύτταρα ASPC-1 με δοκιμασία ΜΤΤ. (Γ) Το miR-130β ανέστειλε την ογκογονικότητα σε γυμνούς ποντικούς μοντέλο ξενομοσχεύματος. Η LV-miR-130b ή LV-NC διαμολύνθηκε σε κύτταρα PANC-1 παρουσία του ιού σε πολλαπλότητα μόλυνσης (ΜΟΙ) 20. Τα μολυσμένα κύτταρα PANC-1 στην συνέχεια υποδορίως εντός γυμνών ποντικών. Οι καμπύλες ανάπτυξης όγκου και οι φωτογραφίες των αποκόπηκε όγκων στο 32 ημέρες μετά την εμφύτευση παρουσιάζονται ως ενδείκνυται. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD σε 10 ποντίκια. Τα επίπεδα έκφρασης miR-130b (D) αναλύθηκαν σε εκτομή όγκων με qRT-PCR και κανονικοποιήθηκαν προς εκείνη της ενδογενούς ελέγχου (U6 RNA). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως η μέση ± SD σε 10 ποντίκια. *. P & lt? 0,05? **. P & lt? 0,01 σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Για την περαιτέρω επιβεβαίωση των παραπάνω διαπιστώσεων,

in vivo

μοντέλο όγκου κατασκευάστηκε από την εμφύτευση των κυττάρων PANC-1 επιμολυσμένα με LV-miRNA. -130b ή αρνητικό μάρτυρα. Καθ ‘όλη τη ογκογόνο περίοδο, οι όγκοι από ΜΙΚ-130β επιμολυσμένα κύτταρα αναπτύχθηκαν σημαντικά πιο αργή (Εικ. 2C). Το miR-130β έκφραση σε ξενομοσχεύματος όγκοι της ομάδας LV-miR-130b ήταν προφανώς υψηλότερη από εκείνη της ομάδας ελέγχου (Σχ. 2D). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το miR-130b ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος και

in vitro

και

in vivo

.

MiR-130Β επαγόμενη απόπτωση και κυτταρικού κύκλου σύλληψης σε παγκρέατος τα καρκινικά κύτταρα

για να διερευνηθούν οι μηχανισμοί του miR-130b αναστολή επί του πολλαπλασιασμού παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων, αναλύσαμε την απόπτωση και κυτταρικό κύκλο στα επιμολυσμένα κύτταρα PANC-1 και ASPC-1 χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής. Οι miR-130b μιμείται αύξησε σημαντικά το ποσοστό απόπτωσης σε PANC-1 (3,57 ± 0,83%

vs.

11,17 ± 1,96%) και τα κύτταρα ASPC-1 (6.17 ± 1.66%

vs.

12,30 ± 1,30%) σε σύγκριση με εκείνη του miR-NC (Εικ. 3Α και 3Γ). Επιπλέον, οι μιμείται miR-130β μειωθεί σημαντικά το ποσοστό των G0 /G1 και G2 /M φάσεις. Επιπλέον, αύξησαν το ποσοστό της φάσης S σε PANC-1 (24.13 ± 4.10%

vs.

41.54 ± 3.80%) και τα κύτταρα ASPC-1 (23.52 ± 3.33%

vs.

47.66 ± 2,04%) σε σύγκριση με εκείνη των ελέγχων (εικ. 3Β και 3D).

(Α) PANC-1 και ASPC-1 κύτταρα επιμολύνθηκαν με miR-130Β ή miR-NC (50 ηΜ) για 48h και απόπτωση μετρήθηκε με χρώση αννεξίνης V και κυτταρομετρία ροής. (Β) Η PANC-1 και κύτταρα ASPC-1 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως αναφέρεται παραπάνω και η κατανομή του κυτταρικού κύκλου μετρήθηκε με χρώση ΡΙ και κυτταρομετρία ροής. Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των αποτελεσμάτων της miR-130b προκαλούμενη απόπτωση (C) και διακοπή του κυτταρικού κύκλου (D). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD των αποτελεσμάτων από 3 ανεξάρτητα πειράματα. **. P & lt? 0,01 σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

MiR-130β Σαθεροποιημένο το καρκίνο του παγκρέατος κυττάρων ικανότητα εισβολής

Η επίδραση του miR-130b στο παγκρέατος εισβολής καρκινικών κυττάρων ερευνήθηκε από Matrigel εισβολής. δοκιμασίες. Βρήκαμε ότι ο αριθμός των εισβάλλουν PANC-1 κύτταρα επιμολυσμένα με το miR-130β μιμείται (57 ± 5 κύτταρα /HP? HP: πεδίο μεγέθυνση υψηλής ισχύος) ήταν αξιοσημείωτα μικρότερος από τον αριθμό των ατόμων που επιμολύνθηκαν με miR-NC (122 ± 9 κύτταρα /HP? Σχ. 4Α). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν επίσης για την διεισδυτικότητα του ASPC-1 κύτταρα επιμολυσμένα με το miR-130β μιμείται (Εικ. 4Β). Αποκαλύφθηκε ότι ο miR-130b με τη μεσολάβηση του παγκρεατικού διεισδυτικότητα των καρκινικών κυττάρων.

(Α) Τα κύτταρα PANC-1 επιμολύνθηκαν με miR-130Β ή miR-NC (50 ηΜ) για 48 ώρες και η ικανότητα των κυττάρων εισβολή ήταν μετράται με προσδιορισμούς Matrigel εισβολή. (Β) Τα κύτταρα ASPC-1 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως παραπάνω και η ικανότητα των κυττάρων εισβολή μετρήθηκε με προσδιορισμούς Matrigel εισβολή. Ποσοτικοποίηση εκτελέστηκε μετρώντας την λεκιασμένη PANC-1 και ASPC-1 κύτταρα, που εισέβαλαν στον κάτω θάλαμο κάτω από ένα μικροσκόπιο φωτός. Όλα τα αποτελέσματα ήταν επαναλήψιμα σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. **. P & lt?. 0.01 σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

STAT3 θα μπορούσε να είναι ο άμεσος στόχος του miR-130b

Για να διερευνήσουν τις δυνατότητες στόχο μέσω του οποίου ο miR-130b αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος, πήραμε πλεονέκτημα της βιοπληροφορικής για την πρόβλεψη των υποθετικών στόχων miR-130b με τη χρήση TargetScan, Miranda και PicTar αλγορίθμων. Η ανάλυσή μας εντοπίζονται STAT3, ένα κλειδί ογκογονίδιο, ως ένας από τους πιθανούς στόχους για miR-130b. Περαιτέρω, οι αλληλουχίες στόχους του STAT3 3’UTR (άγριου τύπου, WT) ή η μεταλλαγμένη αλληλουχία (μεταλλαγμένου τύπου, MUT) κλωνοποιήθηκαν εντός του φορέα αναφοράς λουσιφεράσης, αντίστοιχα (Εικ. 5Α). Τα αποτελέσματα μας έδειξαν ότι ο miR-130β ελάττωσε σημαντικά την δραστικότητα λουσιφεράσης πυγολαμπίδας στο ρεπόρτερ με άγριου τύπου 3’UTR, αλλά η δραστηριότητα του μεταλλαγμένου 3’UTR φορέα παρέμεινε ανεπηρέαστη (Σχ. 5Β). Τα κύτταρα PANC-1 κύτταρα επιμολύνθηκαν με περαιτέρω miR-130Β και εξετάστηκαν για έκφραση STAT3 με qRT-PCR και κηλίδος western. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5C, η επιμόλυνση miR-130b οδήγησε σε μια προφανή μείωση της STAT3 mRNA και την έκφραση της πρωτεΐνης. Αντιθέτως, η επιμόλυνση του αντι-miR-130β οδήγησε σε προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης STAT3.

(Α) (άνω πάνελ) Το ανθρώπινο θραύσμα STAT3 3’UTR που περιέχει άγριου τύπου ή μεταλλαγμένο miR-130b- δεσμευτική ακολουθία. (Κάτω πίνακας) Το miR-130b και το site του miR-130 Β-δεσμευτική στην 3’UTR του STAT3. (Β) Δοκιμασία αναφοράς λουσιφεράσης με συνεπιμόλυνση του άγριου τύπου ή μεταλλαγμένο 3’UTR (100 ng) και miR-130β ή miR-NC (50 ηΜ) σε κύτταρα PANC-1. δραστικότητα λουσιφεράσης Firefly κάθε δείγματος κανονικοποιήθηκε έναντι δραστικότητα λουσιφεράσης Renilla. (Γ) Τα αποτελέσματα του miR-130b ή αντι-miR-130b για την έκφραση των ενδογενών STAT3. QRT-PCR (αριστερό πάνελ) και στύπωμα Western (δεξιά πάνελ) χρησιμοποιήθηκαν για την παρακολούθηση της έκφρασης σε κύτταρα STAT3 PANC-1 48 ώρες μετά την επιμόλυνση με miR-130Β ή αντι-miR-130b (50 ηΜ). Όλα τα δεδομένα από τρία ξεχωριστά πειράματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. *. P & lt? 0,05? **. P & lt?. 0.01

Η

STAT3 ρυθμίζεται αυξητικά στην παγκρέατος ιστοί και αντιστρόφως ανάλογη με το miR-130 Β Επίπεδα

Τα επίπεδα STAT3 mRNA μετρήθηκαν σε ιστούς PC και των παρακείμενων noncancerous ιστούς. Όπως φαίνεται στο Σχ. 6Α, το μέσο επίπεδο έκφρασης STAT3 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς PC σε σύγκριση με εκείνη των ιστών ΝΡ (Ρ & lt? 0,01). Μια σημαντική αντίστροφη συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ STAT3 και miR-130b εκφράσεις σε παγκρεατικά καρκινικούς ιστούς (συσχέτισης Spearman, το r = -0,4903? P & lt? 0,01) και των παρακείμενων noncancerous ιστών (r = -0,4026? P & lt? 0.001) (Σχήμα 6Β.).

(Α) STAT3 ανιχνεύθηκε από qRT-PCR σε 52 καρκίνου του παγκρέατος (PC) σε ιστούς και ταίριαζαν με τα γειτονικά noncancerous παγκρέατος ιστούς (NP). Η αφθονία STAT3 ομαλοποιήθηκε έναντι GAPDH. (Β) Η σχέση μεταξύ STAT3 και miR-130b έκφραση εξερευνήθηκε από συσχέτισης Spearman στις 52 ζεύγη ιστούς PC και των παρακείμενων ιστών NP. Όλα τα δεδομένα από τρία ξεχωριστά πειράματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. *. P & lt? 0,05? **. P & lt?. 0.01

Η

Συζήτηση

Τα προφίλ miRNA έχουν καθοριστεί για μια ποικιλία από συμπαγείς και αιματολογικές κακοήθειες [29], [30]. Τα τελευταία χρόνια, η ανακάλυψη των miRNAs έχει υποστεί σημαντικές πρόοδοι στην κατανόηση της βιολογίας του καρκίνου με την παροχή πρόσθετων μηχανισμών για τη γενετική απορρύθμιση. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τους μοριακούς μηχανισμούς με τους οποίους των miRNAs διαφοροποίησης στη διαδικασία της ογκογένεσης και της συμπεριφοράς των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων. Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι miR-130b ήταν συχνά ρυθμίζεται προς τα κάτω και στις δύο του παγκρέατος καρκινικούς ιστούς και κυτταρικές σειρές. Επίσης αποκαλύφθηκε ότι miR-130β κατέστειλε την παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα πολλαπλασιασμό τόσο

in vitro

και

in vivo

με επαγωγή της απόπτωσης και αναστολή του κυτταρικού κύκλου, καθώς και ανέστειλε διεισδυτικότητα

σε vitro

. Περαιτέρω, επίσης STAT3 χαρακτηρίστηκε ως ένα λειτουργικό στόχο για miR-130β.

έχουν miRNAs έχουν αναφερθεί ότι είναι σημαντικό στην καρκίνους του παγκρέατος, ενώ οι ενώσεις με την επιβίωση και τα κλινικά αποτελέσματα είναι σε μεγάλο βαθμό ασαφείς. Η ανάλυση επιβίωσης της παρούσας μελέτης αποκάλυψαν ότι το miR-130b απορρύθμιση συσχετίζεται με μικρότερο χρόνο επιβίωσης των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος. Εν τω μεταξύ, τα κλινικά δεδομένα έδειξαν ότι το miR-130b απορρύθμιση συσχετίστηκε σημαντικά με μεγάλο μέγεθος του όγκου, το προχωρημένο στάδιο TNM, λεμφική εισβολή και μακρινή μετάσταση. Επιπλέον, πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η χαμηλή miR-130b έκφρασης, προχωρημένο στάδιο TNM και μακρινή μετάσταση ήταν σημαντικοί προγνωστικοί παράγοντες για ένα φτωχό συνολικό ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος. Έτσι, προτείνουμε ότι οι παρατηρήσεις μας παρέχουν πληροφορίες για τη σημασία του miR-130b που θα μπορούσε να είναι ένα νέο βιοδείκτη για να προβλέψουμε την πρόγνωση και την εξέλιξη των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος.

Πρόσφατα, η διαφοροποίηση των miRNAs πιστεύεται ότι κατέχει σημαντική κλινικό δυναμικό στη θεραπεία του καρκίνου [31]. Yip et al. αποκάλυψε ότι η προς τα κάτω ρυθμισμένη miR-130b ήταν υψηλή συσχέτιση με την επιθετική φαινότυπο του θηλώδους καρκινώματος του θυρεοειδούς [18]. Yang et al. έδειξε ότι η προς τα κάτω ρύθμιση miR-130β προώθησε την ανάπτυξη ανθεκτικών σε πολλαπλά φάρμακα του καρκίνου των ωοθηκών μερικώς στοχεύοντας το 3′-UTR του CSF-1, ενώ miR-130β σίγηση μπορεί να διαμεσολαβείται από μεθυλίωση του DNA [32]. Ωστόσο, τα άλλα αποτελέσματα έδειξαν ότι το miR-130 Β ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω και έδρασε ως υποκινητή όγκου. Lai et al. απέδειξαν ότι miR-130β προφανώς υπερεκφράζεται σε καρκίνο του στομάχου και η υπερέκφραση αυξημένη βιωσιμότητα των κυττάρων και με μειωμένο κυτταρικό θάνατο [13]. Liu et al. έδειξε ότι το miR-130b ήταν υπερεκφράζεται σε ηπατικό καρκίνο των κυττάρων και μπορεί να είναι ένας βιολογικός δείκτης ορού με κλινικές τιμές για την ηπατική προσυμπτωματικό έλεγχο του καρκίνου των κυττάρων [33]. Από την επίδραση του miR-130b στον καρκίνο του παγκρέατος ήταν μακριά από την καθορισμένη, αυτή η μελέτη στοχεύει να προσδιορίσει τη λειτουργία των miR-130b στον καρκίνο του παγκρέατος. Η αποκατάσταση του miR-130b βρέθηκε να καταστέλλουν σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των PANC-1 και κύτταρα ASPC-1 με επαγωγή της απόπτωσης και κυτταρικού κύκλου ανακοπή σε φάση S. Επιπλέον, η ανάπτυξη των όγκων ξενομοσχεύματος αναστάλθηκε σημαντικά αφού επιμολυσμένα με LV-miR-130β. Αυτά τα αποτελέσματα να εννοηθεί ότι το miR-130b μπορεί να δρα ως αναστολέας στην πρόοδο του παγκρέατος καρκινογένεσης. Περαιτέρω, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ετερογένεια στην λειτουργία του miR-130b που εξαρτιόταν από τον τύπο του καρκίνου και κυτταρικό περιβάλλον.

εισβολή και η μετάσταση ήταν οι κύριες αιτίες της κακής πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι υπάρχει στενή συσχέτιση μεταξύ εισβολή /μετάσταση του καρκίνου του παγκρέατος και των miRNAs, όπως miR-20 και miR-146a [9], [34]. Ως εκ τούτου, ξετυλίγοντας το σύνθετο ρόλο των miRNAs στην διαδικασία της παγκρεατικής μετάστασης του καρκίνου μπορεί να παρέχει νέες ιδέες για ορισμένες θεραπευτικές συνέπειες. κλινικά αποτελέσματα μας έδειξαν ότι το miR-130b ήταν σημαντικά μειωμένη στους ασθενείς με εισβολή /μετάσταση. Επιπλέον, οι ασθενείς με υψηλότερη έκφραση του miR-130b ήταν λιγότερο συχνά συνδέονται με εισβολή /μετάσταση. Έχουμε περαιτέρω προσδιόρισε το ρόλο του miR-130b σε παγκρεατικά εισβολής των καρκινικών κυττάρων. Μετά την αποκατάσταση του miR-130b, το εισβολής των PANC-1 και ASPC-1 κύτταρα ήταν σαφώς αναστέλλεται. Αυτά τα αποτελέσματα εντατικά υπονοείται ότι miR-130b θα μπορούσε να εμπλέκεται στην εξέλιξη του παγκρέατος μετάσταση καρκίνου. Ως εκ τούτου, οι προσεγγίσεις για την εισαγωγή miR-130b σε καρκινικά κύτταρα μπορεί να είναι δυνητικά εφικτό για την κλινική θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος, ειδικά για εκείνους με χαμηλότερο miR-130b έκφραση σε ιστούς όγκων.

STAT3, μέλος της μεταγωγής σήματος και ενεργοποίηση της μεταγραφής (STAT) οικογένεια, έχει συχνά υπερεκφράζεται σε μία ευρεία ποικιλία ανθρώπινων όγκων συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του παγκρέατος [35] – [37]. STAT3 συμμετέχει στην έναρξη και ανάπτυξη των καρκίνων με την προώθηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, αναστέλλοντας κυτταρική απόπτωση, προαγωγή αγγειογένεσης, εισβολής και μετάστασης [38], [39]. Σε αυτή τη μελέτη, καταδείχθηκε μια σημαντική μοριακή σύνδεση μεταξύ miR-130b και STAT3. Η ανάλυση έδειξε ότι η βιοπληροφορική STAT3 θα μπορούσε να είναι ένας από τους δυνητικούς στόχους για miR-130β. Τα λουσιφεράσης δεδομένα δραστηριότητας έδειξαν ότι το miR-130b ήταν σε θέση να στοχεύσουν άμεσα την 3’UTR της STAT3. Η qRT-PCR και των αποτελεσμάτων κηλίδας Western έδειξε ότι η υπερέκφραση του miR-130b μειωτικά την έκφραση της STAT3 σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα τόσο από παρεμβαίνοντας και αποικοδόμησης mRNA, ενώ το αντι-miR-130β απορυθμίζεται την έκφραση STAT3. Τέλος, η αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ του miR-130b και έκφραση STAT3 στο PC και τους ιστούς ΝΡ επιβεβαιώθηκε επίσης ότι το miR-130b προς τα κάτω ρύθμιση οδήγησε σε STAT3 υπερέκφραση. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα κατέδειξαν ότι miR-130b θα μπορούσε να αναστείλει την ανάπτυξη των κυττάρων και εισβολή του καρκίνου του παγκρέατος με τη στόχευση STAT3.

Εν περιλήψει, παρούσα μελέτη μας έδειξε ότι η απορυθμισμένη έκφραση του miR-130b συσχετίστηκε με κακή πρόγνωση και επιθετικό φαινότυπο του καρκίνου του παγκρέατος. Αυτή η μελέτη επίσης να εννοηθεί ότι το miR-130b έπαιξε σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση του καρκίνου του παγκρέατος κακοήθη συμπεριφορά συμπεριλαμβανομένου του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και εισβολή από απ ‘ευθείας στόχευση STAT3.