Αφηρημένο

Ιστορικό

πνεύμονα αναδύεται ταχύτατα ως η κύρια αιτία θανάτου σε ασθενείς με καρκίνο κινέζικα. Οι αιτιώδεις παράγοντες για την κινεζική ανάπτυξη καρκίνου του πνεύμονα παραμένουν σε μεγάλο βαθμό ασαφής. Εδώ χρησιμοποιείται μια οθόνη shRNA βιβλιοθήκη που βασίζεται απώλειας λειτουργίας σε ένα γονιδίωμα-ευρεία και αμερόληπτο τρόπο να ανακρίνει πιθανούς υποψηφίους ογκοκατασταλτικό στην απαθανάτισε ανθρώπινου πνεύμονα επιθηλιακά κυτταρική σειρά BEAS-2Β.

Μέθοδοι /Αποτελέσματα

Soft δοκιμασίες άγαρ διεξήχθησαν για τη διαλογή κυττάρων BEAS-2Β που έχουν μολυνθεί με τον ρετροϊικό βιβλιοθήκη shRNA με αποκτώμενης χαρακτηριστικό αγκύρωσης ανάπτυξη ανεξάρτητη, μεγάλο ( Λαμβάνοντας υπόψη το γεγονός ότι υπάρχουν τρία μέλη Sentrin σε θηλαστικά με υψηλή ομολογία (π.χ. η ομολογία μεταξύ Sesn1B και Sesn2 είναι 71%), κατά πάσα πιθανότητα, Sesn2 μπορεί να διαδραματίσει έναν περιττό ρόλο σε ποντίκια και η έλλειψή του μπορεί να αντισταθμιστεί με τη στενή ομόλογο του, όπως Sesn1B ή Sesn3. Ωστόσο, σε κυτταρικό επίπεδο, η εκτέλεση της εν λόγω αποζημίωσης εξαρτάται ίσως από το γενετικό υπόβαθρο κάτω από μια συγκεκριμένη κυτταρική σειρά, η οποία μπορεί να διαφέρει εντελώς από την κατάσταση σε ολόκληρο τον οργανισμό, όπως ορισμένα στελέχη ποντικών.

Σε αντίθεση με προηγούμενο εύρημα ότι η ινσουλίνη που προκαλείται από την ενεργοποίηση της Akt απαιτεί την παρουσία των Sesn2 αποδεικνύεται από τη χρήση του νοκ-άουτ μοντέλο ποντικού Sesn2 [25], τα δεδομένα μας πρότεινε τη θεραπεία με ινσουλίνη ήταν ακόμη σε θέση να διεγείρουν την αυξημένη φωσφορυλίωση της Akt-S473 σε κύτταρα Α549 με Sesn2 γκρέμισε από την Τα siRNAs. Λαμβάνοντας υπόψη το γεγονός ότι η ΑΚΤ καταρράκτη μπορεί να ρυθμίζεται από πολλούς μεμβράνη πρωτεΐνες συμπεριλαμβανομένων των κινασών τυροσίνης υποδοχέα, ιντεγκρίνες, συζευγμένου με πρωτεΐνη Ο υποδοχέων [30], είναι πιθανό ότι η ενεργοποίηση της Akt σε ανθρώπινα κύτταρα είναι μερικώς ανεξάρτητη από την ανέπαφη Sesn2. Προς στήριξη των ευρημάτων μας, η υπερ-έκφραση της Sesn2 προκάλεσε μικρότερη φωσφορυλίωση επί Akt-pS473 σε κύτταρα MCF-7 [17], και η knockdown του AMPKα, ενός λειτουργικού εταίρος του Sestrins για την αναστολή της mTORC1, δεν επηρέασε την αύξηση του Akt φωσφορυλίωση διεγείρεται από FoxO1activation [29].

Οι γενετικές αλλοιώσεις συχνά συμβάλλει στην αδρανοποίηση των ογκοκατασταλτικών γονιδίων. Απώλεια της ετεροζυγωτίας (ΑΕ) σε Sesn1 (6q21) και Sesn2 (1p35) είναι επίσης συχνά παρατηρείται σε διάφορους ανθρώπινους καρκίνους [14,31]. Σε αντίθεση με το γονίδιο p53 κύριος της, βρήκαμε ο ρυθμός μετάλλαξης του γονιδίου Sesn2 στον ιστό του καρκίνου του πνεύμονα είναι πολύ χαμηλή. Μεταξύ δείγματα ιστών εκτομήθηκε από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα 77, μόνο ένας ανιχνεύθηκε με σημειακές μεταλλάξεις στο γονίδιο του Sesn2. Λαμβάνοντας υπόψη το γεγονός ότι το 60-80% του πνεύμονα ιστών καρκίνου λιμάνι ρ53 μεταλλάξεις, και Sesn1 και Sesn2 είναι άμεσοι στόχοι του με τη μεσολάβηση ρ53 μεταγραφής, ο ρόλος των Sesns στη γένεση του όγκου μπορεί να είναι μέρος ενός μηχανισμού που διέπουν την απομείωση της p53 στα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα .

Η κλινική σημασία του επιπέδου έκφρασης Sesn2 αξιολογήθηκε σε δείγματα ιστών καρκίνου του πνεύμονα εκτομή από 77 ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα. Αν και τα επίπεδα της πρωτεΐνης Sesn2 διαφέρουν πολύ στα εξετάστηκαν ιστούς των πνευμόνων, υπάρχει σαφής θετική συσχέτιση μεταξύ του χαμηλού Sesn2 επίπεδο έκφρασης και ένα χαμηλό ποσοστό επιβίωσης στις εξέτασε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα. Παραδόξως, σε αντίθεση με τις περισσότερες καταστολείς όγκων γενικά κάτω-ρυθμίζονται σε καρκινικούς ιστούς, έχουμε παρατηρήσει ένα σημαντικό μέρος της υψηλής έκφρασης του Sesn2 (20 από 77) στις εξετάστηκαν ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα, τα επίπεδά τους Sesn2 ακόμη είναι πολύ υψηλότερες από γειτονικά τους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων. Αρχικά, Sestrins έχουν εμπλακεί σε απόκριση προς οξειδωτικό στρες, αδρανοποίηση των Sestrins και τη συσσώρευση των δραστικών μορφών οξυγόνου (ROS) έχουν συνδεθεί με την καρκινογένεση [32]. Υπό ογκογόνο συνθήκες όπως η χρόνια φλεγμονή, η παρατεταμένη σηματοδότηση παράγοντα ανάπτυξης και τα υψηλά επίπεδα του οξειδωτικού στρες ίσως επιζήμια για την επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, ως αποτέλεσμα των αντιοξειδωτικών μηχανισμών, δεν είναι έκπληξη να παρατηρήσουμε πάνω ρυθμισμένα Sestrins σε ορισμένα μέρη του Mu76F1:5’-ATGTCCTCTGGGCGAGCAGACAACCTGGCAGTG-3’

Mu76R1:5’-CACTGCCAGGTTGTCTGCTCGCCCAGAGGACAT-3’

Mu103F2: