Αφηρημένο

Ο καρκίνος του παγκρέατος (PC) είναι θανατηφόρα κακοήθεια με πολύ υψηλό ποσοστό θνησιμότητας. Απουσία ευαίσθητος και ειδικός δείκτης (ες) είναι ένας από τους σημαντικότερους παράγοντες για την κακή πρόγνωση των ασθενών PC. Σε πιλοτικές μελέτες που χρησιμοποιούν μικρό σύνολο των ασθενών, που εκκρίνεται πρωτεϊνών οξείας φάσης ουδετερόφιλων ζελατινάση συνδέεται λιποκαλίνη (NGAL) και ΤΟΡ-β μέλους της οικογένειας των μακροφάγων ανασταλτική κυτοκίνης-1 (MIC-1) προτείνονται ως πιο δυναμικό βιοδείκτες αυξημένα ειδικά στο αίμα των ασθενών PC . Ωστόσο, οι επιδόσεις τους ως διαγνωστικοί δείκτες για PC, ιδιαίτερα σε ασθενείς προ της θεραπείας, παραμένει άγνωστη. Προκειμένου να αξιολογηθεί η διαγνωστική αποτελεσματικότητα της NGAL και MIC-1, τα επίπεδα τους μετρήθηκαν σε δείγματα πλάσματος από ασθενείς με ασθενείς προ-κατεργασία PC (n = 91) και σε σύγκριση με αυτές των υγιών μαρτύρων (HC) άτομα (n = 24 ) και ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα (CP, n = 23). Η διαγνωστική απόδοση αυτών των δύο πρωτεϊνών περαιτέρω σε σύγκριση με εκείνη του CA19-9, ένας δείκτης όγκου που χρησιμοποιείται συνήθως για να ακολουθήσει την εξέλιξη PC. Τα επίπεδα και των τριών βιοδεικτών ήταν σημαντικά υψηλότερα σε σύγκριση με το PC HCs. Η μέση τιμή (± τυπική απόκλιση, SD) NGAL πλάσματος, CA19-9 και MIC-1 επίπεδα σε ασθενείς PC ήταν 111.1 ng /mL (2.2), 219,2 U /mL (7.8) και 4,5 ng /mL (4.1), αντίστοιχα. Κατά τη σύγκριση χειρουργήσιμη PC σε υγιείς ασθενείς, οι τρεις βιοδείκτες βρέθηκαν να έχουν συγκρίσιμες ευαισθησίες (μεταξύ 64% -81%), αλλά CA19-9 και NGAL είχαν υψηλότερη ειδικότητα (92% και 88%, αντίστοιχα). Για τη διάκριση χειρουργήσιμη PC από ασθενείς CP, CA19-9 και MIC-1 ήταν πιο συγκεκριμένες (74% και 78% αντίστοιχα). CA19-9 στο βέλτιστο αποκοπής του 54,1 U /ml είναι ιδιαίτερα εξειδικευμένος στη διαφοροποίηση χειρουργήσιμη (στάδιο 1/2) ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος από τους ελέγχους σε σύγκριση με την κλινική αποκοπής της (37,1 U /ml). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η προσθήκη MIC-1 έως CA19-9 βελτίωσε σημαντικά την ικανότητα να διακρίνουν χειρουργήσιμη περιπτώσεις PC από CP (p = 0.029). Συνολικά, MIC-1 σε συνδυασμό με CA19-9 βελτίωσε τη διαγνωστική ακρίβεια της διαφοροποίησης PC από CP και HCs

Παράθεση:. Kaur S, Chakraborty S, Baine MJ, Mallya Κ, Smith LM, Sasson A, et al. (2013) Δυναμικά της NGAL πλάσματος και MIC-1 ως βιοδεικτών (-ες) στην Διάγνωση του Lethal καρκίνου του παγκρέατος. PLoS ONE 8 (2): e55171. doi: 10.1371 /journal.pone.0055171

Επιμέλεια: Hana Algul, Τεχνικό Πανεπιστήμιο του Μονάχου, Γερμανία

Ελήφθη: 2 Αύγ, 2012? Αποδεκτές: 19 Δεκεμβρίου, 2012? Δημοσιεύθηκε: 1 του Φεβρουαρίου του 2013

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. SKB, SC, SK, KM, MJB, MJ και ARS υποστηρίζονται, εν μέρει, από τις επιχορηγήσεις από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας ( RO1 CA78590, UO1 CA111294, RO1 CA131944, RO1 CA133774, RO1 CA 138.791 και Ρ50 CA127297). SG υποστηρίζεται από επιχορηγήσεις από MDACC McNair Ιδρύματος Βραβείο Scholar και το βραβείο Cyrus Μελετητή. Οι συγγραφείς δεν έχουν άλλες σχετικές συνεργασίες ή χρηματοδοτική συμμετοχή με οποιαδήποτε οργάνωση ή οντότητα με ένα οικονομικό συμφέρον ή οικονομική σύγκρουση με το αντικείμενο ή τα υλικά που συζητήθηκαν στο χειρόγραφο εκτός από εκείνες που αποκαλύπτονται. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Καμία πρόσθετη εξωτερική χρηματοδότηση ελήφθη για τη μελέτη αυτή

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Συν-συγγραφέας SKB είναι μια Συντακτική μέλος του Διοικητικού Συμβουλίου PLoS ONE. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Παρά τις δεκαετίες έρευνας, η πρόγνωση για τον καρκίνο του παγκρέατος (PC) παραμένει ζοφερή, με ένα συνολικό ποσοστό πενταετούς επιβίωσης μόνο περίπου 5% [1]. Μια σημαντική συμβολή στην κακή πρόγνωση του υπολογιστή είναι το γεγονός ότι ο καρκίνος παραμένει συχνά άγνωστα μέχρι προχωρημένο στάδιο. Διαθέσιμες τεχνικές για τη διάγνωση του PC παρουσιάζουν αρκετές δυσκολίες κυρίως επεμβατική φύση τους, την ανάγκη για εξειδικευμένη εκπαίδευση, προκαταλήψεις του παρατηρητή και το υψηλό κόστος για το σύστημα υγειονομικής περίθαλψης. Περαιτέρω, έχει αποδειχθεί μέσω πειραμάτων σε ζωικά μοντέλα που μοριακές τροποποιήσεις προηγούνται της εμφάνισης των αλλαγών σε παγκρεατικά αρχιτεκτονική (που ανιχνεύεται με τεχνικές απεικόνισης) [2]. Ως εκ τούτου, έχει υπάρξει μια αυξανόμενη έμφαση στην αναγνώριση των μοριακών δεικτών που μπορεί να εντοπίσει τον υπολογιστή σε ένα πρώιμο και πιθανώς χειρουργήσιμη στάδιο. Σωματικά υγρά, όπως αίμα, ούρα, χολή και παγκρεατικό χυμό αντιπροσωπεύουν μια πολλά υποσχόμενη πηγή δυνητικών βιολογικών δεικτών. Επί του παρόντος, η μόνη βιοδεικτών που είναι εγκεκριμένο για χρήση σε PC είναι CA19-9 η οποία συνιστάται να ακολουθήσει την εξέλιξη της PC, αλλά όχι για διαγνωστική χρήση. Έχουμε αναφέρει προηγουμένως ότι η ζελατινάση των ουδετερόφιλων σχετίζεται λιποκαλίνη (NGAL), μια γλυκοπρωτεΐνη 24 kDa, διαφορικά ρυθμίζεται αυξητικά κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του PC. Περαιτέρω, σε ένα μικρό σύνολο δειγμάτων δείξαμε ότι τα επίπεδα NGAL πλάσματος ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς PC σύγκριση με τους υγιείς [3] ελέγχους. Πρόσφατα, El-Mesallamy et al. παρατηρήθηκε σημαντική αύξηση των επιπέδων NGAL σε ασθενείς PC με προϋπάρχουσα διαβήτη (142 ng /ml) σε σύγκριση με διαβητικούς ασθενείς (66,7 ng /ml) και μη διαβητικά υγιείς ελέγχους (37.8 ng /ml). Με ευαισθησία και ειδικότητα 75% και 87% στη διαφοροποίηση PC από τις περιπτώσεις μη-PC NGAL ήρθε ως πιθανές αδιποκίνης [4]. Μακροφάγων ανασταλτική κυτοκίνης (MIC-1), ένα μακρινό μέλος του παράγοντα β ανάπτυξης μετασχηματισμού (ΤΟΡ-β) οικογένεια των κυτοκινών, ταυτοποιήθηκε αρχικά ως ένα γονίδιο που εκφράζεται στο πλαίσιο της ενεργοποίησης μακροφάγων [5]. Σε προηγούμενη μελέτη, δείχθηκε ότι εκφράζεται διαφορικά σε ιστούς PC και αυξημένα στον ορό των ασθενών PC σε σύγκριση τόσο με τους υγιείς μάρτυρες και εκείνα με καλοήθη νεοπλάσματα του παγκρέατος [6]. Περαιτέρω, Ozkan et al., Παρατηρήθηκε σημαντικά αυξημένη έκφραση του MIC-1 σε περιπτώσεις PC σε σύγκριση με άλλες ασθένειες και pancreatobilary υγιείς μάρτυρες. Βρέθηκε να έχει παρόμοια ευαισθησία με εκείνον στον ΟΑ19.9 (81%) σε διαφοροποίηση PC από άλλες καλοήθεις ασθένειες [7]. Ορός MIC-1 βρέθηκε να έχει υψηλές επιδόσεις CA19-9 στο CA19-9, στη διαφοροποίηση των ασθενών με χειρουργήσιμο καρκίνο του παγκρέατος από τους ελέγχους [8], [9].

Στην παρούσα μελέτη, επιδιώξαμε να επεκτείνει τα πορίσματα από την πιλοτική μελέτη μας για τη διερεύνηση της διαγνωστικής χρησιμότητας της NGAL πλάσματος σε PC [3]. Δεδομένης της συμμετοχής των δύο MIC-1 και NGAL σε φλεγμονή και τη στενή σχέση μεταξύ της φλεγμονής, κυρίως της χρόνιας φύσης, και PC [3], προσθέσαμε MIC-1 στον πίνακα των πιθανών βιοδεικτών. CA19-9 πλάσμα χρησιμοποιήθηκε ως αναφορά για τη σύγκριση της απόδοσης των διαγνωστικών τόσο NGAL και MIC-1. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι τα επίπεδα και των δύο NGAL και MIC-1 στο πλάσμα ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με PC. Στην παρούσα μελέτη, MIC-1 βρέθηκε να είναι πολύ ειδικό διακριτικό ασθενείς με χειρουργικά χειρουργήσιμη PC (δηλαδή πρώιμο στάδιο 1/2) από τις περιπτώσεις CP. Βελτιωμένη διαγνωστική αποτελεσματικότητα του CA19-9 παρατηρήθηκε στη διαφοροποίηση στάδιο 1/2 ασθενείς PC από HCs σε ένα βέλτιστο αποκοπής & gt? 54,1 U /ml (74% ευαίσθητη και 92% ειδική) σε σύγκριση με την κλινική αποκοπής της (37,1 U /ml) (71% ευαίσθητη και 67% ειδικό). Τέλος, πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι ο συνδυασμός της MIC-1 στο πλάσμα και CA19-9 είναι σημαντικά ανώτερη από CA19-9 και μόνο στη διαφοροποίηση χειρουργήσιμη PC από CP (AUC = 0,85 έναντι 0,74, p = 0,029).

υλικά και Μέθοδοι

μελέτη

Αυτή η αναδρομική διπλή κέντρο μελέτης για δείκτες πλάσματος στον υπολογιστή εγκρίθηκε από το Institutional Review Boards (IRB) του Πανεπιστημίου της Νεμπράσκα Ιατρικό κέντρο (UNMC) (IRB αριθμός 209-00) και το Πανεπιστήμιο του Πίτσμπουργκ Medical Center (IRB αριθμός PRO07030072). Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς και τους ελέγχους πριν από την εγγραφή στη μελέτη. Τα κριτήρια ένταξης ήταν κάθε ενήλικα ασθενή (ηλικία ≥18 ετών) με ιστολογικά αποδεδειγμένη υπολογιστή που ότι έγινε δεκτός στο Πανεπιστήμιο του Πίτσμπουργκ κατά τη διάρκεια της περιόδου από το 2002 έως το 2009. Η χρόνια παγκρεατίτιδα (CP) ορίστηκε με βάση ευρήματα στην αξονική τομογραφία σάρωσης των αποτιτανώσεις, ανώμαλη pancreatogram ή εκκριματίνης δοκιμασία διέγερσης. Για τη μελέτη αυτή, 91 PC, 23 ασθενείς σε CP και 24 υγιείς μάρτυρες είχαν εγγραφεί. Baseline δημογραφικές πληροφορίες για όλες τις ομάδες λεπτομερώς στον Πίνακα 1.

Η

Για τους ασθενείς PC, ένα δείγμα χαρακτηρίστηκε ως «θεραπεία αφελείς» αν το δείγμα συντάχθηκε πριν από κάθε καρκίνο κατευθύνεται χειρουργική ή χημειοθεραπευτικών επέμβαση. Για διαγνωστικές αναλύσεις, χρησιμοποιήθηκαν δείγματα μόνο θεραπεία αφελής. σταδιοποίηση PC βασίστηκε σε ένα από τέσσερα κριτήρια: 1) παθολογικά στάσης μετά τη χειρουργική επέμβαση 2) ​​MRI /CT /υπερήχων στάσης αν αυτό ήταν το μόνο στάσης διαθέσιμο, 3) ενδοσκοπική στάσης εάν ο ασθενής δεν υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση ή 4) η βιοψία της μεταστατικής νόσου εάν δεν προηγούμενη στάσης ήταν διαθέσιμο. Βαθμός PC, θέση του όγκου, το στάδιο, το κάπνισμα, την ιστορία του σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2 και το οικογενειακό ιστορικό του υπολογιστή βασίστηκαν επανεξέταση των αρχείων του νοσοκομείου.

Προσδιορισμός των NGAL πλάσματος και MIC-1 από Sandwich ELISA

NGAL και MIC-1 επίπεδα στο πλάσμα μετρήθηκαν ποσοτικά με σάντουιτς ELISA σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή χρησιμοποιώντας το κιτ Duoset ELISA (R &? D Systems) για την ανθρώπινη NGAL και MIC-1 αντίστοιχα. Τα δείγματα πλάσματος αποθηκεύτηκαν στους -70 ° C αμέσως μετά την παραλαβή και κλασματοποιήθηκαν για να αποφευχθεί επαναλαμβανόμενων κύκλων απόψυξης κατάψυξης. Πρότυπες καμπύλες παράχθηκαν από NGAL και MIC-1 πρότυπα που παρέχονται με το κιτ και σειριακά (log

2) αραιωμένο από 4 ng /ml έως 15,6 pg /ml. Όλες οι μετρήσεις έγιναν εις τριπλούν και τα δείγματα με αναγνώσεις μεγαλύτερη από εκείνη του υψηλότερου δυνατού επιπέδου αραιώθηκαν κατάλληλα και η δοκιμασία επαναλήφθηκε. πλάκες ELISA αναγνώστηκαν στα 450 nm με απορρόφηση διόρθωση στα 540 nm. Τα δεδομένα που συλλέγονται αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το δΟΡΤΜΑΧ PRO λογισμικού (Molecular Devices Corp., Sunnyvale, CA).

CA19-9 Δοκιμασία Radioimmunoassay

CA 19-9 συγκέντρωση αντιγόνου προσδιορίσθηκε με μία ραδιοανοσοανάλυση στερεής φάσης (Centocor, Malvern, ΡΑ, USA), χρησιμοποιώντας την σύσταση του κατασκευαστή. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν και οι ποσότητες CA 19-9 εκφράστηκαν σε αυθαίρετες μονάδες (U /ml), όπου μία δραστηριότητα μονάδα αντιστοιχεί σε περίπου 0,8 ng καθαρισμένου αντιγονική πρωτεΐνη για CA 19-9 σε έναν ραδιοανοσοπροσδιορισμό στερεάς φάσης [10] .

στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας SAS έκδοση στατιστικών λογισμικού 9.2 (SAS Institute Inc, Cary, NC). Την ηλικία, το δείκτη μάζας σώματος (ΔΜΣ), τα επίπεδα της CA19-9, NGAL και MIC-1 στο πλάσμα αναλύθηκαν ως συνεχείς μεταβλητές, ενώ το φύλο, τη φυλή, το βαθμό του όγκου, το στάδιο του καρκίνου, και η χειρουργική κατάσταση θεωρήθηκαν ότι είναι κατηγορηματική. χαρακτηριστικά των ασθενών συγκρίθηκαν μεταξύ ασθενών PC, CP και ελέγχου χρησιμοποιώντας το μοντέλο ANOVA για τις συνεχείς μεταβλητές και δοκιμές chi-τετράγωνο ή ακριβές τεστ του Fisher, όπου ισχύει. Biomarkers αναλύθηκαν στο φυσικό λογαριθμική κλίμακα λόγω της λοξή φύση των δεδομένων. Βιοδείκτες συγκρίθηκαν μεταξύ των ομάδων με τη χρήση t-τεστ και τα μοντέλα ANOVA. Αν βρέθηκαν σημαντικές διαφορές στις συνολικές τιμές ρ από τα μοντέλα ANOVA τότε κατά ζεύγη συγκρίσεις έγιναν προσαρμογή για πολλαπλές συγκρίσεις με τη μέθοδο του Tukey.

λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία ROC (χαρακτηριστικό λειτουργίας λήπτη) καμπύλες, οι οποίες είναι χρησιμοποιείται για να περιγράψει την απόδοση των βιοδεικτών ως διαγνωστικές εξετάσεις που αποτιμώνται σε συνεχή κλίμακα. Οι καμπύλες ROC παρουσιάζονται με τη χρήση των βιοδεικτών για να προβλέψει τη διάγνωση της προ-επεξεργασία (δηλαδή χωρίς χειρουργική επέμβαση ή χημειοθεραπεία) PC από τους ελέγχους. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η χρησιμότητα ενός βιοδείκτη ως διαγνωστικό τεστ. αναλογία Αποδόσεις (OR) υπολογίστηκαν ως μέτρο της δύναμης της σύνδεσης μεταξύ ενός βιοδείκτη και την κατάσταση της νόσου υπό μελέτη. Για όλες τις μονοδιάστατες αναλύσεις, PC θεωρήθηκε η κατάσταση της νόσου, με CP ή υγιείς μάρτυρες θεωρείται η ομάδα ελέγχου. Πολλαπλές λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της απόδοσης των βιοδεικτών σε συνδυασμό ως παράγοντες πρόβλεψης της προ-επεξεργασμένα PC σύγκριση με τους ελέγχους. P-τιμές ≤0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

Αυξημένα επίπεδα της NGAL, MIC-1, και CA19-9 στο Παγκρέατος Καρκινοπαθών

Τα δείγματα πλάσματος από ένα συνολικά 138 άτομα αναλύθηκαν αποτελείται από 91 PC (66%), 23 CP (17%) και 24 υγιείς μάρτυρες (HC, 17%) άτομα. ασθενείς PC και CP ήταν σημαντικά μεγαλύτερα από HCs (p = 0,0005) και είχε ένα υψηλότερο ποσοστό των ανδρών (60% και 61% έναντι 18%, ρ = 0,001). Η πλειοψηφία των συμμετεχόντων στη μελέτη ήταν Καυκάσιους (92%, 91% και 91% των PC, CP και HC αντίστοιχα). Εξήντα δύο τοις εκατό των PC και το 25% των ασθενών ήταν HC ποτέ καπνιστές. Σχεδόν οι μισοί από τους ασθενείς PC είχαν χειρουργικά εξαιρέσιμων όγκων (51%). Η πλειοψηφία των όγκων (71%) βρίσκονταν στην κεφαλή του παγκρέατος και ήταν μέτρια έως χαμηλή διαφοροποίηση (89%). Δέκα τοις εκατό των ασθενών PC είχε οικογενειακό ιστορικό PC ενώ το 27% είχε ιστορικό διαβήτη τύπου 2 (Πίνακας 1). Αξιολόγηση της συσχέτισης της χολερυθρίνης στον ορό με το επίπεδο ΟΑ19.9 και στις δύο περιπτώσεις CP και το PC δεν αποκάλυψαν καμία συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων ΟΑ19.9 και χολερυθρίνης για PC (r = 0,179 p = 0,080) και περιπτώσεις CP (r = 0,459 p = 0,042). Για την παρούσα μελέτη, λόγω της ασύμμετρη κατανομή των επιπέδων βιοδεικτών, κάθε μέτρηση βιοδεικτών ήταν μετασχηματισμένα λογαριθμικά (σε φυσικό λογάριθμο της, στη βάση

e

= 2,7183) πριν από την σύγκριση των μέσων επιπέδων μεταξύ των τριών ομάδων ασθενείς. Για τους σκοπούς της παρουσίασης, τα δεδομένα έχουν αντίστροφη-log μετασχηματίζονται για να επιτρέψει την ενσωμάτωση των μονάδων. Η ενδο και ποσοστό μεταξύ δοκιμασία συντελεστή διακύμανσης (% CV) για NGAL και MIC-1 ήταν 4,1%, 14,3%, 5,9% και 16,1% αντίστοιχα. Λόγω της παρουσίας των υψηλών και χαμηλών προδιαγραφών ενσωματωμένη στο εμπορικό κιτ, αυτοί οι συντελεστές δεν προσδιορίστηκαν για CA19-9.

Η συγκέντρωση στο πλάσμα μέση τιμή (μετά από μετασχηματισμό log) της NGAL, MIC-1 και CA19-9 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ασθενείς PC (111.1 ng /mL, 4.5 ng /mL, και 219,2 U /mL) σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες (67.4 ng /mL (p = 0.01), 1.5 ng /mL (p = 0,003), και 31.5 U /mL (ρ = 0,001)). Επιπλέον, η συγκέντρωση του MIC-1 και CA19-9, αλλά όχι NGAL στον ορό, βρέθηκαν να είναι υψηλότερη στην ομάδα των ασθενών PC ό, τι σε ασθενείς CP (1,6 ng /mL (p = 0,003), 31,8 U /mL (ρ & lt? 0.001 ), και 111,1 ng /mL (P & gt?. 0.05), αντίστοιχα) (Πίνακας 2)

Η

NGAL επίπεδα ήταν σημαντικά υψηλότερα σε ασθενείς ηλικίας 60 ετών και άνω (p = 0,045). MIC-1 επίπεδα ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε όλο και καπνιστές σε σύγκριση με τους μη καπνιστές (p = 0,021). επίπεδα CA19-9 από την άλλη πλευρά ήταν σημαντικά αυξημένα σε γυναίκες ασθενείς με PC και σε εκείνες με ανεγχείρητο νόσο (στάδιο 3/4, ρ = 0.045 και 0.0047 αντίστοιχα) (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

διαγνωστική ακρίβεια της NGAL , CA19-9 και MIC-1

Είμαστε δίπλα προσπάθησε να διερευνήσει την ευαισθησία και την ειδικότητα των τριών βιοδεικτών για τη διάγνωση του PC. PC ασθενείς χωρίστηκαν είτε με βάση το στάδιο της νόσου ή την κατάσταση της θεραπείας. Ως δείγματα μετά τη θεραπεία δεν είναι διαγνωστικά σχετικές, μόνο θεραπεία αφελείς δείγματα που περιλαμβάνονται σε αυτές τις αναλύσεις. Προκειμένου να ελεγχθεί η διαγνωστική αποτελεσματικότητα της CA19-9, MIC-1 και NGAL, αυτοί οι δείκτες αξιολογήθηκαν σε προκαθορισμένα αποκοπής του ≥37 U /ml, ≥1.07 ng /ml, ≥106 ng /ml παρατηρήθηκαν σε προηγούμενες μελέτες [ ,,,0],3], [6]. Κατά τη διάρκεια αυτής της επικύρωσης, NGAL βρέθηκε να είναι 92% ευαίσθητη ενώ MIC-1 ήταν περισσότερο εξειδικευμένη (94%) όσον αφορά τη διάκριση πρώιμο στάδιο 1/2 ασθενείς από υγιείς μάρτυρες (Πίνακας 3). Ωστόσο, η συνολική επίδοση όλων των δεικτών ήταν αρκετά φτωχή. Περαιτέρω, αξιολογήσαμε διαγνωστική αποτελεσματικότητά τους στη βέλτιστη cut-off. Για CA19-9, εκτός από την κοινώς χρησιμοποιούνται τιμή αποκοπής του ≥37 U /ml, χρησιμοποιήσαμε επίσης τη βέλτιστη cut-off (55,1 U /ml) όπως προσδιορίζεται με ανάλυση καμπύλης ROC. Σε σύγκριση των δύο PC με HC και PC σε ασθενείς CP, η χρήση ενός υψηλότερου αποκοπής του CA19-9 οδήγησε σε μεγαλύτερη ειδικότητα με παρόμοια ευαισθησία στη διάκριση PC είτε από CP ή ΚΘ (Εικόνα 1) (Πίνακας 4). Για όλη την περαιτέρω ανάλυση, χρησιμοποιήσαμε CA19-9 στο βέλτιστο αποκοπής 55,1 U /ml του. Αξίζει να σημειωθεί ότι, CA19-9 στη βέλτιστη cut-off της ήταν 79% ευαισθησία και 92% ειδικά σε διακριτικό θεραπεία ασθενών αφελής PC από HCs. MIC-1 ήταν το πιο ευαίσθητο (81%) και CA19-9 το πιο συγκεκριμένο δείκτη (92%) να διακρίνουν τους ασθενείς χειρουργήσιμη PC (φάση 1/2) από HCs. Για τη διάκριση των ασθενών χειρουργήσιμη PC από ασθενείς CP, MIC-1 ήταν η πιο χαρακτηριστική (78%) δείκτη και ΝΟΑί ήταν η πιο χαρακτηριστική δείκτη (100%), στη διάκριση του σταδίου 3 και η ομάδα 4 PC από τις περιπτώσεις CP.

καμπύλη ROC αναλύσεις για την εκτίμηση της ικανότητας του CA19-9 να διαφοροποιούνται μορφή PC HC (πίνακας Α) και PC από CP (πίνακας Β) σε κλινικές περικοπή του off (37 U /ml) (κόκκινη γραμμή), και τη βέλτιστη cut-off (55,1 U /ml) (μπλε γραμμή). Σε αποκοπής 37 U /mL, CA19-9 διαφοροποιημένη θεραπεία ασθενών δεν είχαν λάβει προηγουμένως PC από υγιείς ελέγχους με ευαισθησία, ειδικότητα 83% και 67%, ενώ η ευαισθησία και ειδικότητα 79% και 92% παρατηρήθηκε στο 55,1 U /ml. Σε περίπτωση PC vs ασθενών CP, ευαισθησία και ειδικότητα 61% και 83% παρατηρήθηκαν σε κλινικές αποκοπής, ενώ στο βέλτιστο αποκοπής 62,2 U /ml ευαισθησία αυξήθηκε σε 79% με ειδικότητα 78%.

η

διαγνωστική ακρίβεια ενός συνδυασμού δύο ή τρεις δείκτες για PC σε σύγκριση με CA19-9 μόνος

CA19-9 είναι σήμερα η μόνη FDA ενέκρινε βιοδεικτών που χρησιμοποιείται για να βοηθήσει στην η διάγνωση και την παρακολούθηση της προόδου των ασθενών PC. Αφού εξέτασε τη διαγνωστική απόδοση των επιμέρους δεικτών, έχουμε δίπλα προσπάθησε να διερευνήσει κατά πόσον η προσθήκη είτε NGAL ή MIC-1 έως CA19-9 (ο χρυσός κανόνας) βελτίωσε την ικανότητα να διακρίνουν τις περιπτώσεις PC (χειρουργικά εξαιρέσιμων ή ανεγχείρητο) από CP ή HCs. Οι δοκιμές συνδυασμός προσδιορίστηκαν μέσω πολυπαραγοντικές αναλύσεις των επιμέρους δεικτών, και εκείνων που παρουσιάζουν στατιστικά σημαντικές διαφορές μεταξύ των αντίστοιχων ομάδων ασθενών που χρησιμοποιείται περαιτέρω για ανάλυση. Η προσθήκη της NGAL και MIC-1 βελτίωσε την περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC ± SE) από 0,8 (0,06) έως 0,85 (0,05) σε διακριτικά stage1 /2 PC από HCS (Πίνακας 5). Η προσθήκη της NGAL (με ή χωρίς MIC-1) είχαν σημαντική επίπτωση στην ικανότητα της CA19-9 να διακρίνει υπολογιστή (είτε χειρουργικά εξαιρέσιμων ή ανεγχείρητο) από HCs. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η προσθήκη MIC-1 έως CA19-9 βελτίωσε σημαντικά την ικανότητα να διακρίνουν χειρουργήσιμη περιπτώσεις PC από CP (AUC 0,74 με CA19-9 μόνο και 0,85 με τον συνδυασμό (CI 0,76 – 0,94) (Σχήμα 2) (Πίνακας 5) . Επιπλέον, η προσθήκη της NGAL βελτίωσε την AUC από 0,89 (0,05) έως 0,94 (0,03) σε διακριτικό στάδιο 3/4 PC από HCs.

η συνδυασμένη χρήση των MIC-1 με CA 19-9 βελτιωθεί σημαντικά η ευαισθησία και την ακρίβεια στη διαφοροποίηση χειρουργήσιμη PC από CP (AUC = 0.85 Vs 0,74, p = 0,029, CI 0,76 – 0,94) σε σύγκριση με CA19-9 μόνη της.

Η

Συζήτηση και Συμπεράσματα

Η διαχείριση των PC θα ωφεληθεί σε μεγάλο βαθμό από την έγκαιρη διάγνωση βιοδείκτη. Διάφοροι πιθανοί υποψήφιοι έχουν δοκιμαστεί αλλά καμία δεν έχει βρεθεί με συνέπεια ανώτερη CA19-9. Πρόσφατα, η ομάδα μας παρατηρείται

de novo

έκφραση NGAL (αρκτικόλεξο για ουδετερόφιλων ζελατινάση συνδέεται λιποκαλίνη), ένα 25 kDa που εκκρίνεται γλυκοπρωτεΐνη, σε PanIN-1s, οι πρώτες αλλοιώσεις προκαρκινικές προηγούμενες PC. Επιπλέον, σημειώσαμε σε ένα περιορισμένο σύνολο των δειγμάτων των ασθενών που ορού NGAL επίπεδα ήταν σημαντικά αυξημένα στο πλάσμα ασθενείς με ΠΣ και PC σε σύγκριση με υγιή άτομα (p = 0,035 και 0,004 αντίστοιχα) [3]. Koopman et al, είχε αναφερθεί σε προηγούμενη μελέτη ότι ένα άλλο μικρό κυτοκίνη MIC-1 (μακροφάγων ανασταλτική κυτοκίνης 1) θα μπορούσε να διακρίνει τους ασθενείς PC από HCs με ευαισθησία και ειδικότητα 94% και 90% αντίστοιχα [6]. Καθώς και οι δύο MIC-1 και NGAL είναι μικρά, που εκκρίνεται γλυκοπρωτεϊνών, υποθέσαμε ότι ένας συνδυασμός αυτών των δύο δεικτών θα μπορούσε διάκριση ασθενών PC από HCs και ασθενείς CP. Για να διερευνήσουν αυτή την υπόθεση, συγκρίναμε διαγνωστική ακρίβεια τους με εκείνη της CA19-9, την τρέχουσα χρυσό πρότυπο δείκτη για PC. Τα αποτελέσματα της μελέτης μας δείχνουν ότι η ΝΟΑί και MIC-1 μπορεί να είναι τουλάχιστον συγκρίσιμο με CA19-9 στη διαγνωστική ακρίβειά τους σε συγκεκριμένες καταστάσεις. Συγκεκριμένα, MIC-1 έχει ευαισθησία και ειδικότητα παρόμοια με CA19-9 (στη βέλτιστη αποκοπής του) σε διακριτικό θεραπεία ασθενών δεν είχαν λάβει προηγουμένως PC από ασθενείς CP (Πίνακας 4). Περαιτέρω, η προσθήκη του MIC-1 (με ή χωρίς NGAL) βελτίωσε την ικανότητα να διακρίνουν τα δύο χειρουργικά εξαιρέσιμων (στάδιο 1 ή 2, p = 0,029) και ανεγχείρητο (στάδιο 3 ή 4, p = 0,079) PC από ασθενείς CP (Πίνακας 5 )

NGAL και ποντικού ομολόγου του NGAL έχουν προταθεί ως συστατικά του έμφυτου ανοσοποιητικού συστήματος [11] – [13].. Σε προηγούμενες μελέτες μας, παρατηρήσαμε ότι η υπερέκφραση της NGAL σε κύτταρα PC αναστέλλουν εισβολή και τη μετάσταση και εμποδίζει την αγγειογένεση [14]. Η παρατήρηση ότι τα επίπεδα της NGAL είναι παρόμοια σε ασθενείς CP και PC (Πίνακας 2) υποδηλώνουν ότι η ΝΟΑί μπορεί να απελευθερωθεί ως τμήμα της χρόνιας φλεγμονώδους απόκρισης η οποία συνοδεύει τις δύο νόσους.

MIC-1 (που ονομάζεται επίσης ως GDF- 15 ή NAG-1) είναι ένα μέλος της οικογένειας ΤΟΡ-β που εντοπίστηκε για πρώτη φορά ως μία πρωτεΐνη που εκκρίνεται από μακροφάγα σε απόκριση σε ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος [15]. MIC-1 επίσης παρεκκλίνοντα εκφράζεται από διάφορες κακοήθειες (συμπεριλαμβανομένων PC) και έχει αναδειχθεί ως στόχος της ρ53 μεσολαβεί μεταγραφή (ρόλος του MIC-1 σε καρκίνο που επισκοπείται στο [15]). Διαφορική έκφραση του MIC-1 παρατηρήθηκε σε SAGE (σειριακή ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης) βιβλιοθηκών από έξι παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές σε σύγκριση με μη νεοπλαστικά ιστούς [16]. Koopman και οι συνεργάτες του είχαν αναφέρει νωρίτερα ότι MIC-1 ήταν σημαντικά καλύτερη από ό, τι CA19-9 σε διακρίσεις PC από ΚΘ (AUC είναι 0,99 και 0,78, p = 0,003), αλλά όχι από CP (AUC είναι 0,81 και 0,74 αντίστοιχα, p = 0,63) [ ,,,0],6]. Παρατήρησαν ότι το μέσο επίπεδο MIC-1 σε υγιείς ελέγχους, CP και PC ήταν 0,76 ng /ml, 2,36 ng /ml και 5,4 ng /ml αντιστοίχως. Περαιτέρω μελέτες τόνισε τη διαγνωστική αποτελεσματικότητα της MIC-1 ισοδύναμο με CA19-9 [6], [7]. Στη μελέτη μας, οι MIC-1 επίπεδα στο πλάσμα μέση σε αυτές τις ομάδες ασθενών ήταν 1,5 ng /ml, 1,6 ng /ml και 4,5 ng /ml (Πίνακας 2). Στο σύνολο του δείγματος μας, σε μια βέλτιστη αποκοπής & gt? 2.3 ng /ml, πλάσμα MIC-1 ήταν 62% ευαισθησία και 63% ειδικά στις διακρίσεις PC από HCs. Σε αυτό το cut-off, MIC-1 ήταν 78% ειδική και 62% ευαίσθητες στη διαφοροποίηση PC από ασθενείς CP. Είναι ενδιαφέρον ότι η συνδυασμένη χρήση του MIC-1 με CA 19-9 βελτίωσε σημαντικά την ευαισθησία και την ακρίβεια στη διαφοροποίηση χειρουργήσιμη PC (Στάδιο 1/2) ασθενείς από ασθενείς CP (AUC 0,85, ρ = 0,029) σε σύγκριση με CA19-9 μόνος (AUC 0,74), παρέχοντας μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση για τη διάγνωση PC σε ένα πρώιμο στάδιο. Η σημασία της MIC-1 ως βιολογικός δείκτης για το PC θα πρέπει να διερευνηθεί σε μεγαλύτερο κοόρτες ασθενών.

CA19-9 είναι ένα πολύ γνωστό μοριακό δείκτη στο PC. Βιοχημικά, είναι το σιαλυλιωμένο Lewis αντιγόνο που υπάρχει σε διάφορες γλυκοπρωτεΐνες. Συνολικά, έχει αναφερθεί ευαισθησία και ειδικότητα μεταξύ 70% -80% και 70% -90% αντίστοιχα [17], [18]. Ωστόσο, κύριο μειονέκτημα του είναι ότι μπορεί επίσης να είναι θετικός σε αρκετές καλοήθεις συνθήκες [1], [19]. Στη μελέτη μας, παρατηρήσαμε ότι CA19-9 στο χρησιμοποιούνται συνήθως για αποκοπής & gt? 37 U /ml ήταν 83% ευαισθησία και 67% ειδικά σε ασθενείς διακριτικό PC από HCs και 83% ευαίσθητη με 61% ειδικότητα στη διαφοροποίηση ασθενείς PC από CP. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι βέλτιστες cut-off για CA19-9 ως διαγνωστικός δείκτης (55 U /ml, 79% ευαίσθητη και 92% ειδική σε ασθενείς διακριτικό PC από HCs και 62.2 U /mL, 79% ευαίσθητη και 78% ειδική στη διαφοροποίηση PC ασθενών από CP) ήταν υψηλότερες από ό, τι το κοινό κλινικά απασχολούνται cut-off των 37 U /ml. Αυτές οι υψηλότερες cut-off, αν και αποδίδοντας παρόμοια ευαισθησίες, αύξησε την ειδικότητα του CA19-9 (Πίνακας 4). Η παρατήρηση αυτή υποδηλώνει ότι δεν υπάρχει ένα ενιαίο cut-off για CA19-9 (ή για εκείνο το θέμα κάθε άλλο βιοδείκτη) εφαρμόζεται σε όλες τις καταστάσεις. Επιπλέον Morris-άκαμπτο κ.ά., παρατήρησαν ότι τα αυξημένα επίπεδα του CA19-9 συσχετίζονται απευθείας με τον βαθμό απόφραξη των χοληφόρων (

r = 0,911

,

P

& lt? 0.001). Αλλά για κακοήθεις νόσους επίπεδα CA19-9 ήταν αυξημένα ανεξάρτητη της χολερυθρίνης (

r

= 0,117288,

P

= 0,603) [20]. Ομοίως, αξιολογήσαμε τη συσχέτιση της χολερυθρίνης στον ορό με το επίπεδο ΟΑ19.9 και στις δύο περιπτώσεις CP και PC. Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε συσχετισμός μεταξύ των επιπέδων ΟΑ19.9 και χολερυθρίνης για PC (r = 0,179 ρ = 0,080) και τις περιπτώσεις CP (r = 0,459 ρ = 0,042). Μεγαλύτερες μελέτες στο μέλλον θα έχει ως στόχο να αξιολογήσει τις επιπτώσεις του καθενός από αυτά τα cut-offs για τη διάκριση συγκεκριμένων ομάδων.

Ένας περιορισμός της παρούσας μελέτης είναι η έλλειψη πληροφοριών σχετικά με την προγνωστική σημασία της NGAL και MIC-1 στο PC. Αυξημένα επίπεδα NGAL έχουν αναφερθεί σε προηγούμενες μελέτες ότι συσχετίζεται με μειωμένη επιβίωση σε ωοθήκης [21] του μαστού [22] και γαστρικού καρκίνου [23] οι ασθενείς, ενώ τα επίπεδα MIC-1 δεν έδειξε κάποια συσχέτιση με την επιβίωση σε καρκίνο του οισοφάγου [24] αλλά, όταν αυξημένα στο εγκεφαλονωτιαίο υγρό, συνδέθηκε με βραχύτερη επιβίωση σε ασθενείς με γλοιοβλαστώματα [25]. Επιπλέον, η μελέτη συμμετείχαν 51% των ασθενών PC με χειρουργικά εξαιρέσιμων (Stage 1/2) του όγκου (όγκων σε πρώιμο στάδιο στάδιο), ένα σενάριο αρκετά διαφορετική από τις κλινικές. Έτσι διαγνωστική αποτελεσματικότητα αυτών των δεικτών μπορεί να ποικίλλει ανάλογα με το σετ πληθυσμό. Μελλοντικές μελέτες θα επιδιώξει να απαντήσει σε αυτήν την ερώτηση να οριοθετηθούν καλύτερα την κλινική εφαρμογή αυτών των βιοδεικτών στη διαχείριση του PC.

Η ισχύς της μελέτης μας είναι η αυστηρή σχεδιασμό και τις τεχνικές που χρησιμοποιούνται. Συγκεκριμένα, Koopman και οι συνεργάτες του είχαν χρησιμοποιηθεί ELISA για τη μέτρηση τόσο CA19-9 και MIC-1. Ωστόσο, κλινικώς, τα επίπεδα CA19-9 μετρώνται συνήθως με ραδιοανοσοδοκιμασία (RIA). Αρχικά, προσπαθήσαμε απασχολούν ELISA για τη μέτρηση CA19-9 για να προσπαθήσουμε και να κρατήσει τη μεθοδολογία μας ως παρόμοια με την προηγούμενη μελέτη του δυνατού. Ωστόσο, σημειώνεται ότι οι μετρήσεις με τη χρήση ELISA στερούνταν αναπαραγωγιμότητα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ως εκ τούτου, μπορούμε στη συνέχεια εκ νέου αναλύονται όλα τα δείγματα για CA19-9 επίπεδα με RIA. Έτσι, η μελέτη δεν ήταν μόνο μια ερευνητική μελέτη, αλλά χρησίμευσε επίσης για την επικύρωση προηγούμενων μελετών. Με βάση τις παρατηρήσεις μας, συμφωνούμε με απασχολούν την τεχνική RIA για να αναπαραχθεί μέτρηση της CA19-9.

Εν ολίγοις, έχουμε ερευνηθεί αν ποσοτική μέτρηση της NGAL, MIC-1 και CA19-9 θα μπορούσε να είναι χρήσιμη στην διάγνωση του PC. Παρατηρήσαμε ότι ενώ το επίπεδο των τριών βιοδεικτών ήταν σημαντικά αυξημένα σε PC σε σύγκριση με ΚΘ, μόνο CA19-9 και MIC-1 ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς CP σύγκριση με HCs. Συνδεθείτε μετατραπεί αξία της NGAL ήταν πιο συγκεκριμένο από ό, τι CA19-9 στη διάκριση στάδιο 3/4 ασθενείς PC από τις περιπτώσεις CP, ενώ εκείνη του MIC-1 ήταν περισσότερο ευαίσθητη (στάδιο 1/2 PC από HC) ή ειδική (στάδιο 1/2 vs CP ) από ό, τι CA19-9 σε μια υπο-ομάδα με ειδικό τρόπο. CA19-9 απέδωσαν καλύτερα σε ασθενείς CP διακριτικά μορφή PC ή HCs σε υψηλότερη τιμή αποκοπής από το που χρησιμοποιούνται συνήθως αποκοπής των 37 U /ml. Ένας συνδυασμός MIC-1 και CA19-9 ήταν καλύτερη από την τελευταία και μόνο στη διάκριση χειρουργήσιμη PC από ασθενείς CP ενώ η προσθήκη της NGAL βελτίωσε την ικανότητα του CA19-9 να διακρίνει στάδιο 3/4 περιπτώσεις PC από HCs.