Abstract

α-σολανίνη, μια στεροειδής γλυκοαλκαλοειδή στην πατάτα, βρέθηκε να έχει τον πολλαπλασιασμό ανασταλτικές και την απόπτωση αποτέλεσμα προαγωγής σε πολλαπλές καρκινικά κύτταρα, όπως ο κλώνος, του ήπατος, καρκίνο μελανώματος κύτταρα. Ωστόσο, η αντικαρκινική αποτελεσματικότητα του α-σολανίνη επί καρκίνο του παγκρέατος δεν έχει πλήρως αξιολογηθεί. Σε αυτή τη μελέτη, διερεύνησε αντι-καρκινογόνο δράση του α-σολανίνη έναντι ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος. Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε η αντι-καρκινογόνος δράση του α-σολανίνη έναντι ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος. In vitro, α-σολανίνη ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των PANC-1, sw1990, κύτταρα ΜΙΑ PaCa-2 σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, καθώς και η μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή με ατοξικό δόσεις. Η έκφραση του ΜΜΡ-2/9, εξωκυτταρικό επαγωγέα μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας (EMMPRIN), CD44, eNOS και της Ε-καδερίνης κατεστάλησαν με α-σολανίνη σε κύτταρα PANC-1. Επιπλέον, μειώθηκε σημαντικά ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) και την έκφραση του σωλήνα σχηματισμό αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων διέκρινε εξής α-σολανίνη θεραπεία. Κατέστειλε φωσφορυλίωση της Akt, mTOR και Stat3, και να ενισχύσει τη φωσφορυλίωση της β-κατενίνης βρέθηκε, μαζί με σημαντικά μειωμένη TRAN-πυρηνικά του NF-κΒ, β-κατενίνης και TCF-1. Μετά τη χορήγηση α-σολανίνη (6 μg /g για 2 εβδομάδες) στο μοντέλο ξενομοσχεύματος, ο όγκος του όγκου και του βάρους μειώθηκαν κατά 61% και 43% (p & lt? 0.05) αντίστοιχα, δείχνοντας μειωμένο MMP-2/9, PCNA και VEGF έκφραση. Συμπερασματικά, α-σολανίνη έδειξε ευεργετικά αποτελέσματα για τον καρκίνο του παγκρέατος in vitro και in vivo, η οποία μπορεί μέσω καταστέλλει τον πολλαπλασιασμό μονοπάτι, αγγειογένεση και μετάσταση

Παράθεση:. Lv C, Kong Η, Dong G, Liu L, Tong Κ, Sun H, et al. (2014) αντικαρκινική αποτελεσματικότητα του α-Σολανίνη κατά του καρκίνου του παγκρέατος In Vitro και Ιη Vivo. PLoS ONE 9 (2): e87868. doi: 10.1371 /journal.pone.0087868

Επιμέλεια: Yu-Jia Chang, Ταϊπέι Ιατρικής του Πανεπιστημίου, την Ταϊβάν

Ελήφθη: 2 Οκτωβρίου, 2013? Αποδεκτές: 26 Δεκεμβρίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 5 Φεβρουαρίου, 2014

Copyright: © 2014 Lv et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από την Κίνα Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών (Νο 81070372, Αρ 81370563), Zhejiang Provincial Πρόγραμμα για την καλλιέργεια υψηλού επιπέδου Καινοτόμες ταλέντα Υγείας και επαρχιακή διοίκηση της Παραδοσιακής Κινέζικης Ιατρικής της επαρχίας Zhejiang, Κίνα (NO. WKJ2012-2 -033, Νο 2011ZA072), μια περιοχή Έρευνας και Ανάπτυξης Πρόγραμμα Longwan District of Wenzhou, Zhejiang, Κίνα (Νο 2010YS5). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

παγκρεατικό καρκίνωμα είναι ένας από τους πιο επιθετική και θανατηφόρα καρκίνο λόγω της έλλειψης μιας πρώιμης διάγνωσης, της ανθεκτικότητας στα φάρμακα και την κακή πρόγνωση, και ως τέτοια είναι η τέταρτη κύρια αιτία θνησιμότητας καρκίνου παγκοσμίως [1], [ ,,,0],2]. Επί του παρόντος, η τυπική θεραπεία του παγκρεατικού καρκινώματος εξαρτάται από τη χειρουργική επέμβαση, ακτινοβολία και φάρμακα. Ωστόσο, μόνο το 25% των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος διαγιγνώσκονται με το χειρουργήσιμο μορφή αποδίδοντάς την εισβολή της νόσου [3]. Γεμσιταμπίνη, ένα πρότυπο θεραπεία πρώτης γραμμής του μεταστατικού καρκίνου του παγκρέατος σε επίπεδο προέδρων, χρησιμοποιείται ευρέως, αλλά εμφανίζει κακή θεραπευτική επίδραση για την απόκτηση χημειοαντίσταση και μια ποικιλία των ανεπιθύμητων ενεργειών [4]. Έτσι, αναζητώντας νέα αποτελεσματικά φάρμακα contraposing για την ενίσχυση της αντι-αγγειογενετική ικανότητα και συγκρατούν μετάσταση είναι απολύτως αναγκαίο για τον καρκίνο του παγκρέατος, τη στόχευση περισσότερα αγγεία και επιθετικοί όγκοι του.

Εκτός από τη διέγερση των καρκινικών κυττάρων απόπτωσης και νέκρωσης , η αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, η διήθηση και μετάσταση είναι πρωταρχικής σημασίας. μεταστάσεων όγκων είναι μια ιδιαίτερα συντονισμένη διαδικασία η οποία προωθείται από διάφορα πρωτεολυτικά ένζυμα που αποικοδομούν την εξωκυτταρική μήτρα (ECM) και βασικής μεμβράνης (ΒΜ). Οι μεταλλοπρωτεϊνάσες μήτρας (MMPs) πιστεύεται ότι κυριαρχεί συμμετάσχουν στην μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων, εισβολή ιστού και μετάσταση [5]. ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 παίζουν ρόλους κλειδιά στη διαδικασία της μετάστασης μεταξύ των MMPs. Η κυτταρική πρόσφυση μόριο Ε-καδερίνης, ρυθμίζει τον κυτταρικό πολικότητα, διαφοροποίηση, πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση μέσω της στενής σύνδεσης της με το δίκτυο του κυτταροσκελετού ακτίνης [6], δείχνει μια χαμηλότερη έκφραση σε καρκίνο του παγκρέατος σε σύγκριση με την κανονική παγκρεατικό ιστό [7]. Επιπλέον, Wnt /β-κατενίνης καταρράκτη σηματοδότησης ήταν σχετικές με τον καρκίνο και αγγειακό πολλαπλασιασμό, προδιαγραφές τύχη και τη μετάσταση των κυττάρων. Wnt συνδετήρας συνδέεται προς Frizzled υποδοχέα του για την αδρανοποίηση του συμπλόκου καταστροφή β-κατενίνης, οδηγώντας σε μη-φωσφορυλιωμένη συσσώρευση β-κατενίνης τόσο κυτταρόπλασμα και στον πυρήνα. Στο πυρήνα, β-κατενίνης σχηματίζει ένα ετεροδιμερές σύμπλοκο με την οικογένεια TCF /LEF πρωτεϊνών που δεσμεύονται με DNA και με τον τρόπο αυτό ενεργοποιεί τη μεταγραφή των γονιδίων στόχων Wnt, διακυβεύεται c-myc, survivin, cyclinD1, και ΜΜΡ [8]. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι η φωσφατιδυλινοσιτόλη-3-κινάση (ΡΙ3Κ) -Akt /στόχου της ραπαμυκίνης στα θηλαστικά (mTOR) μονοπάτι εμπλέκεται επίσης σε παγκρεατικά ενδοκρινή καρκινώματα (ΤΒΙ) ογκογένεσης και της εξέλιξης [9], [10], η επιβίωση των κυττάρων, κυτταρικής προσκόλλησης και μετάσταση [11], [12]. Μέσω στιχομυθία με Wnt, NF-κΒ και τα μονοπάτια ΜΑΡΚ, Akt /mTOR δραστηριότητα προάγει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, η αναστολή της μετάστασης και απόπτωση [13], [14]. Επιπλέον, οι συστατικώς ενεργοποιημένες πρωτεΐνες Stat βρεθεί σε πολλαπλούς όγκους [15], [16], [17], [18]. Επιπλέον, Wnt /β-κατενίνης και τα μονοπάτια /mTOR Akt ρυθμίζουν την έκφραση των ΜΜΡ από μεταγραφικούς παράγοντες, όπως ΝΡ-κΒ [19], [20]. Είναι γεγονός ότι τα ΝΡ-κΒ παίζει ένα ρόλο κλειδί στην εξάπλωση, η αναστολή της απόπτωσης και αγγειογένεσης του καρκίνου του παγκρέατος [21]. Έτσι, ο αποκλεισμός Wnt /β-κατενίνης και τα μονοπάτια /mTOR Akt καθώς stat και NF-κΒ παρέχει στους δυνητικούς στόχους για τον καρκίνο θεραπευτικές στρατηγικές.

α-Σολανίνη, ένα βιοδραστικό συστατικό από τα κύρια στεροειδή glycoalkaloids στις πατάτες είναι καλά μελετηθεί για τις επιπτώσεις της στην αντικαρκινικές ιδιότητες. Αρκετές αναφορές έχουν δείξει ότι α-Σολανίνη εκθέματα αναστολή της ανάπτυξης και επαγωγή απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα πολλαπλές [22], [23]. Τα στοιχεία δείχνουν επίσης α-σολανίνη κατέχουν αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις in vitro με τη μείωση της ιντερλευκίνης-2 και ιντερλευκίνη-8 παραγωγές [24]. Η αποτελεσματικότητα και οι συναφείς μοριακοί μηχανισμοί που οφείλεται σε α-σολανίνη κατά του καρκίνου του παγκρέατος δεν έχουν αξιολογηθεί ακόμα. Ως εκ τούτου, αξιολόγησε την αποτελεσματικότητα της α-σολανίνη χρησιμοποιώντας τον καρκίνο του παγκρέατος τόσο in vitro όσο και in vivo στην παρούσα μελέτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Σε αυτή τη μελέτη , τη φροντίδα των ζώων και τα πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με εγκεκριμένο πρωτόκολλο από την ηθική Επιθεώρηση των ζώων Πειραματικό του Κέντρου Εργαστήριο ζώων, Wenzhou Ιατρικό Κολέγιο (Αριθμός άδειας: wydw2013-0001). Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις έγινε υπό αναισθησία, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

1. Κυτταρική γραμμή και Αντιδραστήρια

α-σολανίνη, διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ, USA). κιτ δοκιμασίας Πρωτεΐνης λήφθηκε από την Bio-Rad Labs (Hercules, CA, USA). Dulbecco τροποποιημένο μέσο Eagle (DMEM) και αγοράστηκε από την Gibco /BRL (Gaithersburg, MD, USA). Matrigel ήταν από την BD Biosciences (Bedford, ΜΑ, USA). Σύνολο κυτίο εκχύλισης RNA και αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) kit ήταν από Viogene (Sunnyvale, CA, USA). Αντισώματα έναντι ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9, Ε-καδερίνης, TCF-1, STAT3 και φωσφορυλιωμένο STAT3 αγοράσθηκαν από τη Cell Signaling Technology (Danvers, ΜΑ, USA). Αντισώματα έναντι β-ακτίνης, VEGF, PCNA, β-κατενίνης, Akt, mTOR, φωσφορυλιωμένες πρωτεΐνες αγοράστηκαν από Abcam (Cambridge, ΜΑ, USA). PANC-1, sw1990, ΜΙΑ PaCa-2 και τα ανθρώπινα ομφαλικής φλέβας ενδοθηλιακά κύτταρα (HUVEC) ελήφθησαν από την ATCC (Manassas, VA, USA). Οι καρκίνος του παγκρέατος κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν σε ϋΜΕΜ με 10% FBS και επωάστηκαν σε ένα 5% CO

2 υγροποιημένο επωαστήρα στους 37 ° C, HUVECs καλλιεργήθηκαν σε μέσο Μ199 με 10% FBS. α-Σολανίνη τήχθηκε σε DMSO και αραιώνονται με μέσο καλλιέργειας (η τελική συγκέντρωση του DMSO ήταν μικρότερη από 0,1%).

2. Κυττάρων Η βιωσιμότητα Δοκιμασία Αποικίας και Δοκιμασία

σπορά 20000 κύτταρα κάθε κυτταρική σειρά καρκίνου σε κάθε φρεάτιο πλάκας 96 φρεατίων και αντικαθιστώντας το μέσο καλλιέργειας που περιείχε διάφορες συγκεντρώσεις α-σολανίνη (3,6,9,12 μg /μl) μετά από 24 ώρες. Συνεχίζοντας να αναπτυχθεί για 24 και 48 ώρες, στη συνέχεια το μέσο αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​μέσο συμπερίληψη του 10% CCK8 (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan). Μετά από 1-4 ώρες, τα υπερκείμενα μετρήθηκαν φασματοφωτομετρικά στα 450 nm.

Anchorage-ανεξάρτητη ανάπτυξη των κυττάρων αξιολογείται με διεξαγωγή δοκιμασίας αποικίας (GENMED SCIENTIFECS INC, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, 1.5 ml βάση άγαρ Matrix Layer διανέμονται σε κάθε φρεάτιο ενός 12 φρεατίων πλάκα (τα δείγματα δοκιμάστηκαν εις τριπλούν). Plate ψύχθηκε σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι στερεού. Στη συνέχεια, στρώμα άγαρος 1,5 ml ανάπτυξη που αποτελείται από 2500 κύτταρα προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Πλάκα ψύχεται σε θερμοκρασία δωματίου και πάλι μέχρι το στρώμα ανάπτυξη πάγωσε. Ένα περαιτέρω 500 μΐ μέσου καλλιέργειας που περιέχει διάφορες συγκεντρώσεις του α-σολανίνη προστέθηκαν στην κορυφή του στρώματος ανάπτυξης. Τα κύτταρα επωάζονται στους 37 ° C και 5% CO

2 για μετρήθηκαν 2 εβδομάδες και συνολική αποικίες.

3. Κυτταρική μετανάστευση και την εισβολή Αναλύσεις

Η μετανάστευση των κυττάρων μελετήθηκε με την εκτέλεση δοκιμασιών επούλωση των πληγών. 10000 κύτταρα κάθε παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικής γραμμής καλλιεργήθηκαν σε υψηλές μ-πιάτα 35-mm με ένθετα καλλιέργειας (Ibidi, Martinsried, Germany). Όταν τα κύτταρα αναπτύχθηκαν προς συρροή, τα ένθετα στη συνέχεια απομακρύνθηκαν με αποστειρωμένη λαβίδα για να δημιουργήσει ένα πεδίο πληγή περίπου 500 μm. Μετά την απομάκρυνση των κυτταρικών θραυσμάτων με PBS, τα κύτταρα εκτέθηκαν σε διάφορες συγκεντρώσεις α-σολανίνη για 24 ώρες. μετανάστευση των κυττάρων, θεωρήθηκαν από αντεστραμμένο μικροσκόπιο και φωτογραφήθηκαν (100 × μεγέθυνση). Η περιοχή του τραύματος κλιμακώθηκε με Image Pro Plus. Η επί τοις εκατό κλεισίματος του τραύματος υπολογίστηκε με την εξίσωση: Το κλείσιμο της πληγής% = [1- (περιοχή τραύματος μετά /περιοχή του τραύματος 24 ώρες μετά από 0 h) × 100%

προσδιορισμοί κυττάρων εισβολή εφαρμόστηκαν χρησιμοποιώντας θαλάμους Transwell 6,5 mm. εξοπλισμένο με 8.0 μm μέγεθος πόρων πολυανθρακικό μεμβράνες. Σε αυτές τις δοκιμασίες, οι άνω Champers πρώτα επικαλύπτονται με 50 μΙ Matrigel σε αραίωση 1:05, και επωάστηκαν στους 37 ° C για 2 ώρες. Μετά από θεραπεία με α-σολανίνη για 24 ώρες, τα κύτταρα χωρίς ορό (10,000 κύτταρα /φρεάτιο) μέσο ανάρτησης κάθε παγκρεατικού καρκίνου κυτταρική γραμμή φορτώθηκαν στην κορυφή θάλαμο του transwell. Τα χαμηλότερα θάλαμοι πληρώθηκαν με 500 μΙ ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% FBS. Μετά από επώαση στους 37 ° C για 6 ώρες, μη επεμβατική κύτταρα φυσικώς αποξέστηκαν από την μεμβράνη με τα μάκτρα βάμβακος. Τα επεμβατική κύτταρα χρωματίστηκαν με ϋΑΡΙ για 5 λεπτά και παρατηρήθηκαν με ένα μικροσκόπιο φθορισμού (Leica Microsystems, Wetzlar, Germany). Φθορίζοντα κύτταρα μετρήθηκαν με χρήση Image Pro Plus.

4. Ιη Vitro Δοκιμασία αγγειογένεση

Ανάλυση του σχηματισμού τριχοειδών διεξήχθη χρησιμοποιώντας προσδιορισμούς σχηματισμού σωλήνα (Ibidi, Martinsried, Germany) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, ένα 15-φρεατίων μ-πλακίδια επικαλύφθηκε με 10 μΙ Matrigel το οποίο αφέθηκε να στερεοποιηθεί στους 37 ° C. Για να αξιολογηθεί η επίδραση των α-σολανίνη, κύτταρα PANC-1 υποβλήθηκαν σε αγωγή με διάφορες συγκεντρώσεις α-σολανίνη για 24 ώρες, στη συνέχεια το προσαρμοσμένο μέσο συλλέχθηκαν. HUVEC τέθηκαν σε καλά μ-Slide και επωάστηκαν με ρυθμισμένο μέσο κυττάρων PANC-1 για 6 ώρες. Η γενιά των κινητών δικτύων φωτογραφήθηκαν και ποσοτικά αξιολογούνται από Image Pro Plus.

5. Ποσοτική πραγματικού χρόνου

Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης

Ολικό RNA εξήχθη από PANC-1 με αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Ambion, Carlsbad, California, USA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ολικό RNA (1 μg) κάθε δείγματος υποβλήθηκε σε ολιγο-άΤ RT με ReverTra Ace qPCR RT kit (Toyobo, Osaka, Japan). Realtime αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) εκτελέστηκε για μια ποσοτική ανάλυση του ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9, VEGF, EMMPRIN, Ε-καδερίνη και η έκφραση CD44 mRNA χρησιμοποιώντας SYBR Green PCR πραγματικού χρόνου Κύριο Μείγμα (Toyobo) σε Πραγματικό Χρόνο 7500 Σύστημα PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Οι συνθήκες PCR είχαν ως εξής: 95 ° C για 1 λεπτό, 40 κύκλους στους 95 ° C για 15 s και 60 ° C για 60 s. Οι αλληλουχίες εκκινητή για GAPDH, ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9, VEGF, ENOS, EMMPRIN, Ε-καδερίνη και CD44 συντέθηκαν από την Invitrogen και παρατίθενται στον Πίνακα 1. Η ανάλυση των ποσοτικών δεδομένων σε πραγματικό χρόνο PCR πραγματοποιήθηκε σε τιμές ΔCt.

6. Πρωτεΐνη Εκχύλιση και Ανάλυση Western Blot

PANC-1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε λύση σε ραδιοανοσοποσοτικού προσδιορισμού καθίζησης (RIPA) ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει πρωτεάση και αναστολείς φωσφατάσης (Roche, Βασιλεία, Ελβετία). Πυρηνική και κυτταροπλασματικές πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν με την πυρηνική και την κυτταροπλασματική Εκχύλιση Αντιδραστήρια (Beyotime, Jiangsu, Κίνα) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι πρωτεΐνες κλασματώθηκαν με δωδεκυλ θειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου ηλεκτροφόρηση και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη PVDF (Solarbio). Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% άπαχο ξηρό γάλα επωάστηκαν με σχετικών αντισωμάτων επί μία νύκτα στους 4 ° C. Στη συνέχεια, οι μεμβράνες πλύθηκαν τρεις φορές με TBST και επωάστηκαν με δευτερεύοντα αντισώματα για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από πλύση τρεις φορές με TBST, ζώνες-στόχους ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ECL (Advansta, Menlo Park, California, USA) και εκτέθηκαν σε φιλμ. Η πυκνότητα των ζωνών πρωτεΐνης μετρήθηκαν με Ποσότητα One.

7. Ανάλυση ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 Δραστηριότητες με ζυμογραφία ζελατίνης

Οι δραστηριότητες των ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 προσδιορίστηκαν με ζυμογραφία ζελατίνης. κύτταρα PANC-1 επωάστηκαν με μέσο χωρίς ορό με διάφορες συγκεντρώσεις α-σολανίνη για 24 ώρες. Το ρυθμισμένο μέσο στη συνέχεια συλλέχθηκε και συμπυκνώθηκε. Κάθε δείγμα (20 μg) αναμίχθηκε με ρυθμιστικό διάλυμα φόρτωσης και υποβλήθηκαν σε 10% SDS-πολυακρυλαμιδίου που περιείχε 0,1% ζελατίνη. Η ηλεκτροφόρηση πραγματοποιήθηκε στα 100 V για 1,5 ώρες στους 4 ° C. Τα πηκτώματα στη συνέχεια πλύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (2.5% Triton Χ-100, 50 mmol /L Tris-HCl, 5 mmol /L CaCl

2, ρΗ7. 6), ακολουθούμενη από επώαση στους 37 ° C σε ρυθμιστικό διάλυμα αντίδρασης (50 mmol /L Tris – HCl, 5 mmol /CaCl2, 0. 02% Brij-35, ρΗ 7,6). Μετά από 42 ώρες, τα πηκτώματα χρωματίστηκαν με Comassie μπλε (0,05% Comassie μπλε, 30% μεθανόλη, 10% οξικό οξύ) για 3 ώρες και αποχρωματίζονται με διάλυμα αποχρωματισμού (20% μεθανόλη, 10% οξικό οξύ, 70% ddH2O) έως ότου η σαφείς ζώνες έγιναν ορατές.

8. Ζώα και όγκοι

αθυμικών (ηυ /ηυ) αρσενικά γυμνά ποντίκια ελήφθησαν από το εργαστήριο Σαγκάη. Κέντρο ζώων Ερευνών (Σαγκάη, Κίνα) και στεγάζονται υπό κανονικές εργαστηριακές συνθήκες (συνθήκες pathogenfree με 12 ώρες φως /12 ώρες σκοτάδι χρονοδιάγραμμα). Για την παραγωγή όγκο ζώα, 5 × 10

6 κύτταρα PANC-1 εγχύθηκαν υποδορίως στα πλευρά των τεσσάρων εβδομάδων αθυμικά ηυ /ηυ αρσενικών ποντικών. Όταν οι όγκοι ήταν μετρήσιμοι, τα ποντίκια χωρίστηκαν σε δύο ομάδες (6 /ομάδα) με τυχαία σειρά. φροντίδα των ζώων και τα πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με εγκεκριμένο πρωτόκολλο από ζωικά πειραματικά Ηθικά Επιθεώρηση του Κέντρου Ζώων Εργαστηρίου, Wenzhou Ιατρικό Κολέγιο.

9. Μέθοδος θεραπείας και ο όγκος Ξενομοσχεύματα Μελέτη

Η ομάδα ελέγχου, στην οποία 1 μl /g (βάρος των ποντικών) DMSO εγχύθηκε μέσα στην κοιλιακή κοιλότητα του κάθε ποντικού? η ομάδα σολανίνη, στην οποία 1 μl /g (βάρος των ποντικών) σολανίνη εγχύθηκε με τον ίδιο τρόπο. Η συγκέντρωση του σολανίνη είναι 5 μg /μl. Σολανίνη είχε μια αξιοσημείωτη ασφάλεια στη δόση των 5 μg /g (βάρος των ποντικών), και δεν υπήρχαν κλινικές και ιστολογικές διαφορές μεταξύ της θεραπείας και των ομάδων ελέγχου [25]. Κάθε ομάδα υποβλήθηκε σε επεξεργασία με φάρμακο 1 φορά την ημέρα για δύο εβδομάδες. Το σωματικό βάρος των ποντικών και τα μεγέθη των όγκων τους μετρήθηκαν κάθε μέρα. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν 2 εβδομάδες μετά τη χορήγηση του φαρμάκου και οι όγκοι προσεκτικά διαχωρίστηκαν και ζυγίζονται. Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε από τον τύπο: 0,5236 L1 (L2)

2, όπου το L1 είναι μεγάλη διάμετρο, και το L2 είναι μικρή διάμετρο. Μέρος του όγκου χρησιμοποιήθηκε για την κηλίδα Western και αποθηκεύεται σε 4% παραφορμαλδεΰδη για ανοσοϊστοχημεία, και το υπόλοιπο καταψύχθηκε σε υγρό άζωτο.

10. Western Blot για ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 και ανοσοϊστοχημική χρώση για PCNA και VEGF

Η διαδικασία εκχύλισης πρωτεΐνης ξενομοσχεύματος όγκου και τη θεραπεία των διαδικασιών είναι η ίδια με εκείνη που αναφέρθηκε παραπάνω. Συνεχόμενα τμήματα 4-μm κόπηκαν από παραφίνη παραφίνη ιστούς του όγκου για ανοσοϊστοχημεία. Οι τομές αποκλείσθηκαν με ορό κατσίκας και ανοσοχρωματίστηκαν μετά αποπαραφινώσεως και επανυδάτωση. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με αραίωση 1/200 του πρωτογενούς αντισώματος έναντι PCNA ή VEGF για όλη τη νύχτα στους 4 ° C, που ακολουθείται από επώαση με δευτερογενή αντισώματα για 60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Οι πλάκες αναπτύχθηκαν με διαμινοβενζιδίνη και αντίθετα με αιματοξυλίνη. Ο δείκτης πολλαπλασιασμού (ανά 400 × μικροσκοπικό πεδίο) προσδιορίστηκε ως ο αριθμός των PCNA-θετικών κυττάρων /συνολικό αριθμό των κυττάρων × 100. Η ολοκληρωμένη οπτική πυκνότητα (IOD) αναλύθηκε για VEGF ποσοτικοποίηση. 6 τομείς επιλέχθηκαν τυχαία από κάθε τμήμα. Τα μέσα επίπεδα IOD μεταξύ δύο ομάδων στη συνέχεια συγκρίθηκαν. Εικόνα-Pro Plus 6.0 λογισμικό χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση.

11. Στατιστική Ανάλυση

Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με το λογισμικό SPSS17.0. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά εικόνων ή εκφράζονται ως μέσοι ± S.E.M. της κάθε ομάδας. Η διαφορά μεταξύ των ομάδων των κυττάρων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ANOVA, και ανεξάρτητη δοκιμή δείγματος Τ χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση μεταξύ των ομάδων in vivo. P & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

1.. α-σολανίνη επηρεάζουν τη βιωσιμότητα των κυττάρων και αναστέλλει Colony Σχηματισμός

Βρήκαμε ότι η επεξεργασία της α-σολανίνη (3,6,9 μg /μl) για 24 ώρες ή 48 ώρες δεν άλλαξε την βιωσιμότητα των PANC-1 , sw1990 και τα κύτταρα ΜΙΑ PaCa-2 σημαντικά (Εικ. 1Α). Η βιωσιμότητα των κυττάρων μειώθηκε σημαντικά μετά την αγωγή του α-σολανίνη στα 12 μg /μl. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι η κυτταροτοξικότητα των κυττάρων από κάθε κυτταρική σειρά δεν προκλήθηκαν από α-σολανίνη σε 3, 6, 9 μg /μl για 24 ώρες και 48 ώρες. Χρησιμοποιήσαμε μη τοξικές δόσεις α-σολανίνη για πειράματα in vitro.

(Α) Κύτταρα του κάθε κυτταρική σειρά καρκίνου υποβλήθηκαν σε θεραπεία με διάφορες συγκεντρώσεις α-σολανίνη για 24 ώρες και 48 ώρες. (Β) Φωτογραφίες από ανεξάρτητη από προσκόλληση κυτταρική ανάπτυξη του PANC-1 (100 χ μεγέθυνση). (Γ) ο αριθμός των αποικιών προσδιορίστηκαν ποσοτικά και τα δεδομένα υπολογίστηκαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει το μέσο ± S.E.M. (N = 3). ** Ρ & lt?. 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Για να φωτιστούν οι λειτουργίες του α-σολανίνη στην αγκύρωση ανάπτυξη ανεξάρτητη από παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, χρησιμοποιήσαμε μια δοκιμασία μαλακού άγαρ. Κύτταρα χωρίς α-σολανίνη αγωγή σχηματίζονται όλο και μεγαλύτερες αποικίες από κύτταρα επεξεργασμένα α-σολανίνη (Σχ. 1 Β, C), υποδεικνύοντας ότι η ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων ανεστάλη από α-σολανίνη με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο.

2. α-Σολανίνη Αναστέλλει την κυτταρική μετανάστευση και εισβολή

τραύματος δοκιμασία επούλωσης και φρεατίων δοκιμασία εισβολή έγινε για να παρατηρήσουμε την επίδραση της α-σολανίνη στο κελί maigratoin και την εισβολή. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι α-σολανίνη κατέστειλε τη μετανάστευση και την εισβολή των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 2).

Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις α-σολανίνη για 24 ώρες. (Α) Τα κύτταρα φωτογραφήθηκαν (100 × μεγέθυνση). (Β) Η περιοχή του τραύματος προσδιορίστηκαν ποσοτικά σε τέσσερα πεδία σε κάθε θεραπεία, και τα δεδομένα υπολογίστηκαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα. (C) Τα κύτταρα φωτογραφήθηκαν (100 × maginfication). (D) Τα εισέβαλαν κύτταρα ποσοτικοποιήθηκαν μετρώντας FO κύτταρα ϋΑΡΙ-χρωματισμένο. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει το μέσο ± S.E.M. (N = 3) * ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt?. 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

3.. α-Σολανίνη Σαθεροποιημένο Tube Σχηματισμός PANC-1 Induced ECs και έκφραση του VEGF

Βρήκαμε ότι ρυθμισμένα μέσα κυττάρων PANC-1 που προκαλείται από το σχηματισμό σωλήνα HUVEC, ενώ ρυθμισμένα μέσα από PANC-1 θεραπεία με α-Σολανίνη κατέστειλε σχηματισμός σωλήνα HUVEC με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (εικ. 3Α, 3Β). VEGF, ως αγγειογόνο παράγοντα, προάγει την αγγειογένεση. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν επίσης ότι α-Σολανίνη (3, 6 και 9 μg /μl) μειώθηκε αισθητά mRNA και πρωτεΐνης έκφραση του VEGF σε κύτταρα PANC-1 με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Σχ. 3C, 3D και 3Ε). Τα δεδομένα αποκάλυψαν ότι α-Σολανίνη αναστέλλει την αγγειογένεση σε περιορίζοντας την έκφραση του VEGF.

(Α) Αντιπροσωπευτικά μικρογραφήματα (100 Χ) του σωλήνα μετά την επεξεργασία του ρυθμισμένου μέσου για 6 ώρες. HUVECS απλώθηκαν πάνω στα φρεάτια έχουν προ-επενδυθεί Matrigel και καλλιεργήθηκαν σε ρυθμισμένο μέσο από PANC-1 κύτταρα κατεργασμένα με για 24 ώρες. (Β) Τα μήκη σωλήνα μετρήθηκαν με εικόνας-ProPlus 6.0. (Γ) Η έκφραση του mRNA του VEGF παρουσιάστηκε ως μέσο ± S.E.M. ανάλυση τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. (D) Western blot της έκφρασης του VEGF. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Ε) Ο ποσοτικός προσδιορισμός του αποτελέσματος κηλίδος Western εκτελέστηκε με υπολογισμό της αναλογίας της τιμής με την ομάδα ελέγχου. * P & lt? 0,05, ** p & lt?. 0.01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

4. α-Σολανίνη Ασκεί Έκφραση της μετάστασης Associated Molecule

Η έκφραση των γονιδίων που σχετίζονται με την εξέλιξη του καρκίνου και μετάσταση διεξήχθη με ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (Σχ. 4Α). Η ενεργοποίηση των MMPs είναι ένα κρίσιμο βήμα για την αποικοδόμηση ECM, η οποία επάγει κυτταρική εισβολή. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι α-Σολανίνη κατέστειλε την έκφραση του mRNA του ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9, ENOS, EMMPRIN και CD44 σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Πρωτεΐνη έκφραση του ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 επίσης κατέστειλε με δοσοεξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 4Β, 4D). δοκιμασία ζυμογραφία ζελατίνης έδειξε επίσης ότι η ΜΜΡ-9 και ΜΜΡ-2 δραστηριότητες μειώνεται σημαντικά κατά 6 και 9 μg /μl α-Σολανίνη (Σχ. 4Ε, 4F). Επιπλέον, α-Σολανίνη άναρχη την έκφραση της Ε-καδερίνης (Εικ. 4C, 4D), που μπορεί να αυξήσει την πρόσφυση μεταξύ των κυττάρων. Έτσι, α-Σολανίνη θα μπορούσε να αναστείλει την μετάσταση επηρεάζοντας την πρωτεολυτική ενεργοποίηση και κολλητική ικανότητα.

(Α) Η έκφραση του mRNA της MMP-2/9, EMMPRIN, CD44, ENOS και Ecadherin παρουσιάστηκε ως μέσοι όροι ± S.E.M. τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. (Β) Οι εκφράσεις του ΜΜΡ-2 και πρωτεΐνη ΜΜΡ-9 αναλύθηκαν με κηλίδα Western. (Γ) Οι εκφράσεις του Ecadherin πρωτεΐνης εκτελέστηκε με στύπωμα Western. (Δ) Ποσοτικοποίηση των αποτελεσμάτων κηλίδος Western διεξήχθησαν με υπολογισμό της αναλογίας της τιμής με την ομάδα ελέγχου. (Ε) η δραστικότητα της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 αναλύθηκαν με ζυμογραφία ζελατίνης. (F) Ποσοτικοποίηση των αποτελεσμάτων ζυμογραφία ζελατίνης διεξήχθησαν με υπολογισμό της αναλογίας της τιμής με την ομάδα ελέγχου. * Ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt? 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως μάρτυρας φόρτωσης.

Η

5. α-Σολανίνη Ρυθμιζόμενη Associated Σηματοδοσίας Πρωτεΐνες

Η έρευνα έδειξε ότι Wnt /β-κατενίνης, οι Akt /mTOR και JAK /STAT οδών που εμπλέκονται στην έκφραση των MMPs και προκαλώντας μετάσταση. α-Σολανίνη επαγόμενη την έκφραση της φωσφορυλίωσης του β-κατενίνης και ανέστειλε την φωσφορυλίωση της STAT3 σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο (εικ. 5). Τα δεδομένα έδειξαν επίσης ότι α-Σολανίνη μείωσε την φωσφορυλίωση της Akt και mTOR σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο (εικ. 6). Επιπλέον, α-Σολανίνη ρυθμισμένα προς τα κάτω το επίπεδο της β-κατενίνης και TCF-1 στον πυρήνα (Σχ. 7). Ετσι, α-Σολανίνη θα μπορούσε να καταστείλει κύτταρο εισβολή και έκφραση ΜΜΡ-2/9 εν μέρει μέσω αναστολής της Wnt /β-κατενίνης, Akt /mTOR και JAK /STAT μονοπάτια.

κύτταρα PANC-1 υποβλήθηκαν σε αγωγή με διάφορες δόσεις α-σολανίνη για 24 ώρες, ή 9 μg /μΙ α-σολανίνη για 6,12,18,24 h. Το επίπεδο φωσφορυλίωσης των β-κατενίνης (Α, Β), Stat3 (C, D) προσδιορίσθηκαν με στύπωση Western. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Ε, F, G, H) Ποσοτικοποίηση των αποτελεσμάτων κηλίδος Western διεξήχθησαν με υπολογισμό της αναλογίας της τιμής με την ομάδα ελέγχου. * Ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt?. 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

κύτταρα PANC-1 υποβλήθηκαν σε αγωγή με διάφορες δόσεις α-σολανίνη για 24 ώρες, ή 9 μg /μl του α- σολανίνη για 6,12,18,24 h. (A, C) Το επίπεδο φωσφορυλίωσης της Akt και mTOR προσδιορίσθηκαν με στύπωση Western. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Β, D) Ποσοτικοποίηση των αποτελεσμάτων κηλίδος Western διεξήχθησαν με υπολογισμό της αναλογίας της τιμής με την ομάδα ελέγχου. * Ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt?. 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

κύτταρα PANC-1 υποβλήθηκαν σε αγωγή με διάφορες δόσεις α-σολανίνη για 24 ώρες. (A, C) Το επίπεδο του ΝΡ-κΒ /p65, β-κατενίνης και TCF-1 στον πυρήνα προσδιορίσθηκαν με στύπωση Western. Laminb1 χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης πυρηνική πρωτείνη. (Β, D) Ποσοτικοποίηση των αποτελεσμάτων πυκνομετρική διεξήχθησαν με υπολογισμό της αναλογίας της τιμής με την ομάδα ελέγχου. * P & lt? 0,05, ** p & lt?. 0.01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

6. α-Σολανίνη Μειώθηκε η έκφραση του ΝΡ-κΒ /p65 στον πυρήνα του PANC-1 κύτταρα

Η σχετική πυρηνική επίπεδο του ΝΡ-κΒ /p65 σε κύτταρα PANC-1 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία κηλίδος Western. Βρήκαμε ότι η θεραπεία με α-Σολανίνη decreasd σημαντικά την έκφραση του ΝΡ-κΒ /p65 σε PANC-1 κύτταρα (Σχ. 7Α, 7Β). Συστατική ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ μπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αναστέλλουν την κυτταρική απόπτωση, και ρυθμίζουν την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με την αγγειογένεση. Ετσι α-Σολανίνη θα μπορούσε να ενισχύσει την αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης και του πολλαπλασιασμού και την προώθηση του παγκρέατος απόπτωση των καρκινικών κυττάρων με αναστολή της έκφρασης του NF-κΒ.

7. α-Σολανίνη Καταστέλλει in vivo ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων PANC-1 Ξενομοσχεύματα όγκου

Χορήγηση σολανίνη να γυμνών ποντικών ανέστειλε την ανάπτυξη ξενομοσχεύματος του PANC-1 όγκου (Σχ. 8). Στο τέλος 14 ημερών της μελέτης στο PANC-1 ξενομόσχευμα, σολανίνη μειωμένο όγκο όγκου /ποντίκι από 701,97 ± 157,86 χιλιοστά

3 στην ομάδα ελέγχου σε 273,54 ± 57,27 χιλιοστά

3, που αντιστοιχεί σε 61% (P & lt ? 0,05) μείωση στον όγκο του όγκου. Ομοίως, το βάρος του όγκου σε ομάδα που έλαβε αγωγή σολανίνη μειώθηκε επίσης από 250 ± 37.42 mg στην ομάδα ελέγχου σε 143,33 ± 26,29 mg, που αντιστοιχεί σε 43% (ρ & lt? 0,05) μείωση στο βάρος του όγκου. Παρατηρήσαμε υπήρξε μια μικρή πτώση στο σωματικό βάρος τόσο στην ομάδα ελέγχου και στην ομάδα που έλαβε αγωγή σολανίνη. Ο λόγος του ότι δεν ήταν σαφές ακόμη.

PANC-1 κύτταρα υποδόρια ένεση στα πλευρά των άτριχων ποντικών. Όταν οι όγκοι ήταν μετρήσιμοι, τα ποντίκια έλαβαν DMSO ή α-σολανίνη για 2 εβδομάδες. (Α) Ο όγκος του όγκου /ποντίκι ως συνάρτηση του χρόνου. (Β) Το ποντίκι από κάθε ομάδα παρακολουθήθηκε για το σωματικό βάρος μία φορά την ημέρα. Η μέση σωματικού βάρους /ποντίκι ως συνάρτηση του χρόνου. (Γ) Ο όγκος του όγκου /ποντικό και (Δ) βάρος /ποντίκι στο τέλος της μελέτης όγκου αναλύθηκαν. * P & lt?. 0.05, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

8. α-Σολανίνη Καταστέλλει μετάσταση, Cell πολλαπλασιασμός και η αγγειογένεση σε ξενομοσχεύματα Μοντέλο

MMP-2 και MMP-9 παίζουν σημαντικό ρόλο στη διαδικασία της μετάστασης μεταξύ των MMPs. Εξετάσαμε παγκρεατικού όγκου ξενομοσχεύματος με κηλίδα Western και βρέθηκε α-Σολανίνη μπορεί να μειώσει σημαντικά την έκφραση του ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 (Σχ. 9Α, 9Β). Ο πολλαπλασιασμός και η αγγειογένεση είναι οι δύο χρησιμοποιείται εκτενώς βιοδείκτες, που έχουν χρησιμοποιηθεί για τη μέτρηση της επιθετικότητας των συμπαγών όγκων. Ως εκ τούτου, οι όγκοι αναλύθηκαν για αντι-πολλαπλασιασμού και αντι-αγγειογένεσης των α-Σολανίνη με PCNA και χρώση VEGF μέσω ανοσοϊστοχημικές μεθόδους. Η χρώση PCNA και VEGF χρώση των όγκων έδειξε φτωχή ανοσοαντιδραστικότητα σε ομάδα που υπέστη αγωγή σολανίνη σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχ. 9Β, 9C). Η ποσοτικοποίηση έδειξε 78 ± 4% των κυττάρων PCNA-θετικών στην ομάδα ελέγχου έναντι 29 ± 3% σε ομάδα που υπέστη αγωγή σολανίνη αντιπροσωπεύοντας το 63% μείωση (ρ & lt? 0,01), και η μέση IOD της χρώσης VEGF εκτελούνται 70% μείωση (ρ & lt? 0,01) στην ομάδα που έλαβε αγωγή σολανίνη σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Η μελέτη αυτή επιβεβαίωσε in vivo αντικαρκινική μηχανισμό της αποτελεσματικότητας σολανίνη κατά την ανάπτυξη του όγκου PANC-1.

Όταν ήταν χωρισμένα ξενομοσχεύματα όγκου, τμήματα του όγκου χρησιμοποιήθηκαν για κηλίδος Western και ανοσοϊστοχημεία. (Α) Οι εκφράσεις του ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 πρωτεΐνης analyzede με στύπωμα Western. (B, C) Tumor TISSUS είχαν innunohistochemically αναλύθηκαν για PCNA-θετικών κυττάρων και την πυκνότητα χρώσης VEGF. Οι αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες IHC χρώση PCNA και VEGF δείχνονται στα 400 × μεγεθύνσεις. bar Κλίμακα: 50 μm. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SE. * P & lt? 0,05, ** p & lt?. 0.01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Συζήτηση

α-σολανίνη είναι ένα είδος των στεροειδών αλκαλοειδών που παράγονται από τα φυτά της οικογένειας sloanaceae . Υψηλή συγκέντρωση α-Σολανίνη μπορεί να δημιουργήσει κυτταροτοξικά αποτελέσματα τα οποία επάγουν ταχεία βλάβη του πλασματικής μεμβράνης προκαλεί την θανατηφόρα διαταραχή του μεταβολισμού [26]. Διάφορες μελέτες δείχνουν ότι α-Σολανίνη αναστέλλει την ανάπτυξη του εμβρύου πριν από την εμφύτευση [27], [28], τα φυσιολογικά κύτταρα ανθρώπινου ήπατος [22]. Επιπλέον, α-Σολανίνη έχει αποδειχθεί ότι μειώνουν κυτοκίνης και νιτρικό οξείδιο παραγωγές σε Con Α που προκαλείται από τα κύτταρα Jurkat και LPS-διεγερμένα μακροφάγα Raw [24], αναστέλλει Παράγοντα Νέκρωσης Ογκου-α (TNF-α) και ιντερλευκίνη (IL) -6 σε ποντικό περιτοναϊκούς μακροφάγους, λόγω της καταστολής της ρ38, ΙΝΚ και ERK1 /2 [29]. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι η α-Σολανίνη εκτελεί αποτελεσματικότητα κατά του όγκου, όπως συγκράτηση της πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυτταρικών γραμμών και επαγωγή απόπτωσης και μείωση της μετάλλαξης της ρ53 του γαστρικού καρκίνου κυτταρικών γραμμών [22], [23], [30]. Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μη-τοξική συγκέντρωση του α-Σολανίνη (3, 6 και 9 μg /μl) και βρήκαν ότι α-Σολανίνη αναστέλλει μετάσταση in vitro, όπως εισβολή, τη μετανάστευση και την αγγειογένεση, υποδεικνύοντας ότι η ανασταλτική επίδραση του α-Σολανίνη επί μετάσταση δεν ήταν από κυτταροτοξικά λειτουργία του. Αξιολογήσαμε πρώτα την αποτελεσματικότητα του α-Σολανίνη in vivo και βρέθηκε α-Σολανίνη μπορούν να αναστείλουν τον πολλαπλασιασμό, αγγειογένεση και μετάσταση σε ξενομοσχεύματος όγκου σε αθυμικούς γυμνούς ποντικούς.

Μετάσταση

Ο καρκίνος είναι μια πολύπλευρη διαδικασία η οποία γενετικά ασταθής καρκινικά κύτταρα αναπτύσσουν προσαρμογή και ecesis σε μικροπεριβάλλον των ιστών που είναι απομακρυσμένα από τον πρωτογενή όγκο [31], που αφορούν την απώλεια της κυτταρικής προσκόλλησης, αυξημένη μετανάστευση και την εισβολή, την κυκλοφορία μέσω των λεμφικών συστημάτων αγγειακού /και τη βλάστηση της αποικιακής όγκων σε απομακρυσμένες περιοχές [32], [33] . Υποβάθμιση της ECM και BM από πρωτεολυτικά ένζυμα και σύμφωνα εισβολή είναι απαραίτητη για τη μετάσταση [34]. MMPs είναι τα σημαντικά πρωτεολυτικά ένζυμα που υποβαθμίζουν την ECM και ΒΜ. Μεταξύ αυτών, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 είναι εντόνως εκφρασμένη σε καρκίνο του παγκρέατος [35]. Η αναστολή της παγκρεατικής μετάστασης των καρκινικών κυττάρων διαμεσολαβείται από ρύθμιση προς τα κάτω την έκφραση της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 [36], [37]. EMMPRIN, διεγείροντας περιογκική ινοβλάστες να παράγουν MMPs, που εκτελούνται με ιδιαίτερη υψηλή έκφραση σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα [38]. Παγκρέατος εισβολή των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση μπορεί να κατασταλεί μέσω της θεραπείας αντι-EMMPRIN [39]. CD44, μία διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη με δεσμευτικές περιοχές για το υαλουρονικό οξύ το οποίο είναι ζωτικής σημασίας συστατικό της ECM, εκφράζεται έντονα σε καρκίνο του παγκρέατος [40].