Αφηρημένο

Autophagy που σχετίζονται με το γονίδιο-5 (ATG-5) είναι ένα από τα βασικά ρυθμιστές της αυτοφαγικά κυτταρικό θάνατο. Έχει ευρέως ως προστατευτικό μοριακός μηχανισμός για τα καρκινικά κύτταρα κατά τη διάρκεια της χημειοθεραπείας. Στην παρούσα μελέτη, μελετήθηκε η μορφή έκφρασης του ATG-5 και πολυφαρμάκου αντοχή σχετιζόμενη πρωτεΐνη-1 (MRP-1) σε 135 γαστρικών καρκίνων (GC) ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με epirubicin, σισπλατίνη και 5-FU επικουρική χημειοθεραπεία (ECF ) μετά από χειρουργική εκτομή και να διερευνηθεί πιθανή κλινική σημασία τους. Βρήκαμε ότι τόσο ATG-5 (77.78%) και MRP-1 (79,26%) ήταν εντόνως εκφρασμένο σε ασθενείς GC. ATG-5 έκφρασης συσχετίστηκε σημαντικά με το βάθος της εισβολής τοίχο, τα στάδια TNM και μακρινή μετάσταση του GC (P & lt? 0.05), ενώ MRP-1 η έκφραση ήταν σημαντικά συνδεδεμένη με το μέγεθος του όγκου, το βάθος της εισβολής τοίχο, μετάσταση στους λεμφαδένες, τα στάδια ΤΝΜ και κατάσταση διαφοροποίησης (Ρ & lt? 0,05). ATG-5 έκφρασης συσχετίστηκε θετικά με MRP-1 (RP = 0,616, P & lt? 0,01). Αυξημένη έκφραση του ATG-5 και MPR-1 συσχετίστηκε σημαντικά με κακή συνολική επιβίωση (OS? P & lt? 0,01) και απαλλαγμένα από ασθένειες επιβίωση (DFS? P & lt? 0,01) από ομάδα GC μας. Επιπλέον, αποδείξαμε ότι ATG-5 είχε εμπλακεί σε ανθεκτικά κύτταρα GC, το οποίο ήταν κυρίως μέσω ρύθμισης autophagy φάρμακο. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι η υπερέκφραση του ATG-5, ένα σημαντικό μοριακό χαρακτηριστικό του προστατευτικού αυτοφαγία, συνδέεται με χημειοαντίσταση σε GC. Έκφραση του ATG-5 και MRP-1 μπορεί να είναι ανεξάρτητοι προγνωστικοί δείκτες για τη θεραπεία GC

Παράθεση:. Ge J, Chen Ζ, Huang J, Chen J, Yuan W, Ντενγκ Ζ, et al. (2014) Προς τα πάνω ρύθμιση Autophagy-σχετίζεται με το γονίδιο-5 (ΑΤΟ-5) συνδέεται με χημειοαντίσταση στην Ανθρώπινη γαστρικού καρκίνου. PLoS ONE 9 (10): e110293. doi: 10.1371 /journal.pone.0110293

Επιμέλεια: Pankaj Κ Singh, του Πανεπιστημίου της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: πέμπτης Αυγούστου 2014? Αποδεκτές: 18 του Σεπτέμβρη 2014? Δημοσιεύθηκε: 17 του Οκτώβρη του 2014

Copyright: © 2014 Ge et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Χουνάν, Κίνα (Νο 2012FJ6088). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Παρά τη σημαντική μείωση του ποσοστού επίπτωσης της σε πολλές ανεπτυγμένες χώρες, γαστρικό καρκίνο (GC) παραμένει η τέταρτη πιο συχνά διαγιγνώσκεται κακοήθεια, και η δεύτερη κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο που σχετίζονται με όλο τον κόσμο [1]. Κατά τις τελευταίες δεκαετίες, πρότυπο στρατηγικές πολυτροπικών θεραπεία μαζί με άλλες προτεινόμενες επιλογές (π.χ. D2 εκτομή και επικουρική χημειοθεραπεία) έχουν αποτύχει να θεραπεύσει ένα μεγάλο ποσοστό των ασθενών που πάσχουν από GC, ειδικά για εκείνους με προηγμένες και μεταστατικό ασθένειες, με χειρότερα ποσοστά επιβίωσης να δει πιθανώς λόγω της παρουσίας του χημειοαντίσταση τη διάρκεια της θεραπείας [2]. Ως εκ τούτου, ταυτοποίηση νέων μοριακών γεγονότων που διέπουν την ανάπτυξη αυτής της κακοήθειας και κακή πρόγνωση της, καθώς και την κατανόηση των μηχανισμών της χημειοαντίσταση GC απαιτούνται επειγόντως για την πιο αποτελεσματική κλινική παρέμβαση και την καλύτερη διαχείριση των ασθενών.

Υπό φυσιολογικές συνθήκες, αυτοφαγία είναι ένα λυσόσωμα που εξαρτάται από το σύστημα αυτο-εύπεπτος ο κύριος υπεύθυνος για την αφαίρεση και την ανακύκλωση των μακρόβιων πρωτεϊνών και κατεστραμμένα /παρωχημένες intracellularorganelles προκειμένου να διατηρηθεί η ομοιόσταση του κυττάρου [3]. Οι πρωτεΐνες και οργανίδια που προορίζονται για καταστροφή απομονωμένος εντός κενοτόπια «διπλής μεμβράνης» (αυτοφαγοσώματα), ακολουθούμενη από σύντηξη με λυσοσώματα για την κατασκευή συγκροτημάτων γνωστό ως αυτοφαγοσώματα, όπου τα περιεχόμενα αποικοδομούνται από υδρολάσες λυσοσωματική [4]. Έχει τεκμηριωθεί ότι autophagy μπορούσε να προκληθεί σε απόκριση προς πολλές δυσμενείς συνθήκες, συμπεριλαμβανομένων των θρεπτικών συστατικών στέρηση, το οξειδωτικό στρες ή ζημιές DNA και χρησιμεύει ως ένα προσαρμοστικό μηχανισμό κύτταρο, τελικά επιτρέποντας στα κύτταρα να επιβιώνουν και να πολλαπλασιάζονται, ενώ εκτεταμένες ή ανθεκτικές αυτοφαγία αποτελέσματα σε κυτταρικό θάνατο [ ,,,0],5]. Απομειώσεις σε φυσιολογικό ενεργοποίηση, τη συναρμολόγηση και τη λειτουργία του αυτοφαγικά οδού έχουν όλο και περισσότερο παρατηρούνται σε ευρεία ποικιλία ανθρώπινων καρκίνων, αν και ο ακριβής ρόλος που παίζεται από αυτοφαγία σε γένεση και την εξέλιξη του καρκίνου είναι ακόμα υπό διαμάχη. Ορισμένα στοιχεία ευνοούν την ιδέα ότι η αυτοφαγία καταστέλλει ογκογένεση, ενώ άλλα στοιχεία υποδηλώνουν ότι η αυτοφαγία είναι σε θέση να προκαλέσει την έναρξη του όγκου και προστατεύει τα καρκινικά κύτταρα από το να υποστούν απόπτωση [6]. Είναι ενδιαφέρον ότι, η αναστολή της αυτοφαγία βρέθηκε πρόσφατα για να ενισχύσει την δραστικότητα κατά του όγκου των διαφόρων κυτταροτοξικών παραγόντων. Li και συνεργάτες ανέφεραν ότι autophagy ενεργοποιήθηκε ως ένας προστατευτικός μηχανισμός ενάντια στις κυτταρικές επιδράσεις της 5-FU-θεραπεία και αναστολή autophagy με 3-μεθυλαδενίνη επαυξημένης 5-FU-επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου [7], [8]. Από την άλλη πλευρά, ορισμένοι αντικαρκινικά φάρμακα (π.χ. cetuximab και dasatinib) έχουν αποδειχθεί ότι επάγει αυτοφαγικά κυτταρικό θάνατο μέσω διαφορετικών μηχανισμών σε μερικά καρκινικά κύτταρα [9] – [13]. Ο μοριακός μηχανισμός με τον οποίο αυτοφαγία ρυθμίζει την επιβίωση ή τον θάνατο των νεοπλασματικών κυττάρων παραμένει σε μεγάλο βαθμό ασαφής μέχρι τώρα. Η οδός αυτοφαγία είναι ένα εξαιρετικά διαμορφωμένο δυναμική διαδικασία εκτελείται κατά κύριο λόγο από την αυτοφαγία που σχετίζονται με (ATG) οικογένεια γονιδίων, η οποία διέπεται από διάφορες βασικές κινάσες συμπεριλαμβανομένων mTOR, PI3K /Akt, ΑΜΡΚ και ΜΑΡΚ [14], [15]. ATG-5 είναι ένας κεντρικός ρυθμιστής είναι απαραίτητες για αυτοφαγία από την άποψη της συμμετοχής της στη autophagosome επιμήκυνση [16]. Επιβάλλεται η έκφραση του ATG-5 ευαισθητοποιημένα κύτταρα του όγκου σε αντικαρκινικά φαρμακευτική αγωγή και

in vitro

και

in vivo

? σε αντίθεση με siRNA μεσολάβηση αναστολή της ATG-5 οδήγησε σε μερική αντίσταση στη χημειοθεραπεία [17]

Η μετεγχειρητική επικουρική χημειοθεραπεία είναι σήμερα μια σημαντική θεραπεία για GC.? Ωστόσο, η συνολική αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας παραμένει φτωχή πιθανώς ως συνέπεια της παρουσίας της αντίστασης σε πολλαπλά φάρμακα (MDR) φαινότυπο. Σε αντίθεση με άλλες οντότητες του όγκου, η έκφραση των κλασικών MDR-μεσολάβηση μόρια όπως η γλουταθειόνη S-τρανσφεράση και το γονίδιο αντοχής πολυφαρμάκου 1 δεν είναι πολύ διαδεδομένη σε ιστούς GC, υποδηλώνοντας ότι μπορεί να υπάρχει ένα πολύπλοκο μηχανισμό για την ανάπτυξη MDR σε αυτή την κακοήθη νόσο [ ,,,0],18]. Ως μία από τις κλασικές μηχανισμών ανθεκτικών στα φάρμακα, πολυφαρμακευτική αντίσταση που σχετίζεται με πρωτεΐνη 1 (MRP1 /ABCC1) έχει βρεθεί ότι εκφράζεται έντονα σε GC και έτσι μπορεί να ασκήσει κεντρικούς ρόλους στη διαμεσολάβηση MDR σε GC [19], [20]. Ωστόσο, παραμένει άγνωστο αν MRP-1 έκφραση συνδέεται με την ATG-5 έκφρασης. Και επίσης, αν αυτοφαγία εμπλέκεται στην chemoresistence σε ασθενείς GC είναι ασαφής.

Στην παρούσα μελέτη, για πρώτη φορά χρησιμοποιήθηκε ανοσοϊστοχημεία για να διερευνήσει το προφίλ έκφρασης του ATG-5 και MRP1 σε ένα σύνολο 135 ασθενών που έλαβαν GC ECF (epirubicin, σισπλατίνη και 5-FU) επικουρική χημειοθεραπεία μετά από χειρουργική εκτομή. Οι συσχετίσεις μεταξύ ATG-5 και MRP-1 έκφρασης, καθώς και την έκφρασή τους με διάφορα κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά του GC και τα κλινικά αποτελέσματα αξιολογήθηκαν επίσης.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και δείγματα ιστού

Ένα σύνολο 135 ασθενών GC που αποτελείται από 91 άνδρες και 44 γυναίκες που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση στο Τμήμα γαστρεντερικού Χειρουργικής, Xiangya Νοσοκομείο, Κεντρική Νότια Πανεπιστήμιο (CSU), την Κίνα, μεταξύ 1ης Ιανουαρίου 2007 και 31ης του Δεκεμβρίου του 2008 είχαν εγγραφεί στον αυτή η μελέτη. Η μέση ηλικία του ομάδα ήταν 53,62 ± 9,73 χρόνια, με μια σειρά από 26 έως 72. Theprimary GC όγκου tissuesand συμφωνημένα μη-καρκινικές (NC) σε ιστούς που βρίσκεται τουλάχιστον 5 cm μακριά από τον πυρήνα του όγκου ελήφθησαν μετά από χειρουργική εκτομή και αμέσως επεξεργασία και να αποθηκεύονται μέχρι την περαιτέρω χρήση. Κανένας από τους ασθενείς είχαν προσληφθεί χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Η ιστοπαθολογική διάγνωση διεξήχθη προεγχειρητικά και επιβεβαιώθηκε από τη χειρουργική επέμβαση. Όλοι οι συμμετέχοντες με το στάδιο ΙΒ IV όγκους έλαβε ECF χημειοθεραπεία μετά τη χειρουργική επέμβαση (Δόση: epirubicin 50 mg /m

2 την ημέρα 1, σισπλατίνη 60 mg /m

2 την ημέρα 1 και συνεχή ενδοφλέβια έγχυση 5-FU 500 mg /m

2 /d για 4 ημέρες, επαναλαμβάνεται κάθε 3 εβδομάδες έως 24 εβδομάδες). Τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών αυτών παρατίθενται στον Πίνακα 1.

Η

Όλες οι περιπτώσεις σε αυτήν την μελέτη εξετάστηκαν και όλα τα δείγματα ιστοπαθολογικά επανεξεταστεί τον Οκτώβριο του 2012. Το βάθος της εισβολής τοίχο, περιφερειακών λεμφαδένων μετάσταση, και ιστολογική βαθμό επιβεβαιώθηκαν από την ίδια ομάδα δύο έμπειρους παθολόγους. Οι ασθενείς ταξινομήθηκαν με βάση την κατάσταση διαφοροποίηση των καρκινικών κυττάρων σε τρεις ιστολογική τάξεων: καλά, μέτρια και κακή. Βασίζεται σε ένα συνδυασμό της συμμετοχής του όγκου τοπική-περιφερειακή και την παρουσία μεταστάσεων, σε όλες τις περιπτώσεις οργανώθηκαν σύμφωνα με την ταξινόμηση ΤΝΜ του Κακοήθεις όγκοι (TNM) στάδιο ομαδοποίησης [21]. Για την ανάλυση της επιβίωσης, η ημερομηνία της λειτουργίας χρησιμοποιήθηκε για να αντιπροσωπεύει το σημείο έναρξης της επίσκεψης παρακολούθησης. Οι ασθενείς που πέθαναν από άλλες ασθένειες παρά GC ή άλλα απρόβλεπτα γεγονότα είχαν εξαιρεθεί από τη συλλογή υπόθεση. Η αιτία του θανάτου προσληφθεί σε αυτή τη μελέτη ήταν η επιδείνωση της GC. Η συνολική επιβίωση (OS) υπολογίστηκε ως περίοδος αρχίζει από την ημερομηνία της αρχικής χειρουργική επέμβαση για την ημερομηνία του θανάτου, ή από την ημερομηνία της τελευταίας συνέχειας ως το τελικό σημείο. Η ασθένεια ελεύθερη επιβίωση (DFS) ορίστηκε ως το χρονικό διάστημα από τη χειρουργική επέμβαση μέχρι την ημερομηνία της τοπικής υποτροπής ή μετάστασης πρώτο μακρινό όργανο. Ενημέρωσε γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή πριν από την επέμβαση και η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ερευνών Δεοντολογίας της Κεντρικής Νοτίου Πανεπιστημίου, Κίνα. Όλα τα δείγματα αντιμετωπίζονται και να καθίστανται ανώνυμα, σύμφωνα με τις ηθικές και νομικές κατευθυντήριες γραμμές.

Η ανοσοϊστοχημεία

Τα φρέσκα δείγματα μονιμοποιήθηκαν σε 10% ουδέτερο ρυθμιστικό διάλυμα φορμόλης και στη συνέχεια με ενσωματωμένο παραφίνη. Οι ιστοί εγκλεισμένοι σε παραφίνη κόπηκαν σε 4 μm και ακολούθως αποπαραφινώθηκαν με ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν για περαιτέρω H & amp? Ε ή χρώση υπεροξειδάσης ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας το προσαρμόσουμε το σύστημα ϋΑΚΟ. Εν συντομία, μετά από πρωτεολυτική πέψη και αποκλεισμό με ενδογενούς υπεροξειδάσης, διαφάνειες ιστού επωάστηκαν με τα πρωτογενή αντισώματα (ATG5: ab54033? MRP1: ab32574? Abcam Inc., Cambridge, UK) έναντι των αντίστοιχων πρωτεϊνών στόχων σε αραίωση 1:500 διάρκεια της νύχτας σε 4 ° C. Μετά την πλύση με PBS, υπεροξειδάση σημασμένο πολυμερές και υποστρώματος-χρωμογόνου στη συνέχεια χρησιμοποιούνται προκειμένου να απεικονίσει την immnohistochemical χρώση. Τέλος, οι τομές με αιματοξυλίνη, συγκάλυψη έκανε με μέσο στερέωσης, και εξετάστηκαν με μικροσκοπία φωτός. Όλες οι διαδικασίες διεξήχθησαν στο Τμήμα Παθολογίας, Xiangya Hospital, C.S.U. Διαφάνειες ερμηνεύτηκαν ανεξάρτητα από δύο έμπειρους παθολόγους, οι οποίοι ήταν τυφλοί στην ενημέρωση των ασθενών. Εμείς ποσοτικοποιείται ένταση χρώσης και το ποσοστό των χρωματισμένων κυττάρων χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση που περιγράφηκε προηγουμένως [22], [23]: το ποσοστό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων (0% -100%) πολλαπλασιάστηκε με το κυρίαρχο πρότυπο ένταση της χρώσης, θεωρώντας 1 ως αρνητική ή ιχνοστοιχεία, 2 ως αδύναμο, 3 ως μέτρια και 4 ως ισχυρή. Ως εκ τούτου, η συνολική βαθμολογία κυμαίνεται από 0 έως 400. Οι ασθενείς στη συνέχεια κατηγοριοποιούνται σε τέσσερις διαφορετικές υποομάδες: γκολ 0-99, σκορ 100-199, 200-299 γκολ και το σκορ 300-400

ανάλυση Western blot

εκχυλίσματα ολόκληρου κυττάρου παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας 0,14 Μ NaCl, 0.2 Μ τριαιθανολαμίνη, 0,2% δεοξυχολικό νάτριο, 0,5% Nonidet Ρ-40 και συμπληρωμένο με έναν αναστολέα πρωτεάσης (όλα τα προϊόντα ήταν από την Sigma, St. Louis, Missouri , ΗΠΑ). Στη συνέχεια, το δείγμα πρωτεΐνης τρέχει μέσα από μια δωδεκυλ θειικού ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) γέλης νάτριο 12% και μεταφέρθηκε σε μεμβράνη. Οι μεμβράνες μεταφέρθηκαν στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με πρωτογενές αντίσωμα. Μετά την πλύση, η μεμβράνη επωάστηκε με υπεροξειδάση (HRP) δευτερογενές αντίσωμα για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Τα πρωτογενή αντισώματα ήταν αντι-ATG-5 (Santa Cruz, CA, USA), αντι-LC3A /Β (Abcam, Cambridge, UK) και αντι- β-ακτίνης (Santa Cruz, CA, USA). Όλα αναφερόμενα αποτελέσματα είναι οι μέσες αναλογίες τριών διαφορετικών ανεξάρτητων πειραμάτων.

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων δοκιμασία

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων (10,000 κύτταρα /φρεάτιο) για 24 ώρες πριν από τη θεραπεία. προσδιορισμοί ΜΤΤ χρησιμοποιήθηκαν για την εκτίμηση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε διαφορετικές χρονικό σημείο μετά τη θεραπεία. Η δοκιμασία ΜΤΤ διεξήχθη ως εξής: ΜΤΤ προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο και οι πλάκες επωάστηκαν στους 37 ° C για 4 ώρες. Το μίγμα ΜΤΤ μέσο στη συνέχεια απομακρύνθηκε και 150 μλ διμεθυλοσουλφοξειδίου (DMSO) προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 570 nm χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο πτυχόμενους

παρεμβολή RNA

siRNA διπόλων στόχευση ΑΤΟ-5 συνετέθησαν ως εξής: siRNA-ATG5-486:. GACGUUG GUAACUGACAAATT? siRNA-ATG5-695: GUCCAUCUAAGGAUGCAAUTT και siRNA-ATG5-938: GACCUUUCAUUCAGAAGCUTT. siRNA δίπολα που περιέχουν μη-ειδικές αλληλουχίες χρησιμοποιήθηκαν ως ένας αρνητικός έλεγχος (NC): UUCUCCGAACGUGUCACGUTT. Διαφορετικές siRNAs επιμολύνθηκαν ξεχωριστά σε κύτταρα χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Λιποφεκταμίνη 2000, και το μέσο αντικαταστάθηκε 6 ώρες μετά την επιμόλυνση.

σε πραγματικό χρόνο RT-PCR

Ολικό RNA από τις κυτταρικές γραμμές και ιστοί ήταν εκχυλίζεται χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, USA), ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η συγκέντρωση του RNA μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο. Μια πισίνα cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας 1 μα ολικού RNA και TaqMan Reverse Transcription Αντιδραστήρια (Applied Biosystems, Foster City, USA) όπως περιγράφεται από τον κατασκευαστή. Η έκφραση του γονιδίου στόχου αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μια σχετική προσέγγιση ποσοτικοποίησης (2

-ΔΔCt μέθοδος) με β-ακτίνη ως εσωτερική αναφορά.

ανοσοφθορισμού δοκιμασία

Τα κύτταρα διαπερατά με 0,3 % Triton Χ-100 για 10 λεπτά που ακολουθείται από στερέωση με 2-4% Μεθανάλη για 15 λεπτά, και αποκλείστηκαν με 3% ορό προβάτου σε θερμοκρασία δωματίου για 60 λεπτά. Στη συνέχεια, ανιχνεύθηκαν με πρωτογενή αντισώματα αντι-LC3B (Santa Cruz, CA, USA) για όλη τη νύχτα σε θερμοκρασία δωματίου, και τα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές με PBS. Βάφονται με Alexa Fluor 488 συζευγμένο IgG αντι-κατσίκας 488 κουνέλι για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, και στη συνέχεια τα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές με PBS. Οι πυρήνες οπτικοποιήθηκαν με χρώση με DAPI (Sigma, USA) επί 2 λεπτά. Τα βαμμένα κύτταρα παρατηρήθηκαν με ανεστραμμένο μικροσκόπιο φθορισμού.

Στατιστική ανάλυση

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με το πακέτο λογισμικού SPSS 15.0 για Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Ποσοτικά δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. χ του Pearson test

2 χρησιμοποιήθηκε για να συγκρίνουν τη διαφορά μεταξύ κατετάγη δεδομένων, ενώ η δοκιμή μονόδρομη-ANOVA πραγματοποιήθηκε για να συγκρίνει τη διαφορά μεταξύ των ποσοτικών δεδομένων. αναλύσεις επιβίωσης έγιναν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και συγκρίθηκαν με το τεστ log-rank. Το μοντέλο Cox-παλινδρόμησης έγινε για να αξιολογηθεί η ανεξάρτητη αναλογία κινδύνου της κάθε μεταβλητής στην πολυπαραγοντική ανάλυση. Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ATG5 και MRP 1 εξετάστηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία Διμεταβλητά Συσχέτιση (Pearson). Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές όταν

P

τιμές ήταν μικρότερη από 0.05.

Αποτελέσματα

Η έκφραση της ATG-5 και MRP-1 σε GC

Το μοτίβο έκφρασης και η θέση του ATG-5 και MRP-1 σε ασθενείς GC μας, οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία με epirubicin, σισπλατίνη και 5-FU επικουρική χημειοθεραπεία (ECF) μετά από χειρουργική εκτομή, εξετάσθηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική ανάλυση. Μεταξύ των δειγμάτων 135 GC, 105 (77,78%) ήταν θετικά για ATG-5 ανοσοαντιδραστικότητα, και 107 (79,26%) ήταν MRP-1 θετικές. Όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 1, βρήκαμε ότι ATG5 ήταν κυρίως εκφράζονται στο κυτταρόπλασμα. Επιπλέον, η υπερέκφραση του ATG-5 συσχετίστηκε θετικά με εκείνη του MRP-1 σε GC. (R = 0,616,

P

& lt? 0.001), όπως αποκαλύφθηκε από τη δοκιμή Διμεταβλητά συσχέτισης. Η θετική έκφραση σε παρακείμενες μη-καρκινικούς ιστούς ήταν 113 (83,70%) για ATG-5 και 89 (65,93%) για MRP-1. Τα δεδομένα έδειξαν ότι και οι δύο ATG-5 και MRP-1 θετικά εκφράζεται σε καρκινικά και μη-καρκινικούς ιστούς, οι οποίες υποδηλώνουν ότι η ATG-5 και MRP-1 μπορεί να προκληθεί από χημειοθεραπεία και στις δύο ιστούς όγκων και μη-όγκου. Όπως όλα τα δείγματα μας ασθενής υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ECF χημειοθεραπεία, και βρήκαμε ότι και οι δύο ATG-5 και MRP-1 εκφράζεται έντονα και συσχετίζονται θετικά σε αυτά τα δείγματα. Εν τω μεταξύ, προηγούμενη μελέτη δείχνει ότι MRP-1 ίσως σχετίζονται με την αντίσταση σε πολλά φάρμακα σε GC. Μαζί με προηγούμενο εύρημα, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι ATG-5 και MRP-1 μπορεί να εμπλέκεται σε χημειοαντίσταση σε ασθενείς GC.

(Α) ATG-5 χρώσης σε μη καρκινικούς ιστούς γαστρικού δέχεται 285 (χ 200) ? (Β) χρώση ATG-5 σε ιστούς όγκων GC σκόραρε 50 (× 400)? (C) ATG-5 χρώση σε ιστούς όγκων GC σκόραρε 270 (× 400)? (D) ATG-5 χρώση σε ιστούς όγκων GC σκόραρε 400 (× 200).

Η

Σύλλογοι μεταξύ της έκφρασης του ATG-5 ή MRP-1 και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά του GC

Η οι ενώσεις του ATG-5 και MRP1 έκφρασης με διάφορες παραμέτρους του κλινικοπαθολογικών GC φαίνονται στον πίνακα 1 και πίνακα 2, αντίστοιχα. Έκφραση του ATG-5 συνδέθηκε σημαντικά με το βάθος της εισβολής τοίχο, μακρινή μετάσταση και τα στάδια ΤΝΜ του GC (

P

& lt? 0.001,

P

= 0.018,

P

& lt? 0.001 αντίστοιχα). MRP-1 η έκφραση ήταν σημαντικά σχετίζεται με αυξημένο μέγεθος του όγκου, το βάθος της εισβολής τοίχο, περιφερειακών λεμφαδένων μεταστάσεων, ΤΝΜ τα στάδια (

P

= 0,032,

P

& lt? 0,001, P = 0,016, P & lt? 0.001 αντίστοιχα) και την κατάσταση διαφοροποίησης (

P

= 0,005). Για να προσδιοριστεί περαιτέρω η εμπλοκή o f ATG-5 και MRP-1 στην ανάπτυξη GC, πραγματοποιήσαμε ανάλυση επιβίωσης εντός δειγμάτων μας ασθενή. επιβίωσή μας αναλύσεις έδειξαν ότι η συνολική συνολική επιβίωση (OS) ποσοστό ομάδα GC μας ήταν 43.70%, με μέση επιβίωση των 39,849 μήνες (95% CI, 35,636 – 44,061 μήνες)? λαμβάνοντας υπόψη ότι η ασθένεια ελεύθερη επιβίωση (DFS) ποσοστό ήταν 34,07% με μέση επιβίωση των 35,802 μήνες (95% CI, 31,618 – 39,986 μήνες). Είμαστε δίπλα κατατάσσονται οι ασθενείς σε τέσσερις διαφορετικές υποομάδες ανάλογα με τα αποτελέσματα της χρώσης ανοσοϊστοχημεία. Η ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier έδειξε υψηλότερη έκφραση ATG-5 ήταν σημαντικά σχετίζεται με φτωχότερη OS (

P

& lt? 0.001) και DFS (

P

= 0,003). Κατά ζεύγη συγκρίσεις έδειξαν ότι οι ασθενείς που φέρουν την υψηλότερη ATG-5 έκφρασης (βαθμολογίες 300-400) είχαν τις φτωχότερες ποσοστά επιβίωσης σε σύγκριση με εκείνη των άλλων υποομάδων (Σχήμα 2Α και 2Β). Σταθερά, υπερέκφραση MRP-1 βρέθηκε να σχετίζεται σημαντικά με την κακή OS (

P

= 0.001) και DFS (

P

= 0.018) των ασθενών GC μας. Η υπο-ομάδα με την υψηλότερη βαθμολογία έκφραση MRP1 (0-99) φαίνεται να έχουν τη χειρότερη πρόγνωση (Σχήμα 2C και 2D) σε σύγκριση με τις άλλες υποομάδες. Τα στοιχεία μας έδειξαν επίσης ότι υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ των σταδίων ΤΝΜ και την επιβίωση των ασθενών με GC. Οι ασθενείς με σταδίου ΙΙΙ και IV όγκοι εμφανίζονται χειρότερη πρόγνωση σε σύγκριση με εκείνους που φιλοξενούν στάδιο ΙΒ και όγκους ΙΙ (

P & lt? 0,01

) (Σχήμα 2Ε και 2F). Πιο ενδιαφέρον, πολυπαραγοντικό μοντέλο παλινδρόμησης κινδύνου του Cox έδειξε ότι το ATG-5 και MRP-1 επίπεδα έκφρασης και τα στάδια ΤΝΜ ήταν όλες ανεξάρτητες και σημαντικές προγνωστικούς δείκτες για την πρόβλεψη της OS (

P

= 0.037,

P

= 0.005,

P

& lt? 0.001 αντίστοιχα) και DFS (

P

= 0.004,

P

= 0,008,

P

& lt? 0.001 αντιστοίχως) του GC (Πίνακας 3). Τα δεδομένα μας έδειξαν την ATG-5 και MRP-1 ήταν στενά συνδεδεμένη με την ανάπτυξη GC και μπορεί να χρησιμεύσει ως κακή δείκτες πρόγνωση σε θεραπεία GC.

(Α και Β) Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε τέσσερις ακόλουθες υποομάδες με βάση ATG -5 ανοσοχρώση: σκόραρε 0-99 (καμπύλη α), σκόραρε 100-199 (καμπύλη β), σκόραρε 200-299 (καμπύλη C) και σκόραρε 300-400 (καμπύλη d). Η διαφορά μεταξύ των διαφόρων υποομάδων ήταν στατιστικώς σημαντική, όπως εκτιμήθηκε από τη συνολική συγκρίσεις Log-rank (OS:

P

& lt? 0.001, DFS:

P

= 0,003). Κατά ζεύγη συγκρίσεις Log-rank έδειξε ότι η υποομάδα D παρουσίασαν τις φτωχότερες ποσοστά επιβίωσης σε σύγκριση με άλλες υποομάδες (OS:

P

& lt? 0,05, DFS:

P

& lt? 0,01). (Γ και Δ) Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε τέσσερις ακόλουθες υποομάδες με βάση το MRP-1 ανοσοχρώση: σκόραρε 0-99 (καμπύλη Α), σκόραρε 100-199 (καμπύλη β), σκόραρε 200-299 (καμπύλη C) και σκόραρε 300-400 (καμπύλη d). Η διαφορά μεταξύ των διαφόρων υποομάδων ήταν στατιστικά σημαντική με τη συνολική συγκρίσεις Log-rank (OS:

P

= 0,001, DFS:

P

= 0,018). Κατά ζεύγη συγκρίσεις Log-rank έδειξε ότι η υποομάδα Α είχε την πιο ευνοϊκή πρόγνωση μεταξύ των τεσσάρων υποομάδων (OS:

P

& lt? 0,05, DFS:

P

& lt? 0.001). (Ε και F) Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε τέσσερις υποομάδες ανάλογα με τις διαφορετικές φάσεις ΤΝΜ. Η διαφορά μεταξύ των διαφόρων υποομάδων ήταν στατιστικά σημαντική με τη συνολική συγκρίσεις Log-rank (OS:

P

& lt? 0.001, DFS:

P

& lt? 0.001). Κατά ζεύγη συγκρίσεις Log-rank έδειξε ότι υποομάδες ΙΙΙ ή IV εκτίθενται φτωχότερα τα ποσοστά επιβίωσης από ό, τι εκείνη των υποομάδων IB και II (OS:

P

& lt? 0,01, DFS:

P

& lt? 0.001).

Απλή αναζήτηση

ATG-5 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε χημειοθεραπεία κύτταρα

Για να διερευνήσουν περαιτέρω το ρόλο της ATG-5 στην ογκογένεση και ανθεκτικοί στα φάρμακα. Διαπιστώσαμε την έκφραση της πρωτεΐνης σε αρκετές κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου (AGS, BGC-832, SGC7901, SGC7901 /DPP και ΜΚΝ45) και σε ένα αθανατοποιημένο ανθρώπινο γαστρικό βλεννογόνο επιθηλιακά κυτταρική γραμμή (GES). Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε ότι ATG-5 ήταν δραματικά υπερεκφράζεται σε DPP ανθεκτική κυτταρική γραμμή, κύτταρα SGC7901 /DPP, σε σύγκριση με όλες τις άλλες κυτταρικές σειρές που περιλαμβάνουν DPP κύτταρα ευαίσθητα SGC7901 (Σχήμα 3Α). Εμείς επιβεβαίωσε ότι τα κύτταρα SGC7901 /DPP είναι ανθεκτική στη θεραπεία DPP. Το IC 25, IC50 και IC75 ήταν 15,4 μΜ, 38,7 μΜ και 93,53 μΜ σε SGC7901 κύτταρα. Σε αντίθεση, το IC 25, IC50 και IC75 ήταν 120,03 μΜ, 271.9 μΜ και 423,7 μΜ σε SGC7901 /DPP (Σχήμα 3Β). Είναι περίπου 5 έως 9 φορές υψηλότερη από ότι σε ανθεκτικά κύτταρα μη-φαρμάκου. εύρεση έντονα υποδηλώνει ότι ATG-5 συμβάλλει ανθεκτικών των κυττάρων GC φάρμακο μας.

(Α) Το επίπεδο της ATG5 ανιχνεύτηκε σε κυτταρικές γραμμές χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικοί έλεγχοι. (Β) Το IC 25, IC50 και IC75 της ΓΓΕ-7901 και SGC-7901 /κύτταρα DDP δοκιμάστηκαν χρησιμοποιώντας τις δοκιμασίες ΜΤΤ μετά τη θεραπεία DPP.

Η

Αναστολή του ATG-5 ευαισθητοποιημένα χημειοθεραπεία κύτταρα για τη θεραπεία των ναρκωτικών

για να αποδείξει επιπλέον ότι ATG-5 συμβάλλει στην ανθεκτική των κυττάρων GC ναρκωτικών, χρησιμοποιήσαμε μικρά παρεμβαλλόμενα RNA (siRNA που) με νοκ ντάουν την έκφραση του ATG-5. Τρεις siRNAs σχεδιάστηκαν. πραγματικού χρόνου PCR μας και τα αποτελέσματα κηλίδος Western έδειξαν ότι και τα τρία siRNAs ανέστειλε την έκφραση του ATG-5 τόσο σε επίπεδο mRNA και πρωτεΐνης (Σχήμα 4Α και 4Β). Εμείς επιλέξαμε ένα, siRNA-ATG5-695, με υψηλότερη απόδοση νοκ ντάουν για να εκτελέσει το ακόλουθο πείραμα. Εμείς knockdown ATG-5 έκφρασης και στη συνέχεια κατεργάζεται τα κύτταρα με DPP. ικανότητα πολλαπλασιασμός των κυττάρων εξετάσθηκε σε 0, 48 και 72 ώρες μετά την αγωγή. αποτέλεσμα μας έδειξε ότι knockdowning ATG-5 δεν επηρέασε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε κύτταρα SGC7901 /DPP σε σύγκριση με τον έλεγχο του siRNA (siRNA NC). θεραπεία DPP ανέστειλε μόνος ελαφρώς τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν knockdown την έκφραση του ATG-5 και κατεργασία των κυττάρων με DPP την ίδια στιγμή, η ικανότητα πολλαπλασιασμού των κυττάρων περαιτέρω κατέστειλε σε σύγκριση με τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με DPP μόνος 48 και 72 ώρες μετά την κατεργασία (Σχήμα 4 C). Τα δεδομένα μας υποστηρίζουν περαιτέρω ότι ATG-5 συμβάλλει στην ανθεκτικών κυττάρων GC φαρμάκου.

(Α) Το επίπεδο του mRNA του ATG-5 ανιχνεύτηκε με πραγματικού χρόνου PCR μετά τη θεραπεία με τα siRNA. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικοί έλεγχοι. (Β) το επίπεδο της πρωτεΐνης του ATG-5 ανιχνεύτηκε με στύπωμα Western μετά την επεξεργασία με τα siRNA. β-ακτίνη β χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικοί έλεγχοι. (Γ) Η ικανότητα πολλαπλασιασμού δοκιμάστηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία ΜΤΤ 48 ώρες ή 72 ώρες μετά τη διαφορετική μεταχείριση.

Η

Autophagy συμμετείχε στο φάρμακο ανθεκτικών κυττάρων DC

Όπως ATG-5 είναι ένας κεντρικός ρυθμιστής της αυτοφαγία, εμείς εικάζουν ότι autophagy μπορεί να εμπλέκεται στην ανθεκτικών κυττάρων GC φαρμάκου. Έτσι χρησιμοποιήσαμε 3MA, η οποία είναι ένας αναστολέας αυτοφαγία, για τη θεραπεία των ανθεκτικών σε φάρμακο κυττάρων. Όπως ήταν αναμενόμενο, βρήκαμε ότι 3MA μαζί με θεραπεία DPP είχε παρόμοια επίδραση με ATG-5 kncokdown μαζί με θεραπεία DPP (Σχήμα 4C και 4D). Τα δεδομένα καταδεικνύουν ότι αυτοφαγία συμβάλλει στη ανθεκτικά στα φάρμακα. Στη συνέχεια, εξετάσαμε αν η αυτοφαγία άλλαξε κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Χρησιμοποιήσαμε δοκιμασία ανοσοφθορισμού για την ανίχνευση επιπέδου έκφρασης LC3B, το οποίο είναι ένας δείκτης αυτοφαγία στα κύτταρα. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι autophagy κατεστάλη μετά την φίμωση ATG-5 ή κατεργασία των κυττάρων με 3MA (Σχήμα 5Α). Και αποτέλεσμα κηλίδα Western επιβεβαίωσε περαιτέρω ότι η έκφραση πρωτεΐνης LC3A /B επηρεάστηκε μόνο σε κύτταρα κατεργασμένα με siRNA-ATG5 ή 3MA. Κατά συνέπεια, ο πολλαπλασιασμός κυττάρου αναστάλθηκε περαιτέρω μόνο όταν autophagy ανεστάλη (Σχήμα 4 και Σχήμα 5). Ως εκ τούτου, τα δεδομένα μας αποκάλυψαν ότι ATG-5 ενεπλάκη στην ανθεκτικών στα φάρμακα κυττάρων DC, η οποία επηρεάζει κυρίως μέσω του autophagy των καρκινικών κυττάρων.

(Α) Η αυτοφαγία ανιχνεύθηκε με δοκιμασία ανοσοφθορισμού των LC3B σε τα κύτταρα 48 ώρες μετά την διαφορετική μεταχείριση. (Β) Τα επίπεδα της πρωτεΐνης του LC3A και LC3B ελέγχθηκαν με κηλίδα western. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικοί έλεγχοι.

Η

Συζήτηση

GC παραμένει μία από τις πιο συχνές κακοήθεις όγκους σε παγκόσμια βάση, παρά τη μείωση εμφάνισης της και ο συνολικός αριθμός προβλέπεται να αναρριχηθεί συνεχώς, ως αποτέλεσμα της αύξησης του πληθυσμού. Στους άνδρες, GC κατατάσσεται δεύτερη σε ποσοστό θνησιμότητας? στις γυναίκες, είναι το τέταρτο σε θνησιμότητας [24], [25]. Το ακαθάριστο ποσοστό θνησιμότητας των GC στην Κίνα ήταν 25,2 ανά 100 000 [26]. Στη μελέτη μας, εξετάσαμε την έκφραση του ATG-5 και MRP-1 σε μία ομάδα του ασθενούς GC μετά τη χημειοθεραπεία. Στη συνέχεια, αποδείξαμε ότι ATG-5 ρυθμίζεται αυξητικά σε σισπλατίνη (DDP) ανθεκτική κυτταρική γραμμή. Επιπλέον, μετά την ATG-5 έκφρασης ή aotophogy ανεστάλη, τα καρκινικά κύτταρα ευαισθητοποιήθηκαν σε θεραπεία DPP. Τα αποτελέσματά μας παρέχουν νέες διορατικότητα στο μηχανισμό του χημειοθεραπεία σε εξέλιξη GC.

Αξιολογήσαμε το προφίλ exression του ATG-5 και MRP-1 σε 135 ασθενείς Κινέζοι GC. Σε συμφωνία με την προηγούμενη αναφορά [22], τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι ένα υψηλό ποσοστό των ιστών GC εκφράζονται ATG-5, και ATG-5 έκφραση ήταν στατιστικά σχετίζεται με το βάθος της εισβολής τοίχου, μακρινή μετάσταση και ΤΝΜ στάδια της GC. Αυτά τα ευρήματα υποστηρίζουν μια αντίληψη ότι υψηλό επίπεδο έκφρασης του ATG5 μπορεί να συμβάλει σε, κάποιο βαθμό, μια πιο επιθετική και κακοήθη φαινότυπο σε GC. Η άποψη αυτή ενισχύεται περαιτέρω από το εύρημα μας της συσχέτισης μεταξύ υψηλότερη έκφραση ATG5 στο GC και χειρότερη πρόγνωση των ασθενών (βλέπε περισσότερη συζήτηση κατωτέρω). Το πιο σημαντικό, έχουμε εντοπίσει μια θετική συσχέτιση μεταξύ ATG-5 και MRP1 έκφρασης στην ομάδα GC μας. Λαμβάνοντας υπόψη το γεγονός ότι MRP1 είναι μία πρωτεΐνη ABC διαμεμβρανική μεταφορά καλά γνωστό ότι προάγει τον φαινότυπο MDR σε GC, είναι λογικό να προτείνουμε ότι ATG-5 μπορεί να εμπλέκεται επίσης στην παροχή χημειοαντίσταση GC μέσω ορισμένων άγνωστος μοριακούς μηχανισμούς.

είναι ευρέως αποδεκτό ότι η υποτροπή και μετάσταση είναι δύο σημαντικά εμπόδια στις προσπάθειές μας για τη βελτίωση χαμηλό λειτουργικό σύστημα και DFS ποσοστό επιβίωσης των GC. Χημειοαντίσταση παραμένει ένας από τους σημαντικότερους λόγους που οδήγησαν στην ανανέωση του πληθυσμού όγκου /υποτροπή μετά τη θεραπεία. Κατάλληλη επιλογή της ατομικής μεταχείρισης θα είναι αναμφίβολα επωφελής για τη βελτίωση της κλινικής έκβασης? παρ ‘όλα αυτά, η σημερινή απόφαση της θεραπείας εξαρτάται κυρίως από τα στάδια ΤΝΜ [27], [28]. επιβίωσή μας αναλύει στους ασθενείς 135 GC με σταδίου ΙΒ IV όγκων αποκάλυψε ότι τόσο ATG-5 και MRP-1 έκφρασης ήταν σε θέση να προβλέψει ανεξάρτητα το λειτουργικό σύστημα και DFS μετά τη θεραπεία με ανοσοενισχυτικό ECF χημειοθεραπεία, γεγονός που υποδηλώνει ότι η παρακολούθηση των επιπέδων έκφρασης τους σε συνδυασμό συμβατικά προγνωστικοί δείκτες μπορεί να μας δώσει επιπλέον πολύτιμες πληροφορίες για την καλύτερη αξιολόγηση της επίδρασης της χημειοθεραπείας σε ασθενείς με GC. Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε το ATG-5 υπερεκφράζεται σε ανθεκτικά στα φάρμακα κυττάρων GC γραμμές. Και φίμωση ATG-5 μπορεί να ευαισθητοποιούνται οι ανθεκτικοί στα φάρμακα κυττάρων στη χημειοθεραπεία και πάλι. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η ATG-5 μπορεί να είναι ένας στόχος για χημειοθεραπεία paitents.

Συσσωρευμένα στοιχεία αποδεικνύουν ότι η αυτοφαγία είναι ικανή να προκαλέσει τόσο κυτταρική επιβίωση και τον κυτταρικό θάνατο κάτω από διαφορετικές συνθήκες. Liu et al ανέφεραν ότι μέσω της αναστολής της PI3K /Akt /mTOR μονοπάτι, β-elemene θα μπορούσε να προκαλέσει προστατευτική αυτοφαγία να βοηθήσει τα κύτταρα GC την καλύτερη προσαρμογή σε συνθήκες στρες και την προστασία τους από το να υποστούν απόπτωση θάνατο [29]. Επιπλέον, πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι η ΡΙ3Κ /Akt /mTOR μονοπάτι σηματοδότησης συχνά ενεργοποιείται σε ανθρώπινο γαστρεντερικό κακοήθειες [30]. Η σηματοδότηση PI3K /Akt ρυθμίζει επίσης MDR στο κελί GC μέσω της ρύθμισης της p-γλυκοπρωτεΐνης, Bcl2 και Bax [31]. Ομοίως, ορισμένοι αντικαρκινικοί παράγοντες έχουν αναφερθεί ότι αναστέλλουν την σηματοδότηση mTOR και επάγουν αυτοφαγία στα καρκινικά κύτταρα με αποικοδόμησης πολλά κύρια συστατικά στον άξονα mTOR [14], [32]. Συνολικά, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι autophagy μπορούσε να προκληθεί κατά τη διάρκεια της χημειοθεραπείας, και η καταστολή των οδών αυτοφαγικά χρησιμοποιώντας αναστολέα αυτοφαγία έχουν τη δυνατότητα να βελτιώσουν την αποτελεσματικότητα χημειοθεραπευτικών σε ασθενείς με GC ATG-5 υψηλή έκφραση. Προς στήριξη, βρήκαμε ότι όταν autophagy ανεστάλη, τα ανθεκτικά κύτταρα φάρμακο επίσης ευαισθητοποιημένα σε φαρμακευτική αγωγή και πάλι ως φίμωση ATG-5 έκφρασης. Έτσι, η υποστήριξη αποτέλεσμα μας ότι αυτοφαγία συντελεί στην χημειοθεραπεία σε ασθενή.

Εν περιλήψει, η υπερ-έκφραση του ATG-5, ένα βασικό μοριακό παίκτης της οδού αυτοφαγικά, συνδέεται με χημειοαντίσταση σε GC. Η έκφραση του ATG-5 και MRP-1 θα μπορούσε να θεωρηθεί ως ανεξάρτητος προγνωστικοί δείκτες για την πρόβλεψη OS και DFS των ασθενών GC με βάση τα επί του παρόντος ληφθέντα δεδομένα. Βάσει των σταδίων ΤΝΜ, ανίχνευση των επιπέδων έκφρασης τους μπορεί να είναι κλινικά σημαντική για την καλύτερη πρόβλεψη χημειοθεραπευτικών εκβάσεις θεραπείας σε ασθενείς που πάσχουν από αυτή την κακοήθη νόσο. Μελλοντικές μελέτες που αφορούν την αξιολόγηση του μεγαλύτερου αριθμού των περιπτώσεων, ιδανικά από ένα διαφορετικό εθνικό υπόβαθρο, είναι σίγουρα επιβεβλημένη προκειμένου να επιβεβαιώσουν τα ευρήματά μας σε αυτή τη μελέτη.