Αφηρημένο

Ιστορικό

Ενώ η HPV λοίμωξη είναι η κύρια αιτία του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, η γενετική ευαισθησία σε λοιμώξεις HPV δεν είναι καλά κατανοητός. Ο παράγων νέκρωσης όγκου άλφα (TNF-άλφα), που εμπλέκονται στην άμυνα έναντι μόλυνσης HPV, παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας και παλινδρόμησης. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η σχέση μεταξύ του TNF-άλφα rs1800629 πολυμορφισμό και τον κίνδυνο της HPV λοίμωξης ή του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας.

Μέθοδοι

Τρεις ομάδες συμμετείχαν σε αυτή τη μελέτη των κινεζικών γυναικών. Ομάδα 1 αποτελούνταν από 285 υψηλού κινδύνου HPV ασθενείς με θετικό καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, ομάδα 2, 225 HPV υψηλού κινδύνου θετικούς ασθενείς χωρίς καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, και του Ομίλου 3, 318 HPV αρνητικό γυναίκες χωρίς καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Ελήφθησαν δείγματα αίματος από όλους τους ασθενείς και ο γονότυπος με PCR-RLFP. Πενήντα τυχαία επιλεγμένα δείγματα περαιτέρω αλληλουχία

Αποτελέσματα

Οι αλληλόμορφο και τον γονότυπο, διανομές του rs1800629 πολυμορφισμού TNF-α δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ κάθε μία από τις ομάδες (P & gt? 0,05).. Δεν υπάρχει σημαντική σχέση μεταξύ rs1800629 πολυμορφισμό και HPV λοίμωξη υψηλού κινδύνου (OR = 0,649, 95% CI: 0,253 – 1,670, P = 0.371), ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας (OR = 0.993, 95% CI: 0,376 – 2,618, P = 0,988) ή καρκίνο του τραχήλου με HPV λοίμωξη (OR = 0,663, 95% CI: 0,250 – 1,758, P = 0,409).

Συμπεράσματα

Έχουμε αποδείξει ότι δεν υπάρχει καμία συσχέτιση μεταξύ rs1800629 TNF πολυμορφισμό και η HPV λοίμωξη ή καρκίνο του τραχήλου της μήτρας με HPV λοίμωξη

Παράθεση:. Wang Ν, Γιν D, Zhang S, Wei H, Wang S, Zhang Y, et al. (2012) TNF-άλφα rs1800629 πολυμορφισμός που δεν συνδέονται με HPV λοίμωξη ή καρκίνο του τραχήλου της μήτρας στην κινεζική πληθυσμού. PLoS ONE 7 (9): e45246. doi: 10.1371 /journal.pone.0045246

Επιμέλεια: Cordula Μ Stover, Πανεπιστήμιο του Leicester, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 20, Ιούνη του 2012? Αποδεκτές: 17 Αύγ 2012? Δημοσιεύθηκε: 13 Σεπτεμβρίου 2012 |

Copyright: © Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φύση Επιστημών της Κίνας (Νο 30973191), Επιστήμης και Τεχνολογίας Πρόγραμμα της επαρχίας Liaoning (No.2008225004), Peak Ιατρική Κατασκευή Ειδικών Έργων της επαρχίας Liaoning (No.2010696), Επιστήμης και Τεχνολογίας Πρόγραμμα πόλη Σενγιάνγκ (No.F11-262-9-15) και δωρεάν Ερευνητής του έργου της Shengjing Νοσοκομείου (No.200806). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του τραχήλου παραμένει η δεύτερη πιο κοινή μορφή καρκίνου μεταξύ των γυναικών σε όλο τον κόσμο [1]. Μόλυνση από έναν ογκογόνο ιό των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) είναι ένας παράγοντας κινδύνου για την ανάπτυξη καρκίνου του [2] του τραχήλου της μήτρας. Οι ανοσοαποκρίσεις σε μόλυνση HPV εντός της τραχηλικό επιθήλιο παίζουν σημαντικό ρόλο στην παθογένεση του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας.

Αρκετές κυτοκίνες που ρυθμίζουν την ανοσολογική απόκριση έχουν ενοχοποιηθεί για την ανάπτυξη του καρκίνου [3]. Νέκρωσης όγκου παράγοντα-άλφα (TNF-α), που εκκρίνεται κυρίως από ενεργοποιημένα μακροφάγα, είναι ένα εξαιρετικά πλειοτροπική κυτοκίνη με κεντρικό ρόλο στην ανοσολογική ομοιόσταση, της φλεγμονής και άμυνας του ξενιστή [4], [5]. TNF-α εμπλέκεται στην άμυνα έναντι μόλυνσης από HPV, διαμορφώνοντας την αντιγραφή του ιού [6].

Ο ρόλος του ΤΝΡ-α στον καρκίνο δεν είναι καλά κατανοητή. Η απορρύθμιση της έκφρασης του TNF εντός μικροπεριβάλλον του όγκου φαίνεται να ευνοεί κακοήθη εισβολή των κυττάρων των ιστών, τη μετανάστευση, και τελικά η μετάσταση σχηματισμός [7]. Υπάρχουν επίσης ενδείξεις, ωστόσο, ότι ο ΤΝΡ-α μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη και την εξάπλωση του καρκίνου [8], [9]. Ο ρόλος του ΤΝΡ-α σε προαγωγή όγκων υποστηρίζεται από την TNF-α με ανεπάρκεια μοντέλο ποντικού, στα οποία ο TNF-α

– /- ποντικοί είναι ανθεκτικοί στην ανάπτυξη καλοηθών και κακοηθών όγκων του δέρματος. διαμόρφωση TNF μπορεί να συμβάλλει στην ρύθμιση της κυτταρικής φλεγμονής, και την επακόλουθη ανάπτυξη κακοήθους νόσου [10]. Δεδομένου ότι η κακοήθης ανάπτυξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας προκαλείται από επίμονη ιογενή λοίμωξη, θα επικεντρωθεί στο γονίδιο TNF, το οποίο μπορεί να εμπλέκεται στην ευαισθησία σε λοιμώξεις HPV και την ανάπτυξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας.

Η

ΤΝΡ-α είναι ρυθμίζονται στο μεταγραφικό επίπεδο [11] και τους πολυμορφισμούς rs1800629 εντός της περιοχής του υποκινητή του ΤΝΡ-α έχουν συσχετιστεί με το επίπεδο του ΤΝΡ-α [12]. Η ένωση του rs1800629 πολυμορφισμό και του καρκίνου του τραχήλου έχει μελετηθεί ευρέως, αλλά τα αποτελέσματα είναι αντιφατικά [13], [14], [15], [16]. Η τρέχουσα μελέτη διεξήχθη για να διερευνήσει την κατανομή των rs1800629 πολυμορφισμού και της σχέσης του με τη λοίμωξη HPV και τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Η

Η

Υλικά και Μέθοδοι

Μελέτη θέματα

από το 2008 έως το 2010, όλοι οι ασθενείς που έλαβαν θεραπεία στο Τμήμα Μαιευτικής και Γυναικολογίας, Shengjing Νοσοκομείο της Κίνας Ιατρικού Πανεπιστημίου αξιολογήθηκαν για την έναρξη αυτής της μελέτης. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε 3 ομάδες. Ομάδα 1 αποτελούνταν από 285 ασθενείς που διαγνώστηκαν με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και HPV λοίμωξη υψηλού κινδύνου (περιλαμβανομένου του HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 και 68). Ομάδα 2 αποτελούνταν από 225 ασθενείς που διαγιγνώσκονται με λοίμωξη από HPV υψηλού κινδύνου, αλλά χωρίς καμία ανώμαλη τραχήλου κυτταρολογική ή παθολογική αλλαγή. Ομάδα 3 αποτελούνταν από 318 υγιείς κινεζικές γυναίκες που παρουσιάζουν για τη συνήθη υγιή προβολή στο τσεκ Κέντρο μας. Ομάδα 3 ασθενείς δεν είχαν ιστορικό λοίμωξης από HPV, του τραχήλου της μήτρας νεοπλασματικής νόσου, ή απόδειξη του τραχήλου της μήτρας παθολογίας. Οι ασθενείς στην ομάδα 3 είχε μια κανονική εξέταση τραχηλικής βλέννας σε τουλάχιστον δύο διαδοχικές ετήσιες εξετάσεις. Οι γυναίκες με οποιοδήποτε ιστορικό κακοήθους νόσου αποκλείστηκαν από την Ομάδα 3. Όλοι οι ασθενείς ήταν κινέζικα. Ενημέρωση γραπτή συγκατάθεση και 5 ml περιφερικού αίματος ελήφθησαν από κάθε συμμετέχοντα. Το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του νοσοκομείου της Shengjing. κατάσταση HPV ανιχνεύθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [17].

γονοτυπικός έλεγχος του πολυμορφισμού rs1800629

Το γονιδιακό DNA εξήχθη από λευκοκύτταρα περιφερικού αίματος (Tiangen αίματος Genome Kit). Η γονοτύπηση προσδιορίστηκε με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης-πολυμορφισμό μήκους θραύσματος περιορισμού ανάλυση (PCR-RFLP), η οποία βασίζεται στη μέθοδο των Cabrera et al. [18]. Τα προϊόντα PCR από 50 τυχαία δείγματα ασθενών ήταν περαιτέρω ακολουθία για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων του γονότυπου PCR-RFLP.

Η στατιστική ανάλυση

Η σχέση μεταξύ

TNF

-α rs1800629 πολυμορφισμό και HPV λοίμωξης και καρκίνου του τραχήλου της μήτρας υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση λόγου πιθανοτήτων (OR) και 95% ΚΠ τους υπολογίζεται με πολυπαραγοντική λογιστική παλινδρόμηση. Όλες οι ΕΑΠ προσαρμόστηκαν ως προς την ηλικία και το κάπνισμα. ανάλυση ισορροπία Hardy-Weinberg πραγματοποιήθηκε με το Chi-square τεστ. Η Chi-square test χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση των μεταβλητών. Μία ρ-τιμή των 0,05 χρησιμοποιήθηκε ως το κριτήριο στατιστικής σημασίας. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού SPSS (έκδοση 13.0? SPSS Inc., Chicago, IL).

Αποτελέσματα

Τα βασικά κλινικά χαρακτηριστικά των τριών ομάδων συνοψίζονται στον πίνακα 1. Η κατανομή της ηλικίας και του καπνίσματος δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των 3 ομάδων (Ρ = 0.224 και 0.108, αντίστοιχα). Οι ασθενείς στην ομάδα του καρκίνου του τραχήλου (Ομάδα 1) ήταν όλα HPV θετικά. Ο καρκίνος του τραχήλου ανέβηκε σύμφωνα με τη Διεθνή Ομοσπονδία Γυναικολογίας και Μαιευτικής ταξινόμησης και 49,8, 37,9, 9,8 και 2,1% των ασθενών είχαν σταδίου 0, Ι, ΙΙ και ΙΙΙ ασθένειες, αντίστοιχα. Μόνο 1 ασθενής είχε σταδίου IV καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Όπως ορίζεται, οι ασθενείς στην Ομάδα 2 ήταν όλες HPV θετικά και δεν είχε ανώμαλη τραχήλου ευρήματα.

Τα αποτελέσματα της ανάλυσης PCR-RFLP 50 τυχαία δείγματα ήταν όλα επιβεβαιώθηκαν με αλληλούχιση (Εικ. S1). Οι συχνότητες γονοτύπου σε όλες τις ομάδες δεν είναι σύμφωνες με την ισορροπία Hardy-Weinberg (P = 0.0013). Οι αλληλικές συχνότητες του αλληλόμορφου Α στις Ομάδες 1, 2 και 3 ήταν 8.1, 10.2 και 8.3%, αντίστοιχα. Δεν υπάρχουν σημαντικές διαφορές των αλληλομόρφων συχνότητες βρέθηκαν μεταξύ των ομάδων (P

G1-G2 = 0,271, P

G2-G3 = 0,287 και P

G1-G3 = 0,916, Πίνακας 2). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά της κατανομής γονότυπου δεν παρατηρήθηκε μεταξύ των ομάδων (Ρ

G1-G2 = 0,551, Ρ

G2-G3 = 0.627 και Ρ

G1-G3 = 0,980, Πίνακας 2). Δεν υπήρξε καμία διαφορά στην κατανομή των γονότυπων μεταξύ των ασθενών με διαφορετικές κλινικές στάδια του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας (Ομάδα 1) (Ρ = 0,575).

Σε περαιτέρω ανάλυση πολυμεταβλητή παλινδρόμηση, καμία σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε κατά τη σύγκριση των γενοτύπων μετά την προσαρμογή για την κατάσταση την ηλικία, το κάπνισμα, και HPV λοίμωξη. Συγκρίνοντας Ομάδες 2 και 3, βρήκαμε καμία σημαντική σχέση μεταξύ του TNF rs1800629 πολυμορφισμό και HPV λοίμωξη (AA εναντίον GG: OR = 0,649, 95% CI:. 0,253 έως 1,670, P = 0,371 Πίνακας 3). Συγκρίνοντας Ομάδες 1 και 3, βρήκαμε δεν υπήρχε σημαντική σχέση μεταξύ του TNF rs1800629 πολυμορφισμού και του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας (AA εναντίον GG: OR = 0.993, 95% CI:. 0,376 έως 2,618, P = 0,988 Πίνακας 4). Συγκρίνοντας Ομάδες 1 και 2, βρήκαμε καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ του TNF rs1800629 πολυμορφισμό και τον καρκίνο του τραχήλου με HPV λοίμωξη (AA εναντίον GG: OR = 0,663, 95% CI:. 0,250 έως 1,758, P = 0,409 Πίνακας 5). Δεν ενώσεις βρέθηκαν σε συνδυασμό γονότυπους (ΑΑ έναντι GG + GA ή GG εναντίον GA + ΑΑ) με τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου του τραχήλου της μήτρας (Πίνακας 3-5).

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, αξιολογήσαμε ασθενείς με υψηλή HPV κινδύνου και του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας (ομάδα 1), με HPV υψηλού κινδύνου και χωρίς τραχηλικό καρκίνο (Ομάδα 2), και με ούτε υψηλού HPV κινδύνου ή καρκίνο του τραχήλου της μήτρας (Ομάδα 3) Αξιολογήσαμε τη σχέση μεταξύ πολυμορφισμών rs1800629 και HPV μόλυνση και ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας. Δεν παρατηρήσαμε μια σημαντική σχέση μεταξύ πολυμορφισμών rs1800629 και του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας ή μόλυνση από HPV.

Αν και αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι οι πολυμορφισμοί στην περιοχή του υποκινητή του rs1800629 μπορεί να είναι ένας παράγοντας που συμβάλλει στην ανάπτυξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας [14] , [15], [19], [20], [21], τα αποτελέσματα υπήρξαν αντιφατικές. Δεν είναι σαφές γιατί οι μελέτες κατά πανομοιότυπο κακοήθειες που παράγεται αποκλίνοντα αποτελέσματα. Οι διαφορές μεταξύ του σχεδιασμού της μελέτης, διερευνώνται οι πληθυσμοί, και αναλυτική μέθοδος που χρησιμοποιείται μπορεί να έχουν συμβάλει σε αυτές τις αντιφάσεις. Οι μεγάλες προοπτικές μελέτες με συμφωνημένα μελέτες ασθενών-μαρτύρων που απαιτούνται για να αποσαφηνιστεί καλύτερα ο ακριβής ρόλος του πολυμορφισμού rs1800629 του TNF στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Τα ευρήματά μας είναι παρόμοια με εκείνα που αναφέρθηκαν από Stanczuk et al. [15] και Govan et al. [16], ο οποίος δεν έδειξε καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ rs1800629 πολυμορφισμού και του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Τα ευρήματά μας της κατανομής γονότυπου και του κινδύνου μόλυνσης από HPV υποστηρίζεται από Deshpande et al. [14], ο οποίος διερεύνησε τη σχέση του rs1800629 πολυμορφισμού με λοίμωξης από HPV 16. Ωστόσο, οι μελέτες τους βασίστηκαν σε μικρό μέγεθος δείγματος και δεν θα μπορούσε να είχε επαρκή στατιστική ισχύ για να ανιχνεύσει τη διαφορά. Παρά το γεγονός ότι έχουμε ένα μεγάλο μέγεθος δείγματος, ήμασταν σε θέση να επιβεβαιώσει την πιθανή γενετική προδιάθεση αυτού του site SNP.

Kirkpatrick et al. [22] έδειξε ότι τραχήλου επηρεάστηκε από rs1800629 γονότυπο. Δεδομένου ότι η αυχενική νεοπλασίας τείνουν να υποχωρούν ή την πρόοδο αυθόρμητα [23], θα μπορούσε να επηρεάσει την αξιολόγηση του κινδύνου ανάπτυξης καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Μεγαλύτερης διάρκειας παρακολούθηση θα βελτιωθεί αυτό το ποσοστό ανίχνευσης.

Το εθνοτικό υπόβαθρο σε μια μελέτη γενετική προδιάθεση με βάση τον πληθυσμό είναι επίσης ένας σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει τα αποτελέσματα. Η κατανομή γονότυπος rs1800629 σε Κινέζους ασθενείς μας ήταν παρόμοια με εκείνη που αναφέρεται στην ινδική [21], της Κορέας [24] και την Κόστα Ρίκα Καυκάσου [25] πληθυσμούς, ενώ η διανομή γονότυπο μας ήταν ελαφρώς διαφορετική από τη Νότια Αφρική [15] και της Ζιμπάμπουε [15 ] της Αφρικής και των ΗΠΑ [13], [23] και το Μεξικό [14]. Καυκάσιος πληθυσμούς. Σε μια μετα-ανάλυση, Liu et al. [26] παρατήρησε ότι η σύνδεση μεταξύ του rs1800629 ΑΑ ομόζυγο γονότυπο και ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας ήταν πιο σημαντική σε Ασιάτες. Ωστόσο, οι ομάδες μελέτες που παραθέτει Liu et al. [26] ήταν σχετικά μικρές και κάτω-powered.

Περιβαλλοντική έκθεση μπορεί επίσης να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο σε αυτά τα αντιφατικά αποτελέσματα. Γεωγραφικές διακυμάνσεις στο είδος του HPV [27] μπορούν να συμβάλλουν στην επίτευξη των διαφόρων κινδύνων του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας και να αλλάξει το αποτέλεσμα του rs1800629 πολυμορφισμού. Ωστόσο, τα αποτελέσματά μας δεν υποστηρίζουν τη σχέση μεταξύ της HPV λοίμωξης και rs1800629 πολυμορφισμού στην κινεζική πληθυσμό.

Ένας περιορισμός της παρούσας μελέτης ήταν ότι ήταν ένα, μελέτη ελέγχου περιστατικών σε νοσοκομεία με βάση. Οι ασθενείς επιλέχθηκαν από ένα μόνο φορέα και επομένως δεν μπορεί να ήταν αντιπροσωπευτικό των ασθενών με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας στο γενικό πληθυσμό. υποκείμενα ελέγχου επιλέχθηκαν από τον ίδιο νοσοκομείο, επίσης το ενδεχόμενο δημιουργίας ενός μεροληψία επιλογής. Ωστόσο, η κατανομή των συχνοτήτων γονοτύπου rs1800629 στους ασθενείς μας ήταν παρόμοια με άλλες εκθέσεις [28] του πληθυσμού της Κίνας, η οποία πρότεινε δεν υπήρχε μεροληψία επιλογής.

rs1800629 TNF-α αλληλόμορφο Α τείνουν να αυξάνουν την έκφραση των ΤΝΡ-α [12], αλλά ο εξέλιξη φαίνεται να μειωθεί η συχνότητα της υψηλής ΤΝΡ-α παραγωγός, αλληλόμορφο Α, για τη μείωση της θνησιμότητας που προκαλείται από το υψηλό επίπεδο του TNF-α. Λαμβάνοντας υπόψη τα αποτελέσματα μας, αξιώνουμε ότι στην ανοσοκαταστολή συγκρότημα μικροβιακή κολπικού περιβάλλοντος, TNF-α δεν παίζει σημαντικό ρόλο τόσο στην HPV εξάλειψη και μετασχηματισμό HPV σχετίζονται. Και στην εξέλιξη των πολλαπλών παραγόντων που προκαλείται από τον καρκίνο, η δυαδικότητα του TNF-α καθορίσει ότι δεν έχει αποφασιστική επιρροή στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Συμπέρασμα

Στη μελέτη μας, βρήκαμε καμία συσχέτιση μεταξύ rs1800629 TNF πολυμορφισμό και HPV λοίμωξη ή καρκίνο του τραχήλου της μήτρας με λοίμωξη από τον ιό HPV.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1. ανάλυση

PCR-RFLP και αλληλούχιση του TNF-άλφα rs1800629 γονότυπο. (Α) τα αποτελέσματα των αναλύσεων PCR-RFLP (ηλεκτροφόρηση σε 3% Gel) (Β) τα αποτελέσματα αλληλουχίας από ΑΒΙ 3700.

doi: 10.1371 /journal.pone.0045246.s001

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

ευχαριστούμε τα μέλη του Τμήματος Βασικά Εργαστήριο Συγγενείς Υπουργείου Υγείας Δυσπλασία για τεχνική βοήθεια τους. Μπορούμε επίσης να ευχαριστήσω Chunxue Lu για τη γενναιόδωρη βοήθειά της για τη συλλογή δειγμάτων και κλινική εργασία με τους ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της νόσου.