Αφηρημένο

TREX (μεταγραφή /εξαγωγές) είναι ένα πολυπρωτεϊνικό σύμπλεγμα που παίζει καθοριστικό ρόλο στην μεταγραφική επιμήκυνση και τη μεταφορά του mRNA από τον πυρήνα στο κυτταρόπλασμα . Αναφέραμε προηγουμένως τον καθαρισμό της ανθρώπινης πρωτεΐνης TREX και διαπίστωσε ότι η έκφραση ενός μέλους αυτού του συμπλόκου, p84N5 (που αναφέρονται ως hTREX84 ή hHPR1), μια πρωτεΐνη σύνδεσης RB, συσχετίζεται με το μέγεθος του όγκου του στήθους και της μετάστασης. Εδώ εξετάζουμε τους μηχανισμούς της παρεκκλίνουσας έκφρασης hTREX84 σε καρκίνο του μαστού και των ωοθηκών και κύτταρα αξιολογήσει το ρόλο της στην ογκογένεση. Δείχνουμε ότι τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών υπερεκφράζουν hTREX84 4-φορές και 10 φορές σε σύγκριση με αθάνατο, μη ογκογόνα και πρωτογενή κύτταρα ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακών, αντίστοιχα. Μείωση των επιπέδων hTREX84 από μικρό παρεμβαλλόμενο RNA αποτέλεσμα την αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και G

2 /M σύλληψης. Ακόμα κι αν παρατηρηθεί ότι η έκφραση hTREX84 προκλήθηκε με αγωγή με έναν παράγοντα απομεθυλίωσης, 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνη (5-αζα-dC), όξινο θειώδες νάτριο αλληλουχίας του DNA και της μεθυλίωσης ειδική PCR βρέθηκε καμία ένδειξη των μεταβολών της μεθυλίωσης του DNA στο CpG νησίδες της περιοχής ρυθμιστή του

hTREX84

. Εμείς στη συνέχεια ορίζουν διάφορους μεταγραφικούς παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων θέσεις δέσμευσης NF-κΒ στο

hTREX84

γονίδιο υποκινητή και να αποδείξει με χρωματίνης ανοσοκατακρήμνισης (μάρκας) και κατευθυνόμενη σε θέση μεταλλαξιγένεση που ΚεΙΑ /p65 δεσμεύει περιοχές και προκαλεί

hTREX84

έκφρασης. Τέλος, δείχνουμε με ανοσοϊστοχημεία (IHC) που ΚεΙΑ /p65 εκφράζεται σε αφθονία σε κακοήθη κύτταρα που εκφράζουν κατά παρέκκλιση hTREX84 υποδεικνύοντας ότι ΚεΙΑ /p65 θα μπορούσε να διαδραματίσει κεντρικό ρόλο στη ρύθμιση της έκφρασης hTREX84 στον καρκίνο. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η υπερέκφραση του

hTREX84

συνδέεται με το μετασχηματισμό των καρκινικών κυττάρων, τον πολλαπλασιασμό και μπορεί να ρυθμίζεται από ΚεΙΑ /p65

Παράθεση:. Guo S, Liu Μ, Godwin AK (2012) Μεταγραφική κανονισμός του hTREX84 σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα. PLoS ONE 7 (8): e43610. doi: 10.1371 /journal.pone.0043610

Επιμέλεια: Λιν Ζανγκ, University of Pennsylvania School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 12 Ιούνη 2012? Αποδεκτές: 23 Ιούλη του 2012? Δημοσιεύθηκε: 27 του Αυγούστου του 2012

Copyright: © Guo et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας, R01 CA140323 και 5U01CA113916, το Υπουργείο άμυνας του Καρκίνου του μαστού Πρόγραμμα Έρευνας του αμερικανικού στρατού Ιατρικών Ερευνών, DAMD17-03-1-0312, και το καρκίνο των ωοθηκών Ταμείο Έρευνας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο TREX (μεταγραφή /εξαγωγή) σύμπλοκο παίζει ένα ρόλο κλειδί στην μεταγραφική επιμήκυνση και τη μεταφορά του mRNA από τον πυρήνα στο κυτταρόπλασμα [1]. Αυτό το συγκρότημα είναι συντηρημένο από ζύμη στον άνθρωπο. Στη ζύμη, TREX συγκρότημα αποτελείται από το συγκρότημα THO και η εξαγωγή του mRNA παράγοντες Sub2 και Yra1 [2], [3], [4], [5]. THO συγκρότημα περιέχει ετεροτετραμερείς υπομονάδες, Tho2, Hpr1, Mft1 και Thp2 [6], [7]. Επιπλέον, Tex1, μια πρωτεΐνη άγνωστης λειτουργίας, βρέθηκε να συν-καθαριστεί με το σύμπλοκο THO, αν και σε υποστοιχειομετρικές ποσότητες [3], [5]. TREX πολύπλοκα συστατικά συνδέονται επίσης με Gbp2 και Hrb1 [5], [8]. Αυτές οι δύο πρωτεΐνες είναι το σήμα κατατεθέν της σερίνης-αργινίνης-πλούσια οικογένεια παραγόντων ματίσματος και προσλαμβάνονται σε εν τω γεννάσθαι mRNAs μέσω μιας φυσικής αλληλεπίδρασης με σύμπλεγμα TREX κατά την διάρκεια επιμήκυνσης μεταγραφής [9]. Λειτουργικά, το σύμπλοκο THO παίζει ένα ρόλο στη μεταγραφή που εξαρτάται από ανασυνδυασμό και τη μεταγραφή [6]. Έχει δειχθεί ότι το σύμπλοκο THO προσλαμβάνεται για ενεργά μεταγράφεται γονίδια [5] και που απαιτούνται για την αποτελεσματική επιμήκυνση της μεταγραφής [4]. Null μεταλλάξεις σε κάθε μία από τα γονίδια που κωδικοποιούν τις υπομονάδες του συμπλόκου μολύβδου THO σε ελάττωμα εξαγωγή mRNA [5], [10].

Πρόσφατα, η

Drosophila

και τα ανθρώπινα σύμπλοκα χαρακτηρίστηκαν TREX από διάφορες ομάδες περιλαμβανομένων δική μας [5], [11], [12], [13]. Ανθρώπινα συγκρότημα TREX περιλαμβάνει THO2 (συστατικό Tho2 μαγιά), HPR1 (μαγιά Hpr1), UAP56 (Sub2 μαγιά) και ALY (Yra1 μαγιά). Επιπλέον, το ανθρώπινο συγκρότημα TREX περιέχει άλλα συστατικά, TREX90 (fSAP79), TREX40 (fSAP35) και TREX30 (fSAP24), οι οποίες έχουν τους ομολόγους σε

Drosophila

(THOC5, 6 και 7, αντίστοιχα), αλλά όχι σε ζυμομύκητες [1], [11], [14]. Τόσο το

Drosophila

και τα ανθρώπινα TREX ομόλογα συγκρότημα έλλειψη Mft1 ή Thp2. Παρ ‘όλα αυτά,

Drosophila

και μελέτες ανθρώπινη παρέμβαση RNA του Tho2 ή /και Hpr1 δείχνουν ότι η μεταζωική και πολύπλοκη ανθρώπινη THO, όπως και τον ομόλογό μαγιά της, λειτουργεί σε mRNA των εξαγωγών [11], [13]. TREX84 /HPR1 συνεργάτες με επιμήκυνση RNA πολυμεράση II, υποδεικνύοντας την ανθρώπινη συγκρότημα THO λειτουργεί επίσης στην μεταγραφική επιμήκυνση [12].

συμφέροντα μας στην ανθρώπινη HPR1 προέκυψε από την παρατήρηση μας ότι p84N5 ήταν παρεκκλίνοντα εκφράζεται στον ανθρώπινο καρκίνο του μαστού [15] . p84N5 ανακαλύφθηκε ως δεσμευτική πρωτεΐνη που συνδυάζεται με την πρωτεΐνη καταστολέα ρετινοβλαστώματος (RB) [16]. Για μεγάλο χρονικό διάστημα, αυτό χρησίμευσε ως δείκτης πυρηνική πρωτεΐνη [17], [18]. Παραδόξως, αναγνωρίσαμε ότι p84N5 είναι ανθρώπινη Hpr1, ένα ομόλογό μαγιά, στο συγκρότημα TREX [11]. Το εύρημα αυτό επιβεβαιώθηκε και από άλλες ομάδες ανεξάρτητα [12], [14] και αναφέρεται ως hTREX84 /HPR1.

Ο μηχανισμός ρύθμισης της ανθρώπινης συγκρότημα TREX, συμπεριλαμβανομένων hTREX84 σε φυσιολογικά και μετασχηματισμένα κύτταρα δεν είναι καλά μελετημένη. Αναφέρουμε ότι hTREX84 εκφράζεται μη φυσιολογικά τόσο του μαστού και καρκίνο των ωοθηκών και η έκφρασή του ρυθμίζεται εν μέρει από ΚεΙΑ /p65.

Αποτελέσματα

Υπερ-έκφραση hTREX84 σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου των ωοθηκών

Προηγουμένως, ανέφεραν ότι η έκφραση του hTREX84 σε όγκους μαστού είναι αντιστρόφως ανάλογη προς ορμονικών υποδοχέων [11]. Επιπλέον, όταν συγκρίναμε την έκφραση hTREX84 mRNA σε 6 αντιπροσωπευτικές μείωση mammoplasty δείγματα των οποίων 3 άτοκα προεμμηνοπαυσιακές και 3 parous προεμμηνοπαυσιακές γυναίκες,

hTREX84

έκφραση mRNA ήταν σημαντικά αυξημένα στους άτοκα δείγματα [11] [τα δεδομένα δεν απεικονίζονται]. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι hTREX84 όχι μόνο απορυθμισμένη σε όγκους του μαστού, αλλά επίσης πολύ καλά ρυθμισμένη κατά τη διάρκεια κανονικής ανθρώπινης διαφοροποίηση λοβιακή του μαστού και μπορεί να τροποποιηθεί από ορισμένες ορμόνες, όπως η ανθρώπινη χοριακή γοναδοτροπίνη (hCG). Ως εκ τούτου, το ερώτημα εάν hTREX84 επίσης παρεκκλίνοντα εκφράζεται σε άλλους όγκους εξαρτώμενους από ορμόνες, όπως ο καρκίνος των ωοθηκών. Παρατηρήσαμε ότι hTREX84 ήταν εντόνως εκφρασμένο σε όλες τις 30 περιπτώσεις επιθηλιακών καρκινωμάτων των ωοθηκών (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Περαιτέρω, προσδιορίσαμε έκφραση hTREX84 (hTREX84 /βήτα-ακτίνης αναλογία) σε πρωτογενείς κυτταρικές καλλιέργειες ανθρώπινων επιθηλιακών επιφάνεια των ωοθηκών (ΣΩΛΗΝΑ) (n = 10), SV40 Tag αθάνατος, μη ογκογόνων ΣΩΛΗΝΑ κυτταρικές γραμμές (n = 10) και των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών γραμμές (n = 11) με κηλίδωση Western ανάλυση. Βρήκαμε ότι η έκφραση hTREX84 είναι σημαντικά αυξημένα σε αθάνατες κυτταρικές γραμμές (μέση τιμή, 0,51) σε σύγκριση με πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα (μέση τιμή, 0.125? Ρ = 0,00024) και φτάνει στο υψηλότερο επίπεδο σε καρκινικές κυτταρικές σειρές (μέση τιμή, 2,10? Ρ = 0,0022) (Εικόνα 1α, β).

Α,

έκφραση της πρωτεΐνης hTREX84 σε αντιπροσωπευτικές κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών (OVCAR10, UPN251, UPN275, UPN289), αθάνατο επιθηλιακών κυτταρικών σειρών (HIO- 118, ΟΑΥ-102, ΟΑΥ-104, ΟΑΥ-113), πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα (ROE). Πρωτεϊνικά δείγματα διαχωρίστηκαν σε μια γέλη SDS-πολυακρυλαμιδίου ανοσοαποτύπωση χρησιμοποιώντας αντι-hTREX84 ή μονοκλωνικά αντισώματα β-ακτίνης.

Β,

αναλογία hTREX84 /β-ακτίνης σε πρωτογενείς καλλιέργειες επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών (επιθηλιακό), αθάνατο επιθηλιακών κυτταρικών σειρών (ΟΑΥ) και κυτταρικές σειρές καρκίνου (καρκίνος).

Η

Για την περαιτέρω αποσαφηνιστεί η βιολογική σημασία των hTREX84 σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών, το siRNA έναντι

hTREX84

επιμολύνθηκε σε OVCAR10 κύτταρα. RT-PCR ανάλυση χρησιμοποιώντας εκκινητές ολιγονουκλεοτιδίων ειδικά για το

hTREX84

γονίδιο έδειξε ότι το επίπεδο έκφρασης του μεταγράφου hTREX84 μειώνεται ~ 70 έως 80% από την επιμόλυνση του siRNA σε κύτταρα OVCAR10 όταν συγκρίθηκε με εκείνη των κυττάρων ελέγχου . Υπό αυτές τις συνθήκες, τα σταθερά επίπεδα έκφρασης του αφυδρογονάσης γλυκεραλδεΰδης-3-φωσφορικής (

GAPDH

) γονίδιο ελήφθησαν σε αμφότερα τα κύτταρα (Σχήμα 2α). hTREX84 στοχευμένες siRNAs μειώνεται αποτελεσματικά τα επίπεδα της hTREX84, αλλά δεν επηρέασε τα επίπεδα των μη στοχευμένων μεταγραφές, όπως η β-ακτίνη (Σχήμα 2β). Ανοσοκηλίδωση επιβεβαίωσε ότι η πρωτεΐνη ήταν hTREX84 μειωθεί δραστικά σε μία πλειονότητα των κατεργασμένων κυττάρων (Σχήμα 2c). Ο συνολικός αριθμός των κυττάρων μειώθηκε σημαντικά μετά από θεραπεία με hTREX84-siRNAs σε σύγκριση με κύτταρα που κατεργάζονται με αντιδραστήριο διαμόλυνσης ή ελέγχου-siRNA (Σχήμα 2d). Παρατηρήσαμε ότι η ανάπτυξη των κυττάρων μειώθηκε σε καλλιέργειες που έλαβαν θεραπεία με hTREX84-siRNA σε σύγκριση με τον έλεγχο (Σχήμα 2Ε). δοκιμασίες Γκουάβα νεξίνη έδειξε ότι υπήρχε επίσης μία μείωση του αννεξίνης V-ΡΕ και θετικών κυττάρων 7-AAD σε κύτταρα κατεργασμένα με hTREX84-siRNAs, σε σύγκριση με τους μάρτυρες και οι διαφορές ήταν επίσης μη σημαντικό (ρ παρατεταμένη αγγειογένεση? και εισβολή ιστού και μετάσταση [37]. NF-κΒ είναι σε θέση να επάγει αρκετές αυτών των κυτταρικών μεταβολών [38], και έχει αποδειχθεί ότι ενεργοποιείται ιδιοσυστατικά σε ορισμένους τύπους καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού. Προηγούμενες μελέτες έχουν τεκμηριώσει αυξημένη ή συστατική δραστικότητα ΝΡ-κΒ δέσμευσης DNA τόσο σε μαστικού κυτταρικές γραμμές καρκινώματος και σε πρωτογενή κύτταρα καρκίνου του μαστού του ανθρώπου και τρωκτικού προέλευσης [39], [40], [41]. Αυτό θα μπορούσε να συσχετιστεί με την αύξηση του επιπέδου της επιδερμικού αυξητικού υποδοχέων της οικογένειας παράγοντα (EGFR) [42]. Χρησιμοποιώντας ένα χρωματίνη ανοσοκαθίζηση [43], [44] και λειτουργικές δοκιμασίες που αποδεικνύεται σαφώς ότι ΚεΙΑ /p65, μία από τις υπομονάδες του NF-κΒ, δεσμεύεται στον προαγωγό του

hTREX84

και επηρέασε

hTREX84

έκφραση του mRNA. Επιπλέον, όταν εξαντλούνται συγκεκριμένα από προσεγγίσεις siRNA, απώλεια ΚεΙΑ /p65 μπλοκάρει την έκφραση hTREX84. Για να καθοριστεί περαιτέρω εάν ΝΡ-κΒ ρυθμίζει άμεσα

hTREX84

δραστηριότητα υποκινητή μέσω των θέσεων δέσμευσης NF-κΒ, πραγματοποιήσαμε μια δοκιμασία υποκινητή λουσιφεράσης στην οποία οι θέσεις δέσμευσης NF-κΒ μεταλλάχθηκαν ξεχωριστά ή σε συνδυασμό. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι θέσεις δέσμευσης ΝΡ-κΒ ήταν απαραίτητες για μέγιστη δραστικότητα προαγωγέα. Εξετάσαμε περαιτέρω την πρωτεΐνη έκφραση ΚεΙΑ /p65 από την IHC σε δείγματα ανθρώπινου καρκίνου του μαστού και έδειξε ένα σταθερό μοτίβο της υπερ-έκφρασης σε πιο επιθετική, φτωχά διαφοροποιημένοι όγκοι. Ως εκ τούτου, ΚεΙΑ /p65 εκφράζεται με ένα τρόπο παρόμοιο με hTREX84 [11], υποδεικνύοντας ότι αυτές οι δύο πρωτεΐνες μπορούν να συμβάλλουν συνεργατικά για την εξέλιξη του όγκου και της μετάστασης.

NF-κΒ και ΚεΙΑ /p65 υπομονάδας του, ιδίως μπορεί να προωθήσει ογκογένεση μέσω της ικανότητάς του να επάγει την έκφραση των αντι-αποπτωτικών γονιδίων όπως

Bcl

-Χι,

ΧΙΑΡ

και

ΙΕΧ

-1L [45], [46]. NF-κΒ μπορεί επίσης να διεγείρει τον πολλαπλασιασμό του όγκου μέσω επαγωγής ορισμένων ογκογονιδίων όπως η κυκλίνη D1 [47] και c-MYC [48]. Πρόσθετες γονιδίων στόχων του ΝΡ-κΒ οι οποίες συμβάλλουν όγκου κυτταρική μετανάστευση και /ή μετάστασης περιλαμβάνουν την κυτταρική συγκόλληση μοριακών, όπως ICAM-1 και VCAM-1 [49]? μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας, όπως ΜΜΡ-9? υποδοχείς χημειοκινών, όπως CXCR4, και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) [50]. Σε μια πρόσφατη έκθεση, NF-κΒ έχει αποδειχθεί ότι ρυθμίζει ένα μεγάλο δίκτυο των γονιδίων? Πολύ περισσότερο από ό, τι είχε αρχικά εκτιμηθεί [51]. Η σημασία του

hTREX84

ως νέο στόχο ΚεΙΑ /p65 δεν θα πρέπει να παραβλέπεται ως απλό άλλη οργανωμένη γονίδιο NF-κΒ, τότε. hTREX84 είναι απαραίτητη για την μεταγραφική επιμήκυνση και mRNA εξαγωγή [11]. Έτσι, είναι ενδιαφέρον να προβούμε σε εικασίες ότι η NF-κΒ μπορεί να μεσολαβήσει άμεσα τον μεταβολισμό του mRNA μέσω της ρύθμισης του

hTREX84

στα καρκινικά κύτταρα. NF-κΒ είναι επίσης γνωστό ότι επάγει την έκφραση ορισμένων κυτοκινών και χημειοκινών και, με τη σειρά της, προκαλείται από τους [48], [52]. Αυτή η θετική ανάδραση mechanismis συνήθως διατηρείται υπό έλεγχο για την παραγωγή ενός χρόνιου ή υπερβολική αντίδραση που σχετίζονται με ορισμένες ασθένειες, όταν NF-κΒ γίνεται έκτροπα ενεργό [52]. hTREX84 και ο ΚεΙΑ /p65 υπομονάδα του ΝΡ-κΒ θα μπορούσε επίσης να ενεργοποιηθεί αμοιβαία σε επιθετικό καρκίνο του μαστού. Σε προηγούμενες μελέτες hTREX84 διεγείρεται η μεταγραφή του ΚεΙΑ /p65 [53]? Ωστόσο, ο ρόλος του hTREX84 ως μεταγραφικός παράγοντας δεν έχει καθιερωθεί. Παρατηρήσαμε επίσης ότι η έκφραση hTREX84 ενισχύεται σε υποδοχέα οιστρογόνου (ER) αρνητικές καρκίνο του μαστού [11], ενώ συστατική ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ έχει δειχθεί ότι συνδέεται με πιο επιθετική καρκίνους του μαστού [40], [42], [54] . Ως εκ τούτου, η έλλειψη μοριακών στόχων σε ER-αρνητικό καρκίνο του μαστού παραμένει σημαντική θεραπευτική εμπόδιο. Ακριβώς όπως NF-κΒ, hTREX84 θα μπορούσε να θεωρηθεί ένα ιδανικό θεραπευτικό στόχο για καρκίνους του μαστού ER-αρνητική.

Άλλα μεταγραφικοί παράγοντες είναι πιθανό να συμβάλλουν στη ρύθμιση του

hTREX84

. Τέσσερις ΑΡ-1 θέσεις πρόσδεσης εντοπίστηκαν στην hTREX84

περιοχή του υποκινητή

. Ο παράγοντας μεταγραφής ΑΡ-1 είναι μια διμερής συγκρότημα που περιέχει μέλη της JUN, FOS, ATF και οικογένειες πρωτεϊνών MAF [55]. Αυξημένα δραστικότητας ΑΡ-1 βρέθηκε επίσης σε ανθρώπινους όγκους του μαστού και ανθεκτικοί στα φάρμακα κυττάρων όγκου μαστού γραμμές [56], [57], [58]. NF-κΒ μπορεί έμμεσα αυξάνουν την έκφραση του ΑΡ-1-ρυθμιζόμενα γονίδια από φυσικώς συνδέοντας με την ΑΡ-1 [59]. Ο πιθανός ρόλος του AP-1 και άλλους παράγοντες μεταγραφής στη ρύθμιση

μένει να καθοριστεί hTREX84

έκφραση? Ωστόσο, πρόσφατες μελέτες μας έχουν δείξει ότι ΚεΙΑ /p65 παίζει κεντρικό ρόλο στη ρύθμιση

hTREX84

έκφρασης σε καρκίνο του μαστού και των ωοθηκών.

Υλικά και Μέθοδοι

Γραμμές κυττάρων και κυττάρων Πολιτισμός

Πολυμέσα και τα αντιδραστήρια καλλιέργειας κυττάρων παρασκευάστηκαν με τη διευκόλυνση της κυτταρικής καλλιέργειας σε Αντικαρκινικού Κέντρου Fox Chase. Δέκα πρωτογενή ανθρώπινα επιφάνεια του επιθηλίου των ωοθηκών (ΣΩΛΗΝΑ) κυτταροκαλλιέργειες και 10 SV40 Tag αθάνατη, μη ογκογόνων κυτταρικών σειρών ΣΩΛΗΝΑ καθιερώθηκαν και καλλιεργούνται σε 199 Μεσαίο με 15% FBS και ινσουλίνη (290 μονάδες /ανά 500 ml), όπως έχουμε περιγράψει στο παρελθόν [ ,,,0],60]. Τα επιθηλιακά κύτταρα αθανατοποιημένα ανθρώπινου μαστού MCF-10F (HMECs), που αναπτύχθηκαν σε DMEM /F12 θρεπτικό μέσο συμπληρωμένο με 5% ορό αλόγου, ινσουλίνη, υδροκορτιζόνη, επιδερμικό αυξητικό παράγοντα, τοξίνη χολέρας, και αντιβιοτικά, καθιερώθηκαν από έναν ασθενή με ινοκυστικής νόσου και δεν εμφανίζουν τα χαρακτηριστικά ενός κακοήθους φαινοτύπου [61], [62]. Ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές των ωοθηκών OVCAR2, OVCAR3, OVCAR4, OVCAR5, OVCAR8, OVCAR10, UPN251, UPN275, UPN289, UPN300, Α2780 [63], [64], [65], [66], και κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού, MDA-