Αφηρημένο

Ιστορικό

καρκινικό αντιγόνο (TA) -targeted μονοκλωνικό αντίσωμα (mAb) ανοσοθεραπεία μπορεί να είναι αποτελεσματική για τη θεραπεία της ένα ευρύ φάσμα αιτιολογιών καρκίνο? Ωστόσο, αυτές οι προσεγγίσεις έχουν δείξει μεταβλητή κλινική αποτελεσματικότητα για τη θεραπεία ασθενών με καρκίνο του προστάτη (PCA). Ένα εμπόδιο προς το παρόν εμποδίζουν την μεταγραφική πρόοδος ήταν η αδυναμία να προσδιοριστεί ποσοτικά η δόση mAb που φτάνει στην τοποθεσία του όγκου και συνδέεται με τις στοχευμένες ΤΒ. Η σύζευξη του mAb στην απεικόνιση μαγνητικού συντονισμού νανοσωματιδίων με βάση (MRI) ανιχνευτές θα πρέπει να επιτρέπουν

in vivo

μέτρηση του βιοκατανομές ειδικό ασθενούς? Οι μετρήσεις αυτές θα μπορούσε να διευκολύνει τη μελλοντική ανάπτυξη νέων υποδειγμάτων δοσιμετρίας όπου δόση mAb τιτλοποιείται για τη βελτιστοποίηση των αποτελεσμάτων για μεμονωμένους ασθενείς.

Μέθοδοι

Το προστατικό αντιγόνο βλαστικών κυττάρων (PSCA) είναι ευρέως εκφράζεται στην επιφάνεια των καρκινικά κύτταρα προστάτη (PCA). Αντι-ανθρώπινο PSCA μονοκλωνικά αντισώματα (mAb 7F5) δεσμεύθηκαν να Au /Fe

3Ο

4 (GoldMag) νανοσωματίδια (mAb 7F5 @ GoldMag) για να χρησιμεύσει ως PSCA-ειδικό theragnostic ανιχνευτή MRI επιτρέπει την οπτικοποίηση του mAb βιοκατανομή

in vivo

. Πρώτον, η δέσμευση αξιολογήθηκε η αποτελεσματικότητα ακινητοποίησης αντίσωμα των σωματιδίων GoldMag και η αποτελεσματικότητα για PSCA-ειδικό. Στη συνέχεια, PC-3 (καρκίνος του προστάτη με PSCA υπερ-έκφραση) και SMMC-7721 (κύτταρα ηπατώματος χωρίς έκφραση PSCA) ποντικοί που φέρουν όγκο δέχτηκαν ένεση με mAb 7F5 @ GoldMag για MRI. MRI βιοκατανομές καθετήρα αξιολογήθηκαν σε αυξανόμενα χρονικά διαστήματα μετά την έγχυση? ανταπόκριση της θεραπείας αξιολογήθηκε με μετρήσεις σειριακό όγκο του όγκου

Αποτελέσματα

Η στοχευμένη σύνδεση των ανιχνευτών mAb 7F5 @ GoldMag σε PC-3 κύτταρα επαληθεύτηκε με τη χρήση οπτικών εικόνων και MRI.? επιλεκτική δεσμευτική δεν παρατηρήθηκε για SMMC-7721 όγκων. Η αποτελεσματικότητα ανοσοθεραπευτικό του mAb 7F5 @ GoldMag σε 3 PC-ποντικούς που φέρουν όγκο επαληθεύτηκε με σημαντική αναστολή της ανάπτυξης του όγκου σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου χωρίς θεραπεία.

Συμπέρασμα

ελπιδοφόρα αποτελέσματα μας υποδηλώνουν την εφικτότητα του χρησιμοποιώντας mAb 7F5 ανιχνευτές @ GoldMag ως νέο παράδειγμα για την ανίχνευση και ανοσοθεραπευτική αγωγή προστάτη. Έχουμε αισιόδοξα Αναμένουμε ότι οι προσεγγίσεις που έχουν τη δυνατότητα να μεταφραστούν σε κλινικές ρυθμίσεις

Παράθεση:. Ρεν J, Wang F, G Wei, Yang Υ, Liu Υ, Wei M, et al. (2012) MRL του καρκίνου του προστάτη αντιγόνου Έκφραση για τη διάγνωση και lmmunotherapy. PLoS ONE 7 (6): e38350. doi: 10.1371 /journal.pone.0038350

Επιμέλεια: Dominique Heymann, Faculté de Ιατρικής de Nantes, Γαλλία

Ελήφθη: 15η Ιανουαρίου, 2012? Αποδεκτές: 3 του Μάη του 2012? Δημοσιεύθηκε: 27 του Ιούν 2012

Copyright: © 2012 Ren et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (NSFC) 30973408, 81000627 NSFC και NSFC 81001015. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου.

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου μεταξύ των ανδρών στις Ηνωμένες Πολιτείες και είναι η δεύτερη κορυφαία αιτία θανάτου από καρκίνο στους άνδρες [1]. Μεταφρασμένη προστάτη μπορεί να αντιμετωπιστεί με χειρουργική επέμβαση ή ακτινοθεραπεία, αλλά η ασθένεια υποτροπιάζει σε περίπου 20 έως 30% των ασθενών. θεραπεία στέρηση ανδρογόνου, η πιο κοινή θεραπεία μετά την επανάληψη, είναι αποτελεσματική, αλλά η νόσος εξελίσσεται τελικά στους περισσότερους ασθενείς που λαμβάνουν τέτοια αγωγή [2], [3], [4]. Για τους άνδρες με μεταστατικό προστάτη, διάμεση επιβίωση τελευταία φάση 3 μελέτες κυμαίνονταν 12,2 έως 21,7 μήνες [1], [2], [3], [4]. Χημειοθεραπευτικό παράγοντα, ντοσεταξέλη, είναι η μόνη εγκεκριμένη θεραπεία δειχθεί ότι παρατείνει την επιβίωση μεταξύ των ανδρών με την προϋπόθεση αυτή, προσδίδει μια διάμεση επιβίωση όφελος από 2 έως 3 μήνες [5], [6]. Οι συμβατικές αντικαρκινικές θεραπείες, όπως η χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία, χαρακτηρίζονται από έλλειψη ειδικότητας καρκινικού κυττάρου.

πειστικές αποδείξεις δείχνουν ότι αντιγόνο όγκου (TA) -targeted μονοκλωνικό αντίσωμα (mAb) -με βάση την ανοσοθεραπεία είναι κλινικά αποτελεσματικό για η θεραπεία ενός ευρέως φάσματος αιτιολογιών του καρκίνου [7], [8]. Ωστόσο, TA-στοχευμένη ανοσοθεραπεία mAb που βασίζεται απέδειξε μεταβλητή κλινική αποτελεσματικότητα για τη θεραπεία ασθενών με προστάτη? αυτή η μορφή θεραπείας υπήρξε αποτελεσματική μόνο σε ένα υποσύνολο της νόσου που εκφράζει το συγκεκριμένο στόχο TA [9], [10]. Ένα εμπόδιο που επί του παρόντος εμποδίζει μεταφραστική πρόοδος ήταν η αδυναμία να ποσοτικοποιηθεί η ασθενής-ειδική δόση mAbs που προσδένονται στα στοχευόμενα ΤΑ. Η πληροφορία αυτή παραμένει σε μεγάλο βαθμό άγνωστη σε κλινικό περιβάλλον, αλλά θα επιτρέψει προσαρμογές της δόσης για συγκεκριμένο ασθενή ή την έγκριση των στρατηγικών εναλλακτική θεραπεία όταν είναι απαραίτητο (δηλαδή στοχεύουν σε μια διαφορετική αντιγόνο και /ή να χρησιμοποιήσει εναλλακτικές μονοκλωνικά αντισώματα).

Σε κλινικές ρυθμίσεις, 18- F φθοριοδεοξυγλυκόζη (FDG) τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων (ΡΕΤ) παρέχει έγκαιρη και ακριβής τρόπος για να καθοριστεί εάν ο καρκίνος ανταποκρίνεται στη θεραπεία. Ορισμένες νέες τεχνολογίες μοριακής απεικόνισης με PET κρατήσει την υπόσχεση για τη διαχείριση του προστάτη. Fluorestradiol (FES) μετρά υποδοχείς οιστρογόνων για την παρακολούθηση των όγκων και φθοροθυμιδίνη (FLT) παρέχει ενδείξεις για την κυτταρική ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό [11], [12]. Πιο πρόσφατα, υπάρχουν οι άλλες μεταβολικές ιχνηλατών ΡΕΤ έχουν δοκιμαστεί με επιτυχία για τον καρκίνο του προστάτη [13], [14]. Είναι σημαντικό, υπήρξε μια μελέτη που χρησιμοποίησε εξανθρωπισμένου αντι-PSCA (αντιγόνο βλαστικών κυττάρων προστάτη) ανέπαφο αντίσωμα ως ανιχνευτή μοριακή απεικόνιση για την απεικόνιση PET, το οποίο είναι επί του παρόντος υπό ανάπτυξη για την αξιολόγηση σε μια πιλοτική κλινική μελέτη απεικόνισης [13]. Ωστόσο, το ΡΕΤ μπορεί να παρέχει ανεπαρκή χωρική ανάλυση για την ανίχνευση πρώιμο στάδιο του προστάτη [15]. Τα πλεονεκτήματα της μαγνητικής τομογραφίας πάνω τεχνικές πυρηνικά βάση μοριακής απεικόνισης περιλαμβάνουν υψηλότερη χωρική ανάλυση, εξαιρετική αντίθεση μαλακών ιστών, και την ικανότητα να ενσωματώσουν τα δεδομένα της μοριακής, ανατομικά και φυσιολογικά απεικόνισης, όλα χωρίς να εκθέτουν τον ασθενή σε δυνητικά επιβλαβείς ραδιονουκλίδια. Επιπλέον, η μαγνητική τομογραφία προσφέρει μια εικόνα για τη λειτουργία του όγκου και έχει τη δυνατότητα να γεφυρώσει περαιτέρω το χάσμα μεταξύ της μοριακής βιολογίας και της κλινικής μετάφραση.

Πρόσφατες ερευνητικές προσπάθειες προ-κλινική ανάπτυξη πολυ-τροπικότητα μεθόδους μοριακής απεικόνισης έχουν τη δυνατότητα για μη επεμβατική διάγνωση του προστάτη και απεικόνιση καθοδηγούμενη ανοσοθεραπεία [16], [17]. Πολλαπλές ομάδες επιδιώκουν ενεργά την ανάπτυξη των ανιχνευτών απεικόνισης για την κυτταρική και μοριακή μαγνητική τομογραφία [12], [16], [18], [19], [20]. Οξειδίου υπερπαραμαγνητικού σιδήρου (SPIO) νανοσωματίδια μπορούν να δεσμευτούν εύκολα με διάφορες μοριακών δεικτών, συμπεριλαμβανομένων συνδέτες, αντισώματα, και πεπτίδια όπως MRI ανιχνευτές [21], [22], [23], [24]. Το στατικό μαγνητικό πεδίο σημαντικά διαταραχθεί από αυτούς τους ανιχνευτές SPIO βάση, η Απώλεια Φάσης της επεξεργασίας περιστροφές οδηγεί σε εντοπισμένη απώλεια σήματος σε εικόνες MR.

Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια με ένα κέλυφος /δομή πυρήνα συντίθενται με αναγωγή Au

3+ με υδροξυλαμίνη υπό την παρουσία Fe

3Ο

4 [25], [26]. Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια χρησιμοποιήθηκαν για αυτή τη μελέτη με μέσο μέγεθος 50 nm (κέλυφος /πυρήνας, 5/45 nm) σε διάμετρο (GoldMag Βιοτεχνολογία Co, Ltd, Xi’an). Μαγνητικά νανοσωματίδια (Fe

3Ο

4) έχουν προσελκύσει ευρεία προσοχή λόγω των πιθανών εφαρμογών τους σε μαγνητική τομογραφία [21], [22], [23], [24], [27]. Ο σχηματισμός του χρυσού κελύφους επί του μαγνητικού νανοσωματιδίου διεξήχθη με μέθοδο επαναληπτικής αναγωγή χρησιμοποιώντας υδροξυλαμίνη [28], [29]. Ο Fe

3Ο

4 πυρήνας παρέχει ένα σωματίδιο ενός μικρού μεγέθους με σημαντική μαγνητική ροπή, και μια επίστρωση χρυσού στο Fe

3Ο

4 πυρήνας μπορεί να εισαγάγει μια καλή πλατφόρμα για περαιτέρω σύζευξη με βιομόρια ειδικά για βιοαισθητήρες κατασκευής. Το χρυσό επικαλυμμένα Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια έχουν αναφερθεί ότι εμφανίζουν καλή βιοσυμβατότητα και η συγγένεια μέσω αμίνη /θειόλης τερματικών ομάδων [28], [29]. Με σχετική μεγαλύτερη χωρητικότητα ακινητοποίηση του αντισώματος, Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια είναι μια καλή φορέα αντισώματος σε σχέση με τα νανοσωματίδια Au και Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια. Λόγω των εγγενών μαγνητισμό υψηλό κορεσμό, Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια θα μπορούσε να αντιδράσει άμεσα σε εξωγενείς μαγνητικό πεδίο με λιγότερη κατανάλωση χρόνου κατά τη διάρκεια της διαδικασίας διαχωρισμού. Ως εκ τούτου, τα επικαλυμμένα με χρυσό μαγνητικά νανοσωματίδια πληρούν τις βασικές απαιτήσεις ως φορέας της ανοσολογίας. Αυτά Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια απαιτούν μόνο ένα μοναδικό στάδιο για την ακινητοποίηση αντισωμάτων και παρέχουν σχετικά μεγάλες και σταθερές ικανότητες σύνδεσης αντισώματος [20], [26], [30], [31], [32]. Αντίσωμα συζευγμένο Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια θα μπορούσε ενδεχομένως να χρησιμεύσει ως ένα ευαίσθητο theragnostic ανιχνευτή MRI επιτρέπει την

in vivo

οπτικοποίηση των mAb βιοκατανομή και στοχευμένη παράδοση σε όγκους. Οι τεχνικές αυτές θα μπορούσαν τελικά να επιτρέψει στους γιατρούς να βελτιστοποιήσετε την ατομική δόση για βελτιωμένα αποτελέσματα κατά τη διάρκεια της ανοσοθεραπείας και /ή επιτρέπουν την ταχεία, έγκαιρη έγκριση των στρατηγικών εναλλακτική θεραπεία, όταν απαιτείται.

Το προστατικό αντιγόνο βλαστικών κυττάρων (PSCA) είναι ένα γλυκοζύλ φωσφοϊνοσιτόλης-αγκυροβολημένα πρωτεΐνη κυτταρικής επιφάνειας που ανήκει στο Thy-1 /Ly-6 τάξη αντιγόνων επιφανείας. PSCA είναι ένα ιδανικό υποψήφιο για την ανάπτυξη των αντιδραστηρίων για την ανίχνευση ή ανοσοθεραπεία του προστάτη επειδή έχει αυξημένη ειδικότητα έκφρασης για την PCA και έχει μια τοποθεσία επιφανείας κυττάρου [33], [34], [35], [36]. mAb 7F5 σήμερα συνιστάται για την ανίχνευση των PSCA ανθρώπινης προέλευσης κατά τη διάρκεια της Western Blotting, ανοσοφθορισμό και κυτταρομετρία ροής διαδικασιών [36], [37].

Σε αυτή τη μελέτη, το mAb 7F5 συζεύχθηκε με Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια για την παραγωγή νέων MRI theragnostic καθετήρα (7F5 @ Au /Fe3O4) για την PCA. Ο σκοπός της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η αποτελεσματικότητα αυτού του ιχνηλάτη theragnostic MRI που στοχεύουν ειδικά PSCA επί της επιφανείας των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του προστάτη (PC-3 κύτταρα) για την ανίχνευση και την ανοσοθεραπεία σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού.

Υλικά και μέθοδοι

Γραμμές κυττάρων και ζωικό μοντέλο

Αυτή η μελέτη διεξήχθη με την έγκριση της επιτροπής Φροντίδα και Χρήση Θεσμικών ζώων. Όλα τα ζώα στεγάστηκαν και χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις οδηγίες φροντίδας ζώων και την Επιτροπή Χρήσης και όλες οι εργασίες των ζώων εγκρίθηκε από την αρμόδια επιτροπή (IACUC 0000000 και 0000000A-1). Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την τοπική (επιτροπή δεοντολογίας, τέταρτη Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο 127/2008) Επιτροπή Ηθικής και όλα τα ζώα έλαβαν ανθρώπινη φροντίδα σύμφωνα με «τις αρχές του Εργαστηρίου Φροντίδα Ζώων» που διατυπώθηκε από την Εθνική Εταιρεία Ιατρικής Έρευνας και το «Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των πειραματόζωων »που δημοσιεύθηκε από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (ΝΙΗ Δημοσίευση Νο 86-23, αναθεωρήθηκε το 1996).

Τέσσερις έως έξι εβδομάδων άτριχων ποντικών /c ποντίκια (αρσενικά Bab , βάρους μεταξύ 25 και 30 g) χρησιμοποιήθηκαν για αυτές τις μελέτες. Μία κυτταρική γραμμή καρκινώματος ανθρώπινου προστάτη? η PC-3 ξεκίνησε από ένα οστό μετάσταση ενός αδενοκαρκινώματος του προστάτη βαθμού IV [33], [34], [35], [36]. Τα κύτταρα ελήφθησαν εμπορικώς από την American Type Culture Collection (ATCC? Rockville, MD) και αναπτύχθηκαν ως μονοστιβάδα σε ελάχιστο βασικό μέσο Eagle (Invitrogen Corp., Grand Island, Νέα Υόρκη) συμπληρωμένο με 15% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) στους 37 ° C υπό ένα μίγμα 95% αέρα και

2 5% CO. Για τη δημιουργία του PC-3 μοντέλο που φέρει όγκο, ποντικός εμβολιάστηκε με 2 × 10

6 κύτταρα /5 ml PBS στο δεξί πλευρό. Ένα άλλο ποντίκι που φέρει τον όγκο (SMMC-7721 όγκοι χωρίς έκφραση PSCA) δημιουργήθηκε για να χρησιμεύσει ως ομάδα ελέγχου. SMMC-7721, ένα καρκίνωμα ανθρώπινου ηπατώματος κυτταρική γραμμή (HCC), καλλιεργήθηκε σε τροποποιημένο μέσο Eagle Dulbecco (DMEM, Invitrogen Corp., Grand Island, Νέα Υόρκη) συμπληρωμένο με 10% FBS στους 37 ° C υπό ένα μίγμα 95% αέρα και 5% CO

2 [38].

Κατασκευή και Αξιολόγηση των mAb 7F5 @ Au /Fe3O4 theragnostic MRI Probe

MRI theragnostic ανιχνευτές κατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας είτε προστάτη ειδικό mAb 7F5 (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, California) ή ένα μη-ειδικό αντίσωμα ποντικού αντι-ανθρώπινης IgG (Wuhan Boster Biology Co. Wuhan) για να χρησιμεύσει ως ανιχνευτής ελέγχου. Τόσο 7F5 @ Au /Fe3O4 και IgG @ Au /Fe3O4 ανιχνευτές κατασκευάστηκαν όπως περιγράφεται προηγουμένως [20], [26], [30], [31], [32]. Εν συντομία, 200 μΙ (1 mg /ml) της Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια τοποθετήθηκαν σε ένα σωλήνα σιφωνίου. Αυτός ο σωλήνας στη συνέχεια τοποθετήθηκε σε ένα μαγνητικό διαχωριστή για 2 λεπτά. 100 μα πρωτεΐνης αντισώματος (είτε mAb 7F5 ή IgG) διαλύθηκε σε ρυθμιστικό σύζευξης 400 μΙ? το διαχωρισμένο Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια συνέχεια προστέθηκαν σε 350 μΐ του διαλύματος αντισώματος. Το υπόλοιπο διάλυμα αντισώματος (50 μΙ) χρησιμοποιήθηκε για τη σύζευξη δοκιμές αποτελεσματικότητας. Το διάλυμα αντισώματος με Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια τοποθετήθηκε σε μία σταθερή θερμοκρασία (37 ° C) σέικερ για 20 λεπτά σε 180 rpm, μεταφέρθηκε σε σωλήνα φυγοκέντρησης. Αυτός ο σωλήνας τοποθετήθηκε σε ένα μαγνητικό διαχωριστή για να απομακρυνθεί το υπερκείμενο ακινητοποιημένου αντισώματος-Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια. 50 μΙ αυτού του υπερκειμένου χρησιμοποιήθηκε για τη σύζευξη δοκιμές αποτελεσματικότητας. Η ικανότητα σύνδεσης της Au /Fe

3Ο

4 επιφάνεια προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο UV-VIS (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts) και η αποτελεσματικότητα σύζευξης (ποσοστό πρόσληψης πρωτεΐνης) υπολογισθείσα: × 100%, με OD ( προ) και OD (post) οι μετρήσεις απορρόφησης στα 280 nm για την 50 μΙ πριν και μετά τη σύζευξη διαλύματα αντισώματος, αντίστοιχα. Η ειδική δέσμευση αξιολογήθηκε προηγουμένως περιγράφεται [20], [26], [30], [31], [32]. Εν συντομία, χωριστά, 5 μg /ml 7F5 @ Au /Fe3O4 ή IgG @ Au /Fe3O4 επωάστηκαν με 5 × 10

5 PC-3 κύτταρα και SMMC-7721 κύτταρα για 30 λεπτά σε ενεργοποιούμενη με φθορισμό διαλογή κυττάρων (FACS ) ρυθμιστικό. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με PBS, χρωματίστηκαν με ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) δεύτερο αντίσωμα συζευγμένο γίδινο αντι-ποντικού μέσω επώασης επί 1,5 ώρες (θερμοκρασία δωματίου). Τα δείγματα πλύθηκαν δύο φορές με PBS για την αξιολόγηση των συγκεκριμένων δέσμευσης χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής δοκιμασίας. Για την ανάλυση οπτική μικροσκοπία, PC-3 και SMMC-7721 κύτταρα προσκολλημένα στο καλυπτρίδες. Χωριστά 200 μg /ml 7F5 @ Au /Fe3O4 ή IgG @ Au /Fe3O4 μετά επωάστηκε με κύτταρα PC-3 και SMMC-7721 κυττάρων για μία νύχτα σε 37 ° C. Τα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές με PBS. Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με Cy3 δευτερεύον αντίσωμα αντι-ποντικού συζευγμένο κατσίκας μέσω επώασης επί 1,5 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Τα κύτταρα στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν σε 4% φορμαλίνη για 30 λεπτά και πυρηνικών αντιχρωματισμός επιτεύχθηκε με 4, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλης διϋδροχλωρίδιο (ϋΑΡΙ, Sigma, St. Louis, ΜΟ) χρώση σε 1,5 μg /ml διάλυμα (5 min /RT). Τέλος, καλυπτρίδες τοποθετήθηκαν και, στη συνέχεια, οπτικοποιούνται με σάρωση με λέιζερ συνεστιακή μικροσκοπία (LSCM, η Olympus Optical Co. Ltd., Tokyo, Japan).

Η τοξικότητα του 7F5 @ Au /Fe3O4 MRI Probe στην καλλιέργεια κύτταρα PC-3

PC-3 κύτταρα με 93% -95% βιωσιμότητα (χρώση trypan blue) σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων (4000 κύτταρα /φρεάτιο) με μέσο καλλιέργειας 4 ml. Την επόμενη ημέρα, 20 μΙ mAb 7F5 ή 20 μl mAb 7F5 @ GoldMag prob προστέθηκε σε PC-3 κυτταρικά εναιωρήματα. Σε αμφότερες τις περιπτώσεις, η τελική συγκέντρωση του mAb 7F5 ήταν η ίδια (0,2, 2, 4, 8 και 16 μg /ml, κάθε n = 6). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις mAb 7F5 (από διάλυμα mAb 7F5 ή 7F5 mAb @ GoldMag) σε πλάκες 96 φρεατίων σε επωαστήρα κυτταρικής καλλιέργειας για 24 ώρες. Η τοξικότητα των ισοδύναμων ποσοτήτων σωματιδίων GoldMag σε σύγκριση με mAb 7F5 @ GoldMag αξιολογήθηκε επίσης. Η τελική συγκέντρωση του σωματιδίου GoldMag ήταν η ίδια (2, 4, 8, 16, και 32 μg /ml, κάθε n = 6). Η βιωσιμότητα των κυττάρων (αριθμός ζώντων κυττάρων) μετρήθηκε με βαφή κυανούν τρυπανίου μετά από θεραπεία 24 ώρες. Το ποσοστό αναστολής κυτταρικής υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο: ρυθμός αναστολής κυτταρικού = (1- Npost /Npre) × 100%? όπου Npost είναι ο αριθμός των ζωντανών κυττάρων και Npre είναι ο αριθμός των κυττάρων σε φρεάτια προεπεξεργασμένα.

τοξικότητα του 7F5 @ Au /Fe3O4 MRI Probe σε ποντίκια

Έξι εβδομάδα- old γυμνούς ποντικούς (αρσενικούς ποντικούς Bb /c, βάρους μεταξύ 30 και 35 g, n = 35) χρησιμοποιήθηκαν για τις δοκιμές τοξικότητας. Όλες οι ομάδες έλαβαν μία εφάπαξ δόση μέσω ενδοφλέβιας ένεσης. Τρεις ομάδες ποντικών (κάθε ομάδα n = 5) έλαβε 7F5 @ Au /Fe

3Ο

4? τρεις ομάδες ποντικών (κάθε ομάδα η = 5) έλαβαν IgG @ Au /Fe3O4 σε δόσεις 100, 200 και 300 μλ αντίστοιχα (κανονικοποιημένη δόση 1 mg Au /Fe

3Ο

4 με 50 μg αντισώματος σε κάθε ml σε ακόλουθο πείραμα). Πρόσθετες ομάδα ελέγχου έλαβε ενέσεις φυσιολογικού ορού (300 μΐ, η = 5). Η τοξικότητα των 7F5 @ Au /Fe3O4 ή IgG @ Au /Fe3O4 ανιχνευτών εκτιμήθηκε με πολλαπλές δείκτες. Για την οξεία τοξικότητα, τα ζώα παρατηρήθηκαν για εκδηλώσεις όπως ζωτικών σημείων, ψυχική, τη διατροφή και το επίπεδο δραστηριότητας μετά τη χορήγηση του ανιχνευτή για 96 ώρες. Συστημική τοξικότητα αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τις αλλαγές στο σωματικό βάρος των ζώων. Το βάρος και η φυσική κατάσταση όλων των ποντικών παρακολουθήθηκαν για μια περίοδο 30 ημερών. Τα ζώα ζυγίστηκαν την ημέρα της ένεσης ανιχνευτή και κάθε 5 ημέρες μετά έως και 30 ημέρες μετά την ένεση.

Απεικόνιση Μαγνητικού Συντονισμού

Αυτές οι μελέτες διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας μία κλινική 3.0T ολόκληρου του σώματος MR -Σύστημα (Siemens Magnetom Trio, Erlangen, Γερμανία). Το σύστημα ήταν ικανό να λειτουργεί με μέγιστο ρυθμό απόκλιση από 200 MT /m /ms και μέγιστη αντοχή κλίση των 40 MT /m. Ολοκληρωμένο σύστημα πηνία σώμα χρησιμοποιήθηκαν για τη διέγερση RF και οκτώ καναλιών κλινική πηνίο κεφάλι χρησιμοποιήθηκε για την λήψη σήματος.

In vitro MRI της 7F5 @ Au /Fe3O4 Στοχευμένες κύτταρα

PC-3 κύτταρα και SMMC-7721 κύτταρα καλλιεργήθηκαν με 7F5 @ Au /Fe3O4 και IgG @ Au /Fe3O4 ξεχωριστά για 12 ώρες. Οι συγκεντρώσεις του 7F5 @ Au /Fe3O4 και IgG @ Au /Fe3O4 ήταν 1 mg Au /Fe

3Ο

4 ανά 50 μg αντισώματος για κάθε 1 ml μέσου καλλιέργειας με 0.5 εκατομμύρια κύτταρα. Μετά από 12 ώρες, συλλέχθηκαν τα κύτταρα πλύθηκαν 3 φορές με PBS. Δείγματα κυττάρων αναμίχθηκαν με 1,5 ml 1% αγαρόζη σε μικρά σωληνάρια φυγοκέντρησης που περιείχε Ι) PC-3 + 7F5 @ Au /Fe3O4? II) PC-3 + IgG @ Au /Fe3O4? III) SMMC-7721 + 7F5 @ Au /Fe

3Ο

4? ή IV) SMMC-7721 + IgG @ Au /Fe3O4 με κάθε δείγμα περιέχει περίπου 5 × 10

5 επισημασμένα κύτταρα (κάθε ομάδα, n = 8). Fast spin-echo Τ1 (T1w) και Τ2 μετρήσεις (T2W) MRI εκτελέστηκαν χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες παραμέτρους: επανάληψη του χρόνου (TR) /χρόνος ηχούς (ΤΕ) = 500/25 ms (T1w) και 4000/90 ms (T2W), οπτικό πεδίο (FOV) = 156 × 156 mm

2? πάχος τομής = 2 mm? το μέγεθος της μήτρας = 192 × 192.

In vivo MRI της 7F5 @ Au /Fe3O4 Στοχευμένες όγκοι

Τα ποντίκια που έφεραν όγκους PC-3 και SMMC-7721 ενέθηκαν είτε με 200 μl (1 mg Au /Fe

3Ο

4 με 50 μg αντισώματος σε κάθε ml) 7F5 @ Au /Fe3O4 μέσω της φλέβας της ουράς (PC 3-ποντικούς που φέρουν όγκο, η = 8? SMMC-7721 ποντικούς που φέρουν όγκο, n = 8) ή 200 μΙ IgG @ Au /Fe3O4 (η κάθε μία, η = 8). Κατά τη διάρκεια μελετών MRI, οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με κεταμίνη (80 mg /kg) μέσω ενδοπεριτοναϊκής ένεσης (ΙΡ). MRI μελέτες πραγματοποιήθηκαν πριν και 6, 12, και 24 ώρες μετά την ένεση. Μετά σαρώσεις εντοπισμό προσκόπων, FSE T1w και T2W μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν (T1w: ms TR /ΤΕ = 500/25? T2W: TR /TE = 4000/90 ms, πάχος τομής = 3 mm, FOV = 56,25 x 100 mm

2? πάχος τομής /πάχος της πλάκας = 2 /12,8 χιλιοστά? μέγεθος της μήτρας = 72 × 128). Μετά από μαγνητική τομογραφία, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία μέσω CO

2.

Αξιολόγηση της 7F5 @ Au /Fe3O4 Probe βιοκατανομής

ιστούς όγκων συλλέχθηκαν από έξι ποντικούς μετά 7F5 @ έγχυση καθετήρα Au /Fe3O4 ( 3 από κάθε όγκου-τύπου) για ιστολογική ανάλυση. ιστοί των όγκων καταψύχθηκαν σε μέσο OCT και χωρισμένο κατά διαστήματα 5 μm. Για Πρώσος χρώση λουλάκι, οι τομές επωάστηκαν σε ένα υδατικό διάλυμα 1:01 διάλυμα 10% σιδηροκυανιούχου καλίου και 20% υδροχλωρικό οξύ για 30 λεπτά.

Ένα επιπλέον 24 ποντίκια χρησιμοποιήθηκαν για την ποσοτική ανάλυση των 7F5 @ Au /Fe3O4 και IgG @ Au /Fe3O4 διανομές καθετήρα (4 ομάδες, 6 ποντίκια /ομάδα με PC-3 ή SMMC-7721 όγκοι και λαμβάνουν είτε το 7F5 @ Au /Fe3O4 και IgG @ Au /Fe3O4 εγχύσεις καθετήρα). δείγματα ήπατος, σπληνός και του όγκου συλλέχθηκαν από κάθε ζώο σε 24 ώρες μετά την ένεση. Αυτοί οι ιστοί προετοιμάστηκαν για επαγωγικά συζευγμένου πλάσματος φασματοσκοπία ατομικής εκπομπής με ανιχνευτή CCD. (ICP-AES, Varian, ΡβΙο Alto, CA) με πέψη των κυττάρων με 25% χλωρικό οξύ και, στη συνέχεια, θέρμανση του διαλύματος μέχρι ένα στερεό υπόλειμμα σχηματίστηκε. Τα ανθρακούχα υλικά απομακρύνθηκαν και το στερεό διαλύθηκε σε 2% HNO

3 (νιτρικό οξύ). Το μήκος κύματος ανίχνευσης φασματόμετρο ορίστηκε σε 238 nm για το σίδηρο και βαθμονομείται με τρία διαφορετικά πρότυπα δείγματα (Fe επιλεγεί ως το μεταλλικό στοιχείο ίχνος για την αξιολόγηση ICP-AES διανομής καθετήρα, δεδομένου ότι Fe είναι η αρχή συνιστώσα του Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια).

Anti-όγκου των Theragnostic Au /Fe

3Ο

4 MRI Probe

15 ημέρες μετά την εμφύτευση των κυττάρων του όγκου, 200 μl του 7F5 @ Au /Fe3O4 ανιχνευτή (3 PC-ποντικούς που φέρουν όγκο, η = 15? SMMC-7721 ποντικούς που φέρουν όγκο, n = 15) ή 200 μΙ του IgG ελέγχου @ Au /Fe3O4 ανιχνευτή (3 PC-ποντικούς που φέρουν όγκο, n = 15? SMMC-7721 ποντικούς που φέρουν όγκο, n = 15) εγχύθηκε μέσω της φλέβας της ουράς τις ημέρες 0, 4 και 8. τα ζωτικά σημεία, διανοητική κατάσταση, παρατηρήθηκαν τα επίπεδα διατροφή και τη δραστηριότητα για κάθε ζώο ημερησίως Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε σε τρεις διαστάσεις (μήκος, πλάτος, και ύψος) με ένα παχύμετρο, και ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο του όγκου του όγκου = 4 /3π × (μήκος /2) χ (πλάτος /2) x (ύψος /2) [39] . Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε σε πολλαπλά χρονικά σημεία μετά τη χορήγηση του ανιχνευτή (20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 και 65 ημέρες μετά την εμφύτευση των κυττάρων του όγκου, μετρήστε έγχυση την ημέρα 15). Όλα τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία την ημέρα 65.

ανάλυση εικόνας και Στατιστικές Μέθοδοι

αναλύσεις εικόνας πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση ImageJ (version 1.34s, National Institutes of Health, MD, USA). Περιοχή ενδιαφέροντος (ROI) καταρτίστηκαν περιλαμβάνει διατομές των αντίστοιχων φιαλιδίων ή όγκων του ποντικιού (ROI περιλαμβάνονται περίπου 30 voxels για κάθε φάντασμα φιαλίδιο, 30 voxels για κάθε

in vitro

δείγμα κυττάρων σωλήνα ή 40 voxels για κάθε όγκου ) για τη μέτρηση της μέσης έντασης σήματος T2W (S

μέση). Ξεχωριστή ROI σύρθηκαν έξω από το σωλήνα ή σε μια περιοχή κενό του ιστού (που σε συνεπείς θέσεις μεταξύ επαναλαμβανόμενων μετρήσεων) για να εκτιμηθεί σε σχέση με τα επίπεδα του θορύβου με βάση την τυπική απόκλιση του σήματος υποβάθρου (NSD). Αυτοί οι υπολογισμοί χρησιμοποιήθηκαν για να εκτιμηθεί η σχετική αναλογία σήματος προς θόρυβο (SNR) = S

σημαίνει /NSD για κάθε μέτρηση. Για τους ποντικούς που φέρουν όγκο, αυτές οι μετρήσεις επαναλαμβάνονται για κάθε μαγνητική τομογραφία μετά την ένεση? αυτές οι μετρήσεις ήταν επίσης επαναλαμβάνεται για κάθε

in vitro

Au /Fe

3Ο φιαλίδιο δείγματος

4 κυττάρων.

Όλοι οι στατιστικοί υπολογισμοί διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το πακέτο λογισμικού SPSS (SPSS, Chicago , IL, USA). Για τις μελέτες συστηματική τοξικότητα, να αντιπροσωπεύουν μεταβλητότητα στη βασική γραμμή βάρη του σώματος, η χρονική πορεία των μετρήσεων βάρους σώματος για κάθε ζώο αναφέρθηκαν ως ποσοστό του αρχικού το αρχικό βάρος σώματος. Μονόδρομη ANOVA χρησιμοποιήθηκε για να συγκρίνει αυτές προσαρμόζονται δείκτες σωματικού βάρους μεταξύ των ομάδων θεραπείας σε κάθε χρονικό διάστημα μετά την έγχυση (Tukey post-hoc διόρθωση, σ & lt? 0,05 θεωρείται στατιστικά σημαντική). Στη συνέχεια, μονόδρομη ANOVA για να συγκριθούν α) μετρήσεις T2W SNR από

in vitro

δείγμα φιαλίδια που περιέχουν διαφορετικές κυτταρικές σειρές και τμήματα στόχευσης και β)

στις μετρήσεις vivo

T2W SNR σε όγκους στο προ-έγχυσης και τρία χρονικά διαστήματα μετά την έγχυση (ξεχωριστά συγκρίσεις για PC-3 και SMMC-7221 μοντέλα ποντικών). Παρομοίως, μονόδρομη ANOVA για να συγκριθούν όργανο-συγκεκριμένες μετρήσεις ICP-AES της συγκέντρωσης ιχνηθέτη στο PC-3 και SMMC-7721 ποντίκια που φέρουν όγκο. Τέλος, για θεραπευτική μελέτες αποτελεσματικότητας, σε κάθε χρονικό παρατήρησης μετά την έγχυση, t-test του Student χρησιμοποιήθηκε για την σύγκριση των μετρήσεων του όγκου του όγκου μεταξύ αγωγή και ζώα ελέγχου.?

Αποτελέσματα (ρ & lt 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική)

Ακινητοποίηση Αποδοτικότητα και Ειδικοί

αξιολόγησης Binding

Το ποσοστό σύζευξης αντισώματος-ακινητοποιημένης μειώθηκε σταδιακά με αυξανόμενες συγκεντρώσεις του mAb 7F5. Η προσθήκη 60 μg του mAb 7F5 σε ένα δείγμα 1 mg Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια απέδωσε μια απόδοση σύζευξης κοντά στο 83 ± 9%? Έτσι, για ένα δείγμα 1 mg, περίπου 50 μg του mAb 7F5 ήταν επιφάνεια-συζευγμένο στο Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια. Για να αποφευχθεί η μεροληψία κατά τη διάρκεια αργότερα

in vitro

και

in vivo μελέτες

σύγκριση, αποτελεσματικότητα σύζευξης προσδιορίστηκε επίσης για την μη-ειδική IgG αντίσωμα. Υπό παρόμοιες συνθήκες, IgG να Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδιο αποτελεσματικότητα σύζευξης ήταν περίπου 71 ± 5% απαιτώντας έτσι την προσθήκη 80 μg πρωτεΐνης IgG για να επιτευχθεί μια επιφάνεια σύζευξης του 50 μα IgG στο αντίστοιχο 1 mg δείγματος του Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια. Η κυτταρομετρία ροής έδειξε ότι ο θετικός ρυθμός της δέσμευσης ήταν 93,6 ± 8,2% για τους Fe3O4 + κύτταρα 7F5 @ Au /PC-3, ενώ το θετικό ποσοστό ήταν μόλις 4,2 ± 1,2% για το 7F5 @ Au /Fe3O4 + SMMC-7721. Ο θετικός ρυθμός της δέσμευσης ήταν 5,7 ± 1,7% για Fe3O4 + κύτταρα IgG @ Au /PC-3 και 6,9 ± 2,1% για IgG @ /Fe3O4 + SMMC-7721 κύτταρα Au. Red φθορισμός παρατηρήθηκε στη μεμβράνη και κυτόπλασμα της Au /Fe3O4 + PC-3 κύτταρα με LSCM (άνω σειρά στην Εικ. 1), ενώ Κανένα ερυθρό φθορισμός παρατηρήθηκε στο 7F5 @ Au /Fe3O4 + SMMC-7721 κύτταρα (κάτω σειρά 7F5 @ στο Σχ. 1). Για την ομάδα IgG @ Au /Fe3O4, δεν ερυθρό φθορισμός παρατηρήθηκε για αμφότερα τα κύτταρα PC-3 και SMMC-7721 κυτταρικές γραμμές

Red φθορισμού (7F5 @ Au /Fe3O4rpar?. Παρατηρείται στην μεμβράνη του 7F5 @ Au /Fe3O4 + κύτταρα PC-3 (άνω σειρά), ενώ δεν ερυθρός φθορισμός παρατηρήθηκε στη μεμβράνη των @ Au /Fe3O4 + SMMC-7721 κύτταρα 7F5 (κάτω σειρά). πυρήνες κυττάρων χρωματίστηκαν μπλε χρώμα μέσω DAPI (μεσαία στήλη). 7F5 @ εικόνες φθορισμού Au /Fe3O4 και εικόνες DAPI συγχωνεύονται στην δεξιά στήλη. μπαρ Κλίμακα, 10 μm.

η

η τοξικότητα του 7F5 @ GoldMag MRI Probe στην καλλιέργεια PC-3 κύτταρα

η τοξικότητα του 7F5 @ GoldMag MRI Probe in vitro παρουσιάστηκε στο σχήμα S1 η τοξικότητα των mAb 7F5 ή 7F5 @ GoldMag αποδείχθηκε και το ποσοστό αναστολής των κυττάρων αυξάνεται με την αύξηση της συγκέντρωσης του mAb?.. δεν υπάρχει στατιστική σημαντικότητα σε κάθε συγκέντρωση του mAb 7F5 ή 7F5 @ GoldMag (p & gt?. 0.05 σε κάθε συγκέντρωση, Σχ S1 Α). Επιπλέον, σε σύγκριση με το 7F5 @ ομάδα GoldMag, σωματιδίων GoldMag μόνη της δεν επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (p & lt? 0,05 σε κάθε συγκέντρωση, Εικ. S1B)

Η τοξικότητα των Theragnostic Au /Fe

3Ο

4 Probe σε ποντίκια

Οξεία τοξικότητα:. Όλα τα ποντίκια επέζησαν και μη φυσιολογικά αντιδράσεις στα ζωτικά σημεία, νοητικής κατάστασης, τη διατροφή , και τα επίπεδα δραστηριότητας 96 ώρες μετά τη χορήγηση. Συστημική τοξικότητα στο Σχ. 2: τα ποντίκια στην ομάδα ελέγχου κέρδισαν βάρος σταθερά κατά τη διάρκεια του πειράματος? λαμβάνοντας υπόψη ότι η αύξηση του σωματικού βάρους ήταν ελαφρώς μειωμένη σε ζώα που έλαβαν την έγχυση 7F5 @ Au /Fe3O4 σε δόσεις τόσο 100 μL και 200 ​​μL. Καμία σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ 7F5 @ Au /Fe3O4 και ομάδες αλατόνερου σε οποιοδήποτε χρονικό σημείο και κανένας από αυτούς τους ποντικούς πέθαναν κατά τη διάρκεια της 30 ημερών περιόδου παρατήρησης μετά την έγχυση. Δεν υπάρχουν κλινικά σημεία τοξικότητας όπως το τρέμουλο, μειωμένη δραστηριότητα, ή παρατηρήθηκαν ασταθείς κινήσεις. Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν για τα ζώα που έλαβαν IgG @ Au /Fe3O4 σε δόσεις των 100 μL και 200 ​​μL (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ωστόσο, από το διάστημα παρατήρησης 20 ημερών και μετά, αυτά τα ζώα που έλαβαν 300 μL δόση έδειξαν σημαντικά χαμηλότερα βάρη σώματος σε σύγκριση με τα ζώα αυτά σε έλεγχο και δύο ομάδες χαμηλότερη δόση (ρ & lt? 0,05 για κάθε μία από αυτές τις κανονικοποιημένες συγκρίσεων αύξησης του σωματικού βάρους). Ένα ποντίκι σε αυτή την υψηλή ομάδα δόσης πέθανε την ημέρα 30. Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν για την υψηλή δόση IgG @ ομάδα Au /Fe3O4 με δύο από αυτά τα ποντίκια να πεθαίνουν κατά τις ημέρες 25 και 27, αντίστοιχα. Τέσσερα ποντίκια από τις ομάδες υψηλής δόσης (τρεις ποντικοί από 7F5 @ Au /Fe3O4 ομάδα και ένας από την ομάδα IgG @ Au /Fe3O4) έδειξε κλινικά συμπτώματα τοξικότητας, συμπεριλαμβανομένης τρόμος, μειωμένη δραστηριότητα και ασταθείς κινήσεις με τη μέρα 20. Τα αποτελέσματα αυτά υποδεικνύουν αυξημένη συστηματική τοξικότητα για αυτά τα ζώα που έλαβαν μια δόση 300 μL είτε 7F5 @ Au /Fe3O4 ή IgG @ Au /Fe3O4 ανιχνευτές.

Η

In vitro

MRI του 7F5 @ Au /Fe3O4 Στοχευμένες κύτταρα

In vitro

μελέτες έδειξαν σημαντικά μεγαλύτερες μειώσεις T2W SNR στο PC-3 + 7F5 @ δείγματα κυττάρων Au /Fe3O4 (σωλήνας Ι) σε σύγκριση με τα δείγματα κυττάρων @ Au /Fe3O4 IgG PC-3 +, SMMC-7721 + 7F5 @ δείγματα Au /Fe3O4, και SMMC-7721 + IgG @ Au /Fe3O4 δείγματα μέσα σε σωλήνες II, III και IV αντίστοιχα (Εικ. 3Α). Τα δείγματα μέσα σε σωλήνες II, III και IV δεν έδειξε καμία σαφώς αισθητή μείωση SNR (συγκρίσεις δεν έδωσε στατιστικά σημαντικές διαφορές από τον έλεγχο, p & gt? 0.05 για κάθε σύγκριση)? ο T2W SNR εντός PC-3 + 7F5 @ δείγμα κυττάρων Au /Fe3O4 (σωλήνας Ι) ήταν σημαντικά χαμηλότερη από την T2W SNR εντός σωλήνες δειγμάτων II, III, και IV στην Εικ. 3Β (p & lt? 0.05 για κάθε σύγκριση)

Tube Ι:. PC-3 + 7F5 @ δείγμα κυττάρων Au /Fe3O4, σωλήνα II: PC-3 + IgG @ Au /Fe3O4 δείγμα? σωλήνα III: SMMC-7721 + 7F5 @ δείγμα Au /Fe3O4? Σωλήνα IV: SMMC-7721 + δείγμα IgG @ Au /Fe3O4. μετρήσεις ποσοτικών T2W SNR (Β) για τα φιαλίδια δείγμα κυττάρων που απεικονίζεται στο (A).

Η

In vivo

MRI του 7F5 @ Au /Fe3O4 Στοχευμένες όγκοι

3 PC-ποντικούς που φέρουν όγκο χορηγηθούν 7F5 @ Au /Fe3O4 νανοσωματίδια αποδεικνύεται αξιοσημείωτες μειώσεις σε T2W όγκου ένταση σήματος σε 6, 12, και 24 ώρες μετά την έγχυση (επάνω σειρά στην Εικ. 4). Αριθ σαφώς σήματος αλλάζει αισθητά όγκου παρατηρήθηκαν για SMMC -7721 φέρουν όγκο ποντικών σε οποιοδήποτε από τα τρία χρονικά σημεία μετά την έγχυση (κάτω σειρά στο Σχ. 4). Η ιστολογική ανάλυση (. Πρώσος μπλε χρώση στο Σχήμα 4) έδειξε ετερογενή εναπόθεση του Au /Fe3O4 Au /Fe

3Ο

4 νανοσωματίδια απεικονίζεται ως στικτή μπλε-χρωματισμένο εστίες στους ιστούς του όγκου PC-3? Ωστόσο, οι καταθέσεις αυτές δεν παρατηρήθηκαν εντός SMMC-7721 ιστούς όγκων.

3 PC-ποντίκια που φέρουν όγκο χορηγείται 7F5 @ Au /Fe3O4 νανοσωματίδια αποδειχθεί σημαντική μείωση στην ένταση του σήματος T2W όγκο 6, 12, και 24 ώρες μετά -infusion (πάνω σειρά). Αριθ σαφώς σήματος αλλάζει αισθητά όγκου παρατηρήθηκαν για SMMC -7721 φέρουν όγκο ποντικών σε οποιοδήποτε από τα τρία χρονικά σημεία μετά την έγχυση (κάτω σειρά). Πρώσος μπλε χρώση (PB) έδειξε ότι Au /Fe3O4 νανοσωματίδια απεικονίζεται ως στικτή μπλε-χρωματισμένο εστίες στους ιστούς του όγκου PC-3? Οι καταθέσεις αυτές δεν παρατηρήθηκαν εντός SMMC-7721 ιστούς όγκων. Κλίμακα μπαρ, 10 mm για μαγνητική τομογραφία και 50 μm για Πρώσος μπλε χρώση εικόνα.

Η

Μετά 7F5 @ έγχυση Au /Fe3O4, T2W SNR αλλαγές στο PC-3 όγκων ήταν στατιστικά σημαντική σε σύγκριση με το σενάριο αναφοράς προ -infusion όγκου επίπεδα SNR (ρ & lt? 0.05 για κάθε σύγκριση), το Σχ. 5Α. Πρόσθετες σημαντικές μειώσεις του όγκου SNR παρατηρήθηκαν μεταξύ των 6 και 12 ώρες χρόνο μετά την έγχυση σημεία (p & lt? 0.001)? ενώ η μέση T2W όγκου SNR αργότερα αυξήθηκε σε 24 ώρες μετά την έγχυση (σε σχέση με την προηγούμενη μέτρηση σε 12 ώρες μετά την έγχυση), το εύρημα αυτό δεν ήταν στατιστικά σημαντική με δεδομένη την τρέχουσα μέγεθος του δείγματος (p = 0,145).