Αφηρημένο

Το μεταστατικό δυναμικό των κυττάρων είναι μια σημαντική παράμετρος στο σχεδιασμό των βέλτιστων στρατηγικών για την εξατομικευμένη θεραπεία του καρκίνου. Χρησιμοποιώντας μικροσκοπία ατομικής δύναμης (AFM), δείχνουμε, σύμφωνο με προηγούμενες μελέτες που διεξήχθησαν σε άλλους τύπους καρκίνου επιθηλιακών, ότι τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών είναι γενικά μαλακότερα και εμφανίζουν μικρότερη εγγενή μεταβλητότητα στο κελί ακαμψία από μη κακοήθη επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών. Μια λεπτομερής εξέταση των εξαιρετικά επεμβατική τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών (HEY Α8) σε σχέση με λιγότερο επεμβατική γονικών κυττάρων τους (hey), καταδεικνύει ότι η παραμόρφωση είναι επίσης μια ακριβής βιολογικός δείκτης του μεταστατικού δυναμικού. Συγκριτική έκφραση γονιδίου αναλύσεις δείχνουν ότι η μειωμένη ακαμψία του άκρως μεταστατικών κυττάρων ΗΕΥ A8 συνδέεται με ακτίνη κυτταροσκελετό αναδιαμόρφωση και μικροσκοπική εξέταση της δομής των ινών ακτίνης σε αυτές τις κυτταρικές σειρές είναι συνεπής με την πρόβλεψη αυτή. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η κυτταρική δυσκαμψία μπορεί να είναι ένα χρήσιμο βιοδείκτη για την αξιολόγηση της σχετικής μεταστατικό δυναμικό των ωοθηκών και ίσως άλλους τύπους καρκινικών κυττάρων

Παράθεση:. Xu W, Mezencev R, Kim B, Wang L, McDonald J, Sulchek Τ (2012) Cell ακαμψία ένας βιοδείκτης της μεταστατικής δυναμικό των κυττάρων καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 7 (10): e46609. doi: 10.1371 /journal.pone.0046609

Επιμέλεια: Surinder Κ Batra, Πανεπιστήμιο της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 21, Απριλίου, 2012? Αποδεκτές: 4 Σεπ του 2012? Δημοσιεύθηκε: 4 Οκτωβρίου 2012 |

Copyright: © Xu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς ευχαριστώ NSF (αριθμός έργου CBET-0932510) για την οικονομική υποστήριξη του έργου αυτού. Οι συγγραφείς επίσης να ευχαριστήσω Προπτυχιακών βραβείο του Προέδρου Ερευνών (PURA) πρόγραμμα και Petit Υποτρόφων Προγράμματος στο Georgia Tech για την παροχή χρηματοδότησης για την BK. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η μηχανική ακεραιότητα των κυττάρων ρυθμίζεται από ένα δυναμικό δίκτυο των διαρθρωτικών, διασύνδεση, και τα μόρια σηματοδότησης [1]. Ως εκ τούτου, οι μεταβολές των μηχανικών ιδιοτήτων των μεμονωμένων κυττάρων μπορεί να αποκαλύψει σημαντικές πληροφορίες σχετικά με τις αλλαγές σε αυτά τα δίκτυα. Μελέτες μιας ποικιλίας ασθενειών χρησιμοποιώντας διαφορετικές πειραματικές τεχνικές έχουν δείξει ότι οι ανωμαλίες στις ελαστικές ιδιότητες των κυττάρων που συνδέονται με την παθογένεση και την εξέλιξη της νόσου [2], [3], [4], [5], [6], [7] , [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17]. Για παράδειγμα, τα καρκινικά κύτταρα επεμβατική μηχανικά μαλακώσει και να τροποποιήσουν πρόσφυσή τους στο εξωκυτταρικό πλέγμα, το οποίο ενισχύει την ικανότητά τους να ξεφύγουν από την πρωτογενή όγκο [5], [17], [18]. Μετρήσεις του καρκινικού κυττάρου ακαμψία, ποσοτικά με μέτρο ελαστικότητας του Young, έχουν δείξει μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ των κυττάρων παραμόρφωσης και της κυτταρικής κακοήθειας [5]. Ομοίως, η ακαμψία των μεταστατικών καρκινικών κυττάρων που απομονώνονται από την πλευρική υγρά ασθενών με καρκίνο του μαστού έχει αναφερθεί ότι είναι περισσότερο από 70% χαμηλότερη, με τυπική απόκλιση πάνω από πέντε φορές μικρότερη, από καλοήθη αντιδραστική μεσοθηλιακών κυττάρων [3].

Η κατανομή του δικτύου ακτίνης διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στον καθορισμό των μηχανικών ιδιοτήτων των μεμονωμένων κυττάρων [19], [20], [21]. Καθώς τα κύτταρα μετατρέπουν από μη-κακοήθεις σε καρκινικές καταστάσεις, κυτταροσκελετού αλλαγές της δομής τους από ένα οργανωμένο σε ένα ακανόνιστο δίκτυο, και η αλλαγή αυτή στη συνέχεια μειώνει την ακαμψία των μεμονωμένων κυττάρων [5], [22]. Οι μελέτες των μηχανικών ιδιοτήτων των καρκινικών κυττάρων που συζητήθηκαν παραπάνω υποδηλώνουν ότι η αλλαγή της δυσκαμψίας των μεμονωμένων κυττάρων μπορεί να υποδηλώνουν την παρουσία της κακοήθειας [15], [16], [23], [24].

Η ανάγκη για αποτελεσματική βιοδείκτες για τις ασθένειες είναι ιδιαίτερα σημαντική στην περίπτωση του καρκίνου των ωοθηκών, η οποία είναι η πιο θανατηφόρος των γυναικολογικών καρκίνων. Ο καρκίνος των ωοθηκών κατετάγη πέμπτος ανάμεσα κύριες αιτίες του καρκίνου που σχετίζονται με τους θανάτους των γυναικών των ΗΠΑ το 2007 και το ποσοστό της επιβίωσης 5 χρόνια ήταν 46% για όλες τις περιπτώσεις διαγιγνώσκονται στο 1999-2005 [25]. Λόγω της μη διαθεσιμότητας αξιόπιστων ελέγχου στην κλινική πράξη και την ασυμπτωματική πορεία μέσα από πρώιμα στάδια της νόσου, η πλειοψηφία των περιπτώσεων καρκίνου των ωοθηκών (68%) έχουν διαγνωστεί ως μεταστατική νόσος με κακή επιβίωση [26].

αυτή η μελέτη των μηχανικών ιδιοτήτων των κυττάρων από πολλές διαφορετικές καρκινικές κυτταρικές ωοθηκών γραμμές και μη κακοήθεις αθανατοποιημένα επιφάνεια επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών (IOSE), αποδεικνύουμε ότι κύτταρο ακαμψία όχι μόνο διακρίνει ωοθηκών καρκινικά κύτταρα από μη κακοήθη κύτταρα, αλλά επίσης μπορεί να διακρίνει περισσότερο ογκογόνο /επεμβατική τα καρκινικά κύτταρα που προέρχονται από λιγότερο ογκογόνο /επεμβατική τύπους. Τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι η μέτρηση της κυτταρικής ακαμψία των ωοθηκών και ίσως άλλων τύπων καρκινικών κυττάρων μπορεί να μην συνεισφέρει μόνο στην καλύτερη κατανόηση των φυσικών και μοριακών μηχανισμών που διέπουν την εξέλιξη του όγκου, αλλά μπορεί επίσης να χρησιμεύσει ως ένα χρήσιμο κλινικό εργαλείο για την εκτίμηση του μεταστατικού δυναμικού .

Υλικά και Μέθοδοι

Ανάπτυξης

ωοθηκών κυτταρική γραμμή και Προετοιμασία δείγματος

αθάνατα κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακά (IOSE) έχουν γενναιόδωρα από τον Dr. Ν Auersperg (University of British Κολομβία, Vancouver, Canada) και καλλιεργήθηκαν σε 199/105 μέσο (1:01) συμπληρωμένο με ορό 15% εμβρυϊκό ορό (FBS, Atlanta Biologicals, Atalanta, GA) και 1% διάλυμα αντιβιοτικό-αντιμυκητικό (Mediatech Cellgro-, Manassas, VA ). Ο καρκίνος των ωοθηκών ΗΕΥ και HEY κυτταρικές γραμμές Α8 παρασχέθηκαν από τον Dr. G. Mills (MD Anderson Cancer Κέντρο, Houston, ΤΧ) και αναπτύχθηκαν σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% FBS και 1% διάλυμα αντιβιοτικό-αντιμυκητικό (μέσο R10). Ο καρκίνος των ωοθηκών κυτταρικές σειρές OVCAR-4 OVCAR-3 και είχαν αγοραστεί από τον Αναπτυξιακό Θεραπευτικό Πρόγραμμα (DTP) του Εθνικού Ινστιτούτου Καρκίνου (NCI) (Bethesda, MD). Πριν από τα πειράματα AFM, τα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε ένα Fluorodish (World Precision Instruments, Sarasota, FL) με αρχική πυκνότητα των 10.000-20.000 κύτταρα /cm

2.

Μικροσκοπία Ατομικής Δύναμης

Διενεργήσαμε μικροσκοπία ατομικής δύναμης (AFM) μηχανικές μετρήσεις [27], [28] σε μεμονωμένα επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών. Το AFM χρησιμοποιούνται σε πειράματα μας είναι η MFP-3D (από την έρευνα για το Άσυλο, Santa Barbara, CA) με ένα συνδυασμένο Nikon Ti ανεστραμμένο οπτικό μικροσκόπιο (Nikon, Melville, ΝΥ) που χρησιμοποιείται για την ευθυγράμμιση οπτικά του ανιχνευτή στα κύτταρα. Οι ανιχνευτές που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη ήταν MCST-AUHW (Bruker, Camarillo, CA) με ονομαστική σταθερά ελατηρίου 0,03

Ν

/

m

. Για να απλοποιηθεί η γεωμετρία επαφής και την ελαχιστοποίηση της πλευρικής στέλεχος του δείγματος κατά την διάρκεια οδόντωση, η άκρη προβόλου τροποποιείται με την προσάρτηση ενός απλού μικροσφαίρα σίλικα διαμέτρου 4,7 μm. Οι μετρήσεις διεξήχθησαν σε μέσα κυτταρικής καλλιέργειας σε θερμοκρασία δωματίου, με κύτταρα απλώνονται πάνω στο γυαλί πυθμένα του Fluorodish. Για την εξάλειψη των συγκεχυμένα αποτελέσματα γειτονικά κύτταρα για διευθέτηση κυτταροσκελετού και μορφολογία, απλά κύτταρα μετρήθηκαν.

Πριν από τις μετρήσεις των κυττάρων, ο πρόβολος έχει βαθμονομηθεί στο γυαλί πυθμένα του Fluorodish χρησιμοποιώντας τη μέθοδο θερμικής δόνησης [29] με το προκύπτον θερμικό φάσμα εφοδιασμένα με Lorentzian λειτουργία για να προσδιοριστεί η σταθερά του ελατηρίου. Τα κύτταρα εσοχή περίπου πάνω από την περιπυρηνική περιοχή των μεμονωμένων κυττάρων. Το βάθος οδόντωση επιλέχθηκε να είναι τουλάχιστον 1 μm, ώστε να προσομοιώσει καλύτερα παραμορφώσεις που συμβαίνουν φυσιολογικά. Η δύναμη έναντι καμπύλες οδόντωση από κάθε μέτρηση αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο ερτζιανών επαφή [30], [31] για τη λήψη μέτρο ελαστικότητας του Young του κάθε κυττάρου. Ένα σκίτσο της πειραματικής συσταθεί φαίνεται στο Σχ. 1

μια

. Μικρογράφημα σάρωσης ηλεκτρονίου του άκρου γλυφές που χρησιμοποιείται σε αυτό το πείραμα φαίνεται στο Σχ. 1

β

. Παραδείγματα οπτικών εικόνων που λαμβάνονται κατά τη διάρκεια της κυτταρικής οδόντωση φαίνεται στα Σχ. 1,

γ

-.

g

Η

(Α) Σκίτσο των μετρήσεων σε κύτταρα με AFM,

δ

είναι εσοχή, (Β) SEM εικόνα του άκρου γλυφές, ακαμψία μετρήσεις απλών κυττάρων με AFM για το (C) IOSE, (D) OVCAR-4, (Ε) Hey, (F) OVCAR-3 και (G) ΗΕΥ κύτταρα Α8. Ίδιο cantilever χρησιμοποιήθηκε? ο βραχίονας του προβόλου έχει πλάτος 20 μm και χρησιμεύει ως γραμμή κλίμακας.

Η

φθορισμού απεικόνισης και ανάλυσης των F-ακτίνης

Έχουμε απεικονίζεται το επισημασμένο F-ακτίνης δίκτυο κάθε κυτταρική σειρά χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φθορισμού. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε μια γυάλινη καλυπτρίδα σε πυκνότητα 5000 κυττάρων /cm

2. Η καλυπτρίδα με επιστρώθηκαν κύτταρα τοποθετήθηκε σε ένα φρεάτιο μιας 6-φρεατίων πλάκας με 2 mL μέσα κυτταρικής καλλιέργειας. Τα κύτταρα επωάστηκαν στους 37 ° C όλη τη νύκτα και στη συνέχεια βάφτηκαν με συζευγμένο με ένα φθοριόχρωμα φαλλοειδίνη. Τα κύτταρα βάφτηκαν με την πρώτη στερέωσης με 1 mL 4% φορμαλδεΰδη σε PBS (ρΗ 7.4) για 10 λεπτά και διαπερατότητας με 1 mL 0,2% ΤΧ-100, μπλοκάροντας με 1% BSA για 20 λεπτά και επώαση για μία ώρα με 1:20 Alexa Fluor 546 phalloidin (Life Technologies, Grand Island, Νέα Υόρκη) σε 1% BSA. Όλα τα στάδια κατά τη διάρκεια της διαδικασίας χρώσης διεξήχθησαν σε θερμοκρασία δωματίου σε ένα σκοτεινό δωμάτιο. Μετά τη χρώση, τα κύτταρα ανάμεσα στο γυάλινο κάλυμμα και ένα γυάλινο πλακίδιο, τοποθετημένο με παρατείνουν Χρυσό και σφραγισμένο με βερνίκι νυχιών. Πολλαπλές εικόνες της κάθε κυτταρικής σειράς ελήφθησαν με τη χρήση μικροσκοπίου Nikon Ti (Nikon, Melville, ΝΥ) με το σετ φίλτρου TRITC διέγερσης /εκπομπής. Η ανάλυση περιορίστηκε σε μονά κύτταρα τα οποία δεν ήταν σε επαφή με άλλα κύτταρα.

Τα διαρθρωτικά χαρακτηριστικά του δικτύου ακτίνης αναλύθηκαν από την ποσοτικοποίηση μιας παραμέτρου προσανατολισμό για νημάτια ακτίνης. Ένα δισδιάστατο Fast Fourier Transform (FFT) εφαρμόστηκε στις αρχικές εικόνες φθορισμού χρησιμοποιώντας MATLAB ρουτίνες (The MathWorks, Natick, ΜΑ). Από την μετασχηματισμένη εικόνα, κώδικες έθιμο MATLAB υπολογίζεται το γωνιακό εύρος του FFT αθροίζοντας το τετράγωνο των συστατικών FFT, από το οποίο η διανομή προσανατολισμός των νηματίων ακτίνης προσδιορίζεται ως συνάρτηση της γωνίας. Οι μαθηματικών αλγορίθμων υπολογισμού της συνάρτησης κατανομής προσανατολισμού βασίστηκαν αυτές που αναφέρθηκαν προηγουμένως στη βιβλιογραφία [32]. Η μέθοδος απεικονίζεται στο Σχ. S1 στο υλικό υποστήριξης με έναν εκπρόσωπο φθορισμού εικόνα ενός κυττάρου IOSE.

Μετανάστευση και την εισβολή Αναλύσεις

Η CytoSelect 24 και μετανάστευση των κυττάρων και κιτ προσδιορισμού εισβολή (Cell Biolabs, San Diego, CA ) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Για τη δοκιμασία της μετανάστευσης, 1.5 × 10

5 κύτταρα σε DMEM απαλλαγμένο από ορό μέσο /F12 που περιέχει 0.5% BSA, 2 mM ΟαΟ

2 και 2 mM MgCl

2 φορτώθηκαν σε μεμονωμένα μη επικαλυμμένα ενθέματα με περίπου 8 μm μέγεθος πόρων. Τα ένθετα τοποθετήθηκαν σε πλάκα 24 φρεατίων που περιέχει RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% FBS. Μετά από 3 ώρες επώασης στους 37 ° C σε υγροποιημένο αέρα με 5% CO

2, τα κύτταρα που μετανάστευσαν στην κάτω πλευρά των ενθέτων αποσπάστηκαν, λύθηκαν και ποσοτικά χρησιμοποιώντας φθορίζουσα χρωστική CyQuant GR σε μια συσκευή ανάγνωσης πλάκας στα 480 nm /520 nm (Synergy 4, BioTek, Winooski, VT). δοκιμασίες Εισβολή διεξήχθησαν κατά τον ίδιο τρόπο με 32 ώρες επώασης χρησιμοποιώντας ένθετα μήτρας επικαλυμμένα βασικής μεμβράνης. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν με μια αρχική μελέτη χρονικής πορείας πραγματοποιήθηκε για να φθάσει σημαντική μετενσάρκωσης.

μικροσυστοιχιών και Pathway Εμπλουτισμός Ανάλυση

Το RNA που εξάγεται από δύο μη-συρρέουσες καλλιέργειες HEY HEY και Α8 κύτταρα αναπτύσσονται σε μέσο R10 χρησιμοποιώντας Arcturus PicoPure RNA κιτ απομόνωσης (Applied Biosciences, Carlsbad, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και η ακεραιότητα του RNA επαληθεύεται χρησιμοποιώντας ένα Bioanalyzer RNA Pico Chip (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). mRNA σημάνθηκε χρησιμοποιώντας την ΑΕΚ Labeling Kit (Affymetrix, Santa Clara, CA) και επισημασμένο με βιοτίνη mRNA υβριδοποιήθηκε επί GeneChip Probe Arrays U133 Plus 2.0 (Affymetrix). αρχεία Affymetrix.CEL υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τη χρήση του Affymetrix Έκφραση Console λογισμικού έκδοση 5.0, χρησιμοποιώντας τη ροή εργασίας 3′-έκφραση RMA. Οι 4.746 χαρακτηριστικά με χαμηλότερο 10% τιμές του λογαρίθμου των εντάσεων σήματος κατά μήκος απομακρύνθηκαν όλα τα 4 μάρκες και τα υπόλοιπα 49.929 χαρακτηριστικά αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Σημασία Ανάλυση των μικροσυστοιχιών (SAM) έκδοση 4.0 [33] με ακόλουθες παραμέτρους: Τύπος Response: δύο κλάσης αταίριαστο? Στατιστικό τεστ: T-στατιστική? Αριθμός των μεταθέσεων: 500? Δεδομένων σε κλίμακα log2? Δεν μεσαίο κεντράρισμα. Γονίδια αναφέρθηκαν ως διαφορικά εκφρασμένων μεταξύ HEY HEY και τάξεις Α8, εφόσον πληρούνται τα ακόλουθα κριτήρια:. (I) False Discovery Rate = 1,1% και (ii) την αλλαγή του απόλυτου φορές (FC) ≥1.5

Βιολογικές ερμηνείες της δεδομένων διαφορική γονιδιακή έκφραση έγιναν με ανάλυση εμπλουτισμό της οδού χρησιμοποιώντας MetaCore 5.2 (GeneGO, St Joseph, ΜΙ). Σημαντικά διαταραγμένη οδών και δικτύων ταυτοποιήθηκαν με χαρτογράφηση επάνω ρυθμισμένη και κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια (σε συνδυασμό και ατομικά) σε χάρτες GeneGO κανονική οδός (συλλογή με το χέρι επιμελήθηκε σηματοδότησης και μεταβολικών μονοπατιών) και τα δίκτυα διαδικασία GeneGO (χειροκίνητα επιμέλεια μοντέλα δικτύου των κύριων κυτταρικών διεργασιών ) [34].

GeneGO χάρτες κανονική διαδρομή και τα δίκτυα διαδικασία κατατάχθηκαν ανάλογα με τη σημασία τους για το σύνολο εισόδου των γονιδίων χρησιμοποιώντας p-τιμές που υπολογίζονται με βάση μια εκθετική κατανομή. Πολλαπλές διόρθωση δοκιμή πραγματοποιήθηκε με τη χρήση False Discovery Rate με την προσαρμοστική όριο που να επιτρέπουν όχι περισσότερο από 1 οδός /δίκτυο λανθασμένα προέβλεψε ως σημαντικά εμπλουτισμένη.

Για να επεκτείνει περαιτέρω τη βιολογική ερμηνεία των δεδομένων διαφορική γονιδιακή έκφραση, η τοπολογική σημασία ανάλυση (TSA) των προφίλ γονιδιακής έκφρασης πραγματοποιήθηκε με τη χρήση online εργαλείο που παρέχεται από GeneGO Inc (https://topology.genego.com/zcgi/topology_scoring.cgi). Αυτό το εργαλείο χάρτες διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων σε ένα ιδιόκτητο βάση δεδομένων GeneGO των αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης-πρωτεΐνης και προσδιορίζει τις πρωτεΐνες οι οποίες καταλαμβάνουν τοπολογικά σημαντικές θέσεις σε σχέση με διαφορικά εκφρασμένα γονίδια [35], [36]. Τοπολογικά σημαντική γονίδια (ρ & lt? 0,01) ταυτοποιήθηκαν για όλα τα γονίδια ρυθμισμένα προς τα πάνω σε κύτταρα ΗΕΥ A8 σχέση με ΗΕΥ κύτταρα χρησιμοποιώντας το «μεταγραφική μονοπάτια ενεργοποίησης από όλους τους κόμβους« αλγόριθμος και στη συνέχεια αντιστοιχίζονται με GeneGO χάρτες κανονική οδό όπως περιγράφηκε παραπάνω

.

qPCR

επιλεγμένων γονιδίων (PRKAA2, TWF1 και MYLK), προσδιορίζονται με ανάλυση μικροσυστοιχιών ως σημαντικά διαφορικά εκφρασμένων μεταξύ HEY HEY Α8 και κύτταρα, επικυρώθηκαν χρησιμοποιώντας προσχεδιασμένες δοκιμασίες έκφρασης TaqMan® Gene (Life Technologies, Grand Island , ΝΥ). RNA εκχυλίστηκε από 3 μη-συρρέουσες καλλιέργειες ΗΕΥ και ΗΕΥ κύτταρα A8 (Arcturus PicoPure Απομόνωση RNA Kit) και αντίστροφη μεταγραφή και ενισχύθηκε χρησιμοποιώντας Χειροκροτήματα σύστημα 3′-Amp (NuGen Technologies, Inc., San Carlos, CA) σύμφωνα με το τις οδηγίες του κατασκευαστή. αναλύσεις qPCR πραγματοποιήθηκαν για κάθε γονίδιο και κάθε δείγμα σε 4 αντίγραφα χρησιμοποιώντας συνθήκες θερμικού κύκλου συνιστάται για TaqMan® Gene Expression Master Mix και διπλώστε τιμές αλλαγή μεταξύ Hey Hey Α8 και κύτταρα προσδιορίστηκαν με τη χρήση 2

-ΔΔCt μέθοδο που χρησιμοποιεί γονίδιο GAPDH ως εσωτερική ελέγχου.

στατιστική Ανάλυση

Συνολική στατιστική σημαντικότητα των διαφορών στις μέσες ακαμψία μεταξύ των κυτταρικών τύπων ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ Kruskal-Wallis. Η σημαντικότητα των διαφορών μεταξύ όλων των ζευγών των κυττάρων ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας μετά τη δοκιμή του Dunn. Σημασία των διαφορών στη μετανάστευση και την εισβολή μεταξύ IOSE, hey και τα κύτταρα HEYA8 ελέγχθηκαν με ANOVA, ακολουθούμενη από τεστ Tukey για συγκρίσεις κατά ζεύγη (* p & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? *** P & lt?. 0.001 τεστ Kruskal-Wallis, ANOVA και όλα τα δοκάρια δοκιμές πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση GraphPad Prism version 5.02 για Windows (GraphPad Software, San Diego, CA). Ενώσεις μεταξύ κύτταρο ακαμψία και κύτταρο διεισδυτικότητα, κύτταρο ακαμψία και μεταναστευτικές ιδιότητες των κυττάρων, και των κυττάρων ακαμψία και το βαθμό της συν-ευθυγράμμιση των F-ακτίνης εξετάστηκαν με τη χρήση του προϊόντος, τη στιγμή συσχέτισης Pearson και κατάταξη συσχέτισης Spearman και εκφράζονται ως συντελεστές συσχέτισης (r και ρ, αντίστοιχα). ανάλυση συσχέτισης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το δωρεάν στατιστικών Ε λογισμικού [37].

Αποτελέσματα και συζήτηση

τηλέφωνα ακαμψία είναι μια βιοδεικτών του μεταστατικού (μεταναστευτικών /ικανότητα εισβολής) Δυναμικό

Εκπρόσωπος καμπύλες δύναμης-εσοχή που λαμβάνεται από τη μηχανική διερεύνηση των μεμονωμένων κυττάρων απεικονίζονται στο Σχ. 2

μια

. Κάθε καμπύλη αντιπροσωπεύει την εφαρμοζόμενη δύναμη αναγκαία για την εσοχή ενός ατόμου κυττάρων των ωοθηκών από την IOSE και HEY κυτταρικές σειρές. Οι επαφές ανιχνευτή το κύτταρο σε μια εσοχή του 0 μm. Δεδομένου ότι η κλίση σε ένα σημείο κάθε καμπύλη δύναμης-οδόντωση συνδέεται με το κύτταρο ακαμψία, η μεταβλητότητα των πρανών για κάθε επεσημάνθη κυττάρων σε ένα δεδομένο κύτταρο γραμμή υποδεικνύει μεταβλητότητα της ακαμψίας μεταξύ των μεμονωμένων κυττάρων από το ίδιο καλλιέργεια. Σε γενικές γραμμές, οι καμπύλες που αντιστοιχούν σε μη-κακοήθη κύτταρα IOSE έχουν μεγαλύτερες κλίσεις από εκείνες που αντιστοιχούν σε καρκίνο των ωοθηκών ΗΕΥ κυττάρων και είναι επομένως πιο σκληρή.

(Α) οικόπεδα Box-and-whisker ακαμψίας των μεμονωμένων κυττάρων για διαφορετικές κυτταρικές γραμμές, τα εκατοστημόρια είναι 10%, 25%, 50%, 75% και 90%, το ένθετο δείχνει τις αντιπροσωπευτικές καμπύλες ισχύος της IOSE και HEY. Συνολική διαφορά μεταξύ των μέσων είναι σημαντική (p-value & lt? 2.2 × 10

-16, Kruskal-Wallis)? ζεύγη διαφορές είναι σημαντικές μεταξύ IOSE και hey, hey Α8 και τα κύτταρα 3 OVCAR-μεταξύ HEY HEY Α8 και κυττάρων, καθώς και μεταξύ HEY Α8 και OVCAR-4 κύτταρα (p & lt? 0,05, Dunn του μετά τη δοκιμή)? δοκιμές (Β) Μετανάστευση και την εισβολή για IOSE, HEY HEY και κύτταρα A8. F (480/520) είναι μία ένταση φθορισμού στα 480 nm διέγερση και 520 nm εκπομπή, η οποία είναι ανάλογη προς τον αριθμό των μεταναστεύουν ή εισβάλλοντα κύτταρα.

Η

Οι καμπύλες ισχύος αναλύθηκαν με ένα μοντέλο ερτζιανών επαφή για να προσδιοριστεί η αντίστοιχη μέτρο Young μεμονωμένων κυττάρων. Προσδιορίσαμε μέτρο ελαστικότητας του Young για διαφορετικούς ωοθηκών επιθηλιακών κυτταρικών γραμμών, συμπεριλαμβανομένων των μη-κακοήθων IOSE και μια ποικιλία κυτταρικών σειρών καρκίνου (OVCAR-3, OVCAR-4, Hey, και HEY Α8). Η κατανομή του μέτρου του Young μεμονωμένων κυττάρων από διαφορετικές κυτταρικές σειρές απεικονίζεται στο κουτί και μουστακιού οικόπεδα (Εικ. 2

α

). IOSE αποδειχθεί υψηλότερη μέση ακαμψία από οποιοδήποτε από τους καρκίνους των ωοθηκών. Η συνολική διαφορά μεταξύ των κυτταρικών σειρών ήταν σημαντική (p & lt? 2.2 × 10

-16) με τα παρακάτω ζεύγη εμφανίζει σημαντικές διαφορές (p & lt? 0,05): IOSE vs OVCAR-3, IOSE vs HEY, IOSE vs HEY Α8, OVCAR- 4 vs HEY Α8, και vs HEY HEY Α8. Οι μέσες συντελεστές και οι τυπικές αποκλίσεις του Young των κυττάρων αυτών συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Τα μη κακοήθη κύτταρα IOSE αποδειχθεί υψηλότερη ενδογενή μεταβλητότητα στο κελί ακαμψία από κύτταρα από κάθε κυτταρική σειρά καρκίνου των ωοθηκών, η οποία είναι σύμφωνη με την προηγουμένως αναφερόμενη υψηλότερη μεταβλητότητα σε ακαμψία του καλοήθη κύτταρα σε σχέση με τον καρκίνο του μαστού κύτταρα που απομονώνονται από πλευριτικό ρευστά [3].

Η

Αξίζει να σημειωθεί ότι, Hey και ΗΕΥ κύτταρα A8 που προέρχονται από το ίδιο δείγμα όγκου [38] εμφανίζονται σημαντικές διαφορές σε ακαμψία, με ΗΕΥ κύτταρα A8 να είναι πιο συμβατό (Εικ. 2

α

). Αυτό το εύρημα είναι σημαντικό σε ότι αυτά ισογονικών κύτταρα διαφέρουν επίσης σε ογκογονικότητας τους σε γυμνά ποντίκια, σύμφωνα με την οποία τα κύτταρα ΗΕΥ A8 είναι πιο ογκογόνα μετά από ενδοπεριτοναϊκή ένεση σε γυμνά ποντίκια [38]. Να διερευνήσει τη σχέση μεταξύ των μηχανικών ιδιοτήτων αυτών των κυτταρικών σειρών των ωοθηκών και μεταστατικό δυναμικό τους, εξετάσαμε τις μεταναστευτικές και επεμβατική ιδιότητες HEY HEY και κύτταρα A8 σε σχέση με IOSE χρησιμοποιώντας το

in vitro

δοκιμασίες. ΗΕΥ κύτταρα A8 εμφανίζεται το μεγαλύτερο επεμβατική και μεταναστευτική δραστηριότητα που ακολουθείται από ΗΕΥ κύτταρα και τα κύτταρα ελέγχου IOSE (Σχ. 2

b

) υποδεικνύοντας ότι σχετική ακαμψία συσχετίζεται αντίστροφα με τους δείκτες του μεταστατικού δυναμικού (μετανάστευση και διεισδυτικότητα). Τα ευρήματα αυτά, που συνοψίζονται στο Σχ. 3 και στον Πίνακα 2, είναι σύμφωνο με προηγούμενες αναφορές που συνδέουν την κυτταρική παραμόρφωσης με tumorgenic και μεταστατικό δυναμικό [5], [7], [33].

Τα δεδομένα είναι τα σημεία είναι εξοπλισμένα με νόμο δύναμης για λόγους σαφήνειας. Οι ράβδοι σφάλματος: τυπικά σφάλματα των μέσων

Η

γονιδιακής έκφρασης των HEY HEY και Α8 κύτταρα Σύνδεσμοι Αυξημένη μεταστατικό δυναμικό με τις αλλαγές στην ακτίνη μεσολάβηση κυτταροσκελετού αναδιαμόρφωση Pathways

Αφού διαπιστώθηκε. ότι η απόκτηση του μειώθηκε ακαμψία σε κύτταρα ΗΕΥ A8 σχέση με ΗΕΥ κύτταρα συσχετίζεται με μία αύξηση στην μεταστατική πιθανότητα (δηλαδή, η κυτταρική μετανάστευση και διεισδυτικότητα), πραγματοποιήσαμε μια συγκριτική ανάλυση έκφρασης γονιδίου (DNA microarray) αυτών των δύο κυτταρικών σειρών, ώστε να να αποκτήσουν γνώσεις σχετικά με την πιθανή μοριακή βάση της αποκτηθείσας φαινότυπο.

Χρησιμοποιώντας Σημασία Ανάλυση των μικροσυστοιχιών (SAM) εντοπίσαμε 3641 που εκφράζονται διαφορικά χαρακτηριστικά μεταξύ αυτών των κυτταρικών σειρών (F1 File) και διαπίστωσε ότι 1.258 γονίδια ρυθμίστηκαν προς τα πάνω και 1272 κάτω-ρυθμίζονται σε HEY Α8 σε σχέση με HEY κύτταρα (15 γονίδια εμφανίζονται ασύμφωνα αλλαγές στην έκφραση μεταξύ HEY HEY και κύτταρα A8 για τους απολυμένους σετ καθετήρα). Σημαντικά εμπλουτισμένο οδοί GeneGO (Πίνακας 3) και τα δίκτυα διαδικασία (Πίνακας 4) που αντιστοιχεί στο σύνολο μας διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων δείχνουν ότι οι διαφορές μεταξύ ΗΕΥ και ΗΕΥ κύτταρα A8 περιλαμβάνουν αλλαγές στην μιτωτική φάση του κυτταρικού κύκλου (συναρμολόγηση ατράκτου /διαχωρισμό χρωμοσωμάτων, μικροσωληνίσκων της ατράκτου) , ρύθμιση των επιθηλιακών-to-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT), κυτταροσκελετού αναδιαμόρφωση, κυτταρική προσκόλληση, και ρύθμιση της CFTR (κυστικής ίνωσης διαμεμβρανικό ρυθμιστή αγωγιμότητας)

Η

Κόκκινο θερμόμετρο:. γονιδίων μεταγραφικά ανάντη ρυθμίζεται σε HEY κύτταρα A8? μπλε θερμόμετρο: γονίδια μεταγραφικά κάτω-ρυθμίζονται σε HEY κύτταρα A8? κίτρινο θερμόμετρο: πρωτεΐνες τοπολογικά σχετικές με το σύνολο των up-ρυθμισμένων γονιδίων

Η

(Α) IOSE, (Β) OVCAR-4, (Γ) Hey, (D) OVCAR-3 και (Ε. ) HEY Α8.

Η

(Α) Εκπρόσωπος συνάρτηση κατανομής προσανατολισμού για κάθε κυτταρική σειρά, (Β) ακαμψία έναντι του βαθμού της coalignment της F-ακτίνης, μπαρ σφάλματος αντιπροσωπεύει το τυπικό σφάλμα της μέσης τιμής (SEM).

Για να διερευνήσουν περαιτέρω το δυναμικό βιολογική σημασία των διαφορών στη γονιδιακή έκφραση μεταξύ HEY HEY και κύτταρα Α8, χρησιμοποιήσαμε τοπολογική ανάλυση σημαντικότητας (TSA). Χρησιμοποιώντας αυτή την προσέγγιση, προσδιορίσαμε 1108 μοναδικά αναγνωριστικά Entrez γονίδιο που αντιστοιχεί σε τοπολογικά σχετικές πρωτεΐνες που συνδέονται με up-ρυθμιζόμενα γονίδια σε κύτταρα ΗΕΥ Α8 (τα αναγνωριστικά γονίδιο Entrez μετατραπούν στα 1199 επίσημα σύμβολα γονίδιο παρουσιάζεται στο S2 File). Εμπλουτίζεται σημαντικά μονοπάτια GeneGO για αυτά τα τοπολογικά σχετικές πρωτεΐνες (360 πορείες σε FDR = 0,26%) υποδηλώνουν σημαντικές βιολογικές διαφορές μεταξύ HEY HEY και κύτταρα A8 συμπεριλαμβανομένων και εκείνων που δεν θα μπορούσαν να εντοπιστούν σε μεταγραφικό επίπεδο (S3 αρχείου). Μια πλήρης συζήτηση των αποτελεσμάτων αυτών είναι πέρα ​​από το πεδίο εφαρμογής του παρόντος εγγράφου και θα παρουσιαστεί αλλού. Εδώ θα περιορίσει τη συζήτησή μας σε αυτές τις αλλαγές σχετίζονται περισσότερο με τις παρατηρούμενες διαφορές στο κελί ακαμψία που συζητήθηκαν παραπάνω.

Η κορυφή σκοράροντας GeneGO οδός για τοπολογικά σχετικές πρωτεΐνες (S3 αρχείων) είναι η «TGF, WNT και κυτταροσκελετού αναδιαμόρφωση της οδού «(Εικ. 4). Αυτή η οδός επίσης αναγνωριστεί ως σημαντικά εμπλουτισμένη για τα γονίδια ρυθμισμένα προς τα κάτω σε κύτταρα ΗΕΥ A8 (Πίνακας 3). Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι οι διαφορές στην ακαμψία μεταξύ HEY HEY και κύτταρα A8 που σχετίζονται με κυτταροσκελετού αναδιαμόρφωση. Τα ευρήματά μας υποστηρίζουν προηγούμενες προβλέψεις ότι η βάση της μειωμένης δυσκαμψίας συνδέεται με τον καρκίνο [39] και άκρως μεταστατικών κυττάρων [40] μπορεί να συνδέεται με κυτταροσκελετικές αναδιαμόρφωση. Περαιτέρω υποστήριξη για το συμπέρασμα αυτό προέρχεται από την TSA οποία βρέθηκαν διάφορα isophorms ακτίνης υπεροικογένειας τοπολογικά σημαντική για τα γονίδια ρυθμισμένα προς τα πάνω σε ΗΕΥ Α8 κύτταρα (S2 File), καθώς και από την ανάλυση διαφορικής έκφρασης, το οποίο διαπιστώθηκε ότι οι ακτίνης μονομερούς δέσμευσης πρωτεϊνών CFL2 , TWF1 και PFN1 που ρυθμίζουν την ενσωμάτωση της ακτίνης μονομερών σε νημάτια [41] υπερεκφράζονται στα κύτταρα ΗΕΥ A8. Η υπερέκφραση του κοφιλίνη-2 (CFL2) αυξάνει το ποσοστό του κύκλου εργασιών ακτίνης με αποπολυμερισμό νήματα σε αιχμηρά άκρα τους [42], ενώ twinfilin (TWF1) λειτουργεί ως ακτίνη-μονομερούς-απομόνωσης πρωτεΐνη που αποκόπτει επίσης νημάτια ακτίνης να προωθήσει την αποσυναρμολόγηση του νήματος

in vitro

και γρήγορη εναλλαγή του

in vivo

[43]. Το γεγονός ότι η κινάση φως αλυσίδα μυοσίνης (MYLK), το οποίο προωθεί μια κινητική δραστηριότητα μυοσίνη ακτίνης ενεργοποιούνται και παραγωγή ένταση [44], είναι σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται σε κύτταρα ΗΕΥ A8 υποστηρίζει περαιτέρω το ρόλο των ινών στρες στην παρατηρούμενη διαφορά στο κελί ακαμψία. Είναι ενδιαφέρον, BDM και ML-7, οι αναστολείς του MYLK, έχουν προηγουμένως αναφερθεί ότι επάγει την αποσκλήρυνση του ινοβλαστών κυτταρικών σειρών [45]. Η φωσφορυλίωση του φωτός αλυσίδα μυοσίνης, σχηματισμός ινιδίων του στρες, και η επακόλουθη αύξηση στο κύτταρο ακαμψία μπορεί επίσης να προκληθεί μέσω RhoA /Rho κινάσης [46], η οποία αδρανοποιείται από εξαρτώμενη από cAMP πρωτεϊνική κινάση (ΡΚΑ) [47]. Βρήκαμε ότι οι ρυθμιστικές (PRKAR2A, PRKAR2B) και καταλυτική (PRKACB) υπομονάδα γονίδια της PKA υπερεκφράζεται σημαντικά σε HEY Α8 σε σχέση με HEY κύτταρα προτείνοντας PKA-εξαρτώμενη αδρανοποίηση των RhoA /Rho κινάσης σε HEY κύτταρα A8. qPCR επικύρωση της διαφορικής έκφρασης γονιδίων από πείραμα μικροσυστοιχιών επιβεβαιώθηκε υπερέκφραση PRKAA2 και TWF1 γονίδια με τις αντίστοιχες φορές αλλάζει 3.89 και 2.63 και η μειωμένη έκφραση του γονιδίου MYLK με φορές -2.0 αλλαγή στην HEY κύτταρα A8 σε σχέση με HEY κύτταρα (Εικ. S2).

Μικροσκοπική αναλύσεις των ωοθηκών και Ελέγχου κύτταρα Επιβεβαιώστε ότι η ακτίνη μεσολάβηση κυτταροσκελετού ανάπλαση συνδέονται με την αλλαγή στο μεταστατικό δυναμικό

από μοριακές αναλύσεις μας έδειξαν ότι ακτίνης με τη μεσολάβηση του κυτταροσκελετού αναδιαμόρφωση μπορεί να συνεισφέρει σημαντικά στην οι παρατηρούμενες διαφορές στην κυτταρική ακαμψία μεταξύ ΗΕΥ και οι πιο επεμβατική /ογκογόνα κύτταρα ΗΕΥ Α8, ελέγξαμε την υπόθεση εξετάζοντας την κυτταροσκελετική δομή του σανού και ΗΕΥ κύτταρα A8 σε σχέση με άλλες ωοθηκών καρκινικά κύτταρα (OVCAR-3, OVCAR-4) και μη -malignant αθάνατα κύτταρα των ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακά (IOSE). Τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται στο Σχ. 5 πυκνότερο οθόνη, καλά ευθυγραμμισμένα F-ακτίνης με μακρύτερες ίνες στρες σε σχέση με IOSE όλα τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Αυτό είναι σύμφωνο με προηγουμένως αναφερθεί συγκρίσεις μεταξύ φυσιολογικών και καρκινικών κυττάρων [5], [20].

Επιπλέον, ο βαθμός της συν-ευθυγράμμιση των F-ακτίνης ίνες μεταξύ των διαφόρων κυτταρικών σειρών που εξετάστηκαν συσχετίζεται με την παρατηρηθείσα διαφορά σε κύτταρα ακαμψία. Για παράδειγμα, για τους πιο σκληρή κύτταρα IOSE, τα νημάτια ακτίνης διανέμονται μέσω του κυτταρικού σώματος, με τις περισσότερες δέσμες F-ακτίνης ευθυγραμμισμένες κατά μήκος του μεγάλου άξονα του κυττάρου με σαφώς καθορισμένες ίνες στρες και εστιακές επαφές. Σε αντίθεση, νημάτια ακτίνης στα μαλακότερα ωοθηκών καρκινικά κύτταρα είναι λιγότερο οργανωμένη και F-ακτίνης δέσμες προσανατολισμένη τυχαία με διαταράσσεται, σύντομα τμήματα. Σε OVCAR-4 κύτταρα, τα νημάτια ακτίνης ευθυγραμμίζονται μόνο σε τοπικό επίπεδο και σχηματίζουν ένα μπερδεμένο δίκτυο. Σε HEY κύτταρα, τα νημάτια ακτίνης σπάσει σε μικρότερα τμήματα και να εμφανίσει μειωμένο συν-ευθυγράμμιση. F-ακτίνης σε OVCAR-3 κύτταρα διατηρεί μια φλοιώδη δομή με τα περισσότερα νημάτια που βρίσκεται στην περιφερειακή περιοχή του κυττάρου, αν και σε σχετικά χαμηλή πυκνότητα. ΗΕΥ κύτταρα A8 παρουσιάζουν παρόμοια χαρακτηριστικά κατανομής F-ακτίνης προς ΗΕΥ κύτταρα, αλλά με χαμηλότερη πυκνότητα. Δεδομένου ότι ο κυτταροσκελετός ακτίνης συμβάλλει στις μηχανικές ιδιότητες των κυττάρων, παρατηρούνται διακυμάνσεις είναι σύμφωνες με τις διαφορές στο κελί ακαμψία και με προηγούμενες αναφορές [8], [19].

αναλύθηκαν ποσοτικά ο βαθμός της συν-ευθυγράμμιση των F-ακτίνης σε όλους τους πέντε κυτταρικές σειρές με τη χρησιμοποίηση συνάρτηση κατανομής προσανατολισμού. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται στο Σχ. 6

μια

. Μια παράμετρος

D

, ορίζεται ως χρησιμοποιήθηκε για την ποσοτικοποίηση του βαθμού συν-ευθυγράμμιση των F-ακτίνης από τις λειτουργίες διανομής προσανατολισμό, όπου

P (θ)

αντιπροσωπεύει τη συνάρτηση κατανομής προσανατολισμού, η οποία είναι η πιθανότητα για μια ίνα προσανατολίζεται σε γωνία

θ

στην εικόνα φθορισμού.

P

0 (θ)

είναι η συνάρτηση κατανομής προσανατολισμού για την ακραία περίπτωση όπου F-ακτίνης είναι εντελώς τυχαία κατανεμημένα και ως εκ τούτου έχει μία τιμή

P

0 (θ) =

1/180. Στην ακραία περίπτωση κατά την οποία όλες οι ίνες είναι προσανατολισμένες ακτίνης τυχαία χωρίς καμία προτίμηση, η συνάρτηση κατανομής προσανατολισμού θα πρέπει να είναι ένα σταθερό και ανεξάρτητο από τη γωνία. Από τον ορισμό του

D

, μια υψηλότερη τιμή

D

δείχνει μια αυξανόμενη απόκλιση από τυχαία ευθυγράμμιση και ένας υψηλότερος βαθμός συνεργασίας ευθυγράμμιση των F-ακτίνης. διανομές Προσανατολισμός του F-ακτίνης διαφέρουν μεταξύ των πέντε κυτταρικές σειρές των ωοθηκών (σχ. 6

α

). Σε μη-κακοήθη κύτταρα IOSE, τα περισσότερα από F-ακτίνης δέσμες ήταν ευθυγραμμισμένα κατά μήκος του μεγάλου άξονα του κυττάρου, το οποίο είναι ~135 °. Σε αντίθεση, OVCAR-4 κύτταρα εμφανίζουν διάφορες κατευθύνσεις F-ακτίνης, υποδεικνύοντας ότι τα νημάτια ακτίνης είναι ούτε ομοιόμορφα ευθυγραμμισμένα, ούτε ομοιόμορφα κατανεμημένη. Αυτό το αποτέλεσμα είναι εύκολα εμφανές από την εικόνα φθορισμού στο Σχ. 5. Η σχέση μεταξύ του βαθμού της συν-ευθυγράμμιση των F-ακτίνης και ακαμψία του απλού κυττάρου παρίσταται γραφικώς στο Σχ. 6

b

, η οποία δείχνει ισχυρή και σημαντική θετική συσχέτιση (r = 0,99834 με ρ-val = 8.064 × 10

-5 και ρ = 1 με ρ-val = 0,01667). Το αποτέλεσμα αυτό υποδηλώνει ότι οι αλλαγές στη συν-ευθυγράμμιση των F-ακτίνης δέσμες θα μπορούσε επίσης να συμβάλει με τις διαφορές στο κελί ακαμψίας εντός των εξέτασε κυτταρικές σειρές των ωοθηκών.

Συμπεράσματα

Η ανάλυσή μας των μη-κακοήθεις IOSE και τέσσερις ωοθηκών κυτταρικές σειρές καρκίνου δείχνει ότι τα καρκινικά κύτταρα εμφανίζουν μια χαμηλότερη μέση ακαμψία σε σχέση με μη κακοήθη πρόδρομα κύτταρα. Είναι ενδιαφέρον, μπορούμε επίσης να βρούμε ότι η αύξηση στην επεμβατική και μεταναστευτικών ικανότητα που σχετίζεται με HEY κύτταρα A8 σε σχέση με HEY κύτταρα συσχετίζεται επίσης με μια σημαντική μείωση στο κελί ακαμψία. Συγκριτική ανάλυση γονιδιακής έκφρασης των κυττάρων ΗΕΥ και Α8 HEY υποδεικνύει ότι η μοριακή βάση της μείωσης της δυσκαμψίας μεταξύ αυτών των κυττάρων είναι αντανακλαστική της εκτεταμένης μοριακές αλλαγές συμπεριλαμβανομένων των αλλαγών στο ακτίνης του κυτταροσκελετού αναδιαμόρφωση οδούς. Μικροσκοπικές αναλύσεις του κυτταροσκελετού της ακτίνης σε καρκίνο των ωοθηκών και του ελέγχου κύτταρα είναι συνεπής με αυτήν την υπόθεση.

Δεδομένου ότι οι μετρήσεις μας διεξάγονται με καρκινικές κυτταρικές σειρές, θα χρειαστούν περαιτέρω μελέτες για να δούμε αν έχουν παρόμοια αποτελέσματα που διαπιστώθηκε στην περίπτωση της ασθενούς προερχόμενο κύτταρα. Καθορισμός της σχετικής μεταστατικό δυναμικό των καρκινικών κυττάρων είναι ένας σημαντικός παράγοντας στο σχεδιασμό των βέλτιστων στρατηγικών στον εξατομικευμένη θεραπεία του καρκίνου [48]. Επί του παρόντος, η εκτεταμένη μοριακό προφίλ απαιτείται για την εκτίμηση του μεταστατικού δυναμικού των καρκινικών κυττάρων [49]. Συλλογικά, τα αποτελέσματα μας δείχνουν ότι η μηχανική ακαμψία μπορεί να είναι ένα χρήσιμο βιοδείκτη για την ανάπτυξη ακριβών, μη επεμβατικές κλινικές μεθόδους για την αξιολόγηση της σχετικής μεταστατικό δυναμικό των ωοθηκών και ίσως και άλλα είδη καρκινικών κυττάρων.