Αφηρημένο

Ο καρκίνος του προστάτη είναι η πιο κοινή μη-δερματολογικές κακοήθεια στους άνδρες στο Δυτικό κόσμο. Πρόσφατα, μια συχνή χρωμοσωμική ανωμαλία fusing ανδρογόνων ρυθμίζονται

TMPRSS2

υποκινητή και το

ERG

γονίδιο (

TMPRSS2 /ERG

) ανακαλύφθηκε στον καρκίνο του προστάτη. Αρκετές μελέτες έδειξαν τη συνεργασία μεταξύ των

TMPRSS2 /ERG

και άλλα ελαττωματικά πορείες στην εξέλιξη του καρκίνου. Ωστόσο, τα αποκαλυπτήρια του πιο συγκεκριμένες οδούς στις οποίες

TMPRSS2 /ERG

παίρνει μέρος, απαιτεί περαιτέρω διερεύνηση. Χρησιμοποιώντας τα επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη απαθανάτισε μπορέσαμε να δείξουμε ότι

TMPRSS2 /ERG

υπερεκφράζουν κύτταρα υφίστανται έναν επιθηλιακό σε μεσεγχυματικά Μετάβασης (EMT), που εκδηλώνεται με την απόκτηση της μορφολογίας μεσεγχυματικών και δεικτών, καθώς και τη μετανάστευση και την εισβολή των δυνατοτήτων. Αυτά τα ευρήματα επιβεβαιώθηκαν

in vivo

, όπου τα κύτταρα ελέγχου προκάλεσε διακριτά οζίδια ενώ η

TMPRSS2 /ERG

εκφράζοντα κύτταρα σχηματίζονται κακοήθεις όγκους, η οποία εξέφρασε δείκτες EMT. Για να διερευνήσουν περαιτέρω το γενικό σύστημα μεταγραφής που προκαλείται από το

TMPRSS2 /ERG

, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε ανάλυση μικροσυστοιχιών που αποκάλυψε μια ξεχωριστή πρόγραμμα έκφραση EMT, συμπεριλαμβανομένων των up-ρύθμιση των διαμεσολαβητών EMT,

ZEB1

και

ZEB2,

και κάτω ρύθμιση της επιθηλιακής δείκτη

Cdh1

(Ε-καδχερίνη). Μια δοκιμασία της χρωματίνης ανοσοκατακρήμνισης αποκάλυψε την άμεση σύνδεση του

TMPRSS2 /ERG

στον υποκινητή του

ZEB1

αλλά όχι

ZEB2

. Ωστόσο,

TMPRSS2 /ERG

ήταν σε θέση να δεσμεύουν τους υποψηφίους για τα

ZEB2

ρυθμιστές,

IL1R2

και

SPINT1

. Αυτό το σύνολο των πειραμάτων φωτίζει περαιτέρω ο μηχανισμός με τον οποίο η

TMPRSS2 /ERG

σύντηξης επηρεάζει την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη και μπορεί να βοηθήσει στην στόχευση

TMPRSS2 /ERG

και τους μεταγενέστερους στόχους του σε μελλοντικές προσπάθειες σχεδιασμό φαρμάκων.

Παράθεση: Leshem O, Madar S, Kogan-Sakin Ι, Kamer Ι, Goldstein Ι, Brosh R, et al. (2011)

TMPRSS2 /ERG

Προωθεί Τα επιθηλιακά σε μεσεγχυματικά μετάβαση μέσω του

ZEB1

/

ZEB2

Άξονα σε καρκίνο του προστάτη μοντέλο. PLoS ONE 6 (7): e21650. doi: 10.1371 /journal.pone.0021650

Επιμέλεια: Moray Campbell, Roswell Park Cancer Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 26, Ιαν., 2011? Αποδεκτές: 4 του Ιουνίου 2011? Δημοσιεύθηκε: 1, Ιούλ 2011

Copyright: © 2011 Leshem et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από ένα Κέντρο αριστείας επιχορήγηση από το Flight Attendant Medical Research Institute (FAMRI), EC FP6 Grant LSHC-CT-2004 – 503576, το Γιαντ Αβραάμ Κέντρο για τον Καρκίνο Διάγνωση και θεραπεία και το Ίδρυμα Ridgefield, το πρόγραμμα «Talpiot» για ιατρικές ηγεσία στο Ιατρικό Κέντρο Sheba, και την Ένωση Καρκίνου ισραηλινή. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του προστάτη είναι ένας από τους πιο συχνούς καρκίνους στους άνδρες. Οι Κοντά σε 30.000 ασθενείς αναμένεται να πεθάνουν από τη νόσο στις ΗΠΑ κάθε χρόνο. Μία σημαντική πρόοδος σε αυτό το πεδίο έρευνας είναι μια πρόσφατη ανακάλυψη ότι συχνάζουν υπερ-έκφραση της Ε Είκοσι έξι (ETS)-σχετικών πρωτο-ογκογονίδια μπορεί να οδηγηθεί από τον υποδοχέα ανδρογόνων, ως συνέπεια της κοινής γενωμικού αναδιατάξεις. Η κυρίαρχη μορφή των προαναφερθέντων συντήξεις με συχνότητα -85% [1], είναι η σύντηξη μεταξύ εξόνιο 1 από TMPRSS2 και εξόνια 4-9 από το

ERG

γονίδιο, το οποίο λαμβάνει χώρα είτε με διαγραφή του 3 Mega βάσεις περιοχή που χωρίζει αυτές [2] γονίδια, ή μέσω ενός interchromosomal μετατόπιση [3], [4]. Καθώς αυτή η σύντηξη είναι ήδη εμφανής στις προστάτη ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (PIN) [5], τη διερεύνηση αυτής της σύντηξης μπορεί να κρατούν το κλειδί για την κατανόηση των μηχανισμών που εμπλέκονται στα αρχικά στάδια του καρκίνου του προστάτη.

Από την ανακάλυψή του [6], η

TMPRSS2 /ERG

σύντηξη έχει μελετηθεί εκτενώς σε διάφορες πτυχές, συμπεριλαμβανομένης της πρόωρης διάγνωση, πρόγνωση, συμβολή στην εξέλιξη του καρκίνου και ακόμη και ως στόχος για τη θεραπεία του καρκίνου [7]. Σύμφωνα με μακροπρόθεσμες κλινικές μελέτες που πραγματοποιήθηκαν σε μεγάλη σειρά ασθενών, φαίνεται ότι

TMPRSS2 /ERG

έκφραση συσχετίζεται με μια πιο επιθετική μορφή του καρκίνου του προστάτη [8], [9]. Περαιτέρω μελέτες έχουν δείξει ένα ρόλο για

TMPRSS2 /ERG

σύντηξης στην ογκογένεση σε όρους πολλαπλασιασμού, την εισβολή και την έναρξη του καρκίνου και την εξέλιξη [10], [11], [12], [13]. Σε γενικές γραμμές, φαίνεται ότι ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων δεν είναι απαραίτητα προωθείται μέσω

TMPRSS2 /ERG

έκφρασης. Όσο για ογκογένεση, τα στοιχεία είναι ασαφή. Ενώ χτυπήσει τα κάτω ενδογενή

TMPRSS2 /ERG

στον προστάτη προερχόμενα καρκινικά κύτταρα VCAP ως αποτέλεσμα τη μείωση τόσο της πρόσληψης όγκου και του όγκου [13], [14], διαγονιδιακά ποντίκια που φιλοξενούν

TMPRSS2 /ERG

στο γονιδίωμά τους, είτε αναπτυγμένες PIN [10], [15] ή δεν αποκαλύπτουν ιστολογική ένδειξη PIN ή διηθητικού καρκίνου [11], [16]? ανάλογα με το συγκεκριμένο μοντέλο που χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη και την ερμηνεία των δεδομένων. Παρά τη διαφωνία σχετικά με το ρόλο των

TMPRSS2 /ERG

στην έναρξη του καρκίνου, η κυτταρική εισβολή προτάθηκε να είναι συνέπεια του

TMPRSS2 /ERG

σύντηξη δύο

in vitro

και

in vivo

[10], [13], [15]. Είναι ενδιαφέρον, μια

in silico

μελέτη αποκάλυψε ότι

TMPRSS2 /ERG

συν-εκφράζεται με απακετυλάσης ιστόνης 1 (HDAC1) συνδέεται με ρύθμιση προς τα κάτω των γνωστών στόχων του [17]. Το εύρημα αυτό υποδηλώνει ότι

TMPRSS2 /ERG

συνδέεται με επιγενετικές επαναπρογραμματισμό. Κατά συνέπεια, σε μια μελέτη παρακολούθησης που εκτελούνται από την ίδια ομάδα, ειδικούς αναστολείς HDACi, και HDAC, διακυβεύεται TMPRSS2

/ERG

έκφραση ή δραστηριότητα στην ERG θετικά κύτταρα,

in vitro

[17] , [18]. Επιπλέον, πρόσφατα ευρήματα έδειξαν μια συνεργασία μεταξύ σύντηξης TMPRSS2 /ERG και απορυθμισμένη δραστηριότητα του καρκίνου που σχετίζονται με οδούς, όπως PTEN [19], ΡΙ3-κινάσης [16], και AKT ή AR [20]. Πιο πρόσφατα, TMPRSS2 /ERG δείχθηκε να μεσολαβήσει Επιθηλιακά να μεσεγχυματικά Μετάβασης (ΕΜΤ) μέσω της επαγωγής σηματοδότηση Wnt συστατικών [21]. Στο σύνολό τους, θα μπορούσε να συμπεράνει κανείς ότι και άλλα

TMPRSS2 /ERG

μεσολάβηση οδούς, μπορεί να συγκλίνει στο ίδιο τελικό σημείο, δηλαδή, ΕΜΤ και εισβολή? και ως εκ τούτου την ανακάλυψη νέων οδών μέσω των οποίων

TMPRSS2 /ERG

ασκήσει αυτό το αποτέλεσμα έχει μεγάλη σημασία. Το βασικό κίνητρο αυτής της μελέτης είναι να διαλευκάνουν όπως

TMPRSS2 /ERG

σχετικών μηχανισμών στο πλαίσιο του καρκίνου του προστάτη. Σε μια προηγούμενη εργασία ιδρύσαμε απαθανάτισε και ογκογόνο ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα προστάτη γραμμές (PRECs) των καθορισμένων γενετικής σύστασης [22]. Ομοίως, στην παρουσιάστηκε μελέτη, δημιουργήσαμε γενετικά τροποποιημένων PRECs να χρησιμεύσει ως υπόβαθρο πάνω στο οποίο τα αποτελέσματα των

TMPRSS2 /ERG

σύντηξη θα μπορούσε να είναι πραγματικά μελετηθεί. Βρήκαμε ότι TMPRSS2 /ERG εκτελεί μια ξεχωριστή πρόγραμμα έκφραση EMT που διέπεται κυρίως από την άμεση ενεργοποίηση του

ZEB1

και μια έμμεση επαγωγή

ZEB2

μέσω

SPINT1

και

IL1R2

διαφοροποίησης, οδηγεί σε φαινότυπο EMT

in vitro

και

in vivo

.

Αποτελέσματα

Ίδρυση απαθανάτισε PRECs πολιτισμών

για να διερευνηθεί η επίδραση του

TMPRSS2 /ERG

σε ένα γενετικά τροποποιημένο περιβάλλον επιδιώξαμε να καθιερώσει ένα απαθανάτισε τον πολιτισμό PRECs. Κανονικό προστάτη επιθηλιακά κύτταρα παρήχθησαν από ένα ανθρώπινο δείγμα προστατεκτομή και στη συνέχεια αναπτύχθηκαν σε καλλιέργεια. Για να προκληθεί αθανατοποίηση, τα κύτταρα εισήχθησαν με την καταλυτική hTERT υπομονάδα τελομεράσης, και τόσο η ρ53 και οδοί pRB είχαν διαταράσσονται από ρ53 knockdown και υπερ-έκφραση του κυκλίνη /CDK4 χίμαιρα, αντίστοιχα, δίνοντας αφορμή για μια αθάνατη κυτταρική γραμμή χαρακτηρισμένη ως ΕΡ (Εικόνα 1Α και Β). Στη συνέχεια, τα αθανατοποιημένα κύτταρα μολύνθηκαν με ρετροϊούς που κωδικοποιεί είτε

TMPRSS2 /ERG

ή ελέγχου κενός-φορέα (Σχήμα 1 C). πρωτεϊνικό επίπεδο ERG ήταν συγκρίσιμο με προηγουμένως αναφερθεί επίπεδο έκφρασης του σε κυτταρικές σειρές και τα δείγματα του καρκίνου [23], [24]. Αξίζει να σημειωθεί ότι,

TMPRSS2 /ERG

μόνο του ή σε συνδυασμό με hTERT και /ή p53 knockdown δεν ήταν επαρκής για να επάγει αθανατοποίηση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τέλος, μετά από προηγούμενη έκθεση ότι ο συνδυασμός των ανδρογόνων υποδοχέων (AR) και τα υψηλά επίπεδα της ERG προωθεί την ανάπτυξη μιας πιο φτωχά διαφοροποιημένο, διηθητικό αδενοκαρκίνωμα, είτε από μόνο του γονιδίου [20]? AR εισήχθη στο

TMPRSS2 /ERG

εκφράζοντα κύτταρα καθώς και σε ελέγχους κενός-φορέα τους (Σχήμα 1C).

Για την επαγωγή αθανατοποίηση, τα κύτταρα εισήχθησαν με την καταλυτική υπομονάδα τελομεράσης hTERT , και τόσο η ρ53 και οδοί pRB είχαν διαταραχθεί χρησιμοποιώντας p53 knockdown και υπερ-έκφραση του κυκλίνη /CDK4, αντίστοιχα. (Β) Primary PRECs, καθώς και hTERT /shp53 /κυκλίνη-CDK4 – υπερεκφράζουν (κύτταρα EP), διαδοχικά περάστηκαν και μετρήθηκαν. Διπλασιασμούς πληθυσμού (αρχεία pdl) υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον τύπο: αρχεία pdl = log (έξοδος κυττάρων /cellinput) /log2. (C) κύτταρα του ΕΚ εισήχθησαν με AR και είτε

TMPRSS2 /ERG

(ΕΡ-AR TMPRSS2 /ERG) ή ένα άδειο φορέα (ΕΡ-AR). AR και ERG επίπεδα πρωτεΐνης μετρήθηκαν με κηλίδωση Western. Ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Ένας ρόλος για

TMPRSS2 /ERG

σε επιθηλιακά σε μεσεγχυματικά μετάβαση

in vitro

Η

Συγκρίνοντας το μορφολογίας του ΕΡ-AR και ΕΡ-AR

TMPRSS2 /ERG

κυτταρικές σειρές κάτω από ένα οπτικό μικροσκόπιο, παρατηρήσαμε ότι η ΕΡ-AR

TMPRSS2 /ERG

κύτταρα αποκτήσει χαρακτηριστικά ινοβλαστική-όπως, όπως αποδεικνύεται ένα πιο επίμηκες μορφολογία και διάσπαρτα πυκνότητα σε σύγκριση με τους ελέγχους τους ισογονιδιακών, που επέδειξε υψηλότερο βαθμό προσκόλλησης μεταξύ γειτονικών κυττάρων (Σχήμα 2Α). Οι παρατηρούμενες μεταβολές, οι οποίες είναι χαρακτηριστικά γνωρίσματα της EMT [25], [26], σε συνδυασμό με τις προηγούμενες εκθέσεις συνδέει

TMPRSS2 /ERG

με EMT και εισβολή [10], [21], μας ώθησε να εξετάσει κατά πόσον το Εκτός από τις μορφολογικές αλλαγές, τα κύτταρα χορηγούνται και με κινητικότητα και εισβολή ικανότητες. Για το σκοπό αυτό, τα κύτταρα σπάρθηκαν σε transwells με μέσο χωρίς ορό και αξιολογήθηκε μετανάστευσή τους προς ορό μέσα συμπληρωθούν. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Β,

TMPRSS2 /ERG

εκφράζοντα κύτταρα παρουσίασαν μια ενισχυμένη ικανότητα μεταναστευτικά. Το ίδιο πείραμα επαναλήφθηκε χρησιμοποιώντας φρεάτια επικαλυμμένα με Matrigel, προκειμένου να εξεταστεί η ικανότητα των κυττάρων να διεισδύσουν και να εισβάλει μια πυκνή επιφάνεια. Για άλλη μια φορά, την ικανότητα εισβολής ήταν σημαντικά πιο ευδιάκριτη στα

TMPRSS2 /ERG

που εκφράζουν κύτταρα (Σχήμα 2C). Η απώλεια του

Cdh1

(Ε-καδχερίνη) θεωρείται ότι είναι η πιο θεμελιώδης εκδήλωση κατά τη διάρκεια της EMT [27]. Ως εκ τούτου, μέτρησαν τα επίπεδα της

Cdh1

mRNA και πρωτεΐνης με τη χρήση QRT-PCR και χρώση ανοσοφθορισμού, αντίστοιχα. Πράγματι, ΕΡ-AR

TMPRSS2 /ERG

κύτταρα έδειξαν μια σημαντική μείωση στα επίπεδα του

Cdh1

mRNA (Σχήμα 2D) και πρωτεΐνες (Σχήμα 2Ε). Επιπλέον,

VIM (βιμεντίνη), ένα γνωστό δείκτη μεσεγχυματικά βρέθηκε να είναι αυξημένα κατά το

TMPRSS2 /ERG

εκφράζοντα κύτταρα (Σχήμα 2Ε). Εν ολίγοις, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι

TMPRSS2 /ERG

υπερέκφραση προκαλεί μια επιθηλιακά σε μεσεγχυματικά μετάβαση

in vitro

.

(Α) Για μορφολογική σύγκριση, τα κύτταρα φωτογραφήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα οπτικό μικροσκόπιο. (Β) Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε transwells και των αποδημητικών ικανότητα τους προς FCS μετρήθηκε με απαρίθμηση των μεταναστευόντων κυττάρων. (Γ) Η ίδια ρύθμιση όπως και στο (Β) χρησιμοποιήθηκε με Matrigel επικαλυμμένα transwells προκειμένου να συγκριθούν κυττάρων εισβολής. (D) Κύτταρα αναλύθηκαν για Cdh1 (Ε-Cadhein) έκφρασης με χρήση QRT-PCR. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD από ένα τριπλό από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα. * Υποδηλώνει μία σημαντική διαφορική έκφραση του γονιδίου σε σύγκριση με τον έλεγχο. (Ε) Κύτταρα απλώθηκαν σε πλακίδια και χρωματίστηκαν για Cdh1 και βιμεντίνης. DAPI χρησιμοποιήθηκε για να απεικονίσει πυρήνες. (F) Κύτταρα εμφυτεύθηκαν σε αδένες προστάτη ποντικού. Οι αδένες αφαιρέθηκαν 68 ημέρες μετά την εμφύτευση, σε τομή και είτε βάφτηκαν με αιματοξυλίνη και εοσίνη (Η &? Ε) ή με αντισώματα κατά της ανθρώπινης AR, Cdh1 και βιμεντίνης. (X400 μεγεθύνσεις). Σημειώστε ότι τα κύτταρα ΕΡ-AR (Control) που σχηματίζεται διακριτά οζίδια του προστάτη (Μπλε βέλη), τα οποία είναι θετικά βάφονται με το ανθρώπινο ειδικό αντίσωμα αντι-AR (α-Har). Σε αντίθεση, ΕΡ-AR TMPRSS2 /ERG που προέρχονται από όγκους, τα οποία είναι θετικά βάφονται με α-Har αντισώματος, τυλίχθηκε στις ποντικού οζίδια α-Har-αρνητικό (μαύρα βέλη).

Η

Η επίδραση του

TMPRSS2 /ERG

στην ογκογένεση

σε μια προσπάθεια να επεκταθεί η προηγούμενη παρατήρηση σε ένα

in vivo

μοντέλο? εμείς είτε με ένεση τα γενετικά τροποποιημένων κυτταρικών σειρών υποδορίως ή τους εμφυτεύονται ορθοτοπικά στον προστάτη γυμνών ποντικών. Εξήντα οκτώ ημέρες μετά την εμφύτευση, οι όγκοι αφαιρέθηκαν, κόπηκαν και χρωματίστηκαν για δείκτες EMT. Συγκρίνοντας τις ορθοτοπική θέσεων εμφύτευσης των διακριτών κυτταρικών σειρών αποκάλυψε ότι hTERT /shp53 /CDK4-αθανατοποιημένα PRECs (κύτταρα ΕΡ) δεν σχηματίζουν όγκους (δεδομένα δεν παρουσιάζονται), ενώ το ΕΡ-AR σχηματίζονται διακριτά οζίδια διάσπαρτες σε όλο τον προστάτη ποντικού (Σχήμα 2F, υποδεικνύεται με μπλε βέλη). Αξίζει να σημειωθεί ότι, ΕΡ-AR

TMPRSS2 /ERG

κύτταρα σχηματίζονται μεγάλες κακοήθεις όγκους, η οποία περιβάλλεται τις κανονικές οζίδια προστάτη ποντικού (Σχήμα 2F, μαύρα βέλη). Επιπλέον, ΕΡ-AR-προέρχεται οζίδια αποδειχθεί θετική χρώση για το επιθηλιακό Cdh1 δείκτη, και απέτυχε να λεκιάσουν για την VIM μεσεγχυματικά δείκτη (Σχήμα 2F, μπλε βέλη). Ένα είδωλο ήταν εμφανής στην ΕΡ-AR

TMPRSS2 /ERG

προερχόμενο από όγκους, η οποία εξέφρασε υψηλά επίπεδα VIM και ήταν αρνητικά για Cdh1, επιβεβαιώνοντας περαιτέρω το

in vitro

παρατήρηση ότι

TMPRSS2 /ERG

προκαλεί EMT. Η χρώση για MKI67 (Ki-67), ενός γνωστού δείκτη πολλαπλασιασμού, αποκάλυψε μια εκτεταμένη έκφραση στο ΕΡ-AR

TMPRSS2 /ERG

όγκοι (37% ± 2 θετικά κύτταρα) σε σύγκριση με τα οζίδια ΕΡ-AR-προερχόμενο (8% ± 2). Αυτό δείχνει ότι οι ΕΡ-AR-προέρχεται οζίδια είναι λιγότερο πολλαπλασιαστικές και μπορεί να ευθύνεται για λανθάνουσα φύση τους.

Τα αποτελέσματα που περιγράφονται μέχρι τώρα δείχνουν ότι

TMPRSS2 /ERG

διευκολύνει EMT και, κατά συνέπεια, η σχηματισμός του πιο επιθετική και πολλαπλασιαστική όγκους. Αρκετές μελέτες έδειξαν ότι σε σύγκριση με βλάβες PIN,

TMPRSS2 /ERG

αναδιάταξη συχνότητα σε εντοπισμένες διηθητικού καρκίνου του προστάτη, διπλασιάζεται [5], [28], [29], [30]. Η παρατήρηση αυτή σημαίνει ότι

TMPRSS2 /ERG

απαιτεί πρόσθετες τροποποιήσεις, προκειμένου να επιλεγεί θετικά καθώς η νόσος εξελίσσεται. Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, χρησιμοποιήσαμε μία προηγουμένως παράγονται, Ras-μετασχηματισμένα καλλιέργεια PRECs [22]. Αυτά τα κύτταρα φιλοξενούν εκτοπικά-εκφράζεται hTERT, τα ιικά ογκογονίδια SV40 αντιγόνα μικρών και μεγάλων Τ, ογκογόνο H-RasV12 και ανδρογόνων υποδοχέων. Ένα άδειο φορέα ή ένα

TMPRSS2 /ERG

κωδικοποιεί φορείς εισήχθησαν σε αυτά τα κύτταρα, για να δημιουργήσει δύο ξεχωριστές γραμμές κυττάρων, LHSR και LHSR

TMPRSS2 /ERG

, αντίστοιχα (Σχήμα 3Α). Σε συμφωνία με τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με κύτταρα ΕΡ-AR, Cdh1 ήταν κάτω-ρυθμίζονται σε κύτταρα LHSR εκφράζουν

TMPRSS2 /ERG

(Εικόνα 3Β). Στη συνέχεια, τα κύτταρα ορθοτοπικά ένεση σε γυμνούς ποντικούς προστάτες, καθώς και υποδορίως. Όπως ήταν αναμενόμενο, μετά απλώς 28 ημέρες και οι δύο κυτταρικές σειρές προκάλεσαν όγκους χωρίς σημαντικές διαφορές ως προς το μέγεθος (όγκος συχνότητα παρουσιάζεται στον Πίνακα S1). Κατά συνέπεια, η χρώση MKI67 δεν αποκάλυψε διαφορές μεταξύ των κυτταρικών σειρών σε σχέση με ρυθμό πολλαπλασιασμού (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Είναι ενδιαφέρον, οι

TMPRSS2 /ERG

εκφράζοντα όγκους αποδειχθεί μια έντονη ανοδική ρύθμιση της VIM και μια αξιοσημείωτη προς τα κάτω ρύθμιση των Cdh1 σε σύγκριση με τους όγκους ελέγχου (Σχήμα 3C), η περαιτέρω επικύρωση της υποβοήθησης της EMT από το

TMPRSS2 /ERG

σε μια πρόσθετη, και μια πιο επιθετική,

in vivo

μοντέλο. Δεδομένου ότι οι LHSR κυτταρικές σειρές είναι εξαιρετικά επιθετική, δεν είναι κατάλληλα για να μελετηθεί η επίδραση του

TMPRSS2 /ERG

επί του σχηματισμού μεταστάσεων, καθώς τα ποντίκια έπρεπε να θυσιαστούν σε σύντομο χρονικό διάστημα μετά τις ενέσεις. Παρ ‘όλα αυτά, σε μία περίπτωση,

TMPRSS2 /ERG

εκφράζοντα καρκινικά μετάσταση στον πνεύμονα ποντικού. Όπως φαίνεται στο Σχήμα S1, αυτή η μετάσταση προήλθε από την LHSR

TMPRSS2 /ERG

πρωτογενούς όγκου, καθώς βάφονται θετικά με αντίσωμα ανθρώπου-ειδικό αντι-AR. Είναι δελεαστικό να υποθέσουμε ότι EMT που προκαλείται από τις

TMPRSS2 /ERG

χορηγείται κύτταρα με μεταναστευτικό και επεμβατικές δυνατότητες και τελικά τους έδωσε τη δυνατότητα στο σπίτι και να πολλαπλασιάζονται σε ένα μακρινό τόπο. Έτσι, δεδομένου μια ιδιαίτερα μετασχηματισμένο γενετικό υπόβαθρο,

TMPRSS2 /ERG

επαγόμενη EMT θα μπορούσαν να διευκολύνουν την εισβολή και τη μετάσταση.

(Α) PRECs εκτοπικά εκφράζουν hTERT καθώς SV40 αντιγόνα μικρών και μεγάλων Τ ήταν θεσπίστηκε με H-RasV12 και AR. Η προκύπτουσα γραμμή, LHSR (Control), εισήχθη με TMPRSS2 /ERG για να σχηματίσουν τη γραμμή LHSR TMPRSS2 /ERG. Μια κηλίδα Western απεικονίζει τα επίπεδα πρωτεΐνης των εκτοπικά-εκφρασμένα γονίδια. (Β) Τα κύτταρα αναλύθηκαν για έκφραση Cdh1 χρησιμοποιώντας QRT-PCR. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD από ένα τριπλό από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα. (C) Τα κύτταρα ορθοτοπικά εμφυτεύθηκαν σε ποντικούς αδένων του προστάτη. Οι αδένες αφαιρέθηκαν ένα μήνα μετά την εμφύτευση, τεμαχίστηκαν και χρωματίστηκαν με Η &? Ε ή αντισώματα έναντι AR, Cdh1, και βιμεντίνης. Μαύρα βέλη δηλώνουν οζίδια ποντίκι με αρνητική χρώση για την AR. (X400 μεγέθυνση).

Η

EP-AR και LHSR εκφράζουν TMPRSS2 /ERG δεν έχουν μολυνθεί από τα κύτταρα των μεσεγχυματικών γενεαλογίας

Για να αποκλείσει το ενδεχόμενο ότι η αναφερόμενη EMT πηγάζει από μια διασταυρούμενη μόλυνση των πολιτισμών μεσεγχυματικών κυττάρων πραγματοποιήσαμε Short Tandem Repeat (STR) αποτυπωμάτων βάση. STR θέσεις είναι επαναλαμβανόμενα στοιχεία ακολουθίας, 3 έως 7 ζεύγη βάσεων σε μήκος, τα οποία είναι άφθονα διανέμεται σε όλο το ανθρώπινο γονιδίωμα. PCR ανάλυση που βασίζεται STR ολοένα και περισσότερο χρησιμοποιείται ως μέσο για την ανθρώπινη αναγνώριση για ιατροδικαστική και σύνδεσης μελέτες [31], [32], [33], [34]. Αναλύσαμε τις δύο καλλιέργειες EP και LHSR βασίζεται στην εκχώρηση αλληλόμορφων για κάθε μία από τις θέσεις STR που δοκιμάστηκαν. ΕΡ-AR και ΕΡ-AR TMPRSS2 /ERG βρέθηκαν να είναι πανομοιότυπα σε σχέση με το loci 16 STR (Πίνακας 1). LHSR και LHSR TMPRSS2 /ERG βρέθηκαν επίσης να είναι όμοια μεταξύ τους, ωστόσο να μην ΕΡ-AR ή ΕΡ-AR TMPRSS2 /ERG. Για να επιβεβαιωθεί αυτή η παρατήρηση θα πραγματοποιηθεί, επίσης, φασματική ανάλυση Karyotying (SKY), προκειμένου να εντοπίσει μοναδικά επαναλαμβανόμενων χρωμοσωμικών χαρακτηριστικά, συγκεκριμένα εμφανίζονται στα δύο πολιτισμών ισογονιδιακές κυττάρων. Όπως φαίνεται στο σχήμα S2, ΕΡ-AR και ΕΡ-AR TMPRSS2 /ERG έχουν πρόσθετο υλικό στο χρωμόσωμα 11, ενώ η LHSR και LHSR TMPRSS2 /ERG έκθεμα 3 συγκεκριμένες χρωμοσωμικές μεταθέσεις, δείχνοντας και πάλι ότι κάθε τύπος του πολιτισμού, πηγάζει από την ίδια προέλευση . Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η EMT που αναφέρονται εδώ είναι μια πραγματικά προκαλείται από TMPRSS2 /ERG και όχι με διασταυρούμενη μόλυνση.

Η

TMPRSS2 /ERG

επαγόμενη EMT διαμεσολαβείται από το

ZEB1

/

ZEB2

άξονα

Πολλά μονοπάτια γνωστό ότι συγκλίνουν στο

Cdh1

καταστολής κατά τη διάρκεια των επιθηλιακών σε μεσεγχυματικά μετάβαση [27]. Έτσι, επιδιώξαμε να μετρηθούν τα επίπεδα έκφρασης πολλών παραγόντων μεταγραφής που αναφέρθηκαν για τη διευκόλυνση της ΕΜΤ είτε με άμεση ή έμμεση καταστολή των

Cdh1

[27]. Τα επίπεδα έκφρασης του

SNAI1 (Σαλιγκάρι), SNAI2 (Slug), FOXC2, GSC (Goosecoid), TWIST1, TCF4 (Ε2.2), TCF3 (Ε47) και KLF8

μετρήθηκαν και βρέθηκαν να είναι είτε χαμηλής ή εξίσου εκφράζονται τόσο σε ΕΡ-AR και ΕΡ-AR

TMPRSS2 /ERG

κυτταρικές σειρές (Σχήμα 4Α). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η έκφραση του

ZEB1

και

ZEB2

, δύο γνωστοί άμεση καταστολείς του

Cdh1

[27], ήταν δραματικά ρυθμίζεται στο

TMPRSS2 /ERG

εκφράζοντα κύτταρα (Εικόνα 4Α).

ZEB1

επαγωγή από

TMPRSS2 /ERG

περαιτέρω επικυρώνονται σε επίπεδο πρωτεΐνης με ανοσοχρώση (Εικόνα 4Β). Για να ελέγξετε αν

ZEB1

έχει αποτελεσματικό ρόλο στην προώθηση της διαδικασίας EMT στο μοντέλο μας, η έκφρασή του ήταν σταθερά νοκ-κάτω με μικρή φουρκέτα RNA (shRNA) και δοκιμασία μετανάστευσης εκτελέστηκε. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4C,

ZEB1

επίπεδα μειώθηκε δραματικά μετά

ZEB1

νοκ ντάουν, με αποτέλεσμα τη σημαντική εξασθένηση της μεταναστευτικής ικανότητας των

TMPRSS2 /ERG

εκφράζοντα κύτταρα ( Εικόνα 4C, κάτω πάνελ).

(Α) EMT που σχετίζονται με την έκφραση παραγόντων μεταγραφής. Τα κύτταρα αναλύθηκαν για την έκφραση των συγκεκριμένων γονιδίων χρησιμοποιώντας QRT-PCR. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD από ένα τριπλό από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα. ΔΠ = Δεν ανιχνεύτηκε. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορική έκφραση (P-Value & lt? 5 × 10

-4). (Β) Τα κύτταρα απλώθηκαν σε πλακίδια και χρωματίστηκαν με α-

ZEB1

αντίσωμα. Οι πυρήνες οπτικοποιήθηκαν με DAPI. (Γ) αδένες προστάτη εγχύθηκαν με την ΕΡ-AR (Control) και ΕΡ-AR TMPRSS2 /ERG όπως περιγράφεται, αφαιρείται, τεμαχίστηκαν και χρωματίστηκαν με ένα α-

ZEB1

αντίσωμα. Το μπλε βέλος υποδηλώνει ένα ανθρώπινο οζίδιο. Το μαύρο βέλος δηλώνει οζίδια ποντίκι με αρνητική χρώση για την AR. (X400 μεγέθυνση). (D)

ZEB1

χτυπήθηκε κάτω και τα επίπεδα του mRNA μετρήθηκαν (άνω πάνελ). * Υποδηλώνει σημαντική διαφορική έκφραση (P-value = 8 × 10

-4). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε δοκιμασία μετανάστευσης όπως περιγράφεται (κάτω πίνακας). ** Υποδηλώνει σημαντική διαφορική έκφραση (P-value = 4 × 10

-3).

Η

Τόσο

ZEB1

και

ZEB2

περιοχές υποκινητή αποτελείται θεωρούμενων

TMPRSS2 /ERG

δεσμευτική μοτίβα (Σχήμα S3), πράγμα που σημαίνει ότι

TMPRSS2 /ERG

μπορεί να δεσμεύει άμεσα υποστηρικτές τους και να αυξήσει την έκφραση τους. Για να ελέγξει την υπόθεση αυτή, πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση της χρωματίνης ανοσο-καταβύθιση (μάρκας) χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα α-ERG. Είναι ενδιαφέρον, όπως απεικονίζεται στο σχήμα 5Α,

TMPRSS2 /ERG

φαίνεται να δεσμεύονται άμεσα

ZEB1

προαγωγέα, αλλά όχι

ZEB2

. Ως αρνητικός μάρτυρας χρησιμοποιήθηκε μια περιοχή υποκινητή από

Cdh1

, η οποία αποτελεί μέρος του

ZEB1

/

ZEB2

άξονα, αλλά δεν φιλοξενούν μια θέση πρόσδεσης ERG. Το αποτέλεσμα αυτό σημαίνει ότι

TMPRSS2 /ERG

θα μπορούσε να προκαλέσει έμμεσα

ZEB2

μέσω της διαμεσολάβησης του

ZEB2

ανάντη τελεστές. Για να διερευνήσουν αυτή την υπόθεση, και να κατανοήσουν καλύτερα το μηχανισμό με τον οποίο

TMPRSS2 /ERG

εκτελεί το πρόγραμμα EMT σε μεγάλες? αναλάβαμε μια προσέγγιση γονιδίωμα-ευρεία και διεξήγαγε μια έκφραση μικρο-array με βάση τη σύγκριση μεταξύ EP-AR και ΕΡ-AR

TMPRSS2 /ERG

κύτταρα. Συνολικά 1215 σχολιασμένη γονιδίων που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ των δύο κυτταρικών σειρών (813 έως ρυθμιζόμενα και 402 κάτω-ρυθμιζόμενες), από την οποία ανακτώνται αυτά που και οι δύο σχετίζονται με το

ZEB1

ή

ZEB2

και εμπλέκονται στην EMT στην βιβλιογραφία (για τη λεπτομερή μέθοδο φιλτραρίσματος αναφέρονται σε λεζάντα του Σχήματος 5Β). Για την επαλήθευση της γνησιότητας αυτού του συνόλου των γονιδίων που επικυρώνονται επίσης σχέδια διαφορικής έκφρασης μικροσυστοιχιών προερχόμενο τους χρησιμοποιώντας QRT-PCR (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Όπως απεικονίζεται στο σχήμα 5Β, επτά γονίδια ταίριαζαν με τα κριτήρια φιλτραρίσματος. Δύο από αυτούς,

IL1R2

και

SPINT1

(Σχήμα 5C, επικυρωμένη από QRT-PCR), έχουν αναφερθεί για την κωδικοποίηση ανάντη τελεστές

ZEB2

έκφραση? ο πρώην φάνηκε να ανυψώσει

ZEB2

επίπεδα έκφρασης [35], ενώ η δεύτερη μειώνει την έκφραση του [36], γεγονός που υποδηλώνει ότι θα μπορούσαν να είναι οι μεσολαβητές της

TMPRSS2 /ERG

εξαρτάται

ZEB2

υψόμετρο. Τόσο

IL1R2

και

SPINT1

περιοχές υποκινητή αποτελείται από υποθετικές

TMPRSS2 /ERG

δεσμευτική μοτίβα (Σχήμα S2), και μάλιστα

TMPRSS2 /ERG

παρουσίασαν μια σημαντική δέσμευση σε υποστηρικτές τους σε μια δοκιμασία ChIP (Σχήμα 5D). Να επιβεβαιώσει περαιτέρω SPINT1 και IL1R2 επίδραση στο

ZEB2

έκφραση στο σύστημά μας, νοκ-κάτω την έκφρασή τους με τη χρήση μικρού παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Ε,

SPINT1

και

IL1R2

επίπεδα ήταν ουσιαστικά μειωμένος κατά siRNA διαμόλυνση, με αποτέλεσμα

ZEB2

ανύψωση και μείωση, αντίστοιχα. Εν ολίγοις,

TMPRSS2 /ERG

φαίνεται να δεσμεύει άμεσα και trans-ενεργοποίηση

ZEB1

ενώ έμμεσα επάγουν

ZEB2

μέσω trans-ενεργοποίηση και trans-καταστολή των δραστών της,

SPINT1

και

IL1R2

.

δοκιμασίας (Α) χρωματίνης-IP πραγματοποιήθηκε σε κύτταρα ΕΡ-AR TMPRSS2 /ERG χρησιμοποιώντας α-ERG αντίσωμα και IgG ως μάρτυρα. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD από ένα τριπλό από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα. * Υποδηλώνει τιμή Ρ & lt? 3 × 10

-2. (Β) Ο κατάλογος των 1215 διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων διασταυρώνεται με μια λίστα των γονιδίων που σχετίζονται με

ZEB1

ή

ZEB2

, η οποία ελήφθη από το λογισμικό «Genomatix» [47], με αποτέλεσμα να 37 κοινόχρηστα γονίδια. Ο κατάλογος των 37 γονιδίων φιλτράρεται για τα γονίδια που σχετίζονται με EMT σύμφωνα με τη βιβλιογραφία (n = άγνωστο μέγεθος του δείγματος), αφήνοντας τα 7 γονίδια που παρατίθενται στο παρακάτω πλαίσιο. (C) Τα κύτταρα αναλύθηκαν για

SPINT1

και

IL1R2

έκφρασης με χρήση QRT-PCR. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD από ένα τριπλό από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα. * Υποδηλώνει τιμή Ρ & lt? 5 × 10

-4. (D) Ίδιο set-up ως (Α) χρησιμοποιήθηκε για

IL1R2

και

SPINT1

υποκινητές (Ε) Αριστερό πάνελ: EP-AR κύτταρα επιμολυσμένα με στόχευση siRNA

SPINT1

και mRNA των προσδιοριζόμενων γονιδίων μετρήθηκε με QRT-PCR. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD από δύο πειράματα που χρησιμοποιούν δύο διαφορετικά siRNA ολιγονουκλεοτίδια. * Υποδηλώνει P-value = 7 × 10

-4, ** υποδηλώνει P-value = 1 × 10

-3. Δεξιά πάνελ: το ίδιο πειραματικό set-up χρησιμοποιήθηκε με siRNA που στοχεύει

IL1R2

στην ΕΡ-AR TMPRSS2 /ERG. * Υποδηλώνει P-value = 2 × 10

-4, ** υποδηλώνει P-value = 1 × 10

-2.

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη παρέχουμε ουσιαστικές αποδείξεις για να στηρίξει την άποψη ότι

TMPRSS2 /ERG

αναλαμβάνει ενεργό ρόλο στα επιθηλιακά σε μεσεγχυματικά μετάβασης μέσω της ενεργοποίησης του Zeb /

Cdh1

οδού, τόσο

in vitro

και

in vivo

. Τα ευρήματα αυτά ρίχνουν φως στο μηχανισμό με τον οποίο το

TMPRSS2 /ERG

σύντηξης ασκεί ογκογόνο δράση του.

EMT και εισβολή δυνατότητες έχουν αναφερθεί ότι είναι συνέπεια του

TMPRSS2 /ERG

έκφραση σε διάφορες μελέτες [10], [13], [15], [21]. Ως εκ τούτου, φαίνεται ότι ΕΜΤ και εισβολή είναι γενικές διαδικασίες οι οποίες εκτελούνται από

TMPRSS2 /ERG

στον καρκίνο του προστάτη, και οι οποίες επιτυγχάνονται με διάφορους μηχανισμούς. Συνέπεια, τα συστατικά σηματοδότησης WNT όπως WNT7A, ήταν εμφανής στο μοντέλο μας, καθώς και. EMT προκαλείται από διάφορες οδούς σηματοδότησης, όλα διοχετεύονται στο κάτω-ρύθμιση του

Cdh1

. Αυτά τα μονοπάτια που διέπεται από περίπου 10 σημαντικούς παράγοντες μεταγραφής, η οποία καταστέλλουν

Cdh1

έκφρασης είτε σε άμεσο ή έμμεσο τρόπο [27]. Μια τέτοια οδός είναι η SNAI1 /2, τα οποία ρυθμίζουν

ZEB1

/έκφρασης 2 και έχουν ενοχοποιηθεί σε καρκίνο του προστάτη [37], [38], [39]. Αριθ διαφορική έκφραση SNAI1 ή SNAI2 ήταν εμφανής στο σύστημά μας. Ωστόσο, όπως έχει ήδη αναφερθεί [40],

Zeb

γονίδια μπορεί να προωθήσει την EMT ανεξάρτητα από Snail1 2 έκφρασης /, το οποίο παραπέμπει σε εναλλακτικές, ανάντη ενεργοποιητής της συγκεκριμένης οδού. Στο σύστημά μας,

TMPRSS2 /ERG

φαίνεται να πληροί τα κριτήρια που απαιτούνται για αυτό το ανάντη ενεργοποιητή.

AR διαδραματίζει καθοριστικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη και είναι γνωστό ότι ρυθμίζει το

TMPRSS2

υποκινητή, η οποία αποτελεί το ρυθμιστικό τμήμα του

TMPRSS2 /ERG

σύντηξης. Επιπλέον, AR δείχθηκε πρόσφατα να συνεργούν με

TMPRSS2 /ERG

να προωθήσει επεμβατική ανάπτυξη αδενοκαρκινώματος [20]. Κατά συνέπεια, μια ισχυρή συνεργασία μεταξύ των δύο ήταν εμφανής στο σύστημά μας, όπως κάθε γονίδιο δεν ενεργοποιήσετε ακόμη και ελαφρώς μειωμένη

ZEB1 /2

έκφραση, ενώ συν-έκφραση απέδωσε σημειώνονται μεταγραφική επαγωγή των γονιδίων αυτών (Τα δεδομένα δεν απεικονίζεται). Ομοίως, ενώ τα κύτταρα του ΕΚ παρέλειψε να αυξηθεί

in vivo

παρακάτω ορθοτοπική εμφύτευση και ΕΡ-AR κύτταρα σχηματίζονται διακριτά οζίδια, ΕΡ-AR

TMPRSS2 /ERG

κύτταρα οδήγησε σε μεγάλες κακοήθεις όγκους, τονίζοντας την συνεργιστική φύση της συνεργασίας τους. Πρόσφατες μελέτες έχουν συνδέσει AR να EMT σε μοντέλα καρκίνου του προστάτη μέσω της ενεργοποίησης του άξονα SNAI [41], [42]. Στην παρούσα μελέτη μας, AR από μόνη της δεν ήταν αρκετή για να προκαλέσει EMT, ίσως λόγω της σαλιγκάρι-εξαντλημένο φόντο. Έτσι, για άλλη μια φορά, θα μπορούσε να σκεφτεί ότι AR συνεργάζεται με το

TMPRSS2 /ERG

να επικαλεστεί μια εναλλακτική οδό EMT απουσία σαλιγκάρι. Το γεγονός ότι η έκφραση τόσο του AR και

TMPRSS2 /ERG

στο σύστημά μας διέπεται από τεχνητή υποστηρικτές, το καθιστούν ακατάλληλο για τη μελέτη AR που προκαλείται

TMPRSS2 /ERG

έκφρασης. Ωστόσο, αυτό σύστημα μπορεί να αντιπροσωπεύουν το ορμονοάντοχο στάδιο του προχωρημένου καρκίνου του προστάτη στην οποία το Ar είναι υπερ-ενεργοποιείται. Τα στοιχεία μας υποδηλώνει ότι η συνεργασία μεταξύ των AR και

TMPRSS2 /ERG

δεν διαμεσολαβείται αποκλειστικά μέσω AR-εξαρτώμενη μεταγραφική ρύθμιση της ERG. Εναλλακτικά, άλλοι μηχανισμοί, όπως μεσολάβηση συστατικών ή φυσικές αλληλεπιδράσεις, μπορεί να επηρεάσει τη συνεργασία τους στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη. Περαιτέρω μελέτες θα πρέπει να επικεντρώνεται στην αποσαφήνιση τους ακριβείς μηχανισμούς με τους οποίους AR ελέγχους

TMPRSS2 /ERG

έκφραση και λειτουργία.

Τόσο SPINT1 και Il1R2 είχαν προηγουμένως εμπλακεί στον καρκίνο. Il1r2 αναφέρθηκε ότι είναι σημαντικά αυξημένα στο πλάσμα των ασθενών Hodgkin λεμφωμάτων »σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες [43]. Επιπλέον, ανάγκασε την έκφραση του

IL1R2

σε ένα ουροεπιθηλιακά κυτταρική σειρά οδήγησε σε μια μορφολογική αλλοίωση, αναδιάταξη ακτίνης και απόκτηση ενός μεταναστευτικών ικανότητας και

IL1R2

υπερέκφραση συσχετίστηκε με αυξημένη έκφραση του

ZEB2

και μειωμένη έκφραση του

Cdh1

[35]. Το έργο μας ενισχύεται περαιτέρω

IL1R2

pro-ογκογόνο δράση που διαμεσολαβείται από

TMPRSS2 /ERG

άμεση trans-ενεργοποίησης. Πρόσφατα, σε μια μελέτη που σύγκρινε ιστούς και κυτταρικές σειρές που αντιπροσωπεύουν διαφορετικά στάδια του καρκίνου του προστάτη, Spint1 ήταν εντόνως εκφρασμένο σε φυσιολογικούς ιστούς σε σύγκριση με καλοήθη υπερπλασία προστάτη (ΒΡΗ) και του καρκίνου του χαμηλού βαθμού, με μια προοδευτική απώλεια όσον αφορά την αύξηση δείγματα βαθμού του όγκου [44 ]. Κατά συνέπεια,

SPINT1

εξασθένηση στον καρκίνο του προστάτη κυτταρικές γραμμές, ως αποτέλεσμα μια πιο επιθετική φαινότυπο που περιελάμβανε αυξημένη κινητικότητα και διεισδυτικότητα [45]. Τέλος, SPINT1 νοκ ντάουν στον παγκρεατικό καρκίνο κυτταρική σειρά SUIT-2, που προκαλείται από EMT και εισβολή που συνοδεύονταν από

ZEB2

ανύψωση και

Cdh1

μείωση [36]. Συλλογικά τα δεδομένα αυτά υποδηλώνουν ότι SPINT1 δρα ως καταστολέας όγκων σε καρκίνο του προστάτη. Ήμασταν σε θέση να αποδείξει ότι SPINT1 ασκεί εν μέρει αποτέλεσμα της μειώνοντας τα επίπεδα της

ZEB2

και ως εκ τούτου καταστέλλεται από

TMPRSS2 /ERG

.

Πρόσφατα, εκθέσεις οι οποίες επικεντρώνονται σχετικά με τη συνεργασία των

TMPRSS2 /ERG

με διάφορους εταίρους στην καρκινική διαδικασία αναδύονται [16], [19], [20]. (https://www.affymetrix.com/support/downloads/manuals/wt_sensetarget_label_manual.pdf).

Mircro-array