Αφηρημένο

Ιστορικό και Σκοπός

microRNAs ιστών (miRNAs) μπορεί να εντοπίσει καρκίνους και να προβλέψει την πρόγνωση. Αρκετές πρόσφατες μελέτες ανέφεραν ότι ιστού, πλάσμα, και miRNAs σάλιο μοιράζονται παρόμοια προφίλ έκφρασης. Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε η διακριτική εξουσία των miRNAs σιελογόνων (συμπεριλαμβανομένων των ολόκληρων σάλιο και υπερκείμενο σάλιο) για την ανίχνευση του καρκίνου του οισοφάγου.

Υλικά και Μέθοδοι

Με την Agilent μικροσυστοιχιών, έξι απελευθερωθεί miRNAs από όλη την επελέγησαν δείγματα σιέλου από τους επτά ασθενείς με καρκίνο του οισοφάγου και τρεις υγιείς μάρτυρες. Οι έξι επιλεγμένες miRNAs υποβλήθηκαν σε επικύρωση των επιπέδων έκφρασης τους με RT-qPCR χρησιμοποιώντας τόσο σύνολό δείγματα σιέλου και υπερκείμενο σάλιο από ένα ανεξάρτητο σύνολο 39 ασθενών με καρκίνο του οισοφάγου και 19 υγιείς μάρτυρες.

Αποτελέσματα

Έξι miRNAs (miR-10b *, miR-144, miR-21, miR-451, miR-486-5p, και miR-634) ταυτοποιήθηκαν ως στόχοι από Agilent μικροσυστοιχιών. Μετά την επικύρωση από RT-qPCR, miR-10b *, miR-144 και miR-451 στο σύνολό τους σάλιο και miR-10b *, miR-144, miR-21, και miR-451 στο υπερκείμενο σάλιο σημαντικά υπερεκφράζεται σε ασθενείς, με ευαισθησίες 89.7, 92.3, 84.6, 79.5, 43.6, 89.7, και 51.3% και τις ιδιαιτερότητες των 57,9, 47,4, 57,9%, 57,9, 89,5, 47,4 και 84,2%, αντίστοιχα.

Συμπεράσματα

Βρήκαμε διακριτικό miRNAs για τον καρκίνο του οισοφάγου, τόσο ολόκληρο το υπερκείμενο το σάλιο και το σάλιο. These miRNAs έχουν διακριτική εξουσία για την ανίχνευση του καρκίνου του οισοφάγου. Επειδή η συλλογή σάλιου είναι μη επεμβατική και βολικό, miRNAs σιελογόνων δείχνουν μεγάλη υπόσχεση ως βιοδείκτες για την ανίχνευση του καρκίνου του οισοφάγου σε περιοχές υψηλού κινδύνου

Παράθεση:. Xie Z, Chen G, Ζανγκ Χ, Li D, Huang J, Yang C, et al. (2013) σιελογόνων Τα microRNAs ως ελπιδοφόρες βιοδείκτες για την ανίχνευση του καρκίνου του οισοφάγου. PLoS ONE 8 (4): e57502. doi: 10.1371 /journal.pone.0057502

Επιμέλεια: Αντώνης W. I. Lo, το Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 29 Οκτ 2012? Αποδεκτές: 22 του Ιανουαρίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 1η Απριλίου 2013

Copyright: © 2013 Xie et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του οισοφάγου (ΕΚ) είναι η όγδοη πιο κοινή. καρκίνο και 6η κύρια αιτία θνησιμότητας από καρκίνο σε παγκόσμιο επίπεδο [1]. An estimated 482.300 νέες περιπτώσεις ΕΚ και 406.800 θάνατοι το 2008 σε όλο τον κόσμο. τα ποσοστά εμφάνισης ποικίλουν διεθνώς κατά σχεδόν 16 φορές, με τα υψηλότερα ποσοστά στη Νότια και Ανατολική Αφρική και την Ανατολική Ασία και το χαμηλότερο στη Δυτική και τη Μέση Αφρική και την Κεντρική Αμερική και στις δύο άνδρες και γυναίκες. ΕΚ είναι 3-4 φορές πιο συχνή στους άνδρες από τις γυναίκες [2]. επίπτωση της έχει αυξηθεί ραγδαία στις δυτικές χώρες κατά τον τελευταίο μισό αιώνα [3]. Η περιοχή Chaoshan της επαρχίας Γκουανγκντόνγκ της Κίνας έχει υψηλή συχνότητα εμφάνισης της ΕΚ (& gt? 100 /100.000) [4]. Ο αριθμός των νεκρών που προκαλείται από ΕΚ στην Κίνα αντιπροσωπεύει περισσότερο από το 70% όλων των θανάτων παγκοσμίως ΕΚ [5]

Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης παραμένει σε χαμηλά επίπεδα.? μόνο 3-5% των διαγνωσμένων ασθενών επιβιώνουν για διάστημα 5 ετών [6]. Αντίθετα, το ποσοστό επιβίωσης αυξάνεται στο 90% σε ασθενείς με διάγνωση της νόσου Στάδιο Ι (T1N0M0) οι οποίοι υποβάλλονται σε χειρουργική εκτομή [7]. Ως εκ τούτου, η έγκαιρη διάγνωση και θεραπεία είναι ζωτικής σημασίας. Επί του παρόντος, η κλινική διάγνωση εξαρτάται κυρίως από ακτινολογία και ενδοσκοπική βιοψία. Ωστόσο, οι δοκιμές αυτές είναι δαπανηρές, επεμβατικές, ή να προκαλέσει δυσφορία στους ασθενείς, και οι περισσότεροι ασθενείς βρίσκονται σε προχωρημένο στάδιο της νόσου όταν επιτυγχάνεται ακριβής διάγνωση. Ως εκ τούτου, είναι αναγκαίο να προσδιορίσει ένα βιοδείκτη του πρώιμου σταδίου ΕΚ.

Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι παρεκκλίνουσα έκφραση των miRNAs είναι στενά συνδεδεμένη με την παθογένεια και την ανάπτυξη του καρκίνου, και miRNAs κατέχουν διακριτική εξουσία ως βιοδείκτες του καρκίνου [ ,,,0],8]. Αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει ότι οι miRNAs παρεκκλίνοντα εκφράζονται σε καρκινικό ιστό και το πλάσμα σε ασθενείς με ΕΚ [9], [10]. Ωστόσο, η έκφραση miRNA στο σάλιο των ασθενών με ΕΚ δεν έχει ακόμη αναφερθεί. Λόγω της εκτεταμένης παροχής αίματος σε σιελογόνους αδένες, το σάλιο θεωρείται ότι είναι ένα τερματικό προϊόν της κυκλοφορίας του αίματος, και μόρια που είναι παρόντα στο πλάσμα είναι επίσης παρόντες στο σάλιο. Ως εκ τούτου, το σάλιο πιστεύεται ότι αντικατοπτρίζουν την γενική υγεία και αντικατοπτρίζουν τις συνθήκες όπως ο καρκίνος, τα λοιμώδη νοσήματα, καρδιαγγειακές νόσοι,

κλπ

. [11]. Ιστού, πλάσμα, και το σάλιο miRNAs μοιράζονται παρόμοια προφίλ έκφρασης [12] – [16]. Αυτή η μελέτη αποτελούνταν από δύο φάσεις: τις φάσεις ανακάλυψη και επικύρωσης. Στη φάση της ανακάλυψης, επιλέχθηκαν έξι miRNAs που απορυθμίζεται πιο σημαντικά σε ολόκληρη σάλιο των ασθενών με ΕΚ με ανάλυση μικροσυστοιχιών Agilent ως στόχοι. Στη φάση της επικύρωσης, τα επίπεδα έκφρασης των έξι miRNAs στόχο επικυρώθηκαν με RT-qPCR χρησιμοποιώντας τόσο σύνολό δείγματα σιέλου και υπερκείμενο σάλιο.

Υλικά και Μέθοδοι

Δείγμα εκτίμηση του μεγέθους

Στη φάση ανακάλυψη, σύμφωνα με τα αποτελέσματα μικροσυστοιχιών Agilent, η ευαισθησία του miR-144 για ΕΚ ήταν 85,7%. Ο τύπος για τον υπολογισμό του μεγέθους του δείγματος ήταν ως εξής: n =

u

α

/2P (1-P) /

δ

2

Η

στον τύπο αυτό,

ν

είναι ο αριθμός που απαιτείται,

u

α

/2 είναι το επίπεδο της δοκιμής,

α είναι

την τιμή αποκοπής δύο-ουρά κανονική κατανομή,

P

είναι η αναμενόμενη τιμή της ευαισθησίας, και

δ

είναι το επιτρεπτό σφάλμα.

Σύμφωνα με την ικανότητα να επιτύχουν το μέγεθος του δείγματος για μελέτη μας, επιλέξαμε οι τιμές

α

= 0.05 (

u

α

/2 = 1,96),

δ

= 0,11, και τις τιμές υποκαταστάθηκαν στον τύπο. Το αποτέλεσμα ήταν

n

= 1,96

2 × 0.857 × (1 – 0,857) /0.15

2 ≈38.9 = 39. Δηλαδή, στη φάση της επικύρωσης αυτής της μελέτης, ο ελάχιστος αριθμός των περιπτώσεις που απαιτείται για την ομάδα ΕΚ ήταν 39, και επιλέχθηκαν 39 περιπτώσεις. Σύμφωνα με την ικανότητα να επιτύχουν το μέγεθος του δείγματος για την μελέτη μας, ανέλαβε την αναλογία των περιπτώσεων στην ομάδα του ΕΚ ότι στην υγιή ομάδα να είναι 2:01. 19 περιπτώσεις στην ομάδα υγιών επιλέχθηκαν.

Θέμα επιλογής

46 ολόκληρο το υπερκείμενο δείγματα σιέλου και 46 σάλιο από 46 ασθενείς με ΕΚ και 22 σύνολο του σάλιου και 22 δείγματα υπερκειμένου σιέλου από την ηλικία, το φύλο και εθνοτικά-υγιών ατόμων ελήφθησαν από Guangdong Γενικό Νοσοκομείο μεταξύ Ιουλίου 2011 και Ιανουαρίου 2012. ασθενής αποτελέσματα ιστοπαθολογική επιβεβαιώθηκαν από ενδοσκοπική βιοψία, και οι ασθενείς ΕΚ δεν είχαν ταυτόχρονη οργανικά, συστημική, ή από του στόματος ασθένειες, όπως η ηπατίτιδα, σακχαρώδη διαβήτη,

κλπ

, ότι θα μπορούσε να επηρεάσει τα επίπεδα έκφρασης δείκτη ΕΚ. σταδιοποίηση του καρκίνου βασίστηκε στο σύστημα σταδιοποίησης UICC /ΤΔΔ [17]. Τα στάδια Ι, II, και III με βάση τα αποτελέσματα της ιστοπαθολογικής εξέτασης μετά από χειρουργική εκτομή. Στάδιο IV βασίστηκε στα αποτελέσματα ιστοπαθολογική βιοψίας παρακέντηση του μεταστατικού κόμβους ή τα αποτελέσματα PET-CT. «N /A (μη διαθέσιμο)» ανατέθηκε όταν οι ασθενείς αρνήθηκαν περαιτέρω εξετάσεις ή θεραπείες. Υγιή άτομα συλλέχθηκαν ως έλεγχοι με βάση τα αρνητικά αποτελέσματα εξέτασης υγείας, συμπεριλαμβανομένων εξετάσεις αίματος, ακτινογραφία θώρακος, προφορικές εξετάσεις, κοιλιακό εξετάσεις υπερήχων, κοπράνων δοκιμές απόκρυφη αίματος, και δακτυλική εξέταση. Κανένας από αυτούς τους ελέγχους είχαν διαγνωστεί με οποιοδήποτε τύπο κακοήθειας, είτε πριν από την μελέτη ή κατά τη στιγμή της συλλογής δειγμάτων. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο και την Επιτροπή Δεοντολογίας Θεσμικών κριτική σε Guangdong Γενικό Νοσοκομείο. Όλοι οι συμμετέχοντες δόθηκαν γραπτή συγκατάθεση για την ενημέρωσή τους να αποθηκεύονται στη βάση δεδομένων του νοσοκομείου και να χρησιμοποιηθούν για την έρευνα.

συλλογή σάλιο

Τα άτομα κλήθηκαν να απέχουν από το φαγητό, το ποτό, το κάπνισμα, και τη στοματική υγιεινή διαδικασίες για τουλάχιστον 2 ώρες πριν από την συλλογή. Για την τόνωση της αδενικό ροή σάλιου, τα άτομα έλαβαν ένα διάλυμα κιτρικού οξέος 2% για την εφαρμογή των διμερών οπίσθια πλευρικές επιφάνειες της γλώσσας με μια μπατονέτα για 5 s κάθε 30 s. Η διέγερση κιτρικό οξύ συνεχίσθηκε σε διαστήματα 30 δευτερολέπτων κατά τη διάρκεια ολόκληρης της διαδικασίας συλλογής. Έως 5 mL του σάλιου από κάθε υποκείμενο συλλέχθηκε σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης των 50 mL. Ένα σύνολο 2 ml σιέλου απομακρύνθηκε από το σωλήνα στο σύνολό δείγμα σάλιου. Το υπόλοιπο 3 κ.εκ. δείγματα σιέλου φυγοκεντρήθηκε στα 3.000 χ

g

για 15 λεπτά στους 4 ° C για να γυρίσουν προς τα κάτω αποφλοιωμένα κύτταρα, και το υπερκείμενο μεταφέρθηκε σε σωλήνες μικροφυγοκέντρου ακολουθείται από μια δεύτερη φυγοκέντρηση σε 12,000 χ

g

για 10 λεπτά στους 4 ° C για να απομακρυνθεί εντελώς κυτταρικά συστατικά με τα δείγματα υπερκειμένου σιέλου. Ολόκληρο το σάλιο είναι το σάλιο, που δεν έχει υποβληθεί σε φυγοκέντρηση. Μπορεί να περιέχει απολέπιση του οισοφάγου καρκινικά κύτταρα αναμασημένων από τον οισοφάγο, λόγω της απόφραξης από οισοφάγου όγκου. Το σάλιο υπερκείμενο είναι το σάλιου που έχει υποβληθεί σε φυγοκέντρηση και δεν περιέχει κανένα αποφλοιωμένα κύτταρα και άλλα σφαιρίδια. Ως εκ τούτου, το υπερκείμενο σάλιο θεωρείται ότι είναι το τερματικό προϊόν της κυκλοφορίας του αίματος και αυτό μπορεί να αντανακλά το εσωτερικό περιβάλλον του bodis μας. Τα δείγματα αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Η διαδικασία που αναφέρεται παραπάνω θα πρέπει να ολοκληρωθεί μέσα σε 2 ώρες [18].

Agilent μικροσυστοιχιών στην ανακάλυψη φάση

Επειδή αυτή είναι η πρώτη έρευνα για microRNAs σιέλου για την ανίχνευση της ΕΚ στον κόσμο, εμείς απλά επέλεξε 10 περιπτώσεις για την εκτέλεση των μικροσυστοιχιών. Επτά ολόκληρη δείγματα σιέλου από την ομάδα ΕΚ και 3 από την ομάδα υγιών επιλέχθηκαν τυχαία. Η παθολογία του συνόλου επτά ασθενείς με ΕΚ ήταν πλακώδες καρκίνωμα? ο ένας ήταν σταδίου Ι, ένα στάδιο ΙΙ, 3 σταδίου ΙΙΙ, και δύο το στάδιο IV. Ένα σύνολο 923 ώριμες αλληλουχίες miRNA έχουν συναρμολογηθεί και να ενσωματωθεί στο σχεδιασμό των miRNAs μικροσυστοιχιών μας. Ανεπεξέργαστα δεδομένα ομαλοποιήθηκαν από ποσοστημόριο αλγόριθμο, Gene Άνοιξη Λογισμικό 11.0 (τεχνολογίες Agilent, Santa Clara, Καλιφόρνια, ΗΠΑ). 6 miRNAs επιλέχθηκαν ως στόχοι και τα επίπεδα έκφρασής τους επικυρώθηκαν με RT-qPCR στη φάση της επικύρωσης. Η μέθοδος επιλογής ήταν η εξής: η τιμή gTotalGeneSignal στην μικροσυστοιχία Agilent ανερχόταν στο επίπεδο έκφρασης του κάθε miRNA. Ως εκ τούτου, για τους ίδιους miRNAs, ιστογράμματα συντάχθηκαν σύμφωνα με την αξία gTotalGeneSignal κάθε miRNA. Έχουμε επιλέξει πέντε miRNAs: miR-144, miR-10b *, miR-451, miR-486-5p, και miR-634, οι τιμές των οποίων είχαν την τάση να είναι πολύ υψηλότερη ή χαμηλότερη στην ομάδα του ΕΚ σε σχέση με την υγιή ομάδα και τα οποία επίσης συνδέονται στενά με την ανάπτυξη των νοσημάτων. Εν τω μεταξύ, διάφορες μελέτες έχουν αναφέρει ότι miR-21 εκφράζεται μη φυσιολογικά σε ιστό καρκίνου και το πλάσμα από ασθενείς με ΕΚ [9], [10]? η αξία gTotalGeneSignal του miR-21 δεν παρουσιάζουν αυτή την τάση, αλλά επίσης επιλεγεί ως στόχος. Τα ιστογράμματα των 6 miRNAs στόχοι παρουσιάζονται στο Σχήμα 1. (Οι επτά μπαρ στο μπροστινό μέρος αντιπροσωπεύει την αξία gTotalGeneSignal από την ομάδα ΕΚ, και το 3 αντιπροσωπεύει πίσω από την αξία gTotalGeneSignal από την υγιή ομάδα. Υ-άξονας αντιπροσωπεύει την αξία των gTotalGeneSignal )

.

Α) Με την εξαίρεση του δείγματος 4, οι τιμές των δειγμάτων έξι ομάδα ΕΚ ήταν υψηλότερες από εκείνες των τριών δειγμάτων υγιή ομάδα. Β) Με την εξαίρεση του δείγματος 2, οι τιμές των δειγμάτων έξι ομάδα ΕΚ ήταν υψηλότερες από εκείνες των τριών δειγμάτων υγιή ομάδα. Γ) Με την εξαίρεση του δείγματος 10, οι τιμές των δειγμάτων της ομάδας ΕΚ επτά ήταν υψηλότερες από εκείνες των δύο δειγμάτων υγιή ομάδα. Δ) Με την εξαίρεση του δείγματος 10, οι τιμές των δειγμάτων της ομάδας ΕΚ επτά ήταν υψηλότερες από εκείνες των δύο δειγμάτων υγιή ομάδα. Ε) Όλες οι τιμές ομάδα ΕΚ ήταν χαμηλότερες από τις τρεις του υγιούς ομάδας. ΣΤ) Αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει ότι οι miRNAs παρεκκλίνοντα εκφράζονται σε καρκινικό ιστό και το πλάσμα των ασθενών ΕΚ? Ωστόσο, η αξία gTotalGeneSignal του miR-21 δεν διέφεραν μεταξύ του ΕΚ και υγιείς ομάδες. Ωστόσο, ήταν επίσης επιλεγεί ως στόχος των miRNAs.

Η

φάσης επικύρωσης

Τα επίπεδα έκφρασης των 6 επιλεγμένων miRNAs επικυρώθηκαν με RT-qPCR χρησιμοποιώντας τόσο τις 58 σύνολό δείγματα σιέλου και οι υπερκείμενο δείγματα σάλιου 58 από 39 ασθενείς με ΕΚ και 19 υγιείς μάρτυρες. Η mirVana PARIS Kit (Ambion, USA) χρησιμοποιήθηκε για την απομόνωση ολικού RNA από 1 mL ολόκληρο το σάλιο ή το υπερκείμενο υγρό σάλιο, σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Τέλος, το RNA εκλούεται σε 30 μΐ προθερμανθέντος ύδατος άνευ νουκλεάσης (95 ° C) και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Η ποιότητα και η συγκέντρωση των απομονωμένων ολικού RNA προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας NanodropND-1000 (Thermo Scientific, Worcester, ΜΑ), με την τιμή με OD260 /280 γύρω 2.0 υποδεικνύοντας υψηλής ποιότητας ή καθαρότητας. Η αντίδραση αντίστροφης μεταγραφής διεξάγεται πρώτα με 11 μι μίγματος που περιέχει 2 μι του εκχυλίσματος RNA, 2 μί RT εκκινητή (Ribo, Κίνα), και 7 μλ ύδατος άνευ νουκλεάσης. Το μίγμα 11-μί επωάστηκε στους 70 ° C για 10 λεπτά και σε πάγο για 2 λεπτά. Στη συνέχεια, 5 μΐ ρυθμιστικού διαλύματος RT, 2 μί dNTP (2,5 mM), 0,5 μί αναστολέα RNase (40 U /μl), 0.5 μι ανάστροφης μεταγραφάσης (200 U /μL), και 6 μλ ύδατος άνευ νουκλεάσης ήταν προστίθενται στο μίγμα 11-μί. Η αντίδραση αντίστροφης μεταγραφής συνεχίστηκε στους 42 ° C για 60 λεπτά, 70 ° C για 10 λεπτά, και στους 4 ° C για ∞. διάλυμα cDNA (3 mL) ενισχύθηκε χρησιμοποιώντας 9 mL SYBR Premix Εχ Taq (Takara, Κίνα), 2 μλ miRNA πρόσθιου εκκινητή, 2 μί miRNA προς τα πίσω εναρκτήρα, και 4 μλ ύδατος άνευ νουκλεάσης σε ένα τελικό όγκο 20 mL. Ποσοτική PCR διεξήχθη επί Biorad CFX96 2.1 (Biorad Biosystems), και τα μίγματα αντίδρασης επωάστηκαν στους 95 ° C για 2 λεπτά, ακολουθούμενη από 50 κύκλους των 95 ° C για 5 s και 60 ° C για 10 s. Στο τέλος των κύκλων PCR, ανάλυση καμπύλης τήξης διεξήχθη για να επικυρώσει παραγωγή του αναμενόμενου προϊόντος PCR. Η ρύθμιση της καμπύλης τήξης ήταν 65,0 – 95,0 ° C σε βήματα των 0,5 ° C για 0,05 λεπτά + ανάγνωσης πλάκας. Κάθε δείγμα αναλύθηκε εις τριπλούν. Όλες οι τιμές Ct ήταν & lt? 36. Τα επίπεδα έκφρασης του κάθε miRNA στόχου κανονικοποιήθηκαν προς εκείνη του miR-16. miR-16 είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο microRNA εσωτερικός έλεγχος σε δείγματα σωματικών υγρών, συμπεριλαμβανομένου του πλάσματος [10], [19]. Και το πιο σημαντικό, κατά τη φάση της ανακάλυψης και της φάσης επικύρωσης, η μελέτη μας έδειξε ότι το miR-16 θα μπορούσε να εκφράζουν σταθερά στο σάλιο και την εργασία ως εσωτερικός έλεγχος για miRNAs σιέλου. Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα στη φάση ανακάλυψης μπορείτε να το κατεβάσετε από την ιστοσελίδα του GEO: www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/info/linking.html, και ο αριθμός είναι GSE41268. Η methodoloy, τα ανεπεξέργαστα δεδομένα και φωτογραφίες από την επικύρωση του miR-16 ως εσωτερικός έλεγχος στην έρευνά μας παρουσιάστηκαν στο S1 δεδομένων. Όλα τα επίπεδα έκφρασης υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το 2

-ΔΔCt μέθοδο [20]. Εν συντομία: δείγμα

iΔCt

στόχου miR = δείγμα

ΤΠΕ

στόχου miR-δείγματος

ΤΠΕ

miR-16? δείγματος

iΔΔCt

στόχου miR = δείγμα

iΔCt

στόχου miR -. η μέση τιμή ΔCt

στόχου miR του υγιούς ομάδας

Η στατιστική ανάλυση

τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs και τις ηλικίες συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το Mann – Whitney τεστ U ή το Kruskall – δοκιμή Wallis H. Φύλα συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το χ

2 δοκιμών. Ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης δημιουργήθηκε για τους παράγοντες κινδύνου 4: το κάπνισμα, η κατανάλωση αλκοόλ, το ποτό ή το φαγητό στο ζεστό θερμοκρασίες, και Chaoshanese εθνικότητα. Οι αναλογίες πιθανοτήτων (OR) των παραγόντων κινδύνου 4 υπολογίστηκαν από τα εμπρός LR. Κάθε Ή συγκρίθηκε με τη χρήση της χ

2 τεστ. Χαρακτηριστικά δέκτη-λειτουργίας (ROC) καμπύλες χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθεί η διακριτική δύναμη του κάθε miRNA για διαφοροποίηση των ασθενών και ελέγχων. Η συσχέτιση του κάθε επιπέδου έκφρασης miRNA μεταξύ ολόκληρων υπερκείμενο σάλιο και το σάλιο αναλύθηκε με τη μέθοδο συσχέτισης του Spearman. Οι διαφορές στις διακρίσεις εξουσιών των miRNAs στόχοι σε σχέση με τη μέθοδο της Delong χρησιμοποιώντας το λογισμικό MedCalc12.2.1. Άλλες στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με το λογισμικό SPSS, έκδοση 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Ένα

σ

αξία των & lt?. 0,05 θεωρήθηκε για να δείξει τη στατιστική σημαντικότητα

Αποτελέσματα

Ολόκληρο το σάλιο προφίλ

Δέκα ολόκληρη δείγματα σάλιου (7 από τους ασθενείς με ΕΚ και 3 από υγιείς μάρτυρες) αξιολογήθηκαν με Agilent μικροσυστοιχίας. Ένα σύνολο 923 ώριμες αλληλουχίες miRNA έχουν συναρμολογηθεί και να ενσωματωθεί στο σχεδιασμό των miRNAs μικροσυστοιχιών μας. Ένα σύνολο 461 miRNAs ανιχνεύθηκαν σε ολόκληρο σίελο (η τιμή του σήματος ανιχνευτή αυτών miRNAs ήταν παρόν σε τουλάχιστον ένα δείγμα). Από αυτά τα 461 miRNAs, 452 ανιχνεύθηκαν σε δείγματα ΕΚ και 391 σε δείγματα υγιούς ελέγχου. Ένα σύνολο 232 miRNAs ανιχνεύθηκαν σε όλα τα 10 δείγματα. Ένα σύνολο 261 miRNAs ανιχνεύθηκαν σε όλα τα δείγματα 7 ΕΚ, και 243 miRNAs σε όλα τα δείγματα ελέγχου 3. Είκοσι πέντε miRNAs έδειξαν σημαντικές διαφορές στην έκφραση μεταξύ της ομάδας ΕΚ και την υγιή ομάδα. 6 miRNAs (miR-144, miR-10b *, miR-21, miR-451, miR-486-5p, και miR-634) υποβλήθηκαν σε επικύρωση των επιπέδων έκφρασης τους με RT-qPCR. Ο αριθμός των miRNAs ανιχνεύθηκε σε κάθε δείγμα παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Η

Χαρακτηριστικά των ασθενών ΕΚ και υγιείς μάρτυρες στη φάση της επικύρωσης

Στη φάση της επικύρωσης, 39 ασθενείς με ΕΚ ήταν επιλέγεται, 32 (82,1%) από τους οποίους είχαν καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων, 4 (10,3%) είχαν αδενοκαρκίνωμα, και 3 (7,7%) είχαν μικροκυτταρικό καρκίνωμα. Καρκίνο του σταδιοποίηση των ασθενών με ΕΚ ήταν ως εξής: 0 (0%) ήταν σταδίου Ι, 12 (30,8%) στη φάση II, 11 (28,2%) στη φάση III, 10 (23,6%) στη φάση IV, και 6 δεν ήταν διαθέσιμα. Τα δεδομένα που αφορούν τους ασθενείς ΕΚ και υγιείς μάρτυρες παρουσιάζεται στον Πίνακα 2. Όλοι οι ασθενείς με ΕΚ ήταν & gt? 40 ετών, κυρίως από Chaoshan, επαρχία Γκουανγκντόνγκ, ανέφερε πίνοντας ή τρώγοντας σε υψηλές θερμοκρασίες, και πότες το αλκοόλ, και οι περισσότεροι ήταν άνδρες καπνιστές. Σύμφωνα με το μοντέλο της λογιστικής παλινδρόμησης, οι ΕΑΠ της Chaoshanese άτομα και το ποτό ή το φαγητό σε υψηλή θερμοκρασία ήταν στατιστικά σημαντικές (41.984 και 31.594, αντίστοιχα).

Η

Διακριτική εξουσία του όλο το σάλιο και το υπερκείμενο σάλιο miRNAs για ΕΚ

τα επίπεδα έκφρασης των 6 επιλεγμένων miRNAs στόχου (miR-10b *, miR-144, miR-21, miR-451, miR-486-5p, και miR-634) επικυρώθηκαν από RT- qPCR χρησιμοποιώντας και τα δύο σύνολό δείγματα σιέλου και υπερκείμενο σάλιο. 3 miRNAs (miR-10b *, miR-144 και miR-451) σε όλο το σάλιο από την ομάδα ΕΚ ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω (

σ

= 0.001, 0.012 και 0.002, αντίστοιχα? Fold-αλλαγές, 58.7 , 45,6, και 42,4, αντίστοιχα). Τα άλλα 3 miRNAs (miR-21, miR-486-5p, και miR-634) δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ της ομάδας ΕΚ και υγιή ομάδα (

σ

= 0,110, 0,078 και 0,157, αντίστοιχα). καμπύλες ROC ιδρύθηκαν για να αξιολογηθεί η διακριτική εξουσία του όλο το σάλιο miR-10b *, miR-144 και miR-451? οι AUCs ήταν 0.762, 0.706, και 0.756, αντίστοιχα. Μία βέλτιστη τιμή αποκοπής είναι απαραίτητη για την καμπύλη ROC για τον καθορισμό της διάκρισης. Όταν ο δείκτης Younden (Younden δείκτης = ευαισθησία + ειδικότητα -1) φτάνει τη μέγιστη τιμή, η αντίστοιχη τιμή αποκοπής θα είναι η βέλτιστη τιμή αποκοπής [21].

Οι τιμές αποκοπής των 3 ολόκληρα miRNAs σάλιο (miR -10b *, miR-144 και miR-451) προσδιορίστηκε να είναι 0,74530111, 0,78131771, και 0,79964271, αντίστοιχα. Ως εκ τούτου, οι ευαισθησίες τους για την ανίχνευση ΕΚ ήταν 89,7, 92,3 και 84,6% και η ειδικότητα ήταν 57,9, 47,4 και 57,9%, αντίστοιχα.

4 miRNAs (miR-10b *, miR-144, miR-21, και miR-451) ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε υπερκείμενα ομάδα σάλιο ΕΚ (

σ

= 0.013, 0.036, 0.015 και 0.006, αντίστοιχα? fold-αλλαγές, 4.5, 6.7, 9.7 και 5.4, αντίστοιχα? AUCs, 0.702, 0.671, 0.698, και 0.725, αντίστοιχα). Τα άλλα δύο miRNAs (miR-486-5p και miR-634) δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ της ομάδας ΕΚ και υγιή ομάδα (

σ

= 0,211 και 0,524, αντίστοιχα). Με τον υπολογισμό του δείκτη Younden, οι τιμές αποκοπής του υπερκείμενου miRNAs 4 σάλιο (miR-10b *, miR-144, miR-21, και miR-451) ήταν αποφασισμένος να είναι 1,05078691, 8,08243248, 0,88851054, και 8,48817219, αντίστοιχα. Ως εκ τούτου, οι ευαισθησίες τους για την ανίχνευση της ΕΚ ήταν 79,5, 43,6, 89,7, και 51,3% και η ειδικότητα ήταν 57,9, 89,5, 47,4 και 84,2%, αντίστοιχα.

Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα των επιπέδων έκφρασης του κάθε miRNAs στόχου και τα στοιχεία των ερευνητικών θεμάτων στη μελέτη μας παρουσιάστηκαν στο Data S2. Τα ιστογράμματα των επιπέδων έκφρασης εκφράζονται ανώμαλα σιελογόνων miRNAs που αναφέρθηκαν παραπάνω παρουσιάζονται στο Σχήμα 2. Οι καμπύλες ROC των έκτροπα που εκφράζονται miRNAs παρουσιάστηκαν στο Σχήμα 3.

Α) ολόκληρο το σάλιο miR-10b *. Β) ολόκληρο το σάλιο miR-144. Γ) ολόκληρο το σάλιο miR-451. Δ) υπερκείμενο σάλιο miR-10b *. Ε) υπερκείμενο σάλιο miR-144. ΣΤ) υπερκείμενο σάλιο miR-21. G) υπερκείμενο σάλιο miR-451. επίπεδα έκφρασης miRNA υπολογίστηκαν από το 2

-ΔΔCt μέθοδο. Αυτά τα miRNAs ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω στην ΕΚ (n = 39) σε σύγκριση με την υγιή ομάδα (n = 19).

Η

Α) Ολόκληρο το σάλιο miR-10b *. Β) ολόκληρο το σάλιο miR-144 και C) ολόκληρο το σάλιο miR-451. Δ) υπερκείμενο σάλιο miR-10b *. Ε) υπερκείμενο σάλιο miR-144. ΣΤ) υπερκείμενο σάλιο miR-21. G) υπερκείμενο σάλιο miR-451.

Η

Σύγκριση των AUC

Όσο μεγαλύτερη είναι η AUC, η φαινομενικά πιο σημαντική η διακριτική εξουσία. Ωστόσο, για τη διάγνωση μίας νόσου με τη χρήση της ίδιας συλλογή δειγμάτων, δεν είναι επαρκής για να αξιολογηθεί η διακριτική εξουσία απλώς με τη σύγκριση των τιμών AUC [22], [23]. Για να συγκρίνετε με ακρίβεια διαφορετικές AUCs, χρησιμοποιήσαμε τη μέθοδο της Delong με το λογισμικό MedCalc, έκδοση 12.2.1. 3 ολόκληρα σάλιο και 4 υπερκείμενο σάλιο miRNAs ήταν σε θέση να ανιχνεύσουν ΕΚ. miR-10b *, miR-144 και miR-451 θα μπορούσε να ανιχνεύσει ΕΚ χρησιμοποιώντας τόσο ολόκληρο το σάλιο και το υπερκείμενο σάλιο. Οι τιμές AUC δεν έδειξε σημαντικές διαφορές μεταξύ ολόκληρο το σάλιο miR-10b * και υπερκείμενο σάλιο miR-10b *, ολόκληρο το σάλιο miR-144 και υπερκείμενο σάλιο miR-144, και ολόκληρο το σάλιο miR-451 και υπερκείμενο σάλιο miR-451 (

p

= 0,3413, 0,7050 και 0,6867, αντίστοιχα). Οι διακρίσεις εξουσιών των ίδιων miRNAs στο σύνολό σάλιο και το υπερκείμενο σάλιο δεν ήταν σημαντικά διαφορετική. Επιπλέον, οι τιμές AUC των 3 ολόκληρα miRNAs σάλιο (miR-10b *, miR-144 και miR-451) που θα μπορούσε να ανιχνεύσει ΕΚ συγκρίθηκαν μεταξύ δύο miRNAs. Τα αποτελέσματα έδειξαν επίσης σημαντικές διαφορές [

σ

= 0,2356 (miR-10b *

vs

. MiR-144), 0,8959 (miR-10b *

vs

. MiR -451), και 0,3248 (miR-144

vs

. miR-451)]. Τέλος, οι τιμές AUC του υπερκείμενου miRNAs 4 σάλιο (miR-10b *, miR-144, miR-21, και miR-451) που θα μπορούσε να ανιχνεύσει ΕΚ συγκρίθηκαν μεταξύ δύο miRNAs. Τα αποτελέσματα έδειξαν επίσης σημαντικές διαφορές [

σ

= 0,8251 (miR-10b *

vs

. MiR-21), 0,7699 (miR-10b *

vs

. MiR -451), 0,7102 (miR-10b *

vs

. miR-144), 0,6079 (miR-21

vs

. miR-451), 0,8729 (miR-21

vs

. miR-144), και 0,3529 (miR-144

vs

. miR-451)]. Εν κατακλείδι, οι διακρίσεις αρμοδιότητες όλων των miRNAs τόσο ολόκληρο το υπερκείμενο το σάλιο και το σάλιο ήταν παρόμοια.

Συσχέτιση μεταξύ ολόκληρο το σάλιο και τα επίπεδα υπερκείμενο έκφρασης σάλιο

Ολόκληρα δείγματα σάλιου και υπερκείμενο σάλιου συλλέχθηκαν από κάθε θέμα. Σύμφωνα με τα παραπάνω αποτελέσματα, miR-10b *, miR-144, και miR-451 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε αμφότερα τα ολικό υπερκείμενο σάλιο και το σάλιο στην ομάδα ΕΚ. δοκιμή συσχέτιση Spearman χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση συσχετίσεις των επιπέδων έκφρασης αυτών των 3 miRNAs μεταξύ ολόκληρο το σάλιο και το υπερκείμενο σάλιο. Τα επίπεδα έκφρασης αυτών των 3 miRNAs σε ολόκληρο υπερκείμενο σάλιο και το σάλιο έδειξε σημαντικές συσχετίσεις [

σ

= 0.000 (MIR-10b ‘), 0.035 (MIR-144), και 0.003 (MIR-451)].

Σχέσεις μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των miRNAs και τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών ΕΚ

τα επίπεδα έκφρασης ολόκληρων σάλιο miR-10b *, miR-144 και miR-451 και υπερκείμενο σάλιο miR-21, miR -10b *, miR-144 και miR-451 δεν επηρεάζεται από την ηλικία, το φύλο, την κατοικία, τις διατροφικές συνήθειες, το κάπνισμα, η κατανάλωση αλκοόλ, το είδος της παθολογίας, σταδιοποίηση του καρκίνου, διαφοροποίησης του καρκίνου, ή κομβικά μετάσταση των ασθενών με ΕΚ (Πίνακας 3 .)

Η

Συζήτηση

miRNAs εμπίπτουν σε δύο κατηγορίες: κυτταρικές και εξωκυττάρια. Εξωκυτταρική miRNAs είναι παρόντες στο πλάσμα ή άλλα υγρά του σώματος? καλούνται επίσης εκκριτική miRNAs. Αρκετές μελέτες έχουν διαπιστώσει charateristic και σταθερό προφίλ miRNA σε σωματικά υγρά. Εξωκυττάρια miRNAs μπορεί να είναι μόρια ενδοκυτταρικής σηματοδότησης και transduct μεσοκυττάρια σήματα όταν ρέει [24].

Οι μηχανισμοί του τρόπου miRNA εισέρχεται σωματικά υγρά από τα κύτταρα δεν είναι σαφείς. Kaosuka

et al

. [25] βρήκαν ότι miRNA απελευθερώνεται από κύτταρα ρυθμίζεται από ουδέτερης σφιγγομυελινάσης 2 (nSMase2). Όταν κεραμιδιού αυξήσεις στα κύτταρα, nSMase2 προάγει την απελευθέρωση miRNA. Αναστολή της nSMase2 από τη χημική αναστολέα GW4869 παρεμποδίζει την απελευθέρωση miRNA από κύτταρα.

ΚΝάση είναι παρούσα στο πλάσμα, σάλιο, ούρα, και άλλα υγρά του σώματος. Ωστόσο, αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι miRNAs στα σωματικά υγρά είναι σταθερά και μπορούν να αντισταθούν υποβάθμιση σε υψηλές και χαμηλές θερμοκρασίες, σε ισχυρά οξέα και βάσεις, και με ΚΝάση. Αυτό είναι πιθανό επειδή οι ελεύθερες miRNAs σε σωματικά υγρά τυλιγμένη με πρωτεΐνες ή αποθηκεύονται εντός κυστιδίων [26] – [28]

Το σάλιο είναι ένα σύνθετο υγρό που περιλαμβάνει εκκρίσεις από τα μείζονα και ελάσσονα σιελογόνους αδένες.. Υπάρχουν 450 να 750 ελάσσονες εξάρτημα σιελογόνους αδένες που βρίσκονται πάνω στη γλώσσα, στοματικό βλεννογόνο, και τον ουρανίσκο με εξαίρεση το πρόσθιο τμήμα του σκληρού ουρανίσκου και στα ούλα [29]. Υπάρχει επίσης μια εκτεταμένη παροχή αίματος σε αυτούς τους αδένες? Ως εκ τούτου, μόρια που υπάρχουν στο πλάσμα είναι επίσης παρόντα στο σάλιο, όπως πρωτεΐνες, DNA, RNA,

κλπ

. Αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει ότι σιελογόνων μόρια μπορεί να ανιχνεύσει από το στόμα και άλλα οργανικά και συστηματικές νόσους. Li

et al

. [30] ανέφεραν ότι σιελογόνων mRNAs του DUSP1, H3F3A, OAZ1, S100P, SAT, IL-8, και IL-1 μπορεί να ανιχνεύσει τον καρκίνο του στόματος περισσότερο accuately από μπορούμε πλασματική mRNAs αυτών των γονιδίων. Mbulaiteye

et al

. [31] διαπίστωσε ότι οι δοκιμές των σιελογόνων θα μπορούσε να αντικαταστήσει εξετάσεις αίματος για την ανίχνευση μόλυνσης από τον ιό ΕΒ. Επίσης, τους σιελογόνους C-erbB-2 και CA153 πρωτεϊνών θα μπορούσε να είναι νέα βιοδείκτες του καρκίνου του μαστού [32] – [34].

Weber

et al

. [14] ανέφεραν τα προφίλ miRNA της 12ης σωματικών υγρών και βρήκε ένα μέγιστο των 458 miRNAs στο σάλιο. Patel

et al

. [35] βρήκαν ότι τα επίπεδα έκφρασης του σιελογόνου miRNAs ήταν σταθερά και τα επίπεδα miRNA μπορούν να αναπαράγονται εντός θέματα. Πάρκο

et al

. [15] αξιολογούνται τόσο ολόκληρο το σάλιο και το υπερκείμενο σάλιο miRNAs σε ασθενείς με καρκίνο του στόματος, και βρήκε παρόμοια προφίλ miRNA. Ανέφεραν επίσης ότι οι σιελογόνοι miR-125a και miR-200a ήταν σημαντικά μειωτικά και ότι και οι δύο θα μπορούσαν να είναι νέα βιοδείκτες του καρκίνου του στόματος

Με την Agilent μικροσυστοιχιών, εντοπίσαμε τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs 923 σε 10 σύνολό δείγματα σιέλου.? 461 ανιχνεύθηκαν. Τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs 25 έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ της ΕΚ και υγιείς ομάδες. Χρησιμοποιώντας την ίδια τεχνολογία, Weber

et al

. [14] εντοπιστεί 458 σύνολό miRNAs σάλιου από 5 υγιή άτομα. Μετά την επικύρωση με RT-PCR, τρεις ολόκληρες miRNAs σάλιο (miR-10b *, miR-144 και miR-451) και τέσσερις υπερκείμενο σάλιο miRNAs (miR-10b *, miR-144, miR-451 και miR-21) ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε ασθενείς με ΕΚ. Βασίζονται σε τεστ συσχέτισης Spearman, το σύνολο του σάλιου και το σάλιο υπερκείμενο miR-10b *, miR-144 και miR-451 έδειξε σημαντικές συσχετίσεις. Οι διαφορές στις AUCs δεν ήταν στατιστικά σημαντικές. Αυτό υποδηλώνει ότι οι διακρίσεις εξουσιών του ολόκληρο το σάλιο και το υπερκείμενο σάλιο miRNAs ήταν παρόμοια. Ωστόσο, η πλειοψηφία των ασθενών με ΕΚ όταν εισήχθη στο νοσοκομείο έδειξαν συμπτώματα δυσκολία στην κατάποση, παλινδρόμηση, ή έμετος, και το σάλιο τους μπορεί να περιέχονται αποφλοιωμένα κύτταρα ΕΚ αναμασημένων από τον οισοφάγο, λόγω της απόφραξης του οισοφάγου από τον όγκο. Ως εκ τούτου, εάν σιελογόνων δοκιμές miRNA χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό ΕΚ σε ασυμπτωματικούς ασθενείς, υπερκείμενο σάλιο είναι μια καλύτερη επιλογή, επειδή τα κυτταρικά συστατικά έχουν απομακρυνθεί.

Biagioni F,

et al

[36] δείχνουν ότι microRNA-10b * είναι ένας κύριος ρυθμιστής του πολλαπλασιασμού των κυττάρων καρκίνου του μαστού και προς τα κάτω σε δείγματα των όγκων σε σχέση με συμφωνημένα peritumoural ομολόγους, που επίσης δείχνει ότι η αποκατάσταση των microRNA-10β * έκφραση μπορεί να έχει θεραπευτική υπόσχεση. Αλλά στη μελέτη μας, miR-10b * ρυθμίζεται αυξητικά στο σάλιο των ασθενών ΕΚ. Επειδή η καταγωγή των κυκλοφορούντων miRNAs δεν είναι σαφές προς το παρόν, τα επίπεδα έκφρασης τους δεν συνάδουν με ιστική ή κυτταρική miRNAs μερικές φορές. Για παράδειγμα, Coulouarn

et al

[37] και Tsai

et al

[38] ανέφερε ότι το miR-122 προς τα κάτω σε ιστό καρκίνο του ήπατος, αλλά Ζεν και Zhang [39] ανέφερε ότι ρυθμίζεται αυξητικά στον ορό των ασθενών με καρκίνο του ήπατος. miR-10b * ρυθμίζεται αυξητικά στο σάλιο των ασθενών ΕΚ, αλλά μειωτικά σε ιστό καρκίνου του μαστού. Ο λόγος για αυτό μπορεί να σχετίζεται με τη διαφορετική έκφραση του miR-10b * στα δύο διαφορετικά είδη καρκίνου. Επιπλέον, μπορεί επίσης να συνδέονται με τη διαφορετική κατανομή μεταξύ ρευστά ιστού και του σώματος. Rossing

et al

. [40] διαπίστωσε ότι το miR-144 ήταν μειωτικά στον ιστό καρκίνου του θυρεοειδούς. Sureban

et al

. [41] ανέφεραν ότι νανοσωματιδίων με βάση την παράδοση των siDCAMKL-1 αύξησε microRNA-144 και ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου του παχέος καρκίνο μέσω ενός Notch-1-εξαρτώμενο μηχανισμό. Κονίσι

et al

. [42] ανέφεραν ότι το επίπεδο έκφρασης της στο πλάσμα miR-451 αυξήθηκε σε προεγχειρητικό ασθενείς με καρκίνο του στομάχου και μειωμένη μετεγχειρητικά (AUC = 0,96). Έτσι, τα στοιχεία τους δείχνουν ότι το πλάσμα miR-451 διαθέτει εξαιρετικές διακρίσεις ισχύος για καρκίνο του στομάχου. Brenner

et al

. [43] βρήκαν ότι προς τα πάνω ρύθμιση του ιστού miR-451 ήταν προβλεπτική της κακής πρόγνωσης για ασθενείς με γαστρικό καρκίνο. Σε αντίθεση, Bandres

et al

. [44] ανέφεραν ότι προς τα κάτω ρύθμιση του miR-451 στο γαστρικό ή κόλον καρκινικούς ιστούς προέβλεψε κακή πρόγνωση. Επιπλέον, η υπερέκφραση του miR-451 στα γαστρικά και ορθοκολικό καρκίνο κύτταρα μειώνεται πολλαπλασιασμό των κυττάρων και αυξημένη ευαισθησία στην ακτινοθεραπεία. Έτσι, τα στοιχεία τους δείχνουν ότι το miR-451 είναι ένα σημαντικό ογκοκατασταλτικό miRNA. Τελευταίο αλλά όχι λιγότερο σημαντικό, Wang

κ.ά.

[45] ανέφεραν ότι υπερέκφραση του miR-451 που επάγεται απόπτωση και κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, εισβολή και μετάσταση στην οισοφαγικό καρκίνωμα κυτταρική γραμμή EC9706. Επιπλέον, η έγχυση του miR-451 ανάπτυξη ανέστειλαν όγκου σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος καρκίνου του οισοφάγου.

miR-144 και miR-451 εμπλέκονται στην παθογένεση της μυοκαρδιακής ισχαιμίας και διατήρηση της ομοιόστασης ερυθροειδών. Zhang

et al

. [46] ανέφεραν ότι τα συνεργιστικά αποτελέσματα του GATA-4-μεσολάβηση συμπλέγματος miR-144/451 προστατεύεται έναντι προσομοιωμένης ισχαιμίας /επαναιμάτωσης θάνατο που προκαλείται καρδιομυοκυττάρων. Wang

et al

.