Αφηρημένο

Σκοπός

Για τη διερεύνηση της προγνωστικής ρόλο και σύνδεσης των πυρηνικών survivin και το DNA δίκλωνα σπασίματα επισκευή γονιδίων σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC): DNA εξαρτώμενη καταλυτική υπομονάδα κινάσης πρωτεΐνης (DNA-PKcs), Ku ετεροδιμερής ρυθμιστική συγκρότημα υπομονάδα 70-KD (Κιι70) και αταξία-τηλαγγειεκτασία μεταλλαγμένη (ATM).

Μέθοδοι

Η πρωτεΐνη έκφραση της πυρηνικής survivin, DNA-PKcs, Ku70 και ΑΤΜ διερευνήθηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία σε όγκους από 256 ασθενείς με χειρουργικά NSCLC. Επιπλέον, αναλύσαμε την συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του πυρηνικού survivin, DNA-PKcs, Κιι70 και ΑΤΜ. Μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική αναλύσεις για τον προσδιορισμό των προγνωστικών παραγόντων που inuenced τη συνολική επιβίωση και την ελεύθερη νόσου επιβίωση του NSCLC.

Αποτελέσματα

Η έκφραση της πυρηνικής survivin, DNA-PKcs, Ku70 και ΑΤΜ ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς όγκων σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς. Με διχοτομηθεί τα δείγματα ως εκφράζουν χαμηλά ή υψηλά επίπεδα πυρηνικής survivin, πυρηνική survivin συσχετίζεται σημαντικά με την παθολογική στάδιο (P = 0,009) και την κατάσταση των λεμφαδένων (P = 0,004). Τα επίπεδα πυρηνικής survivin ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας τόσο για τη συνολική επιβίωση και την ελεύθερη νόσου επιβίωση σε μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση. Οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση Κιι70 και DNA-PKcs είχε μεγαλύτερο όφελος από την ακτινοθεραπεία σχέση με τους ασθενείς με υψηλή έκφραση του Κιι70 (Ρ = 0,012) και DNA-PKcs (Ρ = 0,02). έκφραση της πυρηνικής survivin συσχετίζεται θετικά με το DNA-PKcs (P & lt? 0.001) και Ku70 έκφραση (P & lt? 0.001).

Συμπεράσματα

Πυρηνική survivin μπορεί να είναι ένας προγνωστικός παράγοντας για τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με εκτομή σταδίου I-IIIA NSCLC. DNA-PKcs και Κυ70 θα μπορούσε να προβλέψει την επίδραση της ακτινοθεραπείας σε ασθενείς με NSCLC. Πυρηνική survivin μπορεί επίσης να διεγείρει την επιδιόρθωση του DNA διαλείμματα διπλό σκέλος από την αλληλεπίδρασή του με το DNA-PKcs και Ku70

Παράθεση:. Hu S, Qu Υ, Xu Χ, Xu Q, Geng J, Xu J (2013) Πυρηνική survivin και τη σχέση του με γονίδια επισκευής ζημιών DNA σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα διερευνηθεί με τη χρήση ιστών Array. PLoS ONE 8 (9): e74161. doi: 10.1371 /journal.pone.0074161

Συντάκτης: John D. Minna, Πολυτεχνείου της Texas Southwestern Medical Center στο Ντάλας, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 4 Ιούνη του 2013? Αποδεκτές: 29 του Ιούλη, 2013? Δημοσιεύθηκε: 16 Σεπτέμβρη 2013

Copyright: © 2013 Hu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Songliu Hu υποστηρίχθηκε από ερευνητικό νοσοκομείο ταμείο εκκίνησης του τρίτου Συνδεδεμένες νοσοκομείο Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο (JJ2010-08), και Xiangying Xu υποστηρίχθηκε από Heilongjiang επαρχιακή Επιστήμης και Τεχνολογίας έργα (WB12C101). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν ανταγωνιστικών συμφερόντων exsits

Εισαγωγή.

καρκίνο του πνεύμονα μη μικρών κυττάρων (NSCLC) είναι η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται με όλο τον κόσμο, με αυξανόμενη συχνότητα εμφάνισης και κακή πρόγνωση. Καθώς τα κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικών δεν μπορεί να προβλέψει με ακρίβεια την έκβαση του ασθενούς, την κατανόηση της βιολογίας του NSCLC σε μοριακό επίπεδο θα βοηθήσει στην ανάπτυξη νέων και αποτελεσματικών τρόπων θεραπείας και την πρόβλεψη της πρόγνωσης.

Evasion των αποπτωτικών κυττάρων θάνατος είναι κρίσιμης σημασίας για την ανάπτυξη του όγκου και έχει αναφερθεί ότι είναι το σήμα κατατεθέν των καρκινικών κυττάρων [1] που αναπτύσσουν αντίσταση σε αντικαρκινικές θεραπείες. Έτσι, με στόχο τα αποπτωτικά μονοπάτια μπορεί να αντιπροσωπεύει μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για την αντιμετώπιση αντίστασης και ευαισθητοποίηση των καρκινικών κυττάρων σε αντικαρκινικά τρόπους, συμπεριλαμβανομένης της ακτινοθεραπείας [2]. Μεταξύ αυτών των αντι-αποπτωτικών παραγόντων, survivin, μία πρωτεΐνη 16,5 KD υπολειμμάτων 142 αμινοξέων η οποία είναι το μικρότερο μέλος του αναστολέα της πρωτεΐνης απόπτωσης οικογένειας (ΙΑΡ), αξίζει ιδιαίτερη προσοχή λόγω της καθολικής υπερέκφραση σε ανθρώπινους όγκους, και της εξέχοντα ρόλο στη ρύθμιση μιας ποικιλίας κυτταρικών δικτύων, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που ελέγχουν τον πολλαπλασιασμό καρκινικών κυττάρων και προσαρμογή σε ένα δυσμενές περιβάλλον [3]. υπάρχουν Survivin σε διακριτές υποκυτταρικές πισίνες συμπεριλαμβανομένου του πυρήνα, του κυτταροπλάσματος και των μιτοχονδρίων [4] – [6]. Η υποκυτταρική κατανομή της survivin παίζει ένα διακριτό ρόλο στην ικανότητα του μορίου αυτού να ρυθμίζει την κυτταρική διαίρεση και την επιβίωση. Ο εντοπισμός του survivin στο κυτταρόπλασμα θεωρείται κυτταροπροστατευτική λόγω των αντι-αποπτωτικών δραστηριότητες αυτού του μορίου [7]. Η πυρηνική εντόπιση του survivin συσχετίζεται με την κυτταρική διαίρεση, όπως survivin είναι μία υπομονάδα του συμπλόκου χρωμοσωμικού επιβάτη (CPC) [8].

Στα κύτταρα των θηλαστικών, το DNA δίκλωνα σπασίματα (DSBs) επιδιορθώνονται κυρίως μέσω ομόλογος ανασυνδυασμός (HR) ή μη ομόλογο άκρο σύνδεσης (NHEJ) [9]. Ένα βασικό στοιχείο του μονοπατιού NHEJ είναι το DNA-εξαρτώμενη πρωτεϊνική κινάση (ϋΝΑ-ΡΚ), το οποίο αποτελείται από ένα 465-KD καταλυτική υπομονάδα της DNA-εξαρτώμενη πρωτεϊνική κινάση (DNA-PKcs), και μια ετεροδιμερής ρυθμιστική συγκρότημα, Ku, η οποία περιλαμβάνει μια υπομονάδα 70-KD (Κιι70) και μία υπομονάδα 86-KD (Κυ80) [10]. Τα τρέχοντα πρότυπα προτείνουν ότι οι ετεροδιμερείς πρωτεΐνες Ku ταχέως δεσμεύονται να διπλασιάσει άκρα αλύσου DNA και την πρόσληψη της πρωτεΐνης κινάσης DNA (DNA-ΡΚ), δημιουργώντας ένα σύμπλοκο DNA-PK ολοένζυμο. Η πρωτεΐνη ΑΤΜ έχει αναγνωριστεί ως ο κύριος ενεργοποιητής και ο κύριος ελεγκτής της κυτταρικής απόκρισης προς τις DSBs. Η κινάση ΑΤΜ φαίνεται να είναι η κύρια ενεργοποιητή και τον κύριο ελεγκτή της κυτταρικής απόκρισης σε DNA DSBs και φωσφορυλιώνει βασικών φορέων του δικτύου απόκριση βλάβης DNA, συμπεριλαμβανομένης απόπτωσης διακοπή του κυτταρικού κύκλου και την επιδιόρθωση του DNA [11].

Πρόσφατα δείχθηκε ότι survivin είναι σε θέση να προκαλέσει τόσο καταστολή της απόπτωσης και τη διέγερση της επιδιόρθωσης του DNA. Οι υποκείμενοι μηχανισμοί φαίνεται να είναι πολύπλευρη και περιλαμβάνει κασπάσης-εξαρτώμενη και κασπάσης-ανεξάρτητα μονοπάτια. Ορισμένες αναφορές επιβεβαιώνεται υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης βλάβη του DNA σε παχέως εντέρου και ορθού και μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα κυτταρικές γραμμές μετά από επεξεργασία με survivin siRNA ή τον μεταγραφικό καταστολέα YM155 βασίζεται στην ανίχνευση του φωσφο-ιστόνης ανίχνευση γ-Η2ΑΧ ως δείκτη του ακτινοβολίας- επαγόμενη DSBs [12], [13]. αναλύσεις συνανοσοκαθίζησης αποκάλυψε μια αλληλεπίδραση μεταξύ survivin, Κιι70 και DNA-PKcs στην πυρηνική εστίες [14]. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η πυρηνική συσσώρευση της survivin συνδέθηκε με την επιδιόρθωση του DNA-DSB.

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να εξετάσει τη δυνατότητα συσχέτισης και προγνωστική αξία της πυρηνικής survivin, DNA-PKcs, Ku70 και ΑΤΜ με χρήση ανοσοϊστοχημείας . Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς

Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας Αναθεώρηση του Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Harbin, Κίνα. Όλοι οι ασθενείς παρέχεται γραπτή συγκατάθεση για να συμμετάσχουν στη μελέτη. Αυτή η μελέτη ήταν αναδρομική. Χειρουργική εκτομή δειγμάτων ελήφθησαν από 256 ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα στο στάδιο ΙΑ ΙΙΙΒ μεταξύ Δεκεμβρίου 2004 και Δεκεμβρίου 2006. Δεν ασθενείς έλαβαν προεγχειρητική χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία. Υπήρχαν 176 άνδρες και 80 γυναίκες με μέση ηλικία των 57,7 ετών. Οι όγκοι οργανώθηκαν σύμφωνα με την αναθεωρημένη έκδοση του καρκίνου του πνεύμονα TNM στάσης που δημοσιεύθηκε το 1997 [15]. Ιστοπαθολογική διάγνωση έγινε σύμφωνα με τα κριτήρια του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας (ΠΟΥ). Συνολικά, 20 (8%) ασθενείς είχαν στάδιο ΙΑ νόσο, 94 (35%) είχαν ΙΒ, 8 (3%) είχαν ΙΙΑ, 50 (20%) είχαν ΙΙΒ, 69 (27%) είχαν ΙΙΙΑ, και 15 (6 %) είχαν ΙΙΙΒ. Η ιστολογική κατάταξη περιλαμβάνονται 145 αδενοκαρκινώματα, 101 ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα, 5 αδενοχοληδωτό καρκινώματα και 5 άλλα είδη. Συνολικά, 234 ασθενείς υποβλήθηκαν σε λοβεκτομή, 18 ασθενείς υποβλήθηκαν σε πνευμονεκτομή και 4 ασθενείς υποβλήθηκαν σε τμηματεκτομή. Μετά το χειρουργείο, 217 ασθενείς έλαβαν τρεις να τέσσερις κύκλους ανοσοενισχυτικού σισπλατίνη χημειοθεραπείας με βάση. Συνολικά 92 ασθενείς έλαβαν μετεγχειρητική ακτινοθεραπεία χορηγείται με μια τεχνική υψηλής τάσης σε μια συνολική δόση 50 Gy, με 2 Gy ανά κλάσμα δίνεται 5 ημέρες την εβδομάδα.

Κατασκευή ιστικές μικροσυστοιχίες

Η μικροσυστοιχία καρκίνο του πνεύμονα ιστού (TMAs) δομήθηκε ως ακολούθως. Εν συντομία, ένα όργανο παράταξη ιστός χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία οπών σε ένα δεκτικό μπλοκ παραφίνης και να αποκτούν πυρήνες ιστού από το μπλοκ ιστού δότη χρησιμοποιώντας ένα λεπτό τοίχωμα βελόνα με εσωτερική διάμετρο 2 mm, που πραγματοποιήθηκε σε ένα οδηγό ακριβείας Χ-Υ. Τα βασικά δείγματα που ανακτώνται από την επιλεγμένη περιοχή στο δότη και εξωθείται απευθείας μέσα στο δεκτικό μπλοκ στις συντεταγμένες που ορίζονται πίνακα. Ένα στερεό χαλύβδινο σύρμα που ταιριάζουν στενά στο σωλήνα, χρησιμοποιήθηκε για τη μεταφορά των πυρήνων ιστού εντός του δεκτικού μπλοκ. Μετά την κατασκευή του μπλοκ συστοιχίας, όλα τα τμήματα ιστού κόπηκαν με μικροτόμο έως 4 μm και επιτίθεται στη διαφάνεια. Μπλοκ από 256 ασθενείς που παρατάσσονται ως τριπλούν κηλίδες διαμέτρου 2 mm σε διαφάνειες.

Ανοσοϊστοχημεία

Οι τομές ιστού αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν με κλιμακούμενες συγκεντρώσεις αλκοόλης με τη χρήση τυποποιημένων διαδικασιών. Οι τομές στη συνέχεια βυθίζεται σε κιτρικό ρυθμιστικό (ρΗ 6.0) και σε αυτόκλειστο στους 121 ° C για 5 λεπτά για να ανακτήσετε την αντιγονικότητα. Μετά από έκπλυση σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS, 0,1 Μ, ρΗ 7.4,3 φορές για 5 λεπτά), η ενδογενής υπεροξειδάση παρεμποδίστηκε με επώαση σε υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% επί 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Στη συνέχεια, τα δείγματα επωάστηκαν με ένα αντίσωμα survivin (71G4B7, Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ) αραιωμένο σε 1:400, ένα αντίσωμα DNA-PKcs (MS-423-P0, NeoMarkers, Fremont, CA), ένα αντίσωμα Κιι70 ( EPR4027, Epitomics, CA) και ένα αντίσωμα ΑΤΜ (Y170, Epitomics, CA) αραιωμένο σε 1:200 σε PBS που περιέχει 0,5% BSA επί μία νύκτα στους 4 ° C σε ένα υγρό θάλαμο και πλύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα προς απομάκρυνση μη συνδεδεμένων αντισωμάτων. Οι τομές επωάστηκαν με το βιοτινυλιωμένο δευτερεύον αντίσωμα που ακολουθείται από συζευγμένη με υπεροξειδάση στρεπταβιδίνη για 30 λεπτά. 3-3’diaminobenzidine τετραϋδροχλωρική (Dako, Germany) προστέθηκε για να απεικονίσει την αντίδραση. Μετά το ξέπλυμα σε απιονισμένο νερό και αντικηλίδωση με εμπορικούς αιματοξυλίνη, τα πλακίδια αφυδατώνονται και να τοποθετηθεί. Κατάλληλα τμήματα ιστού ως θετικοί μάρτυρες για κάθε πρωτογενές αντίσωμα ταυτοχρόνως χρωματίστηκαν για να χρησιμοποιηθούν ως θετικοί έλεγχοι. Mouse IgG1 ή IgG κουνελιού (Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ) χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί έλεγχοι στις ίδιες αραιώσεις όπως τα αντίστοιχα πρωτογενή αντισώματα.

ανοσοϊστοχημική χρώση Αξιολόγηση

Αξιολόγηση της χρώσης για survivin , DNA-PKcs, Ku70 και έκφραση ΑΤΜ διεξήχθη με οπτικό μικροσκόπιο φωτεινού πεδίου ανεξάρτητα από δύο έμπειρους παθολόγους ανεξάρτητα. Πυρηνική survivin, DNA-PKcs, Κιι70 και τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης ΑΤΜ ταξινομήθηκαν ημιποσοτικά συνδυάζοντας την αναλογία και την ένταση των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων όγκου. Το ποσοστό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων όγκου βαθμολογήθηκε ως εξής: 0 (κανένα θετικά καρκινικά κύτταρα), 1 (1-25% θετικών καρκινικών κυττάρων), 2 (26-50% θετικά κύτταρα όγκου), 3 (51-75% θετικά καρκινικά κύτταρα), και 4 (76-100% θετικά κύτταρα όγκου). Ένταση χρώσης βαθμολογήθηκε ως εξής: 0 (καμία χρώση)? 1 (ασθενής χρώση)? 2 (μέτρια χρώση) και 3 (ισχυρή χρώση). Το σκορ ένταση χρώσης πολλαπλασιαζόμενο με το ποσοστό των θετικών χρώσης χρησιμοποιήθηκε για να καθορίσει τα επίπεδα έκφρασης. Η μέση βαθμολογία μεταξύ των τριών τμημάτων ιστού εισήχθη για στατιστικές αναλύσεις. Στη συνέχεια, η μέση τιμή όλων των βαθμολογιών χρησιμοποιήθηκε ως το σημείο αποκοπής για την ταξινόμηση της έκφρασης των πρωτεϊνών 4, έτσι οι ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα ταξινομήθηκαν σε δύο ομάδες: χαμηλή έκφραση και ομάδες υψηλού έκφρασης. Επιπλέον, περιπτώσεις με αποκλίσεις εξετάστηκαν ταυτόχρονα από τις αρχικές δύο παθολόγους και ανώτερος παθολόγος έως ότου επιτεύχθηκε συναίνεση.

Στατιστική Ανάλυση

Οι συσχετίσεις μεταξύ των παραμέτρων IHC, καθώς και η IHC /κλινικές-παθολογικές παράμετροι αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Chi-τετράγωνο τεστ, το ακριβές τεστ Fisher και το βαθμό συσχέτισης Pearson. Η συνολική επιβίωση (OS), την ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) και τοπικής υποτροπής επιβίωση χωρίς (LRS) ελήφθησαν σύμφωνα με τη μέθοδο Kaplan-Meier. Η επιμονή της νόσου και η εμφάνιση των υποτροπών ήταν τα τελικά σημεία για την DFS, η εμφάνιση της τοπικής υποτροπής ήταν το τελικό σημείο για LRS, και ο θάνατος από οποιαδήποτε αιτία θεωρήθηκε ένα γεγονός για τον υπολογισμό του λειτουργικού συστήματος. Οι συγκρίσεις μεταξύ των προγνωστικών μεταβλητών διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία Log-rank. Ένα αναλογικών κινδύνων κατά Cox μοντέλο χρησιμοποιήθηκε για πολυπαραγοντικές αναλύσεις των ανεξάρτητων προγνωστικών παραγόντων (ηλικία, φύλο, την κατάσταση, ιστολογία, βαθμός διαφοροποίησης, παθολογική στάδιο, το στάδιο Τ, Ν στάδιο, χημειοθεραπεία, ακτινοθεραπεία, έκφραση survivin, έκφραση DNA-PKcs, Κυ70 κάπνισμα έκφρασης και έκφραση ΑΤΜ) που επηρεάζουν το λειτουργικό σύστημα, DFS. Το κριτήριο της σημαντικότητας επιλέχθηκε ήταν ρ & lt? 0,05, και όλες οι δοκιμές ήταν αμφίδρομες. Η ανάλυση επιβίωσης διεξήχθη με τη χρήση του στατιστικού πακέτου SPSS για την έκδοση 13.0.

Αποτελέσματα

Πυρηνική ανοσολογική survivin ανιχνεύτηκε σε 166 (64,8%) από τους 256 όγκους που εξετάστηκαν. Θετική ανοσοαντιδραστικότητα για survivin ήταν παρούσα μόνο σε καρκινικά κύτταρα και όχι στα γειτονικά φυσιολογικά κύτταρα του πνεύμονα επιθηλιακά. Σε ιστούς όγκων, η χρώση για το DNA-PKcs, Κιι70 και ATM ήταν κυρίως πυρηνικών με λεπτά χρώση στο κυτταρόπλασμα. Οι φυσιολογικοί ιστοί έδειξαν μία ασθενή ένταση χρώσης για ΑΤΜ και μια μέτρια ένταση χρώσης για DNA-PKcs και Κυ70. Το ποσοστό των θετικών πυρήνων ήταν σημαντικά υψηλότερη στον ιστό του όγκου σε σύγκριση με το φυσιολογικό ιστό. DNA-PKcs ανοσοαντιδραστικότητα παρατηρήθηκε σε 190 (74,2%) από 256 όγκων και 56 (51,9%) από τους 108 φυσιολογικούς ιστούς? Κιι70 ανοσοαντιδραστικότητα παρατηρήθηκε σε 189 (73,8%) από 256 όγκων και 48 (44,4%) από τους 108 φυσιολογικούς ιστούς, και ΑΤΜ ανοσοαντιδραστικότητα παρατηρήθηκε σε 125 (48,8%) από 256 όγκων και 26 (24,1%) από τους 108 φυσιολογικούς ιστούς. Όταν οι όγκοι κατηγοριοποιούνται ανάλογα με το σκορ ένταση χρώσης και η θετική βαθμολογία χρώσης, 124 όγκοι είχαν χαμηλή έκφραση και 132 είχαν υψηλή έκφραση survivin, 121 όγκοι είχαν χαμηλή έκφραση και 135 είχαν υψηλή έκφραση του DNA-PKcs, 107 όγκοι είχαν χαμηλή έκφραση και 149 είχαν υψηλή έκφραση του Κιι70 και 156 όγκοι είχαν χαμηλή έκφραση και 100 είχαν υψηλή έκφραση του ATM (Εικ. 1).

Ασθενής χρώση για ΑΤΜ (Ε), DNA-PKcs (F), Κυ70 (G ) και της πυρηνικής survivin (H) σε ιστούς του καρκίνου του πνεύμονα.

Η

Συσχέτιση με προγνωστικούς παράγοντες

Οι συσχετίσεις μεταξύ των ασθενών που εκφράζουν την πυρηνική survivin, DNA-PKcs, Ku70 και ΑΤΜ σε διάφορα επίπεδα και κλινικο-παθολογική χαρακτηριστικά τους παρουσιάστηκαν στον πίνακα 1. τα πυρηνικά survivin συσχετίζεται σημαντικά με το στάδιο και λεμφαδένα κατάσταση παθολογική. επίπεδα πυρηνική έκφραση survivin σε ασθενείς με σταδίου ΙΙΙ όγκους ήταν σημαντικά υψηλότερα από εκείνα σε ασθενείς με σταδίου Ι και ΙΙ όγκους (P = 0,009) στάδιο. έκφραση Πυρηνική survivin σε ασθενείς με νόσο του Ν2 και Ν3 ήταν υψηλότερες από εκείνες σε ασθενείς με N0 και ασθένεια Ν1 (Ρ = 0,004). Δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ του DNA-PKcs, Ku70 ή έκφραση ΑΤΜ και τις κλινικοπαθολογική μεταβλητές.

Η

έκφραση των γονιδίων επιδιόρθωσης Πυρηνικής Σουρβιβίνης και DNA DSB σε σχέση με την πρόγνωση

Το μεσαίο χρόνος παρακολούθησης ήταν 64 μήνες. Η διάμεση OS των ασθενών ήταν 47 ± 5,8 μήνες, και ο διάμεσος χρόνος DFS ήταν 25 ± 4,5 μήνες. μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι η ιστολογία του όγκου, βαθμός διαφοροποίησης, παθολογική στάδιο, την κατάσταση Τ, Ν κατάσταση, έκφραση πυρηνικών survivin, DNA-PKcs έκφρασης και έκφραση Κιι70 επηρεάζεται σημαντικά το λειτουργικό σύστημα και DFS (Πίνακας 2). Η πολυπαραγοντική ανάλυση διεξήχθη σύμφωνα με τα αποτελέσματα της μονοπαραγοντική ανάλυση. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο βαθμός διαφοροποίησης όγκου, την παθολογική στάδιο και έκφραση πυρηνικών survivin ήταν οι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες (Πίνακας 3). Οι υπολογισθείσες σχετικών κινδύνων του θανάτου και υποτροπής ήταν 1.68 (Ρ = 0,047) και 1,83 (Ρ = 0,041) για ασθενείς με υψηλή έκφραση survivin, 1,67 (Ρ = 0,001) και 1,59 (Ρ = 0,003) για ασθενείς με υψηλό παθολογική στάδιο και 0,63 (P = 0.015) και 0,51 (P = 0,002) για ασθενείς με χαμηλή διαφοροποίηση, αντίστοιχα.

η

η ανάλυση Kaplan-Meier έδειξε ότι οι ασθενείς με πυρηνικά survivin υψηλή έκφραση είχε φτωχότερες OS (44,8 έναντι 55,7 μήνες? Ρ = 0,001) (Σχήμα 2Α) και DFS (35,7 έναντι 49,7 μήνες?.. Ρ = 0,001) (Σχήμα 2Β) σε σύγκριση με τους ασθενείς με χαμηλότερα επίπεδα πυρηνικής survivin. Ασθενείς με μέτρια ή ισχυρή βαθμού διαφοροποίησης είχαν καλύτερη επιβίωση από τους ασθενείς με χαμηλού βαθμού διαφοροποίησης (OS, P = 0,007? DFS, P = 0,008). Επιπλέον, τα υψηλότερα παθολογικό στάδιο (OS, P & lt? 0.001? DFS, P & lt? 0.001) ήταν σημαντικά σχετίζονται με την κακή OS και DFS. Οι ασθενείς με υψηλό DNA-PKcs ή Ku70 έκφρασης είχαν σημαντικά χειρότερο λειτουργικό σύστημα και DFS από εκείνους με χαμηλότερη έκφραση, αλλά δεν ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες.

Α. Συνολική επιβίωση των ασθενών με χαμηλή πυρηνική survivin (n = 124) σε σύγκριση με εκείνη των ασθενών με υψηλή πυρηνική survivin (n = 132). Η τιμή του P για τη δοκιμασία log-rank είναι 0.001.B. Ελεύθερη νόσου επιβίωση των ασθενών με χαμηλή πυρηνική survivin (n = 124) σε σύγκριση με εκείνη των ασθενών με υψηλή πυρηνική survivin (n = 132). Η τιμή του P για τη δοκιμασία log-rank είναι 0.001.

Η

Σχέση μεταξύ Πυρηνική Σουρβιβίνης και Γονίδια επισκευής ζημιών DNA

Εμείς ερευνήσαμε την πιθανή σχέση μεταξύ της πυρηνικής survivin και γονίδια επιδιόρθωσης βλαβών του DNA μεταξύ των 256 ασθενών. Μεταξύ των τριών σχετικών γονιδίων, DNA-PKcs και της έκφρασης Κιι70 σημαντικά θετικά με την έκφραση της πυρηνικής survivin (Πίνακας 4). Συνολικά, 91 (67.4%) από 135 ασθενείς με υψηλά DNA-PKcs που είχαν ταυτόχρονη έκφραση υψηλού survivin σε σύγκριση με 44 (32,6%) από 135 ασθενείς με υψηλά DNA-PKcs που είχαν χαμηλή έκφραση survivin (Ρ & lt? 0.001). Συνολικά, 99 (66.4%) από 149 ασθενείς με υψηλή Κιι70 είχε συνυπάρχουσα έκφραση υψηλού survivin σε σύγκριση με 50 (33,6%) από 149 ασθενείς με υψηλή Κιι70 έκφραση και χαμηλή έκφραση survivin (Ρ & lt? 0.001). Σε survivin αρνητικές περιπτώσεις, η έκφραση του DNA-PKcs επηρέασε σημαντικά το λειτουργικό σύστημα (46,0 έναντι 61,3 μήνες? P = 0.009) και DFS (35,0 έναντι 55,1 μήνες? P = 0.02). Αυτό δεν βρέθηκε σε survivin θετικών περιπτώσεων.

Η

Πρόβλεψη Αποτέλεσμα Θεραπεία

Η μετεγχειρητική ακτινοθεραπεία θα μπορούσε να μειώσει σημαντικά τον κίνδυνο τοπικής υποτροπής. Στη μελέτη μας, 92 ασθενείς έλαβαν μετεγχειρητική ακτινοθεραπεία. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι ο όγκος βαθμού διαφοροποίησης, DNA-PKcs και έκφραση Κιι70 ήταν οι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες (Πίνακας 5). Οι υπολογισθείσες σχετικών κινδύνων της τοπικής υποτροπής ήταν 2.025 (Ρ = 0,007) για ασθενείς με υψηλή έκφραση DNA-PKcs, 2.161 (Ρ = 0,029) για ασθενείς με υψηλά Κιι70 έκφραση και 0.522 (Ρ = 0,008) για ασθενείς με χαμηλής ποιότητας διαφοροποίηση, αντίστοιχα . Σε ασθενείς με χαμηλή έκφραση του Κιι70 και DNA-PKcs, η τοπική επιβίωση χωρίς υποτροπή (LRS) ήταν σημαντικά υψηλότερη σε σύγκριση με τους ασθενείς με υψηλή έκφραση του Κιι70 (Ρ = 0,012? Σχήμα 3Α.) Και DNA-PKcs (Ρ = 0,02? Σχήμα. 3Β). Το μεγαλύτερο όφελος της ακτινοθεραπείας παρατηρήθηκε σε ασθενείς των οποίων οι όγκοι είχαν χαμηλή έκφραση του Ku70 και DNA-PKcs.

Α. Τοπικές χωρίς υποτροπή επιβίωση των ασθενών με χαμηλή έκφραση Κιι70 (n = 36) σε σύγκριση με εκείνη των ασθενών με υψηλή survivin Κιι70 (n = 56). Η τιμή του P για τη δοκιμασία log-rank είναι 0.012. Β Τοπική χωρίς υποτροπή επιβίωση των ασθενών με χαμηλή έκφραση DNA-PKcs (n = 49) σε σύγκριση με εκείνη των ασθενών με υψηλή πυρηνική survivin (n = 53). Η τιμή του P για τη δοκιμασία log-rank είναι 0,02.

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη, προσδιορίσαμε την έκφραση της πυρηνικής survivin και 3 βασικά συστατικά της μονοπάτια επιδιόρθωσης του DNA DSB σε ασθενείς με ΜΜΚΠ χρησιμοποιώντας TMAs. Σε σύγκριση με την κανονική ιστό πνεύμονα, η αναλογία των κυττάρων με θετικά χρωματισμένων πυρήνων και την ένταση χρώσης ήταν υψηλότερες σε καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με την κανονική πνευμονικό ιστό. Μειωμένη έκφραση του αγγελιαφόρου RNA για DNA-PKcs και ATM σε φυσιολογικό πνευμονικό ιστό έχει επίσης δειχθεί σε μια προηγούμενη μελέτη [16]. έκφραση Σουρβιβίνης παρατηρήθηκε μόνο σε δείγματα όγκων, όχι στους περιβάλλοντες κανονικούς ιστούς, η οποία είναι σύμφωνη με τα αποτελέσματα των προηγούμενων μελετών [17], [18].

Η προγνωστική αξία πρόβλεψης της έκφρασης της survivin και της πυρηνική χρώση έναντι κυτταροπλασματική χρώση σε διάφορες κακοήθειες, συμπεριλαμβανομένου του NSCLC, έχουν ερευνηθεί σε έναν αριθμό μελετών με αντικρουόμενα αποτελέσματα. Παρομοίως, τα αποτελέσματα των μελετών διερεύνηση της προγνωστικής προγνωστική αξία της πυρηνική χρώση των survivin είναι επίσης αντικρουόμενες. Αυτές οι διαμάχες θα μπορούσε να εξηγηθεί, σε μελέτες IHC, με βάση τη χρήση αντισωμάτων διαφορετικών εξειδικεύσεων ή συγκεντρώσεις, και χρησιμοποιώντας διαφορετικά σημεία αποκοπής και διαφορετικές προσεγγίσεις για την αποθήκευση και επεξεργασία των ιστών. Η μελέτη μας έδειξε ότι η πυρηνική έκφραση της survivin είναι ένας ανεξάρτητος αρνητικός προγνωστικός παράγοντας για την επιβίωση σε ασθενείς με χειρουργικά NSCLC. Σύμφωνα με τα αποτελέσματά μας, άλλες αναδρομικές σειρές έχουν προσδιορίσει την πυρηνική αντί κυτταροπλασματική έκφραση survivin ως ανεξάρτητος αρνητικός προγνωστικός παράγοντας για την επιβίωση σε NSCLC [19] – [22]. Ακόμη και σε NSCLC, η πυρηνική survivin έκφρασης φάνηκε να συσχετίζεται με ένα καλύτερο αποτέλεσμα σε μια πρόσφατη σειρά προηγμένων (στάδιο IIIA-IV) ακατάλληλο για ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χημειοθεραπεία [17]. Ωστόσο, μια μετα-ανάλυση των survivin που διεξήχθη από Jiang Fan [23] χρησιμοποιώντας ατομικά στοιχεία των ασθενών που βρέθηκαν αντικρουόμενα αποτελέσματα. Τα στοιχεία από τρεις μελέτες ενώθηκαν για να διαπιστώσετε ότι το επίπεδο της πυρηνικής survivin δεν έχουν επίδραση στο OS των ασθενών με NSCLC (RR1.58, 95% CI 0,87 έως 2,85, P = 0,13). Αλλά οι μελέτες περιελάμβαναν μόνο τρεις μελέτες και ο αριθμός των ασθενών ήταν μικρός, το αρνητικό αποτέλεσμα μπορεί να οφείλεται στο μικρό αριθμό ασθενών.

Στη μελέτη μας, η έκφραση της πυρηνικής survivin συσχετίζεται θετικά με το παθολογικό στάδιο και η λέμφος κατάσταση του κόμβου. Τα τρέχοντα αποτελέσματα είναι συνεπή με εκείνα που ανέφεραν ότι η survivin ήταν ένας δείκτης λεμφαδένα μετάσταση [18], [24], [25]. Η σχέση μεταξύ της έκφρασης της survivin και το δυναμικό για λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες θα μπορούσε να εξηγηθεί ως ακολούθως. Survivin θα μπορούσε να είναι ένας αναστολέας της απόπτωσης: η αναλογία των καρκινικών κυττάρων σε έναν ιστό, η οποία διαφορετικά θα απομακρυνθεί με απόπτωση, αυξάνεται με συνεχή ανάπτυξη και αυξημένη πιθανότητα για εισβολή και μετάσταση

Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε ότι τα υψηλά. έκφραση του DNA-PKcs και Ku70 συσχετίστηκε με κακή συνολική επιβίωση σε ασθενείς με NSCLC, αλλά δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Τα DNA δίκλωνα σπασίματα (DSBs) θεωρείται ως η πιο θανατηφόρα όλων των βλαβών του DNA. Έγκαιρη και αποτελεσματική επιδιόρθωση του DNA DSBs είναι κρίσιμη για τη διατήρηση της γονιδιωματικής ακεραιότητας. Ελαττώματα στο μονοπάτι επιδιόρθωσης DSB μπορεί να προκαλέσει γενετικές αλλαγές, αστάθεια χρωμόσωμα, και, τελικά, κακοήθη μετασχηματισμό. Αντιστρόφως, τα καρκινικά κύτταρα με αυξημένη ικανότητα επιδιόρθωσης του DNA DSB θα ήταν πιο πιθανό να επιβιώσουν και να πολλαπλασιαστούν, με αποτέλεσμα την κακή πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο. Η προγνωστική αξία αυτών των γονιδίων διερευνήθηκαν και τα αποτελέσματα ήταν αντικρουόμενα. Στη μελέτη που διεξήχθη από Jinliang et al στην οποία χρησιμοποιήθηκε RT-PCR για να μετρηθεί DNA-PKcs και της έκφρασης ATM στον καρκίνο του πνεύμονα, οι ασθενείς με υψηλό όγκο: κανονικό (T /N) αναλογίες έκφραση του ΑΤΜ ή DNA-PKcs είχε κυρίως μικρότερη διάμεση επιβίωση από τους ασθενείς με χαμηλές αναλογίες [16]. Ωστόσο, υπάρχουν επίσης ορισμένα αντιφατικά αποτελέσματα σε σχέση με την προγνωστική αξία αυτών των γονιδίων. Σε μια συνολική αναθεώρηση, Wynand ανέφερε ότι τα κύτταρα που παρουσιάζουν ένα ελάττωμα σε μονοπάτια επιδιόρθωσης του DNA τους, ενδέχεται να υποφέρουν από βλάβες στο DNA που προκαλούνται από απόπτωση [26]. Για παράδειγμα, η επιβίωση των ασθενών με υψηλή έκφραση του DNA-PKcs ή Ku86 ήταν σημαντικά καλύτερη σε σύγκριση με την επιβίωση των ασθενών με χαμηλή έκφραση του DNA-PKcs ή Ku86 [27]. Αυτές οι αντιφάσεις μπορεί να είναι το αποτέλεσμα πολλών παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων των διαφόρων τύπων καρκίνου, διαφορετικά χαρακτηριστικά ιστολογία και όγκου, ή μεθοδολογικές διαφορές, όπως είναι η τεχνική που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση της έκφρασης γονιδίου ή το αντίσωμα αντιδρά εναντίον ενός ειδικού επιτόπου.

Η μοριακός μηχανισμός που διέπουν το διαφορικό εντοπισμό σε καρκινικά κύτταρα είναι ακόμα ασαφής. Η υποκυτταρική κατανομή της survivin παίζει ένα διακριτό ρόλο στην ικανότητα του μορίου να ρυθμίζει την κυτταρική διαίρεση. Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν περαιτέρω ότι η αλληλεπίδραση του πλούσιες σε λευκίνη σήμα πυρηνικής εξαγωγής (NES) με την περιοχή του χρωμοσώματος πρωτεΐνη συντήρηση των πυρηνικών υποδοχέων εξαγωγή 1 ομόλογο (Crm1) αποτελεί κρίσιμο ρόλο στην ενδοκυτταρική λειτουργίες σχετίζονται με τον καρκίνο εντοπισμός και survivin του [28], [29 ]. βλάβη του DNA μπορεί να διεγείρει την ταχεία εκκένωση του μιτοχονδριακού πισίνα του survivin στο κυτοσόλιο, η οποία διατηρεί τη βιωσιμότητα των καρκινικών κυττάρων κατά τη διάρκεια παρατεταμένης μπλοκ G2 με ανταγωνισμό DNA βλάβη προκαλούμενη απόπτωση [30]. Χρησιμοποιώντας Pearson ανάλυση συντελεστής συσχέτισης, η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των πυρηνικών survivin και των DNA-PKcs ή Κιι70 παρατηρήθηκε στη μελέτη μας. Survivin είναι μέλος του αναστολέα της απόπτωσης οικογένειας (ΙΑΡ), και αναστέλλει άμεσα τη δραστικότητα των κασπασών, ιδιαίτερα κασπάση-3. Πρόσφατα, δείχθηκε ότι η survivin διεγείρει επίσης την επισκευή DSB από την αλληλεπίδρασή του με το DNA-ΡΚ [14], [31]. Ως εκ τούτου, εμείς εικάζουν ότι βλάβες στο DNA διεγείρει τη γρήγορη εκκένωση του survivin προς τον πυρήνα, το οποίο αλληλεπιδρά φυσικά με παράγοντες των πρωτεϊνών επιδιόρθωσης του DNA DSB DNA-PKcs και Κυ70. Έτσι διεγείρει survivin διπλής ίνας ικανότητες επιδιόρθωση του DNA με τον έλεγχο του DNA-PKcs και της δραστηριότητας Κιι70 και, έτσι αναστέλλουν DNA βλάβη επαγόμενη απόπτωση. Ωστόσο, οι περισσότερες μελέτες που απαιτούνται για να διευκρινιστεί αυτό το ανοικτό ζήτημα.

Το νέο εύρημα της μελέτης μας είναι ότι τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης των πρωτεϊνών επιδιόρθωσης DSB μπορεί να έχει αξία για την πρόβλεψη της έκβασης της θεραπείας. Οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση Κιι70 και DNA-PKcs είχε μεγαλύτερο όφελος από την ακτινοθεραπεία σχέση με τους ασθενείς με υψηλή έκφραση του Κιι70 και DNA-PKcs, επειδή η τελευταία ομάδα είχε ένα υψηλό ποσοστό υποτροπής μετά από θεραπεία με ακτινοθεραπεία. ερμηνεία μας είναι ότι Κιι70 και DNA-PKcs είναι απαραίτητα για την αναγνώριση της βλάβης του DNA και τη σηματοδότηση και ότι η απώλεια αυτών των πρωτεϊνών θα οδηγήσει σε μειωμένη επιδιόρθωση του DNA, αυξημένη ραδιοευαισθησία και βελτιωμένη τοπικό έλεγχο του όγκου. Karin et al. ανέφεραν ότι η χαμηλή έκφραση του Κυ70 /Κυ80 προβλέψει ένα καλό αποτέλεσμα της ακτινοθεραπείας σε πρώιμο καρκίνο του μαστού [32]. Beskow διαπίστωσε επίσης ότι ακτινοανθεκτικά του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας έδειξε αυξημένη συχνότητα του DNA-PKcs, Ku70 και θετικά κύτταρα Ku86 [33]. Bouchaert et al. ανέφερε ότι η θετική πυρηνική χρώση του DNA-PKcs συνδέθηκε στενά με βιοχημική υποτροπή και πρότεινε ότι το DNA-PKcs θα μπορούσε να είναι μια έξυπνη δείκτη υποτροπής μετά από ακτινοθεραπεία σε καρκίνο του προστάτη [34]. Ωστόσο, υπάρχουν και αποτελέσματα που δεν συνάδουν με τα ευρήματά μας [27], [32], [35]. Παραμένει αμφιλεγόμενο κατά πόσον DNA-PKcs ή Ku70 έκφραση θα μπορούσε να είναι ένας προγνωστικός παράγοντας για την αντιμετώπιση των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα στην ακτινοθεραπεία.

Εν κατακλείδι, παρατηρήσαμε ότι η πυρηνική survivin συσχετίστηκε με κακή επιβίωση σε ασθενείς με NSCLC και ότι η πυρηνική survivin ήταν στενά συνδεδεμένες με παθολογικό στάδιο και μετάσταση στους λεμφαδένες. Πυρηνική survivin συσχετίστηκε θετικά με DNA-PKcs και Κιι70 και έτσι μπορεί να διεγείρουν την επιδιόρθωση του DNA διαλείμματα διπλό σκέλος από την αλληλεπίδρασή του με DNA-PKcs και Κυ70. Τα σημερινά αποτελέσματα δείχνουν ότι η πυρηνική survivin μπορεί να είναι χρήσιμη για την πρόβλεψη των κλινικών αποτελεσμάτων των ασθενών με NSCLC.

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες στον Δρ Hongfei Ji στο Ινστιτούτο Πρόληψης Καρκίνου και Θεραπεία , Harbin Ιατρικό Πανεπιστήμιο και ο Δρ Shuhuai Wang στο Τμήμα παθολογίας, Η Τρίτη Συνδεδεμένες Νοσοκομείο Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο για την ενίσχυση της τεχνικής τους.