Αφηρημένο

Ιστορικό

Το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου του ήπατος και του τρίτου κορυφαία αιτία θανάτου από καρκίνο παγκοσμίως. Η μόνη εγκεκριμένη συστηματική θεραπεία για ανεγχείρητο ΗΚΚ είναι η από του στόματος αναστολέας της κινάσης, sorafenib. Ανασυνδυασμένη ανθρώπινη σφιγγομυελινάση οξύ (rhASM), η οποία υδρολύει σφιγγομυελίνη σε κεραμίδιο, είναι ένα ορφανό φάρμακο υπό ανάπτυξη για τη θεραπεία του τύπου Β της νόσου Niemann-Pick (NPD). Λόγω της ηπατοτρόπος φύση της rhASM και την ικανότητά του να παράγει προ-αποπτωτικών κεραμιδιού, αυτή η μελέτη αξιολόγησε τη χρήση των rhASM ως επικουρική θεραπεία με sorafenib σε πειραματικά μοντέλα της HCC.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

In vitro

, rhASM επεξεργασία /sorafenib μείωσε τη βιωσιμότητα των Huh7 καρκίνο του ήπατος κύτταρα περισσότερο από sorafenib.

In vivo

, χρησιμοποιώντας ένα υποδόριο μοντέλο όγκου Huh7, επιβίωση ποντικών αυξήθηκε και πολλαπλασιασμό στους όγκους μειώθηκε σε παρόμοιο βαθμό και στις δύο ομάδες sorafenib και /θεραπεία sorafenib rhASM. Ωστόσο, η συνδυασμένη θεραπεία /sorafenib rhASM μείωσε σημαντικά τον όγκο του όγκου, αύξηση της νέκρωσης των όγκων, και μειωμένη όγκου της πυκνότητας των αιμοφόρων αγγείων σε σύγκριση με το sorafenib. Αυτά τα αποτελέσματα ελήφθησαν παρά την κακή παράδοση των rhASM στους όγκους. Μία δεύτερη (ορθοτοπικό) μοντέλο των όγκων Huh7 επίσης ιδρύθηκε, αλλά δραστηριότητα μέτρια ASM παρομοίως ανιχνεύθηκε σε αυτούς τους όγκους σε σύγκριση με υγιείς ήπατα ποντικών. Είναι σημαντικό, δεν χρόνιας ηπατικής τοξικότητας ή απώλεια βάρους παρατηρήθηκε από τη θεραπεία με rhASM σε κάθε μοντέλο.

Συμπεράσματα /Σημασία

Η /συνδυασμός sorafenib rhASM παρουσίασε μια συνεργική επίδραση στη μείωση του όγκου του όγκου και των αιμοφόρων αγγείων πυκνότητα σε Huh7 ξενομοσχεύματα, παρά μέτρια δραστικότητα rhASM σε αυτούς τους όγκους. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές αυξήσεις στην επιβίωση παρατηρήθηκαν από τη θεραπεία /sorafenib rhASM. Η κακή παράδοση rhASM σε όγκους Huh7 μπορεί να οφείλεται, τουλάχιστον εν μέρει, σε χαμηλή έκφραση του μαννόζης υποδοχέων. Η ασφάλεια και η αποτελεσματικότητα αυτής της προσέγγισης, μαζί με τα νέα ευρήματα σχετικά με το ένζυμο στόχευση, χρήζει περαιτέρω διερεύνησης

Παράθεση:. Savić R, Ο Χ, Fiel Ι, Schuchman EH (2013) Η ανασυνδυασμένη ανθρώπινη όξινη σφιγγομυελινάση σαν ένα επικουρικό να Sorafenib Θεραπεία της Πειραματικής καρκίνο του ήπατος. PLoS ONE 8 (5): e65620. doi: 10.1371 /journal.pone.0065620

Επιμέλεια: Αλέξανδρος ΑγΙϊ, Christian-Albrechts-Πανεπιστήμιο του Κιέλου, Γερμανία

Ελήφθη: 3 Φλεβάρη 2012? Αποδεκτές: 2η Μαΐου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 28 Μαΐου, 2013

Copyright: © 2013 Savić et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. ΝΙΗ HD28607 . Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η πιο πρόσφατη εκτίμηση από την αμερικανική Αντικαρκινική Εταιρεία για το 2013 είναι ότι περίπου 30.640 άνθρωποι θα διαγνωσθεί με πρωτοπαθή καρκίνο του ήπατος και χοληδόχου πόρου στις Ηνωμένες Πολιτείες, με περίπου 21.670 (71%) που σχετίζονται με τον καρκίνο των θανάτων. HCC είναι η πιο κοινή (-90%) μορφή του καρκίνου του ήπατος, συχνά διαγιγνώσκεται σε προχωρημένα στάδια της νόσου. [1] HCC είναι γενετικά ετερογενής κακοήθεια στην οποία πολλές οδούς απελευθερωμένης σηματοδότησης να οδηγήσει σε αυξημένα πολλαπλασιασμό και την αγγειογένεση, συμπεριλαμβανομένης της RAF /MEK /ERK, ΡΙ3Κ /ΑΚΤ /mTOR, WNT /β-κατενίνης, IGF, και HGF /c-met [2]. Μέχρι πρόσφατα, οι θεραπευτικές επιλογές για προχωρημένους /ανεγχείρητο ΗΚΚ ήταν σχετικά αναποτελεσματική και περιπλέκεται από την υποκείμενη ηπατίτιδα και κίρρωση του ήπατος. Το 2007 η FDA ενέκρινε μια προφορική φάρμακο για ανεγχείρητο ΗΚΚ – sorafenib, ένα μικρό αναστολέα μόριο κινασών με ένα

in vitro

δράση ενάντια δεκάδες σερίνης /θρεονίνης (π.χ., RAF) και κινάσες τυροσίνης (π.χ., VEGFR) σε κύτταρα όγκου και αγγείωση [3], [4]. Σε πιλοτικές κλινικές μελέτες, sorafenib έδωσε 2,8 μηνών καλύτερη επιβίωση στην ομάδα θεραπείας (10,7 μήνες διάμεσος) σε σύγκριση με το εικονικό φάρμακο (7,9 μήνες), που αποτελεί τη βάση της έγκρισής της από το FDA [3], [5]. Ωστόσο, παρά την αποδεδειγμένη κλινική αποτελεσματικότητα, ορισμένοι ασθενείς με προχωρημένη νόσο αποτυγχάνουν να ανταποκριθούν στις sorafenib και εκείνων που έχουν ένα πεπερασμένο όφελος [5]. Κατά συνέπεια, οι έρευνες σε εναλλακτικές /υποστηρικτικές θεραπείες φαρμάκων έχουν κερδίζει έδαφος [6].

Σε αντίθεση με HCC, NPD περιλαμβάνει μία οικογένεια εξαιρετικά σπάνιων μονογονιδιακών διαταραχών με γνωστές γενετικές και βιοχημικές ανωμαλίες. Για παράδειγμα, οι μεταλλάξεις στο

SMPD1

γονίδιο αποτέλεσμα στην ανεπάρκεια της δραστηριότητας ASM, οδηγώντας σε συσσώρευση του σφιγγομυελίνης σε λυσοσώματα και άλλα κυτταρικά διαμερίσματα. Τύπος Α NPD είναι η νευροεκφυλιστική, βρεφική μορφή της ανεπάρκειας ASM, συνήθως θανατηφόρα μέσα στα πρώτα 2-3 χρόνια της ζωής. Σε αντίθεση, Τύπος Β NPD δεν έχει νευρολογική συμμετοχή και η επιβίωση μπορεί να είναι σε όψιμη παιδική ηλικία ή την ενηλικίωση, αν και προσβεβλημένα άτομα συχνά παρουσιάζουν προοδευτική ηπατοσπληνομεγαλία και αναπνευστική ασθένεια [7]. Η θεραπεία ενζυμικής υποκατάστασης με εξωγενή rhASM λάβει το καθεστώς του ορφανού φαρμάκου για το NPD τύπου Β το 2000 [8], και έχει δοκιμαστεί με επιτυχία σε μια φάση Ι κλινική δοκιμή σε ασθενείς Β NPD ενηλίκων Τύπος (αναγνωριστικό clinicaltrials.gov NCT00410566). Μια μελέτη φάσης Ib επανάληψης δόσης είναι σε εξέλιξη. Η υδρόλυση της σφιγγομυελίνης από rhASM παράγει μια ιδιαίτερα βιοδραστικών και κυτταροκτόνα λιπιδίων, κεραμίδιο, το οποίο είναι ικανό να επάγει καταστολή του όγκου [9]. Είναι γνωστό ότι η αύξηση του κεραμιδιού στην επιφάνεια του κυττάρου εκ νέου οργανώνει κυτταρικής μεμβράνης πλατφόρμες σηματοδότησης, πιθανόν επαγωγή των κατάντη κυτταρικές αλλαγές, αλλά οι ακριβείς μηχανισμοί που διέπουν αυτές τις επιδράσεις παραμένει ενεργή περιοχή έρευνας [9].

Λόγω στις επιδράσεις προ-θάνατος του κεραμιδιού, τα καρκινικά κύτταρα έχουν αναπτύξει πολλαπλούς μηχανισμούς άμυνας για να ξεπεραστεί αυτό λιπίδιο, συμπεριλαμβανομένης της μείωσης της παραγωγής ή /και ενισχυμένη κάθαρση, ή αυξημένη παραγωγή της καταπολέμηση των λιπιδίων προ-επιβίωσης, σφιγγοσίνης-1-φωσφορικής (S1P). Αυτοί οι μηχανισμοί άμυνας επίσης μπορεί να συνεισφέρει στην αντίσταση σφιγγολιπίδιο μεσολάβηση φαρμάκου [10], [11]. Κατά συνέπεια, φαρμακευτικές θεραπείες που στοχεύουν σφιγγολιπίδιο μεταβολισμού, συμπεριλαμβανομένων υπερπαραγωγή κηραμιδίου για να σκοτώσει τα καρκινικά κύτταρα ή να μειώσει την αγγειογένεση, αντιπροσωπεύουν ελκυστική προσεγγίσεις για τη θεραπεία του καρκίνου. Πολλές από αυτές τις νέες σφιγγολιπίδιο φαρμακευτικές θεραπείες έχουν αξιολογηθεί σε κυτταρική καλλιέργεια ή /και ζωικά μοντέλα, και επικεντρώνονται στην άμεση διανομή των μη φυσιολογικών ceramides [12] σε όγκους, ή χορήγηση αναστολέων των ceramidases ή τις κινάσες σφιγγοσίνης υπεύθυνη για τη σύνθεση του S1P [13]. Δεδομένου rhASM είναι α) λαμβάνεται επιλεκτικά από το ήπαρ μετά από συστηματική χορήγηση, β) πολύ αποτελεσματικό στην παραγωγή κηραμιδίου, και γ) διατίθεται σε ένα σκεύασμα κλινικού βαθμού, εστιάσαμε στη διερεύνηση των δυνατοτήτων των rhASM ως ένα ανοσοενισχυτικό σε θεραπεία sorafenib σε πειραματικές ήπατος του καρκίνου.

Προηγουμένως, δείξαμε ότι rhASM σε συνδυασμό με ακτινοβολία είχε μια βαθιά επίδραση στην μελάνωμα

in vivo.

για να ανακεφαλαιώσουμε αυτό το φαινόμενο

in vitro

τα μέσα που απαιτούνται για να οξυνίστηκε (ρΗ 6.5), μια κατάσταση που μιμείται το μικροπεριβάλλον του όγκου και ευνοεί δραστηριότητα ASM [14]. Επίσης έδειξε ότι rhASM μόνη της (1 μΜ) δεν είχε καμία αναπαραγώγιμη επίδραση επί της βιωσιμότητας των κυτταρικών σειρών 60 του καρκίνου που περιλαμβάνει λευχαιμία, μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, του παχέος εντέρου, του ΚΝΣ, μελανώματος, ωοθήκης, νεφρικό, προστάτη και του μαστού όγκων, προτείνοντας ότι το

in vivo

μικροπεριβάλλον του όγκου ήταν σημαντικό για τις παρατηρούμενες επιπτώσεις [15], [16].

Λαμβάνοντας υπόψη την ηπατοτρόπος φύση της rhASM, υποθέσαμε ότι ο καρκίνος του ήπατος μπορεί να είναι ένα κατάλληλο μοντέλο στο οποίο στην επόμενη δοκιμή η αποτελεσματικότητα των rhASM ως ανοσοενισχυτικό με το πρότυπο της θεραπείας με sorafenib φροντίδας. Εδώ, έχουμε αποδείξει ότι η θεραπεία συνδυασμού με υψηλή δόση rhASM (25 mg /kg κάθε τρεις ημέρες (q.72 h), ενδοπεριτοναϊκά (ΙΡ)) και sorafenib (30 mg /kg κάθε ημέρα (qd), καθετηριασμό) μειώνει τον όγκο του όγκου του Huh7 υποδόρια ξενομοσχεύματα

in vivo

, μειώνει την πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων, και έχει ως αποτέλεσμα αυξημένη νέκρωση στους όγκους. Αυτά τα αποτελέσματα ελήφθησαν παρά περιορισμένη διανομή του ενζύμου στους υποδόριους όγκους. Η θεραπεία συνδυασμού ήταν καλά ανεκτή σε BALB /C ποντικούς χωρίς θανάτους που συνδέονται θεραπεία, χωρίς απώλεια βάρους, και με φυσιολογική ηπατική λειτουργία. Διαπιστώσαμε επίσης ένα ορθοτοπικό μοντέλο όγκων Huh7 σε ήπατα από SCID /μπεζ ποντίκια, και αναπάντεχα βρεθεί παρομοίως κακή παράδοση rhASM να αυτών των όγκων σε σχέση με υγιές ήπαρ. Περαιτέρω έρευνα πρότεινε ότι η χαμηλή έκφραση του μαννόζη υποδοχέων σε όγκους Huh7 μπορεί να εξηγήσει εν μέρει το φαινόμενο αυτό.

Αποτελέσματα

Απελευθέρωση των σφιγγολιπιδίων σηματοδότησης σε ανθρώπινο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα

Η σύγκριση της κανονικής συκώτια να ηπατοκυτταρικού καρκινώματος, χρησιμοποιώντας τέσσερις ανεξάρτητες σειρές δειγμάτων διαθέσιμα στη βάση δεδομένων Oncomine, αποκάλυψαν σημαντικά μειωμένα επίπεδα ASM (

SMPD1

) και S1 Ρ φωσφατάση έκφραση mRNA (

SGPP1

) (Πίνακας 1). Η

SMPD1

γονίδιο κατατάσσεται μεταξύ των κορυφαίων 1, 9, 17 και 11% των καταπιεσμένων γονιδίων στο Mas [17], Chen [18], Wurmbach [19], και Roessler ήπατος 2 σύνολα δεδομένων [20]. Ομοίως, η

SGPP1

γονίδιο κατετάγη στο top 4, 5 και 7% καταπιεσμένη γονίδια σε 3 από τα 4 σύνολα δεδομένων [17], [18], [19]. S1P είναι ένα ιδιαίτερα βιοδραστικό σφιγγολιπίδιο που προάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων [11], και S1 Ρ φωσφατάση είναι το ένζυμο που απαιτείται για να υδρολυθεί η φωσφορική ομάδα από S1 Ρ (Σχήμα 1Α). Καταστολή αυτών των δύο γονιδίων, συνεπώς /ένζυμα θα ευνοούσε χαμηλή κεραμίδιο και τα υψηλά επίπεδα S1P, πιθανόν οδηγώντας σε κυτταρικό πολλαπλασιασμό και /ή αντίσταση φαρμάκου.

(Α) ASM κινεί την παραγωγή των προ-αποπτωτικών κεραμίδιο μέσα από την υδρόλυση του σφιγγομυελίνη, το οποίο μετατρέπεται σε σφιγγοσίνη με ceramidases όπως οξύ κηραμιδάσης (AC). Σφιγγοσίνης κινάση 1 (SPHK1) τότε φωσφορυλιώνει σφιγγοσίνη να σφιγγοσίνης 1 φωσφορικού (S1P), το οποίο μετατρέπεται πίσω σε σφιγγοσινο με S1 Ρ-φωσφατάση (SGPP1) ή μεταβολίζεται από S1 Ρ λυάση 1 (SGPL1). (Β) Δραστηριότητα του ASM σε κύτταρα Hep3B ήταν σημαντικά υψηλότερη (ANOVA, df (2,6), F = 48.49, p & lt? 0.001) από ό, τι σε Huh7 (κατά Tukey τεστ post hoc p & lt? 0.001, **) και τα κύτταρα HepG2 (κατά Tukey post hoc test p & lt? 0.001). AC ήταν παρόμοιο σε όλες τις κυτταρικές σειρές, αλλά τα κύτταρα HepG2 είχαν σημαντικά υψηλότερη ενεργότητα SPHK1 (ANOVA, df (2,6), F = 8.68, ρ = 0.017, *) από Huh7 (δοκιμή Tukey post hoc, το p = 0,041) και Hep3B (δοκιμασία του Tukey post hoc, p = 0,019). κύτταρα (C) Huh7 επιλέχθηκαν για περαιτέρω μελέτες και τη βιωσιμότητά τους δοκιμάστηκαν σε ρΗ 6,5 (βλέπε μεθόδους) παρουσία 500 μg /mL rhASM, 3 μΜ sorafenib, ή τον συνδυασμό rhASM και sorafenib στις 48 ώρες. Sorafenib (δοκιμασία post hoc p & lt του Dunnett? 0.001, **) και σε συνδυασμό rhASM /sorafenib (του Dunnett τεστ post hoc p & lt? 0.001, **) αντιμετωπίζονται κύτταρα είχαν σημαντικά χαμηλότερη βιωσιμότητα από τα κύτταρα ελέγχου (ANOVA, df (3,38), F = 26.47, p & lt? 0.001). rhASM δεν ήταν σημαντικά διαφορετική από τον έλεγχο (ρ = 0.118). Ο συνδυασμός rhASM και sorafenib εμφάνισαν σημαντικά χαμηλότερη βιωσιμότητα σε σύγκριση με το sorafenib μόνο (t-test, 1 όψης, * ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt? 0.001).

Η

Επιλογή ενός ανθρώπου ηπατώματος κυτταρική γραμμή και

in vitro

επίδραση της rhASM στον πολλαπλασιασμό

στη συνέχεια ερευνήσαμε τις βάσης δραστηριότητες των τριών βασικών ενζύμων που εμπλέκονται στο μεταβολισμό σφιγγολιπίδιο – ASM, οξύ κηραμιδάσης (AC), και σφιγγοσίνης κινάσης 1 (SPHK1) – σε τρεις συνήθως χρησιμοποιούνται κυτταρικές σειρές ανθρώπινου ηπατώματος: HepG2, Huh7 και Hep3B. κύτταρα Hep3B είχε την υψηλότερη δραστικότητα βασικής γραμμής ASM, ενώ η δραστηριότητα SPHK1 ήταν υψηλότερη σε κύτταρα HepG2 (Εικόνα 1Β). Και οι τρεις κύτταρα είχαν συγκρίσιμη δραστηριότητα AC. Με βάση αυτά τα αποτελέσματα επιλέξαμε κύτταρα Huh7 για περαιτέρω πειράματα δεδομένου ότι οι βασικές δραστηριότητες ήταν μέτρια και μεταξύ αυτών των HepG2 και Hep3B. Επιπλέον, Huh7 ξενομοσχεύματα υποδόρια ποντίκι είναι ένα καλά καθιερωμένο μοντέλο χρησιμοποιείται για την εκτίμηση ποικίλες πειραματικές θεραπείες φαρμάκου για HCC [21], [22], [23]. Η επίδραση της rhASM διερευνήθηκε σε κύτταρα Huh7 με προ-επεξεργασία (2 ώρες) με την rhASM σε ένα οξινισμένο μέσον (6.5) – μιμείται το μικροπεριβάλλον του όγκου pH – ακολουθούμενη από επώαση επί 46 ώρες σε ρΗ 7,4. Καμία σημαντική επίδραση της θεραπείας rhASM μόνος παρατηρήθηκε στην βιωσιμότητα των κυττάρων κατά τη διάρκεια των Huh7 48 ωρών, όπως παρατηρήθηκε προηγουμένως στα κύτταρα μελανώματος [14]. Σε αντίθεση, το sorafenib οδήγησε σε σημαντική μείωση του πολλαπλασιασμού, η οποία ήταν σημαντικά αυξημένη σε κύτταρα που εκτέθηκαν σε συνδυασμό /sorafenib rhASM (Σχήμα 1 C). Αυτά τα δεδομένα υποστήριξαν περαιτέρω την ιδέα ότι rhASM μόνο έχει μικρή επίδραση στα κύτταρα του όγκου, και μπορεί να είναι χρήσιμη ως επικουρική θεραπεία στο sorafenib [14].

Μειωμένος όγκος του όγκου και αυξημένη επιβίωση σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με rhASM και sorafenib

στη συνέχεια, μελετήσαμε τα αποτελέσματα της θεραπείας συνδυασμού /sorafenib rhASM

in vivo

χρησιμοποιώντας Huh7 υποδόριου ξενομοσχεύματος όγκων σε ποντίκια. Τα ζώα χωρίστηκαν τυχαία σε 4 ομάδες που έλαβαν θεραπεία με sorafenib (n = 10), rhASM (n = 13), rhASM /sorafenib (n = 14), ή όχημα (n = 9). Όπως και στις

in vitro

πειράματα, θεραπεία rhASM μόνο δεν είχε ευεργετική επίδραση

in vivo

(διάμεση επιβίωση 10 ημέρες, ο όγκος του όγκου 925 ± 80 mm

3 κατά την ημέρα 11) (δεδομένα δεν φαίνεται). Ωστόσο, σε σύγκριση με το όχημα, σημαντικά χαμηλότερη αύξηση των όγκων μετρήθηκε στην ομάδα rhASM /sorafenib στις ημέρες 8 και 11. Επίσης, κατά την ημέρα 11 της μείωσης του όγκου του όγκου παρατηρήθηκε στην ομάδα συνδυασμού ήταν σημαντικά χαμηλότερα από ό, τι στα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με sorafenib μόνο ( Σχήμα 2Α). Η επιβίωση των ποντικών ήταν σημαντικά μεγαλύτερη τόσο στην sorafenib (13 ημέρες) και ποντίκια συνδυασμός αγωγή (19 ημέρες) σε σύγκριση με το όχημα (11 ημέρες) (Σχήμα 2Β). Αν και υπήρχε μια τάση προς βελτίωση, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές επιβίωσης μεταξύ των δύο ομάδων θεραπείας. Αξίζει να σημειωθεί, ωστόσο, δύο ζώα στην ομάδα συνδυασμού /sorafenib rhASM είχαν όγκους & lt? 1.000 χιλιοστά

3 και επέζησε πέρα ​​από τις 5 εβδομάδες. Αυτά τα ποντίκια θυσιάστηκαν κατά την ημέρα 43 και οι όγκοι του όγκου τους παρέμεινε σχετικά σταθερό (132 mm

3 (ποντίκι ID # 452) και 267 mm

3 (ποντίκι ID # 443) κατά τη στιγμή της θυσίας.

(Α) Ο μέσος όγκος του όγκου των ποντικών που έλαβαν θεραπεία με rhASM και sorafenib ήταν σημαντικά μικρότερη από εκείνη των ποντικών ελέγχου την ημέρα 8 (post-hoc test ρ του Dunnett = 0.035? ANOVA DF (2,30), F = 3.24, p = 0,053) κατά την ημέρα 11 και sorafenib (του Dunnett post hoc test p = 0,034) και σε συνδυασμό rhASM και sorafenib (Dunnett του τεστ post hoc p & lt? 0.001) αντιμετωπίζονται ποντίκια είχαν μικρότερους όγκους από τα ποντίκια ελέγχου (ANOVA, df (2,27)., F = 12,22, p & lt?.. 0.001) Η ομάδα συνδυασμού /sorafenib rhASM είχαν επίσης σημαντικά μικρότερους όγκους από την ομάδα του sorafenib κατά την ημέρα 11 (t = 2.32, df (20), p = 0,031) (Β) σημαντικά μεγαλύτερη μέση επιβίωση ( 13 ημέρες) των ποντικών που έλαβαν sorafenib (chi-square 5.02, df (1), p = 0,025) και σε συνδυασμό ποντίκια που έλαβαν θεραπεία /sorafenib rhASM (19 ημέρες) (chi-square 14,57, df (1), p & lt? 0.001) παρατηρήθηκε σε σύγκριση με τον έλεγχο (11 ημέρες). Δύο ποντίκια στην ομάδα /sorafenib rhASM έζησε πέρα ​​από την περίοδο μελέτης 5 εβδομάδα, και τελικά θυσιάστηκαν κατά την ημέρα 43 (όγκος όγκου 132 mm

3, 267 mm

3). *, # P & lt? 0,05, ** p & lt?. 0.001

Η

Μειωμένη πολλαπλασιασμό και την πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων και την αύξηση του κυτταρικού θανάτου σε όγκους από τα ποντίκια έλαβαν /sorafenib σε συνδυασμό rhASM

Στο μοριακό επίπεδο, ο αριθμός των κυττάρων θετικών για το δείκτη πολλαπλασιασμού Ki67 μειώθηκε σημαντικά τόσο στο sorafenib και ομάδες rhASM θεραπεία /sorafenib σε παρόμοια έκταση (Σχήμα 3Α). Ωστόσο, νέκρωση ήταν σημαντικά αυξημένη στη συνδυασμένη rhASM αγωγή /sorafenib ποντίκια (Σχήμα 3Β). Για να διερευνηθεί περαιτέρω το συμπέρασμα αυτό, εξετάσαμε έπειτα αγγείωση των όγκων. Ο αριθμός των αιμοφόρων αγγείων χρωματίστηκαν με αντι-αSMA ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε όγκους από τα δύο sorafenib (6,9 ± 0,5) και rhASM /sorafenib (5,5 ± 0,4) ποντικούς που υπέστησαν αγωγή σε σύγκριση με τον έλεγχο (9 ± 0.6). Είναι σημαντικό ότι, ο αριθμός των αντι-αSMA αιμοφόρα θετικό αίμα ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε rhASM /sorafenib ό, τι σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή sorafenib (ρ & lt? 0.001). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν με αντι-CD34 χρώση, όπου rhASM /sorafenib (5,3 ± 0,4) ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ό, τι sorafenib μόνο (7,5 ± 0,4), και τα δύο ήταν χαμηλότερες από τον έλεγχο (11,6 ± 0,9). Τόσο αντι-αSMA και αντι-CD34 που επιτρέπεται για επιλεκτική χρώση των αιμοφόρων αγγείων σε τομές όγκων ενσωματωμένα σε παραφίνη, όπως απεικονίζεται στα σχήματα 3 E, F. Οι /ποντίκια sorafenib μακράς επιβιώνουν rhASM (ID # 452 και # 443 ID) ήταν εντός του εύρους των μετρήσεων για την ομάδα συνδυασμού χρησιμοποιώντας μία από τις δοκιμασίες παραπάνω.

(Α) μέσος αριθμός Κί67 θετικών κυττάρων στο όγκους από τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με sorafenib (του Dunnett post-hoc p & lt? 0.005) και με συνδυασμό /sorafenib rhASM (του Dunnett post-hoc p & lt? 0.001) ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ό, τι οχήματος (ANOVA df (2,30), F = 14,63, p & lt? 0.001). Καμία σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ χρώση Ki67 σε όγκους από sorafenib και rhASM ποντικών που υπέστησαν αγωγή /sorafenib (t = 1.19, df 22, p = 0,249). (Β) Η νέκρωση ήταν σημαντικά αυξημένη (ANOVA, df (2,30), F = 3.66, p = 0.038) σε ποντίκια με αγωγή /sorafenib rhASM (του Dunnett post hoc & gt? Ελέγχου, p = 0,043) σε σύγκριση με τα ποντίκια που έλαβαν φορέα, ενώ ποντίκια που έλαβαν θεραπεία sorafenib δεν ήταν διαφορετικά από τον έλεγχο (του Dunnett post hoc & gt? ελέγχου, p = 0.760). Νέκρωση σε rhASM ποντικούς που υπέστησαν αγωγή /sorafenib ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από ό, τι στα ποντίκια που έλαβαν μόνο sorafenib (t = -2.39, df (22), ρ = 0,26). (Γ) Αντι-αSMA χρώση αιμοφόρων αγγείων αποκάλυψε ένα σημαντικά χαμηλότερο αριθμό σκαφών (ANOVA df (2,30), F = 12,57, p & lt? 0.005) στο sorafenib (δοκιμασία post hoc p του Dunnett = 0.020) και τα ποντίκια έλαβαν /sorafenib rhASM (δοκιμασία post hoc σ του Dunnett & lt? 0.001). Η ομάδα /sorafenib rhASM είχαν επίσης σημαντικά λιγότερο αSMA αιμοφόρα αγγεία από την ομάδα sorafenib (t = 2.25, df (22), p = 0,031). χρώση αιμοφόρων αγγείων (D) αντι-CD34 επιβεβαίωσε τα αποτελέσματα αSMA, που δείχνει ένα σημαντικά χαμηλότερο αριθμό σκαφών (ANOVA df (2,30), F = 32,07, p & lt? 0.001) στο sorafenib (του Dunnett τεστ post hoc p & lt? 0.001) και ποντίκια που έλαβαν θεραπεία /sorafenib rhASM (του Dunnett τεστ post hoc p & lt? 0.001). Η συνδυασμένη ομάδα /sorafenib rhASM είχαν σημαντικά λιγότερο CD-34 θετικά τα αιμοφόρα αγγεία από την ομάδα sorafenib (t = 3.56, df (22), p = 0,002). Επιλεκτική χρώση των αιμοφόρων αγγείων σε τομές όγκων τομές παραφίνης χρωματίστηκαν δείχνεται με αντι αSMA (Ε) και δείκτες αντι-CD34 (F). * Ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt?. 0.001

Η

Η ανάλυση των επιπέδων κεραμιδιού σε όγκους, η οποία έδειξε καμία διαφορά μεταξύ των ομάδων (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), έγινε ως μέτρηση του αποτελέσματος κατά την ολοκλήρωση της μελέτης (έως 48 ώρες μετά την τελευταία ένεση). Δεδομένου ότι η ανύψωση του κεραμιδιού στα κύτταρα σε απόκριση σε ASM είναι ταχεία και μπορεί να επιστρέψει στην βασική γραμμή μέσα σε λίγα λεπτά, εξετάσαμε νέκρωσης όγκου και της πυκνότητας των αιμοφόρων αγγείων (παραπάνω) ως υποκατάστατοι δείκτες για τις βιολογικές επιδράσεις της θεραπείας. Από τη στιγμή που παρατηρείται μια μείωση στον όγκο του όγκου, αύξηση στην νέκρωση, και μείωση στην πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων στην ομάδα /sorafenib rhASM, δεν είχαμε μετρήσει τα επίπεδα άλλων σφιγγολιπίδιο μεταβολιτών όπως S1P. Σε γενικές γραμμές, ωστόσο, είναι σαφές από τα δεδομένα μας ότι η κυρίαρχη επίδραση της θεραπείας συνδυασμού rhASM ήταν κυτταρικό θάνατο, και έτσι οποιαδήποτε κατάντη S1P που μπορεί να έχουν παραχθεί δεν εμπόδισε αυτές /μεταβολές sorafenib επαγόμενη rhASM.

μέτρια κατανομή των rhASM στον υποδόριο όγκους σε σύγκριση με υγιές ήπαρ

Τα παραπάνω στοιχεία έδειξαν μια θετική, αν και μέτρια, επίδραση της συνδυασμένης θεραπείας /sorafenib rhASM σε αυτό το υποδόριο μοντέλο Huh7 ηπατοκυτταρικού καρκινώματος. Για να εξεταστεί η βιοκατανομή του ενζύμου στους όγκους, μετρήσαμε δραστηριότητα ASM στο τέλος της μελέτης. Κάθε ζώο έλαβε την τελευταία ένεση rhASM 1, 24 ή 48 ώρες πριν από τη θανάτωση, σύμφωνα με δοσολογικό σχήμα του ατόμου ζώου. Δεν εμφανείς διαφορές στη δραστηριότητα ASM παρατηρήθηκαν σε σχέση με το χρόνο περίμενε μετά την τελευταία ένεση rhASM. Όπως αναμενόταν, η δραστικότητα ASM ήταν σημαντικά υψηλότερη σε εκχυλίσματα όγκων από τα ποντίκια έλαβαν /sorafenib rhASM σε σύγκριση με το sorafenib μόνο του (Σχήμα 4Α). Ωστόσο, η δραστηριότητα ASM στα υγιή ήπατα των ποντικών αυτών ήταν & gt? 12 φορές ότι στο υποδόριων όγκων (Σχήμα 4Β). Έτσι, μέτρια βιοκατανομή rhASM στους υποδόριους όγκους μπορεί να εξηγήσει την μικρή αποτελεσματικότητα της θεραπείας συνδυασμού σε αυτό το μοντέλο.

(Α) δραστηριότητα ASM σε εκχυλίσματα όγκων του rhASM ποντικών που υπέστησαν αγωγή /sorafenib ήταν σημαντικά υψηλότερο (ANOVA, df (2,30), F = 22,58, p & lt? 0.001? του Dunnett δοκιμασία post hoc p & lt? 0.001) από τον έλεγχο, ενώ sorafenib δεν είχε καμία επίδραση στη δραστηριότητα βασική ASM. (Β) δραστηριότητα ASM στο ήπαρ εκχυλίσματα των ποντικών που έλαβαν /sorafenib rhASM ήταν επίσης υψηλότερη από ό, τι τα ποντίκια που έλαβαν φορέα (ANOVA, df (2,30), F = 11,17, p & lt? 0.001? Του Dunnett δοκιμασία post hoc p & lt? 0.001) και sorafenib δεν είχε καμία επίδραση στη δραστηριότητα βασική ASM. Αξίζει να σημειωθεί ότι τα ζώα στην ομάδα θεραπείας συνδυασμού είχε & gt? 12 φορές υψηλότερη δραστικότητα ASM σε ήπατα από σε όγκους, αποδεικνύοντας την ηπατοτρόπος φύση των rhASM κατά την διάρκεια χρόνιας χορήγησης και σχετικά μικρή διανομή στους υποδόριους όγκους. ** P & lt? 0.001. δραστικότητα Υ-άξονες (10

-6 mol /L /ώρα) μετρήθηκε σε ίσα μέρη των εκχυλισμάτων βάρος /όγκο ιστού 20% όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι

Η

Ασφάλεια: Σημείωση. rhASM /sorafenib θεραπείας συνδυασμού

στη δοκιμή φάσης Ι της ασφάλειας των rhASM σε ασθενείς με NPD τύπου Β, η υψηλότερη ασφαλής αρχική δόση προσδιορίστηκε να είναι 0,6 mg /kg [24]. Λόγω των πολύ υψηλών δόσεων rhASM που χρησιμοποιήθηκε στην τρέχουσα μελέτη (25 mg /kg q.72 h), εξετάσαμε την πιθανή τοξικότητα της θεραπείας συνδυασμού με παρακολούθηση των σωματικών βαρών την διάρκεια της μελέτης και με την εξέταση της λειτουργίας του ήπατος των ποντικών κατά το τέλος της θεραπείας. Τα βάρη κατά την έναρξη και κατά το τέλος της θεραπείας δεν ήταν σημαντικά διαφορετικές (Σχήμα S1A). Επιπλέον, δεν υπάρχει σημαντική διαφορά στην τρανσαμινάση της αλανίνης (ALT) παρατηρήθηκε είτε sorafenib ή rhASM ποντίκια που έλαβαν θεραπεία /sorafenib σύγκριση με το μάρτυρα (Εικόνα S1B). Δύο ζώα με υψηλές τιμές ακραία της ALT είχαν τσέπες των φλεγμονωδών κυττάρων (Εικόνα S1B) σε ένα κατά τα άλλα υγιές συκώτι, χωρίς σημάδια χρόνιου τραυματισμού (Σχήμα S1c). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η μακρόβια rhASM /sorafenib ID ποντίκια # 452 (ALT 52 U /L) και ID # 443 (ALT 53 U /L) δεν ήταν οι ακραίες τιμές. Ασπαρτική τρανσαμινάση (AST, Εικόνα S1D) και ολική χολερυθρίνη (Σχήμα S1E) επίσης δεν μεταβλήθηκαν σημαντικά από τη θεραπεία συνδυασμού. Μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι ο συνδυασμός του rhASM (25 mg /kg q.72 h) και sorafenib (30 mg /kg QD) είναι καλά ανεκτή.

Αξιολόγηση rhASM θεραπεία /sorafenib σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο Huh7 όγκους

τα παραπάνω θετικά αποτελέσματα της θεραπείας /sorafenib rhASM ελήφθησαν παρά την κακή βιοκατανομή rhASM να υποδόριων όγκων. Ως εκ τούτου, αιτιολογημένη ότι τα αποτελέσματα θα μπορούσαν να βελτιωθούν σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο της HCC. Για τη δημιουργία ενός τέτοιου μοντέλου, κύτταρα Huh7 σταθερώς εκφράζουν το γονίδιο αναφοράς λουσιφεράσης εγχύθηκαν στο ηπατικό παρέγχυμα του μπεζ ποντίκια SCID /. Τα ζώα απεικονίστηκαν 24 ώρες και 1 εβδομάδα μετά την επέμβαση, και παρακολουθούνται κάθε 4-5 ημέρες έως ότου παρατηρήθηκε διαρκής αύξηση φωταύγεια (Σχήμα 5Α). Αυτό έγινε για να διασφαλιστεί ότι τα κύτταρα επιβίωσαν της διαδικασίας εμφύτευσης και άρχισε να επεκτείνεται και να δημιουργήσουν όγκους. Όλοι οι ποντικοί είχαν ανιχνεύσιμο περιοχές φωταύγειας εντός της περιοχής του ήπατος κατά την έναρξη της θεραπείας, και σε μεγάλο βαθμό μεγενθυμένη περιοχές φωταύγειας στο τέλος της μελέτης. – Που αντιστοιχούν στους όγκους αυξάνεται στο ήπαρ (Σχήμα 5Β)

(Α ) μετά από χειρουργική ένεση λουσιφεράσης-επισημασμένα κύτταρα Huh7, φωταύγεια παρακολουθήθηκε συναρτήσει του χρόνου. Αύξηση φωταύγεια ≥6 φορές βασική γραμμή (ημέρα 1) χρησιμοποιήθηκε ως απόδειξη της επιτυχούς εμφύτευσης των κυττάρων, η έναρξη της ανάπτυξης του όγκου και ένα σημείο της τυχαιοποίησης των ποντικών σε ομάδες θεραπείας. (Β) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των ποντικών κατά την έναρξη της φαρμακευτικής αγωγής που δείχνει καλά ανιχνεύσιμη φωταύγειας από το ήπαρ (ένθετο α), μεγάλη περιοχή φωταύγειας που αντιστοιχεί στο ήπαρ Huh7 όγκου κατά τον χρόνο της θυσίας (ένθετα b, c). Ήπαρ και όγκου αποκόπηκαν και διαχωρίστηκαν (δ) για περαιτέρω επεξεργασία. Κλίμακα μπαρ στο ένθετο d είναι 1 εκ. (Γ) Σημαντικά πλέον μέση επιβίωση των ποντικών που έλαβαν sorafenib (n = 5, 42 ημέρες, chi-square 4.88, df (1), ρ = 0.027) και σε συνδυασμό rhASM ποντικών που υπέστησαν αγωγή /sorafenib (n = 5, 44 ημέρες, chi- τετράγωνο 4.43, df (1), ρ = 0,035) παρατηρήθηκε σε σύγκριση με τον έλεγχο (η = 4, 14 ημέρες). Καμία σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ rhASM μόνο (n = 4, 19 ημέρες) και ελέγχου ή μεταξύ sorafenib και rhASM /sorafenib. (D) δραστηριότητα rhASM σε ορθοτοπική HCC από το όχημα και τα ποντίκια έλαβαν sorafenib (αφελής στη θεραπεία rhASM? Βάσης rhASM) ήταν σημαντικά, 6,4 ± 1,4 φορές, κάτω από τις δραστηριότητές της rhASM σε όγκους από rhASM και τα ποντίκια έλαβαν /sorafenib rhASM (t = -3,99 , df (15), ρ = 0,001). Ομοίως, βασική rhASM στο ήπαρ ήταν σημαντικά χαμηλότερο, 13,6 ± 1,6 φορές, από τις δραστηριότητες της rhASM σε ήπατα των ποντικών που έλαβαν rhASM ή rhASM /sorafenib (t = -9.07, df (14), p = 3,1 · 10

– 7). Σημαντικά, η διαφορά μεταξύ της δραστηριότητας του rhASM σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή (rhASM και rhASM /sorafenib) μεταξύ ορθοτοπική HCC και το ήπαρ ήταν πολύ υψηλότερο στο ήπαρ, 20,8 ± 2,4 φορές (t = -8,7, df (13), ρ = 8,8 · 10

-7, **). Σημείωση:. Δραστηριότητα Υ-άξονες (10

-6 mol /L /ώρα) μετρήθηκε σε ίσα μέρη των εκχυλισμάτων βάρος /όγκο ιστού 20% όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι

Η

τυχαιοποίηση και την έναρξη της θεραπείας διεξήχθησαν όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Ποντικοί που έλαβαν το συνδυασμό /sorafenib rhASM ξεκίνησαν με το ίδιο χρονοδιάγραμμα δόσης και κατεργασία όπως στο υποδόριο μοντέλο – 30 mg /kg sorafenib q.d. με καθετηριασμό και 25 mg /kg rhASM q.72 ώρες ε.π. Αν και δεν ήταν σε θέση να προσδιορίσει ποσοτικά με ακρίβεια το μέγεθος του όγκου με την πάροδο του χρόνου φωταύγειας (πιθανόν λόγω του μικρού αριθμού των ζώων και η κινητική της ενεργοποίησης λουσιφερίνης εντός όγκους), δεν υπήρχε εμφανής οροπέδιο της φωταύγειας στους ποντικούς που υπέστησαν αγωγή. Ως εκ τούτου, η συχνότητα της χορήγησης rhASM αυξήθηκε (2-ημερών-on, 1-ημέρα-off) 2 εβδομάδες στη μελέτη, σε μια προσπάθεια να μετριάσουν πιθανή υπο-δοσολογίας των rhASM.

Τα προφίλ επιβίωση του αγωγή ποντικούς ήταν παρόμοια με εκείνα που παρατηρήθηκαν στο υποδόριο μοντέλο, δηλαδή χωρίς σημαντική διαφορά μεταξύ του sorafenib μόνο και ομάδες συνδυασμό /sorafenib rhASM (Σχήμα 5C). Αναπάντεχα, όμως, η δραστηριότητα ASM στα υγιή ήπατα των επεξεργασμένων ποντικών ήταν αρκετές φορές μεγαλύτερη από ό, τι στις ορθοτοπική όγκους Huh7 από τα ίδια ζώα. Αυτό είναι παρόμοιο με τα αποτελέσματα από τις υποδόριους όγκους (Σχήμα 4Β), δεικνύοντας ότι η κακή βιοκατανομή rhASM σε όγκους Huh7 ήταν ανεξάρτητη από τη θέση ξενομοσχεύματος.

Λόγω του προφίλ δραστικότητας παρόμοιο ASM στα δύο διαφορετικά μοντέλα εμείς επόμενη διερεύνησαν την έκφραση δύο υποδοχέων σημαντική στην κυτταρική εσωτερίκευση του rhASM – ινσουλίνη αυξητικού παράγοντα του υποδοχέα 2 (IGF2R) και υποδοχέα μαννόζης 1 (MRC1) – σε HCC. Ανάλυση του Oncomine βάσης δεδομένων έδειξε ότι η έκφραση του

IGF2R

δεν απελευθερωθεί με συνέπεια μεταξύ των 4 διαφορετικά σύνολα δεδομένων ανθρώπινου HCC, ενώ η έκφραση του

MRC1

ήταν κάτω-ρυθμίζονται στο 3/4 σύνολα δεδομένων (γονίδιο τάξεις: top 11, 2, και 5%). (Πίνακας 2)

η

Για το λόγο αυτό διερευνήθηκε η έκφραση του

MRC1 /MRC1

στο συκώτι και ορθοτοπική όγκους Huh7. Δύο διαφορετικές ομάδες εκκινητών PCR σχεδιάστηκαν για να εκτιμηθεί η έκφραση της ανθρώπινης και ποντικού

MRC1

και

MRC1

, αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα (Πίνακας 3) αποκάλυψαν καμία ανιχνεύσιμη έκφραση του

MRC1

σε ανθρώπινα κύτταρα Huh7 ή τα ορθοτοπική όγκους Huh7. Η έκφραση ανιχνεύθηκε σε υγιή ανθρώπινο ήπαρ ως θετικός έλεγχος. Η έκφραση του ποντικιού

MRC1

ήταν ανιχνεύσιμο στο ήπαρ μη-όγκου και στους όγκους Huh7. Η τελευταία είναι σύμφωνη με τον οικοδεσπότη-μόσχευμα «μόλυνση», η οποία έχει τεκμηριωθεί πριν [25]. Δεδομένου ότι η C

παρατηρήθηκαν τιμές Τ -21 τόσο για

MRC1

και το

Srsf4

γονίδιο καθαριότητας στο ήπαρ ποντικού και ~ 25 για

MRC1

και

Srsf4

σε όγκους του ήπατος Huh7, η έκφραση του

MRC1

στους όγκους φαίνεται να είναι περίπου 10 φορές μικρότερη.

Srsf4

χρησιμοποιήθηκε ως γονίδιο καθαριότητας με βάση την σταθερή έκφραση κατά τα διάφορα στάδια της ανάπτυξης ΗΚΚ [26]. Συνολικά, τα αποτελέσματα αυτά αποκαλύπτουν πολύ χαμηλή

MRC1

έκφραση σε Huh7 κύτταρα /όγκοι ήταν συνεπής με τη χαμηλή δραστηριότητα ASM παρατηρήθηκε σε όγκους ξενομοσχεύματος μετά τη θεραπεία.

Η

Συζήτηση

Αλλαγές στα λιπίδια της μεμβράνης των καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των γλυκοσφιγγολιπιδίων, έχουν αναγνωριστεί περισσότερα από 40 χρόνια [27]. Από τότε, οι δομικές ρόλοι των σφιγγολιπιδίων επεκτάθηκε για να συμπεριλάβει ένα περίπλοκο δίκτυο των βιοδραστικών λιπιδίων με διαφορετικούς ρόλους σε πολλές κυτταρικές διαδικασίες, συμπεριλαμβανομένων κυτταρικού θανάτου και επιβίωσης. Σήμερα, οι σημαντικούς ρόλους των δύο αυτών των λιπιδίων, κεραμίδιο και S1 Ρ, έχουν καθιερωθεί στον καρκίνο. Η εστίαση στην ceramides και S1P για τη θεραπεία του καρκίνου βρίσκεται σε καλή θέση, δεδομένου διατήρηση της σωστής ισορροπίας του κεραμιδιού /S1P είναι κρίσιμη για τον καθορισμό της κυτταρικής τύχης, και αλλαγμένη σφιγγολιπίδιο μεταβολισμό είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό πολλών μορφών καρκίνου, οδηγώντας σε μείωση της κεραμιδιού ή /και την ανύψωση του S1P [10]. Έτσι, οι σφιγγολιπίδιο φάρμακα υπό ανάπτυξη με στόχο την αποκατάσταση αυτή μεταβολική ισορροπία και /ή ενίσχυση κεραμιδιού μεσολάβηση θάνατο των καρκινικών κυττάρων ή μικροκυκλοφορίας του όγκου [10], [11]. Αρκετές θεραπείες που βασίζονται είτε ανυψώνοντας κεραμίδιο προ-θανάτου ή μειώνοντας S1P προ-επιβίωσης είναι ενεργά υπό έρευνα, συμπεριλαμβανομένης της χρήσης των αναλόγων κεραμίδιο και αναστολείς κινασών ceramidases ή σφιγγοσίνη [28]. Κατά την τελευταία δεκαετία πολυάριθμες εργασίες έχουν αποσαφηνίσει τους ρόλους των κεραμιδιού, και ASM ειδικότερα, στο κελί σηματοδότηση και το δυναμικό της διαμόρφωσης αυτής της οδού στη θεραπεία του καρκίνου [14], [29], [30]. Kolesnick και οι συνεργάτες του ήταν ο πρώτος που δείχνουν ότι η λυσοσωμικού ενζύμου, ASM, μπορεί να έχει ένα ρόλο σε αυτές τις διαδικασίες, και κατέδειξε τη σημασία της ASM που δημιουργείται κεραμιδιού στο ακτινοευαισθησία των καρκινικών κυττάρων και μικροαγγειακού όγκου [31].

Εδώ, θα φέρει την προσοχή σε μια πιθανή εφαρμογή της διαφοροποίησης σφιγγολιπίδιο σε πειραματικά HCC χρησιμοποιώντας rhASM, το οποίο έχει παραχθεί για ανθρώπινη χρήση και να αξιολογηθούν για θεραπεία ενζυμικής υποκατάστασης σε ασθενείς Β NPD Τύπος. HCC είναι μια ιδιαίτερα θανατηφόρα στερεό κακοήθεια με μια αυξανόμενη παγκόσμια επίπτωση και τη θνησιμότητα [32]. Εν μέρει, αντίξοες συνθήκες εκβάσεις σε ασθενείς HCC οφείλονται στην παθογένεση της νόσου, η οποία περιλαμβάνει την ανώμαλη ενεργοποίηση των μεγάλων μονοπάτια σηματοδότησης όπως RAF /MEK /ERK, ΡΙ3Κ /ΑΚΤ /mTOR, WNT /β-κατενίνης, IGF, HGF /γ-ΜΕΤ και την αγγειογένεση [2].