Αφηρημένο

Η υαλουρονάνη (ΗΑ), μια απλή μονάδα δισακχαρίτης, μπορεί να πολυμεριστεί και θεωρείται κύριο συστατικό της εξωκυττάριας μήτρας, η οποία έχει ένα ευρύ φάσμα βιολογικών λειτουργιών. Τα τελευταία χρόνια, ΗΑ που βρίσκεται στην επιφάνεια των καρκινικών κυττάρων. Σύμφωνα με προηγούμενες εκθέσεις, διαφέροντας περιεχόμενο ΗΑ στην κυτταρική επιφάνεια των καρκινικών κυττάρων είναι στενά συνδεδεμένη με μεταστάσεις στους λεμφαδένες, αλλά οι μηχανισμοί που μεσολαβούν τη διαδικασία αυτή παρέμενε ασαφής. Η έρευνα αυτή προορίζεται να μελετήσει το περιεχόμενο επιφάνεια του ΗΑ σε κύτταρα όγκου και ανάλυση των μεταβολών κόλλας κυττάρων που προκαλείται από την αλληλεπίδραση μεταξύ ΗΑ και λεμφικά ενδοθηλιακά υποδοχέα του (LYVE-1). Εμείς διαλογή και παρατηρήθηκε υψηλή περιεκτικότητα σε ΗΑ σε κύτταρα του μαστού HS-578T και χαμηλή περιεκτικότητα σε ΗΑ επί MCF-7 κυττάρων του μαστού μέσω αποκλεισμού σωματιδίων, ανοσοφθορισμό και κυτταρομετρία ροής πειράματα. Η έκφραση των LYVE-1, το ειδικό υποδοχέα ΗΑ λέμφου-σκάφος, συνάδει με την προηγούμενη έκθεσή μας και την ενίσχυση της πρόσφυσης των ΗΑ

high-HS-578T κύτταρα σε COS-7

LYVE-1 (+) μέσω ΗΑ στο κελί στατική πρόσφυση και δυναμικά πειράματα θάλαμο παράλληλης ροής πλάκα. MCF-7 κύτταρα μαστού περιέχουν λίγο ΗΑ στην επιφάνεια? Ωστόσο, τα αποτελέσματά μας έδειξαν μικρή διαφορά προσκόλληση μεταξύ MCF-7 κύτταρα και COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα. Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν όσον αφορά την προσκόλληση των κυττάρων HS-578T ή κύτταρα MCF-7 με SVEC4-10 κύτταρα. Επιπλέον, παρατηρήσαμε για πρώτη φορά ότι η περιεκτικότητα σε ΗΑ κυτταρική επιφάνεια των καρκινικών κυττάρων υψηλή μεταφορά ήταν πλούσια, και εμείς ορατή τη διασταυρούμενη σύνδεση των δομών καλωδίου ΗΑ, το οποίο μπορεί να ενεργοποιήσει LYVE-1 σε λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα, προάγοντας την προσκόλληση του όγκου. Εν ολίγοις, υψηλής χαμηλή περιεκτικότητα σε ΗΑ στην κυτταρική επιφάνεια των καρκινικών κυττάρων μέσω της αλληλεπίδρασης με LYVE-1 οδηγεί σε πρόσφυση διαφορές

Παράθεση:. Du Υ, Liu H, He Υ, Liu Υ, Yang C, Zhou M , et al. (2013) Η αλληλεπίδραση μεταξύ LYVE-1 με υαλουρονικό στην επιφάνεια των κυττάρων μπορεί να παίζουν ρόλο στην ποικιλομορφία της πρόσφυσης σε καρκινικά κύτταρα. PLoS ONE 8 (5): e63463. doi: 10.1371 /journal.pone.0063463

Επιμέλεια: Νίκος Κ Καραμάνος, Πανεπιστήμιο Πατρών, Ελλάδα |

Ελήφθη: 13 Ιανουαρίου, 2013? Αποδεκτές: 3 Απρίλη 2013? Δημοσιεύθηκε: May 22, 2013

Copyright: © 2013 Du et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από την Επιτροπή Σαγκάη Επιστήμης και Τεχνολογίας (No.10411950500), το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81071814, 81172027, 81272479) και το Πρόγραμμα της Σαγκάης Θέμα επικεφαλής ειδικού επιστήμονα (11XD1404000). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

εισβολή και μετάσταση είναι τα πιο σημαντικά βιολογικά χαρακτηριστικά των κακοηθών όγκων. προσκόλληση καρκινικών κυττάρων παίζει σημαντικό ρόλο στην εισβολή και μετάσταση όγκων, περιλαμβανομένης της συνδέσεως μεταξύ κυττάρων του όγκου τους και μεταξύ των κυττάρων του όγκου με άλλους τύπους κυττάρων. Η μεταφορά των καρκινικών κυττάρων περιλαμβάνει την πρόσφυση και διαχωρισμού (αποπολυμερισμού πρόσφυση). Στο αρχικό στάδιο της εισβολής όγκου, τα μεμονωμένα κύτταρα του όγκου να ρίξει από τον πρωτογενή όγκο λόγω της απώλειας του παράγοντα πρόσφυσης, η οποία παράγει το δυναμικό μεταφορά των καρκινικών κυττάρων. Κατά τη μεσαία βαθμίδα της εισβολής, τα καρκινικά κύτταρα που μεταφέρθηκαν στο σύστημα κυκλοφορίας προσκολλώνται στα αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα και της εξωκυττάριας μήτρας. Αυτή η διαδικασία περιλαμβάνει πολλούς παράγοντες προσκόλλησης και διάφορους άλλους παράγοντες που προωθούν ή χωριστές προσκόλληση όπως μόρια κυτταρικής προσκόλλησης (CD44, καδερίνη). Αυτή η μελέτη περιγράφει πρωτίστως προβλήματα στην προσκόλληση περιλαμβάνουν κύτταρα όγκου και της λέμφου ενδοθηλιακά κύτταρα.

Η υαλουρονάνη (ΗΑ) αποτελείται από μία γραμμική επανάληψη μονάδων δισακχαρίτη που αποτελείται από ϋ-γλυκουρονικό οξύ και Ν-ακετυλογλυκοζαμίνη και είναι το κύριο συστατικό του η εξωκυτταρική μήτρα. Υπό φυσιολογικές συνθήκες, το ΗΑ απαντά πρωτίστως στα συνδετικού ιστού με πολλές άλλες πρωτεΐνες για να σχηματίσουν ένα μεγάλο και περίπλοκο δίκτυο που διατηρεί το χώρο μεταξύ των κυττάρων, όπως το propria βλεννογόνου υμένα και την εξωτερική μεμβράνη γύρω από τα αιμοφόρα αγγεία κατά τη διανομή του δέρματος [1], [2 ]. Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι η ΗΑ επηρεάζει αγγειογένεση όγκου, μετάσταση και διεισδυτικότητα. In vivo μελέτες διαπίστωσαν ότι πριν από τη μετανάστευση, τα κύτταρα αυξημένη συγκέντρωση ΗΑ τους σε θέση εκκίνησής τους [3], [4]. Επιπλέον, το ΗΑ βρέθηκε να αυξάνει στην άκρη εισβολή των καρκινικών κυττάρων του μαστού [5], [6] και στο εξωκυτταρικό περιβάλλον [7], που αναδιοργανώνει τη μήτρα της διηθητικής καρκινικών κυττάρων. Ένας μεγάλος αριθμός πειραματικών αποτελεσμάτων έδειξαν ότι επιθετικούς όγκους περιέχουν υψηλά επίπεδα ΗΑ και ότι τα αυξημένα επίπεδα ΗΑ σε συμπαγείς όγκους έχουν σχέση με κακή διαφοροποίηση του όγκου και τη μείωση του ποσοστού επιβίωσης των ασθενών. Προηγούμενες μελέτες βρέθηκε ότι η αύξηση της ΗΑ που παράγεται από τα γύρω ινοβλάστες μετά από διέγερση με καρκινικά κύτταρα μαστού [8]. Ωστόσο, επεμβατική ίδιων των καρκινικών κυττάρων θα μπορούσε επίσης να συνθέσει ΗΑ στην επιφάνεια του κυττάρου. Πολλές μελέτες επικεντρώνονται στο συσχετισμό της ποσότητας του ΗΑ στην επιφάνεια των κυττάρων του όγκου σε μετάσταση του και έχουν βρει ότι η ικανότητα των καρκινικών κυττάρων να μεταφέρουν είχε σχέση με το περιεχόμενό τους επιφάνεια ΗΑ [9], [10]. Itano και οι συνεργάτες του [10] ενδοφλέβια ένεση κύτταρα του μαστού που παράγουν ΗΑ και των μεταλλαγμένων κυττάρων του μαστού που δεν θα μπορούσε να παράγει ΗΑ σε γυμνά ποντίκια. Βρήκαν ότι μεταλλαγμένων κλώνων εμφανίζονται σημαντικές μειώσεις στην μεταστατική ικανότητα σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα μετά από ενδοφλέβια (ί.ν.) ένεση σε συγγενή ποντίκια. Εκφράζοντας υαλουρονικό ποντίκι συνθάσης 1 (HAS1) με επιμόλυνση σε HAS

– κύτταρα ελαττωματικά δραστηριότητας υαλουρονικό συνθάσης διασωθεί σχηματισμό μήτρας υαλουρονικό καθώς και την παραγωγή υαλουρονάνη. Μετάσταση στους πνεύμονες μετά την ί.ν. ένεση HAS1 επιμολύνσεων επίσης ανακτήθηκε σημαντικά. Πολλές αναφορές έχουν επιβεβαιώσει ότι το περιεχόμενο ΗΑ στην επιφάνεια των κυττάρων του όγκου που σχετίζονται με την ταχύτητα μεταφοράς των κυττάρων [9], [10], [11]. Συγκεκριμένα, τα υψηλά επίπεδα της επιφάνειας HA προκαλούν καρκίνο κυττάρων να μεταφέρουν γρήγορα, και τα χαμηλά επίπεδα ΗΑ προκαλούν καρκινικά κύτταρα να μεταφέρει αργά.

υπάρχουσα βιβλιογραφία υποστηρίζει τη σχέση μεταξύ περιεκτικότητας ΗΑ στην επιφάνεια των κυττάρων του όγκου και του όγκου του λεμφικού μετάσταση. Ωστόσο, η ρύθμιση της προσκόλλησης των όγκων, λεμφικό μετάσταση, και την ταχύτητα μεταφοράς από κυτταρικής επιφάνειας ΗΑ παραμένει ασαφής. Μελέτες σχετικά με τη μεταφορά μέσω της οδού του αίματος έδειξαν ότι καρκινικά κύτταρα που συνδυάζονται με αγγειακή επιφάνεια-ειδική σύνθεση των ενδοθηλιακών κυττάρων προάγει την κύτταρο όγκου και η αγγειακή προσκόλληση των ενδοθηλιακών κυττάρων [12], [13]. Επιπλέον, ο ρυθμός μεταφοράς του όγκου και το ποσοστό πρόσφυσης θετικά σχετίζονται. Μελέτες έχουν επίσης βρεθεί ότι CD44, ένα ευρέως εκφραζόμενο ενδοθηλιακού υποδοχέα ΗΑ κυτταρικής επιφάνειας, επηρέασε την προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων και των λεμφοκυττάρων. Λεμφικού μελέτες πεδίου μετάστασης επιβεβαίωσε ότι τα υψηλά επίπεδα της επιφάνειας του ΗΑ σε κύτταρα μελανώματος ποντικού προωθούνται γρήγορη μεταφορά σε λεμφαδένες, και χαμηλά επίπεδα επιφάνειας του ΗΑ σε κύτταρα μελανώματος ποντικού συσχετίζεται με αργή μετάσταση στους λεμφαδένες [9]. Λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα έχουν ένα ειδικό υποδοχέα υαλουρονικού οξέος που ονομάζεται λεμφικού υποδοχέα ενδοθηλιακών κυττάρων υαλουρονικού οξέος 1 (LYVE-1) [14]. LYVE-1 υποτέθηκε ότι έχει ένα αποτέλεσμα που είναι παρόμοιο με CD44 επί των ενδοθηλιακών κυττάρων του αίματος, η οποία διευκολύνεται από την αλληλεπίδραση με την επιφάνεια των κυττάρων του όγκου ΗΑ και επιρροές προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων. Ωστόσο, ο μηχανισμός με τον οποίο επιφανείας κυττάρου όγκου το ΗΑ δρα επί LYVE-1 για να επηρεάσει την πρόσφυση και τη μεταφορά σε όγκο του λεμφικού μετάσταση παραμένει ασαφής.

Σε αυτή τη μελέτη, ο βιολογικός ρόλος της αλληλεπίδρασης μεταξύ LYVE-1 και του όγκου επιφάνεια ΗΑ κυττάρου σε προσκόλληση καρκινικών κυττάρων διερευνήθηκε. κύτταρα HS-578T που περιέχουν υψηλά ΗΑ στην επιφάνεια τους (ΗΑ

υψηλής HS-578T-) και MCF-7 κύτταρα που έχουν μικρή ΗΑ στην επιφάνεια επιλέχθηκαν (ΗΑ

χαμηλής MCF-7). 7 COS-κύτταρα επιμολυσμένα με LYVE-1 (COS-7

LYVE-1 (+)) και SVEC4-10 κύτταρα (μια κυτταρική σαν κυτταρική γραμμή λέμφος ενδοθηλιακής) χρησιμοποιήθηκαν ως μοντέλα για τη μελέτη της επίδρασης της προσκόλλησης μεταξύ LYVE -1 και καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν υψηλά ή χαμηλά επίπεδα του ΗΑ. κύτταρα HS-578T και τα κύτταρα MCF-7, όπως τα ανώτερα κύτταρα, ανεξάρτητα τηρούν την υποστοιβάδα των κυττάρων COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7 κύτταρα επιμολυσμένα με τον έλεγχο φορέα pEGFP-N1 (COS-7

LYVE-1 (-)) υπό στατικές και δυναμικές καταστάσεις. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το ΗΑ, που υπάρχει στην επιφάνεια των καρκινικών κυττάρων, με τη μεσολάβηση της προσκόλλησης των καρκινικών κυττάρων να COS-7

LYVE-1 (+) κύτταρα και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα. HA

high-HS-578T καρκινικά κύτταρα του μαστού είχαν μεγαλύτερη προσήλωση σε COS-7

LYVE-1 (+) από COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα μέσω της αλληλεπίδρασης μεταξύ του ΗΑ και του λεμφικού ενδοθηλίου ειδικού υποδοχέα υαλουρονικού οξέος κύτταρο LYVE-1. Επιπλέον, MCF-7 καρκινικά κύτταρα μαστού που στερούνται κυτταρική επιφάνεια ΗΑ ουσιαστικά δεν μπορεί να προσκολληθεί μέσω ΗΑ και LYVE-1 σύνδεση. Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν επίσης όσον αφορά την προσκόλληση των κυττάρων HS-578T ή κύτταρα MCF-7 με SVEC4-10 κύτταρα.

Αποτελέσματα

Οπτικοποίηση του Σχηματισμού περικυτταρική μήτρα της 6ης ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου μαστού

Το περιεχόμενο ΗΑ στα καρκινικά κύτταρα του μαστού διαφέρει σημαντικά? Ως εκ τούτου, το ΗΑ που υπάρχει στην επιφάνεια οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία σωματίδιο-αποκλεισμού. Σε αυτή τη δοκιμασία, παρατηρήθηκε μια σαφής ζώνη μεταξύ του HS-578T και MDA-MB-231 κύτταρα και τα σταθερά ερυθροκύτταρα (Εικ. 1Α α, γ). Επιπλέον, 5 λεπτά μετά Streptomyces υαλουρονιδάση προστέθηκε στο τρυβλίο καλλιέργειας, HA παλτά ήταν υποβαθμισμένη, επιτρέποντας στα ερυθρά κύτταρα του αίματος να έρθει σε επαφή HS-578T και MDA-MB-231 κύτταρα άμεσα (Σχ. 1Α b, d). Επιπλέον, τα στοιχεία αυτά είναι σε συμφωνία με προηγούμενες εργασίες [15]. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι MDA-MB-435S, MDA-MB-468, MCF-7, και SK-BR-3 κύτταρα, τα οποία έχουν χαμηλή ικανότητα για την παραγωγή ΗΑ, ήταν δεν αποκλείονται από σταθερό ερυθροκύτταρα (Εικ. 1Α e, g , Ι, Κ), και σχεδόν καμία αλλαγή δεν παρατηρήθηκε μετά την προσθήκη υαλουρονιδάση (Εικ. 1Α f, h, j, l). Για να ποσοτικοποιηθεί το πάχος της μήτρας, εντοπίστηκαν περιγράμματα των μητρών και των κυτταρικών όρια από 10 μεμονωμένα κύτταρα. πάχος Coat παραστάθηκε γραφικά για κάθε κυτταρική σειρά με και χωρίς Streptomyces θεραπεία υαλουρονιδάση (Εικ. 1Β). Η μέση αναλογία για κάθε κατάσταση υποδεικνύεται από μία οριζόντια ράβδο. Σε συμφωνία με τα αποτελέσματα του πειράματος αποκλεισμού σωματιδίων, ανοσοφθορισμό (εικ. 1 C) και κυτταρομετρία ροής (Εικ. 1ϋ) πειράματα παρομοίως αποδειχθεί ότι το περιεχόμενο ΗΑ στην κυτταρική επιφάνεια του HS-578T και MDA-MB-231 κύτταρα ήταν πλούσια, και τα άλλα τέσσερα κύτταρα είχαν χαμηλή περιεκτικότητα επιφάνεια ΗΑ.

(Α) απεικόνιση και μορφομετρική ανάλυση του ΗΑ μήτρες διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας δοκιμασία σωματίδιο αποκλεισμού πριν και μετά την προσθήκη του ΗΑ-ειδικών Streptomyces υαλουρονιδάσης. Μια σαφής ζώνη ήταν εμφανής μεταξύ HS-578T, MDA-MB-231 κύτταρα και ερυθρά αιμοσφαίρια (A, C)? περίπου 5 λεπτά μετά Streptomyces υαλουρονιδάση προστέθηκε στα κύτταρα, τα παλτά ΗΑ αποικοδομήθηκαν, επιτρέποντας στα ερυθρά κύτταρα του αίματος σε επαφή με το HS-578T και MDA-MB-231 κύτταρα (b, d). Καμία διαφορά πριν (e, g, ί, k) και μετά (f, h, j, ιβ) η προσθήκη του Streptomyces υαλουρονιδάσης για MDA-MB-435S, MDA-MB-468, MCF-7, και SK-BR- παρατηρήθηκε 3 κύτταρα. κατακράτησης (Β) η επιφάνεια ΗΑ ποσοτικοποιήθηκε ως ο λόγος της περιοχής μήτρας για τον τομέα των κυττάρων. Μεμονωμένα κύτταρα καρκίνου του μαστού εντοπίστηκαν χρησιμοποιώντας Image Pro Plus 6 στο όριο της διαυγούς ζώνης για τον υπολογισμό της περιοχής μήτρας και στην κυτταρική περίμετρο για να υπολογίσει την περιοχή κυττάρων. Οι αναλογίες παλτό /περιοχή κύτταρο καταγράφεται ως διανομή κερδών, με τη μέση τιμή αντιπροσωπεύεται από μια οριζόντια γραμμή. (Γ) Ένα πείραμα ανοσολογική φθορισμός κυττάρου χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της κυτταρικής επιφάνειας ΗΑ. Η σχετική φωτεινότητα εκπροσωπείται το περιεχόμενο ΗΑ στην επιφάνεια των κυττάρων. Ισχυρό φως απεικονίστηκε στα κύτταρα HS-578T και-231 MDA-MB? το φως των άλλων τεσσάρων τύπων κυττάρων ήταν ουσιαστικά μη ανιχνεύσιμο. περιεχόμενο (D) ΗΑ αξιολογήθηκε επίσης με ανάλυση FACS. Αντιπροσωπευτικά ιστογράμματα φαίνονται για τα κύτταρα βάφονται με βιοτινυλιωμένο HABP και Alexa 488-σημασμένο αβιδίνη να ΗΑ σε μη επεξεργασμένα κύτταρα (κόκκινο) ή κύτταρα κατεργασμένα με Streptomyces υαλουρονιδάση (μπλε). κύτταρα ελέγχου βάφτηκαν μόνο με Alexa 488-επισημασμένη αβιδίνη (μαύρο).

Η

καρκινικά κύτταρα του μαστού ΗΑ

high-HS-578T και ΗΑ

με χαμηλό MCF-7 Συμμορφωθείτε διαφορετικά κάτω από στατική Συνθήκες

Δεδομένου ότι οι προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει, το πείραμα στατική πρόσφυση χρησιμοποιείται συχνά για να δοκιμαστεί η διαφορά πρόσφυση μεταξύ διαφορετικών μορίων και κυττάρων. Προκειμένου να διερευνηθεί η διαφορά στην προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων σε κύτταρα COS-7 μέσω της αλληλεπίδρασης με την επιφάνεια ΗΑ και LYVE-1, μία δοκιμασία σύνδεσης διεξήχθη. Η σωστή έκφραση του LYVE-1 σε κύτταρα COS-7 επιβεβαιώθηκε σε προηγούμενη μελέτη μας [16]. HA

high-HS-578T και ΗΑ

-MCF-7 χαμηλά κύτταρα επισημαίνονται με DAPI εφαρμόστηκαν σε COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (- ) κύτταρα να τηρούν σταθερές προσκόλληση. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι τα κύτταρα πολλές HS-578T τηρηθούν στάσιμη COS-7

LYVE-1 (+) κυττάρων λόγω της αφθονίας των μορίων ΗΑ στην επιφάνειά του, και ο αριθμός των κυττάρων που προσκολλώνται μειώθηκε όταν αλληλεπίδρασε με ΣΥΝ- 7

LYVE-1 (-) κύτταρα (Εικ. 2Α, α, β? 2Β, ε). Προηγούμενες μελέτες χρησιμοποιώντας Streptomyces υαλουρονιδάσης πριν από την δοκιμασία πρόσδεσης έδειξε ότι το ΗΑ συμμετέχει στην προσκόλληση του όγκου [16]. Σε συμφωνία με αυτό το εύρημα, κύτταρα MCF-7, τα οποία έχουν χαμηλή περιεκτικότητα σε επιφάνεια ΗΑ, δεν έδειξε διαφορά στην προσκόλληση σε COS-7

LYVE-1 (+) κύτταρα και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα (Εικ. 2Α, c, d? 2Β, f). Τα κύτταρα SVEC4-10 επαληθεύονται ως μια κυτταρική γραμμή κυττάρων που μοιάζει με λέμφου ενδοθηλιακά [17] και είναι διαφορετικά από τα κύτταρα COS-7? Ως εκ τούτου, ελέγξαμε επίσης την προσκόλληση των κυττάρων HS-578T και MCF-7 κύτταρα σε SVEC4-10 κύτταρα, τα οποία πιστοποιήθηκε ως ένα κύτταρο-σαν κυτταρική γραμμή λέμφου ενδοθηλιακή. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι μετά από αποκλεισμό της αλληλεπίδρασης μεταξύ LYVE-1 και ΗΑ, μια ελαφρά μείωση παρατηρήθηκε στην προσκόλληση μεταξύ κυττάρων HS-578T και SVEC4-10 κύτταρα (Σχ 2C, g-i?. 2D, m). Καμία διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ των MCF-7 κύτταρα και SVEC4-10 κύτταρα (Σχ 2C, j-l?. 2D, n). Έτσι, αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η διαφορά σημειώνεται στην μεταφορά σε λεμφαγγεία των κυττάρων του όγκου που εκφράζουν υψηλά και χαμηλά ΗΑ μπορεί να οφείλεται στην προσκόλληση σε διακριτικό LYVE-1 σε ενδοθηλιακά κύτταρα λέμφου.

(Α) προσκολλάται HS- 578T και MCF-7 κύτταρα εμφανίζονται ως μπλε σφαίρες (α-δ). ΫΑΡΙ-επισημασμένα κύτταρα HS-578T ήταν περισσότερο προσκολλημένη στην συρρέουσα μονοστιβάδα κυττάρων COS-7

LYVE-1 (+) σε σύγκριση με COS-7

LYVE-1 (-). Τα κύτταρα MCF-7 προσκολλάται παρομοίως με τα δύο COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα. (Β) Ποσοτική αξιολόγηση των HS-578T και MCF-7 κυτταρική προσκόλληση στην μονοστοιβάδα κυττάρων COS-7 που φαίνεται, και κάθε δοκιμασία πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD φρεατίων εις τριπλούν από ένα τυπικό πείραμα και εκφράζονται ως φορές αύξηση σε σχέση με το COS-7 κύτταρα επιμολυσμένα με τον φορέα ελέγχου ρΕΟΡΡ-Ν1. * P & lt? 0,05 έναντι δείχνει επιμολυσμένα ρΕΟΡΡ-Ν1 COS-7 έλεγχο των φορέων κύτταρα. (C) τηρούνται HS-578T και MCF-7 κύτταρα εμφανίζονται ως μπλε σφαίρες (g-l). ΫΑΡΙ-επισημασμένα κύτταρα HS-578T ήταν προσκολλημένα στο συρρέουσα μονοστιβάδα κυττάρων SVEC4-10 πριν και μετά τον αποκλεισμό με LYVE-1 αντίσωμα, αντίσωμα ισότυπου. (Δ) Οι ποσοτικές αξιολογήσεις των δεδομένων από HS-578T και MCF-7 κυτταρική προσκόλληση στην μονοστιβάδα SVEC4-10 κυττάρων φαίνεται, και κάθε δοκιμασία πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD φρεατίων εις τριπλούν από ένα τυπικό πείραμα και εκφράζονται ως φορές μείωση σε σχέση με SVEC4-10 κύτταρα χωρίς θεραπεία. * P & lt?. 0,05 έναντι SVEC4-10 κύτταρα χωρίς θεραπεία

Η

διαφορικά Συμμορφωθείτε Συνθήκες ροής καρκινικά κύτταρα του μαστού HS-578T και MCF-7 Σύμφωνα με

καρκινικών κυττάρων σύλληψη και ο σχηματισμός σταθερών συγκολλητικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ κυττάρων όγκου και τα ενδοθηλιακά κύτταρα είναι κρίσιμα βήματα στη μεταστατική διαδικασία. Για να αποκτήσετε περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τις ιδιότητες σύνδεσης του καρκίνου του μαστού κυττάρων σε COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα, παρόμοια πειράματα προσκόλλησης με εκείνες που περιγράφονται ανωτέρω διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας ένα παράλληλο θάλαμο ροής πλάκα κάτω από διάτμηση συνθήκες στρες. Τα πλακίδια με COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα τοποθετήθηκαν σε ένα παράλληλο θάλαμο ροής πλάκα, και τα κύτταρα HS-578T ή MCF-7 διαχύθηκαν υπό φυσιολογικές διατμητική τάση. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3 (Α, a, b? Β, ε), παρόμοια αυξημένη προσκόλληση των κυττάρων HS-578T προς COS-7

LYVE-1 (+) από COS-7

LYVE-1 (-) κυττάρων παρατηρήθηκε υπό συνθήκες χαμηλής ροής (0.1dyn /cm

2)? Ωστόσο, MCF-7 κύτταρα εξακολουθούν παρομοίως προσκολλημένα στις δύο COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα (σχήμα 3Α, c, d?. 3Β, στ) . Τα αποτελέσματά μας έδειξαν επίσης ότι μετά το κλείδωμα της αλληλεπίδρασης μεταξύ LYVE-1 και ΗΑ, προσκόλληση μεταξύ κυττάρων HS-578T και SVEC4-10 κυττάρων μειώθηκε ελαφρώς κάτω από συνθήκες χαμηλής ροής (0,1 dyn /cm

2), όπως φαίνεται στο Σχ. 3 (C, g-i? D, m). Δεν προφανείς διαφορές μεταξύ των MCF-7 κύτταρα και SVEC4-10 κύτταρα (πριν και μετά το κλείδωμα) ανιχνεύθηκαν (Σχ 3C, j-l?. 3D, n).

(Α) Ο αριθμός των HS-578T και τα κύτταρα MCF-7 τηρηθούν COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κυττάρων υπό 0,1 dyn /cm

2 χαμηλό στρες διάτμησης αξιολογήθηκε μετρώντας 5 τυχαία θέα των εικόνων μικροσκόπιο φθορισμού. Τηρούνται HS-578T και MCF-7 κύτταρα εμφανίζονται ως μπλε σφαίρες (α-δ). (Β) Ποσοτική αξιολόγηση των δεδομένων που αντιπροσωπεύουν HS-578T και MCF-7 κυτταρική προσκόλληση στην μονοστοιβάδα κυττάρων COS-7 που φαίνεται, και κάθε δοκιμασία πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD φρεατίων εις τριπλούν από ένα τυπικό πείραμα και εκφράζονται ως φορές αύξηση σε σχέση με τον έλεγχο ρΕΟΡΡ-Ν1 φορέα επιμολυσμένα κύτταρα COS-7. * Ρ & lt? 0,05 έναντι των υποδεικνυόμενων επιμολυσμένα ρΕΟΡΡ-Ν1 φορέα ελέγχου COS-7 κύτταρα. (Γ) Ο αριθμός των HS-578T και τα κύτταρα MCF-7 τηρούνται SVEC4-10 κύτταρα πριν και μετά τον αποκλεισμό με LYVE-1 αντίσωμα, το αντίσωμα ισοτόπου κάτω από 0,1 dyn /cm

2 χαμηλής διατμητικής τάσης αξιολογήθηκε μετρώντας 5 τυχαίες θέα φθορισμού εικόνες μικροσκοπίου (g-l). (Δ) Οι ποσοτικές αξιολογήσεις των δεδομένων από HS-578T και MCF-7 κυτταρική προσκόλληση στην μονοστιβάδα SVEC4-10 κυττάρων απεικονίζεται. Κάθε δοκιμασία διεξήχθη εις τριπλούν. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD φρεατίων εις τριπλούν από ένα τυπικό πείραμα και εκφράζονται ως φορές μείωση σε σχέση με SVEC4-10 κύτταρα χωρίς θεραπεία. * P & lt?. 0,05 έναντι SVEC4-10 κύτταρα χωρίς θεραπεία

Η

Η πρόσφυση του HS-578T και τα κύτταρα MCF-7 σε COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα χωριστά υποβλήθηκαν σε διαφορετικές εντάσεις διατμητικής τάσης, και οι αλλαγές στον αριθμό των κυττάρων κόλλας μετρήθηκαν. κύτταρα HS-578T αφέθηκαν να συνδεθούν με LYVE-1-επιμολυσμένα και τα κύτταρα ελέγχου σε 0,1 dyn /cm

2 για 2 λεπτά και εκτέθηκαν σε αυξανόμενες διατμητική τάση έως 13.54 dyn /cm

2 (Σχ. 4Α? Β, α). κύτταρα HS-578T με υψηλή περιεκτικότητα σε ΗΑ παρέμεινε δεσμευμένη στην COS-7

LYVE-1 (+) κυτταρική μονοστιβάδα σε επίπεδα τοιχείο άγχος μέχρι 5,4 dyn /cm

2 και άρχισαν να κυκλοφορήσει στις 13.54 δίνες /cm

2. Το ποσό της προσκόλλησης κυττάρου HS-578T με COS-7

LYVE-1 (+) κυττάρων σε σύγκριση με COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα ήταν ακόμη υψηλότερο και δεν έχει αλλάξει, προφανώς, έως ότου η διατμητική τάση φτάσει 13.54 dyn /cm

2. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στο κυλιόμενο συμπεριφορά των κυττάρων MCF-7 σε COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) παρατηρήθηκαν κύτταρα (Σχ 4Α?. Β, β) . Ωστόσο, η προσκόλληση των κυττάρων HS-578T να SVEC4-10 κύτταρα (πριν και μετά το κλείδωμα) διέφερε από την προσκόλληση σε κύτταρα COS-7. Μια αξιοσημείωτη μείωση στην προσκόλληση σημειώθηκε μεταξύ κύτταρα HS-578T και SVEC4-10 κύτταρα, τα οποία ήταν χωρίς θεραπεία ή θεραπεία με IgG

αντισώματος 2Α ισοτυπικού ελέγχου, όταν έφτασε η διατμητική τάση 2,7 dyn /cm

2 (Σχήμα 4C?. Δ , c). Επίσης, δεν υπάρχουν σημαντικές διαφορές στο κυλιόμενο συμπεριφορά των κυττάρων MCF-7 με SVEC4-10 κύτταρα ανιχνεύθηκαν (Σχ 4C? Δ., D).

κύτταρα HS-578T και MCF-7 διαχύθηκαν πάνω ΣΥΝ- 7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα σε τοίχο καταπονήσεις διάτμησης 0.1, 0.4, 2.7, 5.4 ή 13.54 dyn /cm

2 για 2 λεπτά. (Α) Ο αριθμός των προσκολλημένων κυττάρων στον ίδιο τομέα εμφανίζεται ως μπλε σφαίρες. (Β) Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως το σχετικό αριθμό κυττάρων των κυττάρων HS-578T (α) και κύτταρα MCF-7 (β) συλλαμβάνεται από COS-7

LYVE-1 (+) (κόκκινη γραμμή) προς COS-7

LYVE-1 (-) (μπλε γραμμή) κύτταρα. HS-578T και MCF-7 κύτταρα διαποτίστηκαν σε μία συρρέουσα μονοστιβάδα κυττάρων SVEC4-10 πριν και μετά τον αποκλεισμό με LYVE-1 αντίσωμα, αντίσωμα ισοτύπου εις τοίχωμα καταπονήσεις διάτμησης 0.1, 0.4, 2.7, 5.4 ή 13.54 dyn /cm

2 για 2 λεπτά. (Γ) Ο αριθμός των προσκολλημένων κυττάρων στον ίδιο τομέα εμφανίζεται ως μπλε σφαίρες. (D) Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως το σχετικό αριθμό κυττάρων των κυττάρων HS-578T (γ) και τα κύτταρα MCF-7 (δ) συλλαμβάνεται από SVEC4-10 κύτταρα αποκλεισμό με LYVE-1 (μπλε γραμμή), SVEC4-10 κύτταρα εμποδίζοντας με ελέγχου ισοτόπου (κόκκινη γραμμή) για να SVEC4-10 κύτταρα χωρίς θεραπεία (μαύρη γραμμή). Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD του αριθμού των κυττάρων που συνδέονται. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά 3 ανεξάρτητων πειραμάτων.

Η

Υψηλή HA-καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν Φόρμα υαλουρονικό Κατασκευών Καλώδια

καλώδια ΗΑ μπορεί να έχει την ίδια ικανότητα να ενεργοποιήσετε LYVE-1 ως προς την ικανότητά τους να ενεργοποιούν CD44 in vivo [18], και τα αποτελέσματά μας, καθώς και τα ευρήματα των προηγούμενων εκθέσεων έδειξε ότι ορισμένες επιφάνειες όγκου περιέχουν υψηλά επίπεδα ΗΑ. Ωστόσο, δεν ήταν σαφές εάν ΗΑ στην επιφάνεια των κυττάρων του όγκου να εξελιχθούν σε δομές καλώδιο και να παίξουν ένα ρόλο στην ενεργοποίηση LYVE-1. Συνεπώς, επιχειρήσαμε να χρησιμοποιήσει ανοσοφθορισμού για την ανίχνευση καλώδια ΗΑ στην επιφάνεια των καρκινικών κυττάρων. Μέχρις ότου τα κύτταρα του όγκου έφθασε το 100% συρροή, βιοτινυλιωμένο HABP προστέθηκε στα κύτταρα για την ανίχνευση της διανομής ΗΑ. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα καρκινικά κύτταρα του μαστού HS-578T και ΒΤ-549, καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα 95-D, τραχηλικού καρκινώματος HeLa κύτταρα, κολικά καρκινικά κύτταρα RKO, και κύτταρα αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα Α549 όλα περιέχουν υψηλά επίπεδα ΗΑ και ανάπτυξη δομών καλωδίου (Εικ . 5), οι οποίες έχουν αναφερθεί στο παρελθόν να συμβεί σε HK2 κύτταρα. Μετά τη χρήση Streptomyces υαλουρονιδάση να υποβαθμίσει ΗΑ στην επιφάνεια του όγκου, τα καλώδια ΗΑ HK2 κύτταρα εξαφανίστηκαν (Εικ. 5). Ομοίως, τα καλώδια ΗΑ των άλλων κύτταρα επίσης καταργήθηκαν με πέψη υαλουρονιδάση Streptomyces (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). καλώδια ΗΑ επίσης δεν ανιχνεύθηκε σε κύτταρα MCF-7, τα οποία έχουν χαμηλά επίπεδα επιφάνειας ΗΑ.

κύτταρα συρρέουσα μονοστιβάδα αναπτύχθηκαν σε παρουσία 10% (ν /ν) FCS πριν την μονιμοποίηση με μεθανόλη και την ανίχνευση του ΗΑ με την προσθήκη bHABP. Οι τομές απεικονίστηκαν με ανεστραμμένο μικροσκόπιο φθορισμού (× 20 στόχος). Τα καλώδια ΗΑ επισημαίνονται με λευκά βέλη. Αρχική μεγέθυνση × 20. Streptomyces υαλουρονιδάση προστέθηκε στα κύτταρα πριν την μονιμοποίηση. Τα καλώδια ΗΑ αποικοδομήθηκαν χωρίς ανίχνευση.

Η

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη έχει δείξει το ΗΑ-μεσολαβούμενη μηχανισμός που ρυθμίζει την προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων να λέμφος ενδοθηλιακά κύτταρα. Μια σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε στην προσκόλληση του κυτταρική σειρά καρκίνου του μαστού HS-578T, το οποίο εκφράζει υψηλά επίπεδα του ΗΑ, με

LYVE-1 (+) κυττάρων COS-7? Αντίθετα, COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα επιμολυσμένα με τον φορέα ελέγχου pEGFP-Ν1 δεν εμφανίζουν αυτή την αλλοίωση υπό στατικές και ροής συνθήκες. MCF-7 κύτταρα που στερούνται ΗΑ στην επιφάνειά τους προσκολλάται με τον ίδιο τρόπο να COS-7

LYVE-1 (+) κυττάρων όπως COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα. Μια μικρή αλλαγή ανιχνεύθηκε επίσης στην προσκόλληση των κυττάρων HS-578T να SVEC4-10 κύτταρα πριν και μετά την προσθήκη του αντισώματος αποκλεισμού. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι το ΗΑ στην επιφάνεια των όγκων μπορεί να συμμετέχει στη μετάσταση των όγκων του μαστού με επίδραση δέσμευσης με LYVE-1 σε ενδοθηλιακά λεμφικών σκάφος κύτταρα.

Early μετάσταση στους λεμφαδένες είναι μια συχνή επιπλοκή σε ανθρώπινο καρκίνο του μαστού. Σύμφωνα με προηγούμενες εκθέσεις, εμείς διαλογή HA στις 6 τύπους καρκινικών κυττάρων του μαστού, οι ιδιαίτερα μεταστατικές κυτταρικές γραμμές HS-578T [19], [20] και MDA-MB-231 [21], [22], [23], η μετρίως μεταστατικές κυτταρικές γραμμές MDA-MB-435S [21], [23] και MDA-MB-468 [24], [25], και το όχι μεταστατικές κυτταρικές γραμμές χαμηλής ή MCF-7 [23], [25], [ ,,,0],26] και SK-BR-3 [19], [27] μέσω μιας κλασικής δοκιμασίας αποκλεισμού σωματιδίων, ένα πείραμα ανοσοφθορισμού, και ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Σε συμφωνία με προηγούμενες αναφορές [28], βρήκαμε ότι τα κύτταρα HS-578T και MDA-MB-231 περιέχουν υψηλά επίπεδα του ΗΑ στην επιφάνεια τους, ενώ τα επίπεδα ΗΑ στην επιφάνεια των κυττάρων MDA-MB-435S, MDA-MB-468, MCF -7, και SK-BR-3 κύτταρα μόλις ανιχνευθεί. ΗΑ στην επιφάνεια των όγκων έχει δειχθεί ότι συνδέεται με λέμφο μετάσταση όγκου? Ως εκ τούτου, θεωρήσαμε εάν και πώς HA υπάρχουν επί της επιφανείας του όγκου συμμετέχει στη διαδικασία αυτή. Για να διερευνήσουν περαιτέρω την βιολογική λειτουργία της ΗΑ σε όγκο λεμφικού μετάσταση, εμείς επιλέξαμε υψηλής HA-κύτταρα που εκφράζουν HS-578T και χαμηλής HA-κύτταρα που εκφράζουν MCF-7 για να διερευνήσει κατά πόσον ΗΑ επιρροές την ικανότητα των καρκινικών κυττάρων να τηρούν COS-7

LYVE-1 (+) κυττάρων και SVEC4-10 κύτταρα.

LYVE-1, ένας υποδοχέας κυτταρικής επιφάνειας για το ΗΑ στο λεμφικό ενδοθήλιο, έχει αποδειχθεί ότι συσχετίζεται με υψηλή συχνότητα μεταστάσεων κόμβου λέμφου περιφερειακών [29], [30]. Επιστήμονες από άλλα εργαστήρια έχουν αποδείξει ότι περινεοπλασματικής λεμφικών αγγείων σε ορισμένους τύπους καρκινώματος περιέχουν εμβόλων όγκου διακοσμημένα με υαλουρονάνη εντός του αυλού, και πρότειναν ότι τα κύτταρα όγκου εντός αποστράγγιση λεμφαγγεία μπορεί να δεσμεύονται ΗΑ, προκαλώντας μια αλληλεπίδραση με το τοίχωμα του αγγείου μέσω του CD44 /ΗΑ /αλληλεπίδραση LYVE-1 [31]. Για να διερευνηθεί κατά πόσο η απευθείας αλληλεπίδραση LYVE-1-ΗΑ επηρεάζει όγκου λέμφου μετάστασης, εξετάσαμε την συγκολλητική ικανότητα των κυττάρων του όγκου (διαφορετικό περιεχόμενο ΗΑ) για να LYVE-1-θετικά κύτταρα. δοκιμασία στατικής συγκόλλησης μας αποκάλυψαν ότι LYVE-1 ενισχύει την προσκόλληση των κυττάρων HS-578T σε κύτταρα COS-7 μέσω υαλουρονάνη, η οποία είχε προηγουμένως αναφερθεί [16]. Ωστόσο, αν η χαμηλή περιεκτικότητα σε ΗΑ στα καρκινικά κύτταρα παράγει μία αλληλεπίδραση με LYVE-1 μέσω άλλων παραγόντων που να επηρεάζουν την προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων είναι ακόμα ασαφής. Πραγματοποιήσαμε επίσης μια στατική πείραμα προσκόλληση με MCF-7 κύτταρα και COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα. Η παρούσα μελέτη έδειξε ότι LYVE-1 δεν ενισχύουν την προσκόλληση των κυττάρων MCF-7 που στερούνται ΗΑ στην επιφάνεια τους σε κύτταρα COS-7. Επιπλέον, για να καλύτερο μοντέλο η προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων να λέμφος ενδοθηλιακά κύτταρα, χρησιμοποιήσαμε SVEC4-10 κύτταρα να επαναλάβουν την πρόσφυση. Μόνο μια ελαφρώς μείωση παρατηρήθηκε μετά τη χρήση του αντισώματος αποκλεισμού, η οποία μπορεί να προκληθεί από περιορισμένες αλληλεπιδράσεις με ΗΑ και LYVE-1 επί SVEC4-10 κύτταρα. Στο σύνολό τους, τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι τα διαφορετικά επίπεδα του ΗΑ σε κύτταρα όγκου επηρεάζουν μετάσταση τους στο λεμφικό σύστημα. Τα υψηλά επίπεδα ΗΑ σε κύτταρα HS-578T προάγουν τη σύνδεση προς LYVE-1 και προσκόλλησης, και τα κύτταρα μπορούν ακόμη και να τραβηχτεί μέσα στο λεμφικό σύστημα.

Το κυλιόμενο αλληλεπίδραση αποτελεί προϋπόθεση για την παραγωγή υψηλής αντοχής διαμοριακών δεσμών και σταθερή πρόσφυση [32]. Για να προσδιοριστεί η σταθερότητα των συγκολλητικών αλληλεπιδράσεων, τα πειράματα θάλαμος υδροδυναμική in vitro ροής χρησιμοποιούνται συχνά [33], [34]. Στην παρούσα μελέτη, για να διερευνήσει την επίδραση της ροής στο κολλητικότητα της ΗΑ

high-HS-578T κύτταρα και

κύτταρα ΗΑ χαμηλής MCF-7 σε COS-7

LYVE-1 (+) και COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα, τα κύτταρα εκτέθηκαν σε προοδευτικά αυξανόμενη τάση διάτμησης υγρού. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το ΗΑ αλληλεπιδράσεις με LYVE-1 ήταν μετρίως ισχυρή πρόσφυση στην διαμεσολάβηση υπό συνθήκες φυσιολογικού στρες διάτμησης στο 2,7 dyn /cm

2. Εταιρεία προσκόλληση ορίστηκε ως η ικανότητα των κυττάρων να αντισταθεί σε μια απόσπαση άγχος τοιχείου 10 dyn /cm

2, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [33]? Ως εκ τούτου, οι αριθμοί των προσκολλημένα κύτταρα HS-578T μειώνεται καθώς η πίεση αυξάνεται σε 13,54 dyn /cm

2, αλλά εξακολουθούν να παραμένουν εν μέρει συνδεδεμένο με COS-7

LYVE-1 (+) κυττάρων σε σύγκριση με COS-7

LYVE-1 (-) κύτταρα. Επιπλέον, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το ΗΑ αλληλεπιδράσεις με LYVE-1 επί SVEC4-10 κύτταρα ήταν χαμηλή σε σύγκριση με την αλληλεπίδραση με κύτταρα COS-7, διότι ο αριθμός των κυττάρων που προσκολλώνται HS-578T προφανώς μειώθηκε κάτω από φυσιολογική καταπόνηση διάτμησης σε 2,7 dyn /cm

2. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το ΗΑ προωθεί μια σχετικά αδύναμη και παροδική προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων να λέμφος ενδοθηλιακά κύτταρα αλληλεπιδρώντας με LYVE-1, η οποία μπορεί επίσης να προτείνει ρόλους τους σε καρκινικά κύτταρα τροχαίο κατά μήκος του ενδοθηλίου υπό ροή λέμφου. Ως μάρτυρας, ΗΑ

κύτταρα χαμηλής-MCF-7 εκτέθηκαν επίσης σε κύτταρα COS-7 και SVEC4-10 κύτταρα, αλλά χωρίς σημαντικές αλλαγές στη συμπεριφορά προσκόλλησης των κυττάρων MCF-7 και στα δύο κύτταρα παρατηρήθηκαν σε οποιαδήποτε δεδομένη διάτμηση δύναμης.

η έρευνα που διεξήχθη από τη ΓΔ Jackson [35] έδειξε ότι LYVE-1 λειτουργικά «σιωπήσει» σε ένα κύτταρο-ειδικό τρόπο και ότι τα συμπλέγματα ΗΑ-πρωτεΐνης, όπως καλώδια ΗΑ μπορεί να έχει την ίδια ικανότητα να ενεργοποιήσετε LYVE -1 ως η ικανότητα να ενεργοποιεί CD44 in vivo [36], [37], [38]. Για πρώτη φορά, η παρούσα μελέτη παρέχει στοιχεία για την κατανομή και τη μορφολογία του ΗΑ επί των κυττάρων του όγκου επιφάνειες. Η μελέτη μας διαπίστωσε ότι υπάρχουν καλώδια ΗΑ σε ορισμένες επιφάνειες των κυττάρων του όγκου και ότι το ΗΑ διασχίζεται ως καλώδια στην κυτταρική επιφάνεια των όγκων μπορεί να ενεργοποιήσει LYVE-1. Ωστόσο, με βάση τα αποτελέσματα που δημοσιεύθηκαν από Jung San Huang, ΗΑ διεγείρει τη συστολή του δικτύου ER σε λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σε έναν LYVE-1-εξαρτώμενο τρόπο [39], και πιστεύεται ότι το ΗΑ συνδέεται με LYVE-1 σε λεμφαδένες ενδοθηλιακά κύτταρα, τα οποία ήταν σε συμφωνία με τα αποτελέσματα μας. Αυτές οι αντιφάσεις μπορεί να αποδοθεί στις διαφορετικές μεθόδους ανίχνευσης που χρησιμοποιούνται στις μελέτες. Παρ ‘όλα αυτά, ΗΑ στην επιφάνεια των καρκινικών κυττάρων μπορεί να επηρεάσει την πρόσφυση των όγκων μέσω αλληλεπιδράσεων με το LYVE-1 βρέθηκε σε λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα.

Εν κατακλείδι, τα αποτελέσματα μας επιτρέπουν να κατανοήσουμε καλύτερα τον μηχανισμό πίσω από τη ρύθμιση των ΗΑ στις επιφάνειες των καρκινικών κυττάρων και η προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων. ΗΑ σε κύτταρα όγκου μεσολαβεί προσκόλληση τους μέσω του λεμφικού ενδοθηλιακών κυττάρων ΗΑ υποδοχέα LYVE-1. Πρόσφυση εξαρτάται από την ποσότητα του ΗΑ που υπάρχουν στα κύτταρα του όγκου? Ωστόσο, αυτός ο μηχανισμός διαδραματίζει ρόλο μόνο κατά την έναρξη της διαδικασίας, και πολλά ερωτήματα παραμένουν ασαφείς. Για παράδειγμα, είναι άγνωστο αν επιφανείας κυττάρου όγκου το ΗΑ σχετίζεται με το συνθετικό ένζυμο ΗΑ, το ένζυμο αποικοδόμηση ΗΑ ή άλλα μόρια. Επίσης, δεν είναι σαφές αν τα καλώδια ΗΑ ενεργοποιήσετε LYVE-1 σε λεμφαγγεία. Περαιτέρω εργασίες στον τομέα αυτό βρίσκεται σε εξέλιξη στο εργαστήριό μας.

Υλικά και Μέθοδοι

Αντιδραστήρια και Αναλώσιμα

Βιοτινυλιωμένο HABP (δεσμευτική υαλουρονάνη πρωτεΐνη, HABP) αγοράστηκε από την Merck (Darmstadt , Γερμανία). TRITC-επισημασμένη αβιδίνη ελήφθη από Boster (Wuhan, Κίνα). Alexa Fluor® 488 συζευγμένο με στρεπταβιδίνη αγοράστηκε από την Life Technologies (Carlsbad, USA). Mouse LYVE-1 αντίσωμα και Rat IgG

ισοτυπικού ελέγχου 2Α αγοράστηκαν από την R & amp? Συστήματα D (Minneapolis, USA). DMEM, RPMI-1640, L-15, και F-12K αγοράστηκαν από την Gibco (Στοκχόλμη, Σουηδία). Ο εμβρυϊκός βόειος ορός (FBS) αποκτήθηκε από την Hyclone (Λανζού, Κίνα).