Αφηρημένο

Ιστορικό /Στόχοι

Πρόσφατες πειραματικές μελέτες έχουν δείξει ότι διάφορες κυτοκίνες μπορεί να είναι σημαντικοί παράγοντες στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου του παγκρέατος. Ωστόσο, τα ευρήματα αυτά δεν έχουν ακόμη ελεγχθεί σε κλινικό περιβάλλον.

Μέθοδοι

Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε τα επίπεδα της ένα ευρύ πάνελ κυτοκινών, συμπεριλαμβανομένης της ιντερλευκίνης (IL) -1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-17 και IL-23, καθώς επίσης και παράγοντα νέκρωσης όγκων άλφα (TNFa) και διέγερσης αποικιών κοκκιοκυττάρων παράγοντα (G-CSF) σε ασθενείς με παγκρεατική αδενοκαρκίνωμα (n = 43), και άλλα παγκρέατος κακοήθειες (νευροενδοκρινείς [n = 10] και συμπαγείς όγκους pseudopapillary [n = 3]), και υγιή άτομα (n = 41).

Αποτελέσματα

Βρήκαμε ότι υπήρχαν υψηλότερα επίπεδα IL-6, IL-8, IL-10 και TNFa σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες (για όλους, τουλάχιστον ρ & lt? 0,03). Οι ασθενείς με καρκίνο είχαν χαμηλότερη IL-23 συγκεντρώσεις από υγιή άτομα και ασθενείς που διαγιγνώσκονται με άλλους τύπους κακοηθειών (και για τα δύο, ρ = 0,002). Επίπεδα της IL-6, IL-8, IL-10 και IL-23 συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με την άμεση αριθμό των κυκλοφορούντων μυελού των οστών (ΒΜ) προερχόμενο μεσεγχυματικά ή πολύ μικρές εμβρυϊκά /βλαστικά κύτταρα επιβλάστιο-σαν (SCs) σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Επιπλέον, η μελέτη μας εντόπισε πιθανή ικανότητα της IL-6, IL-8, IL-10, IL-23, και τα επίπεδα του TNFa να επιτρέψει διάκριση του καρκίνου του παγκρέατος από άλλες παγκρεατικών όγκων και ασθενειών, συμπεριλαμβανομένης της οξείας και χρόνιας παγκρεατίτιδας και μετα-παγκρεατίτιδα κύστεις (με ευαισθησία και ειδικότητα που κυμαίνονται μεταξύ 70% -82%).

Συμπεράσματα

μελέτης θ μας) υποστηρίζει τη σημασία των επιλεγμένων κυτοκινών στην κλινική εικόνα του καρκίνου του παγκρέατος, ii) επισημαίνει τα πολυάριθμα ενώσεις μεταξύ επιλεγμένων ιντερλευκίνες και να ενταθούν διακίνησης ΣΚΜΟ σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος, και iii) χαρακτηρίζει προκαταρκτικά το διαγνωστικό δυναμικό αρκετών κυτοκινών ως δυνητικών νέων κλινικών δεικτών του καρκίνου του παγκρέατος σε ανθρώπους

Παράθεση:. Błogowski W, Deskur Α, Budkowska Μ, Σαλάτα D, Madej-Michniewicz Α, Dabkowski K, et al. (2014) Επιλεγμένα κυτταροκίνες σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος: μια προκαταρκτική έκθεση. PLoS ONE 9 (5): e97613. doi: 10.1371 /journal.pone.0097613

Συντάκτης: William B. Coleman, του Πανεπιστημίου της Βόρειας Καρολίνας Σχολή Ιατρικής, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 27 Νοέμ 2013? Αποδεκτές: 22 του Απρίλη 2014? Δημοσιεύθηκε: May 21, 2014

Copyright: © 2014 Błogowski et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από μια επιχορήγηση που χορηγείται από το πολωνικό Υπουργείο Επιστημών και Τριτοβάθμιας Εκπαίδευσης (402 423 038). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια από τις πιο θανατηφόρες γαστρεντερικές κακοήθειες. Αυτό συμβαίνει στις δυτικές κοινωνίες σε όλο τον κόσμο, με συχνότητα που αυξάνεται με ανησυχητικό ρυθμό [1], [2]. Αρκετοί παράγοντες κινδύνου για αυτή την κακοήθεια έχουν ταυτοποιηθεί, συμπεριλαμβανομένων άρρεν φύλο, η προχωρημένη ηλικία, η παχυσαρκία, χρόνια παγκρεατίτιδα, οικογενειακό ιστορικό καρκίνου του παγκρέατος, και η γενετική προδιάθεση [1], [3]. Ωστόσο, παρά την εκτεταμένη επιστημονικών και κλινικών προσπάθειες για τη διαλεύκανση της παθογένεσης της νόσου, οι ακριβείς μοριακοί μηχανισμοί υπεύθυνοι για την έναρξη, την ανάπτυξη και την εξέλιξη του καρκίνου του παγκρέατος στον άνθρωπο δεν είναι επαρκώς κατανοητές.

Πρόσφατα, υπήρξε αυξημένο ενδιαφέρον για την πιθανή συμμετοχή των βλαστικών κυττάρων (ΕΣΥ) στον καρκίνο του παγκρέατος. Αρκετές ερευνητικές ομάδες έχουν ήδη χρησιμοποιηθεί πειραματικά ζωικά μοντέλα για να αποδείξουν την ύπαρξη ενός πληθυσμού της SCS, που ονομάζονται παγκρεατικά καρκινικά βλαστικά κύτταρα (PCSCs), που φαίνεται να είναι υπεύθυνη για την αρχική ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος, καθώς και την προώθηση των συστημική εξάπλωση του [ ,,,0],4] – [9]. Η ομάδα μας επεκτάθηκε πρόσφατα αυτές τις παρατηρήσεις αναφέροντας ότι οι ασθενείς με παγκρεατικό καρκίνο εμφανίζουν ενταθεί συστηματική διακίνηση των διαφόρων πληθυσμών του μυελού των οστών (ΒΜ) προερχόμενη ΠΚ (ΣΚΜΟ). Αυτό διακίνησης είναι κυρίως Λιν

-CD45

-CD133

+ CXCR4

+ πολύ μικρές εμβρυϊκά /επιβλάστιο-όπως ΠΚ (VSELs) και CD45

-CD90

+ CD105

+ ΠΚ μεσεγχυματικά (MSCs) [10]. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τις παθολογικές μηχανισμούς που είναι υπεύθυνοι για το φαινόμενο αυτό. Απροσδόκητα, διάφορες μελέτες σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος έδειξαν ότι η συστηματική κυκλοφορία της SCS δεν σχετίζεται με αυξημένα επίπεδα χημειοελκτικά SC, όπως στρωματικά προερχόμενο παράγοντα 1α. Αντ ‘αυτού, αυτή η συστηματική κυκλοφορία της SCS συνδέεται με τη δράση του έμφυτου ανοσοποιητικού συστήματος, κυρίως ο καταρράκτης του συμπληρώματος [10], [11]. Παρ ‘όλα αυτά, άλλοι ανοσολογικοί παράγοντες θα μπορούσε πολύ πιθανόν να εμπλέκεται στη ρύθμιση αυτής της διαδικασίας, και αυτό θα πρέπει να επαληθευτούν σε κλινικές μελέτες.

Οι κυτοκίνες είναι εξαιρετικός υποψήφιος παράγοντες για την ενορχήστρωση των δύο κινητοποίηση BMSC και την προώθηση του καρκίνου του παγκρέατος ανάπτυξη σε ανθρώπους. Για παράδειγμα, μελέτες έχουν δείξει ότι διάφορες κυτοκίνες μπορεί να προάγουν το σχηματισμό των αιμοφόρων αγγείων εντός του παγκρεατικού μικροπεριβάλλον του όγκου, μπορούν ανεξάρτητα ή /και συνεργιστικά επηρεάσει τη δραστηριότητα των κυττάρων του ανοσοποιητικού, την ένταση των φλεγμονωδών διεργασιών και την ικανότητα εισβολής των παγκρεατικών κυττάρων, ως εκ τούτου συμβάλλοντας μεταστατική εξάπλωση [12] – [19].

Λαμβάνοντας όλα αυτά τα γεγονότα υπόψη, στην παρούσα μελέτη, αποφασίσαμε να αναλύσουμε διεξοδικά συστηματικά επίπεδα των προηγουμένως σημειωθεί κυτοκινών σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος και συγκρίνετε κυτταροκινών επίπεδα μεταξύ του παγκρέατος ασθενείς με καρκίνο, υγιή άτομα και ασθενείς με άλλα παγκρεατικά κακοήθειες. Επαληθεύσαμε επίσης τις προηγούμενες παρατηρήσεις μας σχετικά με τις ενώσεις ανάμεσα συστηματικά επίπεδα κυτοκινών και απόλυτους αριθμούς των κυκλοφορούντων ΣΚΜΟ σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος (προηγουμένως αναφέρθηκε από εμάς [10]). Στη μελέτη αυτή, μπορούμε επίσης να καθοριστεί αν συστημικά επίπεδα κυτοκινών έχουν κλινική αξία για τη διάγνωση και διάκριση του καρκίνου του παγκρέατος από άλλες παγκρεατικών όγκων και ασθενειών στον άνθρωπο. Υποθέσαμε ότι οι ασθενείς που πάσχουν από καρκίνο του παγκρέατος θα έχουν υψηλότερα επίπεδα ορισμένων κυτοκινών, και ότι αυτά τα αυξημένα επίπεδα θα είναι τουλάχιστον εν μέρει συνδέονται με εντατικοποίηση συστηματική διακίνηση των ΣΚΜΟ. Έχουμε, επίσης, έθεσε ευθέως ότι τα επίπεδα κυτοκίνης μπορούσε να χρησιμεύσει ως νέων δεικτών για τη διάκριση του καρκίνου του παγκρέατος από άλλες παγκρεατικών όγκων και ασθενειών στον άνθρωπο.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική δήλωση

Η Βιοηθική Επιτροπή του Pomeranian Ιατρικό Πανεπιστήμιο του Szczecin ενέκρινε το πρωτόκολλο της μελέτης, και όλοι οι ασθενείς παρείχαν ενυπόγραφη ενημερωμένη συγκατάθεση πριν από τη συμμετοχή.

ασθενείς και δείγματα αίματος

Ένα σύνολο από 142 άτομα με γενικά καλή και σταθερή υγεία συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη. Αυτοί οι ασθενείς χωρίστηκαν σε ομάδες: μια ομάδα «καρκίνος» (νεοδιαγνωσθέντες παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα, n = 43), ένα «άλλες κακοήθειες» ομάδα (παγκρεατική νευροενδοκρινών όγκων [NETs], η = 10? Συμπαγείς όγκοι pseudopapillary [ΣΧΣ], n = 3), ένα «άλλες παθήσεις του παγκρέατος» ομάδα (οξεία /χρόνια παγκρεατίτιδα, η = 31?. παγκρεατικών κύστεων, n = 14), και μία ομάδα «ελέγχου» (υγιείς εθελοντές, η = 41)

Η τελική διάγνωση του παγκρεατικού αδενοκαρκινώματος και άλλες κακοήθειες βασίστηκε σε βιοψία ανάλυση δείγματος. Για να καθοριστεί σταδιοποίηση της νόσου, όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε υπερηχογράφημα, αξονική τομογραφία ή /και ενδοσκοπική υπερηχογράφημα, καθώς και στήθος ακτινογραφικές εξετάσεις. Στην ομάδα «καρκίνος», 6 ασθενείς πληρούσαν τις προϋποθέσεις για χειρουργική αφαίρεση του παγκρεατικού όγκου (στάδιο Ι ή ΙΙ, σύμφωνα με το Tumor-Node-Μετάσταση – ΤΝΜ ταξινόμηση), 10 ασθενείς παρουσιάζονται με ανεγχείρητο, τοπικά προχωρημένη νόσο (στάδιο ΙΙΙ), και 27 ασθενείς είχαν άπω μεταστάσεις στο ήπαρ ή στους πνεύμονες (Στάδιο IV). Κατά τη στιγμή της ένταξης τους στη μελέτη, κανένας από τους ασθενείς ήταν σε χημειοθεραπεία, είχε λάβει κυτταροτοξικών παραγόντων ή φαρμάκων εντός των τελευταίων 12 μηνών πριν από τη μελέτη, ή είχε παρουσιάσει κλινικά συμπτώματα ενός ενεργού μολυσματική ασθένεια. Όλοι οι ασθενείς είχαν προσληφθεί από άτομα νοσηλεύονται στο Τμήμα Γαστρεντερολογίας του Pomeranian Ιατρικό Πανεπιστήμιο του Szczecin. Τα γενικά χαρακτηριστικά των ατόμων που εντάχθηκαν στη μελέτη, μαζί με μια στατιστική σύγκριση αυτών των χαρακτηριστικών μεταξύ των εξεταζόμενων ομάδων, παρουσιάζονται στον Πίνακα 1 και Πίνακα S1.

Η

Περιφερειακά δείγματα αίματος (8-10 mL ) συλλέχθηκαν από όλους τους περιλαμβάνονται άτομα. Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία αμέσως σύμφωνα με τις τυποποιημένες εργαστηριακές πρωτόκολλα, και το πλάσμα διαχωρίστηκε, καταψύχθηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι την περαιτέρω αξιολόγηση.

Ανάλυση των συστημικών επιπέδων των κυτοκινών

Οι συστηματικές συγκεντρώσεις του ιντερλευκίνες (IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-17 και IL-23), G-CSF, και TNFa μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας εμπορικά διαθέσιμα, υψηλής ευαισθησίας κιτ ELISA (

R & amp? Συστήματα D, Minneapolis, MN, USA

ή

BD Bioscience OptEIA ELISA κιτ, MD, USA

) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή

Στατιστικές Μέθοδοι

.

Αναλογικά όπως σε προηγούμενες μελέτες μας [20] – [24], η δοκιμή Shapiro-Wilk χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η κατανομή των συνεχών μεταβλητών αναλύθηκαν. t-test του Student χρησιμοποιήθηκε για να συγκρίνει τις μέσες τιμές των παραμέτρων μεταξύ των εξεταζόμενων ομάδων (για κανονικά κατανεμημένες μεταβλητές). Για τις μεταβλητές που δεν είχαν κανονική κατανομή, οι τιμές log μεταμορφωθεί. Εάν μια κανονική κατανομή ακολούθως επιτυγχάνεται, αυτά μετασχηματίζονται μεταβλητές συγκρίθηκαν επίσης χρησιμοποιώντας t-test του Student. Ωστόσο, εάν ο μετασχηματισμός δεν κατέληξε σε μια κανονική κατανομή, μια Mann-Whitney U-test διεξήχθη. Οι συσχετισμοί μεταξύ διαφόρων αναλύονται παράμετροι υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ Pearson ή Spearman rank test, ανάλογα με την κανονικότητα της κατανομής. Για να αξιολογηθούν τα αποτελέσματα της συνεχούς μεταβλητών επί των παγκρεατικών σταδιοποίηση και τα επίπεδα των κυτοκινών καρκίνου, πολυμεταβλητή αναλύσεις παλινδρόμησης πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση μιας μεθόδου επιλογής κατά βήματα. Μεταβλητών που εξαιρούνται από το αρχικό μοντέλο ήταν ξαναμπήκε ξεχωριστά για να αποκλείσει υπολειπόμενη συγχυτική δράση. Κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του πολυμεταβλητή μοντέλα παλινδρόμησης, ο αριθμός των ανεξάρτητων μεταβλητών εισαχθεί δεν υπερβαίνει το 10% του συνολικού αριθμού των ασθενών που αναλύθηκαν. Κατασκευασμένο μοντέλα επαληθεύτηκαν χρησιμοποιώντας το κριτήριο του Akaike (AIC), και κακώς κατασκευάστηκε μητρών οδήγησε στην απόρριψη του μοντέλου. χαρακτηριστικό λειτουργίας (ROC) καμπύλη Δέκτης δομήθηκαν για όλες τις παραμέτρους που αναλύθηκαν ως διαγνωστικά για τον καρκίνο του παγκρέατος, και η περιοχή κάτω από κάθε καμπύλη ROC (AUC) υπολογίστηκε. Η παρούσα μελέτη έχει διεξαχθεί σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ να βελτιώσουν την ποιότητα και τη γενική εγκυρότητα των αποτελεσμάτων της. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SPSS λογισμικό στατιστικής ανάλυσης. P-τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές.

Αποτελέσματα

Ανάλυση του περιλαμβάνονται άτομα

Η αρχική σύγκριση των ανέλυσε ομάδες προσλαμβάνονται άτομα αποκάλυψαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα CA19-9 στο ασθενείς με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα σε σύγκριση με όλες τις άλλες ομάδες ασθενών (Πίνακας 1 και Πίνακας S1). Επιπλέον, ασθενείς με καρκίνο είχαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα Ο-δραστικής πρωτεΐνης από τα άτομα ελέγχου και σε άτομα διαγνώστηκαν με άλλους τύπους παγκρεατικών κακοηθειών, αλλά αυτές οι τιμές ήταν χαμηλότερες από αυτές ανιχνεύονται σε ασθενείς με άλλες παθήσεις του παγκρέατος, και δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των ασθενών με διάγνωση νωρίς και πιο προχωρημένη νόσο (Πίνακας S2).

Σύγκριση των συστημικών επιπέδων των κυτοκινών σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος, του παγκρέατος άλλες κακοήθειες, και υγιή άτομα

Οι μέσες συστηματικές συγκεντρώσεις του ιντερλευκίνες σε ασθενείς με παγκρεατική οι αδενοκαρκίνωμα και υγιή άτομα που απεικονίζεται στο Σχήμα 1 και στο Σχήμα S1. Βρήκαμε ότι τα επίπεδα της IL-6, IL-8, και IL-10 ήταν σημαντικά υψηλότερες (μέχρι 3 φορές) σε ασθενείς με καρκίνο από ό, τι στα υγιή άτομα. Σε αντίθεση, η IL-23 συγκεντρώσεις ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε ασθενείς με καρκίνο από ό, τι στους υγιείς μάρτυρες (Σχήμα 1). Δεν παρατηρήσαμε σημαντικές διαφορές στην παραγωγή IL-1β, τα επίπεδα G-CSF IL-12, IL-23, ή μεταξύ υγιών ατόμων και ασθενών με καρκίνο (Σχήμα 2 και Σχήμα S1). Επιπλέον, οι ασθενείς με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα είχαν επίπεδα G-CSF τα οποία ήταν παρόμοια με υγιή άτομα, και σημαντικά υψηλότερες συγκεντρώσεις TNFα (Σχήμα 2). Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν συγκρίναμε αυτές τις κυτοκίνες επίπεδα μεταξύ των ασθενών με πρώιμη διάγνωση, τοπικά προχωρημένη και μεταστατική νόσο, βρήκαμε στατιστικά σημαντικές διαφορές μόνο από την άποψη της IL-8 συγκεντρώσεις (Πίνακας S2)

IL -. Ιντερλευκίνης p – επίπεδο της σημασίας

Η

G-CSF -. διέγερσης αποικιών κοκκιοκυττάρων παράγοντα TNFα – παράγοντα νέκρωσης όγκων άλφα σελ. – επίπεδο σημαντικότητας

Η

Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν συγκρίναμε τα επίπεδα των κυτοκινών μεταξύ υγιών ατόμων και ασθενών με άλλες παγκρεατικές κακοήθειες, η μόνη διαφορά ήταν στη συγκέντρωση του IL-23 (Πίνακας S3). Επιπλέον, η συστηματική επίπεδα της IL-23 σε ασθενείς με δίχτυα ή ΣΧΣ ήταν σημαντικά υψηλότερα από τα επίπεδα σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος (p = 0,002). Είναι σημαντικό ότι, οι ασθενείς με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα είχαν σημαντικά υψηλότερα συστηματικά επίπεδα IL-8 και TNFa, από ότι άτομα που έχουν διαγνωσθεί με άλλα παγκρεατικά κακοήθειες (Πίνακας S3).

Οι κυτοκίνες και κυκλοφορούν προέρχονται από μυελό οστών τα βλαστικά κύτταρα

Αφού εντοπίσει τις κυτοκίνες που διαφέρουν μεταξύ ασθενών με καρκίνο και υγιή άτομα, μας ενδιαφέρει αν τα επίπεδα αυτών των κυτοκινών που σχετίζονται με την προσφάτως αναφερθεί φαινόμενο του ενταθεί συστηματική κυκλοφορία διαφόρων πληθυσμών ΣΚΜΟ σε ασθενείς με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα [10]. Βρήκαμε ότι τα επίπεδα της IL-6, IL-8, IL-10 και IL-23 συσχετίστηκε σημαντικά με τον απόλυτο αριθμό των κυκλοφορούντων BM-προερχόμενα MSCs, και τα επίπεδα της IL-23 ήταν επίσης αρνητικά με τον αριθμό των κυκλοφορούντων VSELs ( Πίνακας S4). Δεν υπήρχαν άλλες σημαντικές ενώσεις μεταξύ συστηματικής επίπεδα κυτοκινών και του απόλυτου αριθμού των συστημικά κυκλοφορούντων κυττάρων από άλλους πληθυσμούς των ΣΚΜΟ.

Κλινικές συσχετίσεις μεταξύ κυτταροκινών και του καρκίνου του παγκρέατος

Τέλος, διαπιστώσαμε πιθανές συσχετίσεις μεταξύ συστηματικά επίπεδα κυτοκινών και την κλινική παρουσίαση της παγκρεατικής κακοήθεια σε ασθενείς μας. Χρησιμοποιώντας πολυμεταβλητή παλινδρόμηση αναλύσεις βρήκαμε ότι, μεταξύ όλων των κυτοκινών που εξετάστηκαν, μόνο IL-8 επίπεδα σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος συνδέθηκαν στενά με την εξέλιξη της νόσου. Η συγκέντρωση IL-8 φάνηκε επίσης να συνδέεται με ή επηρεάζονται από την IL-6 και TNFa επίπεδα σε ασθενείς με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα (Πίνακας 2).

Η

Αφού έλαβε γνώση της εν λόγω εμφανής διαφορές στα επίπεδα των επιλεγμένων κυτοκινών μεταξύ των εξεταζόμενων ομάδων ασθενών και υγιών ατόμων, αποφασίσαμε να εξετάσουμε προκαταρκτικά την πιθανή διαγνωστική αξία αυτών των επιλεγμένων κυτοκινών για την ανίχνευση του καρκίνου του παγκρέατος στον άνθρωπο. Για να προσδιορίσετε αν συστηματικά επίπεδα των κυτοκινών θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως νέα ιθύνοντες του παγκρέατος αδενοκαρκίνωμα, προσθέσαμε μια ομάδα ασθενών που νοσηλεύτηκαν ή διαγνωστεί με άλλες παθήσεις του παγκρέατος (οξεία /χρόνια παγκρεατίτιδα ή του παγκρέατος κύστεις) για τις αναλύσεις μας. Μετά τη μέτρηση των επιπέδων κυτοκίνης (IL-6, IL-8, IL-10, IL-23, TNFa) σε αυτή την ομάδα, προσθέσαμε αυτούς τους ασθενείς με τις αναλύσεις μας, να κατασκευάζονται οι καμπύλες ROC, και προσδιορίζεται κατά προσέγγιση τιμές AUC για την αξιολόγηση της καταλληλότητας των αυτές οι κυτοκίνες ως διαγνωστικοί δείκτες για καρκίνο του παγκρέατος. Μεταξύ όλων παράμετροι που εξετάστηκαν, μόνο εκείνοι με διάστημα εμπιστοσύνης 95% (CI) κάτω όριο αξίας που υπερέβαινε 0.50 παρουσιάζονται και με ακρίβεια περιγράφεται (Σχήμα 3). Η ανάλυσή μας έδειξε ότι η IL-6, IL-8, IL-10, και TNFa υπόσχονται νέα υποψήφια δείκτες για την ανίχνευση του παγκρεατικού αδενοκαρκινώματος, ενώ η IL-23 μπορεί να είναι πολύτιμη για την ικανότητά του να αποκλείει τη διάγνωση του καρκίνου. Με βάση τα αποτελέσματα μας, αποφασίσαμε να καθορίσει προτεινόμενες τιμές διάγνωσης cut-off για αυτές τις κυτοκίνες και προκαταρκτικά χαρακτηρίζουν εκτιμώμενη ευαισθησία τους, την ειδικότητα και θετική και αρνητική προγνωστική αξία (Πίνακας 3). Είναι ενδιαφέρον, στην ανάλυση C-δραστικής πρωτεΐνης μας φάνηκε να είναι καμία διαγνωστική αξία για την ένδειξη του καρκίνου του παγκρέατος (AUC = 0,45? 95% CI 0,24 – 0,66? Ρ = 0,63) (Σχήμα 3F), και χρησιμοποιείται σήμερα δείκτη ΟΑ19.9 αποδείχθηκε ότι είναι 74,4% ευαισθησία, 80,8% ειδικότητα, ενώ η θετική και αρνητική προγνωστική αξία της ήταν 62,7% και 87,9%, αντίστοιχα.

Υπολογιζόμενη ευαισθησίας (άξονας y) παριστάνεται γραφικά ως προς τον τύπο 1-ειδικότητα (x -άξονα) για εξετάστηκαν ιντερλευκίνες /κυτοκίνες, δηλαδή IL-6 (α), IL-8 (β), IL-10 (γ), TNFa (ε), και η C-αντιδρώσα πρωτεΐνη (στ) ως δείκτες του καρκίνου του παγκρέατος , και IL-23 (δ) ως δείκτη των μη-καρκινικές βλάβες. Ακριβή περιγραφή των παραμέτρων αυτών (ae) παρουσιάζεται στον Πίνακα 3. IL – ιντερλευκίνη TNFα – παράγοντα νέκρωσης όγκων άλφα p – επίπεδο σημαντικότητας CRP -. C-αντιδρώσα πρωτεΐνη

Η

Συζήτηση

για πολλά χρόνια, οι ερευνητές έχουν επισημαίνει το γεγονός ότι βιοχημικών και μοριακών στιχομυθία μεταξύ του ανοσοποιητικού και τα καρκινικά κύτταρα είναι ζωτικής σημασίας για τη συστηματική εξέλιξη των κακοηθειών. Μέχρι στιγμής, αρκετές πειραματικές μελέτες έχουν δείξει ένα σημαντικό ρόλο διαφόρων κυτοκινών, μαζί με παράγοντες ανάπτυξης, στην ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος (ανασκόπηση λεπτομερώς στο [25], [26]). Ωστόσο, πολύ λίγες από αυτές τις παρατηρήσεις έχουν επιβεβαιωθεί σε ένα πραγματικό κλινικό περιβάλλον. Επομένως, αποφασίσαμε να αναλύσουμε γενικά ένα ευρύ πάνελ κυτοκινών σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Χρησιμοποιήσαμε αυτά τα δεδομένα για την επαλήθευση τυχόν ενώσεις των κυτοκινών με συστηματική κυκλοφορία BMSC και να αξιολογηθεί η πιθανή κλινική διαγνωστική αξία των επιπέδων κυτοκίνης.

Βρήκαμε ότι, μεταξύ όλων αναλύονται κυτοκινών, μόνο η IL-6, IL-8, IL-10, και τα επίπεδα IL-23 διέφερε σημαντικά μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος και άλλα άτομα. Από μια μοριακή άποψη, αυξήσεις στα επίπεδα αυτών των ILs μπορεί να προωθήσει έντονα την εξέλιξη του καρκίνου σε ασθενείς με παγκρεατικό κακοήθειες, καθώς οι εν λόγω κυτοκίνες εμπλέκονται στην ενεργοποίηση πολλαπλές οδούς ανάντη σηματοδότησης που επηρεάζουν τη δραστηριότητα πολλών παραγόντων μεταγραφής, ρυθμίζουν τον κυτταρικό πρωτεώματος κατά τόσο η γενετική και μεταφραστικό επίπεδο, και να προωθήσει την ανάπτυξη μιας «ανοσοκατασταλτικών» Th2 ανοσολογικής προφίλ φαινότυπο [12] – [14], [27] – [29]. Παραδόξως, δεν είδαμε σημαντικές διαφορές στα επίπεδα άλλων ILs που εξετάσαμε, οι οποίες είναι γνωστό ότι διεγείρουν ανοσοαπόκριση [17], [19], [30] και θα μπορούσε επωφελώς να προάγει την ανοσιακή επίθεση κατά των καρκινικών κυττάρων που οδηγούν σε επιτυχή εξάλειψη τους . Όλα αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν και μεταφράζει τις προηγούμενες παρατηρήσεις, η οποία έδειξε ότι δεν είναι μόνο ένα τοπικό, αλλά και μια συστημική ενδογενής «ανοσοκατασταλτικά» κατάσταση φαίνεται να συμβαίνουν κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης και εξέλιξης της παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα σε ανθρώπους [31], [32]. Φαίνεται επίσης πολύ ενδιαφέρον να καθοριστούν οι ακριβείς (παθο) μηχανισμοί που οδηγούν σε τέτοιες ειδικές αστερισμό κυτοκινών σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Προτείνεται ότι τέτοιου φαινομένου μπορεί να σχετίζεται με πολλούς παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων των ισχυρών δεσμοπλαστικού αντίδραση από το περιβάλλον καρκίνου που φαίνεται να είναι ένα χαρακτηριστικό στον καρκίνο του παγκρέατος. Διάφοροι τύποι αλληλεπιδράσεων με όγκο στρώματος έχουν ενοχοποιηθεί ως έχοντες το δυναμικό να προωθήσει παγκρεατικό καρκίνο εισβολή κυττάρων και τη μετάσταση. Ερευνητές έχουν αποδείξει ότι το περιβάλλον ανάπτυξης καρκίνου του παγκρέατος περιέχει πολλαπλά κύτταρα, όπως ινοβλάστες, παγκρεατικά αστεροειδή κύτταρα, παρεκκλίνουσα ενδοθηλιακά κύτταρα, περικύτταρα, εστίες φλεγμονωδών κυττάρων και των μακροφάγων που μπορεί να συμβάλλουν σημαντικά στην παραγωγή χημειοκινών και κυτοκινών (ανασκόπηση λεπτομερώς στο [ ,,,0],33]). Επιπλέον, σχετικά με το συστημικό επίπεδο διαφόρων τύπων κυττάρων μπορεί επίσης να συμβάλει στην παραγωγή κυτοκινών, συμπεριλαμβανομένων των οστών που προέρχονται από μυελό βλαστικά κύτταρα, καθώς και κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος, όπως CD4 + Τ λεμφοκύτταρα ή δενδριτικά κύτταρα [34], [35]. Όλοι αυτοί οι μηχανισμοί μπορεί ταυτόχρονα να οδηγήσει σε ένα τροποποιημένο προφίλ κυτοκίνης σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος, και ως εκ τούτου την προώθηση της ανάπτυξης και συστημική εξάπλωση. Είναι ενδιαφέρον ότι, η καταστολή διαφόρων κυτοκινών (για παράδειγμα IL-17) οδηγεί σε σημαντική αναστολή του (παγκρεατική) την ανάπτυξη του όγκου σε πειραματόζωα [36]. Αυτό το αποτέλεσμα πιστεύεται ότι είναι κυρίως σχέση με ανέστειλε μεταλλοπρωτεϊνάσες και δράση του VEGF, καθώς και προώθηση ενός «Th1-κυρίαρχη προφλεγμονώδης» περιβάλλον. Παρ ‘όλα αυτά, περαιτέρω μελέτες έχουν αναμφισβήτητα απαιτείται για την εξέταση πλήρως και να κατανοήσουν τη διαδικασία αυτή σε ανθρώπους.

έδειξαν επίσης ότι τα αυξημένα επίπεδα ορισμένων ILs σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος που σχετίζεται με τον απόλυτο αριθμό των κυκλοφορούντων ΣΚΜΟ, κυρίως MSC. Πρόσφατα, αναφέρθηκε ότι η επιλεκτική ενεργοποίηση του ΣΚΜΟ εμφανίζεται σε ασθενείς με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα, και διαφόρων πληθυσμών των ΣΚΜΟ όπως αιμοποιητικά βλαστικά και προγονικά κύτταρα (HSPCs) ή ενδοθηλιακά προγονικά κύτταρα (EPCs) φαίνεται να κατασταλεί μέσα στο περιβάλλον ΒΜ, ενώ VSELs και MSCs έξοδο από την BM [10]. Σε αυτή τη μελέτη, με έκπληξη ότι ο G-CSF δεν συσχετιζόταν σημαντικά με την εμπορία BMSC σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος, καθώς τα επίπεδα της ήταν συγκρίσιμα μεταξύ εξετάστηκαν ομάδων. Για πολλά χρόνια, G-CSF αναμενόταν να σχετίζεται με την εμπορία BMSC σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος, αν και η έκθεσή μας ότι δεν συσχετίζεται σημαντικά επιβεβαιώνει πιο πρόσφατες εκθέσεις από άλλους [37], [38]. Επιπλέον, τα αποτελέσματα μας έδειξαν ότι τα επιλεγμένα ILs μπορεί πράγματι να εμπλέκονται δυνητικά στην ρύθμιση αυτής της διαδικασίας. Ιδιαίτερα, IL-6, IL-8, IL-10 και IL-23 συγκεντρώσεις σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος φαίνεται να σχετίζεται με τον αριθμό των κυκλοφορούντων MSCs, ενώ χαμηλότερα επίπεδα IL-23 συσχετίζεται αρνητικά με αύξηση του αριθμού των VSELs ανιχνεύονται στο περιφερικό αίμα των ασθενών που διαγιγνώσκονται με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα. Δυστυχώς, σε αυτό το στάδιο της έρευνάς μας, είναι αδύνατο να προσδιοριστεί η ακριβής ρόλος αυτών των ILs στη ρύθμιση της ομοιόστασης ή διακίνησης BMSC σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Αυτή η πτυχή θα πρέπει να εξεταστεί πλήρως στις μελλοντικές πειραματικές και μεταφραστική μελέτες.

Τέλος, αποφασίσαμε να διενεργήσει προκαταρκτική ανάλυση της πιθανής διαγνωστικής αξίας συγκεκριμένων κυτοκινών για την ανίχνευση του καρκίνου του παγκρέατος, καθώς και για τη διάκριση του καρκίνου του παγκρέατος από άλλο παγκρεατικό κακοήθειες και ασθένειες. Αρκετοί ερευνητές προσπαθούν συνεχώς να ανακαλύψουν νέες ουσίες που θα μπορούσαν να χρησιμοποιούνται συνήθως στην κλινική πρακτική ως δείκτες του καρκίνου του παγκρέατος [37] – [39]. Μέχρι στιγμής, οι προσπάθειες αυτές έχουν συναντηθεί με μεταβλητή επιτυχία. Στη μελέτη μας, βρήκαμε ότι συστημικά επίπεδα της IL-6, IL-8, IL-10, και TNFa δείχνουν δυνατότητες ως διαγνωστικοί δείκτες για την ανίχνευση παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα (με ευαισθησία και ειδικότητα περίπου 70-80%), ενώ η IL -23 συγκεντρώσεις θα μπορούσε δυνητικά να χρησιμοποιηθεί για να αποκλείσει μια διάγνωση του καρκίνου του παγκρέατος στον άνθρωπο. Δυστυχώς, ακόμη και αν προκαταρκτικά αποτελέσματα μας είναι πολύ ενθαρρυντικά, στο στάδιο αυτό, οι εν λόγω δείκτες δεν φαίνεται κατάλληλο για ανεξάρτητη λήψη αποφάσεων, λόγω της σχετικά χαμηλής εξειδίκευσης τους και επειδή διαγνωστική αξία τους προσδιορίστηκε με βάση ένα σχετικά μικρό μέγεθος δείγματος. Επιπλέον, η προτεινόμενη αποκοπής και προγνωστικές αξίες αυτών των δεικτών θα πρέπει να ελέγχεται περαιτέρω σε μελέτες κοόρτης.

Εν περιλήψει, κλινική μελέτη μας i) υποστήριξε την σημασία των επιλεγμένων κυτοκινών στην κλινική παρουσίαση του καρκίνου του παγκρέατος σε ανθρώπους, ii) αποκάλυψε διάφορες ενώσεις μεταξύ επιλεγμένων ILS και η εντατικοποίηση της διακίνησης BMSC σε ασθενείς με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα, και iii) προκαταρκτικά χαρακτηρίζεται το διαγνωστικό δυναμικό αρκετών κυτοκινών ως δυνητικών νέων κλινικών δείκτες για τον καρκίνο του παγκρέατος σε ανθρώπους.

Υποστήριξη πληροφοριών

Εικόνα S1.

Επίπεδα επιλεγμένων ιντερλευκίνες σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος και υγιή άτομα μαζί με στατιστική σύγκριση αυτών (μέσο ± τυπική απόκλιση)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0097613.s001

(PDF)

Πίνακας S1.

Γενικά χαρακτηριστικά των ασθενών που έχουν διαγνωστεί με οξεία /χρόνια παγκρεατίτιδα ή του παγκρέατος κύστεις (τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσοι όροι ± SD ή διάμεση τιμή [διατεταρτημοριακό εύρος])

doi:. 10.1371 /journal.pone.0097613.s002

(PDF )

Πίνακας S2.

κυτοκινών και C-αντιδρώσα πρωτεΐνη επίπεδα σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος, υποδιαιρούνται σε ομάδες ανάλογα με τον όγκο-Node-Μετάσταση (TNM) στάσης της κακοήθειας (παρουσιάζονται ως μέσοι όροι ± SD ή διάμεσες [διατεταρτημοριακό εύρος]).

doi : 10.1371 /journal.pone.0097613.s003

(PDF)

πίνακα S3.

Επίπεδα εξετάζονται κυτοκινών σε ασθενείς με άλλες κακοήθειες (δίχτυα και ΣΧΣ) μαζί με στατιστική σύγκριση τους (διάμεση τιμή [διατεταρτημοριακό εύρος])

doi:. 10.1371 /journal.pone.0097613.s004

(PDF)

Πίνακας S4.

Συντελεστές συσχετίσεις μεταξύ απόλυτους αριθμούς των πληθυσμών που κυκλοφορούν μυελού των οστών που προέρχονται από βλαστικά κύτταρα και συστηματικά επίπεδα των κυτοκινών που εξετάστηκαν σε ασθενείς με παγκρεατικό

αδενοκαρκίνωμα

(n = 8)

doi:. 10.1371 /περιοδικό .pone.0097613.s005

(PDF)

Ευχαριστίες

Ένα μέρος αυτών των αποτελεσμάτων παρουσιάστηκαν κατά τη διάρκεια του

Ηνωμένο Ευρωπαϊκής Εβδομάδας Γαστρεντερολογίας

διάσκεψη, η οποία πραγματοποιήθηκε στο Βερολίνο τον Οκτώβριο του 2013, και το

κυτοκίνης 2013

συνέδριο, που πραγματοποιήθηκε στο Σαν Φρανσίσκο, CA, USA, το Σεπτέμβριο του 2013.