Αφηρημένο

Στόχος

Η βλεννογονίτιδα είναι μια σοβαρή διαταραχή του γαστρεντερικού συστήματος που προκύπτει από τη χημειοθεραπεία του καρκίνου. Εμείς ερεύνησε τις επιπτώσεις των αυξανόμενων δόσεων εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού με τη σοβαρότητα της χημειοθεραπείας σε ένα μοντέλο αρουραίου και συμπίπτει επιπτώσεις της στην χημειοθεραπευτική αποτελεσματικότητα σε καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου.

Σχεδιασμός

Θηλυκοί αρουραίοι Dark Agouti καθετηριάστηκαν με εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού (400-1000 mg /kg) ή νερού (ημέρα 3-11) και ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με 5-φθοριοουρακίλη (150 mg /kg) ή αλατούχο (μάρτυρας) κατά την ημέρα 9 για να επάγει βλεννογονίτιδα. Ημερήσια μεταβολικές δεδομένα συλλέχθηκαν και οι αρουραίοι θυσιάστηκαν την ημέρα 12. εντερικούς ιστούς συλλέχθηκαν για ιστολογική και αναλύσεις μυελοϋπεροξειδάσης. βιωσιμότητα Caco-2 κυττάρου εξετάστηκε σε απόκριση σε εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού σε συνδυασμό με 5-φθοροουρακίλη με 3- (4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2,5-διφαινυλ-τετραζολίου βρωμίδιο) του προσδιορισμού.

Αποτελέσματα

σε σύγκριση με 5-φθοριοουρακίλη ελέγχους, εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού (400-1000 mg /kg) μείωσε σημαντικά την ιστολογική βαθμολογία βλάβης (

P

& lt? 0,05) στη νήστιδα. Εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού (1000 mg /kg) αύξησε νηστιδική βάθος κρύπτης κατά 25% (

P

& lt? 0,05) σε 5-φθοροουρακίλη αγωγή αρουραίους σε σύγκριση με 5-φθοροουρακίλη ελέγχους, και εξασθενημένα η 5-φθοροουρακίλη επαγόμενη αναγωγή του πάχους του βλεννογόνου (25%,

P

& lt? 0,05). εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού (600 mg /kg) μειώθηκε δραστηριότητα μυελοϋπεροξειδάσης κατά 55% (

P

& lt? 0,01) σε σύγκριση με 5-φθοριοουρακίλη ελέγχους. Σταφυλιού εκχύλισμα σπόρων ήταν πιο αποτελεσματική στη βελτίωση 5-φθοριοουρακίλη που προκαλείται από εντερική βλάβη, με αποτελέσματα πιο έντονη στο εγγύς νήστιδα. Εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού (10-25 μg /ml) ενίσχυσε σημαντικά τις ανασταλτικές της ανάπτυξης επιδράσεις της 5-φθοροουρακίλη κατά 26% (

P

& lt? 0,05) σε κύτταρα Caco-2 και ήταν πιο ισχυρό από 5-φθοροουρακίλη σε 50-100 μg /mL.

Συμπέρασμα

εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού μπορεί να αντιπροσωπεύει μια νέα θεραπευτική επιλογή για να μειώσει τα συμπτώματα της εντερικής μυκητίασης, ενώ ταυτόχρονα επηρεάζει τη βιωσιμότητα των καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου.

Παράθεση: Cheah KY, Howarth GS, Bastian Σεπτέμβριο (2014) Εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού δόσης υπεύθυνα Μειώσεις σοβαρότητα της ασθένειας σε ένα μοντέλο αρουραίου βλεννογονίτιδα? Ταυτόχρονα Ενίσχυση Χημειοθεραπευτικοί αποτελεσματικότητα στον καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα. PLoS ONE 9 (1): e85184. doi: 10.1371 /journal.pone.0085184

Επιμέλεια: Μιχαήλ Muders, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Carl Gustav Carus Δρέσδη, Γερμανία

Ελήφθη: 20 Ιουν, 2013? Αποδεκτές: 3 Δεκεμβρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 21 Ιανουαρίου, 2014

Copyright: © 2014 Cheah et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Καθηγητής Gordon Howarth υποστηρίζεται από μια Νότιας Αυστραλίας Υγείας και Ιατρικής Έρευνας Ινστιτούτο Αντικαρκινικό Συμβούλιο Senior Research Fellowship. Δεν οικονομικές συμφωνίες είναι στη θέση τους. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από το Πανεπιστήμιο της Αδελαΐδας, είναι μέλος του Wine Cluster Καινοτομίας, Waite Πανεπιστημιούπολη, Αδελαΐδα, Νότια Αυστραλία. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η βλεννογονίτιδα είναι μια σοβαρή, εξουθενωτικές συνέπειες της θεραπείας του καρκίνου, η οποία μειώνει σημαντικά την ποιότητα ζωής σε ασθενείς με καρκίνο [1]. Η βλεννογονίτιδα είναι μια επώδυνη κατάσταση που σχετίζεται με φλεγμονή και εξέλκωση του γαστρεντερικού σωλήνα? συνηθέστερα επηρεάζουν την βλεννογόνο του στόματος (στοματική βλεννογονίτιδα) και το λεπτό έντερο (εντερική βλεννογονίτιδα). Εντερική βλεννογονίτιδα χαρακτηρίζεται από μειωμένη πολλαπλασιασμό εντεροκυττάρων και αυξημένο αποπτωτικό ποσοστό των κυττάρων κρύπτης, με αποτέλεσμα κακή απορρόφηση και διασπάστηκαν λειτουργία φραγμού [2], [3]. Τα συμπτώματα της βλεννογονίτιδας περιλαμβάνουν έντονο πόνο, διάρροια, ναυτία, έμετος και ανορεξία. Συχνά υπάρχει αυξημένος κίνδυνος βακτηριακής λοίμωξης με το σχετικό θνησιμότητα και νοσηρότητα [1]. Μερικές φορές, γαστρεντερική τοξικότητα μπορεί να οδηγήσει σε μείωση, ή ακόμη και τον τερματισμό, της αγωγής χημειοθεραπείας [4]. Λόγω αυτού, η δόση χημειοθεραπείας σε καρκινοπαθείς ασθενείς συχνά είναι υπο-βέλτιστη? Οι ως εκ τούτου, νέα σχήματα που μειώνουν τις παρενέργειες, διατηρώντας την αποτελεσματικότητα αναζήτησε. Τρέχουσες θεραπείες βλεννογονίτιδα είναι σε μεγάλο βαθμό αναποτελεσματική, δεδομένου ότι στοχεύουν μόνο τα συμπτώματα, αλλά όχι την παθογένεση της κατάστασης [5]. Έτσι, είναι σημαντικό να αναζητήσουν νέες εναλλακτικές θεραπείες που όχι μόνο στοχεύουν μυκητίαση, αλλά και την ενίσχυση της χημειοθεραπευτική δράση χωρίς να θέτει σε κίνδυνο την ευημερία του ασθενούς. Προς το παρόν, ο βέλτιστος συνδυασμός των παραγόντων που θα μπορούσαν να ενισχύσουν τόσο την χημειοθεραπευτική κυτταροτοξικότητα έναντι καρκινικών κυττάρων και να έχουν ελάχιστη επίδραση στα φυσιολογικά κύτταρα, δεν έχει ακόμη προσδιοριστεί.

Εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού (GSE) είναι ευρέως καταναλώνεται ως συμπλήρωμα διατροφής με βάση ισχυρό αντιοξειδωτικό της [6], αντι-φλεγμονώδη [7] και φέρονται, αντι-νεοπλασματική [8] ​​ιδιότητες. Προκυανιδίνες (PC) είναι μια κατηγορία ενώσεων που αποτελείται από πολυφαινολικές φλαβαν-3-όλης υπομονάδες (ολιγομερή και πολυμερή) [9]. Οι υπολογιστές βρίσκονται ευρέως σε άλλες πηγές τροφίμων, όπως το τσάι, τα μήλα και το κόκκινο κρασί και πιστεύεται ότι είναι τα βασικά βιοδραστικά συστατικά σε GSE [10], [11]. Αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει ότι η απορρόφηση και η βιοδιαθεσιμότητα του Υ στο έντερο εξαρτάται από τη χημική δομή και το βαθμό πολυμερισμού [12] τους. Οι υπολογιστές (βαθμός πολυμερισμού = 7 ή νεότερη έκδοση) διατηρούνται στον εντερικό σωλήνα, αυξάνοντας έτσι το χρόνο επαφής με τα εντερικά κύτταρα του εντέρου για την προώθηση της υγείας του εντέρου [10]. Οι μελέτες που εξετάζουν GSE σε συνδυασμό με 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) σε φυσιολογικά ζώα είναι περιορισμένες. Επιπλέον, δεν υπάρχουν μελέτες που έχουν δημοσιευτεί την εξέταση του συνδυασμού 5-FU και GSE σε μοντέλα καρκίνου του παχέος εντέρου.

Προηγουμένως, δείξαμε σε μια προκαταρκτική μελέτη ότι το GSE (400 mg /kg) ήταν σε θέση να μειώσει την εντερική βλάβη τόσο σε μοντέλα αρουραίων του εντερικού βλεννογονίτιδας [13] και της ελκώδους κολίτιδας [14]. Ωστόσο, η απαιτούμενη για την επίτευξη της μέγιστης θεραπευτικό όφελος, δόσης-ανταπόκρισης και η ασφάλεια της GSE δόσης παρέμεινε απροσδιόριστη. Συνεπώς, ερευνήσαμε GSE σε ένα εύρος δόσεων για τη δυνατότητά της να άριστα και με ασφάλεια να μειώσει τη σοβαρότητα της εντερικής βλεννογονίτιδας σε ένα μοντέλο αρουραίου. Αυξανόμενες δόσεις του GSE απέτρεψε περαιτέρω 5-FU που προκαλείται από βλάβη βλεννογονίτιδα, και αυτές οι θεραπείες ήταν καλά ανεκτή από τα ζώα, όπως δεν παρατηρήθηκαν μεταβολικές αλλαγές σε σύγκριση με τους υγιείς ελέγχους. Επιπλέον, ερευνήσαμε επίσης τα αποτελέσματα του συνδυασμού της GSE με 5-FU χημειοθεραπείας επί του κόλου νεοπλασία σε ένα

in vitro

μοντέλο σε σύγκριση με την αποτελεσματικότητα του και μόνο 5-FU. Ο συνδυασμός της GSE και 5-FU περαιτέρω ενισχυμένη τοξικότητα σε καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου.

Υλικά και Μέθοδοι

Χημικά

Η κατεχίνη, επικατεχίνη, μεθανόλη, φλορογλυκινόλες, βρωμιούχο εξαδεκυλτριμεθυλαμμώνιο ασκορβικό οξύ (ΗΤΑΒ), όξινο ανθρακικό νάτριο και

o

-διανισιδίνη αγοράστηκαν από την Sigma Chemical Co. Ltd, St Louis, MO. αντιδραστήριο Folin-Ciocalteau και

13C σακχαρόζη αγοράστηκαν από AnalaR, BDH, Merck, Pty. Ltd, Αυστραλία. διαλύματα καλλιέργειας ιστών περιλαμβάνουν Modified Eagle του Minimum Essential Medium (DMEM), ορό εμβρύου κατά Dulbecco μόσχου (FCS), αντιβιοτικά (πενικιλίνη, στρεπτομυκίνη και γενταμυκίνη), του Dulbecco Αλατόνερο Ρυθμισμένο με Φωσφορικό, διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) και 3- (4,5-Dimethylthiazol- 2υλ) -2,5-διφαινυλο-τετραζόλιο) (ΜΤΤ) αγοράστηκαν από την Gibco BRL, Life Tehnologies Pty Ltd, Αυστραλία. Τα φάρμακα χημειοθεραπείας, 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) αγοράστηκαν από MaynePharma Pty. Ltd, Αυστραλία).

Εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού (GSE) προετοιμασία

Εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού ήταν ευγενική δωρεά Tarac Τεχνολογιών (Βόρεια Αδελαΐδα, Νότια Αυστραλία, παρτίδα όχι: 02VIN03) και αποθηκεύονται σε αεροστεγή, ανθεκτικό στο φως το πακέτο μέχρι να διαλυθεί σε αποσταγμένο νερό πριν από τη χρήση. Το GSE προήλθε από συμπυκνωμένη τανίνη κατασκευασμένο από αυστραλιανό λευκό κρασί στέμφυλα (υπολειμματική φλοιούς και τους σπόρους από την οινοποίηση). Το προφίλ της διατροφής του GSE παρατίθεται στον Πίνακα 1. Η GSE χρησιμοποιείται στην παρούσα μελέτη ελήφθη από την ίδια πηγή με τον ίδιο αριθμό παρτίδας με αυτή που περιγράφεται από τον Cheah κ.ά. [13]. Το περιεχόμενο πολυφαινολικών μετρήθηκε προηγουμένως από δοκιμασία Folin-Ciocalteau [13], και η χημική προφίλ ποσοτικά με phloroglucinolysis περιγράφονται παρακάτω.

Η

Folin-Ciocalteau δοκιμασία

Το συνολικό φαινολικό περιεχόμενο GSE στο παρελθόν ήταν ποσοτικά με Folin-Ciocalteau δοκιμασία [13]. Εν συντομία, τα δείγματα GSE προστέθηκαν εις τριπλούν σε μη αποστειρωμένο 96 πλάκες φρεατίων και επωάζονται με το αντιδραστήριο Folin-Ciocalteu για 5 λεπτά. διάλυμα διττανθρακικού νατρίου (7,5% β /ο) προστέθηκε και επωάστηκαν περαιτέρω για 4 ώρες στο σκοτάδι. Η πλάκα διαβάστηκε στα 740 nm με φασματόμετρο (Multiskan® Spectrum, Corporation Θέρμα Electron, Vantaa, Φινλανδία) με τη χρήση του λογισμικού Skanit 2.2. πρότυπα κατεχίνη παρασκευάστηκαν από 1 mg /mL αποθέματος (1/2 διαδοχικές αραιώσεις) και χρησιμοποιείται για τη δημιουργία μιας καμπύλης βαθμονόμησης. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας GraphPad Prism έκδοση 4.0 για Windows® (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) και εκφράζονται σε mg ισοδύναμα κατεχίνης /mL.

Ποσοτικοποίηση του procyanidins (PCs) σε GSE με phloroglucinolysis

το προφίλ procyanidin της GSE χαρακτηρίστηκε από phloroglucinolysis η οποία καθορίζει τη σύνθεση υπομονάδων, σημαίνει βαθμός πολυμερισμού (mDP) και galloylation των υπολογιστών. Phloroglucinolysis διεξήχθη σύμφωνα με μια προηγουμένως περιγραφείσα μέθοδο [15]. GSE διαλύθηκε σε μεθανόλη (10 mg /ml, ν /ν) και 25 μL της GSE προστέθηκε σε ένα ίσο όγκο διαλύματος φλορογλουκινόλης (0,2 Ν HCl σε μεθανόλη, 100 g /L φλωρογλυκινόλης και 20 g /L ασκορβικό οξύ ). Η αντίδραση phloroglucinolysis διεξήχθη στους 50 ° C για 25 λεπτά και αναλύθηκε με υγρή χρωματογραφία ανάστροφης φάσης υψηλής πίεσης (RP-HPLC) με χρησιμοποίηση (-) -. Επικατεχίνη ως ποσοτική πρότυπο [15]

Ethic Δηλώσεις

η μελέτη αυτή ακολούθησε την αυστραλιανή κώδικα ορθής πρακτικής για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων για επιστημονικούς σκοπούς και εγκρίθηκε από τα δύο επιτροπών Φροντίδα ζώων και της δεοντολογίας του παιδιά, τη νεολαία και την Υπηρεσία Υγείας της Γυναίκας και το Πανεπιστήμιο της Αδελαΐδας (AE : 777-3-2011)

μελέτες σε ζώα

Θηλυκοί αρουραίοι Dark Agouti (100-140 g, n = 64) στεγάστηκαν σε ατομικά μεταβολικά κλουβιά (Tecniplast, Exton, PA, USA. ) σε ένα ελεγχόμενης θερμοκρασίας δωματίου (22 ° C) με ένα κύκλο φωτός-σκότους 12 h. Οι αρουραίοι έλαβαν

κατά βούληση

πρόσβαση σε νερό και τρόφιμα (18% δίαιτα βασισμένη στην καζεΐνη) [16] στην μονάδα φροντίδας ζώων από τα παιδιά, τη νεολαία και την Υπηρεσία Υγείας των Γυναικών, Βόρεια Αδελαΐδα, Νότια Αυστραλία.

οι αρουραίοι αποδόθηκαν τυχαία σε 8 ομάδες (η = 8): ένεση Νερό + Saline? GSE 400 mg /kg + ένεση φυσιολογικού ορού? GSE 600 mg /kg + ένεση φυσιολογικού ορού? GSE 1000 mg /kg + ένεση φυσιολογικού ορού? Νερό + 5-FU ένεση (5-φθοροουρακίλη: 150 mg /kg)? ένεση GSE 400 mg /kg + 5-FU? ένεση GSE 600 mg /kg + 5-FU? και ένεση GSE 1000 mg /kg + 5-FU. Οι αρουραίοι εγκλιματίστηκαν σε κλωβούς μεταβολισμού από την ημέρα 0-2 και στη συνέχεια καθετηριάζονται με 1 mL GSE διαλυμένο σε νερό (400 mg /kg, 600 mg /kg ή 1.000 mg /kg) ή από νερό ημέρα 3-11. Την ημέρα 9, όλοι οι αρουραίοι εγχύθηκαν ενδοπεριτοναϊκώς με είτε 5-FU ή αλατούχο (μάρτυρες). Καθημερινές μετρήσεις του σωματικού βάρους, πρόσληψη τροφής και νερού, και τα ούρα και εξόδου περιττωμάτων καταγράφηκαν. Οι αρουραίοι θυσιάστηκαν με CO

2 ασφυξία ακολουθούμενη από αυχενική εξάρθρωση την ημέρα 12. Όλες οι σπλαχνικά όργανα ζυγίστηκαν και απορρίφθηκαν. Τα μήκη και τα βάρη των γαστρεντερικών οργάνων (δωδεκαδάκτυλο, το λεπτό έντερο και το κόλον) καταγράφηκαν. Αντιπροσωπευτικά δείγματα (2 cm) κατά των γαστρεντερικών όργανα συλλέχθηκαν και σταθεροποιήθηκαν σε 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη για ιστολογική ανάλυση, ενώ τα δείγματα τέσσερα cm τα καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C για βιοχημική ανάλυση.

13C-σακχαρόζης τεστ αναπνοής (SBT)

Η SBT είναι ένα έμμεσο μέτρο της εντερικής δραστηριότητας σακχαράσης και πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από Tooley

et al.

[17] Εν συντομία , οι αρουραίοι στοματο-γαστρικά καθετηριάζονται με 1 mL διαλύματος σακχαρόζης που περιέχει

13C (250 mg /kg) και δείγματα αναπνοής συλλέχθηκαν σε διαστήματα 15 λεπτών για 120 λεπτά. δείγματα αναπνοής αναλύθηκαν για

13CO

2 περιεκτικότητα με φασματομετρία μάζας αναλογίας ισοτόπων (IRMS) εξοπλισμένο με ένα σύστημα συλλογής δεδομένων V410 (Europa Επιστημονική, ABCA 20/20, Κρου, Ηνωμένο Βασίλειο). Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως ποσοστό αθροιστικής δόσης στα 90 λεπτά (% CD90) με τον υπολογισμό της μεταβολής της αναπνοής

13CO

2 επίπεδα από την αρχική τιμή για κάθε χρονικό σημείο συλλογής αναπνοή σε όλη την περίοδο του διαστήματος δειγματοληψίας. SBT προσδιορισμοί πραγματοποιήθηκαν την ημέρα 3 (πριν από τη θεραπεία GSE), 9η ημέρα (πριν από την ένεση 5-FU) και την ημέρα 12 (πριν σκοτώσει).

Η μυελοϋπεροξειδάση (MPO) δοκιμασία

Μικρές εντερικό ιστό δείγματα (4 cm) νήστιδα, διασταύρωση της νήστιδας και του ειλεού (ΚΕ) και ειλεό αποψύχθηκαν επί πάγου και ομογενοποιήθηκαν με 1,5 κ.εκ. ρυθμιστικού φωσφορικού (10 mM, ρΗ 6.1) για 60 δευτερόλεπτα μέχρις ότου το διάλυμα ήταν ομογενές. Τα ομογενοποιήματα διατηρήθηκαν κατεψυγμένα στους -80 ° C μέχρι να χρειαστούν.

ΜΡΟ είναι ένα ένζυμο που υπάρχει στα ενδοκυττάρια κοκκία των ουδετερόφιλων, που ενεργεί ως μια οξεία δείκτη φλεγμονής. Το επίπεδο της ΜΡΟ στο λεπτό έντερο προσδιορίστηκε με μία ελαφρά τροποποίηση της δοκιμασίας που περιγράφεται από Krawisz

et al.

[18] Tissue ομογενοποιήματα αποψύχθηκαν σε πάγο και φυγοκεντρήθηκε στα 13.000 g για 13 λεπτά. Το υπερκείμενο απορρίφθηκε και τα σφαιρίδια κυττάρων επαναιωρήθηκαν σε βρωμιούχο εξαδεκυλοτριμεθυλαμμώνιο (0,5%, ρΗ 6,0). Τα δείγματα στροβιλίστηκαν επί 2 λεπτά και περαιτέρω φυγοκεντρήθηκε στα 13.000 g για 3 λεπτά. Τα υπερκείμενα αντέδρασαν με

o

-διανισιδίνη και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 450 nm σε διαστήματα 1 λεπτού για μια περίοδο 15 λεπτών χρησιμοποιώντας μια συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας (Sunrise Microplate Reader, Tecan Austria GmbH, Γκρόντιγκ, Αυστρία). δραστικότητα ΜΡΟ εκφράστηκε ως δραστηριότητα μονάδες ΜΡΟ ανά γραμμάριο ιστού.

Οι ιστολογικές αναλύσεις

δείγματα ιστού Gut (2 cm) κατά εγκλείστηκαν σε κερί παραφίνης και 4 μm τομές χρωματίζονται με Αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Η συνολική βαθμολογία ιστολογικής σοβαρότητας της νόσου (ODS) των εντερικών τμημάτων βαθμολογήθηκε ημι-ποσοτικά (0-3) με βάση 11 ανεξάρτητες ιστολογικά κριτήρια σύμφωνα με ένα πρωτόκολλο που περιγράφεται από Howarth

et al.

[19] λάχνης ύψη και βάθη κρύπτη (40 λαχνών και κρυπτών 40 ανά τμήμα) προσδιορίστηκαν στα μικρά εντερικά τμήματα συμπεριλαμβανομένων νήστιδα, διασταύρωση της νήστιδας και του ειλεού (ΚΕ) και τον ειλεό, όπως περιγράφεται στο Howarth

et al.

[19] Η συνδυασμένη μέτρηση τα ύψη των λαχνών και το βάθος της κρύπτης παρείχε μια προσέγγιση του συνολικού πάχους του βλεννογόνου σε κάθε λεπτού εντέρου δείγμα. Όλες οι αναλύσεις μικροσκόπιο που βασίζεται έγιναν με τυφλό τρόπο χρησιμοποιώντας ένα οπτικό μικροσκόπιο (Nikon, ProgRes®CS, Τόκιο, Ιαπωνία) και η εικόνα ProPlus έκδοση λογισμικού 5.1 (Media Cybernetics, Silver Spring MD, USA).

τηλέφωνα Culture

Η ανθρώπινη κυτταρική σειρά καρκίνου του παχέος εντέρου, Caco-2 ελήφθη από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, USA). κύτταρα Caco-2 διατηρήθηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένο επωαστή με 5% CO

2 – 95% αέρα, και 90% σχετική υγρασία σε Τροποποιημένο Ελάχιστο Απαραίτητο Μέσο Eagle του Dulbecco (DMEM) συμπληρωμένο με 10% (ν /ν αντιβιοτικά) ορό εμβρύου μόσχου (FCS) και 1% (πενικιλίνη, στρεπτομυκίνη και γενταμυκίνη) (ν /ν). Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε 75 cm

2 εξαερίζεται φιάλες καλλιέργειας ιστού, το μέσο καλλιέργειας αλλάχθηκε δύο φορές την εβδομάδα και τα κύτταρα ανακαλλιεργήθηκαν όταν ήταν 80-90% συρροή.

Κυτταρική βιωσιμότητα

Η αναστολή της Caco-2 κύτταρα βιωσιμότητα προσδιορίστηκε με 3- (4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2,5-διφαινυλ-τετραζολίου) (ΜΤΤ) σύμφωνα με μια προηγουμένως περιγραφείσα μέθοδο από τους Huynh-Delerme

et al.

[20] κύτταρα (5 × 10

3 κύτταρα /φρεάτιο) σπάρθηκαν σε πλάκες καλλιέργειας 96 φρεατίων ιστού για 48 ώρες για να επιτραπεί η σύνδεση. GSE παρασκευάστηκε σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) και αραιώνεται με ϋΜΕΜ και περαιτέρω αποστειρώνεται με διήθηση μέσω ενός φίλτρου 0.22 μΜ (Millipore, South Australia, Australia). Σε όλα τα πειράματα, η συγκέντρωση του DMSO στον έλεγχο και επεξεργασμένα δείγματα ήταν μικρότερη από 0.025%. Μετά από 48 ώρες, το μέσο καλλιέργειας αντικαταστάθηκε με μέσο ελεύθερο ορού που περιέχει GSE σε διαφορετικές συγκεντρώσεις (μg /mL) και 5-FU (μΜ) και επωάστηκαν περαιτέρω για 24 ή 48 ώρες. διάλυμα ΜΤΤ παρασκευάστηκε σε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα Dulbecco Αλατόνερο (1 mg /mL) και αποστειρωμένο με διήθηση για να απομακρυνθούν οποιαδήποτε βιολογικούς ρυπαντές. Στη συνέχεια, 50 μι διαλύματος ΜΤΤ προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και επωάστηκαν περαιτέρω στους 37 ° C για 4 ώρες. Το μέσο αντικαταστάθηκε με 100 μL DMSO για την εκχύλιση του προϊόντος φορμαζάνης. Οι πλάκες τοποθετήθηκαν σε επωαστή ανακίνησης για 15 λεπτά και διαβάζεται με φασματόμετρο στα 570 nm. Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως ο αριθμός των βιώσιμων κυττάρων ως ποσοστό των κυττάρων ελέγχου που έλαβαν θεραπεία με μέσο χωρίς ορό μόνο. ​​

Στατιστικές αναλύσεις

Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση PASW 18 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA) και XLSTAT έκδοση 04.02.2011 (Addinsoft SARL, Γαλλία). Όλα τα παραμετρικά στοιχεία, συμπεριλαμβανομένων του σωματικού βάρους, ημερησίως μεταβολικά δεδομένα, SBT, ΜΡΟ, ύψους των λαχνών και το βάθος της κρύπτης και η κυτταρική βιωσιμότητα συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) με το

post-hoc δοκιμασία κατά

του Tukey. Η συνολική βαθμολογία σοβαρότητας της νόσου (ODS) συγκρίθηκε με μια δοκιμασία Kruskal-Wallis με Mann Whitney U-test για τον εντοπισμό σημασία μεταξύ των ομάδων. Τα δεδομένα θεωρήθηκαν σημαντικές στο

P

& lt?. 0.05

Αποτελέσματα

Χαρακτηρισμός procyanidins από phloroglucinolysis

GSE είχε χαμηλή μετατροπή μάζας (23.8% β /w), mDP (5.9) και μοριακή μάζα (1871 g /mol), όπως μετράται με phloroglucinolysis (Πίνακας 2). Οι τερματικό PC υπομονάδες σε GSE ως επί το πλείστον κυριαρχείται από (-) -. Επικατεχίνη-3-

O

-gallate

Η

Καθημερινή μεταβολικές παραμέτρους και το σωματικό βάρος

Από του στόματος χορήγηση του GSE (400, 600 ή 1000 mg /kg) μεταξύ των ημερών 3 και 9 δεν επηρέασε σημαντικά το σωματικό βάρος, την πρόσληψη τροφής ή νερού και τα ούρα ή εξόδου κοπράνων σε σύγκριση με αρουραίους που έλαβαν νερό (Πίνακας 3). ένεση 5-FU αύξησε σημαντικά την πρόσληψη νερού και την παραγωγή ούρων και μειωμένο σωματικό βάρος, πρόσληψη τροφής και η παραγωγή κοπράνων σε σύγκριση με αρουραίους που έλαβαν ένεση φυσιολογικού ορού μεταξύ των ημερών 10 και 12 (Πίνακας 4). GSE 600 και 1000 mg /kg σε 5-FU κατεργασία αρουραίους επέστρεψε σημαντικά την παραγωγή κοπράνων (

P

& lt? 0,01), πίσω προς τις τιμές για τα φυσιολογικούς αρουραίους ελέγχου με αλατούχο ορό εγχύθηκε

Η

σπλαχνικά όργανα

5-FU μειωθεί σημαντικά το βάρος του θύμου κατά 51% (

P

& lt? 0.001) και τον σπλήνα βάρους κατά 20% (

P

& lt ? 0,01) σε σύγκριση με φυσιολογικό ορό αρουραίων. Ενώ GSE δεν εμπόδισε οποιαδήποτε από τις 5-FU-επέφερε αλλαγές στα θύμου και σπλήνα βάρος, καμία από τις GSE δόσεις που δοκιμάστηκαν επηρέασε αρνητικά για τα βάρη σπλαχνικό όργανο (Πίνακας 5), ούτε βάρη και μήκη (Πίνακας 6) σε υγιή ζώα γαστρεντερικό οργάνων. Ωστόσο, GSE 1000 mg /kg σημαντικά αυξημένο βάρος στο στομάχι κατά 13% (

P

& lt? 0.05). Σε σύγκριση με φυσιολογικούς μάρτυρες

Η

Δοκιμή σακχαρόζης αναπνοής (SBT)

5-FU ένεση σημαντικά (

P

& lt? 0.001) μειώθηκε το SBT (% CD90) κατά 70% σε σύγκριση με τις τιμές σε νερό + αντιμετωπίζονται αλατούχο αρουραίους, υποδεικνύοντας έμμεσα ένεση 5-FU είχε διακοπεί δραστηριότητα σακχαράσης σύνορα βούρτσα (Σχήμα 1). Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές στα% CD90 μεταξύ οποιουδήποτε από τα 5-FU αρουραίους που έλαβαν την παραλαβή GSE σε σύγκριση με αρουραίους που έλαβαν-ελέγχου 5-FU. Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στο% CD90 μεταξύ GSE και επεξεργασίας νερού, καμία από τις GSE δόσεων συνεπάγεται είχε αποδεδειγμένα αντίκτυπο στη δραστηριότητα πινέλο σύνορα ανεπάρκεια της σουκρόζης σε υγιείς αρουραίους (Σχήμα 1).

Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ( % CD90) ± SEM. *** Δεικνύει

P

& lt?. 0.001 σε σύγκριση με το νερό + Φυσιολογικός ορός

Η

δραστηριότητα μυελοϋπεροξειδάση (MPO)

Μετά την έγχυση 5-FU, υπήρχε μια σημαντική (

P

& lt? 0.001) αύξηση της δραστηριότητας MPO στο εγγύς νήστιδα, διασταύρωση των νήστιδα και τον ειλεό (JI) και ο ειλεός νερό + 5-FU θεραπεία αρουραίους (1092%, 357% και 297% αντίστοιχα) σύγκριση με την θεραπεία με φυσιολογικό ορό (Σχήμα 2) νερό +. GSE 600 mg /kg σημαντικά (

P

& lt? 0,01) μειωμένη δραστικότητα ΜΡΟ κατά 55% στην JI σύγκριση με το νερό + 5-FU κατεργασία αρουραίους (Σχήμα 2Β). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην δραστικότητα ΜΡΟ μεταξύ GSE και επεξεργασίας νερού σε υγιείς αρουραίους (Σχήμα 2), υποδεικνύοντας ότι η χορήγηση GSE δεν επηρέασε ΜΡΟ δραστηριότητα σε υγιή ζώα.

Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή (μονάδες ΜΡΟ /g ιστού) ± SEM. * Υποδηλώνει

P

& lt? 0,05, ** υποδηλώνει

P

& lt? 0,01 και *** δεικνύει

P

& lt? 0.001 σε σύγκριση με αρουραίους που έλαβαν νερό και αλατούχο διάλυμα έγχυσης. ## Δεικνύει

P

& lt?. 0.01 σε σύγκριση με αρουραίους που έλαβαν νερό και ένεση 5-FU

Η

σκορ σοβαρότητας Συνολικά νόσου

Η χορήγηση του 5-FU αυξήθηκε σημαντικά βαθμολογία σοβαρότητας της νόσου στο εγγύς νήστιδα όταν αξιολογείται από την ημι-ποσοτική ιστολογική ανάλυση βαθμολογία σοβαρότητας (Σχήμα 3 και 4). 5-FU έλεγχοι επιτευχθεί το υψηλότερο σκορ βλάβη (Μέσος όρος = 30) και ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από ό, τι το νερό + φυσιολογικό ορό αρουραίων που έλαβαν θεραπεία (Μέσος όρος = 1,

P

& lt? 0,01). σκορ θεραπεία GSE σημαντικά μειωμένη σοβαρότητα της νόσου σε 5-FU κατεργασία αρουραίους με δοσο-απόκρισης τρόπο (GSE 400 = 21 (15,5 έως 25,5),

P

& lt? 0,01? GSE 600 = 15,75 (9-24) ,

P

& lt? 0,01? και GSE 1000 = 11,75 (7-19),

P

& lt? 0,01) σε σύγκριση με το 5-FU ελέγχει. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στη βαθμολογία βαρύτητας της νόσου παρατηρήθηκε μεταξύ GSE και αρουραίους επεξεργασμένου νερού που έλαβαν ένεση φυσιολογικού ορού (Σχήμα 3), υποδεικνύοντας ότι GSE δεν είχε διαταραχθεί εντερική ακεραιότητα σε υγιή ζώα.

Οι σοβαρότητα αποτελέσματα αξιολογήθηκαν με βάση 11 παραμέτρους σε διαφορετικά στρώματα του εντερικού ιστών με βάση το πρωτόκολλο που περιγράφηκε προηγουμένως Howarth

et al.

[19] τα οικόπεδα κουτί αντιπροσωπεύουν το εύρος της βαθμολογίας σοβαρότητας της νόσου και οι οριζόντιες γραμμές αντιπροσωπεύουν την μέση βαθμολογία σοβαρότητας της νόσου. ** Υποδεικνύει

P

& lt? 0,01 σε σύγκριση με το νερό + Φυσιολογικός ορός. ## Δεικνύει

P

& lt?. 0.01 σε σύγκριση με το νερό + 5-FU

Η

(. Αρχικό μεγέθυνση 40 ×)

Η

ύψος λάχνης, κρύπτη βάθος και βλεννογόνου πάχος

ένεση 5-FU είχε σαν αποτέλεσμα μείωση των λαχνών στη νήστιδα (38%,

P

& lt? 0.001), JI (39%,

P

& lt? 0.001) και τον ειλεό (26%,

P

& lt? 0,01) σε σύγκριση με τους μάρτυρες νερό (Σχήμα 5). 5-FU ένεση, επίσης, μείωση του βάθους κρύπτης στη νήστιδα (38%,

P

& lt? 0.001), JI (23%,

P

& lt? 0,05) και τον ειλεό (15%,

P

& lt? 0,05). Στη νήστιδα, GSE θεραπείες έτειναν να δοσο-ανταπόκριση, τη βελτίωση ύψους των λαχνών και το βάθος κρύπτης, αν και μόνο GSE σε δόση 1000 mg /kg σημαντικά (

P

& lt? 0,05) αυξημένο βάθος κρύπτης σε σύγκριση με 5-FU μάρτυρες (Σχήμα 5Α). Είναι σημαντικό, κανένας από τους GSE θεραπείες επηρέασε αρνητικά το ύψος των λαχνών και το βάθος της κρύπτης σε υγιή ζώα. 5-FU ένεση σημαντικά μειωμένο πάχος του βλεννογόνου στη νήστιδα (38%,

P

& lt? 0.001), JI (45%,

P

& lt? 0.001) και τον ειλεό (29%,

P

& lt? 0,01) σε σύγκριση με τους μάρτυρες νερό (Σχήμα 6). θεραπείες GSE έτειναν να δοσο-ανταπόκριση, αυξάνουν βλεννογόνου πάχος στη νήστιδα, αν και μόνο GSE 1000 mg /kg σημαντικά αυξημένο πάχος του βλεννογόνου (25%,

P

& lt? 0,05) σε σύγκριση με 5-FU ελέγχους (Σχήμα 6Α) .

τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος (μm) ± SEM. * Υποδηλώνει

P

& lt? 0,05, ** υποδηλώνει

P

& lt? 0,01 και *** δεικνύει

P

& lt? 0.001 σε σύγκριση με το νερό + Φυσιολογικός ορός. # Δεικνύει

P

& lt? 0,05 σε σύγκριση με το νερό + 5-FU

Η

Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος (μm) ± SEM.. * Υποδηλώνει

P

& lt? 0,05, ** υποδηλώνει

P

& lt? 0,01 και *** δεικνύει

P

& lt? 0.001. # Υποδεικνύει

P

& lt?. 0.05 σε σύγκριση με το νερό + 5-FU

Η

Επιπτώσεις της 5-FU στη βιωσιμότητα των Caco 2-κύτταρα

Οι απαντήσεις δόση της 5-FU (0-100,000 μΜ) σε κύτταρα Caco-2 για 24 ώρες και 48 ώρες απεικονίζονται στην Εικόνα 7. 5-FU δόσεις ελέγχθηκαν επίσης σε 72 ώρες (στοιχεία δεν φαίνονται). Η κυτταρική βιωσιμότητα των κυττάρων Caco-2 ανεστάλη με 5-FU σε ένα χρόνο- και δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Στις 24 ώρες, 5-FU στα 100 μΜ μείωσε σημαντικά τη βιωσιμότητα σε κύτταρα Caco-2 σε 88% (

P

& lt? 0,05) από τις τιμές ελέγχου και περαιτέρω μείωση της βιωσιμότητας των κυττάρων παρατηρήθηκε στο 70% (

P

& lt? 0,05) των τιμών ελέγχου στις 48 ώρες. Μια συγκέντρωση 100 μΜ 5-FU είχε επιλεγεί για το επόμενο πείραμα, επειδή αυτή η δόση ήταν σε θέση να μειώσει τη βιωσιμότητα Caco-2 κυττάρων (70-85%) αντανακλώντας γαστρεντερικής τοξικότητας που παρατηρείται συχνά σε ασθενείς με καρκίνο μετά από χημειοθεραπεία.

Δεδομένα εκφράζονται ως επί τοις εκατό του κυτταρικής βιωσιμότητας σε σχέση με τη βιωσιμότητα των μη επεξεργασμένων ελέγχων. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσες τιμές ± SEM από 2-3 ανεξάρτητα πειράματα. δεδομένα μπαρ που δεν μοιράζονται το ίδιο γράμμα είναι σημαντικά διαφορετικές

P

& lt?. 0.05

Η

Επιπτώσεις της GSE και 5-FU σε Caco-2 κυτταρικής βιωσιμότητας

προκειμένου να καθοριστεί το κυτταροτοξικότητα της GSE σε κύτταρα Caco-2, GSE (10-100 μg /mL) εφαρμόστηκε σε κύτταρα για είτε 24 ή 48 h (Σχήμα 8). θεραπεία GSE ανέστειλε την κυτταρική βιωσιμότητα σε μια δόση και το χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. θεραπείες GSE σημαντικά (

P

& lt? 0,05) μείωσε την κυτταρική βιωσιμότητα (IC

50 = 50.24 μg /mL) σε 24 ώρες και έγινε πιο τοξικό για τα κύτταρα Caco-2 σε 48 h (IC

50 = 37.84 μg /mL). Όταν τα κύτταρα εκτέθηκαν στο συνδυασμό του GSE (10-100 μg /mL) και 5-FU (100 μΜ), αύξηση του αριθμού των νεκρών κυττάρων ήταν εμφανείς σε σύγκριση με κύτταρα που εκτέθηκαν σε 5-FU μόνο του (Σχήμα 8). Στις 24 ώρες, 5-FU μείωσε σημαντικά την κυτταρική βιωσιμότητα σε 84% (

P

& lt? 0,05) από τις τιμές ελέγχου. Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν τα κύτταρα Caco-2 εκτέθηκαν στο συνδυασμό του GSE και 5-FU, ο ανασταλτικά αποτελέσματα αύξησης του 5-FU ήταν σημαντικά ενισχυμένη κατά 26% (GSE = 25 μg /mL?

P

& lt? 0,05? συνδυασμένη θεραπεία έναντι μόνο δύο παραγόντων) στις 24 ώρες. GSE σε υψηλότερες δόσεις (50-100 μg /mL) που ασκείται μεγαλύτερη αναστολή της ανάπτυξης σε σύγκριση με μονοθεραπεία 5-FU. Στις 24 ώρες, GSE προκάλεσε σημαντικές ανασταλτικές επιδράσεις της ανάπτυξης σε κύτταρα Caco-2 (GSE 50 = 33% και της GSE 100 = 27%?

P

& lt? 0,05) σε σύγκριση με 5-FU ελέγχου (84% του ελέγχου αξία) (Σχήμα 8Α). Επιπλέον, GSE μόνος σημαντικά (

P

& lt? 0,05) μείωσε τη βιωσιμότητα των κυττάρων Caco-2 (GSE 50 = 31% και της GSE 100 = 29%?

P

& lt? 0,05) σε σύγκριση με 5-FU ελέγχου (64% της αξίας ελέγχου) στις 48 ώρες (Σχήμα 8Β).

τα δεδομένα εκφράζονται ως επί τοις εκατό του κυτταρικής βιωσιμότητας σε σχέση με δείγματα αναφοράς άνευ αγωγής. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσες τιμές ± SEM από 4 ανεξάρτητα πειράματα. δεδομένα μπαρ που δεν μοιράζονται τα ίδια γράμματα είναι σημαντικά διαφορετική

P

& lt?. 0.05

Η

Συζήτηση

Η παρούσα μελέτη αποτελεί την πρώτη έκθεση της GSE δόση υπεύθυνα μειώνοντας σοβαρότητα της βλεννογονίτιδας. Τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι οι υψηλότερες δόσεις της GSE είναι πιο αποτελεσματική στη μείωση της σοβαρότητας των δεικτών της εντερικής βλεννογονίτιδας σε αρουραίους και ότι αυτές οι GSE αποτελέσματα που προκαλούνται είναι σε μεγάλο βαθμό εξαρτάται από τη δόση και περισσότερο εμφανές στην πλησίον νήστιδα σε σύγκριση με το άπω λεπτό έντερο.

ένεση 5-FU επιπτώσεις στο λεπτό έντερο σε μεγαλύτερο βαθμό από ό, τι στο παχύ έντερο, πιθανώς λόγω της μεγαλύτερης ρυθμό ανανέωσης των κυττάρων στις πιο εγγύς περιοχές του εντέρου [3]. Τα αποτελέσματά μας είναι σε συμφωνία με προηγούμενες μελέτες [18], [19], [21], με την οποία το μοντέλο βλεννογονίτιδας 5-FU είχε σαν αποτέλεσμα σοβαρή εντερική βλάβη 72 ώρες μετά την επαγωγή της βλεννογονίτιδας. Αυτή η βλάβη χαρακτηρίζεται από μείωση της εντερικής δραστηριότητες συνόρων βούρτσα ένζυμο [21], η αυξημένη διείσδυση ουδετεροφίλων [22], η αυξημένη βαθμολογία σοβαρότητας της νόσου [23] και μειωμένο πάχος βλεννογονικού [13]. Σε συμφωνία με προηγούμενες μελέτες [13], αμβλύνοντας των λαχνών και αποδιοργάνωση του κρυπτών (θέση των βλαστικών κυττάρων) ήταν τα κύρια συμβάντα που σχετίζονται με σοβαρή βλεννογονίτιδα. Η νήστιδα είναι η μέγιστη θέση της βλάβης που προκαλείται από τη χημειοθεραπεία και την επίδραση γίνεται λιγότερο έντονη στα περισσότερα άπω περιοχές του λεπτού εντέρου [13]. Αυτό καταδείχθηκε στην τρέχουσα μελέτη στην οποία παρατηρήθηκε λιγότερο τραυματισμό από την άποψη της δραστικότητας ΜΡΟ (διήθηση ουδετερόφιλων), το ύψος των λαχνών και το πάχος του βλεννογόνου στο απώτατο άκρο του λεπτού εντέρου

Η βιοδιαθεσιμότητα του υπολογιστές στο σύστημα έντερο έχει καλώς τεκμηριωθεί σε άλλες μελέτες [24]. Η μοναδική δομή του πολυμερισμένο PCs αναστέλλει την απορρόφηση κατά μήκος του λεπτού εντέρου, καθώς προσκολλώνται στο βλεννογόνο του εντέρου [25]. Tsang

et al.

[26] ανιχνεύεται μεγαλύτερες μορφές του Υ στο λεπτό έντερο των αρουραίων μέχρι 12 ώρες μετά την κατάποση. Έτσι, η συσσώρευση σχετικώς υψηλές συγκεντρώσεις PC μπορεί να συμβεί στον αυλό του εντέρου για την προστασία του εντερικού φραγμού. Στην παρούσα μελέτη, υψηλότερες δόσεις του GSE (1000 mg /kg) ήταν αποτελεσματικά στη διατήρηση βάθος κρύπτης και πάχος βλεννογόνου της νήστιδας περιοχή, με τις περισσότερες τιμές προσεγγίζουν τις τιμές των υγιών μαρτύρων. Επιπλέον, η παρούσα μελέτη έδειξε επίσης βελτίωση των κοπράνων εξόδου (λιγότερο σοβαρή διάρροια) σε χημειοθεραπεία-αγωγή αρουραίους που έλαβαν την υψηλότερη δόση του GSE (600 mg /kg και 1000 mg /kg), υποδηλώνοντας μειωμένη διάσπαση του βλεννογόνου του λεπτού εντέρου .

Αν GSE στην τρέχουσα μελέτη ήταν πιο αποτελεσματικό στη νήστιδα, η περιοχή των μεγάλων εντερική βλάβη, βιοδραστικότητα μειώθηκε στο απομακρυσμένο λεπτό έντερο. Αυτό μπορεί να οφείλεται σε υποβαθμισμένη βιοενεργά συστατικά επίτευξη του άπω περιοχή του λεπτού εντέρου [27], [28]. Η διάσπαση, απορρόφηση και το μεταβολισμό της GSE είναι σημαντικό να προσδιοριστεί η τύχη των βιοδραστικών ενώσεων σε GSE. Σε μελλοντικές μελέτες θα είναι αναγκαίο να προσδιορίσει τη μορφή, το μέγεθος και βιοδραστικότητα προκυανιδίνες από GSE υπεύθυνη για την προώθηση της εντερικής υγείας χρησιμοποιώντας το

in vitro

και

in vivo

μοντέλα της εντερικής απορρόφησης. Επιπλέον, οι μελλοντικές μελέτες θα μπορούσε να εξετάσει την προστασία της ΓΓΙ, ενδεχομένως με μικροενθυλάκωση, ή μέσω εφαρμογής υπόθετο, για την καλύτερη στόχευση GSE και να βελτιωθεί η βιοδιαθεσιμότητα του στις πιο απομακρυσμένες περιοχές του εντέρου. Λόγω της πολυπλοκότητας του περιεχομένου GSE, θα ήταν δύσκολο να καθοριστεί ποιοι παράγοντες είναι υπεύθυνοι για την παρατηρούμενη βιοδραστικότητα. Για το λόγο αυτό, GSE, αντί εναλλακτική πηγή πρωτεΐνης όπως ορό βοός χρησιμοποιήθηκε ως μάρτυρας του εαυτού του. Η χορήγηση του GSE στην κανονική ζώα επιτρέπεται ακριβέστερη σύγκριση με GSE επεξεργασμένο αρουραίους που έλαβαν 5-FU χημειοθεραπεία.

Το ενδιαφέρον για GSE ήταν κυρίως λόγω της υψηλής περιεκτικότητα σε αντιοξειδωτικές ουσίες του. GSE είναι πιο ισχυρός δέσμευσης ριζών από άλλα γνωστά αντιοξειδωτικά, όπως η βιταμίνη C και Ε [29]. Στην παρούσα μελέτη, η μερική μείωση στην οξεία φλεγμονή με GSE, όπως υποδεικνύεται από τη μείωση της δραστηριότητας ΜΡΟ, και η μείωση της λεμφοκυτταρικής διείσδυσης καταγράφονται από την ανάλυση σκορ σοβαρότητας της νόσου, θα μπορούσε να ενισχύσει το δυναμικό ρόλο της GSE ως ένα ισχυρό αντι-οξειδωτικό και αντι-φλεγμονώδη παράγοντα. Ένας αριθμός μελετών έχουν περιγράψει GSE ως αντι-φλεγμονώδης παράγοντας.